JP2018123148A - Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 - Google Patents
Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018123148A JP2018123148A JP2018072245A JP2018072245A JP2018123148A JP 2018123148 A JP2018123148 A JP 2018123148A JP 2018072245 A JP2018072245 A JP 2018072245A JP 2018072245 A JP2018072245 A JP 2018072245A JP 2018123148 A JP2018123148 A JP 2018123148A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- masp
- antibody
- seq
- amino acid
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 109
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 title claims abstract description 83
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 title claims abstract description 76
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 64
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 200
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 163
- 101001056015 Homo sapiens Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 claims abstract description 93
- 102000054960 human MASP2 Human genes 0.000 claims abstract description 88
- 101710117460 Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 claims description 283
- 102100026046 Mannan-binding lectin serine protease 2 Human genes 0.000 claims description 283
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 127
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 126
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 119
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 103
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 93
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 89
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 89
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 89
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 74
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 37
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 35
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 35
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 33
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 19
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 13
- 102100023661 Coiled-coil domain-containing protein 115 Human genes 0.000 claims description 8
- 101710155594 Coiled-coil domain-containing protein 115 Proteins 0.000 claims description 8
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 7
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 claims description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 abstract description 133
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 abstract description 133
- 239000002523 lectin Substances 0.000 abstract description 132
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 73
- 230000004154 complement system Effects 0.000 abstract description 26
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 23
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 abstract description 7
- 239000004074 complement inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 78
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 70
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 69
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 61
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 60
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 59
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 58
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 57
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- 108010087870 Mannose-Binding Lectin Proteins 0.000 description 55
- 102000009112 Mannose-Binding Lectin Human genes 0.000 description 55
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 51
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 51
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 41
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 39
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 39
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 36
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 35
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 33
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 30
- 108090000062 ficolin Proteins 0.000 description 30
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 28
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 28
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 28
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 28
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 27
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 26
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 26
- 102000016574 Complement C3-C5 Convertases Human genes 0.000 description 23
- 108010067641 Complement C3-C5 Convertases Proteins 0.000 description 23
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 23
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 23
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 22
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 21
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 19
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 18
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 18
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 17
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 16
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 16
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 16
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 16
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 16
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102100024521 Ficolin-2 Human genes 0.000 description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 102100026061 Mannan-binding lectin serine protease 1 Human genes 0.000 description 12
- 101100329495 Mus musculus C1sa gene Proteins 0.000 description 12
- 101100329496 Mus musculus C1sb gene Proteins 0.000 description 12
- 101001018257 Rattus norvegicus Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 11
- ILBONRFSLATCRE-UHFFFAOYSA-N Phosfolan Chemical compound CCOP(=O)(OCC)N=C1SCCS1 ILBONRFSLATCRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 102100030385 Granzyme B Human genes 0.000 description 10
- 101001009603 Homo sapiens Granzyme B Proteins 0.000 description 10
- 101100326461 Mus musculus C1ra gene Proteins 0.000 description 10
- 101100326462 Mus musculus C1rb gene Proteins 0.000 description 10
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 10
- 102100031506 Complement C5 Human genes 0.000 description 9
- 101000941598 Homo sapiens Complement C5 Proteins 0.000 description 9
- 101001055956 Homo sapiens Mannan-binding lectin serine protease 1 Proteins 0.000 description 9
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 8
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 8
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 8
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 102100024508 Ficolin-1 Human genes 0.000 description 7
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 7
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 H-ficolin Proteins 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710117390 Mannan-binding lectin serine protease 1 Proteins 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 6
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 6
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 6
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 6
- 150000007970 thio esters Chemical group 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 208000001395 Acute radiation syndrome Diseases 0.000 description 5
- 108010003529 Alternative Pathway Complement C3 Convertase Proteins 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 5
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 5
- 101000909536 Homo sapiens Collectin-11 Proteins 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 5
- 108010005642 Properdin Proteins 0.000 description 5
- 102100038567 Properdin Human genes 0.000 description 5
- 206010068142 Radiation sickness syndrome Diseases 0.000 description 5
- 101100400474 Rattus norvegicus Masp2 gene Proteins 0.000 description 5
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 5
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 5
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 5
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 4
- 108010034358 Classical Pathway Complement C3 Convertase Proteins 0.000 description 4
- 102100024331 Collectin-11 Human genes 0.000 description 4
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 4
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 102000004528 Mannose-Binding Protein-Associated Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010042484 Mannose-Binding Protein-Associated Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 4
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100497534 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CUB1 gene Proteins 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 102000048783 human MASP1 Human genes 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 3
