JP2018146423A - カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 - Google Patents
カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018146423A JP2018146423A JP2017042551A JP2017042551A JP2018146423A JP 2018146423 A JP2018146423 A JP 2018146423A JP 2017042551 A JP2017042551 A JP 2017042551A JP 2017042551 A JP2017042551 A JP 2017042551A JP 2018146423 A JP2018146423 A JP 2018146423A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- polypeptide
- isotope
- terminal
- labeled
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 44
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 title claims abstract description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 title claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 99
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 79
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 68
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 66
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 238000001948 isotopic labelling Methods 0.000 claims description 16
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 16
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 39
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 23
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 13
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 6
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 description 5
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 description 5
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 5
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 2
- 102100035024 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 2
- 102100032378 Carboxypeptidase E Human genes 0.000 description 2
- 102100028524 Lysosomal protective protein Human genes 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000000738 capillary electrophoresis-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 108010045774 gag protein (129-135) Proteins 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- FJPHHBGPPJXISY-KBPBESRZSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 FJPHHBGPPJXISY-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- PKKIDZFGRQACGB-QORCZRPOSA-N 2-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PKKIDZFGRQACGB-QORCZRPOSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 108010058255 Carboxypeptidase H Proteins 0.000 description 1
- 108010080937 Carboxypeptidases A Proteins 0.000 description 1
- 102000000496 Carboxypeptidases A Human genes 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030612 Mast cell carboxypeptidase A Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 108010020596 beta-casomorphin 5 Proteins 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 108010065713 glycyl-glycyl-tyrosyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
[1]ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を分析する方法であって、
(a)同位体標識溶液中の1種または複数種のポリペプチドをカルボキシペプチダーゼにより酵素処理する工程と
(b)同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸として検出する工程と
を含んでなる、方法。
[2]ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を同定する、上記[1]に記載の方法。
[3]工程(b)において、同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸であると同定する、上記[2]に記載の方法。
[4]ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を定量する、上記[1]に記載の方法。
[5]工程(b)において、同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸として定量する、上記[4]に記載の方法。
[6]工程(b)において、酵素処理により遊離したアミノ酸を質量分析計で分析する、上記[1]〜[5]のいずれかに記載の方法。
[7]同位体が酸素原子の同位体である、上記[1]〜[6]のいずれかに記載の方法。
