JP2017537071A - マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤の使用方法 - Google Patents

Abstract

【課題】糖尿病患者の膵臓機能を保護する医薬組成物を製造するのに用いられるマクロファージ炎症性タンパク質＿１β抑制剤の使用方法を提供する。【解決手段】マクロファージ炎症性タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）抑制剤は、膵臓を保護し、インシュリンの分泌を維持し、血糖値の上昇を防止する効果を有する。【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
この出願は、２０１４年１０月２４日に米国特許商標庁に出願された米国仮特許出願第６２/０６８４７５号に基づくアメリカ仮特許申請の優先権を主張する。その全部の内容が本発明に引用されている。

本発明は、膵臓を保護するマクロファージ炎症性タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）抑制剤の使用方法に関し、特に、糖尿病患者のインシュリンの分泌の維持、および血糖値の異常上昇を防止するＭＩＰ−１βの使用方法に関する。

近年、糖尿病患者の数は、全世界またはアジア諸国、特に、台湾を含む中国、日本、インドで毎年増加している。台湾の二型糖尿病患者人数は、全人口の１０％に近づいており、増加中である。よって、糖尿病治療薬の研究は、緊迫な需要がある。現在知られている糖尿病の血糖上昇メカニズムは、インシュリン抵抗が上昇すること（二型糖尿病）、および、膵臓細胞が炎症により損害されること（一型糖尿病および二型糖尿病）であり、膵臓のインシュリン分泌の不足により、外部から摂取される糖分や、体内で生成される糖分が低下することにより起こりえる。

現在、臨床の糖尿病の血糖制御は、主に膵臓がインシュリンを分泌することを刺激すること（二型糖尿病の治療）、外部組織のインシュリン抵抗を低減させること（二型糖尿病の治療）、腸の糖分摂取を低減させること（二型および二型糖尿病の治療）、尿液の糖分の排出を増加すること（二型および二型糖尿病の治療）などのメカニズムを有する。
しかし、一型または二型糖尿病のいずれも、結果的に膵臓細胞が炎症を発生して壊れ、インシュリンの分泌が著しく不足するため、インシュリンの注射または吸入で治療を補助する必要がある。その主な原因は、現存または開発中の薬は、膵臓（膵臓細胞）を直接的に保護し、その損傷を回復または軽減することができず、インシュリンの分泌を維持することができないためである。
よって、本発明は、人の膵臓を保護することで、膵臓細胞の炎症および損害を改善する治療方法で、糖尿病患者の血糖が上昇する薬を開発する。

マクロファージ炎症性タンパク質−１β(Macrophage inflammatory protein-１β、ＭＩＰ−１β、他の文献ではＣＣＬ４とも呼ばれる）は、ＣＣサイトカインのファミリーである。最初にリポ多糖により活性化されたマクロファージ培養液から分離されており（非特許文献１）、分子量が７．８キロダルトンであり、タンパク質構造が９２個のアミノ酸前駆体により構成されている。ＤＭ（高血糖症）及び心血管患者の中でＭＩＰ−１βが増量調節されることが観察されている（非特許文献２、３）。

ＭＩＰ−１βは、細胞表面上のＣＣサイトカイン受容体（ＣＣＲ、Ｇ−タンパク質−カップリング型受容体スーパーファミリーに属する）と結合することにより、生物化学機能を実行する。マクロファージ炎症性タンパク質−１βの受容体は多く存在する。その中のＣＣＲ５は主な生理的及び病理的作用を有すると認められており、我々が使用するマクロファージ炎症性タンパク質−１βの単クローン抗体はＣＣＲ５に拮抗かつ制御する作用を有する。
糖尿病を有する動物モデルで行った研究によると、膵臓中のＣＣＲ５の発現は膵炎及び自発性一型糖尿病の発展と関連する（非特許文献４）。また、二型糖尿病を有するラットの頸部神経節中にＣＣＲ５が増加する現象が見られる。しかし、このデータは、異なる動物モデルの中で得られた結果が一致していない。報告によると、糖尿病（ＮＯＤ）を有する１１−１３週のマウスモデルの中で、ＣＣＲ５抗体でＣＣＲ５結合のブロッキングまたはＣＣＲ５の欠陥に至る。自体免疫の一型糖尿病の発生を防止することができず加速させる（非特許文献５、６）。

文献によると、血液中のマクロファージ炎症性タンパク質＿１βの数値は、糖尿病及び心臓血管疾患と正相関を有する。よって、発明者は、糖尿病患者の膵島の炎症破壊に対し、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１を抑制することで、膵臓を保護し炎症を改善し、インシュリンの分泌を維持し、血糖をコントロールする新しい治療方法を発展させる。

Lodi P.J. 等, Science 263: 1762-1767, 1994 Tatara, Y. 等, J Mol Cell Cardiol 47:104-111,2009 Mirabelli-Badenier, M. 等, Thromb Haemost 105:409-420, 2011 Cameron MJ等, J Immunol 165:1102-1110, 2000 Gonzalez P等, Genes Immun 2:191-195, 2001 Simeoni E等, Eur Heart J 25:1438-1446, 2004

本発明の目的は、一型及び二型糖尿病を有する動物モデルで、（例えば単クローン抗体等の方法により、）直接に体内のマクロファージ炎症性タンパク質−１βを抑制することである。これにより、膵臓を保護し、インシュリンの分泌を維持し、血糖値の継続的な上昇を防止する効果を有する。

本発明は、糖尿病患者の膵臓機能を保護する医薬組成物を製造するのに用いられるマクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤の使用方法である。医薬組成物は、糖尿病患者の膵臓機能を保護し、糖尿病患者の膵島細胞の損傷を防ぐことを含む。
また、医薬組成物は、糖尿病患者のインシュリン分泌を維持するのに用いられる。
また、医薬組成物は、糖尿病患者の血糖値の上昇を防止するのに用いられる。

本発明の実施の態様によると、マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βの生物活性を低減または抑制する。
マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βに対して特異的な結合性を有するリガンド化合物である。
マクロファージ炎症性タンパク質＿１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質＿１βに反応する抗体または拮抗剤である。

本発明の実施の態様によると、マクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する抗体は単クローン抗体または多クローン抗体である。
本発明の他の実施の態様によると、マクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する抗体は単クローン抗体、または、マクロファージ炎症性タンパク質−１βの少なくともペプチド類フラグメントと結合する抗体フラグメントである。
発明の他の実施の態様によると、マクロファージ炎症性タンパク質＿１βのペプチド類フラグメントは、アミノ酸配列４６ＳＦＶＭＤＹＹＥＴ５４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、または６２ＡＶＶＦＬＴＫＲＧＲＱＩＣ７４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む。

ＭＩＰ−１β抑制剤が一型糖尿病マウス膵臓に対する保護作用を示す図である。単クローン抗体（ｍＡｂ）で体内のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの活性を抑制し、血液中のインシュリン量を効果的に上昇させることが示されている。 一型糖尿病動物モデルの膵臓組織がストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受け炎症が発生する状態を切片及び染色後に観察する結果を示す図である。赤マーカーは膵島細胞である。 正常のマウス（非−ＤＭ対照組）及び二型糖尿病を有するマウスの血液中のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βタンパクの含有量を示す図である。 一型糖尿病動物モデルの膵臓組織がストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受け炎症が発生する状態を切片染色観察する結果を示す図である。赤マーカーは膵島細胞である。 ウェスタンブロット法(Western blot)と統計学分析を示す図である。マウスの膵臓の中のＩＬ６及びＩＬ８の含量（ｎ＝３）を測定し、＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１は正常の対照組マウスと比較した結果であり、＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１は抗体処理されていないＤＭマウスと比較した結果である。 異なるＳＴＺ（または）で処理する間、培養液の中のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの濃度が膵島細胞（ＮＩＴ−１）ＮＩＴ−１の細胞増殖にしたがって増加する状況を示す。 ＭＴＴにより異なる容量のＳＴＺ（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）が膵島細胞（ＮＩＴ−１細胞）に対する毒性の評価を示す図である。単クローン抗体（ｍＡｂ）でＳＴＺによる損害を低減し、ＮＩＴ−１細胞の増殖（ｎ＝３）を回復させる。 ＮＩＴ−１細胞培養上澄み液中のインシュリンの分泌量（ｎ＝６）を示す図である。＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１は、いずれの処理もされていない対照組ＮＩＴ−１の細胞に比べ著しい差異を有し、＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１は、同じ濃度のＳＴＺで処理されたＮＩＴ−１細胞に比べ著しい差異を有する。

本明細書中の「マクロファージ炎症性タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）抑制剤」の意味は、ＭＩＰ−１βタンパク質含量を減少させる、及び／又は、ＭＩＰ−１βタンパク質の少なくとも一つの活性を低下させる化合物をいう。本発明の実施形態では、ＭＩＰ−１β抑制剤化合物は、ＭＩＰ−１βタンパク質の少なくとも一つの活性を１０％、２５％、５０％、７５％またはそれ以上低下させることができる。

本発明の実施形態によると、ＭＩＰ−１β抑制剤化合物は、ＭＩＰ−１βタンパク質の発現量を低減することで、膵臓を保護し血糖の上昇を防止する。例えば、ＭＩＰ−１βを標的とするｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイムを使用し、細胞内のＭＩＰ−１βの遺伝子発現を抑制することができる。また、ＭＩＰ−１βタンパク質をコーディングする遺伝子転写を調節すること、または、対応するｍＲＮＡを不安定となるようにすることでＭＩＰ−１βタンパク質の発現量を減少させることができる。

本発明の実施形態によると、ＭＩＰ−１β抑制剤化合物は、ＭＩＰ−１βタンパク質と結合することにより、直接または間接にＭＩＰ−１βタンパク質の生物活性を抑制し、膵臓を保護し、血糖の上昇を防止する。例えば、本発明の実施例によると、ＭＩＰ−１βに反応する抗体とＭＩＰ−１βタンパクを競争させ、細胞表面上の受容体に結合させることで、ＭＩＰ−１βタンパク質の生物活性を抑制することができる。抗体は、全長の単クローン抗体、多クローン抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、及び、抗体フラグメントを含む。

本明細書中の「抗体」の意味は、特定の抗原と特異的に結合する能力を有する免疫グロブリン分子またはそのフラグメントを指す。抗体フラグメントは、抗体全長の一部を含み、好ましくは、抗体の抗原結合領域または可変領域である。
抗体フラグメントは、以下の例を含む。
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）３、Ｆｖ（代表的なのは抗体のシングルハンドルのＶＬ及びＶＨの機能領域である）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｄｓＦｖ、Ｆｄフラグメント（代表的なのはＶＨ及びＣＨ１機能領域である）、及びｄＡｂフラグメント（代表的なのはＶＨ機能領域である）；
ＶＨ、ＶＬ、及びＶｈＨ機能領域；
微抗体(minibodies)、二重特異性抗体(diabodies)、三重特異性抗体(triabodies)、四重特異性抗体(tetrabodies)、及びkappa抗体(参考文献、Ill等, Protein Eng 10: 949-57, 1997)；
駱駝ＩｇＧ；
一つまたは複数の単離されたＣＤＲｓまたは一つの機能性パラトープ（ｐａｒａｔｏｐｅ）により形成される多特異性抗体フラグメント、その中で、単離された、または、抗原結合残基またはペプチドは、互いに結合またはリンキングし、機能性の抗体フラグメントを形成する。

本発明の実施形態によると、ＭＩＰ−１β抑制剤はＭＩＰ−１β?タンパクと特異的に結合する単クローン抗体である。
本発明の一つの詳細な実施形態によると、ＭＩＰ−１βに反応する単クローン抗体はＭＩＰ−１βタンパクの構造上の主な機能性部位と結合する。
本発明の実施例によると、ＭＩＰ−１β抑制剤（例えば、ＭＩＰ−１βに反応する単クローン抗体）は、ＭＩＰ−１βタンパクのアミノ酸配列位置６〜５４：ＳＦＶＭＤＹＹＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、または、ＭＩＰ−１βタンパクのアミノ酸配列位置６２〜７４：ＡＶＶＦＬＴＫＲＧＲＱＩＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む抗原決定基と結合することができる。

本発明の実施例によると、抗体はヒト化または完全ヒト抗体である。
本発明の医薬組成物によると、少なくとも一つのＭＩＰ−１β抑制剤または一つまたは複数の生理上受けられる担体、希釈剤、または賦形剤を含む。選ばれた投薬経路によって、適切な医薬組成物の形を調合することができる。経口製剤の場合、錠剤、カプセル、粉末などを含み、消化器を経由しない製剤の場合、皮下、筋肉、または腹膜内注射液、及び、投薬する前に生理緩衝溶液と組み合わせた冷凍乾燥粉末などを含む。

本発明のほかの特徴及び長所は、以下の実施例の中で例示して説明する。下記の実施例は補助説明のためであり、本発明の範囲を制限するものではない。

［実施例一：ＭＩＰ−１β抑制剤による一型糖尿病動物（ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受けた糖尿病マウスモデル）の膵臓保護及び血糖値上昇の防止］
生体実験期間において実験マウスの血糖濃度を監視及び測定する。結果を表１に示す。ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受けた一型糖尿病マウスモデルは、足部血管閉塞手術（ＯＰ）を行ったか否かに関わらず、血糖値の増加が著しい。しかし、ＭＩＰ−１β中和抗体を４週間注射したマウスは、足部血管閉塞手術（ＯＰ）を行ったか否かに関わらず、血糖値が上昇せず、下降する傾向を有することがわかる。

図１の血清インシュリン測定結果が示すように、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受けた一型糖尿病マウスは、正常の対照組マウスに比べ、血清インシュリン濃度が著しく下降している。血糖値の高い糖尿病動物において、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの単クローン抗体（ｍＡｂ）を４週間注射した後、処理を受けてない糖尿病マウスに比べ、血液中のインシュリンの量を効果的に高めることができ、血糖値をコントロールし、血糖値の濃度が再び上昇させない。

また、切片かつ染色により膵臓組織の炎症状態を観察した結果、血糖値の高い糖尿病動物（ＤＭ組）では、膵臓中の膵島細胞は損害により数が著しく減少する（赤色のマーカーは膵島細胞である）。単クローン抗体（ｍＡｂ）を注射することで体内のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βに対抗する糖尿病動物（ＤＭ＋ｍＡｂ組）では、膵島細胞が炎症により損害することを防止し、膵島細胞の形を部分的に維持することができ、膵臓を保護する効果を達成する（図２）。

［実施例二：ＭＩＰ−１β抑制剤による二型糖尿病動物（Ｌｅｐｒｄｂ／ｄｂ マウスモデル）に対する膵臓保護及び血糖値上昇の防止］
図３に示すように、正常の動物に比べ二型糖尿病動物の血液中のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの量が高い。血糖値の高い動物の中で、足部血管閉塞手術（ＯＰ）を行ったか否かに関わらず、単クローン抗体（ｍＡｂ）を注射し、体内のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βに対抗することで、血糖値が再び上昇しないよう有効にコントロールすることができる（表２）。

さらに、切片かつ染色により膵臓組織の炎症状態を観察した結果、糖尿病マウスの膵島細胞の損傷が著しい（赤色のマーカーは膵島細胞である）。血糖値の高い二型糖尿病マウスでは、単クローン抗体（ｍＡｂ）を注射し、体内のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βに対抗した後、部分的に膵島細胞の形を回復させることができる。マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１β中和抗体で膵臓を保護し、膵島細胞が破壊されることを防止し、膵臓がインシュリンを分泌し、血糖を調節する正常な機能を維持することができることを示す。
上述の結果が示すように、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを抑制する機能により、膵臓を保護する効果が生じる。

［実施例三：ＭＩＰ−１β抑制剤が膵島細胞の損傷（ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の誘導を受けた膵臓細胞損傷モデル）を防止することに対する保護作用］
ＭＩＰ−１β抑制剤の保護作用をさらに調べるために、ウェスタンブロット法(Western blotting)で膵臓中の炎症性タンパク質の含有量を測定する。図５の結果が示すように、血糖値の高い糖尿病動物では、単クローン抗体（ｍＡｂ）を注射し、体内のマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βに対抗することで、膵臓（膵島）の炎症性物質を有効に抑制することができる。例えば、インターロイキン−６（ＩＬ−６）及びインターロイキン−８（ＩＬ−８）の発現。よって、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを抑制することで、膵島細胞を保護することができ、ストレプトゾトシンがそれに対する炎症反応を低減することができる。

インビトロの細胞研究も行い、ＭＩＰ−１β抑制剤が体内の膵島細胞の損傷を防止する効果を模擬した。ＮＩＴ−１細胞を９６−孔培養皿に接種し、一晩インキュベートする。接種濃度は１×１０⁵細胞／孔とする。前述の前培養を行ってから、ＳＴＺ（０、０．７５、１．５、３、６ｍＭ）を入れ、細胞とともに２４時間培養する。ＳＴＺがＮＩＴ−１細胞に対する細胞毒性をＭＴＴで測定する。ＮＩＴ−１細胞をＳＴＺにより２４時間処理し、無添加、低使用量（０．３μｇ／ｍｌ）、または高使用量（３０μｇ／ｍｌ）のＭＩＰ−１β抗体(Ｒ＆Ｄ system)で４時間処理する。ＭＴＴによりＮＩＴ−１細胞の増殖状況を分析評価する。結果を図６に示す。

図６Ａのデータが示すように、ＮＩＴ−１細胞研究において、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）は、膵島細胞（ＮＩＴ−１）がマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを生成するよう膵島細胞（ＮＩＴ−１）を刺激し、培養液の中においてストレプトゾトシンの濃度の増加にしたがってマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの濃度が増加する。マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βの濃度が増加するこの現象は薬−単クローン抗体（ｍＡｂ）を投与することによって抑制される。

図６Ｂのデータが示すように、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）が膵島細胞（ＮＩＴ−１）に対する毒性は、ストレプトゾトシンの使用量の増加に従って増加する。単クローン抗体（ｍＡｂ）で、細胞が生成するマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを対抗することで、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）が膵島細胞（ＮＩＴ−１）に対する数の抑制及び破壊作用を直接かつ有効に改善することができる。よって、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを抑制することで、直接に膵島細胞を保護することができ、ストレプトゾトシンが膵島細胞に対する傷害を軽減することができる。

細胞研究の結果が示すように、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）は膵島細胞（ＮＩＴ−１）がインシュリン（ｉｎｓｕｌｉｎ）を分泌することを抑制する。この抑制作用は、使用量の増加に従って増加する。単クローン抗体（ｍＡｂ）で、細胞が生成するマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを対抗することで、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ １．５，ＳＴＺ ３）によるインシュリンの分泌作用を有効に改善することができる。よって、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１βを抑制することで、直接に膵島細胞を保護し、ストレプトゾトシンがそれに対する傷害を低減し、インシュリンの分泌を回復させることができる（図７）。

上述の実施例の結果によると、マクロファージ炎症性タンパク質−１βを直接抑制し（例えば、単クローン抗体または拮抗剤などの方法）、膵臓機能を保護し、膵島細胞の炎症を低減することで、インシュリンの正常な分泌を維持し、糖尿病感謝の血糖をコントロールすることができる。

Claims (10)

1. 糖尿病患者の膵臓機能を保護する医薬組成物を製造するのに用いられるマクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤の使用方法であって、
   前記医薬組成物は、糖尿病患者の膵臓機能を保護し、糖尿病患者の膵島細胞の損傷を防ぐことを含むことを特徴とする、マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤の使用方法。
2. 前記医薬組成物は、糖尿病患者のインシュリン分泌を維持するのに用いられることを特徴とする、請求項１に記載の使用方法。
3. 前記医薬組成物は、糖尿病患者の血糖値の上昇を防止するのに用いられることを特徴とする、請求項２に記載の使用方法。
4. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質＿１βの生物活性を低減または抑制することを特徴とする、請求項１に記載の使用方法。
5. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βに対して特異的な結合性を有するリガンド化合物であることを特徴とする、請求項１または４に記載の使用方法。
6. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質＿１βに反応する抗体であることを特徴とする、請求項５に記載の使用方法。
7. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１β抑制剤は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βまたはそのフラグメントに対して特異的に結合しマクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する単クローン抗体であることを特徴とする、請求項６に記載の使用方法。
8. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する単クローン抗体は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βの構造のメイン機能性部位と結合することを特徴とする、請求項７に記載の使用方法。
9. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する単クローン抗体は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βの４６〜５４：ＳＦＶＭＤＹＹＥＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）に位置するアミノ酸配列を含むペプチド類フラグメントと結合することを特徴とする請求項７または８に記載の使用方法。
10. 前記マクロファージ炎症性タンパク質−１βに反応する単クローン抗体は、マクロファージ炎症性タンパク質−１βの６２〜７４：ＡＶＶＦＬＴＫＲＧＲＱＩＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）に位置するアミノ酸配列を含むペプチド類フラグメントと結合することを特徴とする請求項７または８に記載の使用方法。