JP2018534932A5 - - Google Patents
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Claims (34)
- 活性を有する天然に存在しないポリペプチド又は単離ポリペプチドであって、100a.m.u.未満の分子量及び第1のpHから最大4pH単位離れたpKaを有する小分子又はイオンの存在下で前記活性がpH依存性であり、前記小分子又はイオンの存在下におけるpH依存性活性が、第1のpHにおける活性の、第2のpHにおける活性に対する比が少なくとも3.0であり、前記小分子又はイオンの非存在下における前記タンパク質の前記活性がpH依存性ではなく、
前記小分子又はイオンが、ヒスチジン、ヒスタミン、水素付加アデノシン二リン酸、水素付加アデノシン三リン酸、クエン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム、リン酸二水素及びこれらの任意の組み合わせから選択される、天然に存在しないポリペプチド又は単離ポリペプチド。 - 前記第1のpHにおける活性の、前記第2のpHにおける活性に対する比が少なくとも4.0、又は少なくとも6.0、又は少なくとも8.0、又は少なくとも10.0、又は少なくとも20.0、又は少なくとも40.0、又は少なくとも60.0、又は少なくとも100.0である、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記第1のpHが酸性pHであり、且つ前記第2のpHがアルカリ性pH又は中性pHである、請求項1または2に記載のポリペプチド。
- 前記第1のpHが5.5〜7.2の範囲であるか、又は6.2〜6.8の範囲である、請求項3に記載のポリペプチド。
- 前記第2のpHが7.2〜7.6の範囲である、請求項3又は4に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、親ポリペプチドから進化させた天然に存在しない変異ポリペプチドである、請求項1〜5のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 前記変異ポリペプチドが、前記親ポリペプチドよりも高い割合の荷電アミノ酸残基を有する、請求項6に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドが、抗体、一本鎖抗体、及び抗体フラグメントから選択され、前記活性が抗原に対する結合活性である、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが重炭酸塩である、請求項1〜8のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが6.2より高いpKaを有する、請求項1〜9のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 前記第1のpHにおける活性の、前記第2のpHにおける活性に対する比が少なくとも4.0である、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム及び硫化ナトリウムからなる群から選択される、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが第1の条件から最大0.5、1、2、又3pH単位離れたpKaを有する、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが第1のpHと第2のpHの間のpKaを有する、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが6.2より大きく7.2未満のpKaを有する、請求項1に記載のポリペプチド。
- 前記第1のpHが5.5〜7.2の範囲であり、前記第2のpHが7.2〜7.6の範囲である、請求項1に記載のポリペプチド。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
- 親ポリペプチドから条件的活性型ポリペプチドを作製する方法であって、
(i)少なくとも1つのアミノ酸を突然変異させることにより前記親ポリペプチドを進化させて、1つ以上の変異ポリペプチドを作製する工程;
(ii)前記1つ以上の変異ポリペプチドを、100a.m.u.未満の分子量及び第1のpHから最大4pH単位離れたpKaを有する小分子又はイオンの存在下で第1のpHのもとで前記1つ以上の変異ポリペプチドのための第1のアッセイ、および前記小分子又はイオンの存在下で第2のpHのもとで前記1つ以上の変異ポリペプチドのための第2のアッセイに供する工程;
(iii)第1のアッセイにおける活性の、第2のアッセイにおける活性に対する比が少なくとも3.0である変異ポリペプチドを選択する工程;および
(iv)小分子またはイオンの非存在下で活性がpH依存性ではない、工程(iii)で選択された1つの変異ポリペプチドを選択することによって条件的活性型ポリペプチドを得る工程
を含み、
前記小分子又はイオンが、ヒスチジン、ヒスタミン、水素付加アデノシン二リン酸、水素付加アデノシン三リン酸、クエン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム、リン酸二水素及びこれらの任意の組み合わせから選択される、方法。 - 前記親ポリペプチドが抗体の重鎖又は軽鎖であり、及び前記少なくとも1つのアミノ酸が前記親ポリペプチドの相補性決定領域にある、請求項18に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのアミノ酸が前記親ポリペプチドのFc領域にある、請求項19に記載の方法。
- 前記進化工程が、前記Fc領域を別個の抗体の可変領域に置換して二重特異性抗体を形成することを含む、請求項20に記載の方法。
- 前記進化工程が、前記Fc領域を別個の抗体の可変領域に置換して一本鎖抗体を形成することを含む、請求項20に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのアミノ酸が前記親ポリペプチドのフレームワーク領域にある、請求項19に記載の方法。
- 前記進化工程が、置換、挿入、欠失、又はこれらの組み合わせを含む、請求項18〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(ii)が前記1つ以上の変異ポリペプチドを、前記小分子又はイオンの非存在下で第1のpHのもとで前記1つ以上の変異ポリペプチドのための第3のアッセイ、および前記小分子又はイオンの非存在下で第2のpHのもとで前記1つ以上の変異ポリペプチドのための第4のアッセイに供することを更に含み;
工程(iii)第4のアッセイにおける活性に対する第3のアッセイにおける活性の比が少なくとも3.0である変異ポリペプチドを選択することを更に含む、請求項18に記載の方法。 - 前記第1のアッセイにおける活性の、前記第2のアッセイにおける活性に対する比が少なくとも4.0である、請求項18に記載の方法。
- 前記小分子又はイオンが、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム及び硫化ナトリウムからなる群から選択される、請求項18に記載の方法。
- 前記小分子又はイオンが第1のpHから最大0.5、1、2、又3pH単位離れたpKaを有する、請求項18に記載のポリペプチド。
- 前記小分子又はイオンが第1のpHと第2のpHの間のpKaを有する、請求項18に記載の方法。
- 前記小分子又はイオンが6.2より大きく7.2未満のpKaを有する、請求項18に記載の方法。
- 前記第1のpHが5.5〜7.2の範囲であり、前記第2のpHが7.2〜7.6の範囲である、請求項18に記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、抗体、一本鎖抗体又は抗体フラグメントであり、活性が抗原に対する結合活性である、請求項18に記載の方法。
- 前記ポリペプチドが、前記親ポリペプチドから進化した天然に存在しない変異ポリペプチドである、請求項18に記載のポリペプチド。
- 前記変異ポリペプチドが、前記親ペプチドよりも高い割合の荷電アミノ酸残基を有する、請求項33に記載のポリペプチド。
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