JP2018105881A - 液体クロマトグラフィー質量分析による体液中のアミノ酸分析 - Google Patents
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Abstract
Description
薬は誘導体化されたアミノ酸の分析を促進する置換基を含みうるため、有用である。例えば誘導体化試薬は、UV吸収検出のための発色団または蛍光検出のためのフルオロフォアを含有してもよい。
合物をLC-MSまたはGC-MSで誘導体化/分離することは困難な課題である。
”Clin Chem lab Med (2000) 38: 391-401;Hessら,“Acid hydrolysis of silk fibroins and determination of the enrichment of isotopically labeled amino acids using precolumn derivitization and high performance liquid chromatography-electrspray ionization mass spectrometry”Anal Biochem (2002) 311:19-26;Jiら,“Determination of phenethyl isothiocyanate in human plasma and urine by ammonia derivatization and liquid chromatography-tandem mass spectrometry” Anal Biochem (2003) 323:39-47;Van Eijikら,“Determination of amino acid isotope enrichment using liquid chromatography-mass spectrometry” (1999) Anal Biochem 271:8-17;およびLiuら,“Derivitization of amino acids with N,N-dimethyl-2,4-dinitro-5-fluorobenzylamine for liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry”(2004) Rapid
Commun Mass Spectrom 18:1059-65。体液中のアミノ酸を検出するための改善された方法が所望されている。
個体の体液中に存在しうる様々の個別アミノ酸を検出するための方法を開示する。体液中の個別アミノ酸の検出を用いて、体液が1つまたはそれ以上のアミノ酸異常を有するか否かを判定することができる。ある観点では、本発明の方法は以下を伴う:体液アミノ酸の誘導体化、液体クロマトグラフィー(LC)による誘導体化アミノ酸の分離、質量分析(MS)法による誘導体化アミノ酸の同定、およびアミノ酸標準物質群中の構造的に類似したアミノ酸との比較による誘導体化アミノ酸の定量。好ましくはMSはタンデムMS以外のもの(例えばシングルMSなど)である。構造的に類似したアミノ酸は重要な構造的特徴(例えば主要な官能基)を共有しているため、質量分析による一つのアミノ酸の同定を用いて、同じ方法で構造的に類似した他のアミノ酸を同定することができる。個別アミノ酸標準物質群を、処理前に体液に添加して一連の内部標準として使用するのが好ましい。
中で個々のアミノ酸を検出、同定および/または定量する方法では、そのレベルを表1に示す基準範囲と比較することができる。表1の基準範囲外にある血漿アミノ酸レベルを異常として同定してもよい。尿中で個別アミノ酸を検出、同定、および/または定量する方法では、そのレベルを表2に示す基準範囲と比較することができる。表2の基準範囲外にある尿中アミノ酸レベルを異常として同定してもよい。CSF中で個別アミノ酸を検出、同
定、および/または定量する方法では、そのレベルを表3に示す基準範囲と比較することができる。表3の基準範囲外にあるCSF中アミノ酸レベルを異常として同定してもよい。
唾液中で個別アミノ酸を検出、同定、および/または定量する方法では、そのレベルを表4に示す基準範囲と比較することができる。表4の基準範囲外にある唾液中アミノ酸レベルを異常として同定してもよい。ある態様では、各アミノ酸の基準範囲は被験体の年齢(すなわち新生児、乳幼児、小児、または成人)によって変化する。
えばフェニルイソチオシアネート(PITC))で誘導体化する。好ましい態様では、誘導体化試薬はPITCである。他の好適な誘導体化試薬にはo-フタルジアルデヒド(OPA)、2,4-
ジニトロフルオロベンゼン(DNFB)、およびNα-(2,4-ジニトロ-5-フルオロフェニル)-L-アラニンアミド(FDAA)がある。
ン、サルコシン、タウリン、カルノシン、シトルリン、アルギニン、アンセリン、1-メチルヒスチジン、3-メチルヒスチジン、α-アミノアジピン酸(AAD)、スレオニン、アラニン、β-アラニン(BALA)プロリン、エタノールアミン、γ-アミノ酪酸(GABA)、β-ア
ミノイソ酪酸(BAIA)、α-アミノ酪酸(AAB)、システイン、チロシン、バリン、メチオニン、L-アロシスタチオニン(シスタチオニンA)、L-シスタチオニン(シスタチオニンB)、シスチン、イソロイシン、アロイソロイシン、ロイシン、DL-ヒドロキシリジン(ヒド
ロキシリジン(1))、DL-アロヒドロキシリジン(ヒドロキシリジン(2))、フェニルアラ
ニン、オルニチン、トリプトファン、ホモシスチン、アルギノコハク酸(ASA)、リジン
、および ホーキンシン(Hawkinsin;(2-L-システイン-S-イル-1,4-ジヒドロキシシクロ
ヘキシ-5-エン-1-イル)酢酸。更に、この方法を使用して体液中で検出された任意の個別
アミノ酸のレベルに基づいて疾病状態を診断してもよい。
ルノシン、スレオニン、アルギニン、アンセリン、1-メチルヒスチジン、3-メチルヒスチジン、アラニン、GABA、BAIB、プロリン、エタノールアミン、AAB、チロシン、バリン、
メチオニン、シスタチオニンA、シスタチオニンB、シスチン、イソロイシン、アロイソロイシン、ロイシン、OH-リジン-1, OH-リジン-2、ホモシスチン、フェニルアラニン、トリプトファン、オルニチン、およびリジン。
アミノアジピン酸、スレオニン、アラニン、β-アラニン、プロリン、エタノールアミン
、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、α-アミノ酪酸、チロシン、バリン、メチオニン
、L-シスタチオニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、オルニチン、トリプトファン、ホモシスチン、およびリジン。
ン、L-シスタチオニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、オルニチン、トリプトファン、ホモシスチン、リジン、シスチン、およびヒドロキシリジン。
スレオニン、アラニン、β-アラニン、プロリン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、
α-アミノ酪酸、チロシン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルア
ラニン、オルニチン、トリプトファン、ホモシスチン、およびリジン。
アジピン酸、β-アラニン、プロリン、エタノールアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイ
ソ酪酸、システイン、L-アロシスタチオニンA、L-シスタチオニン、シスチン、アロイソ
ロイシン、DL-ヒドロキシリジン、DL-アロヒドロキシリジン、およびホモシスチン。
アジピン酸、β-アラニン、プロリン、エタノールアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイ
ソ酪酸、システイン、L-アロシスタチオニンA、L-シスタチオニン、シスチン、DL-ヒドロキシリジン、DL-アロヒドロキシリジン、およびホモシスチン。更に別の態様では、この
方法を用いてシステイン、ホスホセリン、またはアルギノコハク酸のいずれかを同定できる。
β-アラニン、プロリン、エタノールアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、シス
テイン、L-アロシスタチオニンA、L-シスタチオニン、シスチン、アロイソロイシン、DL-ヒドロキシリジン、DL-アロヒドロキシリジン、およびホモシスチン。
タノールアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、L-アロシスタチオニンA、L-シス
タチオニン、シスチン、アロイソロイシン、DL-ヒドロキシリジン、DL-アロヒドロキシリジン、およびホモシスチン。
ルアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、L-アロシスタチオニンA、L-シスタチオ
ニン、シスチン、DL-ヒドロキシリジン、DL-アロヒドロキシリジン、およびホモシスチン。
シリカ粒子)を含む充填剤を含有するものである。粒子は一般に約50から300オングストローム、好ましくは約150オングストロームの微細孔を有する。粒子は一般に約50-600m2/g
、好ましくは約100m2/gの表面積を有する。
よく、移動相中のアセトニトリル濃度を約100%まで漸増させてアミノ酸をカラムから溶
出してもよい。必要により、移動相を約40-60℃、好ましくは約50℃の温度まで加熱して
もよい。更に、移動相は必要により、LCおよび/またはMSの際に有用な更なる1つまたはそれ以上の試薬を含有してもよい(例えば酢酸アンモニウムまたは酢酸)。
光イオン化法、電子イオン化法、高速電子衝撃(FAB)/液体二次イオン化法(LSIMS)、マトリクス支援レーザー脱離イオン化法(MALDI)、フィールドイオン化法、フィールド
脱離法、熱スプレー/プラズマスプレーイオン化法、およびパーティクルビーム・イオン化法がある。好ましくはMSはESIを用いて行う。更に、MSは負または正イオンモード(好
ましくは負イオンモード)を用いて行ってもよい。
ましくは、イオンはSIMを用いて検出する。MSはタンデムMS以外が好ましい。
本明細書で使用する“アミノ酸”とは、アミノ基および酸性基に共有結合したα炭素を含有する任意の分子を意味する。酸性基はカルボキシル基であってもよい。“酸性基”は以下の式の一つを有する分子であってもよい:
ン、バリン、フェニルアラニン、ロイシン、チロシン、システイン、トリプトファン、ホスホセリン(PSER)、スルホシステイン、アルギノコハク酸(ASA)、ヒドロキシプロリ
ン、ホスホエタノールアミン(PEA)、 サルコシン(SARC)、タウリン(TAU)、カルノ
シン(CARN)、シトルリン(CIT)、アンセリン(ANS)、1,3-メチルヒスチジン(ME-HIS)、α-アミノアジピン酸(AAA)、β-アラニン(BALA)、エタノールアミン(ETN)、γ-アミノ酪酸(GABA)、β-アミノイソ酪酸(BAIA)、α-アミノ酪酸(BABA)、L-アロシ
スタチオニン(シスタチオニンA;CYSTA-A)、L-シスタチオニン(シスタチオニンB;CYSTA-B)、シスチン、アロイソロイシン(アロILE)、DL-ヒドロキシリジン(ヒドロキシリジン(1))、DL-アロヒドロキシリジン(ヒドロキシリジン(2))、オルニチン(ORN)、ホモシスチン(HCY)、およびそれらの誘導体。“アミノ酸”にはD-アミノ酸およびL-アミ
ノ酸型のような立体異性体も含まれる。特に記載しないかぎり、“アミノ酸”という用語は、ジペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質中に存在するアミノ酸から分離された個別の(すなわち遊離の)アミノ酸分子を示す。
が含まれる。好ましくは、体液は血漿、血清、脳脊髄液、尿、または唾液であり、最も好ましくは血漿である。
ることを意味する。例えばアミノ酸の誘導体化は、アミノ酸を誘導体化試薬と反応させて誘導体化アミノ酸を生成させることによって行ってもよい。誘導体化は、アミノ酸のαアミノ基を誘導体化試薬の求電子性原子と反応させて共有結合を形成させることを含んでもよい。誘導体化試薬はイソチオシアネート基、ジニトロフルオロフェニル基、ニトロフェノキシカルボニル基、および/またはフタルアルデヒド基であってもよい。
量分析計”には化合物のイオン化および帯電化合物の検出のための手段が含まれる。
同様の電荷を持つ分子間の距離が増大する。中性キャリアガスを用いて微小液滴中の中性溶媒を揮発させ、これによって今度は帯電した分析物分子が互いに接近する。しかしながらこの分子の接近は不安定となり、同様の電荷を持つ分子同士が接近すると液滴は再び爆
発する。この過程は、分析物が溶媒を含有しなくなり、孤立したイオンが生成されるまで繰り返される。孤立したイオンは質量分析計へ輸送される。
アラインされた金属製ロッド)から成る質量分析計であり、1対のロッドは正電位を、他の組のロッドは負電位を有する。検出されるためには、イオンはアラインされたロッドに沿って並行する軌道の中央を通過しなければならない。所定の直流振幅および高周波電圧で四重極を操作すると、所定のm/zを有するイオンだけが共鳴し、安定した軌道で四重極
を通過し、検出される。“陽イオンモード”とは、正電位を有するイオンが質量分析計によって検出されるモードを意味する。“陰イオンモード”とは、負電位を有するイオンが質量分析計によって検出されるモードを意味する。“単一(single)イオンモニタリング”または“選択(selected)モニタリング”(すなわちSIM)では、特定の質量だけが観
察されるように直流振幅および高周波電圧を調整する。
、尿、または唾液であり、血漿が最も好ましい。
サルコシン、タウリン、カルノシン、シトルリン、アンセリン、1,3-メチルヒスチジン、α-アミノアジピン酸、β-アラニン、エタノールアミン、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、α-アミノ酪酸、L-アロシスタチオニン(シスタチオニンA)、L-シスタチオニン(シスタチオニンB)、シスチン、アロイソロイシン、ロイシン、DL-ヒドロキシリジン(ヒドロキシリジン(1))、DL-アロヒドロキシリジン(ヒドロキシリジン(2))、オルニチン
、トリプトファン、ホモシスチン、およびそれらの異性体(例えば立体異性体)。
ルトン・カットオフフィルターがある。更に、アルコール(例えばメタノール)または酸をサンプルに添加して高分子量成分を血漿サンプルから沈殿させてもよい。また、高速遠心分離によって高分子量成分をサンプルから除去してもよい。
の分離および/または検出を容易にする(例えばプレカラム誘導体化を最初に行い、その後LCを実施する)。誘導体化試薬は、クロマトグラフィーの際、またはその後の誘導体化アミノ酸の検出を容易にする置換基(例えば蛍光体または発色団)を含んでもよい。更に、誘導体化試薬は質量分析の際の誘導体化アミノ酸のイオン化を容易にする置換基を含んでもよい。一般的な誘導体化試薬にはイソチオシアネート(例えばフェニルイソチオシアネート(PITC))、o-フタルジアルデヒド(OPA)、2,4-ジニトロフルオロベンゼン(DNFB)、およびNα-(2,4-ジニトロ-5-フルオロフェニル)-L-アラニンアミド(FDAA)がある
。好ましい態様では、誘導体化試薬はPITCである。
くは高圧液体クロマトグラフィー分離)および質量分析(すなわちLC-MS)を行う。
約15-300mmであってもよい。好ましくはカラムは直径約2mm、長さ約50mmである。
る(例えば250x2.1mm、5μm、BetaBasic C18カラム)。
クモード、またはポリタイピック(すなわち混合)モードを用いて行ってもよい。好ましくは、液体クロマトグラフィーはグラジエントモードを用いて行う。グラジエントモードでは、誘導体化したサンプルをカラムに適用し、2つの溶媒の混合液(すなわち移動相)
をカラムに通過させてアミノ酸を溶出させる。一般に、当該分野で公知のように、一方の溶媒は相対的に親水性の傾向があり、他方の溶媒は相対的に疎水性の傾向がある。本発明の方法の実施に好適であることが明らかになっている溶媒配合の具体例として、親水性溶媒が95% H2O、5% アセトニトリルであり、疎水性溶媒が100% アセトニトリルであっても
よい。必要により、配合溶媒は、誘導体化アミノ酸の分離および/または検出を容易にするために1つまたはそれ以上の試薬(例えば20mM 酢酸アンモニウム)を含有してもよい
。いくつかの試薬を移動相に添加してクロマトグラフィーのピーク形状の改善および/またはLC-MSのイオン源の提供を行ってもよい。
、LC-MSの実施に好適な装置はAgilent Technologiesから入手できる(例えばAgilent 1100シリーズLC/MSD)。
電子イオン化法、高速原子衝突(FAB)/液体二次イオン化法(LSIMS)、マトリクス支援レーザー脱離イオン化法(MALDI)、フィールドイオン化法、電解脱離法、熱スプレー/
プラズマスプレーイオン化法、および粒子ビームイオン化法。エレクトロスプレーイオン化法が好ましい。
析する。質量電荷比を測定するのに好適な分析計には四重極型分析計、イオントラップ型分析計、および飛行時間型分析計がある。好ましくは四重極を用いて質量電荷比を測定する。イオンの検出は、いくつかの検出法を用いて行ってもよい。例えば選択されたイオンを検出するか(すなわち選択イオンモニタリングモード(SIM)を用いて)、またはスキ
ャンモードを用いてイオンを検出してもよい。好ましくはイオンはSIMを用いて検出する
。
尿、血漿、および脳脊髄液(CSF)サンプルを健常個体から得た。一晩絶食した後の患
者からヘパリン化血漿サンプルを採取した。小児患者では非絶食サンプルを使用した。以下の操作を用いて、尿、血漿、およびCSF中のアミノ酸を定量した。
試験混合液を調製した。次いで試験混合液を分画分子量10,000のフィルターに通過させ、試験サンプルとして低分子量ろ液画分を得、その後窒素雰囲気下、40-75℃で乾燥させた
。乾燥サンプルを約25μlの再乾燥溶液(等量のメタノール、1M 酢酸ナトリウム、およびトリエチルアミン)に溶解し、窒素雰囲気下、40℃で乾燥した。サンプルを50μlの誘導
体化溶液(1.12μlの100%メタノール、1.60μlの水、1.60μlの100%トリエチルアミン、
および1.60μlの100%フェニルイソチオシアネート(PITC))に溶解した。次いで、溶解
したサンプルを約40℃で約15-20分間加熱し、その後窒素雰囲気下、50-60℃で乾燥した。乾燥したサンプルを100μlの再構成溶液(95% H2O、5%アセトニトリル)に溶解し、ボル
テックスをし、LC/MS用バイアルに移した。
モニウムおよび(B)100%アセトニトリル(50℃に加熱)であった。アミノ酸サンプルを
以下のステップグラジエントでカラムから溶出した:
新生児(30日以下)、乳児(1-23.9ヶ月)、小児(2-17.9歳)、および成人(18歳以上)から採取したヘパリン化血漿サンプルについてアミノ酸分析を行った。全ての個体は臨床的に正常と診断されたか、または感染性疾患判定のために提出されたサンプルから得た。全ての被験体は完全に歩行可能、地域在住、健常であって、医薬品を服用していない。試験群の人口統計は以下の通りである:
同値にすべきである。
新生児(30日以下)、乳児(1-23.9ヶ月)、小児(2-17歳)、および成人(17歳以上)から採取した尿サンプルについてアミノ酸分析を行った。全ての個体は臨床的に正常と診断されたか、または感染性疾患判定のために提出されたサンプルから得た。全ての被験体
は完全に歩行可能、地域在住、健常であって、医薬品を服用していない。試験群の人口統計は以下の通りである:
正を行っていない。検出不能であるアミノ酸の正常範囲はLOQ未満であるか、それと同値
にすべきである。
新生児(3ヶ月以下)、乳児(3-23.9ヶ月)、小児(2-10歳)、および成人(10歳以上
)から採取したCSFサンプルについてアミノ酸分析を行った。全ての個体は臨床的に正常
と診断されたか、または感染性疾患判定のために提出されたサンプルから得た。全ての被験体は完全に歩行可能、地域在住、健常であって、医薬品を服用していない。試験群の人口統計は以下の通りである:
ック統計学手法を用いて正常基準範囲を構築した。データがガウス分布を示す場合は、好適な平均値±2SDの範囲を選択した。データがガウス分布を示さない場合は、ノンパラメトリック法で95パーセンタイル範囲または観察された範囲を選択した。表3にアッセイした各アミノ酸の正常基準範囲を定量限界(LOQ)と共に示す。基準範囲はμM(マイクロモル/リットル)で表す。検出不能であるアミノ酸の正常範囲はLOQ未満であるか、それと
同値にすべきである。
成人9人(男性3人、女性6人)の唾液サンプルについてアミノ酸分析を実施した。全ての被験体は臨床的に正常であると診断され、完全に歩行可能、地域在住、健常であって、医薬品を服用していない。表4にアミノ酸レベルの実測値の範囲を示す。診断目的では、これらの範囲を“正常”範囲と見なしてもよい。検出不能であるアミノ酸の正常範囲は
LOQ未満であるか、それと同値にすべきである。
本発明の意図に包含されるが、これは特許請求の範囲に定義する。
から成る”、および“から成る”という用語は互いに他の2つのいずれかで置換してもよい。使用した用語および表現は制限ではなく説明のための用語として使用するものであり、それらの用語および表現の使用において提示および記載する特長に相当するものまたはその一部のいずれをも除外する意図はなく、認識されるように、請求する本発明の範囲内で種々の改変を行うことができる。従って、好ましい態様および必要に応じた特長によって本発明を具体的に開示したが、当業者は本明細書に開示する概念の改変および変更を行ってもよく、それらの改変および変更は添付の特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内に含まれると見なされることは理解されるべきである。
Claims (21)
- 個体の体液中の1以上の遊離アミノ酸の量を質量分析法によって決定する方法で
あって、
(a)液体クロマトグラフィー(LC)により前記1以上の遊離アミノ酸を分離し;そして
(b)質量分析(MS)法により前記1以上の遊離アミノ酸の量を測定する、
の各工程を含み、
前記1以上の遊離アミノ酸が、ホスホセリン、アロイソロイシン、およびスルホシステインから選択される少なくとも1つのアミノ酸を含む、方法。 - 前記1以上の遊離アミノ酸が、ホスホセリンを含む、請求項1記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、アロイソロイシンを含む、請求項1記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、ホスホセリンおよびアロイソロイシンを含む、請求項1記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、スルホシステインを含む、請求項1記載の方法。
- 前記体液が、血漿、尿、脳脊髄液(CSF)および唾液からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
- 前記体液が血漿であり、前記遊離アミノ酸の量が表1に示す各アミノ酸の基準範囲と比較される、請求項1記載の方法。
- 前記体液が尿であり、前記遊離アミノ酸の量が表2に示す各アミノ酸の基準範囲と比較される、請求項1記載の方法。
- 前記体液が脳脊髄液(CSF)であり、前記遊離アミノ酸の量が表3に示す各アミノ酸の基準範囲と比較される、請求項1記載の方法。
- 前記体液が唾液であり、前記遊離アミノ酸の量が表2に示す各アミノ酸の基準範囲と比較される、請求項4記載の方法。
- 少なくとも1つの遊離アミノ酸を、フェニルイソチオシアネート(PITC)、o−フ
タルジアルデヒド(OPA)、2,4−ジニトロフルオロベンゼン(DNFB)、または
Nα(2,4−ジニトロ−5−フルオロフェニル)−L−アラニンアミド(FDAA)で
誘導体化する、請求項1記載の方法。 - 質量分析法が、タンデム質量分析法である、請求項1記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸の量が、メープルシロップ尿症、腎不全、クローン病、潰瘍性大腸炎、慢性疲労症候群、ウィルソン病、クッシング病、痛風、および多動性障害群より選択される1以上の疾患の診断またはモニターに用いられる、請求項1記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、さらにロイシン、イソロイシン、およびバリンを含む、請求項3記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、さらにホスホエタノールアミン、タウリン、アスパラギン、セリン、ヒドロキシプロリン、グリシン、グルタミン、アスパラギン酸、エタノールアミン、ヒスチジン、スレオニン、シトルリン、サルコシン、β-アラニン、アラニン、グルタミン酸、1-メチルヒスチジン、3-メチルヒスチジン、アルギノコハク酸、カルノシン、アンセリン、アルギニン、α-アミノアジピン酸、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、α-アミノ酪酸、ヒドロキシリジン、プロリン、オルニチン、シスタチオニン、シスチン、リジン、メチオニン、バリン、チロシン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含む、請求項4記載の方法。
- 前記体液が、尿である、請求項15記載の方法。
- 前記1以上の遊離アミノ酸が、さらにホモシスチン、ホスホエタノールアミン、タウリン、アスパラギン、セリン、ヒドロキシプロリン、グリシン、グルタミン、アスパラギン酸、エタノールアミン、ヒスチジン、スレオニン、シトルリン、サルコシン、β-アラニン、アラニン、グルタミン酸、1-メチルヒスチジン、3-メチルヒスチジン、アルギノコハク酸、カルノシン、アンセリン、アルギニン、α-アミノアジピン酸、γ-アミノ酪酸、β-アミノイソ酪酸、α-アミノ酪酸、ヒドロキシリジン、プロリン、オルニチン、シスタチオニン、シスチン、リジン、メチオニン、バリン、チロシン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、およびトリプトファンを含む、請求項4記載の方法。
- 前記体液が、血漿または脊髄液である、請求項17の方法。
- 個体の体液中の1以上の遊離アミノ酸の量を質量分析法によって決定する方法で
あって、
(a)液体クロマトグラフィー(LC)により前記1以上の遊離アミノ酸を分離し;そして
(b)前記1以上の遊離アミノ酸を質量分析(MS)法に供して定量する、
の各工程を含み、
前記1以上の遊離アミノ酸が、ホスホセリンを含む、方法。 - 個体の体液中の1以上の遊離アミノ酸の量を質量分析法によって決定する方法で
あって、
(a)液体クロマトグラフィー(LC)により前記1以上の遊離アミノ酸を分離し;そして
(b)質量分析(MS)法により前記1以上の遊離アミノ酸の量を測定する、
の各工程を含み、
前記1以上の遊離アミノ酸が、アロイソロイシンを含む、方法。 - 個体の体液中の1以上の遊離アミノ酸の量を質量分析法によって決定する方法で
あって、
(a)液体クロマトグラフィー(LC)により前記1以上の遊離アミノ酸を分離し;そして
(b)質量分析(MS)法により前記1以上の遊離アミノ酸の量を測定する、
の各工程を含み、
前記1以上の遊離アミノ酸が、スルホシステインを含む、方法。
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