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 231100000062 no-observed-adverse-effect level Toxicity 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical group C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102000004405 Collectins Human genes 0.000 description 2
- 108090000909 Collectins Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 101000859758 Homo sapiens Cartilage-associated protein Proteins 0.000 description 2
- 101000916686 Homo sapiens Cytohesin-interacting protein Proteins 0.000 description 2
- 101000726740 Homo sapiens Homeobox protein cut-like 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 2
- 101000761460 Homo sapiens Protein CASP Proteins 0.000 description 2
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101000761459 Mesocricetus auratus Calcium-dependent serine proteinase Proteins 0.000 description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 102100024933 Protein CASP Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 102000023852 carbohydrate binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008400 carbohydrate binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000003961 penetration enhancing agent Substances 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical class O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010083822 Alternative Pathway Complement C5 Convertase Proteins 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical group OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010051779 Bone marrow toxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 101800000261 C3-beta-c Proteins 0.000 description 1
- 102400000626 C3-beta-c Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010078804 Classical Pathway Complement C5 Convertase Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 102000016917 Complement C1 Human genes 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010078015 Complement C3b Proteins 0.000 description 1
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 1
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102100025721 Cytosolic carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000932634 Homo sapiens Cytosolic carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001056128 Homo sapiens Mannose-binding protein C Proteins 0.000 description 1
- 101100273566 Humulus lupulus CCL10 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 238000012773 Laboratory assay Methods 0.000 description 1
- 101150104297 MASP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150047867 MASP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 101001033011 Mus musculus Granzyme C Proteins 0.000 description 1
- 101001056014 Mus musculus Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033661 Pancytopenia Diseases 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 description 1
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021917 activation of membrane attack complex Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 231100000366 bone marrow toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002820 chemotaxin Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000006834 complement receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010047295 complement receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 229960002224 eculizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000007368 endocrine function Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-M fusidate Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C([O-])=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-M 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000009215 host defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 238000001906 matrix-assisted laser desorption--ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 101150011109 mbl gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N propane-1,1-diol Chemical compound CCC(O)O ULWHHBHJGPPBCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 1
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21104—Mannan-binding lectin-associated serine protease-2 (3.4.21.104)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】本発明は、ヒトMASP−2に結合し、かつ免疫系の古典(C1q依存性)経路の成分を損なわないままでレクチン媒介性の補体活性化を阻害する、完全ヒト抗体を提供する。上記ヒト抗MASP−2抗体は、免疫系の古典(C1q依存性)経路の成分を損なわないままで、レクチン媒介性の補体経路の活性化に伴う細胞の損傷を阻害するために有用である。
【選択図】なし
Description
本発明は、MASP−2依存性の補体活性化の有害作用を阻害する際に使用するための、抗MASP−2阻害抗体およびそのような抗体を含む組成物に関する。
この出願は、2011年5月4日に出願された仮出願第61/482,567号(これは、その全体が参考として本明細書に援用される)の利益を主張する。
本願に付随する配列表は、紙の写しの代わりにテキスト形式で提供してあり、本明細書によって本明細書中に参考として援用される。その配列表を含むテキストファイルの名称は、MP_1_0115_PCT_SequenceListingasFiled_20120504_ST25である。このテキストファイルは、158KBであり;2012年5月4日に作成され;本明細書の出願とともにEFS−Webを介して提出されている。
補体系は、ヒトおよび他の脊椎動物において、微生物感染および他の急性の侵襲に対する免疫応答を開始、増幅および指揮する、初期に作用する機構をもたらす(非特許文献1)。補体活性化は、潜在的な病原体に対する重要な第1線の防御を提供するが、防御免疫応答を促進する補体の活性は、宿主に対する潜在的な脅威でもあり得る(非特許文献2;非特許文献3)。例えば、C3タンパク分解産物およびC5タンパク分解産物は、好中球を動員(recruit)し、活性化する。活性化された好中球は、宿主防御に不可欠であるが、破壊性酵素の放出において無差別であり、臓器の損傷を引き起こし得る。さらに、補体活性化は、宿主細胞の近傍、ならびに微生物の標的上において溶解性補体成分の沈着を引き起こし得、その結果、宿主細胞が溶解される。
この要旨は、下記の詳細な説明にさらに記載される概念の選択を平易化された形態で紹介するために提供される。この要旨は、特許請求される主題の鍵となる特徴を特定することを目的としていないし、特許請求される主題の範囲を決定する際の助けとして使用されることも目的としていない。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する:
(項目1)
(i)CDR−H1、CDR−H2およびCDR−H3配列を含む重鎖可変領域;ならびに
(ii)CDR−L1、CDR−L2およびCDR−L3を含む軽鎖可変領域
を含む、ヒトMASP−2に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、上記重鎖可変領域のCDR−H3配列は、配列番号38または配列番号90として示されるアミノ酸配列およびその保存的な配列改変を含み、上記軽鎖可変領域のCDR−L3配列は、配列番号51または配列番号94として示されるアミノ酸配列およびその保存的な配列改変を含み、上記単離された抗体は、MASP−2依存性の補体活性化を阻害する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
(項目2)
上記重鎖可変領域のCDR−H2配列が、配列番号32または33として示されるアミノ酸配列およびその保存的な配列改変を含む、項目1に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目3)
上記重鎖可変領域のCDR−H1配列が、配列番号28または配列番号29として示されるアミノ酸配列およびその保存的改変を含む、項目2に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目4)
上記軽鎖可変領域のCDR−L2配列が、配列番号93として示されるアミノ酸配列およびその保存的改変を含む、項目3に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目5)
上記軽鎖可変領域のCDR−L1配列が、配列番号91または配列番号92として示されるアミノ酸配列およびその保存的改変を含む、項目4に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目6)
上記重鎖可変領域のCDR−H1が、配列番号28を含む、項目3に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目7)
上記重鎖可変領域のCDR−H2が、配列番号32を含む、項目2に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目8)
上記重鎖可変領域のCDR−H3が、配列番号90を含む、項目1に記載の単離された抗体または抗原結合フラグメント。
(項目9)
配列番号90に示されるアミノ酸配列が、8位にRを含む、項目8に記載の単離された抗体。
(項目10)
上記軽鎖可変領域のCDR−L1が、配列番号91を含む、項目5に記載の単離された抗体。
(項目11)
配列番号91に示されるアミノ酸配列が、2位にEを含む、項目10に記載の単離された抗体。
(項目12)
配列番号91に示されるアミノ酸配列が、8位にYを含む、項目10に記載の単離された抗体。
(項目13)
上記軽鎖可変領域のCDR−L2が、配列番号93を含み、配列番号93に示されるアミノ酸配列が、2位にKを含む、項目4に記載の単離された抗体。
(項目14)
上記軽鎖可変領域のCDR−L2が、配列番号93を含み、配列番号93に示されるアミノ酸配列が、3位にQを含む、項目4に記載の単離された抗体。
(項目15)
上記軽鎖可変領域のCDR−L3が、配列番号51を含む、項目1に記載の単離された抗体。
(項目16)
上記抗体またはその抗原結合フラグメントが、Fab、Fab’フラグメント、F(ab’)2フラグメントおよび抗体全体からなる群より選択される、項目1に記載の単離された抗体。
(項目17)
上記抗体またはその抗原結合フラグメントが、一本鎖抗体、ScFv、およびヒンジ領域を欠く一価抗体からなる群より選択される、項目1に記載の単離された抗体。
(項目18)
上記抗体が、10nM以下のKDでヒトMASP−2に結合する、項目1に記載の単離された抗体。
(項目19)
上記抗体が、1%ヒト血清におけるインビトロアッセイにおいてC4活性化を10nM以下のIC50で阻害する、項目1に記載の抗体。
(項目20)
上記抗体が、90%ヒト血清においてC4活性化を30nM以下のIC50で阻害する、項目1に記載の抗体。
(項目21)
ヒトMASP−2に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、上記抗体は、
I)a)
i)配列番号20の31〜35のアミノ酸配列を含む重鎖CDR−H1;および
ii)配列番号20の50〜65のアミノ酸配列を含む重鎖CDR−H2;および
iii)配列番号18または配列番号20の95〜102のアミノ酸配列を含む重鎖CDR−H3
を含む重鎖可変領域;ならびに
b)
i)配列番号22または配列番号24の24〜34のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR−L1;および
ii)配列番号22または配列番号24の50〜56のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR−L2;および
iii)配列番号22または配列番号24の89〜97のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR−L3
を含む軽鎖可変領域;または
II)上記重鎖の上記CDR領域内における合わせて合計10個までのアミノ酸置換および上記軽鎖可変領域の上記CDR領域内における合わせて合計10個までのアミノ酸置換を除けばその他の部分は上記可変ドメインと同一であるその改変体
を含み、上記抗体またはその改変体は、MASP−2依存性の補体活性化を阻害する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
(項目22)
上記抗体が、10nM以下のKDでヒトMASP−2に結合する、項目21に記載の抗体。
(項目23)
上記抗体が、MASP−2のCCP1ドメインにおけるエピトープに結合する、項目21に記載の抗体。
(項目24)
上記抗体が、1%ヒト血清におけるインビトロアッセイにおいてC3b沈着を10nM以下のIC50で阻害する、項目21に記載の抗体。
(項目25)
上記抗体が、90%ヒト血清においてC3b沈着を30nM以下のIC50で阻害する、項目21に記載の抗体。
(項目26)
上記抗体が、Fv、Fab、Fab’、F(ab)2およびF(ab’)2からなる群より選択される抗体フラグメントである、項目21に記載の抗体。
(項目27)
上記抗体が、一本鎖分子である、項目21に記載の抗体。
(項目28)
上記抗体が、IgG2分子である、項目21に記載の抗体。
(項目29)
上記抗体が、IgG1分子である、項目21に記載の抗体。
(項目30)
上記抗体が、IgG4分子である、項目21に記載の抗体。
(項目31)
上記IgG4分子が、S228P変異を含む、項目30に記載の抗体。
(項目32)
上記抗体が、古典経路を実質的に阻害しない、項目21に記載の抗体。
(項目33)
上記重鎖可変領域が、配列番号20、または配列番号20に対して少なくとも80%の同一性を含むその改変体を含む、項目21に記載の抗体。
(項目34)
上記重鎖可変領域が、配列番号18、または配列番号18に対して少なくとも80%の同一性を含むその改変体を含む、項目21に記載の抗体。
(項目35)
上記軽鎖可変領域が、配列番号24、または配列番号24に対して少なくとも80%の同一性を含むその改変体を含む、項目21に記載の抗体。
(項目36)
上記軽鎖可変領域が、配列番号22、または配列番号22に対して少なくとも80%の同一性を含むその改変体を含む、項目21に記載の抗体。
(項目37)
上記改変体が、上記重鎖可変領域の上記CDR領域内における合わせて合計1、2、3、4、5または6個までのアミノ酸置換を除けばその他の部分は上記重鎖可変領域と同一である、項目21に記載の抗体。
(項目38)
上記改変体が、上記重鎖可変領域の31、32、33、34、35、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、95、96、97、98、99、100または102位からなる群より選択される1つ以上の位置にアミノ酸置換を含む、項目21に記載の抗体。
(項目39)
上記改変体が、上記軽鎖可変領域の上記CDR領域内における合わせて合計1、2、3、4、5または6個までのアミノ酸置換を除けばその他の部分は上記軽鎖可変領域と同一である、項目21に記載の抗体。
(項目40)
上記改変体が、上記軽鎖可変領域の25、26、27、29、31、32、33、51、52、89、92、93、95、96または97位からなる群より選択される1つ以上の位置にアミノ酸置換を含む、項目21に記載の抗体。
(項目41)
配列番号18、配列番号20または配列番号21に示されるアミノ酸配列のうちのいずれか1つを含む重鎖可変領域を含む、ヒトMASP−2に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
(項目42)
配列番号22、配列番号24、配列番号25または配列番号27に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、項目41に記載の単離された抗体。
(項目43)
配列番号22、配列番号24、配列番号25または配列番号27に示されるアミノ酸配列のうちのいずれか1つを含む軽鎖可変領域を含む、ヒトMASP−2に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
(項目44)
配列番号18、配列番号20または配列番号21に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をさらに含む、項目43に記載の単離された抗体。
(項目45)
項目1、21、41または43に示されたような抗MASP−2抗体またはそのフラグメントのアミノ酸配列をコードする核酸分子。
(項目46)
項目45に記載の本発明の抗MASP−2抗体をコードする核酸分子を含む発現カセット。
(項目47)
項目45または項目46に記載の本発明の抗MASP−2抗体をコードする核酸分子のうちの少なくとも1つを含む細胞。
(項目48)
単離された抗MASP−2抗体を生成する方法であって、上記抗MASP−2抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下において項目47に記載の細胞を培養する工程、および上記抗MASP−2抗体を単離する工程を包含する、方法。
(項目49)
表面プラズモン共鳴によって測定されたとき10nM以下のKDでヒトMASP−2から解離し、かつ1%血清において、マンナンコーティングされた基材上でC4活性化を10nM以下のIC50で阻害する、単離された完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。
(項目50)
上記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号20に示されるような重鎖可変領域および配列番号24に示されるような軽鎖可変領域を含む参照抗体によって認識されるエピトープの少なくとも一部を特異的に認識する、項目49に記載の単離されたヒト抗体。
(項目51)
項目1、21、41、43または49に記載の完全ヒトモノクローナル抗MASP−2抗体またはそのフラグメントおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
(項目52)
上記組成物が、全身性送達のために製剤化される、項目51に記載の組成物。
(項目53)
上記組成物が、動脈内、静脈内、頭蓋内、筋肉内、吸入、経鼻または皮下投与のために製剤化される、項目52に記載の組成物。
(項目54)
上記組成物が、皮下投与のために製剤化される、項目52に記載の組成物。
(項目55)
ヒト被験体におけるMASP−2依存性の補体活性化を阻害する方法であって、項目1、21、41、43または49に記載のヒトモノクローナル抗体を、上記ヒト被験体におけるMASP−2依存性の補体活性化を阻害するのに十分な量で投与する工程を包含する、方法。
(項目56)
ヒト被験体への治療上の投与に適した単位用量のヒトモノクローナル抗MASP−2抗体を備える製品であって、上記単位用量は、1mgから1000mgまでの範囲である、製品。
配列番号1 ヒトMASP−2 cDNA
配列番号2 ヒトMASP−2タンパク質(リーダーを含む)
配列番号3 ヒトMASP−2タンパク質(成熟)
配列番号4 ラットMASP−2 cDNA
配列番号5 ラットMASP−2タンパク質(リーダーを含む)
配列番号6 ラットMASP−2タンパク質(成熟) 。
配列番号7 ヒトMASP−2のCUBIドメイン(aa1〜121)
配列番号8 ヒトMASP−2のCUBI/EGFドメイン(aa1〜166)
配列番号9 ヒトMASP−2のCUBI/EGF/CUBIIドメイン(aa1〜277)
配列番号10 ヒトMASP−2のEGFドメイン(aa122〜166)
配列番号11 ヒトMASP−2のCCPI/CCPII/SPドメイン(aa278〜671)
配列番号12 ヒトMASP−2のCCPI/CCPIIドメイン(aa278〜429)
配列番号13 ヒトMASP−2のCCPIドメイン(aa278〜347)
配列番号14 ヒトMASP−2のCCPII/SPドメイン(aa348〜671)
配列番号15 ヒトMASP−2のCCPIIドメイン(aa348〜429)
配列番号16 ヒトMASP−2のSPドメイン(aa429〜671)
配列番号17:セリンプロテアーゼ不活性化変異体(変異されたSer618を含むaa610〜625) 。
配列番号18 17D20mc重鎖可変領域(VH)ポリペプチド
配列番号19 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)重鎖可変領域(VH)(シグナルペプチドを含まない)をコードするDNA
配列番号20 17D20_dc35VH21N11VL(OMS646)重鎖可変領域(VH)ポリペプチド
配列番号21 17N16mc重鎖可変領域(VH)ポリペプチド 。
配列番号22 17D20mc軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド
配列番号23 17D20_dc21N11VL(OMS644)軽鎖可変領域(VL)(シグナルペプチドを含まない)をコードするDNA
配列番号24 17D20_dc21N11VL(OMS644)軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド
配列番号25 17N16mc軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド
配列番号26 17N16_dc17N9(OMS641)軽鎖可変領域(VL)(シグナルペプチドを含まない)をコードするDNA
配列番号27 17N16_dc17N9(OMS641)軽鎖可変領域(VL)ポリペプチド 。
配列番号28〜31 CDR−H1
配列番号32〜35 CDR−H2
配列番号36〜40 CDR−H3 。
配列番号41〜45 CDR−L1
配列番号46〜50 CDR−L2
配列番号51〜54 CDR−L3
MASP−2抗体配列
配列番号55:scFv母クローン17D20完全長ポリペプチド
配列番号56:scFv母クローン18L16完全長ポリペプチド
配列番号57:scFv母クローン4D9完全長ポリペプチド
配列番号58:scFv母クローン17L20完全長ポリペプチド
配列番号59:scFv母クローン17N16完全長ポリペプチド
配列番号60:scFv母クローン3F22完全長ポリペプチド
配列番号61:scFv母クローン9P13完全長ポリペプチド
配列番号62:野生型IgG4重鎖定常領域をコードするDNA
配列番号63:野生型IgG4重鎖定常領域ポリペプチド
配列番号64:変異S228Pを有するIgG4重鎖定常領域をコードするDNA
配列番号65:変異S228Pポリペプチドを有するIgG4重鎖定常領域
配列番号66:scFv娘クローン17N16m_d17N9完全長ポリペプチド
配列番号67:scFv娘クローン17D20m_d21N11完全長ポリペプチド
配列番号68:scFv娘クローン17D20m_d3521N11完全長ポリペプチド
配列番号69:野生型IgG2重鎖定常領域をコードするDNA
配列番号70:野生型IgG2重鎖定常領域ポリペプチド
配列番号71:17N16m_d17N9軽鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む))
配列番号72:17N16m_d17N9軽鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号73:17N16m_d17N9 IgG2重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号74:17N16m_d17N9 IgG2重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号75:17N16m_d17N9 IgG4重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号76:17N16m_d17N9 IgG4重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号77:17N16m_d17N9 IgG4変異重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号78:17N17m_d17N9 IgG4変異重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号79:17D20_3521N11軽鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号80:17D20_3521N11軽鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号81:17D20_3521N11 IgG2重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号82:17D20_3521N11 IgG2重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号83:17D20_3521N11 IgG4重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号84:17D20_3521N11 IgG4重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号85:17D20_3521N11 IgG4変異重鎖遺伝子配列(nt1〜57によってコードされるシグナルペプチドを含む)
配列番号86:17D20_3521N11 IgG4変異重鎖タンパク質配列(シグナルペプチドaa1〜19を含む)
配列番号87:完全長ポリペプチド(シグナルペプチドを含まない)をコードするscFv娘クローン17N16m_d17N9 DNA
配列番号88:完全長ポリペプチド(シグナルペプチドを含まない)をコードするscFv娘クローン17D20m_d21N11 DNA
配列番号89:完全長ポリペプチド(シグナルペプチドを含まない)をコードするscFv娘クローン17D20m_d3521N11 DNA
配列番号90:17D20mおよびd3521N11のコンセンサス重鎖CDR−H3
配列番号91:17D20mおよびd3521N11のコンセンサス軽鎖CDR−L1
配列番号92:17N16mおよびd17N9のコンセンサス軽鎖CDR−L1
配列番号93:17D20m、d3521N11、17N16mおよびd17N9のコンセンサス軽鎖CDR−L2
配列番号94:17N16mおよびd17N9のコンセンサス軽鎖CDR−L3 。
本発明は、ヒトMASP−2に結合し、かつ免疫系の古典(C1q依存性)経路の成分を損なわないままでレクチン媒介性の補体活性化を阻害する、完全ヒト抗体を提供する。そのヒト抗MASP−2抗体は、実施例2〜9に記載されるようにファージディスプレイライブラリーをスクリーニングすることによって同定された。実施例10〜12に記載されるように、インビトロアッセイとインビボの両方において証明されるように、レクチン媒介性の補体活性化を阻害する能力を有する高親和性抗MASP−2抗体が同定された。上記抗体の可変軽鎖フラグメントおよび可変重鎖フラグメントは、scFv型と完全長IgG型の両方として単離された。上記ヒト抗MASP−2抗体は、免疫系の古典(C1q依存性)経路の成分を損なわないままで、レクチン媒介性の補体経路の活性化に伴う細胞の損傷を阻害するために有用である。
本明細書中で特に定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての用語は、本発明の分野における当業者が理解する意味と同じ意味を有する。以下の定義は、本発明を説明する明細書および特許請求の範囲において使用される用語に関して明確にするために提供される。
レクチン(MBL、M−フィコリン、H−フィコリン、L−フィコリンおよびCL−11)は、先天性の補体系を引き起こす特異的な認識分子であり、この系は、レクチン開始経路、およびレクチンによって開始される、末端の補体エフェクター分子の活性化を増幅する関連する末端経路増幅ループを含む。C1qは、後天性の補体系を引き起こす特異的な認識分子であり、この系は、古典開始経路、およびC1qによって開始される、末端の補体エフェクター分子の活性化を増幅する関連する末端経路増幅ループを含む。本発明者らは、これらの2つの主要な補体活性化の系を、それぞれレクチン依存性補体系およびC1q依存性補体系と呼ぶ。
1つの態様において、本発明は、ヒトMASP−2に特異的に結合し、MASP−2依存性の補体活性化を阻害するかまたは遮断する、モノクローナル完全ヒト抗MASP−2抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。MASP−2阻害抗体は、MASP−2の生物学的機能を阻害するかまたは遮断することによって、MASP−2依存性の補体活性化の系を効果的に阻害し得るか、または効果的に遮断し得る。例えば、阻害抗体は、MASP−2のタンパク質間の相互作用を効果的に阻害し得るかもしくは遮断し得るか、MASP−2の二量体化または組み立てを干渉し得るか、Ca2+結合を遮断し得るか、またはMASP−2セリンプロテアーゼ活性部位を干渉し得る。
本発明は、ヒトMASP−2に特異的に結合する完全ヒト抗体を提供する。MASP−2ポリペプチドは、MASP−1、MASP−3ならびにC1補体系のプロテアーゼであるC1rおよびC1sに類似の分子構造を示す。配列番号4に示されるcDNA分子は、MASP−2の代表例(配列番号1に示されるアミノ酸配列からなる)をコードし、そして分泌後に切断されてヒトMASP−2の成熟型(配列番号3)がもたらされる、リーダー配列を有するヒトMASP−2ポリペプチド(aa1−15)を提供する。図1Aに示される通りに、ヒトMASP2遺伝子は、12個のエキソンを包含する。ヒトMASP−2 cDNAは、エキソンB、C、D、F、G、H、I、J、KおよびLによってコードされる。配列番号4に示されるcDNA分子は、ラットMASP−2(配列番号5に示されるアミノ酸配列からなる)をコードし、分泌後に切断されて、ラットMASP−2の成熟型(配列番号6)をもたらす、リーダー配列を含むラットMASP−2ポリペプチドを提供する。
抗MASP−2阻害抗体は、補体系における他の抗原よりも少なくとも10倍高い親和性でヒトMASP−2(配列番号3として示されるもの、配列番号1によってコードされる)に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、MASP−2阻害抗体は、補体系における他の抗原よりも少なくとも100倍高い結合親和性でヒトMASP−2に特異的に結合する。
1つの実施形態において、MASP−2阻害抗体は、1%血清において測定されたとき、≦30nM、好ましくは、20nM未満もしくは約20nM、または約10nM未満、または約5nM未満、または約3nM以下、または約1nM以下のIC50でMASP−2依存性の補体活性化を阻害するのに十分強力である。
(i)CDR−H1、CDR−H2およびCDR−H3配列を含む重鎖可変領域;ならびに(ii)CDR−L1、CDR−L2およびCDR−L3を含む軽鎖可変領域(ここで、重鎖可変領域のCDR−H3配列は、配列番号38または配列番号90として示されるアミノ酸配列およびその保存的な配列改変を含み、軽鎖可変領域のCDR−L3配列は、配列番号51または配列番号94として示されるアミノ酸配列およびその保存的な配列改変を含み、単離された抗体は、MASP−2依存性の補体活性化を阻害する)。
上に記載されたヒトモノクローナル抗体は、MASP−2依存性の補体活性化を阻害する改変体抗体を提供するように改変され得る。その改変体抗体は、上に記載されたヒトモノクローナル抗体の少なくとも1つのアミノ酸の置換、付加または欠失によって作製され得る。通常、これらの改変体抗体は、上に記載されたヒト抗体の一般的な特徴を有し、上に記載されたヒト抗体の少なくともCDR、またはある特定の実施形態では、上に記載されたヒト抗体のCDRによく似たCDRを含む。
本発明の1つの実施形態において、MASP−2阻害抗体は、遺伝的に融合された一本鎖分子として、適当なポリペプチドリンカーによって結合された軽鎖の可変領域、重鎖の可変領域を含む遺伝的に操作された分子として定義される一本鎖抗体である。そのような一本鎖抗体は、「一本鎖Fv」または「scFv」抗体フラグメントとも呼ばれる。一般に、Fvポリペプチドはさらに、VHドメインとVLドメインとの間に、scFvが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを含む。MASP−2に結合するscFv抗体は、可変軽鎖領域を可変重鎖領域に対してアミノ末端またはそれに対してカルボキシル末端に方向づけられ得る。本発明の代表的なscFv抗体は、配列番号55〜61および配列番号66〜68として本明細書中に示される。
多くの実施形態において、主題のモノクローナル抗体をコードする核酸が、宿主細胞に直接導入され、その細胞が、コードされる抗体の発現を誘導するのに十分な条件下でインキュベートされる。
別の態様において、本発明は、治療有効量のヒト抗MASP−2阻害抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む、MASP−2依存性の補体活性化の有害作用を阻害するための組成物を提供する。
本明細書中で使用されるとき、用語「全身性送達」および「全身性投与」は、治療的効果が意図される単一の部位または複数の部位に送達される抗体の分散を効率的にもたらす、筋肉内(IM)、皮下、静脈内(IV)、動脈内、吸入、舌下、頬側、局所的、経皮的、経鼻、直腸、膣および他の投与経路を含む、経口経路および非経口経路を含むがこれらに限定されないことを意図する。本組成物に対する全身性送達の好ましい経路としては、静脈内、筋肉内、皮下および吸入が挙げられる。本発明の特定の組成物において利用される選択された薬剤にとって的確な全身性投与経路は、所与の投与経路に関連する代謝変換経路に対するその薬剤の感受性を明らかにするために部分的に決定されることが理解されるだろう。
本明細書中で使用されるとき、用語「局所」は、意図される局在化作用の部位におけるかまたはその部位周辺における薬物の適用を包含し、例えば、皮膚または他の罹患組織への局所的送達、眼への送達、くも膜下腔内(IT)、脳室内(ICV)、関節内、腔内、頭蓋内もしくは小嚢内(intravesicular)への投与、留置または灌注が挙げられ得る。局所投与は、低用量の投与によって、全身性副作用を回避することを可能にするために、ならびに、局所送達の部位における活性薬剤の送達のタイミングおよび濃度をより正確に管理するために、好ましい場合がある。局所投与によって、代謝、血流などにおける患者間変動にかかわらず、標的部位において既知の濃度がもたらされる。直接的な送達様式によって、投与量管理の改善もまた、もたらされる。
関節炎および他の筋骨格障害の処置において使用されるMASP−2阻害抗体組成物は、関節内注射によって局所的に送達され得る。そのような組成物は、徐放送達ビヒクルを適当に含み得る。局所送達が望まれ得る場合のさらなる例として、尿生殖器状態の処置において使用されるMASP−2阻害抗体組成物は、膀胱内または別の泌尿生殖器の構造内に適当に点滴注入され得る。
MASP−2阻害抗体は、MASP−2依存性の補体活性化と関連する状態を処置するかまたは回復させるのに治療的に有効な用量で、そのような阻害の必要がある被験体に投与され得る。治療的に有効な用量とは、その状態の症状の回復をもたらすのに十分なMASP−2阻害抗体の量のことをいう。
別の態様において、本発明は、ヒト被験体への治療上の投与に適した単位剤形(例えば、1mg〜5000mg、例えば、1mg〜2000mg、例えば、1mg〜1000mgの範囲、例えば、5mg、10mg、50mg、100mg、200mg、500mgまたは1000mgの単位投与量)の、本明細書中に記載されるようなヒトMASP−2阻害抗体またはその抗原結合フラグメントを備える製品を提供する。いくつかの実施形態において、その製品は、容器、およびその容器上のまたはその容器に付随したラベルまたは添付文書を備える。適当な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器などが挙げられる。それらの容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。その容器は、上記状態を処置するために有効な組成物を保持し、滅菌されたアクセスポートを有し得る(例えば、その容器は、皮下注射用針によって貫通可能な栓を有する静脈内投与用溶液バッグまたはバイアルであり得る)。その組成物中の少なくとも1つの活性な薬剤は、本発明のMASP−2阻害抗体またはその抗原結合フラグメントである。上記ラベルまたは添付文書は、その組成物が特定の状態の処置のために使用されることを示している。上記ラベルまたは添付文書は、患者に抗体組成物を投与するための指示をさらに含み得る。本明細書中に記載される組み合わせの治療薬を備える製品およびキットもまた企図される。
別の態様において、本発明は、ヒト被験体におけるMASP−2依存性の補体活性化を阻害する方法を提供し、この方法は、本発明のヒトモノクローナル抗MASP−2阻害抗体を、前記ヒト被験体におけるMASP−2依存性の補体活性化を阻害するのに十分な量で投与する工程を包含する。
この実施例では、組換え完全長ヒト、ラットおよびマウスMASP−2、MASP−2由来ポリペプチド、ならびに触媒的に不活性化された変異型のMASP−2の組換え発現およびタンパク質産生を説明する。
リーダー配列を含むヒトMASP−2ポリペプチド(配列番号2)をコードするヒトMASP−2の完全長cDNA配列(配列番号1)を、CMVエンハンサー/プロモーター領域の制御下で真核生物発現を駆動する哺乳動物発現ベクターpCI−Neo(Promega)内にサブクローニングした(Kaufman R.J.ら、Nucleic Acids Research 19:4485−90,1991;Kaufman,Methods in Enzymology,185:537−66(1991)に記載)。リーダー配列を含むラットMASP−2ポリペプチド(配列番号5)をコードする完全長ラットMASP−2 cDNA(配列番号4)をpED発現ベクター内にサブクローニングした。次いで、それらのMASP−2発現ベクターを、Maniatisら、1989に記載されている標準的なリン酸カルシウムトランスフェクション手順を使用して、付着性チャイニーズハムスター卵巣細胞株DXB1にトランスフェクトした。これらの構築物でトランスフェクトした細胞は、非常にゆっくりと増殖したことから、コードされたプロテアーゼが細胞傷害性であることが意味される。成熟型のヒトMASP−2タンパク質(配列番号3)および成熟型のラットMASP−2タンパク質(配列番号6)を、下に記載するように培養培地中に分泌させ、単離した。
論理的根拠:
認識小成分のMBL、C型レクチンCL−11またはフィコリン(L−フィコリン、H−フィコリンまたはM−フィコリンのいずれか)(集合的にレクチンと呼ばれる)が各々の炭水化物パターンに結合した後、MASP−2は、自己触媒的切断によって活性化される。MASP−2の活性化をもたらす自己触媒的切断は、血清からのMASP−2の単離手順中または組換え発現後の精製中に起きることが多い。抗原として使用するために、より安定なタンパク質調製物を得るために、プロテアーゼドメインの触媒的な三つ組中に存在するセリン残基を、成熟ラットMASP−2タンパク質(配列番号6 Ser617をAla617に置換);または成熟ヒトMASP−2タンパク質(配列番号3 Ser618をAla618に置換)においてアラニン残基で置換することによって、MASP−2Aと称される触媒的に不活性な形態のMASP−2を作製した。
MASP−2の様々なドメインを分泌させるMASP−2シグナルペプチド(配列番号2の残基1〜15)を使用して、以下の構築物を作製した。ヒトMASP−2 CUBIドメイン(配列番号7)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)の残基1〜121(N末端のCUB1ドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。ヒトMASP−2 CUBI/EGFドメイン(配列番号8)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)の残基1〜166(N末端のCUB1/EGFドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。ヒトMASP−2 CUBI/EGF/CUBIIドメイン(配列番号9)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基1〜277(N末端のCUBI EGF CUBIIドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。ヒトMASP−2 EGFドメイン(配列番号10)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基122〜166(EGFドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。ヒトMASP−2 CCPI/CCPII/SPドメイン(配列番号11)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基278〜671(CCPI/CCPII/SPドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。ヒトMASP−2 CCPI/CCPIIドメイン(配列番号12)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基278〜429(CCPI/CCPIIドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。MASP−2のCCPIドメイン(配列番号13)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基278〜347(CCPIドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。MASP−2のCCPII/SPドメイン(配列番号14)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基348〜671(CCPII/SPドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。MASP−2のCCPIIドメイン(配列番号15)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基348〜429(CCPIIドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。MASP−2のSPドメイン(配列番号16)を発現する構築物を、MASP−2(配列番号3)のaa残基429〜671(SPドメインに対応する)をコードする領域を増幅するPCRによって作製した。
この実施例では、親和性成熟に進めるための、MASP−2の機能活性を阻止する高親和性完全ヒト抗MASP−2 scFv抗体候補を同定するために使用されるスクリーニング方法を説明する。
MASP−2は、多くの別個の機能的ドメインを有する複合体タンパク質であり、その機能的ドメインとしては、MBLおよびフィコリンに対する結合部位、セリンプロテアーゼ触媒性部位、タンパク分解性基質C2に対する結合部位、タンパク分解性基質C4に対する結合部位、MASP−2チモーゲンの自己活性化に対するMASP−2切断部位および2つのCa++結合部位が挙げられる。高親和性でMASP−2に結合するscFv抗体フラグメントを同定し、それらがMASP−2機能活性を遮断することができるか否かを決定するためにその同定されたFab2フラグメントを機能的アッセイにおいて試験した。
MASP−2抗原に対するscFvファージミドライブラリーのスクリーニング
抗原:
N末端の5×Hisタグを有するヒトMASP−2AおよびN末端の6×Hisタグを有するラットMASP−2Aを、実施例1に記載した試薬を用いて作製し、先に記載されたように(Chenら、J.Biol.Chem.276:25894−02(2001))ニッケルアフィニティークロマトグラフによって培養上清から精製した。
ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖可変領域配列のファージディスプレイライブラリーを、抗原パニングに続いて、自動化された抗体のスクリーニングおよび選択に供することにより、ラットMASP−2タンパク質およびヒトMASP−2タンパク質に対する高親和性scFv抗体を同定した。
概要:2つのパニングストラテジーを使用して、合計3回のパニングで、MASP−2に結合したファージをファージミドライブラリーから単離した。両方のストラテジーが、溶液におけるパニングおよびMASP−2に結合したファージの釣り上げを含んだ。MASP−2を、標的上のHis−タグ(NiNTAビーズを使用する)またはビオチン(ストレプトアビジンビーズを使用する)のいずれかを介して磁気ビーズ上に固定化した。
ヒトMASP−2A
OMS100抗体(ポジティブコントロール)
ヤギ抗ヒトIgG(H+L)(Pierce #31412)
NiNTAビーズ(Qiagen #LB13267)
Dynabeads(登録商標)M−280ストレプトアビジン,10mg/ml(LB12321)
正常ヒト血清(LB13294)
ポリクローナルウサギ抗ヒトC3c(LB13137)
ヤギ抗ウサギIgG,HRP(American Qualex #A102PU)
タグ付きMASP−2A抗原を試験するために、ビオチンタグ付きMASP−2AまたはHISタグ付きMASP−2A抗原(10μg)とともにプレインキュベートされたポジティブコントロールOMS100抗体(200ng/ml)を、それぞれ4%乳PBS中の50μlのNiNTAビーズまたは200μlのストレプトアビジンビーズを用いて捕捉する実験を行った。結合したMASP−2A−OMS100抗体を、ヤギ抗ヒトIgG(H+L)HRP(1:5000)およびTMB(3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジン)基質を用いて検出した。
50μlのNiNTAビーズを、リン酸緩衝食塩水(PBS)中の1mlの4%乳でブロッキングし、ローテーターホイール(rotator wheel)上において室温で1時間インキュベートした。並行して、10μgのMASP−2AおよびOMS100抗体(4%乳−PBS中に200ng/mlに希釈されたもの)を1時間プレインキュベートした。次いで、各工程の間に磁石を使用して、そのビーズを1mlのPBS−Tで3回洗浄した。OMS100抗体とともにプレインキュベートされたMASP−2Aを、洗浄されたビーズに加えた。その混合物をローテーターホイール上においてRTで1時間インキュベートし、次いで、上に記載したように磁石を使用して1mlのPBS−Tで3回洗浄した。そのチューブを、PBS中4%乳において1:5000希釈されたヤギ抗ヒトIgG(H+L)HRPとともにRTで1時間インキュベートした。ネガティブコントロールの場合は、ヤギ抗ヒトIgG(H+L)HRP(1:5000)を、別個のチューブ内の洗浄され、ブロッキングされた、Ni−NTAビーズに加えた。
このアッセイは、代わりにサンプル1つあたり200μlのストレプトアビジンビーズおよび非ビオチン化抗原を使用したこと以外は、NiNTAビーズELISAアッセイについて上に記載したように行った。
HISタグ付きまたはビオチンタグ付きMASP−2Aに対するscFvファージライブラリーの3回のパニングを、それぞれ表7または表8に示されるように行った。3回目のパニングを、まずMBLで溶出し、次いでTEA(アルカリ)で溶出した。標的のMASP−2Aに対するscFvフラグメントをディスプレイしているファージの特異的濃縮をモニターするために、固定化されたMASP−2Aに対するポリクローナルファージELISAを、下に記載するように行った。
上に記載したようなヒトMASP−2に対するscFvファージライブラリーの3回のパニングの後、下に記載するように、固定化されたMASP−2Aに対するパニングによって作製された濃縮されたポリクローナルファージ集団においてELISAアッセイを行うことによって、標的MASP−2Aに対するscFvフラグメントを用いたファージの特異的濃縮をモニターした。
5ng/mlのMASP−2Aを、4℃で一晩、PBSにおいてmaxisorp ELISAプレート上に固定化した。3回のすべてのパニングからのパッケージングされたファージを、4%乳−PBSにおいて1:3希釈し、3倍希釈で力価測定した。ネガティブコントロールは、M13ヘルパーファージだった。
ファージELISAの結果は、両方のパニングストラテジーについてMASP−2Aに対するscFvの特異的濃縮を示した。図2を参照のこと。図2に示されるように、NiNTA磁気ビーズによる捕捉を含むストラテジーは、2回のパニングの後、MASP−2Aに対するファージ上でのscFvの濃縮をもたらしたのに対し、両方のストラテジーが、3回目のパニングの後、競合的な溶出とTEA溶出の両方において良好な濃縮を有した。ネガティブコントロールファージは、M13ヘルパーファージだったが、それは、その最低希釈においてMASP−2Aに対して交差反応を示さなかった。これらの結果から、観察されたシグナルが、MASP−2Aに特異的に結合するscFvに起因することが証明される。
3回目のパニングからのscFvフラグメントをコードするプラスミドを含む細菌コロニーを拾い、ニトロセルロース膜上に格子状に並べ(gridded)、非誘導培地上で一晩増殖させることにより、マスタープレートを作製した。3回目のパニングから合計18,000個のコロニーを拾い、半数を競合溶出から、および半数をその後のTEA溶出から解析した。
方法:
4μg/mlのMASP−2Aを、4℃で一晩、PBSにおいてmaxisorp ELISAプレート(Nunc)上に固定化した。翌日、そのプレートをPBS−Tween(0.05%)で3回洗浄することによってブロッキングした。137個のscFv候補(上に記載したように作製された)の各々からの粗製scFv材料(100μlの培地−ペリプラズム抽出物)をプレートの1ウェルごとに加えた。次に、抗cMycを加え、最後の工程では、HRP結合体化ウサギ抗マウスを適用することにより、結合したscFvを検出した。ペルオキシダーゼ基質1ステップABTS(Calbiochem)において反応を発色させた。ポジティブコントロールは、PBS−Tween0.05%中に10μg/mlに希釈されたOMS100(Fab2型の抗MASP−2抗体)だった。ネガティブコントロールは、プラスミドを含まないXL1−Blue由来の培地−ペリプラズムだった。
この実施例では、正常ヒト血清においてMASP−2活性を阻止する能力について高親和性完全ヒト抗MASP−2 scFv抗体候補を解析するために使用されたMASP−2機能的スクリーニング方法を説明する。
レクチン経路C3コンバターゼ形成の阻害を測定するアッセイ:
レクチン経路C3コンバターゼ形成の阻害を測定する機能的アッセイを使用して、抗MASP−2 scFv候補クローンの「遮断活性」を評価した。レクチン経路C3コンバターゼは、C3を2つの強力な炎症促進性フラグメント(アナフィラトキシンC3aおよびオプソニンのC3b)へとタンパク分解性に切断する酵素的複合体(C4bC2a)である。C3コンバターゼの形成は、炎症の媒介に関してレクチン経路における重要な工程であるらしい。MASP−2は、レクチン経路C3コンバターゼ(C4bC2a)の構造的成分ではない;したがって、抗MASP−2抗体(またはFab2)は、既存のC3コンバターゼの活性を直接阻害しない。しかしながら、MASP−2セリンプロテアーゼ活性は、レクチン経路C3コンバターゼを含む2つのタンパク質成分(C4b、C2a)を生成するために必要とされる。したがって、MASP−2機能活性を阻害する抗MASP−2 scFv(すなわち、遮断抗MASP−2 scFv)は、レクチン経路C3コンバターゼのデノボ形成を阻害する。C3は、その構造の一部として、反応性の高い独特のチオエステル基を含む。このアッセイにおいてC3コンバターゼがC3を切断する際に、C3b上のチオエステル基は、プラスチックウェルの底面上に固定化された高分子上のヒドロキシル基またはアミノ基とエステル結合またはアミド結合を介して共有結合を形成することができ、ELISAアッセイにおけるC3bの検出を容易にし得る。
実施例2に記載したように同定された45個の候補クローンを発現させ、精製し、同じストック濃度に希釈し、それを再度、Ca++およびMg++含有GVB緩衝液(4.0mMバルビタール、141mM NaCl、1.0mM MgCl2、2.0mM CaCl2、0.1%ゼラチン,pH7.4)に希釈することにより、すべてのクローンが同じ量の緩衝液を有することを確実にした。それらのscFvクローンを各々、2μg/mlの濃度において三連で試験した。ポジティブコントロールは、OMS100 Fab2であり、0.4μg/mlにおいて試験した。scFv/IgGクローンの存在下および非存在下においてC3cの形成をモニターした。
表9に示された10個の候補クローンを1リットルスケールで発現させ、ニッケルクロマトグラフィにおけるイオン交換により精製した。その後、各クローンのサンプルをサイズ排除クロマトグラフィカラムに流して、モノマーおよびダイマーの含有量を評価した。下記の表10に示されるように、ほとんどすべてのscFvクローンがモノマー型で存在し、このモノマー画分を、さらなる試験および順位付けのために単離した。
表10に示されたクローンを、1Lスケールで発現させ、金属クロマトグラフィおよびイオン交換において精製し、サイズ排除クロマトグラフィ(SEC)によりモノマー画分に分離し、機能的アッセイを繰り返すことにより、IC50値および交差反応性を測定した。
表10に示される上位10個のクローンのモノマー画分を精製し、希釈系列(その各々には、同じ濃度の、カルシウムおよびマグネシウムを含むGVB緩衝液ならびにヒト血清が与えられている)において機能的なIC50nMについて試験した。それらのscFvクローンを、12の希釈において三連で試験した。ポジティブコントロールは、OMS100 Fab2だった。C3b沈着を抗体の存在下および非存在下においてモニターした。結果を下記の表11に示す。
2つの異なる方法において、10個の候補scFvクローンの精製モノマー画分に対して結合親和性KDを測定した。MASP−2Aを、CM5チップへのアミンカップリングによって固定化するか、またはまず、一定濃度のscFv(50nM)をアミンカップリングされた高親和性α−cMyc抗体で捕捉し、次に、溶液中の一連の濃度のMASP−2Aをそのチップの上を通過させた。結果を下記の表11に示す。
表11に示されたように、機能的アッセイにおいて、10個の候補scFvクローンのうち5個が、0.5%ヒト血清を使用したとき、25nMの標的基準未満のIC50nM値をもたらした。下に記載するように、これらのクローンを、他の種における機能活性を測定するために非ヒト霊長類血清およびラット血清の存在下においてさらに試験した。溶液における結合親和性に関しては、すべての結合親和性が、低nMまたはそれより良好な範囲であったのに対し、固定化されたMASP−2を用いた従来のアッセイでは、2つのクローン(4D9および17D20)だけしか、低nM範囲の親和性を有しなかった。溶液ベースのアッセイにおけるより高い親和性の観察結果は、おそらく、抗原が溶液中では多量体化するという事実の結果である。また、標的がチップ上に固定化されたとき(方向付けられたカップリングによって)、エピトープがマスクされることにより、固定化されたアッセイでは、観察される親和性が低下し得る。
