JPS63196857A - タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 - Google Patents
タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法Info
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- JPS63196857A JPS63196857A JP2863287A JP2863287A JPS63196857A JP S63196857 A JPS63196857 A JP S63196857A JP 2863287 A JP2863287 A JP 2863287A JP 2863287 A JP2863287 A JP 2863287A JP S63196857 A JPS63196857 A JP S63196857A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、タンパク質のカルボキシル末端よりのアミノ
酸配列決定法に関する。
酸配列決定法に関する。
本発明は、アミノ末端をカラム充填剤に固定したタンパ
ク質のカルボキシル末端のアミノ酸をカルボキシペプチ
ダーゼにより順序遊離させ、そのアミノ酸を同定するこ
とにより、アミノ酸配列を決定するものである。
ク質のカルボキシル末端のアミノ酸をカルボキシペプチ
ダーゼにより順序遊離させ、そのアミノ酸を同定するこ
とにより、アミノ酸配列を決定するものである。
従来、カルボキシペプチダーゼを用いたタンパク質のカ
ルボキシル末端よりのアミノ酸配列決定法においては、
タンパク質と酵素を含む反応混液から適当な時間間隔を
おいて、その一部分を取り出してアミノ酸分析のための
試料としていた。
ルボキシル末端よりのアミノ酸配列決定法においては、
タンパク質と酵素を含む反応混液から適当な時間間隔を
おいて、その一部分を取り出してアミノ酸分析のための
試料としていた。
（参考文献１）
〔発明が解決しようとする問題点〕
従来の、カルボキシペプチダーゼを用いたタンパク質の
アミノ酸配列決定法は、特別な機器を必要とせず簡便で
あるが、試料を大量に消費するため近年求められている
極微量タンパク質あるいは極微量ペプチドの分析には適
さない、そこで本発明はより微量のタンパク賞試料のア
ミノ酸配列を決定する新しい方法を提供しようとするも
のである。
アミノ酸配列決定法は、特別な機器を必要とせず簡便で
あるが、試料を大量に消費するため近年求められている
極微量タンパク質あるいは極微量ペプチドの分析には適
さない、そこで本発明はより微量のタンパク賞試料のア
ミノ酸配列を決定する新しい方法を提供しようとするも
のである。
〔問題点を解決するための手段及び作用〕本発明は、上
記の欠点を克服し、より微量のタンパク質のカルボキシ
ル末端よりのアミノ酸配列を決定するために、カラム充
填剤にタンパク質のアミノ末端を固定して、カルボキシ
ペプチダーゼにより順次遊離されたアミノ酸を検出する
ものである。
記の欠点を克服し、より微量のタンパク質のカルボキシ
ル末端よりのアミノ酸配列を決定するために、カラム充
填剤にタンパク質のアミノ末端を固定して、カルボキシ
ペプチダーゼにより順次遊離されたアミノ酸を検出する
ものである。
以下、実施例に基づいて本発明の詳細な説明する。
実施例１
初めにタンパク質のアミノ末端をカラム充填剤に固定す
る方法を示す、カラム充填剤として用いるアガロースゲ
ルの水酸基に臭化シアンを反応させた後、タンパク質を
加える。〔１３式に従うて反応が進行し、アガロースゲ
ルにタンパク質のアミノ末端が固定される。
る方法を示す、カラム充填剤として用いるアガロースゲ
ルの水酸基に臭化シアンを反応させた後、タンパク質を
加える。〔１３式に従うて反応が進行し、アガロースゲ
ルにタンパク質のアミノ末端が固定される。
ＲＮＨ＊ ：タンパク質あるいはペプチド（参考文献２
） 次いでアガロースゲルに固定されたタンパク質のカルボ
キシル末端のアミノ酸が、カルボキシペプチダーゼによ
り順次遊離されることを示す、但し、ここでは簡単のた
め、タンパク質の代わりにＡｌａ −Ｖａｌ −Ｌｅｕ
−＾１ａ−１１ｅというペンタペプチドを用いた。ア
ミノ末端のアミノ酸であるＡｌａを実施例１の手順に従
ってガラスピーズと結合させた後カラムに詰め、カルボ
キシペプチダーゼの１種であるカルボキシペプチダーゼ
Ａ （ＣＰａｓｅ Ａ ）を含む溶液をカラムに流す、
カラムから溶出された溶液をフラクションコレクターで
分取する０分取した溶液を溶出された順にアミノ酸分析
計にかけ、含まれるアミノ酸を同定した。第１図に示さ
れるように、１１ｅ＋ＡＩａ、Ｌｅｕの順に溶出されて
いることがわかる。この結果より、このペプチドのカル
ボキシル末端よりの配列はｌｉｅ、＾ｌａ、Ｌｅｕの順
であると言える。
） 次いでアガロースゲルに固定されたタンパク質のカルボ
キシル末端のアミノ酸が、カルボキシペプチダーゼによ
り順次遊離されることを示す、但し、ここでは簡単のた
め、タンパク質の代わりにＡｌａ −Ｖａｌ −Ｌｅｕ
−＾１ａ−１１ｅというペンタペプチドを用いた。ア
ミノ末端のアミノ酸であるＡｌａを実施例１の手順に従
ってガラスピーズと結合させた後カラムに詰め、カルボ
キシペプチダーゼの１種であるカルボキシペプチダーゼ
Ａ （ＣＰａｓｅ Ａ ）を含む溶液をカラムに流す、
カラムから溶出された溶液をフラクションコレクターで
分取する０分取した溶液を溶出された順にアミノ酸分析
計にかけ、含まれるアミノ酸を同定した。第１図に示さ
れるように、１１ｅ＋ＡＩａ、Ｌｅｕの順に溶出されて
いることがわかる。この結果より、このペプチドのカル
ボキシル末端よりの配列はｌｉｅ、＾ｌａ、Ｌｅｕの順
であると言える。
実施例２
本実施例においては、自動アミノ酸分析計と同期連結し
た、カルボキシペプチダーゼを用いたタンパク質のカル
ボキシル末端よりのアミノ酸配列決定装置の一例を示す
、第２図に示すように、この装置は大きく分けて、液体
クロマトグラフ、フラクションコレクタ。オートサンプ
ラ、アミノ酸分析計の４つの部分から構成されている。
た、カルボキシペプチダーゼを用いたタンパク質のカル
ボキシル末端よりのアミノ酸配列決定装置の一例を示す
、第２図に示すように、この装置は大きく分けて、液体
クロマトグラフ、フラクションコレクタ。オートサンプ
ラ、アミノ酸分析計の４つの部分から構成されている。
まず、酵素を含む溶液をペリスクリックボンブで送液し
、タンパク質を固定した充填剤を詰めたカラムに流して
カルボキシル末端よりのアミノ酸を順次遊離サ−ｔ＋る
。カラム溶出液をフラクションコレクタで分取した後、
オートサンプラを用いてアミノ酸分析計に試料を供給す
る。
、タンパク質を固定した充填剤を詰めたカラムに流して
カルボキシル末端よりのアミノ酸を順次遊離サ−ｔ＋る
。カラム溶出液をフラクションコレクタで分取した後、
オートサンプラを用いてアミノ酸分析計に試料を供給す
る。
本実施例は、本発明の配列決定法は自動化が容易である
ことを示している。
ことを示している。
（発明の効果〕
本発明の主眼とするところの効果は、タンパク質あるい
はペプチドのカルボキシル末端よりのアミノ酸配列決定
法における、試料の＠量化と、操作の自動化である。
はペプチドのカルボキシル末端よりのアミノ酸配列決定
法における、試料の＠量化と、操作の自動化である。
本発明の重要な点は、タンパク質のアミノ末端をカラム
充填剤に固定し、カルボキシル末端よりのアミノ酸をカ
ルボキシペプチダーゼにより、順次遊離させることにあ
る。
充填剤に固定し、カルボキシル末端よりのアミノ酸をカ
ルボキシペプチダーゼにより、順次遊離させることにあ
る。
実施例においては、Ａｌａ −Ｖａｌ −Ｌｅｕ −Ａ
ｌａ −１１ｅというペンタペプチドを試料とし、カル
ボキシペプチダーゼＡを用いて例を示したのみであるが
、他のタンパク質あるいはペプチドを試料としても可能
なことは明らかであり、実施例に制約されない、よって
、本発明によるタンパク質のアミノ酸配列決定法はその
工業的価値が大である。
ｌａ −１１ｅというペンタペプチドを試料とし、カル
ボキシペプチダーゼＡを用いて例を示したのみであるが
、他のタンパク質あるいはペプチドを試料としても可能
なことは明らかであり、実施例に制約されない、よって
、本発明によるタンパク質のアミノ酸配列決定法はその
工業的価値が大である。
（参考文献）
１、生化学実験講座１．タンパク質の化学■ｐ２０３日
本生化学会編 東京化学同人２、Ｒ，アクスンとＪ、ボ
ラートとＳ。
本生化学会編 東京化学同人２、Ｒ，アクスンとＪ、ボ
ラートとＳ。
エルンバフク著 ネイチャー ２１４巻１９６７年 ｐ
１３０２ （Ｒ，Ａｘｅｎ＋Ｊ、Ｐｏｒａｔｈ＋Ｓ、
Ｅｒｎｂａｃｋ Ｎａｔｕｒｅ ２１４ （１９６７）
１３０２）
１３０２ （Ｒ，Ａｘｅｎ＋Ｊ、Ｐｏｒａｔｈ＋Ｓ、
Ｅｒｎｂａｃｋ Ｎａｔｕｒｅ ２１４ （１９６７）
１３０２）
第１図：溶離液のアミノ酸分析のチャート（ａｌ Ｉｌ
ｅ 山Ｉ Ａｌａ ｆｃ） Ｌｅｕ 第２図ニアミノ酸配列決定装置の概略図１、酵素溶液 ２、ペリスタリンクポンプ ３、恒温槽 ４、カラム ５、フラクシッンコレクタ ６、オートサンプラ 以上 溶出歳のアミノ酸分析のすマート 第１０ 了ミノ６Ｉ己夕”１：矢足狭星の、１既略四沿２図
ｅ 山Ｉ Ａｌａ ｆｃ） Ｌｅｕ 第２図ニアミノ酸配列決定装置の概略図１、酵素溶液 ２、ペリスタリンクポンプ ３、恒温槽 ４、カラム ５、フラクシッンコレクタ ６、オートサンプラ 以上 溶出歳のアミノ酸分析のすマート 第１０ 了ミノ６Ｉ己夕”１：矢足狭星の、１既略四沿２図
Claims (6)
- （１）固体表面上にそのアミノ末端を結合させたタンパ
ク質のカルボキシル末端のアミノ酸を、酵素により順次
遊離させて該アミノ酸を固定することによりタンパク質
もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法。 - （２）酵素はタンパク質のカルボキシル末端のアミノ酸
の遊離を触媒する、カルボキシペプチダーゼである特許
請求の範囲第（１）項記載のタンパク質もしくはペプチ
ドのアミノ酸配列決定方法。 - （３）タンパク質のアミノ末端をカラム充填剤に共有結
合で固定する特許請求の範囲第（１）項記載のタンパク
質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法。 - （４）タンパク質を結合させた充填剤をカラムに詰め、
酵素を含む溶液を流すことにより、アミノ酸を遊離させ
る特許請求の範囲第（１）項記載のタンパク質もしくは
ペプチドのアミノ酸配列決定方法。 - （５）遊離されたアミノ酸をシーケンシャルにアミノ酸
分析計により分析する特許請求の範囲第（１）項記載の
タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法。 - （６）アミノ酸分析は適当な時間間隔をおいて実施する
特許請求の範囲第（５）項記載のタンパク質もしくはペ
プチドのアミノ酸配列決定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2863287A JPS63196857A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2863287A JPS63196857A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63196857A true JPS63196857A (ja) | 1988-08-15 |
Family
ID=12253920
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2863287A Pending JPS63196857A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | タンパク質もしくはペプチドのアミノ酸配列決定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63196857A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008266221A (ja) * | 2007-04-20 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | アミノ末端１箇所で配向制御固定化された固定化タンパク質 |
| JP2018146423A (ja) * | 2017-03-07 | 2018-09-20 | キリン株式会社 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
| WO2021010482A1 (ja) * | 2019-07-18 | 2021-01-21 | 国立大学法人東海国立大学機構 | 分離ペプチド |
-
1987
- 1987-02-10 JP JP2863287A patent/JPS63196857A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008266221A (ja) * | 2007-04-20 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | アミノ末端１箇所で配向制御固定化された固定化タンパク質 |
| WO2008133164A1 (ja) * | 2007-04-20 | 2008-11-06 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | アミノ末端1箇所で配向制御固定化された固定化タンパク質 |
| JP2018146423A (ja) * | 2017-03-07 | 2018-09-20 | キリン株式会社 | カルボキシル末端アミノ酸の分析方法 |
| WO2021010482A1 (ja) * | 2019-07-18 | 2021-01-21 | 国立大学法人東海国立大学機構 | 分離ペプチド |
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