[8]酸素原子の同位体が18Oである、上記[7]に記載の方法。
[9]同位体標識溶液がH2 18Oである、上記[1]〜[8]のいずれかに記載の方法。
[10]ポリペプチドが構造未知のものである、上記[1]〜[9]のいずれかに記載の方法。
[11]酵素処理時間が30分以上である、上記[1]〜[10]のいずれかに記載の方法。
[12]同位体標識溶液からなる、ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸の分析用試薬。
[13]同位体標識溶液がH2 18Oである、上記[12]に記載の試薬。
工程(a)は、同位体標識溶液中の1種または複数種のポリペプチドをカルボキシペプチダーゼにより酵素処理する工程である。本発明の方法は、カルボキシペプチダーゼによる酵素処理に先立って分析対象のポリペプチドを同位体標識溶液中に溶解させる工程を含んでいてもよい。
工程(b)は、同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸として検出する工程である。カルボキシペプチダーゼによる酵素処理により最初に遊離してくるアミノ酸がC末端のアミノ酸に対応する。すなわち、ポリペプチドの配列や使用するカルボキシペプチダーゼにもよるが、酵素反応を30分程度実施すると最初にC末端アミノ酸が遊離し、その後遅れてC末端から2番目のアミノ酸、3番目のアミノ酸が順番に遊離してくる。酵素反応溶液を反応開始から5分、10分、15分あるいは20分おきに回収し、遊離アミノ酸の回収率を経時観察することで、遊離してくるアミノ酸の順番を特定することができる。
本発明の別の面によれば、同位体標識溶液からなる、ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸の分析用試薬が提供される。本発明の分析用試薬は、本発明の分析方法における同位体標識溶液に相当することから、本発明の分析方法に関する記載に従って実施することができる。
ペプチド基質を安定同位体標識水の存在下で酵素分解反応に供し、遊離アミノ酸を液体クロマトグラフ質量分析(以下、「LC−MS」という)により定量した。
1mgのカルボキシペプチダーゼY(Worthington社製)を1mLの安定同位体標識水H2 18O(大陽日酸社製、以下「標識水」という)に溶解して酵素溶液(以下同様)を調製した。ペプチド基質:(ベンジルオキシカルボニル基)−Gly−Pro−Leu−Gly−Pro(配列番号1、ペプチド研究所製)を50mMリン酸バッファー(pH6.7)((無水)リン酸二水素ナトリウム(特級)および(無水)リン酸水素ナトリウム(特級)(いずれも和光純薬工業社製)を標識水に溶解して調製、以下同様)に溶解して1.74mMペプチド基質溶液を調製した。500μLのペプチド基質溶液に5μLの酵素溶液を添加して室温に置き、5分後、10分後、30分後、1時間後、2時間後、3時間後および24時間後に50μLをサンプリングし、各サンプルを95℃のヒートブロックで1分間加熱することにより酵素を失活させた。次いで各サンプルを標識水で600倍に希釈し、LC−MSによる遊離アミノ酸定量分析に供した。検量線は、アミノ酸混合標準液H型(和光純薬工業社製)を用いて作成した。なお、「C末端アミノ酸残基の定量値/理論値」×100(%)を遊離アミノ酸の回収率とした。
遊離アミノ酸の定量分析は以下の条件で行った。
カラム:Intrada Amino Acid 150mm×2mm(粒子径3μm、インタクト社製)
検出器:質量分析計(Waters社製)
イオンソース:ESI−positive
Scan range:m/z 50−600
移動相A:アセトニトリル/100mM ギ酸アンモニウム=20/80(v/v)
移動相B:アセトニトリル/ギ酸=100/0.3(v/v)
流量:0.3mL/分
グラジエントプログラム:表1に示す通りとした。
(1)酵素分解反応および分析用サンプルの調製
ペプチド基質:Gly−Gly−Tyr−Arg(配列番号2、ペプチド研究所製)を用いた以外は例1(1)に記載の手順に従ってサンプルを調製した。
遊離アミノ酸の定量分析は、例1(2)に記載の手順に従って行った。
(1)酵素分解反応および分析用サンプルの調製
ペプチド基質:Ser−Gln−Asn−Tyr−Pro−Ile−Val(配列番号3、ペプチド研究所製)を用いた以外は例1(1)に記載の手順に従ってサンプルを調製した。
遊離アミノ酸の定量分析は、例1(2)に記載の手順に従って行った。
(1)酵素分解反応および分析用サンプルの調製
各ペプチド基質:Ser−Gln−Asn−Tyr−Pro−Ile−Val(配列番号3)、Tyr−Gly−Gly−Phe−Leu−Arg−Lys−Tyr−Pro(配列番号4)、Tyr−Pro−Phe−Pro−Gly(配列番号5)およびArg−Pro−Pro−Gly−Phe−Ser−Pro−Phe−Arg(配列番号6)(いずれもペプチド研究所製)を50mMリン酸バッファー(pH6.7)に溶解して各1mMペプチド基質溶液を調製した。各ペプチド基質溶液50μLを採取後、混合し、300μLの50mMリン酸バッファー(pH6.7)を添加して500μLのペプチド基質溶液を調製し、25μLの酵素溶液を添加して室温に置き、経時的にサンプリングし、各サンプルを95℃のヒートブロックで1分間加熱することにより酵素を失活させた。次いで、各サンプルを標識水で20倍に希釈し、LC−MSによる遊離アミノ酸定量分析に供した。検量線の作成と、回収率の算出は、例1(1)に記載の手順に従って行った。
遊離アミノ酸の定量分析は、例1(2)に記載の手順に従って行った。
Claims (13)
- ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を分析する方法であって、
(a)同位体標識溶液中の1種または複数種のポリペプチドをカルボキシペプチダーゼにより酵素処理する工程と
(b)同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸として検出する工程と
を含んでなる、方法。 - ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を同定する、請求項1に記載の方法。
- 工程(b)において、同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸であると同定する、請求項2に記載の方法。
- ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸を定量する、請求項1に記載の方法。
- 工程(b)において、同位体で標識されていないアミノ酸をカルボキシル末端のアミノ酸として定量する、請求項4に記載の方法。
- 工程(b)において、酵素処理により遊離したアミノ酸を質量分析計で分析する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 同位体が酸素原子の同位体である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 酸素原子の同位体が18Oである、請求項7に記載の方法。
- 同位体標識溶液がH2 18Oである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- ポリペプチドが構造未知のものである、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 酵素処理時間が30分以上である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 同位体標識溶液からなる、ポリペプチドのカルボキシル末端のアミノ酸の分析用試薬。