この実施例では、10個の候補ヒト抗MASP−2 scFvクローンをラットMASP−2に対する交差反応性について試験した結果、ならびにヒト血清、非ヒト霊長類血清およびラット血清においてMASP−2依存性の補体活性化を阻害する能力を測定する機能的アッセイにおいてこれらのscFvクローンのIC50値を測定した結果を説明する。
ラットMASP−2に対する交差反応性
実施例3の表9に示された10個の候補scFvクローンを、吸着されたラットMASP−2Aに対する従来のELISAアッセイにおいてラットMASP−2Aに対する交差反応性について試験した。ラットMASP−2Aを、PBSにおいて4μg/mlに希釈し、4℃で一晩、Maxisorp ELISAプレート(Nunc)上にコーティングした。翌日、そのプレートを、PBS−Tween(0.05%)において3回洗浄することによってブロッキングした。PBS−Tweenにおいて20μg/mlに希釈されたScFvクローン(100μl)をそのプレートに加え、さらに4倍希釈物で3回力価測定した。MASP−2A特異的svFcクローン(結合したscFvを含むウェル)を、抗cMycおよびウサギ抗マウスHRP二次抗体で検出した。その反応をペルオキシダーゼ基質TMB(Pierce)において発色させた。ポジティブコントロールは、PBS−Tweenにおいて10μg/mlに希釈されたOMS100 Fab2だった。試験されたすべてのクローンが、ラットMASP−2Aに対して交差反応を示したが、2回目のパニングにおいてラットMASP−2を用いたので、これは予想されたものだった(データ示さず)。
種々の血清におけるベースラインC3cレベルの測定
まず、以下のとおり、上記3種の血清(ヒト、ラットおよびNHP)においてベースラインC3bレベルを比較する実験を行った。
次いで、上記10個の候補scFvクローンの精製モノマー画分を、ヒト血清、ラット血清およびアフリカミドリザル血清(非ヒト霊長類「NHP」)における機能的IC50nMについて試験した。このアッセイは、1000nM scFv精製タンパク質、およびCaMgGVB緩衝液において0.9%に希釈された正常ヒト血清;CaMgGVB緩衝液において0.2%に希釈されたアフリカミドリザル血清;またはCaMgGVB緩衝液において0.375%に希釈されたラット血清を使用して、実施例3に記載されたように行った。10個すべてのscFvクローンを、同じ濃度の、カルシウムおよびマグネシウムを含むGVB緩衝液ならびに血清が与えられた希釈系列において試験した。それらのscFvクローンを、12の希釈において三連で試験した。ポジティブコントロールは、100ng/mlのOMS100 Fab2またはその反応物へのEDTAの添加だった。ネガティブコントロールは、無関係のscFvコントロールまたはscFvを含まないPBSだった。C3b沈着をscFvまたはFab2抗体の存在下および非存在下においてモニターした。100ng/mlのOMS100のバックグラウンドシグナルをすべてのシグナルから引き算した。表12は、3種すべての血清における機能的アッセイの結果を要約している。
上記血清をC3b沈着レベルに関して正規化した後、上記scFvクローンの10個すべてがヒト血清と非ヒト霊長類(NHP)血清の両方において機能を示した。ヒト血清において最も活性な6つのクローンは、最良から最悪に順位付けすると:9P13>17N16>17D20>4D9>3F22>18L16だった。NHP血清では、それらのクローンは、順位付けされた(最良から最悪の順で):17L20>17N16>17D20>9P13>18L16>3F22。17N16と17D20の両方が、ヒト血清とNHP血清の両方に対して上位3つに順位付けされた。17D20は、ラット血清においてもいくらかの活性を示した。
この実施例では、3つの母クローン17D20、17N16および18L16(実施例2〜4に記載したように同定された)の野生型IgG4型へのクローニング、ならびに完全長IgGとしての3つの母クローンの機能性の評価を説明する。
中程度の機能的効力を有する完全ヒト抗MASP−2 scFv抗体を、実施例2〜4に記載したようにファージディスプレイを用いて同定した。そのような3つの母クローン17D20、17N16および18L16を親和性成熟のために選択した。完全長IgGとしてのこれらの母クローンの機能性を評価するために、これらの抗体のIgG4野生型およびS228Pヒンジ領域IgG4変異型を作製した。血清安定性を高めるためにS228Pヒンジ領域変異を含めた(Labrijn A.F.ら、Nature Biotechnology 27:767(2009)を参照のこと)。
完全長型のクローンの作製
上記3つの母クローンを野生型IgG4型およびIgG4変異S228P型に変換した。これは、所望の抗体を生成するために、先述の母クローンから適切なVHおよびVL領域をPCR単離し、それらを、適切な重鎖定常領域を有するpcDNA3発現ベクターにクローニングして、インフレーム融合物を作製することによって達成された。次いで、変異IgG4型の3つの母クローンをペプシンで切断することによりF(ab’)2フラグメントを生成し、サイズ排除クロマトグラフィカラムにおける分画によって後者を精製した。
IgG4型に変換された候補母クローンを、HEK293細胞に一過性にトランスフェクトし、その一過性のトランスフェクションからの上清をELISAアッセイにおいて力価測定した。それらのクローンは、物理的に吸着されたヒトMASP−2Aと優れた反応性を示し、以下の順序で順位付けされた:17N16>17D20>18L16(データ示さず)。
実施例4に記載したように1%正常ヒト血清(NHS)を使用するC3コンバターゼアッセイを用いて、1%NHSにおける母scFvクローンおよび完全長IgG4対応物の機能活性を比較した。マンナンを20μg/mlの濃度に希釈し、4℃で一晩、ELISAプレート上にコーティングした。翌日、ウェルを1%ヒト血清でブロッキングした。ヒト血清をCaMgGVB緩衝液において1%に希釈し、精製された抗体;scFv(900nM)、F(ab’)2(300nM)、IgG(300nM)を、一連の種々の希釈において同じ量の緩衝液に二連で加え、氷上で45分間プレインキュベートした後、ブロッキングされたELISAプレートに加えた。反応を、37℃で1時間インキュベーションすることによって開始し、そのプレートを氷上に置くことによって停止させた。ウサギα−マウスC3c抗体に続いてヤギα−ウサギHRPを用いて、C3b沈着を決定した。マンナン陽性プレート上の50nMのOMS100のバックグラウンドを、その曲線から引き算した。この解析の結果の要旨を下記の表16に示す。
背景:MASP−2のセリンプロテアーゼ活性は、非常に特異的であり、MASP−2に対する2つのタンパク質基質;C2およびC4だけが同定されている。C4の切断は、C4aおよびC4bを生成する。抗MASP−2 Fab2は、C4切断に直接関与するMASP−2上の構造的エピトープ(例えば、C4に対するMASP−2結合部位;MASP−2セリンプロテアーゼ触媒部位)に結合し得、したがってMASP−2のC4切断機能活性を阻害する。
この形式では、両方のIgG4型の17D20が、レクチン経路によって駆動されるC4b沈着を阻害したが、IC50値は、C3b沈着アッセイと比べて約3倍高かった。興味深いことに、17N16のIgG4野生型は、このアッセイにおいて、C3b沈着アッセイに匹敵するIC50値および用量反応プロファイルで良好な活性を示した。18L16は、相当に強力ではなく、この形式では完全な阻害を達成しなかった(データ示さず)。
実施例2〜5に記載したように、機能遮断活性を有する完全ヒト抗MASP−2 scFv抗体を、ファージディスプレイを用いて同定した。そのような3つのクローン17N16、17D20および18L16を親和性成熟およびさらなる試験のために選択した。完全長IgGとしてのこれらの母クローンの機能性を評価するために、IgG4野生型およびIgG4 S228Pヒンジ領域変異型のこれらの抗体を作製した。この実施例に記載したように、完全長IgGの大部分は、1%ヒト血漿を用いる標準的な機能的アッセイ形式において試験されたとき、それらのscFv対応物と比べて改善された機能活性を有した。生理学的条件下の抗体活性を推定するために、90%ヒト血漿を使用するストリンジェントなアッセイ条件下において母クローンIgG4調製物の試験を行った。これらの条件下において、いくつかの抗体は、標準的な(1%)血漿機能的アッセイにおけるそれらの成績に基づく予想より実質的に良い機能的な効力を明らかにした。
この実施例では、母クローン17D20、17N16および18L16の鎖シャフリングおよび親和性成熟、ならびに得られた娘クローンの解析を説明する。
改善された効力を有する抗体を同定するために、実施例2〜5に記載したように同定された3つの母scFvクローン17D20、17N16および18L16を軽鎖シャフリングに供した。このプロセスは、6人の健常ドナー由来のナイーブヒトラムダ軽鎖(VL)のライブラリーと対形成された各母クローンのVHからなるコンビナトリアルライブラリーの作製を含んだ。次いで、このライブラリーを、改善された結合親和性および/または機能性を有するscFvクローンについてスクリーニングした。
上記119個の娘クローンの代表的なサブセットに対するELISAアッセイの結果を図7AおよびBに示す。図7Aは、huMASP−2Aに対して力価測定された、17N16母クローン 対 娘クローンのELISAアッセイの結果をグラフで図示している。図7Bは、huMASP−2Aに対して力価測定された、17D20母クローン 対 娘クローンのELISAアッセイの結果をグラフで図示している。
上記の候補娘クローンを、以下のとおり種々の血清において解析した。マンナンを20μg/mlに希釈し、4℃で一晩、ELISAプレート上にコーティングした。翌日、ウェルを1%HSAでブロッキングした。CaMgGVB緩衝液において、アフリカミドリザル血清を0.2%に希釈し、ラット血清を0.375%に希釈し、ヒト血清を1%に希釈した。各候補娘クローンからの精製されたscFvを、一連の種々の濃度において2つ組で同じ量の緩衝液に加え、氷上で45分間プレインキュベートした後、ブロッキングされたELISAプレートに加えた。反応を、37℃で1時間インキュベーションすることによって開始し、プレートを氷浴に移すことによって停止させた。ウサギα−マウスC3c抗体に続いてヤギα−ウサギHRPを用いて、C3c放出を検出した。マンナン陰性プレート上での0.1μg/mlのOMS100のバックグラウンドを、これらの曲線から引き算した。結果を下記の表19に要約する。
表19に示されたように、娘クローン17N16m_d17N9は、母クローンより高い機能活性を有する。母クローンと比べて軽鎖における17アミノ酸の配列差異に加えてラット血清における改善された機能によって、このクローンが陽性候補になる。このデータに基づいて、娘クローン17N16m_d17N9をさらなる解析のために選択した。
この実施例では、母クローン17D20に由来する娘クローン17D20m_d3521N11の作製および解析を説明する。
母クローン候補17D20mcの親和性を改善するために、さらなる「ルックスルー突然変異誘発(look−through−mutagenesis)」を、重鎖のCDR3(CDR−H3)中の最初の3アミノ酸に対して行った。これは、17D20mcの通常の軽鎖シャフリングと並行した突然変異誘発キャンペーンだった。したがって、縮重コドンを使用して1、2および3位のアミノ酸を可能性のある20種すべてのアミノ酸のセットに対してランダム化するPCRによって3つの異なるscFvライブラリーを構築した。ライブラリーをクローニングした後、マイクロスケール発現を行い、MASP−2AでコーティングされたCM5チップ上のscFv結合をモニターした(示さず)。マイクロスケール発現のBIAcore解析を、1、2または3位においてランダム化されたMASP−2Aでコーティングされたチップ上で3つの異なるライブラリーにおいて行い、潜在的に興味深い娘クローンを同定した。
変異クローン#35および#59を小規模で発現させ、固定化されたMASP−2A(10μg/ml)に対する力価測定−ELISAにおいて母候補クローン17D20と比較してさらに試験した。それらのscFvを、20μg/mlから開始して5倍段階希釈し、抗Myc(マウス)/抗マウスHRPを使用して結合を検出した。母候補クローン17D20と比較して候補クローン#35および#59に対するELISAアッセイにおいてわずかに改善された結合が観察された(データ示さず)。
この実施例では、候補娘クローン17N16m_d17N9および17D20m_d3521N11からIgG4、IgG4/S228PおよびIgG2型への変換および解析を説明する。
実施例2〜7に記載した抗体スクリーニング方法によって、適当な機能性を有する2つの母クローン17N16および17D20が同定された。これらの母クローンの親和性成熟によって、scFvレベルでの代理の機能的アッセイにおいてそれらの母クローンと比べておよそ2倍の効力の改善を示す娘クローンが得られた。最良の活性を有する娘クローンは、17N16m_d17N9および17D20m_d3521N11である。実施例6に記載したように、17N16母クローンと軽鎖シャフリングされた娘クローンとの機能活性の比較において(scFv型,1%NHSアッセイ)、17N16m_d17N9が、母クローンよりもわずかに強力であり、このアッセイにおいて試験されたすべての娘クローンのうち最良の機能的効力を有すると測定された。
候補scFvクローンの機能的効力の比較を、実施例5に記載したように行われたC3変換アッセイ(1%ヒト血清および90%ヒト血清)およびC4変換アッセイ(90%ヒト血清)において行った。
これらの候補クローンのすべてを、さらなる解析のためにIgG4、IgG4/S228PおよびIgG2型に変換した。
配列番号62:野生型IgG4をコードするcDNA
配列番号63:野生型IgG4ポリペプチド
配列番号64 IgG4変異S228PをコードするcDNA
配列番号65:IgG4変異S228Pポリペプチド
配列番号69:野生型IgG2をコードするcDNA
配列番号70:野生型IgG2ポリペプチド
この実施例では、遮断ヒト抗MASP−2MoAbのうちのいくつかに対して行われたエピトープマッピングを説明する。
以下の組換えタンパク質を、実施例1に記載したように作製した:
ヒトMAp19
ヒトMASP2A
ヒトMASP−2 SP
ヒトMASP−2 CCP2−SP
ヒトMASP−2 CCP1−CCP2−SP
ヒトMASP−1/3 CUB1−EGF−CUB2
ヒトMASP−1 CCP1−CCP2−SP
抗MASP−2抗体OMS100およびMoAb#6(35VH−21N11VL)(この両方ともが、高親和性でヒトMASP−2に結合し、機能的補体活性を阻止する能力を有すると証明された(実施例6〜8を参照のこと))を、ドットブロット解析によってエピトープ結合に関して解析した。
上に記載される組換えMASP−2ポリペプチドの段階希釈物をニトロセルロース膜上にスポットした。スポットしたタンパク質の量は、10倍の段階で50ng〜5pgの範囲であった。後の実験では、スポットしたタンパク質の量は、50ngに低下させた量から再度5倍の段階で16pgまでの範囲であった。膜をTBS中の5%スキムミルク粉末(ブロッキング緩衝液)でブロッキングし、次いで、ブロッキング緩衝液(5.0mM Ca2+を含む)中1.0μg/ml抗MASP−2 Fab2とともにインキュベートした。HRP結合体化抗ヒトFab(AbD/Serotec;1/10,000希釈)およびECL検出キット(Amersham)を使用して、結合しているFab2を検出した。1枚の膜を、ポジティブコントロールとしてポリクローナルウサギ抗ヒトMASP−2Ab(Stoverら、J Immunol 163:6848−59(1999)に記載されているもの)とインキュベートした。この場合、HRP結合体化ヤギ抗ウサギIgG(Dako;1/2,000希釈)を使用して、結合しているAbを検出した。
結果を表27に要約する。
この実施例では、ヒト抗MASP−2MoAb#6が、静脈内投与後のアフリカミドリザルにおいてレクチン経路を阻害することが証明される。
MoAb#6を、第1群の3頭のアフリカミドリザルに1mg/kgの投与量で、および第2群の3頭のアフリカミドリザルに3mg/kgの投与量で、静脈内投与した。血液サンプルを、投与の2、4、8、10、24、48、72および98時間後に得て、レクチン経路活性の存在について試験した。
この実施例では、抗MASP−2抗体などのMASP−2インヒビターが、放射線曝露の処置および/または急性放射線症候群の処置、回復もしくは予防に有効であることが証明される。
高線量の電離放射線への曝露は、2つの主要な機構:骨髄に対する毒性および胃腸症候群によって死亡を引き起こす。骨髄毒性により、すべての血液学的(hematologic)細胞が減少し、その生物が感染および出血によって死亡しやすくなる。胃腸症候群は、より重篤であり、腸上皮層の崩壊に起因する腸管の関門機能の喪失および腸管の内分泌機能の喪失によって駆動される。これによって、死に至り得る、敗血症および関連する全身性炎症反応症候群がもたらされる。
方法および材料:
材料。本研究において使用された被験物質は、トランスフェクトされた哺乳動物細胞において産生されるレクチン補体経路のMASP−2タンパク質成分を遮断する、(i)高親和性抗マウスMASP−2抗体(mAbM11)および(ii)高親和性抗ヒトMASP−2抗体(mAbOMS646)だった。投薬濃度は、抗マウスMASP−2抗体(mAbM11)の1mg/kg、抗ヒトMASP−2抗体(mAbOMS646)の5mg/kgまたは滅菌食塩水だった。各投薬セッションについて、適切な体積の新鮮な投薬溶液が調製された。
6.5、7.0および8.0Gy曝露群に対するKaplan−Meier生存プロットを、それぞれ図18A、18Bおよび18Cに提供し、下記の表29に要約する。全般的に見れば、照射前の抗マウスMASP−2ab(mAbM11)による処置は、6.5Gy曝露レベル(20%増大)と7.0Gy曝露レベル(30%増大)の両方において、ビヒクルで処置された照射コントロール動物と比べて、照射されたマウスの生存を増大させた。6.5Gyの曝露レベルでは、抗マウスMASP−2abによる照射後の処置によって、ビヒクルコントロール照射動物と比べて、生存の中程度の増大(15%)をもたらした。
急性放射線症候群は、3つの明確な亜症候群(subsyndromes)からなる:造血、胃腸および脳血管。観察される症候群は、放射線量に依存し、造血への作用は、1Gyを超える有意な部分的または全身放射線曝露を受けたヒトにおいて観察される。造血症候群は、免疫系への損傷と同時に起きる血球数、赤血球および白血球ならびに血小板の変化を伴う汎血球減少症に至る、骨髄機能の極度の低下を特徴とする。末梢血中に好中球および血小板がほとんど存在しない底(nadir)が生じると、好中球減少症、発熱、敗血症の合併症および制御できない出血によって死に至る。
Swiss Websterマウス(n=50)を電離放射線(8.0Gy)に曝露した。放射線曝露の18時間前および2時間後ならびにその後毎週投与された抗MASP−2抗体による治療(OMS646 5mg/kg)の死亡に対する効果を評価した。
抗MASP−2抗体OMS646の投与によって、8.0Gyに曝露されたマウスの生存率がビヒクルコントロールを投与されたマウスと比べて増大し(調整されたメジアン生存率 4日〜6日)、ビヒクルコントロールを投与されたマウスと比べて死亡率が12%減少した(ログランク検定,p=0.040)と測定された。
Swiss Websterマウス(n=50)を、以下の群において電離放射線(8.0Gy)に曝露した:(I:ビヒクル)食塩水コントロール;(II:低)照射の18時間前および照射の2時間後に抗MASP−2抗体OMS646(5mg/kg)を投与、(III:高)照射の18時間前および照射の2時間後にOMS646を投与(10mg/kg);および(IV:高後)照射の2時間後のみOMS646(10mg/kg)を投与。
照射の前および後の抗MASP−2抗体の投与によって、ビヒクルコントロールを投与された動物と比較して、平均生存時間が4日から5日に調整されると決定された。抗MASP−2抗体で処置されたマウスの死亡率は、ビヒクルコントロールマウスと比較して6〜12%低下した。処置の有意な有害作用が観察されなかったことにさらに留意されたい。
この実施例では、ヒンジ領域に変異を有する完全ヒト抗ヒトMASP−2 IgG4抗体であるOMS646抗体(17D20m_d3521N11)のさらなる特徴付けを説明する。
ヒンジ領域に変異を有する完全ヒト抗ヒトMASP−2 IgG4抗体であるOMS646(17D20m_d3521N11)を上記の実施例2〜8に記載したように作製した。OMS646抗体を、OMS646の重鎖および軽鎖をコードする発現構築物で安定的にトランスフェクトしたCHO発現細胞株の培養上清から精製した。細胞をPF−CHO培地中で16〜20日間増殖させ、細胞生存率が50%未満に低下したら、細胞非含有上清を回収した。プロテインAアフィニティークロマトグラフに続いて、イオン交換、濃縮およびPBSへの緩衝液交換によってOMS646を精製した。
固定化されたOMS646と組換えヒトMASP−2との結合の表面プラズモン共鳴(Biocore)解析
方法:
CM5チップへのアミンカップリングによって様々な密度でOMS646を固定化し、9nM、3nM、1nMまたは0.3nMで溶解された組換えヒトMASP−2の会合および解離を経時的に記録することにより、会合速度定数(Kon)および解離速度定数(Koff)を測定した。実験上のKonおよびKoff値に基づいて平衡結合定数(KD)を計算した。
図19は、固定化されたOMS646が、約1〜3×10−4S−1のKoff速度および約1.6〜3×106M−1S−1のKon速度で組換えMASP−2に結合することを示しており、これらの実験条件下における親和性(約92pMのKD)を意味する、OMS646に対する表面プラズモン共鳴(Biocore)解析の結果をグラフで図示している。固定化されたOMS646の密度および溶液中のMASP−2の濃度に応じて、50〜250pMの範囲内の実験上のKD値が決定された。
方法:ELISAアッセイを行うことにより、固定化された組換えMASP−2へのOMS646の結合の用量反応を評価した。組換えヒトMASP−2(50ng/ウェル)を、4℃で一晩、PBS中においてmaxisorp ELISAプレート(Nunc)上に固定化した。翌日、そのプレートを、PBS−Tween(0.05%)で3回洗浄することによってブロッキングした。次いで、ブロッキング緩衝液中の段階希釈系列のOMS646(0.001〜10nMの濃度範囲)を、MASP−2でコーティングされたウェルに加えた。1時間インキュベーションして、固定化された抗原にOMS646を結合させた後、ウェルを洗浄することにより、未結合のOMS646を除去した。結合したOMS646を、HRP標識ヤギ抗ヒトIgG抗体(Qualex;ブロッキング緩衝液において1:5000希釈されたもの)を使用して検出した後、TMBペルオキシダーゼ基質(Kirkegaard & Perry Laboratories)で発色させた。100μl/ウェルの1.0M H3PO4を加えることによってペルオキシダーゼ反応を停止させ、基質の変換を、96ウェルプレートリーダー(Spectramax)を使用して450nMにおいて測光法で定量した。単一結合部位カーブフィッティングアルゴリズム(Graphpad)を使用して、KD値を計算した。
図20は、固定化されたヒトMASP−2に対するOMS646の結合親和性を決定するELISAアッセイの結果をグラフで図示している。図20に示されるように、OMS646は、固定化された組換えヒトMASP−2に85±5pMのKDで結合すると測定され、これは、図19に示されたようなBiocore解析において得られた結果と一致する。これらの結果から、OMS646が、ヒトMASP−2に対しておよそ100pMのKDという高親和性を有することが証明される。
方法:
それぞれ以下のとおり図21Aおよび21Bに示される濃度範囲にわたるOMS646の存在下または非存在下で、マンナンコーティングされた表面上または免疫複合体でコーティングされた表面上において、C4活性化を測定した。
マンナンコーティングされた表面上におけるC4活性化:
レクチン経路に対するOMS646の作用を測定するために、96ウェルCostar Medium Bindingプレートを、50mM炭酸塩緩衝液,pH9.5中に希釈された50μLの40μg/mLのマンナン溶液とともに5℃で一晩インキュベーションすることによって、マンナンでコーティングした。各ウェルを200μLのPBSで3回洗浄した。次いで、ウェルを、100μL/ウェルのPBS中1%ウシ血清アルブミンでブロッキングし、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで3回洗浄した。別個の96ウェルプレートにおいて、MASP−2抗体(OMS646)の段階希釈物を、Ca++およびMg++含有GVB緩衝液(4.0mMバルビタール、141mM NaCl、1.0mM MgCl2、2.0mM CaCl2、0.1%ゼラチン,pH7.4)中の1%ヒト血清とともに5℃で1時間プレインキュベートした。続いて、これらの抗体血清プレインキュベーション混合物を、上記のマンナンコーティングされたアッセイプレートの対応するウェルに移した。そのアッセイプレートを37℃の水浴に移すことによって、補体活性化を惹起した。60分間のインキュベーションの後、その反応混合物にEDTAを加えることによって、反応を停止させた。各ウェルを200μLのPBS−Tween20(PBS中0.05%Tween20)で5回洗浄し、次いで、各ウェルを200μLのPBSで2回洗浄した。100μL/ウェルのビオチン結合体化ニワトリ抗ヒトC4c(Immunsystem AB,Uppsala,Sweden)の1:100希釈物を、2.0mg/mlウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBSにおいて加え、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルの0.1μg/mlのペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン(Pierce Chemical #21126)を、2.0mg/mlのBSAを含むPBSにおいて加え、振盪機上で穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルのペルオキシダーゼ基質TMB(Kirkegaard & Perry Laboratories)を加え、室温で10分間インキュベートした。100μL/ウェルの1.0M H3PO4を加えることによって、ペルオキシダーゼ反応を停止させ、OD450を測定した。
古典経路に対するOMS646の作用を測定するために、上に記載したアッセイを、免疫複合体でコーティングされたプレートを使用するように改変した。古典経路を介してC4活性化を刺激するために使用される精製ヒツジIgGでウェルをコーティングしたという差異を加えて、上記のレクチン経路に対して詳述されたとおりアッセイを行った。
図21Aは、OMS646の存在下または非存在下における、マンナンコーティングされた表面上のC4活性化のレベルをグラフで図示している。図21Bは、OMS646の存在下または非存在下における、IgGコーティングされた表面上のC4活性化のレベルをグラフで図示している。図21Aに示されるように、OMS646は、マンナンコーティングされた表面上においてC4活性化を1%ヒト血清中においておよそ0.5nMのIC50で阻害する。10個の独立した実験において得られたIC50値は、0.52±0.28nM(平均±SD)だった。対照的に、図21Bに示されるように、OMS646は、IgGコーティングされた表面上においてC4活性化を阻害しなかった。これらの結果から、OMS646は、補体成分C4のレクチン依存性の活性化を遮断するが、古典経路依存性の活性化を阻害しないことが証明される。
方法:
細胞膜傷害複合体(MAC)の沈着に対するOMS646の作用を、レクチン経路、古典経路および副経路に対する経路特異的条件を使用して解析した。この目的で、Wieslab Comp300補体スクリーニングキット(Wieslab,Lund,Sweden)を製造者の指示書に従って使用した。
図22Aは、レクチン経路特異的アッセイ条件下の抗MASP−2抗体(OMS646)の存在下または非存在下におけるMAC沈着のレベルをグラフで図示している。図22Bは、古典経路特異的アッセイ条件下の抗MASP−2抗体(OMS646)の存在下または非存在下におけるMAC沈着のレベルをグラフで図示している。図22Cは、副経路特異的アッセイ条件下の抗MASP−2抗体(OMS646)の存在下または非存在下におけるMAC沈着のレベルをグラフで図示している。
方法:
レクチン依存性のC3およびC4活性化を、以下のとおり、様々な濃度のOMS646の非存在下および存在下において90%ヒト血清において評価した:
C4活性化アッセイ
レクチン依存性のC4活性化に対するOMS646の作用を評価するために、96ウェルCostar medium結合プレートを、5℃において一晩、2μgのマンナン(50mM炭酸塩緩衝液,pH9.5中の50μlの40μg/mL溶液)でコーティングした。次いで、プレートを、200μlのPBSで3回洗浄し、穏やかに混合しながら室温で1時間、100μL/ウェルのPBS中1%ウシ血清アルブミンでブロッキングした。別個のプレインキュベーションプレートにおいて、選択された濃度のOMS646を90%ヒト血清と混合し、氷上で1時間インキュベートした。次いで、これらの抗体血清プレインキュベーション混合物を、氷上のアッセイプレートのマンナンコーティングされたウェルに移した。次いで、そのアッセイプレートを氷水浴において90分間インキュベートすることにより、補体を活性化させた。その反応混合物にEDTAを加えることによって、反応を停止させた。各ウェルを200μLのPBS−Tween20(PBS中0.05%Tween20)で5回洗浄し、次いで、各ウェルを200μLのPBSで2回洗浄した。100μL/ウェルのビオチン結合体化ニワトリ抗ヒトC4c(Immunsystem AB,Uppsala,Sweden)の1:1000希釈物を、2.0mg/mlウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBSにおいて加え、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルの0.1μg/mLのペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン(Pierce Chemical #21126)を、2.0mg/mlのBSAを含むPBSにおいて加え、振盪機上で穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルのペルオキシダーゼ基質TMB(Kirdegaard & Perry Laboratories)を加え、室温で16分間インキュベートした。100μL/ウェルの1.0M H3PO4を加えることによって、ペルオキシダーゼ反応を停止させ、OD450を測定した。
レクチン依存性のC3活性化に対するOMS646の作用を評価するために、終点においてC3沈着を評価した点を除いては、上に記載したC4活性化アッセイと同一の様式でアッセイを行った。C3沈着を、以下のとおり定量した。補体沈着反応の終わりに、プレートを上に記載したように洗浄し、続いて、100μL/ウェルの、2.0mg/mLウシ血清アルブミン(BSA)を含むPBS中のウサギ抗ヒトC3c抗体(Dako)の1:5000希釈物とともに1時間インキュベートした。各プレートを200μLのPBSで5回洗浄し、次いで、100μL/ウェルの、2.0mg/mL BSAを含むPBS中のHRP標識ヤギ抗ウサギIgG(American Qualex Antibodies)とともに室温で1時間インキュベートした。プレートを200μLのPBSで5回洗浄し、次いで、100μL/ウェルのペルオキシダーゼ基質TMB(Kirkegaard & Perry Laboratories)を加え、室温で10分間インキュベートした。100μL/ウェルの1.0M H3PO4を加えることによって、ペルオキシダーゼ反応を停止させ、OD450を測定した。シグモイド用量反応カーブフィッティングアルゴリズム(GraphPad)を実験データセットに適用することによって、IC50値を得た。
図23Aは、レクチン経路特異的条件下の90%ヒト血清における一連の濃度にわたる抗MASP−2抗体(OMS646)の存在下または非存在下におけるC3沈着のレベルをグラフで図示している。図23Bは、レクチン経路特異的条件下の90%ヒト血清における一連の濃度にわたる抗MASP−2抗体(OMS646)の存在下または非存在下におけるC4沈着のレベルをグラフで図示している。図23Aに示されるように、OMS646は、90%ヒト血清においてC3沈着をIC50=3±1.5nM(n=6)で遮断した。図23Bに示されるように、OMS646は、C4沈着をIC50=2.8±1.3nM(n=6)で遮断した。
上記の実施例10に記載し、図17に示されたように、OMS646が、OMS646(3mg/kg)をアフリカミドリザルに静脈内投与した後の約72時間にわたって全身のレクチン経路活性を切断した後、レクチン経路の活性が回復すると測定された。
この実施例では、以下のとおり、レクチン依存性のC4活性化を、OMS646の一連の濃度にわたって、およびOMS646の非存在下において、90%アフリカミドリザル血清または90%カニクイザル(Cynomoglus monkey)血清において評価した追跡研究を説明する:
種々の非ヒト霊長類種におけるレクチン依存性のC4活性化に対するOMS646の作用を測定するために、96ウェルCostar medium結合プレートを、5℃において一晩、2μgのマンナン(50mM炭酸塩緩衝液,pH9.5中の50μlの40μg/mL溶液)でコーティングした。次いで、プレートを200μLのPBSで3回洗浄し、穏やかに混合しながら室温で1時間、100μL/ウェルのPBS中1%ウシ血清アルブミンでブロッキングした。別個のプレインキュベーションプレートにおいて、選択された濃度のOMS646を、アフリカミドリザルまたはカニクイザルから回収された90%血清と混合し、氷上で1時間インキュベートした。次いで、これらの抗体血清プレインキュベーション混合物を、氷上のアッセイプレートのマンナンコーティングされたウェルに移した。次いで、そのアッセイプレートを氷水浴において90分間インキュベートすることにより、補体を活性化させた。その反応混合物にEDTAを加えることによって、反応を停止させた。各ウェルを200μLのPBS−Tween20(PBS中0.05%Tween20)で5回洗浄し、次いで、各ウェルを200μLのPBSで2回洗浄した。100μL/ウェルのビオチン結合体化ニワトリ抗ヒトC4c(Immunosystem AB,Uppsala,Sweden)の1:1000希釈物を、2.0mg/mLのBSAを含むPBSにおいて加え、穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルの0.1μg/mLのペルオキシダーゼ結合体化ストレプトアビジン(Pierce Chemical #21126)を、2.0mg/mLのBSAを含むPBSにおいて加え、振盪機上で穏やかに混合しながら室温で1時間インキュベートした。各ウェルを200μLのPBSで5回洗浄した。100μL/ウェルのペルオキシダーゼ基質TMB(Kirdegaard & Perry Laboratories)を加え、室温で10分間インキュベートした。100μL/ウェルの1.0M H3PO4を加えることによって、ペルオキシダーゼ反応を停止させ、OD450を測定した。シグモイド用量反応カーブフィッティングアルゴリズム(GraphPad)を実験データセットに適用することによって、IC50値を得た。
90%カニクイザル血清(図24A)および90%アフリカミドリザル血清(図24B)におけるレクチン経路阻害の用量反応が、それぞれ30nM〜50nMおよび15nM〜30nMの範囲内のIC50値で観察された。
Claims (18)
- 配列番号56のアミノ酸残基1〜120、配列番号57のアミノ酸残基1〜120、配列番号58のアミノ酸残基1〜120、配列番号60のアミノ酸残基1〜120、または、配列番号61のアミノ酸残基1〜120に示されるアミノ酸配列のうちいずれか一つを含む重鎖可変領域;ならびに
配列番号56のアミノ酸残基146〜250、配列番号57のアミノ酸残基146〜250、配列番号58のアミノ酸残基146〜250、配列番号60のアミノ酸残基146〜250、または、配列番号61のアミノ酸残基146〜250に示されるアミノ酸配列のうちいずれか一つを含む軽鎖可変領域
を含む、ヒトMASP−2に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、Fv、Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、一本鎖抗体、ScFv、ヒンジ領域を欠く一価抗体、および抗体全体からなる群より選択される、請求項1に記載の抗体。
- 以下の少なくとも一つが当てはまる、請求項1に記載の抗体:
(i)前記抗体が、10nM以下のKDでヒトMASP−2に結合する;
(ii)前記抗体が、MASP−2のCCP1ドメインにおけるエピトープに結合する;
(iii)前記抗体が、1%ヒト血清におけるインビトロアッセイにおいてC3b沈着を10nM以下のIC50で阻害する;
(iv)前記抗体が、90%ヒト血清においてC3b沈着を30nM以下のIC50で阻害する;または
(v)前記抗体が、古典経路を実質的に阻害しない。 - 前記抗体が、IgG2分子、IgG1分子、およびIgG4分子からなる群より選択される、請求項1に記載の抗体。
- 前記IgG4分子がS228P変異を含む、請求項4に記載の抗体。
- 前記重鎖可変領域が配列番号56のアミノ酸残基1〜120を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号56のアミノ酸残基146〜250を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記重鎖可変領域が配列番号57のアミノ酸残基1〜120を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号57のアミノ酸残基146〜250を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記重鎖可変領域が配列番号58のアミノ酸残基1〜120を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号58のアミノ酸残基146〜250を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記重鎖可変領域が配列番号60のアミノ酸残基1〜120を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号60のアミノ酸残基146〜250を含む、請求項1に記載の抗体。
- 前記重鎖可変領域が配列番号61のアミノ酸残基1〜120を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号61のアミノ酸残基146〜250を含む、請求項1に記載の抗体。
- 請求項1〜10のいずれかに記載されたMASP−2抗体またはそのフラグメントのアミノ酸配列をコードする核酸分子。
- 請求項11に記載の本発明のMASP−2抗体をコードする核酸分子を含む発現カセット。
- 請求項11に記載の本発明のMASP−2抗体をコードする核酸分子のうちの少なくとも1つ、または、請求項12に記載の発現カセットのうちの少なくとも1つを含む細胞。
- 単離された抗MASP−2抗体を生成する方法であって、前記抗MASP−2抗体をコードする核酸分子の発現を可能にする条件下において請求項13に記載の細胞を培養する工程、および前記抗MASP−2抗体を単離する工程を包含する、方法。
