JP2017530965A - 組換えバチルス細胞および別の生物農薬を含む組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2014年9月17日出願の米国暫定特許出願62/051,911(その内容は、参照によって全体が本明細書に組み込まれる。)に対する優先権を主張するものである。
配列表の公式コピーを、2015年9月14日作成のファイル名「BCS149057WO_ST25.txt」であってサイズが152キロバイトであるASCII様式配列表としてEFS−Webによって電子的に提出しており、本明細書と同時に提出している。このASCII様式文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、参照によってそれの全体が本明細書に組み込まれるものである。
発明の分野
本発明は、相乗的に効果的な量で、(i)(x)少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質またはペプチド;および(y)融合タンパク質をバチルス細胞の外膜に局在させる標的配列を含む融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞;および(ii)昆虫、ダニ、線虫および/または植物病原体に対する活性を向上させる能力を示す、本明細書に開示の特定の微生物および/または個々の株の全ての識別特性を有する本明細書に開示の微生物の特定の株の突然変異体、および/または植物の成長および/または健康、および/または個々の株によって産生される少なくとも一つの代謝物から選択される少なくとも一つのさらに別の生物農薬を含む組成物に関する。さらに本発明は、この組成物の使用ならびに植物成長を促進し、植物の健康を増進し、および/または植物および植物部分の全体的損傷を低減する方法に関するものである。
融合タンパク質は、バチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員の外膜への融合タンパク質を標的とする標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片ならびに(a)植物成長刺激タンパク質またはペプチド;(b)病原体から植物を保護するタンパク質もしくはペプチド;(c)植物のストレス抵抗性を促進するタンパク質またはペプチド;(d)植物結合性タンパク質またはペプチド;または(e)植物免疫系エンハンサータンパク質またはペプチドを含む。バチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員細菌で発現される場合、これらの融合タンパク質は、胞子の外膜層を標的とするものであり、そのタンパク質またはペプチドが胞子の外側に露出するような物理的配置となっている。
参照しやすいように、本明細書で言及されるペプチドおよびタンパク質配列についての配列番号を、下記の表1に挙げてある。
*B.アントラシス(B. anthracis)スターン(Sterne)株BclAは、B.ツリンギエンシス(B. thuringiensis)BclAと100%配列同一性を有する。従って、配列番号1、2および59は、それぞれB.ツリンギエンシス(B. thuringiensis)BclAのアミノ酸1から41、全長B.ツリンギエンシス(B. thuringiensis)BclA、およびB.ツリンギエンシス(B. thuringiensis)BclAのアミノ酸1から196も表す。同様に、配列番号60は、B.ツリンギエンシス(B. thuringiensis)BclAのメチオニン残基とアミノ酸20から35も表す。
融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質または外膜タンパク質断片、および少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチドを含むことができる。植物成長刺激タンパク質もしくはペプチドは、ペプチドホルモン、非ホルモンペプチド、植物成長刺激性化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素または細菌、真菌もしくは植物の栄養源を分解もしくは改変する酵素を含むことができる。標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片は、上記の標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片のいずれかであることができる。
アラニンリンカー:配列番号1−An−融合パートナータンパク質
グリシンリンカー:配列番号1−Gn−融合パートナータンパク質
混合アラニンおよびグリシンリンカー:配列番号1−(A/G)n−融合パートナータンパク質。
上記で示したように、融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片および少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチドを含むことができる。例えば、植物成長刺激タンパク質もしくはペプチドは、ペプチドホルモン、非ホルモンペプチド、植物成長刺激性化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素、または細菌、真菌もしくは植物の栄養源を分解もしくは改変する酵素を含むことができる。
融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片、および植物を病原体から保護する少なくとも一つのタンパク質もしくはペプチドを含むことができる。
前記融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片および少なくとも一つの植物におけるストレス抵抗性を高めるタンパク質もしくはペプチドを含むことができる。
前記融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片および少なくとも植物結合性タンパク質もしくはペプチドを含むことができる。その植物結合性タンパク質もしくはペプチドは、植物のいずれかの部分(例えば、植物根または植物の地上部分、例えば葉、茎、花、または果実)または植物体に特異的もしくは非特異的に結合する能力を有するタンパク質またはペプチドであることができる。従って、例えば、前記植物結合性タンパク質もしくはペプチドは、根結合性タンパク質もしくはペプチド、または葉結合性タンパク質もしくはペプチドであることができる。
本明細書に記載の融合タンパク質は、組換え外膜産生性バチルス細胞によって発現することができる。融合タンパク質は、上記で記載の融合タンパク質のいずれかであることができる。
多くのバチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員株が。固有の有益な特質を有する。例えば、一部の株は、植物成長促進効果を有する。本明細書に記載の融合タンパク質のいずれも、そのような株で発現させることができる。
本明細書に記載の組換え外膜産生性バチルス細胞のいずれにおいても、前記融合タンパク質は、標的配列、外膜タンパク質、または融合タンパク質の外膜タンパク質断片由来のプロモーターの制御下に発現することができる。例えば、融合タンパク質がB.アントラシス(B. anthracis)スターン(Sterne)BclA(例えば、配列番号1のアミノ酸20から35、配列番号1のアミノ酸1から35、配列番号1、または配列番号60)由来の標的配列を含み、または融合タンパク質が全長BclA(配列番号2)また全長BclAの断片(例えば、配列番号59)を含む場合、融合タンパク質はB.アントラシス(B. anthracis)スターン(Sterne)(例えば、配列番号85のプロモーター)のゲノム中のBclA遺伝子と通常関連しているプロモーターの制御下に発現することができる。
一部の実施形態において、融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞および少なくとも一つの本明細書に記載の生物農薬を含む組成物はさらに、合成根粒形成因子および/または植物成長刺激剤を含む。そのような合成化合物の非限定的な例は、下記一般式(I)の化合物ならびにそれの農業的に許容される幾何異性体および/または光学異性体、エナンチオマーおよび/またはジアステレオマー、互変異体、塩、N−オキサイド、スルホキシドもしくはスルホンである。
nは2または3であり;
Aは−C(O)−であり;
Bはフェニレンであり;
Cは−O−であり;
Dは、飽和であるか炭素4と5個の間で不飽和である炭素11個を含む直鎖炭化水素系鎖であり;
EおよびGは独立に、置換基NHR20からなる群から選択され;
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、およびR9はHであり;
R8は、H、フコシル、メチルフコシル、SO3H、SO3Li、SO3Na、SO3KおよびSO3N(C1−8−アルキル)4からなる群から選択され;
R20はC(O)C1−6−アルキルである。
R26は、HおよびCH3からなる群から選択され;
R27およびR28は独立に、H、C(O)CH3、SO3H、SO3Li、SO3Na、SO3KおよびSO3N(C1−8アルキル)4からなる群から選択される。
生物農薬には、特には、昆虫、ダニ、線虫および/または植物病原体に対して活性を示す細菌、真菌または酵母、原虫、ウィルス、昆虫病原性線虫、植継体および植物体(botanicals)および/または個々の株の全ての識別特性を有するそれらの突然変異体、および/または個々の株によって産生される少なくとも一つの代謝物などがあり得る。本発明は、上記組換えバチルス細胞と本明細書に記載の特定の生物農薬との組み合わせおよび/または本明細書に記載の特定の微生物株の突然変異体に関するものであり、当該突然変異体は、昆虫、ダニ、線虫および/または植物病原体に対して活性を示すか、植物成長を促進し、および/または植物の健康を増進する個々の株、および/または個々の株によって産生される少なくとも一つの代謝物の全ての識別特性を有する。
バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、特には、株GB34(YIELDSHIELD(登録商標)として知られる製品)、および株QST2808(SONATA(登録商標)QST2808として知られる製品)、
バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)、特には、株GB03(KODIAK(登録商標)として知られる製品)、株QST713(SERENADE(登録商標)QST713として知られる製品);NRRL寄託番号B−50455、WO2012/087980(参照によって本明細書に組み込まれる)から公知)、またはB.サブティリス(B. subtilis)変種アミロリクエファシエンス(amyloliquefaciens)株FZB24(として知られる製品TAEGRO(登録商標))、株AQ743(NRRL寄託番号B−21665)、株AQ153(WO98/21964に記載のATCC寄託番号55614)。
バチルス・プミルス(Bacillus pumilus)、例えば株GB34(YIELD SHIELD(登録商標)として知られる製品)および株QST2808(SONATA(登録商標)QST2808として知られる製品)、
バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)およびバチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、例えばリポペプチド類を産生するもの、特には、プリパスタチン類またはフェンギシン類、サーファクチン類および/またはイツリン類の組み合わせ。さらに、バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)に関しては、特には、株GB03(KODIAK(登録商標)として知られる製品、U.S. EPA, Pesticide Fact Sheet−−Bacillus subtilis GB03 1992参照)、株QST713(SERENADE(登録商標)QST713として知られる製品)、株AQ30002(aka QST30002;NRRL寄託番号B−50421、WO2012/087980(参照によって本明細書に組み込まれる)から公知)、および株AQ30004(aka QST30004;NRRL寄託番号B−50455、WO2012/087980(参照によって本明細書に組み込まれる)から公知)。
本発明によれば、前記組成物は、相乗的に有効な量で、a)(i)植物成長刺激性化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素;細菌、真菌もしくは植物の栄養源を分解もしくは改変する酵素;および病原体から植物を保護するタンパク質もしくはペプチドからなる群から選択される少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチド;および(ii)融合タンパク質をバチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員の外膜に局在化させる標的配列を含む融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞;およびb)昆虫、ダニ、線虫および/または植物病原体に対して活性を示す、本明細書に開示の少なくとも一つのさらなる異なる特定の生物農薬および/または個々の株の全ての識別特性を有する本明細書に開示の微生物の特定の株の突然変異体、および/または個々の株によって産生される少なくとも一つの代謝物を含む。
本発明の1態様は、増量剤、溶媒、自発性促進剤、担体、乳化剤、分散剤、凍結保護剤、増粘剤およびアジュバントからなる群から選択される少なくとも一つの補助剤をさらに含む上記の組成物を提供することにある。それらの組成物は、製剤と称される。
さび病病原体、例えばギムノスポランギウム・サビナエ(Gymnosporangium sabinae)などのギムノスポランギウム(Gymnosporangium)種;ヘミレイア・バスタトリックス(Hemileia vastatrix)などのヘミレイア(Hemileia)種;ファコプソラ・パチライジ(Phakopsora pachyrhizi)およびファコプソラ・マイボミアエ(Phakopsora meibomiae)などのファコスプソラ(Phakopsora)種;プクシニア・レコンディテ(Puccinia recondite)、P.トリチシナ(P. triticina)、P.グラミニス(P. graminis)またはP.ストリフォルニス(P. striiformis)またはP.ホルデイ(P.hordei)などのプクシニア(Puccinia)種;ウロミセス・アッペンディキュラタス(Uromyces appendiculatus)などのウロミセス(Uromyces)種によって引き起こされる病害;
卵菌類(Oomycetes)群の病原体、例えばアルブゴ・カンジダ(Algubo candida)などのアルブゴ(Albugo)種;ブレミア・ラクチュカエ(Bremia lactucae)などのブレミア(Bremia)種;ペロノスポラ・ピシ(Peronospora pisi)、P.パラシチカ(P. parasitica)またはP.ブラッシカエ(P. brassicae)などのペロノスポラ(Peronospora)種;フィトフソラ・インフェスタンス(Phytophthora infestans)などのフィトフソラ(Phytophthora)種;プラスモパラ・ビチコラ(Plasmopara viticola)などのプラスモパラ(Plasmopara)種;シュードペロノスポラ・フムリ(Pseudoperonospora humuli)またはシュードペロノスポラ・キュベンシス(Pseudoperonospora cubensis)などのシュードペロノスポラ(Pseudoperonospora)種;ピチウム・ウルティマム(Pythium ultimum)などのピチウム(Pythium)種によって引き起こされる病害;
例えばアルテルナリア・ソラニ(Alternaria solani)などのアルテルナリア(Altemaria)種;セルコスポラ・ベチコラ(Cercospora beticola)などのセルコスポラ(Cercospora)種;クラジオスポリウム・キュキュメリナム(Cladiosporium cucumerinum)などのクラジオスポリウム(Cladiosporum)種;コクリオボラス・サティブス(Cochliobolus sativus)(分生子型:ドレクスレラ(Drechslera)、同義語:ヘルミントスポリウム(Helminthosporium))、コクリオボラス・ミヨビーナス(Cochliobolus miyobeanus)などのコクリオボラス(Cochliobolus)種;コレトトリカム・リンデムサニウム(Colletotrichum lindemuthanium)などのコレトトリカム(Colletotrichum)種;シクロコニウム・オレアギナム(Cycloconium oleaginum)などのシクロコニウム(Cycloconium)種;ディアポルテ・シトリ(Diaporthe citri)などのディアポルテ(Diaporthe)種;エルシノエ・フォーセッティイ(Elsinoe fawcettii)などのエルシノエ(Elsinoe)種;グレオスポリウム・ラエティカラー(Gloeosporium laeticolor)などのグレオスポリウム種(Gloeosporium);グロメレラ・シンギュラータ(Glomerella cingulata)などのグロメレラ(Glomerella)種;ギニャルディア・ビドウェリ(Guignardia bidwelli)などのギニャルディア(Guignardia)種;レプトスファエリア・マキュランス(Leptosphaeria maculans)、レプトスファエリア・ノドルム(Leptosphaeria nodorum)などのレプトスファエリア(Leptosphaeria)種;マグナポルテ・グリージー(Magnaporthe grisea)などのマグナポルテ(Magnaporthe)種;ミクロドキウム・ニバレ(Microdochium nivale)などのミクロドキウム(Microdochium)種;マイコスファエレラ・グラミニコラ(Mycosphaerella graminicola)、M.アラキジコラ(M. arachidicola)およびM.フィジエンシス(M. fijiensis)などのマイコスファエレラ(Mycosphaerella)種;フェオスファエリア・ノドラム(Phaeosphaeria nodorum)などのフェオスファエリア(Phaeosphaeria)種;ピレノフォラ・テレス(Pyrenophora teres)、ピレノフォラ・トリチシ・レペンチス(Pyrenophora tritici repentis)などのピレノフォラ(Pyrenophora)種;ラムラリア・コロシグニ(Ramularia collo−cygni)、ラムラリア・アレオラ(Ramularia areola)などのラムラリア(Ramularia)種;リンコスポリウム・セカリス(Rhynchosporium secalis)などのリンコスポリウム(Rhynchosporium)種;セプトリア・アピイ(Septoria apii)、セプトリア・リコペルシイ(Septoria lycopersii)などのセプトリア(Septoria)種;チフラ・インカルナータ(Typhula incarnata)などのチフラ(Typhula)種;ベンチュリア・イナエキュアリス(Venturia inaequalis)などのベンチュリア(Venturia)種によって引き起こされる葉枯病(leaf blotch diseases)および葉萎凋病(leaf wilt diseases);
例えば、コルチシウム・グラミネアラム(Corticium graminearum)などのコルチシウム(Corticium)種;フサリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)などのフサリウム(Fusarium)種;ゲウマノミセス・グラミニス(Gaeumannomyces graminis)などのゲウマノミセス(Gaeumannomyces)種;リゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)などのリゾクトニア(Rhizoctonia)種;サロクラジウム・オリザエ(Sarocladium oryzae)などによって引き起こされるサロクラジウム(Sarocladium)病;サロクラジウム・オリザエ(Sarocladium oryzae)などによって引き起こされるサロクラジウム(Sarocladium)病;タペシア・アキュフォルミス(Tapesia acuformis)などのタペシア(Tapesia)種;チエラビオプシス・バシコラ(Thielaviopsis basicola)などのチエラビオプシス(Thielaviopsis)種によって引き起こされる根および茎の病害;
例えばアルテルナリア属(Alternaria spp.)などのアルテルナリア(Alternaria)種;アスペルギルス・フラバス(Aspergillus flavus)などのアスペルギルス(Aspergillus)種;クラドスポリウム・クラドスポリオイデス(Cladosporium cladosporioides)などのクラドスポリウム(Cladosporium)種;クラビセプス・パープレア(Claviceps purpurea)などのクラビセプス(Claviceps)種;フサリウム・クルモラム(Fusarium culmorum)などのフサリウム(Fusarium)種;ギッベレラ・ゼアエ(Gibberella zeae)などのギッベレラ(Gibberella)種;モノグラフェラ・ニバリス(Monographella nivalis)などのモノグラフェラ(Monographella)種;セプトリア・ノドルム(Septoria nodorum)などのセプトリア(Septoria)種によって引き起こされる穂および円錐花序の病害(トウモロコシ穂軸など);
黒穂菌(smut fungi)、例えばスファセロセカ・ライリアナ(Sphacelotheca reiliana)などのスファセロセカ(Sphacelotheca)種;ティレチア・カリエス(Tilletia caries)、T.コントロベルサ(T. controversa)などのティレチア(Tilletia)種;ウロシスティス・オキュラータ(Urocystis occulta)などのウロシスティス(Urocystis)種;ウスティラゴ・ヌーダ(Ustilago nuda)、U.ヌーダ・トリチシ(U. nuda tritici)などのウスティラゴ(Ustilago)種によって引き起こされる病害;
例えばアスペルギルス・フラバス(Aspergillus flavus)などのアスペルギルス(Aspergillus)種;ボトリティス・シネレア(Botrytis cinerea)などのボトリティス(Botrytis)種;ペニシリウム・エクスパンサム(Penicillium expansum)およびP.プルプロゲナム(P. purpurogenum)などのペニシリウム(Penicillium)種;スクレロティニア・スクレロティオラム(Sclerotinia sclerotiorum)などのスクレロティニア(Sclerotinia)種;ベルティシリウム・アルボアトラム(Verticilium alboatrum)などのベルティシリウム(Verticilium)種によって引き起こされる果実腐敗;
例えばアルタナリア(Alternaria)種によって引き起こされる、例えばアルタナリア・ブラシシコラ(Alternaria brassicicola)によって引き起こされる;アファノミセス(Aphanomyces)種、例えばアファノミセス・ユーテイケス(Aphanomyces euteiches)によって引き起こされる;アスコチタ(Ascochyta)種、例えばアスコチタ・レンティス(Ascochyta lentis)によって引き起こされる;アスペルギルス(Aspergillus)種、例えばアスペルギルス・フラブス(Aspergillus flavus)によって引き起こされる;クラドスポリウム(Cladosporium)種、例えばクラドスポリウム・ヘルバルム(Cladosporium herbarum)によって引き起こされる;コクリオボラス(Cochliobolus)種、例えばコクリオボラス・サティブス(Cochliobolus sativus)(分生子型:ドレクスレラ(Drechslera)、ビポラリス(Bipolaris)同義語:ヘルミントスポリウム(Helminthosporium))によって引き起こされる;コレトトリカム(Colletotrichum)種、例えばコレトトリカム・ココデス(Colletotrichum coccodes)によって引き起こされる;フサリウム(Fusarium)種、例えばフサリウム・カルモラム(Fusarium culmorum)によって引き起こされる;ギッベレラ(Gibberella)種、例えばギッベレラ・ゼアエ(Gibberella zeae)によって引き起こされる;マクロホミナ(Macrophomina)種、例えばマクロホミナ・ファセオリナ(Macrophomina phaseolina)によって引き起こされる;モノグラフェラ(Monographella)種、例えばモノグラフェラ・ニバリス(Monographella nivalis)によって引き起こされる;ペニシリウム(Penicillium)種、例えばペニシリウム・エキスパンスム(Penicillium expansum)によって引き起こされる;ホマ(Phoma)種、例えばホマ・リンガム(Phoma lingam)によって引き起こされる;ホモプシス(Phomopsis)種、例えばホモプシス・ソジャエ(Phomopsis sojae)によって引き起こされる;フィトフソラ(Phytophthora)種、例えばフィトフソラ・カクトラム(Phytophthora cactorum)によって引き起こされる;ピレノホラ(Pyrenophora)種、例えばピレノホラ・グラミネア(Pyrenophora graminea)によって引き起こされる;ピリクラリア(Pyricularia)種、例えばピリクラリア・オリザエ(Pyricularia oryzae)によって引き起こされる;ピチウム(Pythium)種、例えばピチウム・ウルティマム(Pythium ultimum)によって引き起こされる;リゾクトニア(Rhizoctonia)種、例えばリゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)によって引き起こされる;リゾプス(Rhizopus)種、例えばリゾプス・オリザエ(Rhizopus oryzae)によって引き起こされる;スクレロティウム(Sclerotium)種、例えばスクレロティウム・ロルフシイ(Sclerotium rolfsii)によって引き起こされる;セプトリア(Septoria)種、例えばセプトリア・ノドルム(Septoria nodorum)によって引き起こされる;チフラ(Typhula)種、例えばチフラ・インカルナタ(Typhula incarnata)によって引き起こされる;ベルチシリウム(Verticillium)種、例えばベルチシリウム・ダーリアエ(Verticillium dahliae)によって引き起こされる種子および土壌伝染性の腐敗、カビ、しおれ、腐敗病および立ち枯れ病;
例えばネクトリア・ガリゲナ(Nectria galligena)などのネクトリア(Nectria)種よって引き起こされる癌、こぶ病およびてんぐ巣病;
例えばモニリニア・ラクサ(Monilinia laxa)などのモニリニア(Monilinia)種によって引き起こされる枯れ病;
例えばエキソバシジウム・ベキサンス(Exobasidium vexans)などのエキソバシジウム(Exobasidium)種;タフリナ・デフォルマンス(Taphrina deformans)などのタフリナ(Taphrina)種によって引き起こされる葉ぶくれ病または葉巻病;
例えばファエモニエラ・クラミドスポラ(Phaemoniella clamydospora)、ファエオアクレモニウム・アレオフィラム(Phaeoacremonium aleophilum)およびフォミチポリタ・メジテラネア(Fomitiporia mediterranea)によって引き起こされるエスカ(Esca)病;例えばユーチパ・ラタ(Eutypa lata)によって引き起こされるユーチパ(Eutypa)枝枯れ病;例えばガノデルマ・ボニネンセ(Ganoderma boninense)によって引き起こされるガノダーマ(Ganoderma)病;例えばリジドポルス・リグノスス(Rigidoporus lignosus)によって引き起こされるリジドポルス(Rigidoporus)病によって引き起こされる木材植物における衰退(decline)病;
例えばボトリティス・シネレア(Botrytis cinerea)などのボトリティス(Botrytis)種によって引き起こされる花および種子の病害;
リゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)などのリゾクトニア(Rhizoctonia)種;ヘルミントスポリウム・ソラニ(Helminthosporium solani)などのヘルミントスポリウム(Helminthosporium)種によって引き起こされる植物塊茎の病害;
例えばプラモジオフォラ・ブラッシカエ(Plamodiophora brassicae)などのプラモジオフォラ(Plamodiophora)種によって引き起こされる根こぶ病;
細菌性病原体、例えばキサントモナス・キャンペストリスpv.オリザエ(Xanthomonas campestris pv. oryzae)などのキサントモナス(Xanthomonas)種;シュードモナス・シリンガエpv.ラクリマンス(Pseudomonas syringae pv. lachrymans)などのシュードモナス(Pseudomonas)種;エルウィニア・アミロボラ(Erwinia amylovora)などのエルウィニア(Erwinia)種によって引き起こされる病害。
実施例1:複数の有効成分の組み合わせの効力についての式
有効成分組み合わせの活性が、個別に施用した場合の有効成分の活性の合計を超える場合には、有効成分の相乗効果が存在する。2種類の有効成分の所定の組み合わせについての予想される活性は、下記のように計算することができる(Colby, S. R., ″Calculating Synergistic and Antagonistic Responses of Herbicide Combinations″,Weeds 1967, 15, 20−22参照)。
Yが、有効成分Bを施用量nppm(またはg/ha)で施用した場合の効力であり、
Eが、有効成分AおよびBをそれぞれmおよびnppm(またはg/ha)で施用した場合の効力である場合、
バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)QST713系産物およびホスホリパーゼCを発現する組換えバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)細胞(「BEPC」)の発酵産物の組み合わせの効力を分析するため、実験を行った。25から28℃および湿度50%の植物成長室のライトラック上、小さい3インチ正方形ポット中の合成培地および砂の無菌混合物で、トウモロコシ種子を約14日間にわたり成長させた。各ポットでは、2個の種子を植えた。植え付け時には、各ポットの成長培地を、下記に記載の処理液に浸した。14日後、植物を、植物バイオマスについて測定した。いくつかの実験では、WinRhizo根スキャナーを用いて、根を分析した。これら実施例を通じて全ての表において、UTCは未処理対照を指す。「計算値」は、上記コルビー式を用いて計算される予想効果値を指し、「効力」は観察された実際の効果を指す。
これらの実施例においてBEEと称されるエンドグルカナーゼ(配列番号107)を発現する組換えバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)細胞を用いて、実施例2の場合と同様の実験を行った。ホスホリパーゼではなくエンドグルカナーゼ(配列番号107)を用いた以外、上記と同様にして、BEEの全ブロス培地を作った。BEEのSERENADE(登録商標)ASOとの組み合わせの植物収量に対する効果を、下記の表に示している。
20℃および湿度70%の温室中、ローム性砂でトウモロコシ種子を約11日間成長させる。処理時点から約11日後、若芽を土から上で切り取り、新鮮重量を求める。
Claims (31)
- 相乗的に有効な量で、
a)
(i)少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチド;および
(ii)標的配列、外膜タンパク質もしくは外膜タンパク質断片
を含む融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞
および
b)リポペプチド産生性バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)株、リポペプチド産生性バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)株、バチルス・フィルムス(Bacillus firmus)株およびバチルス・プミルス(Bacillus pumilus)株からなる群から選択される少なくとも一つの生物農薬
を含む組成物。 - 前記少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチドが、植物成長刺激性化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素および細菌、真菌もしくは植物の栄養源を分解もしくは改変する酵素からなる群から選択される請求項1に記載の組成物。
- 前記外膜産生性バチルス細胞がバチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員の細胞である請求項1に記載の組成物。
- 前記バチルス・セレウス(Bacillus cereus)科構成員が、バチルス・アントラシス(Bacillus anthracis)、バチルス・セレウス(Bacillus cereus)、バチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)、バチルス・ミコイデス(Bacillus mycoides)、バチルス・シュードミコイデス(Bacillus pseudomycoides)、バチルス・サマニイ(Bacillus samanii)、バチルス・ガエモケンシス(Bacillus gaemokensis)、バチルス・ウェイヘンステフェンシス(Bacillus weihenstephensis)、バチルス・トヨイエンシスウェイヘンステフェンシス(Bacillus toyoiensis)およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項3に記載の組成物。
- 前記標的配列または外膜タンパク質が、
配列番号1のアミノ酸20から35と少なくとも約43%同一性を有するアミノ酸配列(アミノ酸25から35との同一性は少なくとも約54%である。);
配列番号1のアミノ酸1から35を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸20から35を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸22から31を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸22から33を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸20から31を含む標的配列;
配列番号1を含む標的配列;または
配列番号2と少なくとも85%同一性を有するアミノ酸配列を含む外膜タンパク質
を含む請求項1から4のいずれか1項に記載の組成物。 - 前記植物成長刺激化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素が、アセトインレダクターゼ、インドール−3−アセトアミドヒドロラーゼ、トリプトファンモノオキシゲナーゼ、アセト乳酸シンターゼ、α−アセト乳酸デカルボキシラーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ジアセチルレダクターゼ、ブタンジオールデヒドロゲナーゼ、アミノトランスフェラーゼ、トリプトファンデカルボキシラーゼ、アミンオキシダーゼ、インドール−3−ピルビン酸デカルボキシラーゼ、インドール−3−アセトアルデヒドデヒドロゲナーゼ、トリプトファン側鎖オキシダーゼ、ニトリルヒドロラーゼ、ニトリラーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、アデノシンリン酸イソペンテニルトランスフェラーゼ、ホスファターゼ、アデノシンキナーゼ、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、CYP735A、5′リボヌクレオチドホスホヒドロラーゼ、アデノシンヌクレオシダーゼ、ゼアチンシス−トランスイソメラーゼ、ゼアチンO−グルコシルトランスフェラーゼ、β−グルコシダーゼ、シス−ヒドロキシラーゼ、CKシス−ヒドロキシラーゼ、CK N−グルコシルトランスフェラーゼ、2,5−リボヌクレオチドホスホヒドロラーゼ、アデノシンヌクレオシダーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、ゼアチンレダクターゼ、ヒドロキシルアミンレダクターゼ、2−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ、ジベレリン酸2B/3Bヒドロラーゼ、ジベレリン3−オキシダーゼ、ジベレリン20−オキシダーゼ、キトサナーゼ、キチナーゼ、β−1,3−グルカナーゼ、β−1,4−グルカナーゼ、β−1,6−グルカナーゼ、アミノシクロプロパン−1−カルボン酸デアミナーゼ、およびノッド因子産生に関与する酵素からなる群から選択される請求項2から5のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記植物成長刺激化合物の産生もしくは活性化に関与する酵素がキトサナーゼである請求項6に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が配列番号109を含む請求項7に記載の組成物。
- 前記細菌、真菌もしくは植物の栄養源を分解もしくは改変する酵素が、セルラーゼ、リパーゼ、リグニンオキシダーゼ、プロテアーゼ、グリコシドヒドロラーゼ、ホスファターゼ、ニトロゲナーゼ、ヌクレアーゼ、アミダーゼ、硝酸レダクターゼ、亜硝酸レダクターゼ、アミラーゼ、アンモニアオキシダーゼ、リグニナーゼ、グルコシダーゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ペクチナーゼ、グルカナーゼ、スルファターゼ、ウレアーゼ、キシラナーゼ、およびシデロホアからなる群から選択される請求項2から5のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記酵素がエンドセルラーゼ、エキソセルラーゼ、およびβ−グルコシダーゼからなる群から選択されるセルラーゼである請求項9に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質がバチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)エンドグルカナーゼを含む請求項10に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が配列番号107を含む請求項11に記載の組成物。
- 前記組換えバチルス細胞がバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)BT013A由来である請求項12に記載の組成物。
- 前記酵素がホスホリパーゼである請求項9に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が配列番号108を含む請求項14に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が、標的配列に固有の胞子形成プロモーター、外膜タンパク質、または前記融合タンパク質の外膜タンパク質断片の制御下に発現される請求項1から15のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が、高発現胞子形成プロモーターの制御下に発現される請求項1から16のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記高発現胞子形成プロモーターがσ−K胞子形成特異的ポリメラーゼプロモーター配列を含む請求項17に記載の組成物。
- 前記胞子形成プロモーターが、配列番号:85から103のいずれか一つの核酸配列と少なくとも80%同一性を有する核酸配列を含む請求項16から18のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記少なくとも一つの生物農薬が、リポペプチド産生性バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)株またはリポペプチド産生性バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)株である請求項1から19のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)株またはバチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)株が、バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)QST713、バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)MBI600、バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)D747、バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)FZB42、バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)var.アミロリクエファシエンス(amyloliquefaciens)FZB24または個々の株の全ての識別特性を有するそれの突然変異体である請求項20に記載の組成物。
- 前記少なくとも一つの生物農薬がバチルス・フィルムス(Bacillus firmus)株I−1582である請求項1から19のいずれか1項に記載の組成物。
- 請求項1から22のいずれか1項に記載の組成物で処理された種子。
- 植物成長促進および/または植物の健康増進のための、請求項1から23のいずれか1項に記載の組成物の使用。
- 従来植物もしくはトランスジェニック植物またはそれの種子を処理するための請求項24に記載の使用。
- 植物、植物部分または植物周囲の場所を処理して植物成長を促進および/または植物の健康を増進する方法であって、相乗的に有効な量で、
a)
(i)少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチド;および
(ii)標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片
を含む融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞;および
b)リポペプチド産生性バチルス・サブチリス(Bacillus subtilis)株、リポペプチド産生性バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)株、バチルス・フィルムス(Bacillus firmus)株またはバチルス・プミルス(Bacillus pumilus)株からなる群から選択される少なくとも一つの生物農薬
を同時または順次に施用する段階を有する方法。 - 前記標的配列または外膜タンパク質が、
配列番号1のアミノ酸20から35と少なくとも約43%同一性を有するアミノ酸配列(アミノ酸25から35との同一性は少なくとも約54%である。);
配列番号1のアミノ酸1から35を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸20から35を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸22から31を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸22から33を含む標的配列;
配列番号1のアミノ酸20から31を含む標的配列;
配列番号1を含む標的配列;または
配列番号2と少なくとも85%同一性を有するアミノ酸配列を含む外膜タンパク質
を含む請求項26に記載の方法。 - 相乗的に有効な量で、
a)
(i)少なくとも一つの植物成長刺激タンパク質もしくはペプチド;および
(ii)標的配列、外膜タンパク質、または外膜タンパク質断片
を含む融合タンパク質を発現する組換え外膜産生性バチルス細胞;および
b)段落[0189]から[0232]において本明細書で開示の特定の生物農薬のいずれかから選択される少なくとも一つの生物農薬
を含む組成物。 - 前記融合タンパク質がエンドグルカナーゼまたはホスホリパーゼを含み;前記標的配列が配列番号1のアミノ酸20から35と少なくとも約43%同一性を有するアミノ酸配列(アミノ酸25から35との同一性は少なくとも約54%である。)であり;前記組換えバチルス細胞がバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)もしくはバチルス・ミコイデス(Bacillus mycoides)由来である請求項28に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が配列番号107を含み;前記標的配列が配列番号1のアミノ酸20から35を含み;前記バチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)がバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)BT013Aである請求項29に記載の組成物。
- 前記融合タンパク質が配列番号108を含み;前記標的配列が配列番号1のアミノ酸20から35を含み;前記バチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)がバチルス・ツリンギエンシス(Bacillus thuringiensis)BT013Aである請求項29に記載の組成物。
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