- 同位体標識溶液がH2 18Oである、請求項12に記載の試薬。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017042551A JP7173452B2 (ja) | 2017-03-07 | 2017-03-07 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
JP2022141381A JP7318171B2 (ja) | 2017-03-07 | 2022-09-06 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017042551A JP7173452B2 (ja) | 2017-03-07 | 2017-03-07 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022141381A Division JP7318171B2 (ja) | 2017-03-07 | 2022-09-06 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018146423A true JP2018146423A (ja) | 2018-09-20 |
JP7173452B2 JP7173452B2 (ja) | 2022-11-16 |
Family
ID=63591954
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017042551A Active JP7173452B2 (ja) | 2017-03-07 | 2017-03-07 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7173452B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3816630A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Christian-Albrechts-Universität zu Kiel | Analysis of protein termini |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63196857A (ja) * | 1987-02-10 | 1988-08-15 | Seiko Instr & Electronics Ltd | タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 |
JPH07203993A (ja) * | 1994-01-20 | 1995-08-08 | Toray Res Center:Kk | 蛋白質のカルボキシル末端断片の分離方法 |
JP2005053929A (ja) * | 1990-05-17 | 2005-03-03 | Altana Pharma Ag | 肺胞界面活性タンパク質 |
JP2005121380A (ja) * | 2003-10-14 | 2005-05-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 蛋白質分析方法 |
US20080032322A1 (en) * | 2006-06-30 | 2008-02-07 | University Of North Dakota | Method for incorporation of two oxygen atoms into digested peptides using peptidases |
CN101173926A (zh) * | 2006-11-03 | 2008-05-07 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 稳定同位素18o标记蛋白质组双重定量方法与试剂盒 |
JP2010508503A (ja) * | 2006-10-31 | 2010-03-18 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 質量分光によるタンパク質分解処理の分析 |
-
2017
- 2017-03-07 JP JP2017042551A patent/JP7173452B2/ja active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63196857A (ja) * | 1987-02-10 | 1988-08-15 | Seiko Instr & Electronics Ltd | タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 |
JP2005053929A (ja) * | 1990-05-17 | 2005-03-03 | Altana Pharma Ag | 肺胞界面活性タンパク質 |
JPH07203993A (ja) * | 1994-01-20 | 1995-08-08 | Toray Res Center:Kk | 蛋白質のカルボキシル末端断片の分離方法 |
JP2005121380A (ja) * | 2003-10-14 | 2005-05-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 蛋白質分析方法 |
US20080032322A1 (en) * | 2006-06-30 | 2008-02-07 | University Of North Dakota | Method for incorporation of two oxygen atoms into digested peptides using peptidases |
JP2010508503A (ja) * | 2006-10-31 | 2010-03-18 | コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ | 質量分光によるタンパク質分解処理の分析 |
CN101173926A (zh) * | 2006-11-03 | 2008-05-07 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 稳定同位素18o标记蛋白质组双重定量方法与试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
DESIDERIO ET AL.: "Preparation of Stable Isotope-Incorporated Peptide Internal Standards for Field Desorption Mass Spec", BIOMEDICAL MASS SPECTROMETRY, vol. 10, no. 8, JPN6022022171, 1983, pages 471 - 479, ISSN: 0004791560 * |
TAKAO ET AL.: "Facile Assignment of Sequence Ions of a Peptide Labelled with 18O at the Carboxyl Terminus", RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, vol. Vol.5/Iss.7, JPN6021012771, 1991, pages 312 - 315, ISSN: 0004791562 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3816630A1 (en) * | 2019-10-30 | 2021-05-05 | Christian-Albrechts-Universität zu Kiel | Analysis of protein termini |
WO2021084089A1 (en) | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Christian-Albrechts-Universität Zu Kiel | Analysis of protein termini |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7173452B2 (ja) | 2022-11-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hao et al. | Recent advances in mass spectrometric analysis of protein deamidation | |
JP4913587B2 (ja) | ペプチドおよびタンパク質定量法 | |
JPWO2012111249A1 (ja) | 質量分析法における質量変化を検出する方法及び安定同位体標識タンパク質の絶対量の定量方法 | |
WO2010095365A1 (ja) | 質量分析装置を用いたタンパク質定量のための評価用ペプチド、人工標準タンパク質、及びタンパク質の定量方法 | |
WO2012121302A1 (ja) | 分析方法 | |
KR102386584B1 (ko) | Adamts13 효소 활성을 결정하기 위한 방법 및 시스템 | |
JP7173452B2 (ja) | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 | |
An et al. | A mass spectrometry‐based method to screen for α‐amidated peptides | |
Sung et al. | Enhanced carboxypeptidase efficacies and differentiation of peptide epimers | |
JP7318171B2 (ja) | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 | |
JP4659040B2 (ja) | リン酸化タンパク質分析用ゲル内標識化及びゲル内単離方法及びそれを利用したタンパク質のリン酸化位置同定方法 | |
Han et al. | Response boosting-based approach for absolute quantification of gelatin peptides using LC-MS/MS | |
Zheng et al. | Quantitation of a PEGylated protein in monkey serum by UHPLC-HRMS using a surrogate disulfide-containing peptide: a new approach to bioanalysis and in vivo stability evaluation of disulfide-rich protein therapeutics | |
Klapoetke et al. | Disulfide bond characterization of human factor Xa by mass spectrometry through protein-level partial reduction | |
Fnu et al. | Absolute quantitation of peptides and proteins by coulometric mass spectrometry after derivatization | |
JP7419340B2 (ja) | タンパク質バイオマーカーを定量するためのlc-ms/msの使用 | |
CA3041724C (en) | Methods and systems for measuring plasma renin activity | |
US20230366889A1 (en) | Methods of detecting isoaspartic acid | |
Kai et al. | Liquid chromatography of peptides treated with fluorogenic reagents and its application to analyses of opioid peptides, their precursors and related enzymes in rat brain | |
Neubert et al. | Online high-flow peptide immunoaffinity enrichment and nanoflow liquid chromatography/tandem mass spectrometry: assay development for total salivary pepsin/pepsinogen | |
JP2009300094A (ja) | ラベル化によるアミノ酸配列解析方法 | |
Blokland et al. | Analysis for endogenous and recombinant bovine somatotropin in serum.[Conference poster]. | |
Kennedy | In vivo peptidomics: discovery and monitoring of neuropeptides using microdialysis and liquid chromatography with mass spectrometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20190731 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190828 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200204 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210203 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210610 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211116 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220111 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220607 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220906 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20220906 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20220914 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20220920 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221004 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221019 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7173452 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |