CN113271964A

CN113271964A - 化脓性汗腺炎治疗中使用的抗cd40抗体

Info

Publication number: CN113271964A
Application number: CN202080008145.XA
Authority: CN
Inventors: P·埃斯比; C·洛斯切; L·罗斯; J·拉什; G·维佐利克
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2019-01-11
Filing date: 2020-01-09
Publication date: 2021-08-17
Also published as: CL2021001829A1; KR20210114964A; EP3908310A1; IL284338A; AU2020205839A1; JP2021181439A; TW202033558A; MX2021008305A; US20220098315A1; JP2021506953A; CA3125886A1; WO2020144605A1; BR112021013174A2

Abstract

本披露涉及通过使用CD40拮抗剂，例如抗CD40抗体，来治疗化脓性汗腺炎的方法、治疗方案、用途、试剂盒和疗法。

Description

化脓性汗腺炎治疗中使用的抗CD40抗体

技术领域

本披露涉及通过使用CD40拮抗剂，特别是抗CD40抗体，例如CFZ533(iscalimab)，来治疗化脓性汗腺炎的方法、治疗方案、用途、试剂盒和疗法。

背景技术

化脓性汗腺炎(HS)，也被称为“反常性痤疮”或“Maladie de Verneuilh”，是一种慢性、复发性和使人衰弱的炎症性皮肤病症，通常表现在带有顶泌腺的身体部分的深部、炎性、疼痛性病变。侵犯最常见的区域是腋窝、腹股沟和肛门生殖器区域(Jemec 2012年；Fimmel和Zouboulis 2010年)。

目前，HS被认为是毛囊皮脂的一种炎性疾病，其具有发生在遗传易感个体中的潜在的免疫系统失衡(Kelly等人2014)。虽然HS被认为是主要由毛囊阻塞引起的疾病，但HS是一种炎性皮肤疾病，其特征在于炎性病变中存在大量中性粒细胞和巨噬细胞(Lima等人2016，Shah等人2017)。虽然HS病理生理学仍很未知，但在更大的研究中已描述了肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断的益处(Kimball等人2016)。

抗IL1治疗(Tzanetakou等人2016)和阻断IL-17A(Thorlacius等人2017，Schuch等人2018，Giuseppe等人2018，

等人2018)或抗IL-23治疗(Sharon等人2012，Blok等人2016)的功效的证据在较小的研究和/或病例报告中也被观察到。最近，已经描述了使用口服PDE4抑制剂阿普斯特(apremilast)(Weber等人2017)或抗补体5a化合物(Kanni等人2018)的研究方法。

所述疾病在青春期后开始，且女性比男性更常见(3:1)。危险因素包括肥胖和吸烟。尽管流行病学患病率估计值相差很大(0.03％-4.3％；Jemec 2012，Jemec和Kimball2015)，并且存在地理差异，但科学界普遍接受的患病率约为0.1％-1％(Garg等人2018)。

HS的临床表现是异质性的，但是所述疾病倾向于表现为慢性复发性、深部、疼痛、炎性皮肤病变，主要是炎性结节和脓肿，导致可能的引流和化脓。疾病进展过程中，窦道的形成和成瘘使炎症病变复杂化，并可能导致肥厚性瘢痕形成，可能对功能使用产生影响。

HS与疼痛、伤口上的恶臭分泌物和瘢痕形成有关，并且确实频繁具有破坏性的社会心理影响。HS是一种严重地使人衰弱的疾病，对生活质量(QoL)产生很大的负面影响，多项研究证实，其影响要大于其他皮肤病可见的影响(Deckers和Kimball 2016)。HS患者还经常患有抑郁症、社交隔离、性健康受损，并且可能难以履行其工作职责(Esmann和Jemec2011，Fimmel和Zouboulis 2010，Janse等人2017)。

HS很难治疗。欧洲官方治疗指南仅在2015年制定，建议应为患者提供辅助、药物和手术疗法(Zouboulis等人2015)。

虽然局部抗生素可用于轻度病例，但中度至重度HS优选长期的多种全身性抗生素疗法(通常用四环素或克林霉素和利福平的组合)，随后可通过慢性抗生素治疗维持数月甚至数年(Bettoli等人2016，Dessinioti等人2016，Zouboulis等人2015)。

但是，众所周知，HS是一种慢性炎性疾病，而不是传染性疾病(Jemec 2012)。因此，抗炎药是相比抗生素可替代并且可能更合适的方法，或者可以是抗生素的补充。随着时间的流逝，慢性、复发性、治疗不充分的炎症后果是不可逆的纤维化，表现为通常对药物疗法无反应的瘢痕形成和通道或窦道。一旦发生持久的解剖变化，减少纤维化组织体积并改进受影响皮肤区域功能的唯一治疗选择是手术(Andersen和Jemec 2017)。未来的治疗目标之一应该是减少持续的瘢痕形成并避免手术，这可以通过预防炎性病变来实现，或者可能需要特定的治疗方法。

2015年，针对可溶性和膜结合TNF-α的重组人单克隆免疫球蛋白G1(IgG1)抗体阿达木单抗

获得了治疗中度至重度HS的监管批准。阿达木单抗的功效已经被观察到，分别根据PIONEER I和II研究中报告的，HiSCR(化脓性汗腺炎临床应答)的应答率超过安慰剂16％(阿达木单抗41.8％与安慰剂26％)和31％(阿达木单抗58.9％与安慰剂27.6％)(Kimball等人2016)。正如在阿达木单抗标签中所捕获的那样，阿达木单抗与包括肺结核，侵袭性真菌感染和其他机会性感染在内的严重感染的安全风险增加相关。使用阿达木单抗还报告了恶性肿瘤的发生率增加。

因此，对于有效减轻炎症同时对患有中度至重度HS的患者具有有利的安全性的全身疗法存在未满足的需求。

CFZ533(iscalimab)是针对人CD40的人单克隆抗体。它属于IgG1同种型亚类并包含Fc沉默突变(N297A)，该突变消除FcγR结合和相关的效应子功能(像ADCC和CDC)。CFZ533在US 8828396和US 9221913中公开，将这两个文献通过引用并入本文。

发明内容

虽然尚不完全了解HS的发病机理，但这种慢性皮肤疾病的特征在于发炎的HS病变中大量中性粒细胞和巨噬细胞。中性粒细胞和巨噬细胞似乎是HS致病机制的关键驱动因子(Shah等人2017，Lima等人2016)。CD40在HS病变皮肤活检中大量表达(主要由巨噬细胞和B细胞表达)。CD40L由HS病变皮肤活检中的T细胞表达。因此，任何能够抑制CD40-CD40L信号传导的拮抗剂(如具有沉默的ADCC活性的抗CD40抗体或其片段)都适用于治疗HS。

根据本发明的第一方面，提供了用于治疗化脓性汗腺炎的CD40拮抗剂。

在优选的实施例中，所述CD40拮抗剂是抗CD40抗体。

在第一方面的另一个实施例中，所述抗CD40抗体或其片段是具有沉默的ADCC活性的抗CD40抗体。

该抗体可以选自下组，该组由以下组成：

a.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域；

b.抗CD40抗体，其包含含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的高变区的免疫球蛋白VH结构域以及含有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的高变区的免疫球蛋白VL结构域；

c.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:13的Fc区；

d.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区；以及

e.抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区。

抗体可以包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

所述抗体还可以选自由以下组成的组：mAb1(也称为CFZ533或iscalimab)、mAb2和ASKP1240。

在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含治疗有效量的用于根据第一方面使用的抗体和一种或多种药学上可接受的载体。

在一个实施例中，施用途径是皮下或静脉内、或皮下或静脉内的组合施用根据第一方面的抗体。

剂量可以是约3mg至约30mg活性成分/千克人受试者。可以每周一次、每两周一次或每四周一次给予剂量。

在一个实施例中，剂量是约10mg活性成分/千克人受试者。

在一个实施例中，剂量是约150mg至约600mg活性成分。可以每周一次、每两周一次或每四周一次给予剂量。

在一个实施例中，剂量是约300mg活性成分。

在一个优选的实施例中，剂量是150mg活性成分。在另一个优选的实施例中，剂量是300mg活性成分。在又另一个优选的实施例中，剂量是600mg活性成分。

在一个实施例中，通过负荷给药和维持给药来施用抗体。

在一个实施例中，经由皮下注射第一剂量来施用负荷给药，并且经由皮下注射第二剂量来施用维持给药。第一剂量可以与第二剂量相同或高于第二剂量。

在一个实施例中，第一剂量在约150mg与约600mg活性成分之间，如约300mg活性成分，并且第二剂量在约150mg与约600mg活性成分之间，如约300mg活性成分。

在一个实施例中，第一剂量是150mg、300mg或600mg活性成分，并且第二剂量是150mg、300mg或600mg活性成分。

在一个实施例中，负荷给药包括至少两次皮下注射，并且维持给药由每周一次(Q1W)、每两周一次(Q2W)或每月一次(Q4W)皮下注射组成。在一个实施例中，负荷给药由两次皮下注射组成。在另一个实施例中，负荷给药由三次皮下注射组成。

在一个实施例中，负荷给药的多次皮下注射具有不同的剂量。在另一个实施例中，负荷给药的多次皮下注射具有相同的剂量。

所述HS患者可以根据以下标准之一选择：

所述患者患有中度至重度HS；

所述患者是成年人；

所述患者是青少年；

在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者具有HS-PGA评分≥3；

在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者具有至少3个炎性病变；或

在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者没有因HS引起的广泛瘢痕形成(<10个瘘管)。

在一个实施例中，到治疗的第16周，所述HS患者实现以下至少一项：

简化的HiSCR；

HS红肿块减少；

NRS30；

通过DLQI测量的减少≤6；和/或

DLQI的改进。

在一个实施例中，到治疗的第16周，至少40％的所述患者实现简化的HiSCR；或至少25％的所述患者实现NRS30应答；或少于15％的所述患者经历HS红肿块。

在一个实施例中，所述患者最早在所述CD40拮抗剂的第一剂量后一周具有以下中的至少一种：

通过VAS或NRS测量的疼痛迅速减轻，和

使用标准hsCRP测定法测量的CRP迅速降低。

在一个实施例中，所述患者在治疗结束后3个月实现持续应答，如通过炎性病变计数、HS临床应答(HiSCR)、数值评定量表(NRS)、改良的缝匠肌HS评分、化脓性汗腺炎-医师整体评估(HS-PGA)或皮肤病生活质量指数(DLQI)所测量的。

在一个实施例中，所述患者在治疗结束后3个月实现持续应答，如通过简化的HiSCR(sHiSCR)所测量的。

根据第二方面，提供了治疗人受试者中的HS的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效剂量的CD40拮抗剂。

在优选的实施例中，所述CD40拮抗剂是抗CD40抗体。

在一个实施例中，该抗体选自下组，该组由以下组成：

e.抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区。

在一个实施例中，抗体可以包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

在一个实施例中，抗体与一种或多种药学上可接受的载体一起施用。

在一个实施例中，皮下或静脉内、或皮下或静脉内的组合施用抗体。

在一个实施例中，以约3mg至约30mg活性成分/千克人受试者的剂量施用抗体。

在一个实施例中，剂量是约10mg活性成分/千克人受试者。

在一个实施例中，以约150mg至约600mg活性成分(如300mg活性成分)的剂量施用抗体。

在一个实施例中，以负荷给药和维持给药施用抗体。

在一个实施例中，经由皮下注射第一剂量来施用负荷给药，并且经由皮下注射第二剂量来施用维持给药。

第一剂量可以与第二剂量相同或高于第二剂量。

在一个实施例中，负荷给药包括至少两次皮下注射，并且维持给药由每周一次(Q1W)、每两周一次(Q2W)或每月一次(Q4W)皮下注射组成。

在一个实施例中，负荷给药由两次皮下注射组成。在另一个实施例中，负荷给药由三次皮下注射组成。

根据第三方面，提供了包含抗CD40抗体、缓冲剂、稳定剂和增溶剂的液体药物组合物以及用于将抗CD40抗体皮下施用至患有HS的患者的装置用于制造治疗HS的药物的用途，其中将该抗CD40抗体：

a.以第一负荷给药皮下施用；并且

b.此后，以第二维持给药皮下施用，其中所述抗CD40抗体选自由以下组成的组：

i.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域；

ii.抗CD40抗体，其包含含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的高变区的免疫球蛋白VH结构域以及含有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的高变区的免疫球蛋白VL结构域；

iii.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:13的Fc区；

iv.抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区；

v.抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区；以及

vi.抗CD40抗体，其包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

本发明进一步涉及CD40拮抗剂与一种或多种另外的治疗剂的组合，用于需要这种治疗和/或预防的患者的HS治疗或预防。

附图说明

图1是根据临床试验设计的给药方案的图示。

图2A、图2B和图2C是皮下给予的活性成分的可能每周一次负荷剂量，然后是活性成分的每两周一次的维持方案(皮下)的图示。

图3是显示体外CFZ533抑制rCD154诱导的途径激活的图。

图4是显示体外CFZ533最小刺激活性的图。

图5是显示CFZ533在体外不介导细胞耗竭的图。

图6是各个RI-1B细胞的代表性图像，其显示被recCD154或CFZ533结合后CD40受体的内化。

图7是显示在非人灵长类动物中CFZ533的药物代谢动力学和药物效应动力学(靶标接合；无B细胞耗竭)特性的图。

图8A是非人灵长类动物中PK/PD和疫苗接种研究的实验设计示意图。图8B是显示抗KLH IgG(免疫应答)和血浆CFZ533水平(药物代谢动力学)的图。图8C显示了生发中心的组织学分析结果。

图9A是显示在不同组织类型中的CD40表达的图，且图9B是显示在不同组织类型中的CD40L表达的图。

图10显示了组织学结果。

图11是表示CFZ533的预测血浆浓度-时间曲线的图。

具体实施方式

已经显示出CD40-CD154(CD154是CD40配体，CD40L)途径可能影响皮肤炎症(Mehling等人2001)。

先前在HS病变中也观察到B细胞的存在和上调(Hunger等人，2008；van der Zee等人，2012)。与病变周围和健康皮肤相比，在HS病变中，特别是在慢性病变(相对于早期阶段)中检测到B细胞和浆细胞(van der Zee)。在一些样品中，在慢性病变中检测到带有CD20+B细胞的淋巴滤泡。在由诺华公司(CJM112X2202)进行的一项涉及中度至重度HS受试者的近期研究中，组织学样品显示病变皮肤以及病变组织中多个生发中心中有大量B细胞浸润。在同一项研究中，来自皮肤活检的基因表达数据中的细胞类型特征不仅显示出清晰的B细胞特征，而且还显示了基于转录组学的巨噬细胞特征。与这些观察结果一致，在2018年于鹿特丹举行的欧洲HS基金会会议上传达了HS患者循环B细胞亚群的异常和上调(Musilova J，2018)。

另外，也许更重要的是，在慢性HS病变皮肤中大量发现了巨噬细胞(Shah等人2017)。最近，这些巨噬细胞被鉴定为潜在的M2 CD163+巨噬细胞(Byrd等人2018)。在CJM112X2202 HS样品中，CD40在HS病变中存在的巨噬细胞和B细胞上表达，并在HS病变皮肤活检中大量表达，而CD40L在HS病变皮肤活检中由T细胞表达。皮肤活检证实了在转录水平上具有特征的途径参与。因此，iscalimab可能是针对HS的首个治疗，该治疗靶向HS中最近观察到的巨噬细胞和B细胞病理生理学。

因此，任何能够阻断CD40-CD154信号传导的CD40途径拮抗剂(如具有沉默的ADCC活性的抗CD40抗体)都适用于治疗HS。

不希望受理论束缚，诸位发明人已经确定在维持方案期间至少40μg/mL的CFZ533抗体的持续血浆浓度对于阻断靶组织中的CD40-CD40L途径是必需的。而且，由于CFZ533进行靶标介导的分布(与靶标转换和表达相关)以及HS患者在体内呈现高CD40表达，因此在治疗开始时需要负荷方案以使CD40受体在这些患者中在其中CD40水平增加的条件下完全饱和，这在治疗开始时需要更高剂量或更频繁的方案。因此，负荷给药方案在治疗开始时(2至3周)提供CD40受体的快速饱和，然后维持给药方案在整个治疗期间提供至少40μg/mL或至少100μg/mL的持续血浆浓度，在其中受影响组织中的CD40表达增强(病症的严重程度)的情况下，考虑治疗效果。