- 請求項1〜10のいずれかに記載の抗MASP−2抗体またはそのフラグメントおよび薬学的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
- 前記組成物が、動脈内、静脈内、頭蓋内、筋肉内、吸入、経鼻または皮下投与のために製剤化される、請求項15に記載の組成物。
- MASP−2依存性の補体活性化の阻害を必要とする被験体におけるMASP−2依存性の補体活性化を阻害するための医薬の製造のための、請求項1〜10のいずれかに記載のMASP−2抗体の使用。
- ヒト被験体への治療上の投与に適した、請求項1〜10のいずれかに記載のヒトモノクローナル抗MASP−2抗体の単位用量を備える製品であって、前記単位用量は、1mgから1000mgまでの範囲である、製品。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161482567P | 2011-05-04 | 2011-05-04 | |
US61/482,567 | 2011-05-04 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015177337A Division JP6352226B2 (ja) | 2011-05-04 | 2015-09-09 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020031661A Division JP2020097630A (ja) | 2011-05-04 | 2020-02-27 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018123148A true JP2018123148A (ja) | 2018-08-09 |
JP6669800B2 JP6669800B2 (ja) | 2020-03-18 |
Family
ID=47090380
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014509474A Active JP5891298B2 (ja) | 2011-05-04 | 2012-05-04 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2015177337A Active JP6352226B2 (ja) | 2011-05-04 | 2015-09-09 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2018072245A Active JP6669800B2 (ja) | 2011-05-04 | 2018-04-04 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2020031661A Withdrawn JP2020097630A (ja) | 2011-05-04 | 2020-02-27 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2022139872A Pending JP2022172275A (ja) | 2011-05-04 | 2022-09-02 | Masp-2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014509474A Active JP5891298B2 (ja) | 2011-05-04 | 2012-05-04 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2015177337A Active JP6352226B2 (ja) | 2011-05-04 | 2015-09-09 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
Family Applications After (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020031661A Withdrawn JP2020097630A (ja) | 2011-05-04 | 2020-02-27 | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
JP2022139872A Pending JP2022172275A (ja) | 2011-05-04 | 2022-09-02 | Masp-2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (6) | US9011860B2 (ja) |
EP (2) | EP3725811A3 (ja) |
JP (5) | JP5891298B2 (ja) |
KR (3) | KR101641057B1 (ja) |
CN (2) | CN103687620B (ja) |
AU (1) | AU2012250627B2 (ja) |
BR (1) | BR112013028429B1 (ja) |
CA (3) | CA2832871C (ja) |
CL (1) | CL2013003140A1 (ja) |
CY (1) | CY1123212T1 (ja) |
DK (1) | DK2704743T3 (ja) |
ES (1) | ES2795667T3 (ja) |
HR (1) | HRP20200887T1 (ja) |
HU (1) | HUE049154T2 (ja) |
IL (4) | IL229208B (ja) |
LT (1) | LT2704743T (ja) |
ME (1) | ME03755B (ja) |
MX (3) | MX347691B (ja) |
PL (1) | PL2704743T3 (ja) |
PT (1) | PT2704743T (ja) |
RS (1) | RS60541B1 (ja) |
RU (3) | RU2636038C2 (ja) |
SI (1) | SI2704743T1 (ja) |
WO (1) | WO2012151481A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201308943B (ja) |
Families Citing this family (45)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3689912A1 (en) | 2007-09-26 | 2020-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr |
TWI564021B (zh) | 2008-04-11 | 2017-01-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Repeated binding of antigen to antigen binding molecules |
MX365235B (es) | 2010-11-30 | 2019-05-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Molécula de unión a antígeno capaz de unir repetidamente a la pluralidad de moléculas de antígeno. |
NZ746139A (en) | 2011-04-08 | 2023-11-24 | Omeros Corp | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
US9644035B2 (en) | 2011-04-08 | 2017-05-09 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
KR101641057B1 (ko) * | 2011-05-04 | 2016-07-20 | 오메로스 코포레이션 | Masp-2 의존적 보체 활성화를 억제하는 조성물 |
EP3597747B1 (en) | 2012-08-24 | 2023-03-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Mouse fcgammarii-specific fc antibody |
CN110818798A (zh) | 2012-10-25 | 2020-02-21 | 美国比奥维拉迪维股份有限公司 | 抗补体C1s抗体和其用途 |
EP2914291B1 (en) | 2012-11-02 | 2022-02-23 | Bioverativ USA Inc. | Anti-complement c1s antibodies and uses thereof |
NZ729747A (en) * | 2013-03-15 | 2020-03-27 | Omeros Corp | Methods of generating bioactive peptide-bearing antibodies and compositions comprising the same |
US20140363433A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-12-11 | Omeros Corporation | Methods of Generating Bioactive Peptide-bearing Antibodies and Compositions Comprising the Same |
EP3783017A1 (en) | 2013-04-02 | 2021-02-24 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Fc region variant |
RU2020111211A (ru) * | 2013-10-17 | 2021-11-08 | Омерос Корпорейшн | Способы лечения состояний, ассоциированных с masp-2-зависимой активацией комплемента |
CA2963760A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Yoshinao Ruike | Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use |
EA201791754A1 (ru) | 2015-02-05 | 2019-01-31 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | АНТИТЕЛА, СОДЕРЖАЩИЕ ЗАВИСЯЩИЙ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ДОМЕН, ВАРИАНТЫ Fc-ОБЛАСТИ, IL-8-СВЯЗЫВАЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
HRP20230093T1 (hr) | 2015-04-06 | 2023-03-31 | Bioverativ Usa Inc. | Humanizirana anti-c1s protutijela i postupci njihove primjene |
CN106699888B (zh) | 2015-07-28 | 2020-11-06 | 上海昀怡健康科技发展有限公司 | 一种pd-1抗体及其制备方法和应用 |
WO2017083371A1 (en) | 2015-11-09 | 2017-05-18 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
EP3394098A4 (en) | 2015-12-25 | 2019-11-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-MYOSTATIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE |
IL294411A (en) * | 2016-01-05 | 2022-08-01 | Omeros Corp | masp-2 suppressors for use in suppressing fibrosis |
AU2017240129B2 (en) | 2016-03-31 | 2020-04-02 | Omeros Corporation | Methods for inhibiting angiogenesis in a subject in need thereof |
JOP20170154B1 (ar) * | 2016-08-01 | 2023-03-28 | Omeros Corp | تركيبات وطرق لتثبيط masp-3 لعلاج أمراض واضطرابات مختلفة |
CA3026050A1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Composition for prophylaxis or treatment of il-8 related diseases |
JOP20170170B1 (ar) * | 2016-08-31 | 2022-09-15 | Omeros Corp | صيغ لجسم مضاد تثبيطية لـ masp-2 بتركيز عالي ولزوجة منخفضة وأطقم، وطرق |
SG10201607778XA (en) | 2016-09-16 | 2018-04-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use |
JOP20190068A1 (ar) * | 2016-10-13 | 2019-04-01 | Omeros Corp | طرق لتقليل البول البروتيني في خاضع بشري يعاني من الاعتلال الكلوي a الناتج عن الجلوبيولين المناعي |
TW202402809A (zh) | 2017-08-15 | 2024-01-16 | 美商歐米諾斯公司 | 用於治療和/或預防與造血幹細胞移植有關的移植物抗宿主病和/或瀰漫性肺泡出血和/或靜脈閉塞性病的方法 |
EP3765494A4 (en) | 2018-03-15 | 2022-03-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-DENGUE VIRUS ANTIBODIES WITH CROSS-REACTIVITY AGAINST ZIKA VIRUS AND METHODS OF USE |
US11584714B2 (en) | 2018-05-29 | 2023-02-21 | Omeros Corporation | MASP-2 inhibitors and methods of use |
SG11202010925UA (en) * | 2018-05-29 | 2020-12-30 | Omeros Corp | Masp-2 inhibitors and methods of use |
KR20210100688A (ko) * | 2018-12-13 | 2021-08-17 | 아르제넥스 비브이비에이 | 인간 보체 인자 c2b 에 대한 항체 및 이의 사용방법 |
IL293551A (en) | 2019-12-04 | 2022-08-01 | Omeros Corp | 2-masp inhibitor compounds, preparations containing them and their uses |
IL293550A (en) | 2019-12-04 | 2022-08-01 | Omeros Corp | 2-masp inhibitor compounds, preparations containing them and their uses |
CA3159159A1 (en) | 2019-12-04 | 2021-06-10 | Neil S. Cutshall | Masp-2 inhibitors and methods of use |
US20210179612A1 (en) | 2019-12-04 | 2021-06-17 | Omeros Corporation | Masp-2 inhibitors and methods of use |
TWI834025B (zh) * | 2020-03-06 | 2024-03-01 | 美商奥默羅斯公司 | 用於治療和/或預防冠狀病毒誘導的急性呼吸窘迫症候群的抑制masp-2的方法 |
CN114634575A (zh) * | 2020-12-16 | 2022-06-17 | 康诺亚生物医药科技(成都)有限公司 | 一种补体抑制剂的开发和应用 |
CA3206789A1 (en) * | 2021-02-05 | 2022-08-11 | Gregory A. Demopulos | Biomarker for assessing the risk of developing acute covid-19 and post-acute covid-19 |
CN115215937B (zh) * | 2021-04-15 | 2023-05-26 | 上海麦济生物技术有限公司 | 抗人masp-2抗体及其制备方法和应用 |
KR20240000543A (ko) | 2021-04-25 | 2024-01-02 | 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 | 항-masp2 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 |
WO2023103789A1 (zh) * | 2021-12-10 | 2023-06-15 | 舒泰神(北京)生物制药股份有限公司 | 特异性识别masp2的抗体及其应用 |
US20230265215A1 (en) * | 2021-12-10 | 2023-08-24 | Omeros Corporation | Therapeutic antibodies that bind to the serine protease domain of masp-2 and uses thereof |
CN116284412A (zh) * | 2021-12-21 | 2023-06-23 | 沈阳三生制药有限责任公司 | 一种抗masp-2抗体及其制备方法与用途 |
WO2023174039A1 (en) * | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Inmagene Biopharmaceuticals (Hangzhou) Co., Ltd. | Masp-2-targetting antibodies and uses thereof |
WO2024118840A1 (en) | 2022-11-30 | 2024-06-06 | Omeros Corporation | Fused pyrimidines as masp-2 inhibitors |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004106384A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-12-09 | Natimmune A/S | Antibodies to masp-2 |
WO2005123128A2 (en) * | 2004-06-10 | 2005-12-29 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2007117996A2 (en) * | 2006-04-03 | 2007-10-18 | University Of Leicester | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2011047346A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Omeros Corporation | Methods for treating disseminated intravascular coagulation by inhibiting masp-2 dependent complement activation |
Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5211657A (en) | 1988-11-07 | 1993-05-18 | The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Laminin a chain deduced amino acid sequence, expression vectors and active synthetic peptides |
US5549910A (en) | 1989-03-31 | 1996-08-27 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
US5859205A (en) * | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
JP3218637B2 (ja) | 1990-07-26 | 2001-10-15 | 大正製薬株式会社 | 安定なリポソーム水懸濁液 |
JP2958076B2 (ja) | 1990-08-27 | 1999-10-06 | 株式会社ビタミン研究所 | 遺伝子導入用多重膜リポソーム及び遺伝子捕捉多重膜リポソーム製剤並びにその製法 |
US5856121A (en) | 1994-02-24 | 1999-01-05 | Case Western Reserve University | Growth arrest homebox gene |
JPH07238100A (ja) | 1994-02-25 | 1995-09-12 | Sumitomo Electric Ind Ltd | ヒトのmaspに対するモノクローナル抗体 |
US5741516A (en) | 1994-06-20 | 1998-04-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Sphingosomes for enhanced drug delivery |
US5795587A (en) | 1995-01-23 | 1998-08-18 | University Of Pittsburgh | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
US5738868A (en) | 1995-07-18 | 1998-04-14 | Lipogenics Ltd. | Liposome compositions and kits therefor |
BR9509985A (pt) | 1995-12-12 | 1998-11-03 | Omeros Med Sys Inc | Solução para irrigação e método para inibição de dor inflamação e esparmo |
US6969601B2 (en) | 1997-04-03 | 2005-11-29 | Jensenius Jens Chr | MASP-2, a complement-fixing enzyme, and uses for it |
JP2002532079A (ja) | 1998-12-15 | 2002-10-02 | ザ ブライハム アンド ウイミンズ ホスピタル, インコーポレイテッド | 補体活性化に関連するレクチン補体経路を調節するための方法および産物 |
CA2378880C (en) | 1999-07-21 | 2010-02-23 | Omeros Medical Systems, Inc. | Solutions and methods for inhibition of pain, inflammation and cartilage degradation |
US20010051754A1 (en) | 1999-08-03 | 2001-12-13 | Daria N. Lissy | Plural stage toluene disproportionation process minimizing ethylbenzene |
CA2401652A1 (en) * | 2000-03-01 | 2001-09-07 | Medimmune, Inc. | High potency recombinant antibodies and method for producing them |
SG98393A1 (en) | 2000-05-19 | 2003-09-19 | Inst Materials Research & Eng | Injectable drug delivery systems with cyclodextrin-polymer based hydrogels |
WO2002006460A2 (en) * | 2000-07-13 | 2002-01-24 | Jens Christian Jensenius | Masp-2, a complement-fixing enzyme, and uses for it |
ES2288900T3 (es) * | 2001-10-05 | 2008-02-01 | Affimed Therapeutics Ag | Anticuerpo de origen humano para inhibir la agregacion de trombocitos. |
WO2003047336A2 (en) * | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Abgenix, Inc. | TRANSGENIC ANIMALS BEARING HUMAN Igμ LIGHT CHAIN GENES |
KR20040094413A (ko) | 2002-02-01 | 2004-11-09 | 오메로스 코포레이션 | 연골 분해를 전신 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
CA2490007C (en) | 2002-07-19 | 2011-05-24 | Omeros Corporation | Biodegradable triblock copolymers, synthesis methods therefor, and hydrogels and biomaterials made there from |
WO2004076658A1 (ja) * | 2003-02-28 | 2004-09-10 | Mitsubishi Pharma Corporation | モノクローナル抗体およびそれをコードする遺伝子、ハイブリドーマ、医薬組成物ならびに診断試薬 |
US8840893B2 (en) | 2004-06-10 | 2014-09-23 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with MASP-2 dependent complement activation |
US20060018896A1 (en) | 2004-06-10 | 2006-01-26 | University Of Leicester | Methods for treating conditions associated with lectin-dependent complement activation |
GB0412966D0 (en) | 2004-06-10 | 2004-07-14 | Univ Leicester | Genetically modified non-human mammals and cells |
WO2010032060A1 (en) | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Medimmune Llc | Antibodies directed to dll4 and uses thereof |
CA2742969A1 (en) | 2008-11-07 | 2010-05-14 | Fabrus Llc | Anti-dll4 antibodies and uses thereof |
KR101641057B1 (ko) * | 2011-05-04 | 2016-07-20 | 오메로스 코포레이션 | Masp-2 의존적 보체 활성화를 억제하는 조성물 |
HUE036930T2 (hu) * | 2012-04-06 | 2018-08-28 | Omeros Corp | Készítmények és eljárások MASP-1 és/vagy MASP-3 gátlására paroxymalis nocturnalis hemoglobinürítés kezelésére |
-
2012
- 2012-05-04 KR KR1020137032078A patent/KR101641057B1/ko active Application Filing
- 2012-05-04 BR BR112013028429-3A patent/BR112013028429B1/pt active IP Right Grant
- 2012-05-04 WO PCT/US2012/036509 patent/WO2012151481A1/en active Application Filing
- 2012-05-04 MX MX2013012862A patent/MX347691B/es active IP Right Grant
- 2012-05-04 PT PT127793479T patent/PT2704743T/pt unknown
- 2012-05-04 EP EP19215429.2A patent/EP3725811A3/en active Pending
- 2012-05-04 JP JP2014509474A patent/JP5891298B2/ja active Active
- 2012-05-04 ME MEP-2020-121A patent/ME03755B/me unknown
- 2012-05-04 PL PL12779347T patent/PL2704743T3/pl unknown
- 2012-05-04 CA CA2832871A patent/CA2832871C/en active Active
- 2012-05-04 HU HUE12779347A patent/HUE049154T2/hu unknown
- 2012-05-04 CA CA3025762A patent/CA3025762C/en active Active
- 2012-05-04 CN CN201280032866.XA patent/CN103687620B/zh active Active
- 2012-05-04 KR KR1020187021028A patent/KR102024016B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-04 US US13/464,334 patent/US9011860B2/en active Active
- 2012-05-04 ES ES12779347T patent/ES2795667T3/es active Active
- 2012-05-04 LT LTEP12779347.9T patent/LT2704743T/lt unknown
- 2012-05-04 AU AU2012250627A patent/AU2012250627B2/en active Active
- 2012-05-04 DK DK12779347.9T patent/DK2704743T3/da active
- 2012-05-04 EP EP12779347.9A patent/EP2704743B1/en active Active
- 2012-05-04 MX MX2017006060A patent/MX361175B/es unknown
- 2012-05-04 SI SI201231793T patent/SI2704743T1/sl unknown
- 2012-05-04 CA CA3131223A patent/CA3131223C/en active Active
- 2012-05-04 RU RU2013153527A patent/RU2636038C2/ru active
- 2012-05-04 CN CN201710201126.9A patent/CN107011443B/zh active Active
- 2012-05-04 KR KR1020167018831A patent/KR101882830B1/ko active IP Right Grant
- 2012-05-04 RS RS20200685A patent/RS60541B1/sr unknown
- 2012-11-03 IL IL229208A patent/IL229208B/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-10-30 CL CL2013003140A patent/CL2013003140A1/es unknown
- 2013-11-03 IL IL229208A patent/IL229208A0/en unknown
- 2013-11-04 MX MX2018014714A patent/MX2018014714A/es unknown
- 2013-11-27 ZA ZA2013/08943A patent/ZA201308943B/en unknown
-
2015
- 2015-03-17 US US14/660,040 patent/US9475885B2/en active Active
- 2015-09-09 JP JP2015177337A patent/JP6352226B2/ja active Active
-
2016
- 2016-09-13 US US15/263,876 patent/US10047165B2/en active Active
-
2017
- 2017-10-31 RU RU2017137872A patent/RU2725958C2/ru active
-
2018
- 2018-04-04 JP JP2018072245A patent/JP6669800B2/ja active Active
- 2018-07-13 US US16/034,896 patent/US10683367B2/en active Active
-
2019
- 2019-05-20 IL IL266756A patent/IL266756B/en unknown
-
2020
- 2020-02-27 JP JP2020031661A patent/JP2020097630A/ja not_active Withdrawn
- 2020-04-24 US US16/857,558 patent/US11613589B2/en active Active
- 2020-06-02 HR HRP20200887TT patent/HRP20200887T1/hr unknown
- 2020-06-10 CY CY20201100525T patent/CY1123212T1/el unknown
- 2020-06-22 RU RU2020120539A patent/RU2020120539A/ru unknown
-
2021
- 2021-08-10 IL IL285522A patent/IL285522A/en unknown
-
2022
- 2022-09-02 JP JP2022139872A patent/JP2022172275A/ja active Pending
-
2023
- 2023-02-13 US US18/168,192 patent/US20240092938A1/en active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004106384A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-12-09 | Natimmune A/S | Antibodies to masp-2 |
WO2005123128A2 (en) * | 2004-06-10 | 2005-12-29 | Omeros Corporation | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2007117996A2 (en) * | 2006-04-03 | 2007-10-18 | University Of Leicester | Methods for treating conditions associated with masp-2 dependent complement activation |
WO2011047346A1 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Omeros Corporation | Methods for treating disseminated intravascular coagulation by inhibiting masp-2 dependent complement activation |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6669800B2 (ja) | Masp−2依存性の補体活性化を阻害するための組成物 | |
US20190382505A1 (en) | Compositions and Methods of Inhibiting MASP-1 and/or MASP-2 and/or MASP-3 for the Treatment of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria | |
AU2015270480B2 (en) | Compositions for inhibiting MASP-2 dependent complement activation | |
WO2013020995A1 (en) | New antibodies against phosphorylcholine | |
NZ617487B2 (en) | Compositions for inhibiting masp-2 dependent complement activation | |
NZ715226B2 (en) | Compositions for inhibiting MASP-2 dependent complement activation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180404 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190221 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190821 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200128 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200227 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6669800 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |