JP2018524287A - 造影後の膵炎のリスクを低下させるための組成物及び方法 - Google Patents
造影後の膵炎のリスクを低下させるための組成物及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018524287A JP2018524287A JP2017561234A JP2017561234A JP2018524287A JP 2018524287 A JP2018524287 A JP 2018524287A JP 2017561234 A JP2017561234 A JP 2017561234A JP 2017561234 A JP2017561234 A JP 2017561234A JP 2018524287 A JP2018524287 A JP 2018524287A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pancreatitis
- cell
- radiocontrast
- pancreatic
- calcineurin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/04—X-ray contrast preparations
- A61K49/0433—X-ray contrast preparations containing an organic halogenated X-ray contrast-enhancing agent
- A61K49/0438—Organic X-ray contrast-enhancing agent comprising an iodinated group or an iodine atom, e.g. iopamidol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
- A61K38/13—Cyclosporins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/04—X-ray contrast preparations
- A61K49/0433—X-ray contrast preparations containing an organic halogenated X-ray contrast-enhancing agent
- A61K49/0447—Physical forms of mixtures of two different X-ray contrast-enhancing agents, containing at least one X-ray contrast-enhancing agent which is a halogenated organic compound
- A61K49/0452—Solutions, e.g. for injection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/507—Pancreatic cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/06—Gastro-intestinal diseases
- G01N2800/067—Pancreatitis or colitis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
【選択図】 図1A
Description
本出願は、2015年5月27日に出願された米国仮特許出願第62/167,143号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、米国国立衛生研究所により授与された助成金No. DK093491、DK083327及びDK03002の下、政府支援により成された。米国政府は、本発明に特定の権利を有する。
本発明は、膵臓及び関連構造の造影研究において使用するための、造影後の膵炎のリスクを低減する組成物、及び対応する使用方法に関する。
内視鏡的逆行性胆管膵管造影(ERCP)は、内視鏡が十二指腸まで挿入され、ファーター膨大部にカニューレが挿入される一般的な消化管処置である1。膵胆管系をX線写真上で可視化するため、カテーテルを通して放射線造影剤(RC)が注入される。ERCPは、米国において推定年間発生率が10万人当たり60〜75人実施される一般的な処置である2。これらは、一般的な胆管(CBD)に嵌入した胆石の除去及び様々な他の治療的介入のために不可欠である。しかし、最も一般的なERCPの医源性合併症は、膵臓の有痛性の炎症性障害である急性膵炎である。ERCP後膵炎(PEP)の頻度は1%〜15%にわたり、全平均3.5%を有する3、4。PEPは、膵管の静水圧と膵臓のRCへの曝露との合併に起因するものであった。高リスク状況で、膵管ステントの留置又は抗炎症薬インドメタシンの直腸投与が用いられていた5〜9。しかし、PEPを予防するために広く受け入れられている戦略(例えば、直腸インドメタシンによる前処理2)の効力には課題が残っていた3、4。PEP予防の探究は、これまで解明されていない、RCが、膵炎をもたらす膵臓傷害を誘導する根本的な機構を明らかにすることを要する。
本発明は、放射線造影媒体を用いる処置(特に膵臓、胆嚢及び/又は胆管系を選択的に造影する処置)のための、造影後の膵炎のリスクを低下させるための組成物及び方法に関する。
説明の明確性のため、限定のためではなく、詳細な説明は以下の副節に分けられる:
(a) 放射線造影剤;
(b) カルシニューリン阻害剤;
(c) 抗酸化剤;
(d) 放射線造影媒体組成物及びキット;
(e) 処置方法;及び
(f) アッセイ系。
本発明による使用のための放射線造影媒体は、1つの構成要素として、放射線造影剤を含む。放射線造影剤は、X線ベースの造影技術(例えば、限定するものではないが、コンピュータ化断層撮影及びX線撮影)において、体内構造の可視性を高める組成物である。特定の非限定的例として、本発明の放射線造影媒体において使用するための放射線造影剤は、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法(「ERCP」)における造影に適した薬剤である。
本発明の放射線造影媒体の第2成分は、カルシニューリンの作用を直接的に又は間接的に阻害することができる1種以上のカルシニューリン阻害剤である。具体的な非限定的実施形態において、阻害されるカルシニューリンはヒトカルシニューリンである。
本発明の放射線造影媒体の第3の成分は、抗酸化剤である。
非限定的実施形態において、本発明は、以下の3つの構成要素:(i) 放射線造影剤;(ii) カルシニューリン阻害剤;及び(iii) 抗酸化剤を、被験体における放射線造影に有効で、カルシニューリン阻害剤及び抗酸化剤を伴わずに投与される放射線造影剤と比較して造影後の膵炎のリスクを低下させる量で含む、本発明による使用のための放射線造影媒体を提供する。好適な放射線造影剤、カルシニューリン阻害剤及び抗酸化剤成分の非限定的な例は、上の節に示される。
本発明によれば、本発明による放射線造影媒体は、造影処置において、従来の造影媒体を用いて造影処置が行われた対照被験体におけるリスクと比較して処置後膵炎のリスクを低下させるため、従来の造影媒体の代わりに使用することができる。例えば、対照被験体は、治療される被験体と類似の臨床プロファイルを有し得る。
特定の非限定的実施形態において、本発明は、造影後の膵炎のリスクを低下させる薬剤を同定するために使用することができるアッセイ系を提供する。アッセイ系は、in vitroアッセイであってもよいし、in vivoアッセイであってもよい。
試薬及び動物
RCは、主として、低浸透圧(672mOsm/kg水)、非イオン性、ヨウ化(300mg/ヨウ素/ml)造影媒体として分類されるイオヘキソール(Omnipaque 300;GE Healthcare;Princeton、NJ)を指す。本研究から得られる主要な知見を確認するため、第2のRCであるイオパミドール(Isovue 300;Bracco Diagnostics;Monroe Township、NJ)(イオヘキソールと同じカテゴリー内)を使用し、その使用は本文中に明記される。NFAT-ルシフェラーゼ(Qiagen;Valencia, CA)、NF-κBルシフェラーゼ(Vector Biolabs;Philadelphia PA)、及び構成的に活性なカルシニューリン(ΔCn)のアデノウイルスを、先に記載されたとおりに構築した10〜12。他の全ての試薬は、別段に特定されない限り、Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)から購入した。体重22〜28gの雄のSwiss websterマウス(Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME)に標準的な実験食を食べさせ、水は自由に摂取させた。CnAβ-/-マウスは、B6129J/F1系統のマウスであった13。週齢、性別及び系統が一致する対照マウスを、野生型(WT)対照として使用した。全ての動物実験は、ピッツバーグ大学動物実験委員会によって認可されたプロトコルを使用して実施した。
CBD及び膵管への逆行性注入の処置は、以前に報告されている14。手短に言えば、Swiss websterマウスを、イソフルランで麻酔した。中線切開を行って腹腔を明らかにした。十二指腸を裏返してその遠位側を明らかにし、結紮によりその場に保持した。十二指腸の腸間膜反対側を通して30Gの針を挿入し、CBDにカニューレ挿入した。注入剤の十二指腸管腔への逆流を防止してカニューレをその場に保持するため、遠位CBD(十二指腸の近く)に小ブルドック鉗子を適用した。肝臓への注入を防止することによって流れを膵管に向けるため、近位CBD(肝臓の近く)にはさらに大きなブルドック鉗子を適用した。総容量50〜100μlのイオヘキソール、イオパミドール、又は正常生理食塩水(NS)を、P33灌流ポンプ(Harvard Apparatus, Holliston, MA)を用いて1分当たり10〜20μlで5分間注入した。注入完了後、ブルドック鉗子を外した。外側の腹部創傷を、7mm創傷クリップを用いて閉じ、手術の直後にブプレノルフィン(0.075mg/kg)の単回注射を投与した。マウスは、ヒーティングパッド上で処置後30分間回復させた。手術後、これらのマウスに食物及び水を自由に摂取させた。
腺房細胞に、高親和性Ca2+-検出色素Fluo-4AM(Kd=300nM;Invitrogen)を室温でロードした。酸洗浄ガラスカバースリップ上に腺房細胞をプレーティングし、その後灌流チャンバーに取り付けた。その後すぐに、HEPESバッファー中で希釈した異なる濃度のRC(17〜50%)により、これらを室温で刺激した。各実験の最後にカルバコール(1mM)を投与し、細胞がインタクトであり、細胞内Ca2+貯蔵を可動化することができたことを確認した。Zeiss LSM710レーザー走査共焦点顕微鏡を、20X、開口数1.4の対物レンズを用いて使用した。色素を488nmの波長で励起させ、>515nmの発光シグナルを2秒毎に収集した。個々の腺房細胞由来の蛍光を記録した。ImageJソフトウェア(NIH, Bethesda, MD)を用いて記録の分析を行い、各領域中の長時間にわたる平均蛍光をグラフ化した。
先に記載された手順に従って、腺房細胞にAd-NFAT-ルシフェラーゼを感染させた10、15、16。この構築物は、9つのタンデムなNFAT結合部位を含有するIL-4プロモーターの下流に配置されたルシフェラーゼ遺伝子を含む10。腺房細胞を、刺激の前にNFAT駆動ルシフェラーゼアデノウイルスと共に1.5時間インキュベートした。記載される阻害剤は全て、RCによる刺激の前に30分間添加した。ルシフェラーゼアッセイ系を用いて、NFAT-ルシフェラーゼを測定した。手短に言えば、細胞を、1,000rpmで5分間スピンさせ、PBSで洗浄し、レポーター溶解5Xバッファー(Promega, #E397A, Madison, WI)を用いて溶解させた。サンプルをボルテックスし、12,000gで2分間スピンした。上清をプレーティングし、Synergy H1プレートリーダー(BioTek, Winooski, VT)を用いて発光を測定し、全タンパク質に対して正規化した。
AR42J細胞を、デキサメタゾン(100nM)を48〜72時間投与することによって腺房表現型へと分化させた17。AR42J細胞に、先に記載された方法を用いて、刺激の16時間前にAd-NF-κBルシフェラーゼを感染させた12。DMEM/F12培地による洗浄後、腺房細胞を48ウェルプレートに均等に分配し、37℃で30分間インキュベートした。これらを、異なる濃度のRCと共に、異なる時間でインキュベートした。市販のルシフェラーゼアッセイ(Promega, Madison, WI)を用いて、NF-κBルシフェラーゼを測定した。手短に言えば、細胞を、1,000rpmで5分間スピンし、PBSで洗浄し、レポーター溶解5Xバッファー(Promega, カタログno. E397A)を用いて溶解した。サンプルをボルテックスし、12,000xgで2分間スピンした。上清をプレーティングし、Synergy H1プレートリーダー(BioTek, Winooski, VT)を用いて発光を測定し、全DNAに対して正規化した。
AAV6-NF-κBルシフェラーゼレポーターを構築し、HEK293細胞中で増殖させ、先に記載されたとおりに精製した18〜20、39。容量100μlのウイルス(1012 GCP/ml)を、上記の及び最近刊行されたRC注入技術21、39と同じ技術を用いて、10μl/分の速度で膵胆管内に注入した。手術から5週間の回復後、マウスは、FK506処置と共に、又はFK506処置を伴わずにPEP誘導を受けた。手術後の異なる時点(2〜36時間にわたる)で、造影の開始15分前に、最初にルシフェリン(150μg/体重g)の皮下注射を首筋に投与することによって生物発光シグナルを得た。マウスをイソフルランで短時間麻酔し、生物発光造影チャンバー(IVIS spectrum imager;Perkin Elmer, Waltham, MA)中で、3〜10分間仰臥位に配置した。平均ピクセル強度を目的の膵臓領域から測定した(上腹部中)。各マウスから得られたロータイムポイント(raw time point)を、ゼロ時点におけるその個々のベースライン強度に対して正規化した。
膵臓、十二指腸及び脾臓を、4%パラホルムアルデヒド中で室温にて24時間固定した。パラフィン包理切片をヘマトキシリン及びエオシン(HE)で染色し、10個の別視野にわたり(10 separate field)20X対物レンズを用いて盲検様式で評価した。Wildi et al67に記載されているとおり、膵臓組織を、浮腫、炎症性浸潤及び壊死について評価した。全血サンプルを、4℃にて1,500xgで5分間遠心分離した。先に記載されたとおり68、Phadebas kit(Amersham Pharmacia, Rochester NY)を用いて血清アミラーゼを測定した。
膵臓腺房細胞集団を、先に記載されたとおりに26、69、わずかに改変を加えて単離した。手短に言えば、膵臓を除去し、その後20mM HEPES(pH7.4)、95mM NaCl、4.7mM KCl、0.6mM MgCl2、1.3mM CaCl2=、10mMグルコース及び2mMグルタミン、さらに1%BSA、1X MEM非必須アミノ酸(GIBCO/BRL)、200単位/ml 4型コラゲナーゼ(Worthington, Freehold, NJ)、及び1mg/mlダイズトリプシン阻害剤を含むバッファー中で5分間ミンチした。この組織を90rpmで振盪しながら37℃で30分間インキュベートした。消化物を15mL円錐管に移し、コラゲナーゼ非含有バッファーで洗浄した。懸濁液を15〜20秒激しく振盪し、細胞をより小さなクラスターに分離した。
1%ピルビン酸ナトリウム及び1%BSAを加えたF12/DMEM培地中2mg/mlコラゲナーゼを用いてマウス膵腺房を単離した。3回洗浄後、0.1%BSAを加えたF12/DMEM培地中で腺房細胞を培養した。細胞をRCで処理し、異なる時点で回収した。細胞を1X PBSで洗浄し、1X SDSサンプルバッファー中で溶解した。p65の核移行を検証するため、NE-PER nuclear and cytoplasmic extraction kit (Thermo Scientific, Rockford, IL)を用いて核画分及び細胞質画分を抽出した。40マイクログラムのタンパク質を、4〜20%勾配のPAGEゲル上に流した。抗体は全て、Cell Signaling (Beverly, MA)から購入した。IκBαのSer32におけるリン酸化を、ホスホ-IκBα-特異的抗体(#2859)を用いるウェスタンブロットによって検証した。ローディング対照として、アクチン(#4967)を使用した。p65のブロットは、Cell Signalingの抗体(#4764)を用いて、核画分及び細胞質画分上で行った。GAPDH(#2118)及びヒストン3(#9715)を、細胞質マーカー及び核マーカーとしてそれぞれ使用した。Image Jソフトウェア(NIH)を用いてデンシトメトリーを行った。
RC添加の前に、腺房細胞を、50μg/mlのヨウ化プロピジウム(PI)を含む48ウェルプレート中で30分間インキュベートした。6時間までの時間経過にわたって、536nm励起波長及び617nm発光波長で蛍光を測定した。0.5%トリトン-X100による細胞溶解後に測定された蛍光を使用して、結果を全DNAに対して正規化した。
単離後、膵臓腺房細胞を、DMEM/F12培地(48ウェルプレートで0.5mL/ウェル)中で37℃の水浴で培養し、RC±FK506で処置した。指定時点で細胞を回収し、100μlの溶解バッファー(100mM Tris pH7.75、4mM EDTA)中で溶解した。ENLITENルシフェラーゼ/ルシフェリン試薬(Promega, カタログno. FF2021)を用いて、20μlアリコートの腺房細胞溶解物からATPレベルを測定した。
4℃にて40mgの組織を2mlのTRIzol試薬(Life Technologies; Grand Island NY)中でホモジナイズし、直ぐに液体窒素中でフラッシュ凍結することによって、膵頭部由来の全RNAを得た。サンプルを氷上で解凍し、4℃にて12,000xgで10分間遠心分離した。上清を200μlのクロロホルムで希釈し、4℃にて12,000xgで15分間遠心分離した。上側の水相を0.5mlのイソプロパノールで処理し、4℃にて10,000xgで10分間遠心分離した。150μlの75%エタノールでペレットを再懸濁し、4℃にて7,500xgで5分間遠心分離した。このペレットを空気乾燥させ、100μlのヌクレアーゼ非含有水中で溶解した。全RNAサンプルを使用し、iScript Advanced cDNA合成キット(Bio Rad;Hercules, CA)を用いてcDNAを作製した。
データは、別段に記載されない限り、平均±標準偏差として表した。不対T検定を用いて統計的有意性を決定し、P値≦0.05と定義した。
マウスにおいて、RCの導管内注入は膵臓傷害を誘導する
マウスのPEPモデルは、「方法」に詳述されるとおり、CBDの十二指腸経由のカニューレ挿入を行うことによって発症させた(図1A)。近位CBDをクランプし、これにより肝臓への逆流を妨げることによって注入物を膵管に向けた。
RC曝露はPEPの主要原因であり、このため、単離膵臓細胞中で、RCがex vivoで膵炎を開始する機構について試験した。導管細胞は膵管及び小導管を裏打ちするが、膵臓の85%超は、膵臓腺房細胞で構成されている24。膵炎は腺房細胞中で始まり、大半の実験モデルにおいて、最も早期の重要な因子の1つは、大振幅の、ピークプラトー(すなわち持続的)Ca2+シグナルの誘導である25〜27。RCが腺房細胞Ca2+シグナルを誘導するか否かを試験するため、腺房として分類される5〜15個の初代腺房細胞の小クラスターを新たに単離した。これらに、高親和性Ca2+色素Fluo-4AMをロードし、タイムラプス共焦点造影を用いて灌流チャンバー中で造影した(図1C〜1F)。ERCP中、慎重にRCを膵管に注入する専用の膵管造影法を用いた場合でも、発明者らは、相当量の膵液希釈液から、腺房管腔が10%〜50%のRC濃度に曝露されていると推定した。この理由から、腺房には上記のRCの希釈液が灌流していた。
RCはCa2+シグナルを誘導するため、本実施例は、カルシニューリン(膵炎における推定Ca2+標的)が活性化されたか否かについて試験した。カルシニューリン活性化について試験するため、IL-4プロモーター由来の9つのタンデムNFAT結合モチーフからなるアデノウイルスNFAT(活性化T細胞の核因子)-ルシフェラーゼを使用した10。細胞質におけるNFATのカルシニューリン脱リン酸化は核への移行を引き起こし、これによりルシフェラーゼを駆動する。
膵炎における炎症の主要調節因子は、幾つかの炎症遺伝子(例えば、IL-6、Spi2a、TGF-β、及びIL-1β)28〜31を誘導することができる転写因子NF-κBである。初代腺房細胞中で、増加濃度のRCは、IκBαのセリン32におけるリン酸化(早期分解シグナル32)及びp65の核移行を誘導した(図6A)。RCがレポーター系においてNF-κBを誘導するか否かを決定するため、本発明者らは、一晩の感染及びその後6〜8時間のRC投与を必要とするアデノウイルスNF-κBルシフェラーゼを使用した12。このアッセイのための長期間の培養において初代腺房細胞を使用することには制限があるため、本発明者らは、デキサメタゾン(100nM)で48〜72時間プライミングされると腺房細胞表現型を誘導するAR42J膵臓細胞株17に変更した。RCは、この細胞株中でも、また初代腺房細胞中でもCa2+シグナルを誘導し、カルシニューリンを活性化した(図7)。RCは、NF-κBルシフェラーゼの濃度及び時間依存性の増加を引き起こした(図6B)。ERCP中の曝露条件をより密接に模倣するRCの短時間曝露(すなわち25%RCを10分間投与、その後洗浄)でも、ベースラインを上回るNF-κBルシフェラーゼの5倍の増加をもたらした。しかし、統計的に有意な増加は、60、90、及び120分で観察され、それぞれ、ベースラインを上回る58、59、及び112倍の増加をもたらした(P<0.05)。RCイオパミドールはまた、NF-κB活性化を濃度依存様式で誘導した(図8A)。
カルシニューリンがNF-κB活性化を誘導するのに十分であるか否かを決定するため、AR42J細胞に、構成的に活性なカルシニューリン(自己阻害ドメインを含まない切断触媒カルシニューリンAサブユニット)を含むアデノウイルス11(Ad-ΔCn;図6E)を感染させた。
単離初代腺房細胞におけるヨウ化プロピジウム(PI)取り込みは、in vivoにおける膵炎中の腺房傷害及び壊死のサロゲートである。6時間のRC曝露は、PLC、IP3RCa2+放出、及び細胞質Ca2+上昇に依存する(これらの各阻害剤又はキレート剤に基づく)、PI取り込みの濃度依存性の増加をもたらした(図9)。同様の結果は、AR42J腺房細胞株中で観察された(図10A)。さらに、RCは、いずれも濃度依存様式でATPレベルの枯渇を引き起こした(図9F)。しかし、FK506はATP枯渇を予防することはできず、in vitroでは、カルシニューリンが、ATP枯渇をもたらすミトコンドリア病変に必要ではないことを示していた。
本実施例は、マウスにおいてカルシニューリンがPEPを媒介するか否かについてもin vivoで試験した(図11)。マウスにおいてカルシニューリンを最大に阻害した先のレジメン16、38に基づいて、FK506(1mg/kg)の腹腔内注射を、導管内RC注入の1時間前に投与し、その後、外科処置の2.5時間後、5.5時間後及び12時間後に投与した。外科処置の24時間後に測定された、膵炎後の膵臓の組織学的重症度は予防され、血清アミラーゼはNS偽条件のレベルまで低下した(図11A〜11C及び図10B〜10C;P<0.05)。この効果は、PEPに対して一般的に投与されるNSAID、インドメタシンの治療的投与と同程度にロバストであった(図12)。
本研究は、膵臓傷害の文脈を用いた、RC曝露が、異常なCa2+シグナル及び活性化カルシニューリンを誘導することによってNF-κBの活性化を引き起こし、上皮損傷及び器官損傷をもたらすことの最初の証明である(図15)。
7.1. 材料及び方法
内視鏡的逆行性胆管膵管造影(ERCP)は一般的な消化管処置であり、1%〜15%の急性膵炎のリスクを与える70。ERCP後膵炎(PEP)を予防するために広く受け入れられている戦略、例えば直腸インドメタシン8による前処理の効力には最近、課題が生じている71、72。PEP予防の探究には、PEPを開始する中心的機構を明らかにすることが必要である。初代マウス及びヒト膵臓腺房細胞の単離から得られたPEPのex vivoサロゲートモデルを用いて、本発明者らは最近、ERCP中に使用される一般的な放射線造影剤が、カルシウム活性化ホスファターゼであるカルシニューリン(Cn)の活性化を通して腺房細胞の炎症性シグナル伝達及び傷害を誘導することを示した73。マウスにおけるPEPのin vivoモデルにおいて、本発明者らは、グローバルCnノックアウトマウス(CnAβ欠損)又はCn阻害剤FK506若しくはシクロスポリンA(CsA)の頻繁な予防的投与によるCnの全身性阻害がPEPを予防したことを見出した。Cnはユビキタスに発現しているため、重大な未解決の問題は、in vivoにおいて、腺房細胞Cnの遮断自体がPEPを予防するのに十分であるか否かである。
試薬は全て、別段に特定されない限り、Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)から購入した。CnB1のloxP隣接(「フロックス(floxed)」)アレルを有するマウス(CnB1f/f;C57BL/6系統と戻し交雑)は、Gerald Crabtree博士74からの親切な贈り物であり、Ela-CreERT2トランスジェニック系統は、Craig Logsdon博士75からの親切な贈り物であった。Lox-Stop-Lox tdTomato赤色レポーターマウスはJackson研究所76から得た。雄及び雌両方の遺伝子組み換えマウスを、in vivo研究に同等に使用した。体重25gの8〜10週齢の野生型の雄及び雌のSwiss websterマウスを使用して、FK506及びCsAの導管内投与の効力を評価した。全マウスを、22℃にて、12時間の明暗サイクルで飼育し、標準的な実験食で維持して食物及び水は自由に摂取させた。全ての動物実験は、ピッツバーグ大学動物実験委員会によって認可されたプロトコルを用いて実施した。
CnB1f/fマウスをEla-CreERT2マウスと交雑し、ホモ接合Ela-CreERT2/CnB1f/f系統を作製した。膵臓腺房細胞中でCnB1を欠失させるため(CnB1Δ/Δ)、CreERT2/CnB1f/fマウスは、累積用量の5〜6mgタモキシフェンを、毎日又は1日おきに総期間5〜6日間で腹腔内に受容した。PEPは、最後のタモキシフェン注射(図16A)の一週間後に誘導された。Ela-CreERT2の挿入がないCnB1f/f系統を対照として供した。これらの対照もタモキシフェンを受容した。
記載されたとおり77、新たに単離したマウスの膵臓組織及び肝臓組織からゲノムDNAを調製した。手短に言えば、上記の組織を氷上でミンチし、プロテイナーゼKを含む塩化ナトリウムトリス-EDTA(STE)バッファー中でホモジナイズした。ホモジネートを、断続的にボルテックスしながら55℃で3時間インキュベートした。プロテイナーゼKの不活性化後、ホモジネートを4℃で遠心分離し、ゲノムDNAを含む上清をイソプロパノールで沈殿させた。沈殿したゲノムDNAを4℃でペレット化し、70%エタノールで洗浄し、空気乾燥させて、PCR反応のために200μLの1xトリス-EDTAバッファーに溶解した。予測アンプリコンの位置及び大きさの模式図は、図17に提供される。プライマー配列は以下のとおりである。
先に記載されたとおり16、単離膵臓腺房細胞にNFAT-ルシフェラーゼアデノウイルスを感染させた。手短に言えば、細胞を、NFAT-ルシフェラーゼアデノウイルス(力価、2 x 109 IFU)と共に30分間インキュベートし、その後、これらを放射線造影剤に約6時間曝露した。刺激後、細胞を回収し、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で1回洗浄し、1X 溶解バッファー(Promega, #E397A, Madison, WI)で溶解し、4℃にて12,000gで5分間遠心分離した。ルシフェラーゼアッセイ系(Promega, #E1483)を用いてSynergy H1プレートリーダー(BioTek、Winooski、VT)中で上清から発光を測定し、BCA法(Thermo Scientific, Rockford, IL)により決定された全タンパク質を用いてデータを正規化した。
先に記載されたとおり19、39、pEla-iCre又はpCMV-ZsGreenをpAAV-MCSプラスミド(Cell Biolab #VPK-410;San Diego, CA)中にクローニングすることによってAAV6プラスミドを作製した。一旦クローン化した後、AAV6プラスミドを、2つのヘルパープラスミド:(1) 血清型6のrep遺伝子及びcap遺伝子を有するパッケージングプラスミドであるpAAV-RepCap (Applied Viromics;cat #0912-06;Fremont, CA);及び(2) ヘルパー遺伝子を有するプラスミドであるpHelper (Applied Viromics;cat# 0913;Fremont, CA)と共に、HEK293細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクションの72時間後に細胞を回収し、50mM Tris、150mM NaCl及び2mM MgCl2を含む溶解バッファーに懸濁した。
先に記載されたとおりに21、39、AAV6を精製した。手短に言えば、トランスフェクトしたHEK293細胞を3回凍結/融解してAAV6ウイルスを放出させた。細胞溶解物をベンゾナーゼ(0.05単位)で37℃にて30分処理し、その後1%デオキシコール酸ナトリウムで37℃にて30分処理した。溶解物を、2500xgで10分スピンし、上清を回収した。40%ポリエチレングリコール(PEG-800)と2.5M塩化ナトリウムの1:4混合物を用いて、AAV6を0℃で2時間沈殿させた。溶液を2500xgで30分スピンし、PEGペレットを回収した。ペレットをHEPESバッファー(50mM)に再懸濁し、等容量の100%クロロホルムで処理し、2500xgで10分スピンし、30分空気乾燥させた。50%硫酸アンモニウム及び40%PEG-800を用いて二相分配を行い、2500xgで15分スピンした。硫酸アンモニウム相を回収し、10kDa分子量カットオフSlide-A-Lyser Dialysis Cassette (Thermo Scientific #66810)を用いて4時間透析した。透析を16時間、2回繰り返した。50kDa遠心分離フィルターユニット(Millipore #UFC905024, Billerica, MA)を用いてAAVを濃縮し、-80℃で保存した。QuickTiter AAV定量キット(Cell Biolabs #VPK-145, San Diego, CA)を使用してウイルス濃度を測定した。
AAV6の逆行性膵管注入のための外科処置は、先に記載されたとおりであった73。手短に言えば、100μlの精製AAV6(力価2X1012PFU)を、P33蠕動シリンジポンプ(Harvard Apparatus, Holliston, MA)を用いて、10μl/分の速度で10分間胆膵管に注入した。外科的麻酔は、イソフルラン及び酸素を吸入させることによって達成した。手術の直後に、鎮痛剤ブプレノルフィン(0.075mg/kg)の単回注射を投与した。マウスをヒーティングパッド上で30分間回復させ、PEPの誘導前に、食物及び水を自由に摂取させて4〜6週間飼育した。AAV6注入の効力を確認するため、Lox-Stop-Lox tdTomato赤色レポーターマウスを使用した。上記のとおり、100マイクロリットルの精製AAV6 Ela-iCre(力価2X1012 PFU)を膵管に注入した。手術の5週間後、蛍光解剖用顕微鏡を用いて、腹部器官と一体として膵臓組織を造影し、さらに切開した。
先に記載されたとおりにPEPを誘導した73。手短に言えば、100μlのイオヘキソール(Omnipaque, GE Healthcare, Princeton, NJ)を、20μl/分の速度で5分間胆膵管に逆行性注入した。導管操作(DM)群に由来するマウスは、10μl/分の低速で5分間、50μlの正常生理食塩水の膵管中への逆行性注入を受けた。マウスは、PEP誘導の24時間後に、CO2吸入及び頸椎脱臼によって安楽死させた。偽群に由来するマウスは、開腹手術のみを受けた。
血液は、PEP誘導の6時間後、眼窩後方出血により回収した。血清は、4℃にて1,500xgで10分間遠心分離することによって調製した。血清アミラーゼは、製造者の指示に従ってPhadebas キット(Amersham Pharmacia, Rochester, NY)を用いて測定した。
解剖学的方向を維持するため、膵臓、十二指腸及び脾臓を一体として1つのカセット中に配置した(図18A)。組織を、室温で24時間4%パラホルムアルデヒド中に固定した。パラフィン包理切片を、ヘマトキシリン及びエオシン(HE)で染色した。200Xに拡大した、十二指腸に近位であることにより同定した膵頭部から系統的に選択された10個の視野を盲検様式で評価した。評価スコアは、記載されたとおり5、浮腫、炎症性浸潤及び壊死に対して同等の重み(0〜3)を与えた。浮腫指数は、ImageJ software(NIH, Bethesda, MD)を用いて強度閾値化を行うことによってさらに客観的に線引きした。分析のため、各スライドに由来する少なくとも5つの画像を選択した。各画像を、同じ色閾値に設定した。柔組織中の標識化された領域を浮腫として示し、それらの表面領域を全柔組織領域のパーセントとして計算した。
Leica Bond-Max全自動IHC及びISH染色システム(Leica, Buffalo Grove, IL)を半自動様式で用いて、パラフィン包理組織切片からミエロペルオキシダーゼ(MPO)の免疫組織化学(IHC)を行った。MPOのIHC用の製品は全て、Leica社から購入した(一次抗体を含む)。スライドをBondシステムに搭載し、以下のとおりにプログラムを設定した:Bond脱ワックス溶液(AR9222)を使用する脱パラフィン化、アルコールによる脱水、MPO(PA0491)一次抗体と共に15分間インキュベート、セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)-リンカーを含むBondポリマー精製検出キット(DS9800)と共にインキュベート、内因性ペルオキシダーゼ活性をクエンチするための過酸化水素ブロック、ビオチン非含有系。3,3’-ジアミノベンジジンテトラヒドロクロリド水和物(DAB)、及びヘマトキシリン対比染色。次のステップへ進む前に、Bond Wash Solution(AR9590)又は蒸留水のいずれかを用いてスライドを自動的に洗浄した。陽性対照組織及び陰性対照組織を用いた抗体の系統的最適化後、MPO用の理想的な条件が、MPO BRTU(即時使用可能Bond(Bond Ready to Use))溶液、前処理必要なし、15分間の抗体インキュベーション時間、8分間の一次インキュベーション後時間、及び8分間のDABインキュベーション時間であることが見出された。50Xに拡大した、膵頭部から系統的に選択された5個の視野を盲検様式で評価した。0〜3のスコアを使用して、各視野中の褐色の程度を評価した。
データは、平均±SEMとして表した。GraphPad Prism 6 (La Jolla, CA)を用いて統計的分析を行った。比較は、不対T検定を用いて行った。P値≦0.05を有意と見なした。
腺房細胞中でCnを選択的に欠失させるため、重要な調節サブユニットB1(CnB1)にフロックス(floxed)アレルを含むマウス系統を、完全長腺房特異的ラット膵臓エラスターゼプロモーターによって駆動されるタモキシフェン誘導性Cre系統と交雑した75(図16A及び図17)。正常生理食塩水の低圧導管内注入(導管操作(DM)と命名)により誘導されたPEPの軽症モデルでも、腺房細胞特異的CnB1欠損マウス(CnB1Δ/Δ;図16B)に、組織学的損傷のほぼ完全な低下が生じた。さらに、(速度及び容量を2倍にすることによる)より高圧での放射線造影剤の注入によってPEPを模倣する傷害のより重症なモデルにおいて、CnB1Δ/Δマウスでは、組織学的損傷が著しく低下(偽手術陰性対照群のレベルまで75%低下)した。浮腫、炎症性浸潤(MPO染色により付加的に試験した)、及び壊死を含む全組織学的スコアの各パラメータは減少した(図16C及び図18)。これらの知見は、in vivoで腺房細胞CnがPEPを媒介することを示す。PEPの軽症及び中程度のモデルに加えて、腺房細胞特異的Cn欠失は、胆汁酸であるタウロコール酸塩の注入によって誘導された、急性膵炎の異なるモデルも予防した(図19)。この知見は、膵臓傷害の媒介における腺房細胞Cnの広範な重要性を示した。
要約すると、in vivoで腺房細胞Cnを欠失させるための2つの補完的な遺伝子的アプローチを用いて、またマウスにおけるPEPの2つの重症モデル並びに膵炎の胆汁注入モデルにおいて、本発明者らは、PEP及び膵炎が、腺房細胞Cn欠失によって大きく予防され得ることを示す。これらの有意な知見の翻訳的な帰結は、in vivoで腺房細胞Cnを標的とするCn阻害剤の導管内送達はまた、PEPを低下させることが示されたことである。これらの新たな知見は、Cn阻害剤の慢性投与及び全身性投与が膵炎及び膵臓線維症に罹患しやすくさせる可能性があったが81、82、膵臓に対する急性及び標的化送達が膵炎を予防するというパラドックスを調整する。この研究は、PEPを予防するためのCn阻害剤を含む新規なERCP注入製剤の効力を試験するための臨床試験を開始する契機を提供する。
Claims (17)
- (i) 放射線造影剤;(ii) カルシニューリン阻害剤;及び(iii) 抗酸化剤を、被験体における放射線造影に有効で、カルシニューリン阻害剤及び抗酸化剤を伴わずに投与される放射線造影剤と比較して造影後の膵炎のリスクを低下させる量で含む、放射線造影媒体。
- 放射線造影剤が水溶性非イオン性放射線造影剤である、請求項1に記載の放射線造影媒体。
- カルシニューリン阻害剤がシクロスポリンである、請求項1に記載の放射線造影媒体。
- 抗酸化剤がN-アセチルシステインである、請求項1に記載の放射線造影媒体。
- (i) 放射線造影剤;(ii) カルシニューリン阻害剤;及び(iii) 抗酸化剤を含む請求項1に記載の放射線造影媒体を調製するためのキット。
- 放射線造影剤が水溶性非イオン性放射線造影剤である、請求項5に記載のキット。
- カルシニューリン阻害剤がシクロスポリンである、請求項5又は6に記載のキット。
- 抗酸化剤がN-アセチルシステインである、請求項5、6又は7に記載のキット。
- 被験体における膵臓、胆嚢、及び/又は胆管系を放射線造影する方法であって、被験体の膵臓、胆嚢及び/又は胆管系に、有効量の(i) 放射線造影剤;(ii) カルシニューリン阻害剤;及び(iii) 抗酸化剤を含む上記に示される放射線造影媒体を導入するステップを含む、前記方法。
- 放射線造影剤が水溶性非イオン性放射線造影剤である、請求項9に記載の方法。
- カルシニューリン阻害剤がシクロスポリンである、請求項9又は10に記載の方法。
- 抗酸化剤がN-アセチルシステインである、請求項9、10又は11に記載の方法。
- 造影後の膵炎のリスクを低下させるために試験化合物を使用し得るか否かを決定する方法であって、(i) 炎症誘導性プロモーターに作動可能に連結された、検出可能なレポーターと融合したNFκBをコードする核酸が導入されている初代腺房細胞又は膵臓細胞株の細胞である細胞を提供するステップ;(ii) 細胞を放射線造影剤及び試験化合物に曝露し、NFκB-レポーターの量を決定するステップ;及び(iii) (ii)において決定されたNFκB-レポーターの量を、同等の条件下であるが試験化合物の不存在下で放射線造影剤に曝露された対照細胞中に存在するNFκB-レポーターの量と比較するステップを含み、ここで(ii)において決定されたNFκB-レポーターの量が、(iii)において決定されたNFκB-レポーターの量より少ない場合、造影後の膵炎のリスクを低下させるために試験化合物を使用し得る、前記方法。
- 造影後の膵炎のリスクを低下させるために試験化合物を使用し得るか否かを決定する方法であって、(i) 炎症誘導性プロモーターに作動可能に連結された、検出可能なレポーターと融合したNFATをコードする核酸が導入されている初代腺房細胞又は膵臓細胞株の細胞である細胞を提供するステップ;(ii) 細胞を放射線造影剤及び試験化合物に曝露し、NFAT-レポーターの量を決定するステップ;及び(iii) (ii)におけるNFAT-レポーターの量を、同等の条件下であるが試験化合物の不存在下で放射線造影剤に曝露された対照細胞中に存在するNFAT-レポーターの量と比較するステップを含み、ここで(ii)において決定されたNFAT-レポーターの量が、(iii)において決定されたNFAT-レポーターの量より少ない場合、造影後の膵炎のリスクを低下させるために試験化合物を使用し得る、前記方法。
- 炎症誘導性プロモーターに作動可能に連結された、検出可能なレポーターと融合したNFκBをコードする核酸が導入されている初代腺房細胞又は膵臓細胞株の細胞を含む、請求項14に記載の方法において使用するためのアッセイ系。
- 炎症誘導性プロモーターに作動可能に連結された、検出可能なレポーターと融合したNFATをコードする核酸が導入されている初代腺房細胞又は膵臓細胞株の細胞を含む、請求項14に記載の方法において使用するためのアッセイ系。
- 被験体の膵臓及び関連構造を造影する薬剤として、(i) 放射線造影剤;(ii) カルシニューリン阻害剤;及び(iii) 抗酸化剤を、被験体における造影後の膵炎のリスクを低下させるような量で含む放射線造影媒体を使用するステップを含む、かかる処置を必要とする被験体における造影後の膵炎のリスクを低下させる方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562167143P | 2015-05-27 | 2015-05-27 | |
US62/167,143 | 2015-05-27 | ||
PCT/US2016/034841 WO2016191743A1 (en) | 2015-05-27 | 2016-05-27 | Compositions and methods for reducing the risk of post-imaging pancreatitis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018524287A true JP2018524287A (ja) | 2018-08-30 |
Family
ID=57393407
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017561234A Ceased JP2018524287A (ja) | 2015-05-27 | 2016-05-27 | 造影後の膵炎のリスクを低下させるための組成物及び方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10898592B2 (ja) |
EP (1) | EP3302580B1 (ja) |
JP (1) | JP2018524287A (ja) |
CN (1) | CN107921151A (ja) |
HK (1) | HK1249035A1 (ja) |
WO (1) | WO2016191743A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023063355A1 (ja) * | 2021-10-13 | 2023-04-20 | 国立大学法人 東京大学 | ウイルス感染を評価する方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018081447A1 (en) | 2016-10-26 | 2018-05-03 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Compositions and methods for reducing the rick of radiocontrast-induced nephropathy |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005508840A (ja) * | 2001-03-30 | 2005-04-07 | バイオアドヴァンテックス ファーマ インコーポレイテッド | N−アセチルシステイン組成物及び薬剤毒性治療または防止方法 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5599324A (en) | 1995-05-04 | 1997-02-04 | Boston Scientific Corporation | Catheter for administering a liquid agent |
US7160535B2 (en) | 2001-10-31 | 2007-01-09 | Bracco International Bv | Conjugates of antioxidants with metal chelating ligands for use in diagnostic and therapeutic applications |
WO2003045322A2 (en) | 2001-11-28 | 2003-06-05 | Schering Corporation | Method for treating and preventing pancreatitis |
US7060733B2 (en) | 2002-08-15 | 2006-06-13 | The Regents Of The University Of California | Methods for treating pancreatitis with curcumin compounds and inhibitors of reactive oxygen species |
CA2528144A1 (en) | 2003-06-09 | 2005-01-20 | Mitchell P. Fink | Method for treating acute pancreatitis |
US7947285B2 (en) | 2003-12-12 | 2011-05-24 | Fein Seymour H | Methods for preventing post endoscopic retrograde cholangiopancreatography pancreatitis |
US7833279B2 (en) | 2004-11-12 | 2010-11-16 | Enteromedics Inc. | Pancreatic exocrine secretion diversion apparatus and method |
JP2008535921A (ja) | 2005-04-12 | 2008-09-04 | エラン・ファルマ・インターナショナル・リミテッド | シクロスポリンを含むナノ粒子および放出調節された組成物 |
US20160296559A9 (en) | 2005-06-17 | 2016-10-13 | Sun Uk SONG | Method for treating pancreatitis with mesenchymal stem cells |
DE102005037791A1 (de) | 2005-08-10 | 2007-02-15 | Ernst-Moritz-Arndt Universität Greifswald | Verwendung von spezifischen Trifluormethylketonen zur Vorbeugung und Behandlung einer Pankreatitis |
EP1959982B1 (en) | 2005-12-01 | 2012-08-08 | Flinders Technologies PTY. Ltd. | Methods and compositions for preventing and/or treating pancreatitis |
WO2008021550A2 (en) | 2006-08-16 | 2008-02-21 | Oregon Health & Science University | Thiol-based agents for reducing toxicities associated with medical procedures employing radiographic contrast agents |
WO2008057534A2 (en) | 2006-11-07 | 2008-05-15 | University Of Vermont And State Agricultural College | Methods and compositions for organ protection |
WO2009049022A1 (en) | 2007-10-10 | 2009-04-16 | Ore Pharmaceuticals Inc. | Method for treatment of pancreatitis |
US8192721B2 (en) | 2007-12-13 | 2012-06-05 | Verrow Pharmaceuticals, Inc. | Compositions useful for reducing toxicity associated with gadolinium-based contrast agents |
US20090257999A1 (en) | 2007-12-31 | 2009-10-15 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Method of preventing contrast-induced nephropathy |
WO2009137827A2 (en) | 2008-05-09 | 2009-11-12 | Tiara Pharmaceuticals, Inc. | Controlled release of n-acetylcysteine (nac) for reduction of systemic and/or vascular inflammation |
CN101297975B (zh) | 2008-06-12 | 2010-06-09 | 济南市第四人民医院 | 磁共振胰胆管成像用对比剂 |
CN101627987A (zh) | 2008-07-15 | 2010-01-20 | 陈伟成 | 甲磺酸加贝酯及其衍生物在消除胆结石及治疗胆结石并发症中的应用 |
US8560053B2 (en) | 2009-08-03 | 2013-10-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and apparatuses for endoscopic retrograde cholangiopancreatography |
CN102144978B (zh) | 2011-04-11 | 2013-03-13 | 南京正科制药有限公司 | 一种乙酰半胱氨酸颗粒及其制备工艺 |
US20130123934A1 (en) | 2011-05-13 | 2013-05-16 | Riad Azar | Grooved pancreatic stent |
EP2574333B1 (en) | 2011-09-27 | 2017-01-11 | Friulchem SpA | N-acetylcysteine effervescent tablet and its therapeutical applications |
CN103432099A (zh) | 2013-08-13 | 2013-12-11 | 江苏正大清江制药有限公司 | 一种他克莫司缓释胶囊及其制备方法 |
-
2016
- 2016-05-27 CN CN201680043076.XA patent/CN107921151A/zh active Pending
- 2016-05-27 WO PCT/US2016/034841 patent/WO2016191743A1/en active Application Filing
- 2016-05-27 EP EP16800839.9A patent/EP3302580B1/en active Active
- 2016-05-27 JP JP2017561234A patent/JP2018524287A/ja not_active Ceased
-
2017
- 2017-11-22 US US15/820,600 patent/US10898592B2/en active Active
-
2018
- 2018-07-06 HK HK18108811.0A patent/HK1249035A1/zh unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005508840A (ja) * | 2001-03-30 | 2005-04-07 | バイオアドヴァンテックス ファーマ インコーポレイテッド | N−アセチルシステイン組成物及び薬剤毒性治療または防止方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GASTROENTEROLOGY, (2015.05.14), 149, [3], P.753-764, JPN6020001254, ISSN: 0004341283 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023063355A1 (ja) * | 2021-10-13 | 2023-04-20 | 国立大学法人 東京大学 | ウイルス感染を評価する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1249035A1 (zh) | 2018-10-26 |
EP3302580A1 (en) | 2018-04-11 |
US10898592B2 (en) | 2021-01-26 |
EP3302580A4 (en) | 2019-01-09 |
CN107921151A (zh) | 2018-04-17 |
US20180110885A1 (en) | 2018-04-26 |
EP3302580B1 (en) | 2021-01-20 |
WO2016191743A1 (en) | 2016-12-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Rizvi et al. | Murine liver repair via transient activation of regenerative pathways in hepatocytes using lipid nanoparticle-complexed nucleoside-modified mRNA | |
Jin et al. | Exposure to radiocontrast agents induces pancreatic inflammation by activation of nuclear factor-κB, calcium signaling, and calcineurin | |
EP2679221B1 (en) | Method to enhance tissue regeneration | |
Mitra et al. | Nanoparticle-mediated miR200-b delivery for the treatment of diabetic retinopathy | |
Orabi et al. | Targeted inhibition of pancreatic acinar cell calcineurin is a novel strategy to prevent post-ERCP pancreatitis | |
BR112021012715A2 (pt) | Silenciamento de tgf-beta 1 e cox2 usando sirnas entregues em combinação com inibidores imune checkpoint para tratar câncer | |
Weng et al. | Down-regulation of miR-34a-5p potentiates protective effect of adipose-derived mesenchymal stem cells against ischemic myocardial infarction by stimulating the expression of C1q/tumor necrosis factor-related protein-9 | |
Zimmerman et al. | Calreticulin regulates neointima formation and collagen deposition following carotid artery ligation | |
Li et al. | Somatostatin receptor 5 is critical for protecting intestinal barrier function in vivo and in vitro | |
JP2018524287A (ja) | 造影後の膵炎のリスクを低下させるための組成物及び方法 | |
US20190314345A1 (en) | Calcineurin inhibitor and non-steroidal anti-inflammatory drug to reduce risk of post-imaging pancreatitis | |
Cervantes‑Garcia et al. | Adenoviral‑bone morphogenetic protein‑7 and/or doxazosin therapies promote the reversion of fibrosis/cirrhosis in a cirrhotic hamster model | |
Yang et al. | Repeated administration of adipose-derived mesenchymal stem cells added on beneficial effects of empagliflozin on protecting renal function in diabetic kidney disease rat | |
CN109937053B (zh) | 用于治疗黄斑变性的含有mTOR抑制剂的药物组合物 | |
Rappoport et al. | Effect of intravitreal injection of bevacizumab on optic nerve head leakage and retinal ganglion cell survival in a mouse model of optic nerve crush | |
Fan et al. | Enhanced therapeutic effect of PEDF-loaded mesenchymal stem cell-derived small extracellular vesicles against oxygen-induced retinopathy through increased stability and penetrability of PEDF | |
US20210379104A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising isolated mitochondria for preventing or treating tendinopathy | |
US11376236B2 (en) | Methods and compositions for the treatment of retinopathy and other ocular diseases | |
RU2752089C1 (ru) | Применение соединения для получения лекарственного средства для лечения церебральной микроангиопатии | |
CA3173845A1 (en) | Use of exosome-based delivery of nf-kb inhibitors | |
ES2843724T3 (es) | Antagonistas de NMDAR para el tratamiento de la angiogénesis tumoral | |
JP7498293B2 (ja) | NF-κB抑制剤のエキソソーム基盤伝達の使用 | |
ES2739637T3 (es) | Métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de beta-talasemias | |
JP7366249B2 (ja) | タウタンパク質の蓄積、凝集及びタングル形成抑制用組成物及びその抑制方法 | |
US10801025B2 (en) | MicroRNA therapy for pancreatic cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180112 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20180112 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190404 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20200109 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200121 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200415 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200430 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200908 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201120 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210413 |
|
A045 | Written measure of dismissal of application [lapsed due to lack of payment] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A045 Effective date: 20210831 |