适当的剂量将根据以下而变化：例如使用的特定CD40途径拮抗剂，例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533或iscalimab)、mAb2、ASKP1240)或者抗CD40L抗体(例如BIIB063)或其抗原结合片段，治疗的受试者，施用方式和所治疗病症的性质和严重程度，以及患者所经历的先前治疗的性质。最终，主治医疗服务人员将决定治疗各名个体患者的CD40途径拮抗剂的量。在一些实施例中，主治医疗服务人员可施用低剂量或甚至单一剂量的CD40途径拮抗剂且观察患者的应答。在其他实施例中，施用至患者的CD40途径拮抗剂的一个或多个初始剂量较高，接着向下调节直至出现复发迹象为止。可施用较大剂量的CD40途径拮抗剂，直至患者获得最佳治疗效果为止，且该剂量一般不会进一步增加。

在一个实施例中，本披露内容涉及根据如上所述的披露内容的第一、第二或第三方面中任一项所述的使用的抗CD40抗体或其抗原结合片段，其中调节所述抗-CD40抗体或其抗原结合片段(例如，mAb1，也称为CFZ533或iscalimab、mAb2或ASKP1240)的负荷剂量和维持剂量，以使抗体的血浆或血清浓度至少为40μg/mL。

在实践本公开的一些治疗方法或用途时，将治疗有效量的CD40途径拮抗剂，例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)或者抗CD40L抗体或其抗原结合片段施用至患者，例如哺乳动物(例如人)。虽然应当理解所公开的方法提供了使用CD40途径拮抗剂(例如，mAb1/CFZ533、mAb2、ASKP1240)治疗HS患者，但这并不排除如果患者最终用CD40途径拮抗剂治疗，则这种CD40途径拮抗剂疗法必然是单一疗法。实际上，如果选择患者进行CD40途径拮抗剂治疗，那么CD40途径拮抗剂(例如，mAb1/CFZ533、mAb2、ASKP1240)可以根据本公开的方法单独施用或与其他药剂和疗法组合施用。

应当理解，方案改变可能适合于某些HS患者，例如对使用的CD40途径拮抗剂(例如，抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)或抗CD40L抗体或其抗原结合片段)的治疗显示出不充分应答的患者。因此，施用(例如mAb1/CFZ533或mAb2)可能比每月给药更频繁，例如每两周一次给药(每隔两周)或每周一次给药。

一些患者可以受益于负荷方案(例如，每周一次施用持续数周[例如1至4周，例如在第0周、第1周、第2周和/或第3周给药，如2周，在第0周和第1周负荷给药方案])然后是维持方案，例如在第3周或第4周开始，其中CFZ533可以每周、每两周或每4周一次施用持续数周。

例如，针对mAb1/CFZ533或mAb2的适当方案可以是每周一次持续数周[例如1至4周，例如在第0周、第1周、第2周和第3周给药]，然后是每月一次的维持方案。

在另一个实例中，针对mAb1/CFZ533或mAb2的适当方案是每周一次持续数周(例如2至8周，如3周，例如在第0周、第1周、第2周给药)，然后是每两周一次的维持方案。

还应当理解，施用(例如对于mAb1/CFZ533或mAb2的施用)可以不如每月给药那么频繁，例如，每6周、每8周(每两个月)、每季度(每三个月)等给药。

应当理解，基于疾病的严重程度，剂量递增可能适合于某些HS患者，例如对使用的CD40途径拮抗剂(例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)，或者抗CD40L抗体或其抗原结合片段)的治疗显示出不充分应答的患者。因此，皮下(s.c.)剂量(负荷或维持剂量)可大于皮下约150mg至约900mg，例如约75mg、约100mg、约125mg、约175mg、约200mg、约250mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg等；类似地，静脉内(i.v.)剂量可大于约10mg/kg，例如约11mg/kg、12mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg等。还应当理解，剂量降低还可能适合于某些HS患者，例如对CD40途径拮抗剂(例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)，或抗CD40L抗体或其抗原结合片段)的治疗显示不良事件或不良应答的患者。因此，CD40途径拮抗剂(例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)，或抗CD40L抗体或其抗原结合片段)的剂量可以少于皮下约150mg至约900mg，例如约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约175mg、约200mg、约250mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg等。

在一些实施例中，可以按皮下递送的600mg的初始剂量向患者施用CD40拮抗剂，例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)或抗CD40L抗体或其抗原结合片段，然后如果需要，可以如医师所确定的将剂量调节至皮下递送的150mg或300mg。

在一些实施例中，可以按静脉内递送的10mg/kg的初始剂量向患者施用CD40拮抗剂，例如抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1(本文也称为CFZ533)、mAb2、ASKP1240)或抗CD40L抗体或其抗原结合片段，然后如果需要，可以如医师所确定的将剂量调节至皮下递送的150mg或300mg。

在具体实施例中，在第1天(D1)、第15天(D15)、D29、D57、D85、D99、D113和D141皮下施用3mg/kg CFZ533。

在另一个具体实施例中，在D1、D15、D29、D57、D85、D99、D113和D141静脉内施用10mg/kg CFZ533。

在又另一个具体实施例中，每周一次(Q1W)皮下施用包括四个单位剂量的600mgCFZ533的负荷剂量，即在D1、D8、D15和D22皮下施用600mg CFZ533，然后每周一次(Q1W)皮下施用包括300mg单位剂量的维持剂量，即从D29至D85每周一次皮下施用300mg CFZ533。

在另一个具体实施例中，在第1天静脉内施用一次包括一个剂量的10mg CFZ533/kg受试者的负荷剂量，然后每周一次(Q1W)皮下施用包括300mg单位剂量的维持剂量，即从D8至D85每周一次皮下施用300mg CFZ533。

CFZ533可以每季度、每月、每周或每两周施用一次，例如通过皮下注射，以约75mg至约600mg或约150mg至约300mg的剂量皮下施用，以约75mg、约150mg、约300mg、约450mg或约600mg的单位剂量施用。

可以通过皮下注射每周一次施用CFZ533，负荷剂量为约150mg至约600mg，其中负荷剂量在1至4周内施用。

负荷剂量也可以是约10mg/kg至约30mg/kg的静脉内施用。而且，可以每周或每两周一次皮下施用负荷剂量，剂量为约150mg、300mg和/或600mg的活性成分。

优选地进行CFZ533的负荷方案或给药(例如150/300/600mg，每周或每两周一次)，随后进行维持方案或给药，每周、每两周或每月(每四周)施用一次。优选地维持剂量为每周或每两周一次皮下300mg，或每两周一次600mg或每4周600mg。

抗CD40抗体或其抗原结合片段可以是CFZ533、其功能衍生物或其生物仿制药。

如本文所定义的，“单位剂量”是指皮下剂量，其可包含在约75mg至900mg之间，例如约150mg至约600mg、例如约150mg至约600mg、例如约300mg至约600mg、或例如约150mg至约300mg。例如，单位皮下剂量是约75mg、约150mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg。

定义

如本文所使用的，CD40是指分化簇40，也称为肿瘤坏死因子受体超家族成员5。除非另有描述，术语CD40是指人CD40，例如如SEQ ID NO:19中所定义的。

与数值x相关的术语“约”意指例如+/-10％。当在数值范围或数字列表前使用时，术语“约”适用于系列中的每个数字，例如，短语“约1-5”应被解释为“约1-约5”，或例如，短语“约1、2、3、4”应被解释为“约1、约2、约3、约4等”。

单词“基本上”不排除“完全”，例如，与“基本上不含”Y的组合物可以完全不含Y。必要时，可以从本公开的定义中省略“基本上”一词。

术语“包含”涵盖“包括”以及“由…组成”，例如，“包含”X的组合物可以仅由X组成或可以包括另外的一些，例如X+Y。

AUC0-t表示从时间零到时间‘t’在血浆浓度-时间曲线下的面积，其中t是施用后的确定时间点[质量x时间/体积]。

AUCtx-ty表示从时间‘x’到时间‘y’在血浆浓度-时间曲线下的面积，其中‘时间x’和‘时间y’是施用后定义的时间点。

C_max是药物施用后观察到的最大血浆浓度[质量/体积]。

C_min是药物施用后观察到的最小血浆浓度。

C_谷是正好在给药间隔开始之前或结束时观察到的血浆浓度。

T_max是药物施用后达到最大浓度的时间[时间]。

ss(下标)表示在稳定状态下定义参数。

如本文所使用的术语“抗体”或“抗CD40抗体”等是指与CD40相互作用(例如通过结合、空间位阻、稳定/去稳定、空间分布)的完整抗体。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区组成。所述重链恒定区由三个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。所述轻链恒定区由一个结构域，CL组成。VH和VL区可以被进一步细分为称作互补决定区(CDR)的高变区，其间插有称为框架区(FR)的更加保守的区域。每个VH和VL由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。这些抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。术语“抗体”包括例如单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼抗体、或合成抗体。这些抗体可以属于任何同种型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类，优选IgG并且最优选IgG1。示例性抗体包括CFZ533(本文也称为mAb1)和mAb2，如表1所示。

将轻链和重链二者分成结构同源性区和功能同源性区。术语“恒定”和“可变”是在功能上使用。在这点上，应当理解轻链(VL)和重链(VH)部分的可变结构域均决定抗原识别和特异性。相反地，轻链(CL)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予重要生物学特性例如分泌、经胎盘移动性(transplacentalmobility)、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域离抗体的抗原结合位点或者氨基末端越远，它的编号越大。N末端是可变区并且在C末端是恒定区；CH3结构域和CL结构域实际上分别包含重链和轻链的羧基末端。特别地，术语“抗体”具体包括IgG-scFv形式。

如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗原部分”)是指保留了与抗原或表位(例如，CD40的一部分)特异性结合能力的全长抗体或抗体的一个或多个片段，如蛋白质。

“互补决定区”(“CDR”)是其边界使用许多熟知的方案中的任一种确定的氨基酸序列，这些方案包括以下描述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]”,第5版.Public Health Service[公共卫生服务],美国国立卫生研究院(National Institutes of Health),贝塞斯达(Bethesda),马里兰州(MD)(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)以及ImMunoGenTics(IMGT)编号(Lefranc,M.-P.,TheImmunologist[免疫学家],7,132-136(1999)；Lefranc,M.-P.等人,Dev.Comp.Immunol.[发育与比较免疫学],27,55-77(2003)(“IMGT”编号方案)。在IMGT下，可以使用程序IMGT/DomainGap Align确定抗体的CDR区。

如本文所使用的术语“表位”是指能以高亲和力与免疫球蛋白结合的任何决定簇。表位是特异性靶向抗原的抗体结合的该抗原的区域，并且当抗原是蛋白质时，该表位包括直接接触抗体的特定氨基酸。大多数情况下，表位存在于蛋白质上，但是在一些情况中，它们可以存在于其他类型的分子(如核酸)上。表位决定簇可以包括分子的化学活性表面基团，如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且可以具有特定的三维结构特征、和/或特定的电荷特征。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH是由单独的基因编码的，但是可以使用重组方法将这两个结构域通过使它们能够形成为单一蛋白链的合成接头来相连，其中VL区和VH区配对形成单价分子(被称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人,(1988)Science[科学]242:423-426；和Huston等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)。

如本文所使用的，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合CD40的分离抗体基本上不含特异性结合非CD40的抗原的抗体)。然而，特异性结合CD40的分离的抗体可以与其他抗原(如来自其他物种的CD40分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学品。如本文所使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子的制剂。如本文所使用的，术语“人抗体”旨在包括具有框架区和CDR区二者都衍生自人来源的序列的可变区的抗体。“人抗体”无需由人、人组织或人细胞产生。本公开的人抗体可包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变引入的突变，通过抗体基因重组期间在体内连接处的N-核苷酸添加，或通过体内体细胞突变)。

关于天然多肽及其功能衍生物的“同一性”在本文中定义为：在比对序列并且引入空位(如果需要的话)以实现最大同一性百分比之后，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分，候选序列中氨基酸残基与相应天然多肽的残基相同的百分比。N-末端或C-末端延伸与插入均不应解释为降低同一性。用于比对的方法及计算机程序是熟知的。百分比同一性可通过标准比对算法来确定，例如Altshul等人描述的基本局部比对搜索工具(BLAST)((1990)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],215:403 410)；Needleman等人的算法((1970)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],48:444 453)；或Meyers等人的算法((1988)Comput.Appl.Biosci.[生物科学中的计算机应用],4:11 17)。一组参数可以是具有空位罚分12、空位延伸罚分4、以及移码空位罚分5的Blosum 62评分矩阵。也可使用已经整合到ALIGN程序(版本2.0)中的E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS,4:11-17)的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的百分比同一性。

“一个或多个氨基酸”是指例如所有天然存在的L-α-氨基酸且包括D-氨基酸。短语“氨基酸序列变体”是指与根据本公开的序列相比在其氨基酸序列中具有一些差异的分子。根据本公开的抗体(例如指定序列)的氨基酸序列变体仍具有结合人CD40的能力。氨基酸序列变体包括取代性变体(去除至少一个氨基酸残基且在根据本公开的多肽中的相同位置插入不同氨基酸的那些变体)、插入性变体(紧邻根据本公开的多肽中的特定位置处的氨基酸插入一个或多个氨基酸的那些变体)以及缺失性变体(在根据本公开的多肽中去除一个或多个氨基酸的那些变体)。

如本文所使用的术语“Fc区”是指包含抗体的CH3、CH2和恒定结构域的铰链区的至少一部分的多肽。任选地，Fc区可以包括存在于一些抗体类别中的CH4结构域。Fc区可以包含抗体恒定区的整个铰链区。在一个实施例中，本发明包含抗体的Fc区和CH1区。在一个实施例中，本发明包含抗体的Fc区和CH3区。在另一个实施例中，本发明包括Fc区、CH1区和来自抗体恒定结构域的C_κ/λ区。在一个实施例中，本发明的结合分子包含恒定区，例如重链恒定区。在一个实施例中，与野生型恒定区相比，这类恒定区是经修饰的。也就是说，本文披露的本发明的多肽可以包含对三个重链恒定结构域(CH1、CH2或CH3)和/或对轻链恒定区结构域(CL)中的一个或多个的改变或修饰。实例修饰包括一个或多个结构域中一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。可以包括这样的变化以优化效应子功能、半衰期等。

如本文所使用的，术语“亲和力”是指在单一抗原位点上抗体与抗原之间的相互作用强度。在每个抗原位点内，抗体“臂”的可变区通过弱非共价力在许多位点处与抗原相互作用；相互作用越多，亲和力越强。如本文所使用的，针对IgG抗体或其片段(例如Fab片段)的术语“高亲和力”是指对靶抗原具有10^-8M或更小、10^-9M或更小、或10^-10M、或10^-11M或更小、或10^-12M或更小、或10^-13M或更小的K_D的抗体。然而，对于其他抗体同种型，高亲和力结合可以变化。例如，对于IgM同种型的高亲和力结合是指具有10^-7M或更小、或10^-8M或更小的K_D的抗体。

如本文所使用的，“特异性结合CD40多肽”的抗体或蛋白质意在是指以100nM或更小、10nM或更小、1nM或更小的K_D结合人CD40多肽的抗体或蛋白质。

“与不是CD40的抗原交叉反应”的抗体意在是指以1μM或更小、100nM或更小、10nM或更小、1nM或更小的K_D结合该抗原的抗体。“不与特定抗原交叉反应”的抗体意在是指以100nM或更大的K_D、或1μM或更大的K_D、或10μM或更大的K_D结合该抗原的抗体。在某些实施例中，不与抗原交叉反应的此类抗体在标准结合测定中对这些蛋白质展现基本上检测不到的结合。

如本文所使用的术语“K_assoc”或“K_a”意在是指特定抗体-抗原相互作用的结合速率，而如本文所使用的术语“K_dis”或“K_d”意在是指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。

如本文所使用的，术语“K_D”意在是指解离常数，其获得自K_d与K_a的比率(即K_d/K_a)并且表示为摩尔浓度(M)。可以使用本领域中充分确立的方法确定抗体的K_D值。用于测定抗体的K_D的方法是通过使用表面等离子共振，或者使用生物传感器系统，如

系统。

如本文所使用的，术语“ADCC”或“抗体依赖性细胞毒性”活性是指细胞耗竭活性。ADCC活性可以通过如本领域技术人员所熟知的ADCC测定来测量。

如本文所使用的，术语“沉默”抗体是指不显示或显示出低的ADCC活性的抗体，如在ADCC测定中所测量的。

在一个实施例中，术语“无ADCC活性或低ADCC活性”意指沉默抗体表现出低于50％的特异性细胞裂解(例如低于10％的特异性细胞裂解)的ADCC活性，如在标准ADCC测定中所测量的。无ADCC活性意指沉默抗体表现出低于1％的ADCC活性(特异性细胞裂解)。

沉默的效应子功能可以通过在抗体的Fc区中进行突变而获得并已经在本领域中进行了描述：LALA和N297A(Strohl,W.,2009,Curr.Opin.Biotechnol.[生物技术新见]卷20(6):685-691)；以及D265A(Baudino等人,2008,J.Immunol.[免疫学杂志]181:6664-69；Strohl,W.,同上)。沉默Fc IgG1抗体的实例包含号称的LALA突变体，所述突变体在IgG1Fc氨基酸序列中包含L234A和L235A突变。沉默IgG1抗体的另一个实例包含D265A突变。另一个沉默IgG1抗体包含N297A突变，所述突变导致无糖基化/非糖基化的抗体。

如本文所使用的，术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”是指减少或抑制给定的病症、症状或障碍、或疾病，或在生物活性或过程的基线活性方面的显著降低。

如本文所使用的，术语任何疾病或障碍的“治疗(treat、treating或treatment)”在一个实施例中是指改善疾病或障碍(即，减慢或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展或进展)。在另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指减轻或改善至少一种身体参数，包括不能被患者辨别的那些。在又另一个实施例中，“治疗(treat、treating或treatment)”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定化)、在生理上(例如，身体参数的稳定化)或二者调节疾病或障碍。更具体地，术语“治疗”疾病HS是指治疗HS患者中的炎性病变(在数量或质量方面或减小其体积和大小)，和/或治疗HS患者中的脓肿和炎性结节和/或引流性瘘管，和/或减少瘢痕形成的数量和/或减轻与瘢痕形成相关的功能限制。治疗HS的疾病还指减轻与HS相关的疼痛、疲劳和/或瘙痒，减少脓液释放和减少与脓液释放相关的气味，和/或改善HS患者的生活质量和/或减少其工作障碍。

如本文所使用的术语“预防(prevention)”是指延迟疾病或障碍的发病或发展或进展。更具体地，术语“预防”疾病HS是指预防HS红肿块和/或出现新的病变；预防瘢痕形成和预防与瘢痕形成相关的功能限制，和/或特别是预防HS的外科手术介入。

如本文所使用的，如果受试者将在生物学上、在医学上或在生活质量上从治疗中获益，则这类受试者是“需要”这种治疗的。

术语“药学上可接受的”意指不干扰一种或多种活性成分的生物活性的有效性的无毒性材料。

如本文所使用的，术语“施用(administration/administering)”主题化合物意指向需要治疗的受试者提供本发明的化合物及其前药。与一或多种其他治疗剂“组合”施用包括以任何顺序和任何施用途径同时(并行)施用和连续施用。一次施用可以是单次注射、或者彼此联合递送的多次注射，这取决于需要施用多少药物物质来实现治疗效果。

如本文所使用的，“治疗有效量”是指抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1)在以单剂量或多剂量向患者(例如人类)施用时有效地治疗、预防、防止发病、治愈、延迟、降低严重程度、减轻障碍或复发障碍的至少一种症状、或延长患者的存活期超出无此治疗存在时所预期存活期的量。当应用于单独施用的单个活性成分(例如抗CD40抗体，例如mAb1)时，该术语是指单独的该成分。当应用于组合时，所述术语是指产生治疗作用的活性成分(无论连续还是同时组合施用)的组合量。

短语“治疗方案”意指用于治疗疾病的方案，例如在HS治疗期间使用的给药方案。治疗方案可以包括负荷方案(或负荷给药)，然后是维持方案(或维持给药)。

短语“负荷方案”或“负荷期”是指用于疾病初始治疗的治疗方案(或治疗方案的部分)。在一些实施例中，所公开的方法、用途、试剂盒、过程和方案(例如治疗HS的方法)都采用负荷方案(或负荷给药)。在一些情况下，负荷期是直至达到最大功效的时间段。负荷方案的总体目标是在治疗方案初始阶段向患者提供高水平药物。负荷方案可包括施用比医师在维持方案期间会采用的更高剂量的药物，比医师在维持方案期间施用药物更频繁地施用该药物，或两者兼有。剂量递增可在负荷方案期间或之后发生。

短语“维持方案”或“维持期”是指疾病治疗期间用于维持患者的治疗方案(或治疗方案的部分)，例如保持患者在负荷方案或负荷期之后长时段(数月或数年)处于缓解状态。在一些实施例中，所公开的方法、用途和方案使用维持方案。维持方案可采用连续疗法(例如以常规间隔施用药物，例如每周、每两周或每月(每4周)、每年等)或间歇疗法(例如中断治疗、间断性治疗、复发时治疗、或实现具体预定标准[例如疼痛、疾病表现等]后的治疗)。剂量递增可在维持方案期间发生。

短语“施用装置”用于表示向患者全身性地施用药物的任何可用器具，包括但不限于预填充注射器、小瓶及注射器、注射笔、自动注射器、静脉内滴注器和袋、泵、贴片泵等。使用此类物品，患者可以自己施用药物(即，代表自己施用药物)或者医生可以施用药物。

实例1.CD40拮抗剂

具有沉默的ADCC活性的抗CD40 mAb已在专利US 8828396和US 9221913中公开，将这两个专利通过引用以其全文并入本文。预测具有沉默的ADCC活性的抗CD40 mAb相对于其他抗CD40抗体具有改善的安全特性，并且特别地可能更适合于非肿瘤适应症，化脓性汗腺炎(HS)。

根据诸位发明人的非结合性假设，来自专利US 8828396和US 9221913的两种mAb(称为mAb1和mAb2)被认为是用于治疗HS的适合化合物。抗体mAb1(也称为CFZ533)是特别优选的。

mAb1抑制体外CD154诱导的活化以及体内T细胞依赖性抗体的形成和生发中心的形成。

为了使本领域技术人员能够实施本发明，mAb1和mAb2的氨基酸和核苷酸序列提供于下表1中。

本领域已知的另一种抗CD40 mAb是来自安斯泰来制药株式会社(AstellasPharma)/协和发酵麒麟株式会社(Kyowa Hakko Kirin Co)的ASKP1240，如描述于例如US8568725 B2中，通过引用并入本文。

本领域已知的又另一种抗CD40 mAb是来自勃林格殷格翰公司(BoehringerIngelheim)的BI655064，如描述于例如US 8591900中，通过引用并入本文。

本领域已知的另一种抗CD40 mAb是快进制药公司(Fast ForwardPharmaceuticals)的FFP104，如在US8669352(通过引用并入本文)中所描述的。

另一种治疗方式可以是来自阿斯利康公司(AstraZeneca)的MEDI4920(其是一种抗CD40L-Tn3融合蛋白)或来自拜奥基因(Biogen)的抗CD40L抗体BIIB063，来自UCB/拜奥基因(Biogen)的培戈-达匹利珠单抗(dapirolizumab pegol)，或来自百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)的来利珠单抗(letolizumab)。

如本领域技术人员所理解的，本披露还涵盖具有与上述抗体相同作用模式的抗体，所谓的生物仿制药。

表1.序列表

在一个实施例中，提供了抗CD40抗体，所述抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域。

在一个实施例中，提供了抗CD40抗体，所述抗体包含含有如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示的高变区的免疫球蛋白VH结构域以及含有如SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5和SEQ ID NO:6所示的高变区的免疫球蛋白VL结构域。

在一个实施例中，提供了抗CD40抗体，所述抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:13的Fc区。

在一个实施例中，提供了抗CD40抗体，所述抗体包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区。

在一个实施例中，提供了抗CD40抗体，所述抗体包含Fc IgG1沉默区。

在优选的实施例中，提供了命名为mAb1的抗CD40抗体。具体地，mAb1包含SEQ IDNO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；并且mAb2包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

1.表达系统

对于轻链和重链的表达，通过标准技术将编码重链和轻链的一个或多个表达载体转染到宿主细胞。不同形式的术语“转染”旨在涵盖多种通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。在理论上可能在原核或真核宿主细胞中表达本发明的抗体。讨论了抗体在真核细胞，例如哺乳动物宿主细胞、酵母或丝状真菌中的表达，因为此类真核细胞，并且特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更可能装配和分泌正确折叠的和有免疫活性的抗体。

特别地，克隆或表达载体可以包含以下与适合的启动子序列可操作地连接的编码序列(a)-(b)中的至少一种：

(a)分别编码mAb1的全长重链和轻链的SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；或

(b)分别编码mAb2的全长重链和轻链的SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18。

用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin,1980Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4216-4220中，这些细胞与DH FR可选择标志物一起使用，例如在R.J.Kaufman和P.A.Sharp,1982Mol.Biol.[分子生物学]159:601-621中描述的)、CHOK1 dhfr+细胞系、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。特别地，为使用NSO骨髓瘤细胞，另一种表达系统是示于PCT公开WO 87/04462，WO 89/01036和EP 0338841中的GS基因表达系统。

在将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许在宿主细胞中表达该抗体或将该抗体分泌到其中生长宿主细胞的培养基中的时间段来产生抗体。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基回收抗体(参见，例如Abhinav等人2007,Journal of Chromatography[色谱杂志]848:28-37)。

可以在适合的条件下培养宿主细胞以表达和产生mAb1或mAb2。

2.药物组合物

治疗性抗体通常被配制成水性形式以备施用或者配制成冻干物以在施用前与适合的稀释剂重构。抗CD40抗体可以被配制成冻干物，或配制成水性组合物，例如在预填充注射器中。该制剂也称为药物产品(DP)。

合适的制剂可以提供水性药物组合物或冻干物，该冻干物可以重构以给出具有高浓度的抗体活性成分和低水平的抗体聚集的溶液用于递送至患者。高浓度的抗体之所以有用，是因为高浓度降低了必须被递送给患者的物质含量。降低的给药体积使得向患者递送固定剂量所花费的时间降至最低。具有高浓度抗CD40抗体的本发明的水性组合物特别适合皮下施用。

因此，本发明提供了适用于在受试者中施用(例如用于皮下施用)的水性药物组合物，该水性药物组合物包含抗CD40抗体，如mAb1或mAb2。

当与药学上可接受的载体组合时，抗CD40抗体可以用作药物组合物。除抗CD40抗体(如mAb1或mAb2)外，这种组合物可含有载体、各种稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂和本领域熟知的其他材料。运载体的特征将取决于施用途径。在所公开的方法中使用的药物组合物还可以含有用于治疗特定靶向障碍的另外的治疗剂。

在一个具体实施例中，该组合物(也称为药物产品(DP))是由pH为6.0的水性制剂制备的冻干制剂，并且包含：

(i)150mg/mL mAb1或mAb2

(ii)270mM蔗糖作为稳定剂，

(iii)30mM L-组氨酸作为缓冲剂，和

(iv)0.06％聚山梨醇酯20作为表面活性剂。

在另一具体实施例中，该药物组合物(也称为药物产品(DP))是pH为6.0的水性药物组合物，并且包含：

(i)150mg/mL mAb1或mAb2

(ii)270mM蔗糖作为稳定剂，

(iii)30mM L-组氨酸作为缓冲剂，和

(iv)0.06％聚山梨醇酯20作为表面活性剂。

3.组合

本发明进一步涉及CD40拮抗剂，特别是抗CD40抗体，例如CFZ533(iscalimab)，与一种或多种另外的治疗剂的组合，用于在需要这种治疗和/或预防的患者中的HS的治疗或预防。

此类其他治疗剂可以包括在局部治疗(乳膏[非甾体或甾体]、洗剂、防腐剂)、全身性治疗(例如用生物制品、抗生素或化学实体)、防腐剂、光动力疗法和外科手术介入(激光、引流或切口、切除)。

在HS治疗期间，另外的非限制性治疗剂用于与披露的CD40拮抗剂(例如抗CD40抗体，例如isclaimab)组合使用。与披露的CD40拮抗剂一起用于全身性治疗中使用的HS药剂的非限制性实例包括IL-17拮抗剂(艾塞吉珠单抗(ixekizumab)、布洛鲁单抗(brodalumab)、苏金单抗(secukinumab)、CJM112)，以及IL17A/F拮抗剂(例如比美吉珠单抗(bimekizumab))或IL17C拮抗剂(例如MOR106)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)阻滞剂(例如

(etanercept)、

(阿达木单抗)、

(infliximab)和

(戈利木单抗(golimumab)))、白介素12/23阻滞剂(例如

(优特吉努单抗(ustekinumab))、tasocitinib和布瑞吉努单抗(briakinumab))、IL-23阻滞剂(例如谷瑟库单抗(guselkumab)、替曲吉珠单抗(tildrakizumab)和利散吉珠单抗(risankizumab))、p19抑制剂、PDE4抑制剂(例如apremilast或

)、补体途径抑制剂(例如因子B抑制剂)(例如，披露于WO 2015/009616的化合物或LNP023(也称为4-((2S,4S)-4-乙氧基-1-((5-甲氧基-7-甲基)-1H-吲哚-4-基)甲基)哌啶-2-基)苯甲酸)、C5a抑制剂(IFX-001、CCX168(也称为阿伐可泮(Avacopan)))、IL-1拮抗剂(卡那吉努单抗(canakinumab)、格沃吉珠单抗(gevokizumab)、利那西普(rilonacept)、阿那靳雷(anakinra)、MaBp1(X生物技术公司(XBiotech)))、炎症小体抑制剂(例如NLRP3抑制剂和NLRP5抑制剂)、CXCR1/2抑制剂、IL-18拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-36拮抗剂、CD20拮抗剂、CTLA4拮抗剂、IL-8拮抗剂、B细胞耗竭剂(尤其是CD20拮抗剂，例如利妥昔单抗以及BAFF-R和LTA4H抑制剂)、IL-21拮抗剂、IL-22拮抗剂、VEGF拮抗剂、CXCL拮抗剂、MMP拮抗剂、和防御素拮抗剂(例如，受体诱饵、拮抗性抗体等)、以及广谱口服JAK抑制剂或更具体的TYK2或JAK1、JAK2或JAK 3抑制剂。

在HS治疗期间，与披露的CD40拮抗剂组合使用的另外的HS药剂包括维甲酸(例如阿维A(retariatin)(例如

)和异维A酸(isotretinoin))、免疫系统抑制剂(例如雷帕霉素、T细胞阻滞剂[例如

(阿来西普(alefacept))和

[依法利珠单抗(efalizumab)])、环孢霉素、氨甲蝶呤、麦考酚酸吗啉乙酯、霉酚酸、来氟米特(leflunomide)、他克莫司(tacrolimus)等)、羟基脲(例如

)、柳氮磺胺吡啶、6-硫鸟嘌呤、富马酸酯(例如富马酸二甲酯和富马酸酯)、咪唑硫嘌呤、秋水仙碱、顺式维甲酸、类固醇、皮质类固醇、瑟托利珠单抗(certolizumab)、莫米松、罗格列酮、吡格列酮、结晶肉毒素、氟羟强的松龙、IFX-1(InflaRx)、LY-3041658(礼来公司(Eli Lilly))、TE-2232(Immunwork)、NSAID、COX抑制剂，麻醉处方药、酮洛芬、可待因、加巴喷丁、普瑞巴林芬太尼、抗生素(局部、口服、IV)(例如克林霉素、利福平、四环素、沙瑞环素、多西环素、米诺环素、赖甲四环素、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异噁唑、红霉素、头孢曲松、莫西沙星、甲硝哒唑，单独或组合使用)、皮质类固醇(可注射或口服)、抗雄激素/激素疗法(口服避孕药、安体舒通、非那雄胺、度他雄胺、孕酮IUD、乙酸赛普龙、乙炔基雌二醇、孕二烯酮、诺孕酯、地索高诺酮、屈螺酮、安体舒通)、丙炎松、MEDI8968、羟氯喹、达普松、二甲双胍、阿达帕林、壬二酸和锌。

用于所披露的试剂盒、方法和用途的优选组合包括其他生物制品，例如TNFα阻滞剂、IL-17或IL23和/或IL1和/或IL18阻滞剂。

组合使用的TNFα阻滞剂的实例是etanercept、阿达木单抗、infliximab和戈利木单抗。IL17阻滞剂的实例是艾塞吉珠单抗、布洛鲁单抗、苏金单抗或CJM112。IL23阻滞剂的实例是谷瑟库单抗、替曲吉珠单抗和利散吉珠单抗。IL1阻滞剂的实例是卡那吉努单抗、格沃吉珠单抗、利那西普、阿那靳雷、MaBp1(X生物技术公司(XBiotech))。

4.施用途径

通常，例如通过静脉内、腹膜内或皮下注射来施用抗体或蛋白质。完成此施用的方法是本领域普通技术人员已知的。还可能获得可以局部或口服施用的组合物，或者能够透过黏膜传递的组合物。如本领域技术人员所理解的，可以使用任何适合的施用方式，如适合于特定的所选施用途径。

可能的施用途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内(I.V.或IV)、肌内(IM)、真皮内、皮下(S.C.或SC)、或输注)、口服和肺(例如吸入)、经鼻、经皮(局部)、经黏膜、以及直肠施用。被用于胃肠外、真皮内、或皮下应用的溶液或悬浮液可以包括以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；并且用于调节渗透压的试剂如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱(例如盐酸或氢氧化钠)调节pH。肠胃外制剂可以被封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

可以通过向需要抗CD40疗法的受试者施用本发明的抗体或蛋白质的负荷方案或负荷给药来启动抗CD40疗法。“负荷剂量”意指向受试者施用一次或数次的本发明的抗CD40抗体或蛋白质的初始剂量，其中施用的本发明的抗体或蛋白质的剂量落入更高的给药范围(即，约10mg/kg至约50mg/kg，如约30mg/kg静脉内，或约600mg、或约300mg或约150mg每周一次、每两周一次持续多达4周)。“负荷方案”可以按单次施用或多次施用来施用，例如单次或多次静脉内输注，或者按组合在“负荷给药”方案中的多次皮下施用来施用，这取决于疾病的严重程度)。施用“负荷方案”后，再向受试者施用一个或多个另外的治疗有效剂量的本发明的抗CD40抗体或蛋白质。可以根据每周给药方案、或者每两周一次(每两周一次地)、每三周一次或每四周一次施用后续治疗有效剂量。在此类实施例中，后续治疗有效剂量通常落在较低给药范围内(即，约0.003mg/kg至约30mg/kg，如约10mg/kg，例如10mg/kg静脉内，或每周、每两周或每4周皮下施用约150mg、约300mg或约600mg)。

可替代地，在一些实施例中，在“负荷方案”后，根据“维持方案”施用后续治疗有效剂量的本发明的抗CD40抗体或蛋白质，其中施用所述治疗有效剂量的本发明的抗体或蛋白质每月一次、每6周一次、每两个月一次、每10周一次、每三个月一次、每14周一次、每四个月一次、每18周一次、每五个月一次、每22周一次、每六个月一次、每7个月一次、每8个月一次、每9个月一次、每10个月一次、每11个月一次或者每12个月一次。在这类实施例中，本发明的抗CD40抗体或蛋白质的治疗有效剂量落在较低给药范围内(即，约0.003mg/kg至约30mg/kg，如约10mg/kg，例如10mg/kg)，特别是以较高频率间隔(例如每周一次、每两周一次至每四周一次)施用后续剂量时，或者落在较高给药范围内(即，10mg/kg至约50mg/kg，如30mg/kg)，特别是以较低频率间隔施用后续剂量时，例如，在间隔一个月至12个月施用后续剂量的情况下。

给药的时间通常从第一剂量活性化合物(例如mAb1)的当天(也称为“基线”)测量。然而，不同的医疗服务人员使用不同的命名惯例。

值得注意的是，一些医疗服务人员可能称第零周为第1周，而一些医疗服务人员可能称第零天为第一天。因此，有可能不同医师将指明剂量例如在第3周/在第21天期间、在第3周/在第22天期间、第4周/在第21天期间、第4周/在第22天期间给予，而指的是相同给药时间表。为了一致性，给药的第一周将在本文中称为第0周，而给药的第一天将被称为第1天。然而，本领域技术人员将理解，该命名规则仅用于一致性并且不应被解释为限制，即，每周给药是提供每周剂量的抗CD40抗体(例如mAb1)，无论医师是否参考特定的一周为“第1周”或“第2周”。如本文所述的剂量方案的实例见图1和图2。应理解，无需在精确时间点提供剂量，例如大约预定在第29天的剂量可例如在第24天至第34天(例如第30天)提供，只要提供在适当的周中即可。

如本文所使用的，短语“具有足够量的抗CD40抗体以允许递送[指定剂量]的容器”用于表示可以用于提供所需剂量的、已在其中布置抗CD40抗体(例如，作为药物组合物的一部分)体积的给定容器(例如小瓶、笔、注射器)。作为一个实例，如果所希望的剂量是500mg，那么临床医生可能使用来自含有浓度为250mg/ml的抗-CD40抗体配制品的容器中的2ml、来自含有浓度为500mg/ml的抗-CD40抗体配制品的容器中的1ml、来自含有浓度为1000mg/ml的抗-CD40抗体配制品的容器中的0.5ml等。在每个这样的情况下，这些容器具有足够量的抗-CD40抗体以允许递送所希望的500mg的剂量。

如本文所使用的，短语“以允许[施用途径]递送[指定剂量]的剂量配制”用于表示给定的药物组合物可用于通过指定的施用途径(例如皮下或静脉内)提供所需剂量的抗CD40抗体(例如mAb1)。作为一个实例，如果所希望的皮下剂量是500mg，那么临床医生可能使用具有浓度为250mg/ml的2ml抗-CD40抗体配制品、具有浓度为500mg/ml的1ml抗-CD40抗体配制品、具有浓度为1000mg/ml的0.5ml抗-CD40抗体配制品等。在每个这样的情况下，这些抗-CD40抗体配制品处于足够高的浓度以允许皮下递送抗-CD40抗体。皮下递送通常需要递送小于约2ml的体积，优选约1ml或更小的体积。然而，可以使用例如贴片/泵机制随时间递送更高的体积。

本文公开了抗CD40抗体(例如mAb1)用于制造治疗患者中的化脓性汗腺炎的药物的用途，其中该药物被配制成包含容器，每个容器具有足够量的抗CD40抗体以允许每单位剂量递送至少约75mg、150mg、300mg或600mg的抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1)。

本文公开了抗CD40抗体(例如mAb1)用于制造治疗患者中的化脓性汗腺炎的药物的用途，其中该药物以一定剂量被配制以允许每单位剂量全身递送(例如，静脉内或皮下递送)75mg、150mg、300mg或600mg的抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1)。

5.试剂盒

本公开还涵盖用抗CD40抗体或其抗原结合片段(例如mAb1)治疗患有化脓性汗腺炎的患者(视情况而定)的试剂盒。此类试剂盒包含抗CD40抗体或其抗原结合片段，例如mAb1(例如，以液体或冻干形式)或包含抗CD40抗体(如上所述)的药物组合物。另外，此类试剂盒可包含用于施用抗CD40抗体的装置(例如注射器和小瓶、预填充注射器、预填充笔、贴片/泵)及使用说明书。说明书可以公开将抗CD40抗体(例如mAb1)作为具体给药方案的一部分提供给患者。这些试剂盒还可以含有用于治疗银屑病，例如用于与所装入的抗CD40抗体(例如mAb1)组合递送的另外的治疗剂(如上所述)。

短语“施用装置”用于表示向患者全身性地施用药物的任何可用器具，包括但不限于预填充注射器、小瓶及注射器、注射笔、自动注射器、静脉内滴注器和袋、泵、贴片/泵等。使用这些物品，患者可自施用药物(即自行施用药物)，或可由护理给予者或医师施用药物。

本文披露了用于治疗患有化脓性汗腺炎的患者的试剂盒，这些试剂盒包含：a)药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的抗CD40抗体或其抗原结合片段；b)用于向患者施用抗CD40抗体或其抗原结合片段的装置；和c)说明书，该说明书提供了以约3至约30mg活性成分/千克人受试者的剂量向有需要的患者皮下施用抗CD40抗体或其抗原结合片段三次，每隔一周一次，然后每月给药约3至约30mg(如10mg)活性成分/千克人受试者，或在维持方案期间以约150mg、约300mg或约600mg施用，每周一次、每两周一次或每月一次。

在一个具体实施例中，提供了a)包含抗CD40抗体、缓冲剂、稳定剂和增溶剂的液体药物组合物，以及b)用于将抗CD40抗体皮下施用至患有化脓性汗腺炎的患者的装置用于制造治疗化脓性汗腺炎的药物的用途，其中将该抗CD40抗体：

i)以约3至约30mg(如10mg)活性成分/千克人受试者的剂量静脉内施用至患者三次，每隔一周一次；并且

ii)此后，以约3至约30mg(如10mg)活性成分/千克人受试者的每月剂量静脉内施用至患者，其中所述抗CD40抗体选自由以下组成的组：

a)抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域；

b)抗CD40抗体，其包含含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的高变区的免疫球蛋白VH结构域以及含有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的高变区的免疫球蛋白VL结构域；

c)抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:13的Fc区；

d)抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区；

e)抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区；以及

f)抗CD40抗体，其包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

在另一个具体实施例中，提供了a)包含抗CD40抗体、缓冲剂、稳定剂和增溶剂的液体药物组合物，以及b)用于将抗CD40抗体皮下施用至患有HS的患者的装置用于制造治疗HS的药物的用途，其中将该抗CD40抗体：

i)以约150mg活性物质、约300mg活性物质或约600mg活性物质的剂量皮下施用至患者(每周一次或每两周一次)；并且

ii)此后，以约150mg活性物质、约300mg活性物质或约600mg活性物质的每周、每两周或每月(每四周)剂量皮下施用至患者，其中所述抗CD40抗体选自由以下组成的组：

e)抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区；以及

实例2.药理学

1.主要药理学

mAb1以高亲和力(K_d为0.3nM)结合人CD40。然而，它不结合Fcγ受体(包括CD16)或介导抗体依赖性细胞毒性或补体依赖性细胞毒性。mAb1抑制重组体CD154(rCD154)诱导的人白细胞活化，但不诱导PBMC增殖或由单核细胞源树突细胞(DC)造成的细胞因子产生。mAb1以非常相似的亲和力结合人和非人灵长类动物CD40。

在体内，mAb1阻断原发性和继发性T细胞依赖性抗体应答(TDAR)，并且可以延长非人灵长类动物中肾同种异体移植物的存活(Cordoba等人2015)。另外，mAb1可以破坏体内已建立的生发中心(GC)。

使用人全血培养物在体外同时评估CD40受体占用和功能活性。通过CD154诱导的CD20阳性细胞(B细胞)上的CD69(活化标志物)的表达来定量功能活性，并使用荧光标记的mAb1监测CD40占用。CD40几乎完全被mAb1占用是完全抑制rCD154诱导的CD69表达所必需的。

2.次要药理学

研究了mAb1对血小板功能和血液止血的影响，表明mAb1不诱导血小板聚集应答，而是在高浓度下对血小板聚集显示出某些轻度抑制作用。

实例3.非临床毒理学和安全药理学

用mAb1进行的毒理学研究未揭露任何显著的器官毒性，包括无血栓栓塞事件的证据，如用抗CD154 mAb进行的临床试验中所报道的(Kawai等人2000)。在13周的GLP恒河猴研究(以10、50和150mg/kg每周一次给药)中，注意到5/22的动物中淋巴细胞性增加(这被认为是由于持续感染)，这一观察结果与mAb1的药理学一致。在50mg/kg下注意到2只动物的肾和肺中的炎性病变，并且在这两只动物中的一只中，还注意到眼睛和气管中的病变。虽然不能排除mAb1对肾和肺的直接影响，但证据的份量(包括机会致病菌的证实)表明这些发现可能继发于mAb1介导的免疫抑制并且是传染源。鉴于这些炎症发现，13周毒性研究的最大无毒性反应剂量(NOAEL)设定为10mg/kg。在食蟹猴中的26周慢性毒性研究中，没有发现与mAb1相关的不良结果。基于这些数据，将NOAEL设定为150mg/kg(26周)。在每周一次皮下施用1、50和150(NOAEL)mg/kg下，平均(所有动物)C_max,ss分别为44、3235和9690μg/mL。源自26周食蟹猴研究的NOAEL被认为与支持临床给药方案的相关度最高。

验尸组织学和免疫组织学评估揭露了脾脏和淋巴组织的皮质B细胞区域中的GC减少。复原动物显示一些淋巴结细胞性增加的病例，伴随T细胞面积正常和B细胞面积增加，这与停药后重建GC相一致。在mAb1的血液水平降至低于完全受体占用所需的水平之后，复原动物能够立即对钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)产生初级TDAR。

由于完全抑制T细胞依赖性抗体应答(TDAR)，KLH，预计不会形成针对mAb1的抗药物抗体(ADA)，因此当将mAb1浓度持续保持在药理学水平时，ADA相关的副作用被认为不太可能。

组织交叉反应性研究揭露了CD40不仅存在于免疫细胞中，还存在于各种组织中。这主要是由于其在内皮细胞和上皮细胞上的表达，其中CD40参与信号传导，如响应伤口愈合过程、病毒防御的上调和炎症相关的介体。预期拮抗性抗CD40单克隆抗体如mAb1不会有助于炎症过程，这通过使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外研究而证实。

迄今尚未进行完全符合指南的生殖毒性研究。然而，已经进行了兔的剂量范围发现、胚胎-胎儿发育(EFD)研究，以确认兔是相关的生殖毒理学物种。没有观察到对胚胎-胎儿发育的影响，并且在任何组中都没有与治疗相关的胎儿外部畸形。

总之，所述非临床数据支持对化脓性汗腺炎患者的研究。

实例4.非临床药物代谢动力学和药物效应动力学

1.药物代谢动力学(PK)

对于IgG免疫球蛋白而言典型地，消除mAb1的主要途径可能是通过蛋白水解分解代谢(发生在与血浆平衡的位点)。另外，mAb1-CD40复合物的结合和内化导致快速和可饱和的清除途径。这通过非线性mAb1血清浓度-时间曲线来说明，其显示在约10-20μg/mL处的拐点。CD40介导的清除对总体清除的贡献取决于mAb1浓度、以及CD40表达水平、内化和受体转换率。对于mAb1>10-20μg/mL的血清浓度，预期线性动力学，而在较低浓度下出现非线性动力学。

2.药物效应动力学(PD)

在食蟹猴的PK/PD研究中，PK曲线中的拐点(约10μg/mL)与CD40饱和度下降相关，如在独立性淋巴细胞靶标饱和度测定中所确定的。因此，这个拐点被视为CD40饱和水平的标志物，并且是靶标接合的证据。

在用KLH免疫的恒河猴中进一步证明了CD40占用和药物效应动力学活性之间的联系。将猴子用KLH进行三次免疫(第一次是在给药前约3周，第二次是在施用mAb1后2周，并且第三次是在完全洗去mAb1后)。在第二次KLH疫苗接种时，在血浆浓度>40μg/mL下，CD40被mAb1占用完全阻止了强化(recall)抗体应答。一旦mAb1被清除，所有动物都对第三次KLH产生完全记忆抗体应答。这些结果表明，预先存在的记忆B细胞的功能不受影响。在完全消除mAb1后，用破伤风类毒素(TTx)进行免疫导致与未处理的动物相似的抗TTx-IgG/IgM滴度，并证明在mAb1消除后恢复完整的TDAR。

3.免疫原性

正如对免疫抑制药物所预期的，恒河猴(单剂量)中的免疫原性数据与KLH-TDAR体验的结果一致，并证实在CD40完全被mAb1占用下不能产生针对mAb1的免疫应答。

4.治疗方案

基于mAb1的药物代谢动力学和药物效应动力学曲线、以及mAb1的临床前研究和临床研究的结果，可以使用以下治疗方案。

在一个实施例中(参见图1)，所述mAb1治疗方案由每周s.c.600mg mAb1(2x 2mL)的负荷剂量组成。第1天(第1周)、第8天(第2周)、第15天(第3周)、第22天(第4周)和第29天(第5周)给药。第5周后，患者接受s.c.mAb1 600mg(2x 2mL)的维持剂量，每隔一周(或每两周一次)、第43天(第7周)、第57天(第9周)等等。

在一个实施例中(参见图2A，1)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由两个剂量的600mg mAb1组成，在这两个剂量之间的一周施用，然后所述维持给药由多个剂量的600mg mAb1组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。

在另一个实施例中(参见图2A，2)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和300mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由600mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。

在又另一个实施例中(参见图2A，3)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和150mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由600mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用150mg剂量；通过注射1mL药物产品(150mg/mL)1次，可替代地通过注射2mL稀释1/2倍(75mg/mL)的药物产品1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。

在一个实施例中(参见图2B，1)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由两个剂量的600mg mAb1组成，在这两个剂量之间的一周施用，然后所述维持给药由多个剂量的300mg mAb1组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。

在另一个实施例中(参见图2B，2)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和300mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由300mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。

在又另一个实施例中(参见图2B，3)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和150mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由300mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用150mg剂量；通过注射1mL药物产品(150mg/mL)1次，可替代地通过注射2mL稀释1/2倍(75mg/mL)的药物产品1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。

在一个实施例中(参见图2C，1)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由两个剂量的600mg mAb1组成，在这两个剂量之间的一周施用，然后所述维持给药由多个剂量的150mg mAb1组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。优选皮下施用150mg剂量；通过注射1mL药物产品(150mg/mL)1次，可替代地通过注射2mL稀释1/2倍(75mg/mL)的药物产品1次。

在另一个实施例中(参见图2C，2)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和300mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由150mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。优选皮下施用150mg剂量；通过注射1mL药物产品(150mg/mL)1次，可替代地通过注射2mL稀释1/2倍(75mg/mL)的药物产品1次。

在又另一个实施例中(参见图2C，3)，mAb1治疗方案由负荷给药和维持给药组成，所述负荷给药由600mg mAb1的第一剂量和150mg mAb1的第二剂量组成，其中在第一剂量后一周施用第二剂量，然后所述维持给药由150mg mAb1的多个剂量组成，每隔2周(Q2W)施用。优选皮下施用150mg剂量；通过注射1mL药物产品(150mg/mL)1次，可替代地通过注射2mL稀释1/2倍(75mg/mL)的药物产品1次。优选皮下施用600mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)2次。优选皮下施用300mg剂量；通过注射2mL药物产品(150mg/mL)1次。

将治疗方案分为负荷给药部分和维持给药部分的优点是它允许最佳治疗效果。

对于本文所述的所有治疗方案，负荷给药的目的是实现目标饱和度(血浆浓度接近40μg/mL)并因此起始治功效果，并且维持给药给药的目的是维持功效。

实例5.人体安全性和耐受性数据

mAb1的安全性、耐受性、PK和PD活性正在健康受试者和类风湿性关节炎(RA)患者中的mAb1的持续、随机、双盲、安慰剂对照、单次递增剂量研究中进行评估。总共有48名受试者报名：36名健康受试者接受单剂量mAb1至3mg/kg静脉内或皮下；以及12名RA患者，其中6名接受单剂量的10mg/kg静脉内mAb1。总体而言，健康志愿者中高达3mg/kg mAb1的单剂量和RA患者中单次的10mg/kg mAb1是安全且耐受良好的，并且未发生疑似严重不良事件(SAE)。在RA患者中进行30mg/kg静脉内剂量的研究。由于该研究仍在进行中，所有临床数据实际上都是初步的，并且基于在RA患者中进行的高达10mg/kg剂量的中期分析。

实例6.人体药物代谢动力学和药物效应动力学(健康志愿者和类风湿性关节炎患者)

在健康受试者以及类风湿性关节炎患者中，单次静脉内或皮下施用后，CFZ533 PK曲线与靶标介导的分布一致，该靶标介导的分布导致非线性PK曲线和当CD40受体占用降至约90％以下时更快清除。

尽管来自中国受试者的PK曲线存在一些个体间可变性，但中国受试者中CFZ533的分布通常与非中国受试者的情况相似，并且在3mg/kg静脉内CFZ533后，靶标接合也相似(约4周)。在该剂量水平，通过血浆中的游离CFZ533曲线、测量游离CD40和总CD40的外周B细胞上的CD40占用、以及血浆中的总sCD40浓度证明了类似的PK/PD曲线。

在健康受试者中皮下施用后，CFZ533被快速吸收并分散，这与人体中典型的IgG1抗体的预期一致。在3mg/kg皮下时，CFZ533通常在给药后3天达到峰值(2名受试者为7天)，并且给药后1周血浆浓度与静脉内施用后的血浆浓度范围相同。在3mg/kg皮下时，靶标接合的持续时间也是约4周。

在10mg/kg静脉内下的类风湿性关节炎患者中，如通过全血B细胞上的游离CD40与平均给药前和血浆中的总sCD40曲线相比所测量的，完全CD40占用通常维持8周。在30mg/kg静脉内时，血浆中的PK和总sCD40曲线与16周的靶标接合持续时间一致。

在健康受试者中，CD40被CFZ533结合通常导致外周B细胞上的总CD40减少约50％(追踪B细胞上的CD40占用，如通过B细胞上的游离CD40所测量的)。这可能是由于与CFZ533结合之后膜结合的CD40的内化和/或脱落所致。在类风湿性关节炎患者中，未证实外周B细胞上的总CD40减少。

定义了血浆中的CFZ533与全血B细胞上的CD40占用(B细胞上的游离CD40)之间的关系，并且0.3-0.4μg/mL的CFZ533浓度与全血B细胞上的完全(定义为≥90％)CD40占用相关。

更一般地，已经鉴定了CFZ533的非特异性和特异性消除途径。由FcRn受体介导的非特异性和高容量途径通常由内源IgG共享。特异性靶标介导的CFZ533的分布导致CFZ533-CD40复合物的形成，这些复合物部分内化(随后溶酶体降解)和/或从膜上脱落。靶标介导的过程导致CFZ533的可饱和以及非线性分布。CFZ533-CD40复合物的形成是剂量/浓度依赖性的，其中在高浓度的CFZ533条件下发生饱和。

总体而言，CFZ533的分布取决于特异性(靶标介导的)和非特异性消除途径对CFZ533的总体清除的相对贡献。当CFZ533浓度低于靶标的浓度时，观察到非线性PK表现，而在CD40受体饱和的较高浓度下，非特异性途径占优势并且CFZ533的消除是线性的。

如对于靶向膜结合受体的和表明靶标介导的分布的典型IgG1抗体所预期的，CFZ533的暴露程度(AUClast)的增加超过剂量增加(超比例)。因此，预计这与较高剂量的CFZ533的分布量和清除量的减少有关。

在CFZ533血浆浓度低于定量限并且明确地太低而不能阻断组织中任何CD40途径相关效应之后6周，1mg/kg静脉内CFZ533(1周完全CD40占用)的一名受试者产生针对检测的CFZ533的特异性抗体。这名受试者中抗药物抗体(ADA)的存在并未危害暴露，并且与免疫相关的安全性信号无关。这对应于本研究中ADA发生率为2％。

单剂量的3mg/kg(静脉内和皮下)的CFZ533瞬时抑制对第一次KLH免疫的抗KLH应答，CFZ533浓度对应于完全(≥90％)受体占用(约3-4周)。在所有受试者中检测到对CFZ533浓度的抗KLH初级应答，并伴随受体占用下降。所有受试者都能够对第二次KLH免疫(在预期受体占用损失后进行施用)产生强化应答。

数据表明CD40被CFZ533结合阻止了重组体人CD154(rCD154)介导的B细胞在人全血中的活化。B细胞上的rCD154诱导的CD69表达通常在对应于B细胞上完全CD40占用的时间段期间被抑制。当CD40占用不完全时，rCD154的功能活性得以恢复。

没有证据表明CFZ533对免疫分型数据有任何影响。

实例7.CFZ533(阻断性和非耗竭性抗CD40单克隆抗体)的体外和体内特性的表征

1.方法

表面等离子共振分析CFZ533对CD40的亲和力

在25℃用HBS-EP+作为运行缓冲液进行重组体CFZ533的结合分析。典型的结合分析周期包括以下三个步骤：(i)通过固定在芯片表面上的蛋白A捕获抗体，(ii)CD40抗原与捕获的抗CD40抗体结合，和(iii)蛋白A表面的再生。为了确定抗原-抗体结合相互作用的动力学速率常数，处理结合数据，用来自空白注射的应答进行双重参考。使用Biacore T100评估软件的1:1相互作用模型局部拟合结合曲线以确定动力学速率常数。平衡解离常数(KD)的值计算为速率常数kd/ka的比率。所有结合测量均在两个独立实验中进行。

表面等离子共振分析CFZ533对FcγRIIIA的亲和力

通过Geneart合成用4-氨基酸纯化标签(4APP；诺华公司(Novartis))和Avi生物素化标签(GLNDIFEAQKIEWHE；Avidity公司)标记的人FcγRIIIA的细胞外结构域人FcγRIIIA(CD16a)158V(Uniprot:P08637,17-199)和人FcγRIIIA 158F(Uniprot:P08637,17-199)，将其在HEK293细胞中表达，并用抗4APP亲和色谱进行纯化。将受体用与链霉亲和素传感器芯片(通用电气公司(General Electric))结合的BirA(Avidity公司)进行定点生物素化，并且通过如(Warncke等人2012)所述的表面等离子共振(T100，通用电气公司)来分析不同Ab的平衡结合水平。通过1:1模型来计算平衡解离常数(K_D)。

人白细胞培养

全血血沉棕黄层获自健康志愿者(Blutspendezentrum，巴塞尔，瑞士)或从健康志愿者收集的全血，条件是根据瑞士人类研究法案获得知情同意，并获得责任伦理委员会(Ethikkommission Nordwest-und Zentralschweiz；EKNZ)的批准。人扁桃体样品获自Ergolz Klinik公司(利斯塔尔(Liestal)，瑞士)(研究方案号1000244v.03；由Ethikkommission beider Basel(EKBB)批准)和Kantonspital公司(利斯塔尔，瑞士)(研究方案号TRI0149 v.01；由EKNZ批准)。对于体外培养实验，请参阅补充材料了解详细方法。简言之，将全血分离的PBMC、体外衍生的单核细胞DC或人扁桃体B细胞与单一浓度或剂量调节的CFZ533或相关对照抗体一起孵育。对于途径阻断实验，这些培养物还包括EC80浓度的重组人CD154(5μg/ml)和IL-4(75ng/ml)。用于体外测定的读数包括通过掺入胸苷(³H-TdR)评估的增殖，基于流式细胞术的对B细胞上的活化分子CD69的表达的评估，以及通过ELISA评估的细胞因子分泌。类似的测定用于NHP全血和PBMC。在一些人全血实验中，还通过使用荧光标记的CFZ533调查CD40受体占用。在适当的情况下，使用GraphPad

软件中的基于线性回归的曲线拟合来估计IC50值。

体外细胞耗竭测定

有关详细方法，请参阅补充材料。简言之，与B细胞耗竭性抗体利妥昔单抗相比，在三天的时间内在人全血中监测CFZ533介导CD20^pos B细胞耗竭的能力。对于CDC，在存在或不存在兔补体的情况下将CFZ533或利妥昔单抗与RAJI B细胞一起孵育，并通过发光评估细胞裂解。

CFZ533的内化

使用人B细胞系RI-1在体外评估荧光标记的CFZ533和rCD154的内化(Th’ng等人,1987)。使用CD40敲除RI-1细胞系评估CFZ533内化的CD40依赖性。使用

图像流式细胞仪(默克集团(Merck KHaA)，达姆施塔特市(Darmstadt))，根据制造商的说明来评估内化，并使用

软件分析数据。

体内研究

单剂量药物代谢动力学/药物效应动力学(PK/PD)研究利用生物制品治疗7.5-8.5岁(6.5±2.6kg)的初试食蟹猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))和来自菲律宾的人工饲养的食蟹猴(Siconbrec，马卡蒂市(Makati City)，菲律宾)。根据瑞士联邦动物保护法(动物许可证BS#1900、BS#1495)进行动物处理、护理、药物治疗和血液采样。对于强化免疫实验，我们利用来自德国明斯特(Muenster)的科文斯实验室股份有限公司(CovanceLaboratories GmbH)进行的毒理学研究中的动物(手稿在制备中)。该研究是根据授权的研究方案和当地标准操作程序进行的，严格遵守有关动物福利法和公认的动物福利标准的国家法律规定。

在PK研究中，将CFZ533以计算的单剂量16.2(5532)、18.5(5531)和20(5530)mg/kg施用三只动物。对血液进行取样以分析CFZ533血清浓度、外周T和B淋巴细胞的数量、以及外周B细胞上的CD40被CFZ533占用。对于强化TDAR实验，分别在研究第8天(引发)和第43天(强化；在CFZ533治疗期间)用在明矾中的钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)对动物进行免疫。在引发免疫和强化免疫前一天以及在引发免疫和强化免疫后的第7天、第14天和第21天对血清取样。使用食蟹猴抗KLH IgM/IgG参考血清作为标准，用夹心ELISA测定KLH特异性IgM/IgG滴度。如上所述进行PK评估。有关PK和TDAR实验的更多详细信息，请参阅补充材料。

生发中心的组织学分析

将福尔马林固定的、包埋在石蜡(FFPE)中的脾脏和淋巴结(腋窝、下颌和肠系膜)切片用苏木精和伊红以及具有以下标志物的间接免疫过氧化物酶法(来自达科公司(Dako)的HRP+DAB)染色：抗CD20抗体(M0755，达科公司)、抗CD8抗体(RM-9116-SO，Medac公司)和Ki67(M7240，达科公司)。评估所有载玻片并根据染色强度(阴性至强烈)进行分级。另外，还描述了组织内任何免疫组织化学染色的细胞的染色模式和分布。

2.结果

CFZ533结合人CD40并抑制rCD154诱导的多种表达CD40的细胞类型的活化

表2表明，CFZ533对重组人CD40的KD通过表面等离子共振测定为0.3nM，因此这与其亲本抗体HCD122(CFZ533的野生型IgG1形式)非常相似。

表2.HCD122和CFZ533对人CD40的结合亲和力(KD)和动力学。

	HCD122	CFZ533
			K<sub>D</sub>[M]	4.67±1.00x10<sup>-10</sup>	3.05±0.26x10<sup>-10</sup>
k<sub>a</sub>[1/Ms]	2.84±0.67x10<sup>5</sup>	3.13±0.73x10<sup>5</sup>
			k<sub>d</sub>[1/s]	1.26±0.03x10<sup>-4</sup>	0.93±0.14x10<sup>-4</sup>
Chi<sup>2</sup>[RU<sup>2</sup>]	0.17-0.19	0.10-0.15

图3A显示CFZ533对rCD154和IL-4介导的来自多个供体(分别为5、32和6个供体)的人全血培养物、PBMC和分离的扁桃体B细胞的增殖(3H-TdR)的影响。数据呈现为标准化的cpm(rCD154+IL-4＝100；点线)。图3B显示在过夜培养后，CFZ533抑制由rCD154刺激的moDC进行的TNF-α产生。图3C显示CFZ533的延迟添加抑制了rCD154+IL-4介导的人PBMC增殖。在用rCD154+IL-4刺激之前一小时、同时、或之后两小时和六小时，将CFZ533添加到人PBMC中，并在随后的四天培养之后评估增殖(3H-TdR)(点线和虚线表示rCD154+IL-4和细胞加培养基对照)。对于所有数据，将rCD154诱导的刺激的读数的平均值和SD绘制为对数转换的CFZ533浓度的函数。在适当的情况下，使用基于线性回归的曲线拟合来确定IC50值。图3D显示由CFZ533进行的CD40占用和途径阻断之间的关系。在剂量调节的CFZ533存在下，将来自10个供体的人全血用rCD154培养过夜。评估了途径活化程度(B细胞上的％CD69pos)和CD40占用程度(用AlexaFlour 488标记的CFZ533染色)。空心圆和实心圆表示被CFZ533占用的CD40的百分比和CD20pos B细胞上表达CD69pos的细胞百分比，分别作为对数转换的CFZ533浓度的函数(显示平均值和SD)。点线和虚线表示在所有供体中标准化的rCD154诱导的CD69表达和细胞加培养基对照培养物。

图3A表明CFZ533完全抑制来自多个供体的rCD154诱导的人全血培养物、PBMC以及纯化的扁桃体B细胞的增殖，其效力(IC50值)分别为0.024μg/ml(0.16nM)、0.017μg/ml(0.12nM)和0.071μg/ml(0.47nM)。另外，我们可以证明CFZ533完全阻断了由原代单核细胞源树突细胞(moDC)进行的rCD154诱导的TNF产生，IC50为0.04μg/ml(0.27nM)(图3B)。

如先前公布的，CFZ533抑制rCD154诱导的来自食蟹猴的PBMC的增殖(Cordoba等人,2015)。CFZ533以相似的效力抑制rCD154诱导的来自人、恒河猴和食蟹猴的PBMC的增殖(IC50分别为0.02、0.03和0.01μg/ml)，并且还能以约0.2μg/ml的EC50值结合来自这些物种的B细胞上的CD40，参见表3。

表3.CFZ533在人和NHP中的细胞结合和功能特性。

以上细胞数据来源于在rCD154之前或同时添加CFZ533的实验，表明抗体可以阻止内源配体的结合。我们还可以证明在启动含有rCD154的白细胞培养后长达6小时添加CFZ533导致细胞活化的完全抑制而效力损失最小，表明CFZ533可以从CD40置换内源配体(图3C)。

我们还想评估CFZ533的CD40占用程度与途径抑制程度之间的关系。为此，我们同时评估了来自多个供体的全血中由CFZ533进行的CD40受体占用和rCD154诱导的CD69。图3D表明由CFZ533进行的至少90％CD40受体占用是完全阻断CD40途径活化所必需的。使用CD23和CD54作为CD40途径活化的读数，还观察到受体占用和途径抑制之间的类似关系(数据未显示)。

CFZ533在体外表现出最小的刺激潜力

使用全血中B细胞上的活化分子CD69的增殖和上调来评估CFZ533刺激人白细胞活化的能力。图4A显示了以下的数据：i.将来自多个供体(n＝13)的人全血与剂量调节的CFZ533一起孵育，并在培养三天后评估增殖(³H-TdR)；ii.将来自多个供体(n＝26)的人PBMC与剂量调节的CFZ533一起孵育，并在培养三天后评估增殖(³H-TdR)。对于这两个图，数据呈现为标准化的cpm的平均值和SD，作为对数转换的CFZ533浓度的函数(rCD154+IL-4＝100，点线；细胞加培养基＝0，虚线)。图4B显示CFZ533在另外的刺激存在下不诱导人PBMC增殖。在IL-4(i)或抗IgM F(ab’)2(ii)存在下，用剂量调节的CFZ533对人PBMC进行刺激3天。3H-TdR(cpm)的平均值和SD显示为对数转换的CFZ533浓度的函数。在图4C中，显示了如何将人全血(41个供体)用无刺激、CFZ533、同种型对照或rCD154培养过夜，并通过FACS评估B细胞上的CD69表达。每个点代表来自单个供体的数据，其中平均％CD69值由水平红线表示。

图4A显示与rCD154相比，CFZ533不能诱导经由人全血(1:10稀释)或PBMC的胸苷掺入。CFZ533无法诱导增殖的能力不受添加另外的共刺激(如IL-4或抗IgM)的影响(图4B)。我们还可以证明CFZ533不能诱导来自多个供体的全血中的B细胞上CD69的上调，这再次与rCD154相反(图4C)。最后，CFZ533不能通过表达CD40的单核细胞源DC或人脐静脉内皮细胞(HUVEC)诱导细胞因子产生(数据未显示)。

CFZ533不介导细胞耗竭

CFZ533被工程化为含有N297A突变(之前已证明其消除FcγR结合)，导致不能介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。与HCD122(野生型IgG1)相比，CFZ533不能结合FcγRIIIA(表4)，并且我们想要调查这种结合的缺乏如何影响CFZ533介导细胞耗竭的能力。

表4.HCD122和CFZ533对人FcγRIIIA的结合亲和力(k_a[1/M])

FcγR种类	HCD122(野生型IgG1)	CFZ533(N297A IgG1)
			人FcγRIIIA 158V	1.72x 106	n.d.
人FcγRIIIA 158F	6.99x 105	n.d.

n.d.未检出

图5A显示在剂量调整的CFZ533或50μg/ml利妥昔单抗存在下，来自孵育72小时的人全血培养物的数据。基于落入淋巴细胞FSC/SSC门内的CD45pos和CD19pos事件确定B细胞数。各个抗体浓度的结果计算为参照未处理样品的剩余B细胞百分比，并作为对数转换的抗体浓度的函数绘图(调节至100％并显示为点线)。数据表示八个独立供体的平均值和SD。图5B显示了用不同浓度的利妥昔单抗或CFZ533和固定浓度的兔补体孵育的Raji B细胞的结果。2小时后分析Raji细胞的浓度依赖性杀伤，其中通过使用荧光素酶测定每个孔中的ATP浓度来测量细胞的存活力。结果呈现为同种型对照标准化的相对荧光素酶单位(RLU)，作为对数转换的抗体浓度的函数。

图5A表明，耗尽的抗CD20抗体利妥昔单抗能够消除人全血中约80％的B细胞，而CFZ533不能介导任何细胞耗竭。另外，与利妥昔单抗相比，CFZ533不能介导Raji B细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)(图5B)。

CFZ533以CD40依赖性方式被B细胞内化。

我们接下来想要调查CFZ533是否可以被表达CD40的人B细胞系RI-1内化。图6A表明，与非允许条件(4℃)相比，rCD154在允许条件(37℃)下被内化，其中可以在质膜上观察到rCD154的弱染色。CFZ533也被内化，尽管在37℃确实存在残留的膜染色。图6B表明rCD154的内化程度似乎大于对CFZ533观察到的内化程度。使用CD40敲除RI-1B细胞系，我们可以证明CFZ533(图6C)和rCD154(数据未显示)的结合和内化是CD40依赖性的。

图6A显示用AlexaFlour 488标记的rCD154或CFZ533在37℃或4℃培养3小时的各个RI-1B细胞的代表性图像。图6B.在允许条件下CFZ533和rCD154的相对内化侵蚀(减去非允许性侵蚀值)。每个点代表来自单个实验的数据，并且总体平均值表示为水平红线。图6C.用Alexa488标记的CFZ533在37℃培养3小时的各个表达CD40的细胞或CD40敲除RI-1细胞的代表性图像。在所有实验中，将细胞用AlexaFlour647标记的CD45进行共染色以标记细胞膜。

CFZ533在非人灵长类动物中的药物代谢动力学特性

图7A.以16.2(5532)、18.5(5531)和20(5530)mg/kg静脉内的计算剂量施用单剂量后，三只食蟹猴中CFZ533的血清浓度。图7B.CD40占用：可用CD40百分比(i)和总CD40百分比(ii)C。外周B/T细胞：单次剂量后外周血B细胞的百分比。第0天是施用CFZ533的时间。

以上数据表明CFZ533结合NHP CD40，并且能以相似的效力抑制rCD154诱导的NHPB细胞的活化。这表明食蟹猴和恒河猴是调查CFZ533 PK和PD之间关系的体内研究的适合物种。图7A中的数据显示单次静脉内剂量的CFZ533(计算的剂量为16.2、18.5和20mg/kg)后三只食蟹猴的PK曲线。对于靶向内化膜结合抗原的单克隆抗体而言典型的(Mager等人2006和Ng等人2006)，CFZ533浓度的时间进程表现出明显的靶标介导的分布，这导致非线性PK曲线以及浓度依赖性清除率和半衰期。在PK曲线中观察到的拐点是靶标接合的标志，并且其与CD40对CFZ533的总体清除的贡献增加以及更短的半衰期相关。此外，PK曲线中的拐点与观察到CD40饱和度下降的时间一致(图7B，i)。当CFZ533进行更快速消除时，这发生在约10-20μg/ml。在所有动物中，细胞上没有损失CD40受体表达(图7B，ii)。此外，尽管在整个研究中观察到一些变化，但CFZ533没有耗尽外周血B细胞(图7C)或T细胞(数据未显示)。

CFZ533抑制强化T细胞依赖性抗体产生

图8A显示了用于评估CFZ533对强化TDAR的影响的实验设计示意图。x轴下方的箭头突出显示初级和次级KLH免疫。单剂量10mg/kg CFZ533的计时如上所示。星号表示测量抗KLH IgG和/或CFZ533水平的时间点。图8B.每个图显示个体动物的抗KLH IgG(实心符号)和血浆CFZ533水平(对数标度；完整线)。出于比较性目的，将来自对照动物的平均抗KLH IgG水平(空心符号)覆盖在每个图上。图8C.使用CFZ533，对来自1mg/kg/周皮下多剂量的26周研究中的恒河猴的mLN中的生发中心(Ki67染色)进行组织学分析。显示了来自六只动物的代表性mLN切片：(i)以及对照图像(ii)，iii。在治疗期结束时，来自个体动物的给药间隔内的平均稳态CFZ533血清浓度。

CD40阻断的预期中靶的PD效应是对TDAR的抑制(Kawabe等人1994)。CFZ533抑制NHP和人的初级TDAR，而且我们也想调查这种抗体对强化TDAR的影响。该实验设计概括于图8A中。简言之，在研究第28天(引发)用在明矾中的KLH对四只恒河猴进行免疫，之后是在研究第1天单次静脉内剂量的CFZ533 10mg/kg，然后在研究第15天进行第二次KLH免疫。

图8B显示了与来自免疫对照(无CFZ533)的数据相比，CFZ533对四只个体动物中的抗KLH IgG强化应答的影响。在CFZ533的PK曲线中存在动物间可变性，在1号动物和3号动物中观察到更快速的CFZ533消除。在2号动物和4号动物中观察到更长时间的较高血浆浓度。有趣的是，这些动物在研究第15天表现出对抗KLH IgG(和IgM；数据未显示)强化应答的完全抑制(注意到所有动物都产生对KLH的初级TDAR)。相比之下，在更快清除CFZ533的动物中观察到抗KLH IgG应答(尽管有一些延迟)(与1号动物相比，3号动物的延迟更高)，特别是在第二次KLH免疫时血清CFZ533水平低于约40μg/ml时。如先前用CFZ533在移植的(Cordoba等人2015)和未移植的动物(图7B)的体内实验所观察到的，未观察到外周B细胞耗竭(数据未显示)。

以上结果表明高于约40μg/ml的CFZ533血清浓度是完全抑制NHP中强化TDAR所必需的。我们想进一步调查CFZ533暴露与CD40途径相关的组织药物效应动力学效应之间的关系。在26周的毒理学研究结束时，在皮下1mg/kg/周CFZ533下，我们对肠系膜淋巴结(mLN)中的GC进行组织学和分子分析。图8C(i)表明在给药的六只动物中，我们可以观察到三个个体中对GC的完全抑制，而在剩余动物的mLN中仍然可以观察到GC。图8C(iii)表明至少38μg/mL的血清浓度(给药间隔内的平均稳态浓度)与淋巴结皮质B细胞区域中的GC发育的完全抑制相关，而在低于20μg/mL的血清浓度下观察到对GC的不完全抑制(动物26842)或无抑制(动物26772和26837)，尽管观察到全血CD20^pos B细胞上的完全CD40占用(动物26842和26772；数据未显示)。没有证据表明外周B细胞耗竭(数据未显示)。

讨论

正在开发CFZ533作为实体器官移植和与CD40-CD154共刺激途径调节异常相关的自身免疫性疾病的潜在疗法。在这里，我们描述了CFZ533在CD40途径相关的体外和体内模型系统中的功能特性的表征，并且研究了CFZ533暴露与PD效应之间的关系。

CFZ533能够结合CD40并完全阻止rCD154诱导的途径对不同的人免疫细胞类型(包括B细胞和DC)的活化。另外，似乎CFZ533需要超过90％的CD40占用以完全阻断全血中的途径活化。总的来说，这些数据表明CFZ533具有阻断CD40途径依赖性效应子功能的潜力，而与细胞类型无关，假设获得了足够的受体占用。我们的数据还表明，在PBMC中，CFZ533能够从CD40置换预先结合的rCD154，这表明mAb和生理配体的表位可能重叠；这一想法正在结构研究中进行调查。

在体内，在单剂量PK研究中观察到CFZ533的浓度依赖性清除率和半衰期。该PK曲线表明CD40受体表达影响CFZ533的消除。在低CFZ533浓度(即不完全的靶标饱和度)下，CD40对CFZ533总体清除率的贡献升高，并且半衰期比通常观察到的IgG1型抗体的半衰期略短。在对应于完全靶标饱和度(和完全功能途径抑制)的较高浓度下，该受体对CFZ533的总体清除率的贡献是有限的并且半衰期增加。CFZ533的靶标介导的清除是与体外观察到的CD40介导的CFZ533的内化一致的，这之后可能是复合物的溶酶体降解。

来自PK/PD研究的另一个发现证实了CFZ533不能在体内消耗外周B细胞(Cordoba等人2015)。正如所述，CFZ533不能消耗表达CD40的细胞是由于抗体中存在N297A突变(该突变导致铰链区中不存在N-连接的糖基化)造成的，使其不能结合FcγRIIIA或介导ADCC或CDC。进行CFZ533的Fc沉默以防止表达CD40的细胞类型的消耗；鉴于该受体在免疫和非免疫细胞类型上的广泛组织分布(特别是在炎性条件下)，这是特别令人关注的。

除了在NHP肾移植中的功效(Cordoba等人2015)，本文的结果还表明CFZ533完全抑制了强化TDAR。该结果表明记忆B细胞对T细胞依赖性抗原的应答完全依赖于CD40-CD154相互作用。强化应答的抑制程度似乎与CFZ533的浓度有关，其中完全抑制抗原特异性抗体应答需要超过30-40μg/ml的血清水平(在加强后持续至少一周)。当调查CFZ533对肠系膜淋巴结GC的影响时，血清浓度与CD40途径相关的组织PD读数之间的这种关系也得以保持，其中完全抑制GC需要平均稳态血清CFZ533浓度的最小阈值。这些数据指出了在外周药物暴露与组织中靶标相关性PD效应之间建立关系的重要性，以便为给药策略提供信息。正在开发针对各种自身免疫性疾病的几种靶向CD40-CD154共刺激途径的生物制品。除了CFZ533等抗CD40 mAb以外，抗CD154 mAb仍处在临床阶段，尽管存在血栓栓塞事件的潜在风险(Boumpas等人,2003)。最近的结果表明，Fc沉默的和聚乙二醇化的F(ab’)2方法可以消除靶向CD154的抗体的血栓栓塞危险，但是有报道称Fc沉默的抗CD154 mAb可能不太有效。迄今为止，没有证据表明在临床前模型或临床中有与施用多种抗CD40抗体相关的血栓栓塞事件。

总之，我们的数据表明CFZ533是具有最小激动性质的途径阻断性、非耗竭性抗CD40抗体。在足够的药理学相关暴露下，CFZ533能够完全抑制强化TDAR并且抑制生发中心，而不消耗表达CD40的细胞类型。这些数据与肾移植的临床前功效相结合，为CFZ533在选择性自身免疫性疾病和实体器官移植中的潜在临床应用提供了坚实的科学依据。

实例8.CD40途径抑制和化脓性汗腺炎

对人类HS患者皮肤样品的分析显示，与健康皮肤相比，CFZ533的靶标(CD40)以及配体(CD40LG)在RNA和蛋白质水平上都更为丰富。进一步的实验显示，疾病相关细胞因子(TNF、IFNG)可以在构成皮肤主要成分(角质形成细胞和真皮成纤维细胞)的细胞类型中诱导CD40表达，并且在HS患者中反映出随后的CD40LG诱导的信号传导。另外，可以显示在患病的组织中形成了具有生发中心的三级淋巴样结构，并且在HS患者的血清中可以发现自身抗体。综合证据表明，所述CD40途径是活跃的且与疾病有关，因此对其的抑制将使HS患者受益。

1.材料与方法

转录组学

19例HS皮肤活检和8例健康皮肤活检的转录组学分析如下：从速冻的皮肤组织中，使用来自凯杰(Qiagen)RNeasy迷你试剂盒的推荐缓冲液制备匀浆。根据制造商的方案提取细胞的总RNA。使用高容量cDNA逆转录试剂盒(应用生物系统公司(Applied Biosystems))从相同起始量的RNA制备样品的cDNA。样品由CiToxLAB France在Affymetrix HG_U133_Plus2微阵列上处理。使用GeneSpring 11.5.1(安捷伦技术公司(Agilent Technologies)，圣克拉拉，加利福尼亚州)分析RMA标准化数据，并使用依诺米那公司基础空间关联引擎(Illumina BaseSpace Correlation Engine)软件和凯杰(Qiagen)IPA解释结果。最初，所述数据通过CiToxLAB和在GeneSpring(PCA，杂交对照)中进行标准QC控制。随后，在进一步分析之前，将其针对在任何一种条件下100％的样品中高于20百分位的探针组在表达水平上过滤。

为了创建差异表达的基因列表，在不配对的T检验和Benjamini Hochberg FDR中使用p<0.05选择大于2x，并且在各组之间(即病变与健康之间)存在显著差异的探针组。

组织学

来自瑞士巴塞尔的巴塞尔大学医院，整形与美容外科和手外科接受了来自11名HS患者的27例皮肤活检(16例病灶和11例非病灶)和3例健康志愿者的皮肤活检作为非介入性生物标志物研究(TRI1270397，由EKNZ批准)。

切下3μm厚的石蜡切片，并使用Ventana XP免疫染色剂(罗氏诊断公司(RocheDiagnostics)，瑞士)对CD40(多克隆兔抗CD40抗体：E3702，批号：130507MD，斯普林生物科学公司(Spring Bioscience)，美国)和CD40L(多克隆山羊抗CD40配体/TNFSF5：AF617，批号：BFW0314021，R&D，英国)染色。另外，进行了T细胞的CD3(克隆：SP7，新标志物公司(NeoMarkers Inc.)，美国)、B细胞的CD20(克隆L26，达科公司(Dako)，丹麦)、巨噬细胞的CD68(克隆KP-1，达科公司(Dako)，丹麦)的免疫染色。特定的同种型对照用作阴性对照。使用带有物镜x20或x40的ScanScope XT载玻片扫描仪(Aperio，莱卡生物系统集团(LeicaBiosystems)，瑞士)将所有活检样品数字化。

2.结果

对患者HS转录组的分析显示，与非病变或健康组织的水平相比，HS病变中CD40和CD40LG的mRNA信息水平增加。结果显示在图9中，可以清楚地看到，HS病变样品中的CD40(图9A)和CD40L(图9B)表达强度高于HS非病变样品和健康样品。

如图10所示，免疫组织化学染色显示在真皮中含有生发中心的三级淋巴样结构中CD20阳性B细胞和CD68阳性巨噬细胞(包括多核巨细胞)区域中CD40的表达。此外，CD40L染色主要发生在三级淋巴样结构的生发中心，其中观察到了CD3(T细胞标志物)染色。比例尺指示100μm。

在未显示的数据中，我们发现CD40 mRNA(通过RT-PCR)和蛋白质(FACS)表达可以在角质形成细胞和真皮成纤维细胞中被细胞因子(如TNF和IFNG，这两种成分在HS患者的病变中都丰富)诱导。随后用CD40LG刺激的因此引发的细胞的转录组学分析显示，在HS病变组织中也增加的基因的上调。

另外的数据(未显示)表明HS患者具有自身抗体水平升高，这表明CD40阳性B细胞数量增加和异位生发中心具有对患者的功能性后果。

因此，所披露的根据实施例中任一项所述的CD40拮抗剂和化合物，例如CFZ533，可以在体外、离体使用或掺入药物组合物中使用并在体内施用以治疗HS患者(例如人类患者)。

3.CD40途径抑制

在最近的Cochrane综述中，比较性HS试验的中位治疗持续时间为16周(Ingram等人2016)。这也是阿达木单抗类似安慰剂对照的2期研究的持续时间，阿达木单抗最近已批准用于HS的治疗(Kimball等人2012)，而另一项安慰剂对照试验在非常相似的HS群体中长达24周(Tzanetakou等人2016)。安慰剂治疗可能会对疾病产生某种影响，反映出自然病史，消退至平均影响或部分地由于伴随的药物对受试者更严格的临床管理。在该试验中，如果医学上合理，包括皮肤感染在内，允许局部使用伤口护理以及短期(<2周)抗生素。如果医学上合理，则在安全性随访期内，治疗期结束后，受试者可以接受另外的治疗(根据护理标准)。如果病变需要切口或有限的切除以减轻受试者的负担，则允许这样做，并且必须记录下来。

HS受试者呈现高炎性状态，可能与高CD40表达有关，因此，当在CD40表达可能升高的条件下s.c.施用iscalimab时，负荷期是合理的以克服有效的CD40介导的iscalimab消除。

在pSS受试者的研究CCFZ533X2203中已证明了这一点。在该研究的队列1中(s.c.方案；数据未显示)，由于有效的系统前CD40介导的消除(可能在间质、淋巴毛细血管和/或淋巴结中)，大多数受试者表现出低于预期PK曲线。由于已报道CD40受体在发炎组织的实质中上调，因此CD40受体水平的升高很可能是有效的系统前CD40介导的iscalimab消除的起源。Iscalimab受到靶标介导的消除作用，如果CD40受体未完全饱和，则CD40表达升高与iscalimab的高消除率相关。

在HS受试者中，期望在负荷期间提供600mg s.c.每周一次的方案以在治疗开始时在靶组织中提供快速而完全的CD40-CD40L途径阻断。

在研究CCFZ533X2203中，演示了s.c.方案能够递送类似于队列2(i.v.方案；数据未显示)的稳态谷血浆浓度，并具有克服CD40介导的iscalimab消除的能力，引入了队列3：600mg s.c.每周4次(负荷)，然后300mg s.c.每周9次(维持；数据未显示)。初步数据表明该方案是安全的并且耐受性良好。

在实例9中披露的研究的维持阶段中(从第43天(第7周)至第99天(第15周))，以600mg s.c.每隔一周施用iscalimab(Q2W；5剂量)。

预计600mg Q2W维持方案可递送约160-170μg/mL的稳态谷血浆浓度(图11)，略高于在pSS受试者中研究CCFZ533X2203-队列2(10mg/kg IV方案)中观察到的稳态谷血浆浓度。在研究CCFZ533X2203-队列2中，稳态iscalimab谷血浆浓度为100-120μg/mL与临床功效相关，例如EULAR干燥综合征疾病活动指数的临床改进以及生物学相关生物标志物CXCL13(趋化因子CXC配体13蛋白；生发中心活性的标志物)的抑制。

在HS(一种具有深层皮肤结节/疖子(在载有顶分泌腺的皮肤中)和脓肿的毛囊皮肤疾病)中，iscalimab的组织渗透是关键，与pSS相比，可能需要更高的血浆暴露。

4.化脓性汗腺炎

HS是一种慢性、炎性、瘢痕形成病症，主要累及人体腋窝、腹股沟、乳房下、生殖器肛门和会阴区的擦烂皮肤。三种诊断标准可诊断为HS：典型病变(早期主要病变中深层疼痛结节[盲]疖子、或脓肿、窦道引流、桥接瘢痕和次要病变中的“墓碑(tombstone)”开放粉刺)；典型形貌(腋窝、腹股沟、生殖器、会阴和肛周区域、臀部、乳下和乳间区域)；以及慢性和复发性(Margesson和Danby(2014))。HS的身体范围可以使用Hurley的临床分期在基线进行分类，如下表2所示：

表2：HS的Hurley期。实际上，患Hurley III期的患者可能具有已耗尽的III期，但仍具有活动性I期或II期病变。

HS由毛囊堵塞、导管破裂和继发性炎症组成。患者首先会经历毛囊导管堵塞，随着时间的流逝，这会导致导管泄漏和水平破裂至真皮。当毛囊-毛囊皮脂腺(FPSB)修复失败时，毛囊碎片会刺激三种反应，从而开始HS病程。首先是由先天免疫系统触发的炎症应答，引起化脓和组织破坏，并导致异物反应和广泛瘢痕形成。第二反应导致上皮化的窦道，其可能从源自FPSB单元的干细胞发展而来，所述干细胞在炎症应答引起的破坏中幸存下来。第三，在大多数情况下产生侵入性增生性凝胶物质，其由含有炎性细胞的凝胶组成，并且假定是上述上皮化元件的前体。(参见Margesson和Danby(2014))。如本文所使用的，短语“减慢HS疾病进展”是指降低上述HS疾病病程的任何方面、特别是炎性应答的进展率。在本披露的一些实施例中，用抗CD40抗体的治疗减缓了HS疾病进展。

患者中HS的复发包括丘疹、脓疱或炎性结节、疼痛和瘙痒、脓肿、引流及其任何组合的发展。如本文所使用的，“HS红肿块”(等)被定义为脓肿和炎性结节计数(AN)相对于基线至少增加25％，最小增加两个AN。

在本披露的一些实施例中，根据所披露的方法用抗CD40抗体的治疗预防HS红肿块，降低HS红肿块的严重程度，和/或降低HS红肿块的频次。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，在前16周的治疗期间少于5％、少于10％、少于15％、或少于20％经历红肿块。

如本文所使用的，短语“降低HS红肿块的严重程度”等表示降低HS红肿块的强度，例如减少脓肿和/或炎性结节的数量和/或大小，降低特定红肿块成分的强度(例如减少脓肿和/或炎性结节的数量、大小、厚度等，减少皮肤刺激程度(瘙痒、疼痛)等)，和/或减少红肿块(或其成分)存在的时间。

如本文所使用的，短语“降低HS红肿块的频次”等表示减少HS红肿块的发生率，例如，减少脓肿和/或炎性结节的发生率。通过降低HS红肿块的频次，患者将经历更少的HS复发。可以通过随时间监测患者来评估红肿块的发生率，以确定红肿块患病率是否降低。

如本文所使用的，短语“防止HS红肿块”表示消除将来的HS红肿块和/或红肿块组分。

可以使用各种已知的测量HS疾病状态和/或HS临床应答的方法和工具来评估HS治疗的有效性。一些实例包括，例如，Hurley分期、严重性评估评分系统(SAHS)、Sartorius评分、改良的Sartorius评分、HS医师整体评估(HS-PGA)评分、视觉模拟量表(VAS)或数字评定量表(NRS)评估与皮肤相关的疼痛、皮肤病生活质量指数(DLQI)、基于脓肿和炎性结节的总和(HiSCR)的HS临床应答、简化的HiSCR、EuroQuol-5D(EQ5D)、医院焦虑和抑郁量表、医疗保健资源利用率、化脓性汗腺炎严重程度指数(HSSI)、工作生产率指数(WPI)、炎性体表面积(BSA)、逆向性痤疮严重程度指数(AISI)等(例如，参见Deckers和Prens(2016)Drugs[药物]76:215-229；Sartorius等人(2009)Br.J.Dermatol[英国皮肤病学杂志]161:831-39；Chiricozzi等人(2015)Wounds[创伤]27(10):258-264)。在一些实施例中，本文披露的本发明方法的有效性可以通过以下来评估：HS医师整体评估(HS-PGA)、严重性评估评分(SAHS)、评分数字评定量表(NRS)、皮肤病生活质量指数(DLQI)，基于脓肿和炎性结节的总和(HiSCR)的HS临床应答和/或简化的HiSCR。优选地，本文所披露的HS治疗的有效性可以通过基于脓肿和炎性结节的总和(HiSCR)的HS临床应答和/或简化的HiSCR来评估。

在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现HiSCR。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，到治疗的第16周，至少30％、至少40％、至少50％、至少60％或至少70％实现HiSCR。

在其他实施例中，本文披露的HS治疗的有效性可以通过到治疗的第16周，所治疗的患者中的应答率(即对使用本发明化合物对HS治疗达到HiSCR应答的患者)与安慰剂治疗的患者中的应答率之间的差异来测量。在一些实施例中，如通过HiSCR测量的，应答者比率的差异为至少15％、至少25％、至少30％或至少35％。

用于治疗应答的优选评分系统为HiSCR、简化的HiSCR、NRS(尤其是NRS30)、严重性评估评分系统(SAHS)、HS-PGA、炎性病变计数(脓肿、炎性结节和/或引流性瘘管计数)和DLQI。

化脓性汗腺炎临床应答(HiSCR)是对HS治疗的临床应答的测量。HiSCR对治疗的应答(与基线相比)如下：1)脓肿和炎性结节至少减少50％，并且2)脓肿的数量没有增加，并且3)引流性瘘管的数量没有增加。如本文所使用的，“简化的HiSCR”或“sHiSCR”是指在评估病变进展时不包括脓肿计数相对于基线的改良HiSCR。在优选的实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现简化的HiSCR。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，到治疗的第16周，至少40％、至少50％、至少60％、或至少70％实现简化的HiSCR。

可以使用数字评定量表(NRS)评估疼痛。在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现改进的NRS。NRS30定义为基线评分为3或更高的患者相比于基线在皮肤疼痛的患者整体评估(PGA)中与基线相比疼痛减轻至少30％，并且至少降低1个单位。在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现NRS30。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，到治疗的第16周，至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、或至少60％实现NRS30。在该实施例的优选方面，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，到治疗的第16周，至少30％实现NRS30。在一些实施例中，应答于根据所要求保护的方法的治疗，最早在初始给药后1周，患者经历通过VAS或NRS测量到疼痛迅速减轻。

严重性评估评分系统(SAHS)由Hessam S、Scholl L、Sand M等人(2018)描述。可以通过SAHS评分评估HS的严重程度，为此对以下项目进行了调查：累及区域的数量(左腋窝、右腋窝、左乳下、右乳下、乳间或胸部、腹部、阴阜、左腹股沟、右腹股沟、生殖器、肛周或会阴、左臀肌、右臀肌及其他[例如，颈部、耳后])，除瘘管(ILOF)之外的炎性病变和/或疼痛病变的数量以及瘘管的数量。这些由医师评分的项目由2个患者报告的项目完成：询问患者在过去4周内新疖子或现有疖子红肿块爆发的数量，并在数值评定量表上评估其在日常活动(例如坐着、移动、或工作)中最有症状病变的当前疼痛严重程度(NRS)。SAHS评分是上面所有收集的信息的综合评分。轻度HS的定义是SAHS评分为4或更低。中度HS的定义是SAHS评分为5到8，重度HS的定义是SAHS评分为9或更高。

在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现改进的SAHS评分。在一些实施例中，应答于HS治疗，HS患者的SAHS评分实现与基线相比降低至少一分。在其他实施例中，应答于HS治疗，HS患者的SAHS评分实现与基线相比降低了至少两分或降低了至少3分。优选地，在用抗CD40抗体治疗之前，所述SAHS评分在基线至少为4。

DLQI是最成熟的皮肤病生活质量检测工具。它由有关在过去一周皮肤疾病对感觉和日常生活活动不同方面的影响的问题组成。每个问题的评分从0(根本没有)到3(非常多)。最高评分总计30分，其中0–1被视为无影响，2–5被视为影响较小，6–10被视为中度影响，11–20被视为影响较大，而21–30被视为对患者的生活造成极大影响。(参见Finlay和Khan(1994)Clin Exp Dermatol[临床实验皮肤病学]19:210–16)。在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现改进的DLQI。

在一些实施例中，应答于根据所要求保护的方法的治疗，最早在初始给药后1周，患者经历通过标准CRP测定法或高灵敏度CRP(hsCRP)测定法测量到CRP迅速降低。如本文所使用的，“C反应蛋白”和“CRP”是指血清C反应蛋白，一种通常用作对炎症的急性期应答的指标的血浆蛋白。血浆中的CRP水平可以任何浓度给出，例如mg/dl，nmol/L。CRP的水平可以通过多种标准测定法来测量，例如放射免疫扩散、电免疫测定法、免疫比浊法、ELISA、比浊法、荧光偏振免疫测定法和激光浊度测定法。CRP测试可采用标准CRP测试或高灵敏度CRP(hs-CRP)测试(即能够使用激光浊度测定法测量样品中低水平CRP的高灵敏度测试)。可以从各种公司购买用于检测CRP水平的试剂盒，例如凯尔生物技术公司(Calbiotech,Inc)、开曼化学公司(Cayman Chemical)、罗氏诊断公司(Roche Diagnostics Corporation)、阿巴酶公司(Abazyme)、贝林公司(DADE Behring)、亚诺法公司(Abnova Corporation)、安尼亚拉公司(Aniara Corporation)、生物定量公司(Bio-Quant Inc.)、西门子医疗诊断公司(Siemens Healthcare Diagnostics)等。

Sartorius HS评分(也称为HS评分或HSS)是通过计数HS患者的累及区域、结节和窦道而得出的。(Sartorius等人(2003)Br J Dermatol[英国皮肤病学杂志]149:211–13)。改良的Sartorius HS评分是对HSS原始版本的修订，其中做了一些简化，使其使用起来更加实用，例如，评分中包括的特定病变更少，每个参数给出的分数变化等。(Sartorius等人(2009))。在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现改进的改良的Sartorius HS。

HS医师整体评估(HS-PGA)是基于HS病变(脓肿、引流性瘘管、炎性结节和非炎性结节)数量的6个等级的评估量表(评分范围为0-5)。(Kimball AB、Kerdel F、Adams D等人Adalimumab for the treatment of moderate to severe hidradenitis suppurativa:aparallel randomized trial.[阿达木单抗用于治疗中度至重度化脓性汗腺炎：一项平行随机试验。]Ann Intern Med[内科学年鉴]2012；157:846–855)。在一些实施例中，HS患者应答于HS治疗而实现改进的HS-PGA。在一些实施例中，应答于HS治疗，HS患者的HS-PGA评分实现与基线相比降低至少2分。优选地，在用抗CD40抗体治疗之前，所述HS-PGA评分在基线至少为3。

在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，在第16周时对治疗有应答的患者(例如，在第16周时达到HiSCR或简化的HiSCR的患者)的至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％在治疗结束后3个月或治疗结束后6个月或治疗结束后12个月具有持续应答。在该实施例的另一方面，在第16周时对治疗有应答的患者(例如，在第16周时达到HiSCR或简化的HiSCR的患者)的至少40％或至少50％在治疗结束后3个月具有持续应答。优选地，在第16周时对治疗有应答的患者(例如，在第16周时达到HiSCR或简化的HiSCR的患者)的至少70％在治疗结束后3个月具有持续应答。如本文所使用的，术语“持续”是指在给定时间内基本上保持结果或目标(例如，减轻疼痛、减轻炎症)。

病变相关的瘙痒可以通过患者调查来评估。要求患者将病变相关的瘙痒从0(无瘙痒)至10(更糟的可能瘙痒)进行评分。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，瘙痒评分改进至少2分，优选至少3分。此外，当与安慰剂组比较时，治疗组与安慰剂组之间的差异为至少3分。

由病变引流引起的气味可以通过患者调查来评估。要求患者将由病变引流所引起的气味从1(无气味)、2(少量气味)、3(中度气味)到4(大量气味)进行评分。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，瘙痒评分改进至少1分，优选至少2分。此外，当与安慰剂组比较时，治疗组与安慰剂组之间的差异为至少1分。

HS对完成工作能力的影响可以通过患者调查来评估。要求患者将HS影响完成工作的能力的程度从1(完全没有)、2(一点)、3(中等)、4(很大)到5(无法完成任何工作)进行评分。在一些实施例中，当根据所披露的方法治疗HS患者群体时，瘙痒评分改进至少1分，优选至少2分。此外，当与安慰剂组比较时，治疗组与安慰剂组之间的差异为至少1分。

实例9.一项随机，受试者和研究人员双盲，安慰剂对照和多中心研究，以评估 CFZ533药物对中度至重度化脓性汗腺炎患者的功效和安全性

以下提供了详细的临床试验设计，以证明抗CD40抗体CFZ533的功效。

受试者和研究者的双盲允许对主观读数进行无偏评估，例如HS的病变计数或整体HS-PGA评分以及不良事件。

进行了一项随机、受试者和研究者双盲、安慰剂对照、多中心和平行组研究，以评估几种活性治疗化合物(例如抗CD40抗体CFZ533)在中度至重度HS受试者中的功效、安全性和耐受性。经过约4周的筛选期后，计划治疗期为16周，然后进行约12周的安全随访。给予受试者600mg iscalimab(2次2mL的注射；每周一次，然后每两周一次)s.c.或其相应的安慰剂(2x 2mL)s.c.。

这项研究包括的受试者是年龄在18至65岁的成年男性和女性，表现为诊断为中度至重度HS伴随复发性炎性病变持续至少12个月。对于要包括在研究中的受试者的要求是他具有至少5个炎性病变。基线评估可以从第负7天开始，以允许在第1天治疗之前的第负1天完成评估。在给药和满足合格标准之前，所有基线安全性评估结果必须均可用。使用集中式交互式应答技术(IRT)系统进行随机化。

治疗16周后，选定的主要临床终点为简化的HiSCR(化脓性汗腺炎临床应答)。

在第113天(第17周)，在进行安全性和其他评估之后，所有受试者均进入随访期，未施用任何药物。如果医学上合理，并且未鉴定出潜在的安全隐患(在与申办者讨论之后)，则在此随访期内，受试者可以接受以前禁止的药物。

在第141天(第21周)和第197天(第29周)的随访中进行安全性和功效评估。收集药代动力学(PK)和药效学(PD)参数。对于研究者和受试者，维持双盲直到研究结束。研究随访的结束发生在第197天(第29周)，其包括完成研究评估然后从研究中解脱出来。

约有45例受试者是随机化的，其中30例在活性药物组，15例在安慰剂组。在第1天，通过受过训练的现场工作人员通过皮下注射(s.c.)施用一剂量的600mg的iscalimab或匹配的安慰剂(2次注射，每次2mL)。将进行临床评估以及PK、PD、IG、生物标志物和安全性评估。受试者将在完成所有评估后的同一天从现场出院，条件是没有安全性问题。首次施用后，应在现场观察受试者的即时注射部位反应至少一个小时，或更长时间(由研究者决定)。

受试者将返回研究中心以在第8天(第2周)、第15天(第3周)、第22天(第4周)和第29天(第5周)每周一次接受s.c.剂量的600mg iscalimab或匹配的安慰剂(与第1天时接受的相同)。

第5周后，受试者将在第43天(第7周)、第57天(第9周)、第71天(第11周)、第85天(第13周)和第99天(第15周；最后一次剂量)每隔一周接受600mg s.c.iscalimab。

在这些随访期间将进行安全性和选择有效性评估，并将收集PK/PD/IG/生物标志物样品。

主要目的是显示与安慰剂相比，在16周的治疗后的HS受试者中，抗CD40抗体CFZ533治疗的初步功效。在16周的治疗期后，进行12周的随访期以观察16周的治疗后该作用的可持续性可以维持或提高。

基于这样的事实，计划进行2:1的随机化，以有利于暴露于活性药物，同时限制受试者对安慰剂的暴露。

该研究包括多个临床终点，以更好地评估这些选定终点的特性：

对于本研究，选择了简化的HiSCR(从Kimball 2014改良)作为主要终点。简化的HiSCR定义为脓肿加炎性结节总数减少50％，而引流性瘘管未增加。

HS的炎性病变在典型的解剖区域将被计为单个病变(炎性结节、脓肿和引流性瘘管)。除计数外，还将使用整体评估量表(化脓性汗腺炎-医师整体评估或HS-PGA)以及综合评分(化脓性汗腺炎评分严重程度评估或SAHS)。

将使用若干患者报告的结局，包括皮肤病生活质量指数(DLQI)。最后，从受试者的角度来看，与皮肤相关的疼痛是最重要的症状，因此包括疼痛的数值评定量表(NRS)。

1.有关临床评估的另外的信息：

HS-PGA(化脓性汗腺炎-医师整体评估)：该评分将用作评估HS的探索性目标，并在Kimball AB、Kerdel F、Adams D等人(2012)中使用和描述。

所述SAHS评分是综合评分(Hessam S、Scholl L、Sand M等人(2018))，并且将从收集的炎症病变计数、瘘管计数和NRS疼痛信息中得出。另外，将在这两个队列中收集解剖区域和新的或存在红肿块的疖子。

皮肤疼痛-NRS(疼痛的数值评定量表)：阿达木单抗研究中使用了针对皮肤相关疼痛的NRS(Kimball等人(2016))，并将其用作与皮肤或HS相关的疼痛(其是患者负担最大的负担之一(Matusiak等人(2017)))。与HS相关的疼痛将记录在最近24小时内的平均值和最坏时值(在最近24小时内)。

其他患者报告的结局(PRO)将包括瘙痒、疲劳和工作障碍以及皮肤病生活质量指数(DLQI)和与皮肤病相关的生活质量(QoL)工具(具有在许多国家和语言中提供经过验证的评分)方面。它包括患者整体评估。

2.研究目标和终点

一个或多个主要目标与一个或多个主要目标相关的终点

·为了证明抗CD40抗体·16周的治疗后，通过简化的化脓CFZ533与安慰剂相比在中度性汗腺炎临床应答(HiSCR)评估达到至重度炎性化脓性汗腺炎(HS)临床应答的患者比例

患者中的功效

一个或多个次要目标与一个或多个次要目标相关的终点

·评估抗CD40抗体·不良事件的数量和严重程度CFZ533在中度至重度化脓性·安全实验室、生命体征和心电图汗腺炎(HS)患者中的安全性(ECG)参数变化的发生率和耐受性·在基线时的身体检查和生命体征，并反复进行直至研究完成随访

·评估抗CD40抗体·化脓性汗腺炎-随时间的医师CFZ533相比于安慰剂随时间整体评估(HS-PGA)评分对临床结局评估的影响·随时间的炎性结节计数

·随时间的脓肿计数

·随时间的引流性瘘管计数

·随时间的非炎性结节计数

·评估抗CD40抗体·在经16周的治疗内经历至少一CFZ533相比于相应的安慰剂个红肿块的患者比例减少HS红肿块的作用红肿块的定义是相对于基线总脓肿和炎性结节计数(AN计数)至少增加25％，最少增加2AN。

·评估抗CD40抗体·皮肤病生活质量指数(DLQI)CFZ533与安慰剂相比对患者·患者整体评估报告的结局的影响·基线皮肤疼痛NRS≥3的患者中在16周的治疗后达到NRS30的患者比例

·在过去四周内新疖子或现有疖子红肿块爆发的数量。

3.关键入选标准

·筛查前至少12个月临床诊断为HS的年龄在18至65岁之间的男性和女性受试者

·总计至少5个炎性病变，即脓肿和/或炎性结节，和

·不超过10个瘘管，和

·HS病变至少累及两个解剖区域

·受试者的体重必须至少为50Kg(包括端值)

4.关键排除标准

·在筛选时、或登记后30天内或登记的5个半衰期内或直到期望的药效学作用恢复到基线(以时间较长者为准)时使用研究药物；或者如果当地法规要求的更长的时间。

·在随机化/首次治疗之前的最后6个月内使用IL12和IL23阻断性生物制品，例如优特吉努单抗或谷瑟库单抗。

·在12个月内使用B细胞靶向或B细胞消耗生物制品或类似物，如利妥昔单抗或belilumab；对于较早接受这些药物的患者，B细胞计数必须在正常范围内。

·在随机化/首次治疗之前3个月或5个半衰期(以时间较长者为准)内使用上述以外的生物免疫调节剂(例如，阿达木单抗、苏金单抗、etanercept、infliximab等)；

·在12个月内使用利妥昔单抗或belilumab；

·在随机化之前的最后4周内使用针对HS的任何全身性治疗(例如维甲酸或其他免疫调节疗法，例如氨甲蝶呤、环孢霉素A、皮质类固醇)。

·最近6个月内使用环磷酰胺

·在随机化/首次治疗之前的最后一周使用全身性抗生素治疗HS

·如果使用安体舒通或其他抗雄激素药(非那雄胺、乙酸赛普龙等)(针对HS)，则只有在最近3个月内剂量稳定且计划在研究期间继续的患者才有资格。

·在随机化/首次治疗之前的最后4周内，对HS进行手术治疗。手术治疗不包括偶发的切除活检

·在3个月内接受任何高剂量皮质类固醇注射(>1mg/kg)

5.治疗

研究药物iscalimab及其相应的匹配安慰剂由诺华公司制备，并以双盲药物试剂盒的形式提供至研究地点。研究治疗的存储和管理要求的详细信息、以及受试者编号、处方/分配和服用研究治疗的说明书，在《现场操作手册》/《药房手册》(Site OperationsManual/Pharmacy Manual)中进行了概述。

对于iscalimab，所提供药物的剂型是“即用型”缓冲无菌水溶液，也称为“CFZ533注射用浓缩液(小瓶中的液体)”。所述溶液含有150mg/ml的iscalimab和赋形剂L-组氨酸、蔗糖和聚山梨酯20，pH 6.0±0.5。为这项研究选择的安慰剂对照是一种含有无活性的赋形剂的匹配组合物的溶液。

受试者将接受600mg iscalimab(2次2mL的注射；每周一次，然后每两周一次)s.c.或其相应的安慰剂(2x 2mL)s.c.。

受试者将以2:1的比例随机化至研究治疗组或其相应的安慰剂组。最长治疗时间不会超过16周。

列举的实施例

1.一种治疗人受试者中的化脓性汗腺炎的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效剂量的CD40拮抗剂。

2.根据实施例1所述的方法，其中所述CD40拮抗剂是选自下组的抗CD40抗体，该组由以下组成：

d)抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区；以及

e)抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区。

3.根据实施例1或2所述的治疗方法，其中所述抗体包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQID NO:12的轻链氨基酸序列。

4.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中皮下或静脉内、或者皮下或静脉内的组合施用所述抗体。

5.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中以约3mg至约30mg活性成分/千克人受试者的剂量施用所述抗体。

6.根据实施例5所述的方法，其中所述剂量为约10mg活性成分/千克人受试者。

7.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中以约150mg至约600mg活性成分，如约300mg活性成分的剂量施用所述抗体。

8.根据实施例7所述的方法，其中所述剂量为150mg活性成分、300mg活性成分或600mg活性成分。

9.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中以负荷给药和维持给药来施用所述抗体。

10.根据实施例9所述的方法，其中经由皮下注射第一剂量来施用所述负荷给药，并且经由皮下注射第二剂量来施用所述维持给药。

11.根据实施例10所述的方法，其中所述第一剂量在约150mg与约600mg活性成分之间，如约300mg活性成分，并且所述第二剂量在约150mg与约600mg活性成分之间，如约300mg活性成分。

12.根据实施例11所述的方法，其中所述第一剂量是150mg、300mg或600mg活性成分，并且所述第二剂量是150mg、300mg或600mg活性成分。

13.根据实施例10至12中任一项所述的方法，其中所述负荷给药包括至少两次皮下注射，并且所述维持给药由每周一次(Q1W)、每两周一次(Q2W)或每月一次(Q4W)皮下注射组成。

14.根据实施例13所述的方法，其中所述负荷给药的至少两次皮下注射具有不同的剂量。

15.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中所述抗体与一种或多种药学上可接受的载体一起施用。

16.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中根据以下标准之一选择所述患者：

a)所述患者患有中度至重度HS；

b)所述患者是成年人；

c)所述患者是青少年；

d)在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者具有HS-PGA评分≥3；

e)在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者具有至少3个炎性病变；或

f)在用CD40拮抗剂治疗之前，所述患者没有因HS引起的广泛瘢痕形成(<10个瘘管)。

17.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中所述患者在治疗的第16周实现以下至少一项：

a)简化的HiSCR；

b)HS红肿块减少；

c)NRS30；

d)通过DLQI测量的减少≤6；和/或

e)DLQI的改进。

18.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中当所述方法用于治疗患有中度至重度HS的患者群体时，至少40％的所述患者在治疗的第16周实现简化的HiSCR。

19.根据实施例1至11中任一项所述的方法，其中当所述方法用于治疗患有中度至重度HS的患者群体时，或至少25％的所述患者在治疗的第16周实现NRS30应答。

20.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中当所述方法用于治疗患有中度至重度HS的患者群体时，少于15％的所述患者在治疗的16周期间经历HS红肿块。

21.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中用CD40拮抗剂治疗所述患者持续至少16周。

22.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中所述患者最早在所述CD40拮抗剂的第一剂量后一周具有以下中的至少一种：

a)通过VAS或NRS测量的疼痛迅速减轻，

b)使用标准CRP测定法测量的CRP迅速降低。

23.根据上述实施例中任一项所述的方法，其中所述患者在治疗结束后3个月实现持续应答，如通过炎性病变计数、化脓性汗腺炎临床应答(HiSCR)、数值评定量表(NRS)、改良的缝匠肌HS评分、化脓性汗腺炎-医师整体评估(HS-PGA)或皮肤病生活质量指数(DLQI)所测量的。

24.根据实施例23所述的方法，其中所述患者在治疗结束后3个月实现持续应答，如通过简化的HiSCR(sHiSCR)所测量的。

25.包含抗CD40抗体、缓冲剂、稳定剂和增溶剂的液体药物组合物以及用于将所述抗CD40抗体皮下施用至患有化脓性汗腺炎的患者的装置用于制造治疗化脓性汗腺炎的药物的用途，其中将所述抗CD40抗体：

以第一负荷给药皮下施用；并且

此后，以第二维持给药皮下施用，其中所述抗CD40抗体选自由以下组成的组：

抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域；

抗CD40抗体，其包含含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的高变区的免疫球蛋白VH结构域以及含有如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的高变区的免疫球蛋白VL结构域；

抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:13的Fc区；

抗CD40抗体，其包含含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的免疫球蛋白VH结构域和含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的免疫球蛋白VL结构域、以及SEQ ID NO:14的Fc区；

抗CD40抗体，其包含Fc IgG1沉默区；以及

抗CD40抗体，其包含SEQ ID NO:9的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:10的轻链氨基酸序列；或包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列。

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