JP2017516820A

JP2017516820A - ω−３多価不飽和脂肪酸及びレスベラトロールを含む経口投与用均質処方物

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Publication number: JP2017516820A
Application number: JP2016570876A
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Inventors: ジュゼッペジャンニーニ，; モーゼサンタニエッロ，
Original assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Current assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date: 2014-06-04
Filing date: 2015-03-26
Publication date: 2017-06-22
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Abstract

本発明は、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）とレスベラトロールとを含む経口投与用均質処方物に関し、この処方物において、レスベラトロールは、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）又はそのアルキルエステル及びイオン性乳化剤からなる溶媒系に可溶化されている。本発明による組成物は、フードサプリメント若しくは栄養補助食品又は脂質代謝障害及び血小板凝集の増大に起因する心臓血管疾患並びにフリーラジカルに起因する損傷及び／若しくはウイルス性疾患の予防若しくは治療のための薬剤として処方できる。

Description

（発明の分野）
本発明は、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）及びレスベラトロールを含む経口投与用均質処方物に関し、この処方物において、レスベラトロールは、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）又はそのアルキルエステル及びイオン性乳化剤からなる溶媒系に可溶化されている。

特に、本発明は、脂質代謝障害及び血小板凝集の増大に起因する心臓血管疾患並びにフリーラジカルに起因する損傷及び／又はウイルス性疾患の予防又は治療に使用するための上記均質処方物に関する。

（発明の背景）
異常な脂質代謝に関連する心臓血管疾患は、先進工業国において非常に多発している。例えば、イタリアでは、２０１１年４月に発表された世界保健機関のデータによると、イタリアにおける心臓血管疾患による死亡者数は、死亡者数全体の１８．６５％に達していた。コレステロールと冠状動脈性心臓疾患との関係についての本発明者らの認識は、過去数年にわたって行われた疫学的研究に由来する。これらの研究において、重篤な冠状動脈アテローム性動脈硬化症及び冠状動脈性心臓疾患の発症は、血清コレステロールレベルと密接に関係しているという結論に至った［Breuer, H.W.M.; European Cardiology, 2005; 1-6（非特許文献１）］。

血小板は、心臓血管疾患において重要な役割を果たすが、十分に認識されていないことが多い。例えば、血小板の正常な応答は凝集促進刺激の増大又は抗凝集物質の減少のいずれかによって変化して、血小板の活性化／凝集が増大した病態をもたらすことがあり、この病態は、慢性（例えば、永続的な狭心症）及び急性（例えば、急性心筋梗塞）双方の心臓血管疾患状態で起こる。さらに、血小板の凝集過剰は、冠状動脈性疾患の危険因子（例えば、喫煙、高血圧及び高コレステロール血症）とも関連する。最終的に、上記疾患状態の治療における抗血小板療法の範囲を拡大すると、心臓血管疾患の病因において血小板が果たす極めて重要な役割がさらに強調される。最近発表された論文には、ホメオスタシスの維持における血小板の正常な生理学的役割、心臓血管疾患において血小板機能障害の一因となる病態生理学的プロセス、並びに抗血小板療法の関連する役割及び恩恵の包括的な概要が示されている［Kottke-Marchant K.: Cleveland Clinic Journal of Medicine; 2009 Apr; 76(1): 1-7（非特許文献２）］。

人類を悩ます変性疾患の多くは有害なフリーラジカル反応を原因とするという証拠が蓄積されている。これらの疾患としては、アテローム性動脈硬化症、癌、炎症性関節疾患、喘息、糖尿病、老人性認知症及び変性眼疾患が挙げられる。生物学的老化のプロセスもまた、フリーラジカルによるものである。フリーラジカルによる細胞への損傷のほとんどは、酸素フリーラジカル、又はより一般的には活性化酸素種（ＡＯＳ）が関与する。活性化酸素種には、フリーラジカルのみならず、一重項酸素及び過酸化水素などの非ラジカル種も含まれる。ＡＯＳは、遺伝物質を損傷し、細胞膜で脂質過酸化反応を引き起こして、膜結合酵素を不活性化することがある。我々の食餌（食事）に抗酸化剤を補充することは、より健康的な高齢者人口を確保するために必要である［Aust N Z J Ophthalmol. 1995 Feb; 23(1): 3-7（非特許文献３）］。

ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）は、心臓血管事象（心血管系イベント）の予防における有益な効果が実証されており［Aarsetoey H. et al.; Cardiology Research and Practice, Volume 2012: 1-16（非特許文献４）］、この効果は、おそらく抗炎症性、抗血栓性及び抗不整脈性機構によるものである［Sethi S. et al.; Blood 2002: 100: -1340-6（非特許文献５）; Billman GE, et al.; Circulation 3 1999: 99: 2452-7（非特許文献６）］。脂質低下効果が最初に発見されたので、これらの薬物は当初、脂質異常症の治療のために用いられていたが、後に、抗炎症性、抗血栓性、抗アテローム硬化性及び抗不整脈性効果が見出された。ＧＩＳＳＩ−予防試験（GISSI-Prevention trial）［Lancet 1999 354: 447-55（非特許文献７）］は、心筋梗塞後症候群患者におけるｎ−３ＰＵＦＡの効能及び耐性（tolerability）を実証した最初の試験であった。文献証拠によると、現在ｎ−３ＰＵＦＡは、虚血性心臓病及び突然心臓死（ＳＣＤ）の一次的及び二次的予防に必要とされている［Mori TA, Beilin L J. Long-chain omega-3 fatty acids, blood lipids and cardiovascular risk reduction. Curr. Opin. Lipidol. 2001; 12: 11-7（非特許文献８）］。Nutrition and Dietary Supplements 2011 September 14;: 93-100（非特許文献９）には、心臓血管疾患の予防におけるｎ−３系多価不飽和脂肪酸の役割が記載されている。

レスベラトロール（ｔｒａｎｓ−３，４’，５，−トリヒドロキシスチルベン）は、黒ブドウの皮に存在するポリフェノール分子である。レスベラトロールは、心臓保護効果を有し、血小板凝集の阻害剤として作用することが知られている［Szmitko PE, et al. Circulation January 2005, 111 (2) p10-11（非特許文献１０）；Das DK, et al. “Resveratrol in cardioprotection: a therapeutic promise of alternative medicine”; Mol. Interv., 2006, 6 (1): 36-47（非特許文献１１）］。レスベラトロールは、抗酸化剤及び皮膚保護剤としても作用する［Afaq, Farrukh et al. “Botanical antioxidants in the prevention of photocarcinogenesis and photoaging”; Experimental Dermatology, 2006, 15 (9): 678-84（非特許文献１２）］。レスベラトロールは赤ワインの主成分の一つであり、赤ワインの公知の有益な特性に関連して、近年集中的に研究されている［Life Sci., 71, 2145-52, 2002（非特許文献１３）］。多数の研究によってレスベラトロールの抗発癌活性が実証されており、その作用機序は以下のように分類することができる：炎症及び発癌プロセスに関与する種々の遺伝子の発現を調節可能な転写因子ＮＦ−κＢの活性化の阻害［Lancet, 341, 1103-1104, 1993（非特許文献１４）；Science, 275, 218.220, 1997（非特許文献１５）；Proc. Natl. Acad. Sc., 94, 14138-14143, 1997（非特許文献１６）；Life Science, 61, 2103-2110, 1997（非特許文献１７）；Brit. J. Pharm., 126, 673-680, 1999（非特許文献１８）；J. Imm., 164, 6509-6519, 2000（非特許文献１９）］；プロテインキナーゼＣ［Stewart, J.R., Ward, N.E., Ioannides, C.G. and O’Brian, C.A., Resveratrol preferentially inhibits protein kinase C-catalyzed phosphorylation of a cofactor-independent, arginine-rich protein substrate by a novel mechanism, Biochemistry. 1999, 38, 13244-13251（非特許文献２０）］、リボヌクレオチドレダクターゼ［FEBS Lett., 421, 277-279, 1998（非特許文献２１）］及び哺乳類上皮細胞中のシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）［Steinmetz KL, Tyson CK, Meierhenry EF, Spalding JW, Mirsalis JC. Examination of genotoxicity, toxicity and morphologic alterations in hepatocytes following in vivo or in vitro exposure to methapyrilene. Carcinogenesis. 1988 Jun;9(6): 959-963（非特許文献２２）］を含む種々のタンパク質の阻害；カスパーゼ２、３、６及び９の活性化［FASEB J., 1613-1615, 2000（非特許文献２３）］；及び公知の腫瘍抑制因子であるｐ５３遺伝子の調節［Soleas GJ, Goldberg DM, Grass L, Levesque M, Diamandis EP. Do wine polyphenols modulate p53 gene expression in human cancer cell lines? Clin Biochem 2001; 34: 415-420（非特許文献２４）］。

Free Radic. Res., 33, 105-114, 2000（非特許文献２５）には、レスベラトロールの抗酸化活性並びにレスベラトロールが細胞内酸化的ストレスを引き起こす種々の物質及び／又は状態によってもたらされる損傷効果を相殺できることが記載されている。

ＥＰ１５６７１３７Ｂ１（特許文献１）には、インフルエンザウイルス感染を治療するためにレスベラトロールを使用することが記載されている。

ＷＯ２０１１／１６１５０１（特許文献２）には、有効成分が水に不溶又は難溶であり、及び／又は不耐熱性であり、及び／又は不快な感覚刺激性を有する、粉末又は顆粒形態の固体組成物が記載されている。記載されている方法は、トリグリセリド、ポリオキシエチレンソルビタンエステル及びアスコルビン酸パルミテートを含む脂質マトリックスへの分散である。

特許出願ＷＯ２０１１／１２０５３０（特許文献３）には、多孔質二酸化ケイ素と、魚油のうち薬学的油を多く含んでいてもよい放出増強剤（release enhancing agent）とを含む固体の多孔質不活性担体組成物が開示されている。ｎ−３ＰＵＦＡと１又は複数の有効成分とを組み合わせて含む組成物の調製例は、ＥＰ２５１７６９７（特許文献４）に記載されている。特に、ｎ−３ＰＵＦＡのアルキルエステル中に１又は複数のスタチンを含むマイクロカプセル懸濁液であって、スタチンが、胃腸液（gastrointestinal medium）中で容易に崩壊可能な高分子膜でｎ−３ＰＵＦＡのアルキルエステルとの接触から隔離されている懸濁液が記載されている。

レスベラトロールとｎ−３ＰＵＦＡとを含む組成物の調製に有用な、当該分野で公知の方法のほとんどは、時間も費用もかかるマイクロカプセル化又はコーティングプロセスを含む。これらの研究は、レスベラトロールを単回投与で油相内に適切に送達する方法を見出すことに焦点を当てている。

当該分野において、ｎ−３ＰＵＦＡ中にレスベラトロールを可溶化する方法は知られていない。

実際に、レスベラトロールは、ｎ−３ＰＵＦＡ分解の防止又は低減における安定化剤として非常に良好な特性を維持するが、薬及び栄養補助食品（nutraceuticals）の調製のためのプロトコルに使用される油相の多くにほとんど不溶である。ある乳化剤及び／又は補助界面活性剤（cosurfactant）を添加しても、所望の目的を達成することに有効ではない。

医学的又は栄養補助的用途のためにレスベラトロールとｎ−３ＰＵＦＡ脂肪酸とを組み合わせる効果を考慮すると、レスベラトロールを油相中に可溶化するための効果的な方法を見出すことの必要性がますます顕著になってきている。

ＥＰ１５６７１３７Ｂ１ＷＯ２０１１／１６１５０１ＷＯ２０１１／１２０５３０ＥＰ２５１７６９７

European Cardiology, 2005; 1-6 Cleveland Clinic Journal of Medicine; 2009 Apr; 76(1): 1-7 J Ophthalmol. 1995 Feb; 23(1): 3-7 Cardiology Research and Practice, Volume 2012: 1-16 Blood 2002: 100: -1340-6 Circulation 3 1999: 99: 2452-7 Lancet 1999 354: 447-55 Curr. Opin. Lipidol. 2001; 12: 11-7 Nutrition and Dietary Supplements 2011 September 14;: 93-100 Circulation January 2005, 111 (2) p10-11 Mol. Interv., 2006, 6 (1): 36-47 Experimental Dermatology, 2006, 15 (9): 678-84 Life Sci., 71, 2145-52, 2002 Lancet, 341, 1103-1104, 1993 Science, 275, 218.220, 1997 Proc. Natl. Acad. Sc., 94, 14138-14143, 1997 Life Science, 61, 2103-2110, 1997 Brit. J. Pharm., 126, 673-680, 1999 J. Imm., 164, 6509-6519, 2000 Biochemistry. 1999, 38, 13244-13251 FEBS Lett., 421, 277-279, 1998 Carcinogenesis. 1988 Jun;9(6): 959-963 FASEB J., 1613-1615, 2000 Clin Biochem 2001; 34: 415-420 Free Radic. Res., 33, 105-114, 2000

（発明の説明）
驚くべきことに、今般、イオン性乳化剤（脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン（deoiled phosphatidylcholine-enriched lecithin）及びω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）からなる溶媒系を用いると、この溶媒系中の相当な量のレスベラトロールを完全に可溶化できることが見出された。

従って、本発明の目的は、
（１）以下からなる溶媒系：
ω−３多価不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステル；
脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン；又はホスファチジルコリンが９２％よりも多い量で存在する脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン若しくはＥｐｉｋｕｒｏｎ（エピクロン）（商標）２００からなる群より選択されるイオン性乳化剤；及び
（２）レスベラトロール又はレスベラトロール含有天然抽出物；
を含む組成物であって、レスベラトロールは溶媒系中に完全に溶解されて、均質組成物を得ることができる。

本発明のさらなる目的は、ｎ−３ＰＵＦＡの残存率（回収率（recovery））が、４０℃で３か月後に少なくとも９４重量％であり、３０℃で３か月後に少なくとも９６重量％であり、２５℃で３か月後に少なくとも９８重量％であり、かつ５℃で３か月後に少なくとも９９重量％である前記組成物である。

本発明のさらなる目的は、レスベラトロールの残存率が、４０℃で３か月後に少なくとも８５重量％であり、３０℃で３か月後に少なくとも９４重量％であり、２５℃で３か月後に少なくとも９７重量％であり、かつ５℃で３か月後に少なくとも９９重量％である前記組成物である。

本発明の一実施形態において、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）又はそれらのアルキルエステル及びその混合物からなる群より選択され、かつω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）のアルキルエステルは、エチルエステル、メチルエステル及びプロピルエステルからなる群より選択される。

本発明のさらなる実施形態において、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）は、ＥＰＡ及びＤＨＡの含有量が脂肪酸総重量に対して７５重量％〜９５重量％、好ましくは少なくとも８５重量％である脂肪酸の混合物であり、ｎ−３ＰＵＦＡの総含有量は、脂肪酸総重量に対して少なくとも９０重量％であり、かつエイコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸との比が０．５〜２である。

本発明の他の実施形態において、ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）は、ＥＰＡエチルエステル及びＤＨＡエチルエステルを０．９〜１．５の比で含む混合物であり、脂肪酸総重量に対して、ＥＰＡエチルエステルの含有量が４０〜５１重量％であり、かつＤＨＡエチルエステルの含有量が３４〜４５重量％である。

本発明のさらなる目的は、
（１）以下からなる溶媒系：
ω−３多価不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステル；
脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン；又はホスファチジルコリンが９２％よりも多い量で存在する脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン若しくはＥｐｉｋｕｒｏｎ（エピクロン）（商標）２００からなる群より選択されるイオン性乳化剤；及び
（２）レスベラトロール又はレスベラトロール含有天然抽出物；
を含む組成物であって、レスベラトロールは溶媒系中に完全に溶解されて、ダイエタリーサプリメント（健康食品）若しくは栄養補助食品（dietary or nutritional supplement）又は経口投与用薬剤の形態で均質組成物を得ることができる。

本発明のさらなる実施形態において、前記組成物中のω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）の量は、０．５〜１．０ｇ、好ましくは０．８〜０．９ｇ、より好ましくは０．９ｇである。

本発明のさらなる実施形態によると、前記組成物は、さらに、１若しくは複数のビタミン、１若しくは複数のミネラル、１若しくは複数の補酵素、１若しくは複数の抗酸化剤及び／又は１若しくは複数の植物抽出物を含んでもよい。

本発明のさらなる実施形態によると、前記組成物は、さらに、少なくとも１つの薬学的に許容可能なベヒクル又は賦形剤を含んでもよい。

本発明のさらなる目的は、経口投与のために、腸溶性コーティング剤を必要に応じて含む軟ゼラチンカプセルによってカプセル化されることを特徴とする前記組成物である。

本発明のさらなる目的は、脂質代謝障害及び／若しくは血小板凝集の増大に起因する心臓血管疾患；並びに／又はアテローム性動脈硬化症、癌、炎症性関節疾患、喘息、糖尿病、老人性認知症及び変性眼疾患からなる群より選択されるフリーラジカルに起因する損傷；並びに／又はウイルス性疾患の予防又は治療に使用するための前記組成物である。

本発明のさらなる目的は、さらに、必要に応じて２−（２−エトキシエトキシ）エタノールを含む前記組成物である。

本発明によると、用語「相当な量（significant amount）」とは、溶媒系１ｍｌに対して５ｍｇよりも多いか又は５ｍｇと等しい量のレスベラトロールが完全に可溶化されることを意味する。

本発明によると、用語「均質（な）（homogeneous）」とは、相分離がなく、懸濁された粒子がなく、固体沈殿物がなく、かつ溶質（レスベラトロール）が溶媒系中に完全に溶解していることを意味する。

本発明のさらなる目的は、脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン及びｎ−３ＰＵＦＡからなる溶媒系溶液を調製する工程及びこの溶媒系溶液にレスベラトロールを添加する工程を含む、本発明の組成物の調製方法であって、レスベラトロールが完全に溶解した「均質」溶液の生成は、実験の項で例示されるように得られる。

本発明による組成物はまた、実質的に活性を損なうことなく他の有用成分を含んでもよい。本発明による有用成分の限定されない例は、１若しくは複数のビタミン、１若しくは複数のミネラル、１若しくは複数の補酵素、１若しくは複数の抗酸化剤及び／又は１若しくは複数の植物抽出物を含む。

本発明のさらなる目的は、上記成分を、必要に応じて１若しくは複数の薬学的に許容可能なベヒクル及び／又は賦形剤との混合物で含む組成物である。

本発明による使用に適した医薬組成物は、一般に、当該分野の専門家によって容易に選択可能な、少なくとも１つの薬学的に許容可能なベヒクル及び／又は１つの希釈剤及び／又は１つの界面活性剤及び／又は１つの増粘剤及び／又は１つの結合剤及び／又は１つの滑沢剤及び／又は１つの着香剤及び／又は１つの着色剤及び／又は１つの安定化剤などを含む。

本発明の組成物は、慣用の補助剤（adjuvant）、担体、希釈剤又は賦形剤とともに、医薬組成物及びその単位剤形の形態で含まれてもよく、このような形態は、錠剤若しくは充填したカプセル剤などの固体；又は液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤若しくはそれらを充填したカプセル剤などの液体として、すべて経口用途に用いられてもよい。経口投与用組成物は、バルク液剤若しくは懸濁剤又はバルク散剤の形態をとっていてもよい。しかし、通常、組成物は、正確な投薬を容易にするために単位投薬形態（単位剤形）で与えられる。用語「単位投薬形態」とは、ヒト被験体及び他の動物に対する単位投薬量として適切な物理的に別々の（分離した）単位をいい、各単位は、所望の治療効果を得るために計算された所定量の有効物質と、適切な薬学的賦形剤とを含む。

経口投与に適した液体形態としては、緩衝剤、懸濁化及び分散化剤、着色剤、矯味剤などを含む適切な水性又は非水性ベヒクルが挙げられる。

経口投与用の上記成分は、単に代表的なものにすぎない。さらなる材料並びにプロセス技術などは、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, Merck Publishing Company, Easton, Pennsylvaniaの第５部（Part 5）に記載されている。この文献は、参照することにより本明細書に組み入れられる。

本発明による組成物は、フードサプリメント（food supplement）又はダイエタリーサプリメント（dietary supplement）として処方されてもよく、これらは本発明のさらなる目的を構成する。

本発明による組成物は、当該分野において公知であって臨床実務においてすでに使用されている有効成分を含む。従って、このような有効成分は、以前から販売されており、かつヒト又は動物への投与に適したグレードの製品であるので、非常に調達しやすい。

レスベラトロール（３，５，４’−トリヒドロキシ−ｔｒａｎｓ−スチルベン）は、スチルベノイドであり、天然フェノールの一種であり、細菌又は真菌などの病原体から攻撃を受けているときにいくつかの植物によって天然に産生されるフィトアレキシンである。

用語「ω−３多価不飽和脂肪酸」（本明細書において、「ｎ−３ＰＵＦＡ」と略される）とは、長鎖多価不飽和脂肪酸、一般的には、Ｃ_１６〜Ｃ_２４鎖（特にＣ_２０〜Ｃ_２２鎖）を有する長鎖多価不飽和脂肪酸であって、ｎ−３位（すなわち、脂肪酸のメチル末端から第３番目の結合）に炭素−炭素二重結合を共通に有するファミリーをいう。天然に見出される最も一般的なω−３多価不飽和脂肪酸の例を、それぞれの名前とともに以下の表に示す。

最も好ましい長鎖多価不飽和脂肪酸は、ａｌｌ−ｃｉｓ−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びａｌｌ−ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。

好ましくは、本発明によるｎ−３ＰＵＦＡは、ＥＰＡ及びＤＨＡを高含有量で含む脂肪酸の混合物であり、例えば、ＥＰＡ及びＤＨＡの含有量は、脂肪酸総重量を基にして、２５重量％よりも高く、好ましくは約３０重量％〜約１００重量％、特に約７５重量％〜９５重量％、及びより好ましくは少なくとも８５重量％である。好ましくは、本発明によるｎ−３ＰＵＦＡの総含有量は、脂肪酸総重量を基にして、少なくとも９０重量％のｎ−３ＰＵＦＡを有する脂肪酸の混合物である。

本明細書において用いられる用語「ＰＵＦＡ」及び「ｎ−３ＰＵＦＡ」には、対応するそれらのＣ_１〜Ｃ_３アルキルエステル（好ましくは、エチルエステル）及び／又はそれらの薬学的に許容可能な塩基［水酸化ナトリウム、リシン（リジン）、アルギニン又はアミノアルコール（コリンなど）など］との塩を包含することが意図される。エチルエステルは、本発明において最も広範に使用され、かつ好ましい。

本発明の組成物は、経口的に投与され、特に、軟ゼラチンカプセル剤の形態で投与される。経口用途について、単位用量は、一般的に、ω−３系の多価不飽和脂肪酸を１００〜１０００ｍｇ、好ましくは５００〜１０００ｍｇ又は３００〜５００ｍｇ含み、総用量は、通常、１日当たり約０．１〜３．０ｇ、好ましくは１日当たり０．３〜２．０ｇ、最も好ましくは１日当たり１．０ｇである。

有効成分として上記仕様（specification）を満たし、かつ本発明に従って使用できる具体的なｎ−３ＰＵＦＡ含有薬剤は、すでに販売されており入手可能である。

製品のこの量は、所望の血中濃度に達するために、１日数回に分けた用量の形態で、又は好ましくは単回用量として投与されてもよい。当然のことながら、臨床医は、患者の状態、年齢及び体重に応じて、投与されるべき製品（又は他の治療剤との混合物）の量を変更してもよい。

他の種類の経口投与用処方物（例えば、多価不飽和脂肪酸を固体支持体に吸着した硬カプセル剤又は錠剤）もまた、本発明の目的に適している。乳剤、分散賦形剤中の顆粒剤（granulates）、シロップ剤、液滴剤（droplets）など、及び病状の重篤度に基づいて当該分野の専門家によって評価され、非経口用途に適した薬物の全身性吸収を確実にできる他の投与形態（滅菌液剤又は乳剤など）を使用することも可能である。

欧州薬局方２０００（European Pharmacopoiea 2000 (EuPh. 2000)）に説明される組成物は、９０重量％よりも多いか又は９０重量％と等しい量のω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）又は多価不飽和脂肪酸エチルエステルを含み、その８０重量％よりも多いか又は８０重量％と等しい量は、ＥＰＡエチルエステル及びＤＨＡエチルエステルの混合物に相当し、本発明の目的にも適している。

ＥＰＡとＤＨＡとの最も好ましい比は、約０．６〜１．１／１．３〜１．８；特に、０．９〜１．５である。

好ましくは、脂肪酸総重量に対して、ＥＰＡ（エチルエステルとして）の含有量は４０〜５１重量％であり、ＤＨＡ（エチルエステルとして）の含有量は３４〜４５重量％である。

ホスファチジルコリン（ＰＣ）は、頭部基（head group）としてコリンを有するリン脂質の一種である。ホスファチジルコリンは、生体膜の主成分であり、卵黄又は大豆などの簡単に入手可能な様々な供給源からヘキサンを用いて機械的に抽出又は化学的に抽出することによって容易に得ることができる。ホスファチジルコリンはまた、動物及び植物組織に存在する黄褐色の脂肪質の物質のレシチン群の１つである。

本発明のために、イオン性乳化剤は、Ｅｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００などのホスファチジルコリンを少なくとも９２％と豊富に含む脱油及び精製大豆レシチンである。当該分野において、大豆レシチンは、抗コレステロール活性（anticholesterolemic activity）を有することは公知である。従って、本発明の他の効果は、ｎ−３ＰＵＦＡとレスベラトロールとの組み合わせにおける前記大豆レシチンが、本発明の組成物の薬理学的活性を相加的挙動で増大させることである。

本発明によるレシチンの限定されない例は、商品名「Ｅｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００」の名で販売されているものである。

本発明の他の実施形態において、組成物は単位剤形（形態）を有し、この単位剤形において、有効成分は、単一の薬学的剤形中に存在し、特に、不活性支持体に吸着されている。本発明による組成物は、必要に応じて、有効成分とともに、少なくとも１つの薬学的に許容可能なベヒクル又は賦形剤を含む。

本発明の実質的な効果及び予期せぬ効果を実証するために、本発明は、以下の実施例に従って実施されるが、これらの例に限定されない。

（発明の詳細な説明）
（実施例）
（材料及び方法）
本発明のために、以下の材料を用いた：
・ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）は、多価不飽和脂肪酸エチルエステルの混合物であって、ＥＰＡ及びＤＨＡの含有量が８５％よりも高く、ＥＰＡ／ＤＨＡ比が０．９〜１．５であり、ＳＰＡ（Pronova、ノルウェー）によって供給された製品である；
・レスベラトロールは、Royalmount Pharma（カナダ、モントリオール）によって供給される；
・商品名Ｌａｂｒａｓｏｌ（ラブラゾル）（登録商標）としても公知のグリセリル及びポリエチレングリコールエステルの混合物は、GATTEFOSSE’ ITALIA, S.r.l（イタリア、ミラノ）によって供給される；
・商品名Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ（ラウログリコール）９０（商標）としても公知のプロピレングリコールモノラウレートは、GATTEFOSSE’ ITALIA, S.r.l（イタリア、ミラノ）によって供給される；
・商品名Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（クレモフォール）ＲＨ４０（登録商標）としても公知のポリオキシエチレングリセロールトリヒドロキシステアレートは、BASF Italia Srlによって供給される；
・商品名Ｔｗｅｅｎ（ツイーン）８０（登録商標）としても公知のポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエートは、Sigma-Aldrichによって供給される；及び
・商品名Ｅｐｉｋｕｒｏｎ（エピクロン）（商標）２００としても公知の脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチンは、Cargillによって供給される。

（ＨＰＬＣ分析）
溶液が一見して透明であったすべての処方物について、同じ方法を適用した。分析される溶液を、機械的に遠心分離しながら放置し、次いで、上澄みをＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）フィルター（孔のサイズ：０．２２μｍ）による濾過によって分離して、Column Intersil ODS-3 4.6x250mm、溶離液としてＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ（７０／３０）溶液＋０．１％ＣＦ_３ＣＯＯＨを用いて、流速１ｍｌ／分及びUV/VIS Detector（λ＝３１１ｎｍ）でＨＰＬＣにより分析した。

（安定性分析）
処方物を４つの群に分けた。各群を、それぞれ、６０％ＲＨ（相対湿度）で５℃、６０％ＲＨで２５℃、６０％ＲＨで３０℃、及び７０％ＲＨで４０℃にて３か月間放置した。

次いで、１０ｍｌのサンプルを取り、適切な量を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。ＥＰＡ、ＤＨＡ及びレスベラトロールの検出量の百分率を、重量％として表した。

（処方物１）
５００ｍｇのポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標））を４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで３時間、２２℃、６０％ＲＨで機械的に攪拌しながら放置したところ、乳白色の溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた混合物をさらに６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

（処方物２）
５００ｍｇのポリオキシエチレングリセロールトリヒドロキシステアレート（ＣｒｅｍｏｐｈｏｒＲＨ４０（登録商標））を４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで３時間、２２℃、６０％ＲＨで機械的に攪拌しながら放置したところ、乳白色の溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた混合物をさらに、６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

（処方物３）
５００ｍｇのグリセリル及びポリエチレングリコールエステルの混合物（Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標））を４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで３時間、２２℃、６０％ＲＨで機械的に攪拌しながら放置したところ、乳白色の溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた混合物をさらに、６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

（処方物４）
５００ｍｇのプロピレングリコールモノラウレートの混合物（Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ９０（商標））を４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで３時間、２２℃、６０％ＲＨ（相対湿度）で機械的に攪拌しながら放置したところ、透明な溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた溶液及び混合物をさらに、６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

（処方物５）
５００ｍｇのドクサートナトリウムを４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで１８時間、２２℃、６０％ＲＨで機械的に攪拌しながら放置したところ、透明な黄色溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた溶液及び混合物をさらに、６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

（処方物６）
５００ｍｇの脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００）を４．５ｇのｎ−３ＰＵＦＡに添加し、この溶液を６００ｒｐｍで１８時間、２２℃、６０％ＲＨで機械的に攪拌しながら放置した。透明な黄色溶液が認められた。２ｍｌのサンプルを取り出して、５０ｍｇのレスベラトロールを添加し、得られた混合物をさらに、６００ｒｐｍで２４時間、２２℃で機械的に攪拌しながら放置した。次いで、この溶液を上記の方法でＨＰＬＣにより分析した。

この処方物について、安定性試験も実施した。最初にＥＰＡ、ＤＨＡ及びレスベラトロールの量の百分率を測定した後、この溶液を４つのサンプルに分けて、それぞれ異なる温度で６か月間放置した。次いで、サンプルをＨＰＬＣにより分析した。結果を以下の表に示す。最初の測定時間で組成物中のレスベラトロールの少なくとも８５％が、４０℃、７０％ＲＨで６か月放置後に維持されていた。

比較を容易にするため、すべての前記処方物に対して、乳化剤を添加したω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）中のレスベラトロールの最大溶解度について得られた結果を、表２にまとめる。

（結果の考察）
本願に示された実験データから、使用した溶媒系が、ｎ−３ＰＵＦＡへの溶解性に乏しいレスベラトロールの相当な量を完全に可溶化できることが分かる。

表２の結果から明らかなように、ＰＵＦＡ単独中のレスベラトロールの溶解度（０．２５ｍｇ／ｍｌ）は、Ｅｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００を含む処方物では７２倍増大し、最大１８ｍｇ／ｍｌに達する。

処方物６によって示された安定性により、レスベラトロールのω−３脂肪酸溶液は、脂質代謝障害及び／若しくは血小板凝集の増大に起因する心臓血管疾患、フリーラジカルに起因する損傷並びに／又はウイルス性疾患の予防又は治療に使用する経口投与用組成物を容易に調製するために非常に有用になる。

レスベラトロールとω−３脂肪酸及びＥｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００からなる溶媒系とを含む組成物はまた、他の有用成分をさらに可溶化及び送達するために容易に使用できる。

さらに、本発明の組成物の調製方法は簡単であり、産業上の利用に特に適している。

血小板は、心臓血管疾患において重要な役割を果たすが、十分に認識されていないことが多い。例えば、血小板の正常な応答は凝集促進刺激の増大又は抗凝集物質の減少のいずれかによって変化して、血小板の活性化／凝集が増大した病態をもたらすことがあり、この病態は、慢性（例えば、永続的な狭心症）及び急性（例えば、急性心筋梗塞）双方の心臓血管疾患状態で起こる。さらに、血小板の凝集過剰は、冠状動脈性疾患の危険因子（例えば、喫煙、高血圧及び高コレステロール血症）とも関連する。最終的に、上記疾患状態の治療における抗血小板療法の範囲を拡大すると、心臓血管疾患の病因において血小板が果たす極めて重要な役割がさらに強調される。最近発表された論文には、ホメオスタシスの維持における血小板の正常な生理学的役割、心臓血管疾患において血小板機能障害の一因となる病態生理学的プロセス、並びに抗血小板療法の関連する役割及び恩恵の包括的な概要が示されている［Willoughby S, Holmes A, Loscalzo J Eur J Cardiovasc Nurs. 2002 Dec;1(4):273-88（非特許文献２）］。

European Cardiology, 2005; 1-6 Eur J Cardiovasc Nurs. 2002 Dec;1(4):273-88 J Ophthalmol. 1995 Feb; 23(1): 3-7 Cardiology Research and Practice, Volume 2012: 1-16 Blood 2002: 100: -1340-6 Circulation 3 1999: 99: 2452-7 Lancet 1999 354: 447-55 Curr. Opin. Lipidol. 2001; 12: 11-7 Nutrition and Dietary Supplements 2011 September 14;: 93-100 Circulation January 2005, 111 (2) p10-11 Mol. Interv., 2006, 6 (1): 36-47 Experimental Dermatology, 2006, 15 (9): 678-84 Life Sci., 71, 2145-52, 2002 Lancet, 341, 1103-1104, 1993 Science, 275, 218.220, 1997 Proc. Natl. Acad. Sc., 94, 14138-14143, 1997 Life Science, 61, 2103-2110, 1997 Brit. J. Pharm., 126, 673-680, 1999 J. Imm., 164, 6509-6519, 2000 Biochemistry. 1999, 38, 13244-13251 FEBS Lett., 421, 277-279, 1998 Carcinogenesis. 1988 Jun;9(6): 959-963 FASEB J., 1613-1615, 2000 Clin Biochem 2001; 34: 415-420 Free Radic. Res., 33, 105-114, 2000

Claims

（ａ）以下からなる溶媒系：
ω−３多価不飽和脂肪酸又はそのアルキルエステル、及び
脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン、又はホスファチジルコリンが９２％よりも多い量で存在する脱油ホスファチジルコリン濃縮レシチン、又はＥｐｉｋｕｒｏｎ（商標）２００からなる群より選択されるイオン性乳化剤；並びに
（ｂ）レスベラトロール又はレスベラトロール含有天然抽出物
を含む組成物であって、
レスベラトロールが完全に溶解されることを特徴とし、均質である組成物。
ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）が、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸又はその混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
エイコサペンタエン酸とドコサヘキサエン酸との比が０．５〜２であることを特徴とする請求項２記載の組成物。
ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）が、ＥＰＡ及びＤＨＡの含有量が脂肪酸総重量に対して７５重量％〜９５重量％、好ましくは少なくとも８５重量％である脂肪酸の混合物であり、かつｎ−３ＰＵＦＡの総含有量が、脂肪酸総重量に対して少なくとも９０重量％であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）が、ＥＰＡエチルエステル及びＤＨＡエチルエステルを０．９〜１．５の比で含む混合物であり、脂肪酸総重量に対して、ＥＰＡエチルエステルの含有量が４０〜５１重量％であり、かつＤＨＡエチルエステルの含有量が３４〜４５重量％である請求項１記載の組成物。
ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）のアルキルエステルが、エチルエステル、メチルエステル若しくはプロピルエステル又はその混合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
ω−３多価不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）の量が、０．５〜１．０ｇ、好ましくは０．８〜０．９ｇ、より好ましくは０．９ｇである請求項１記載の組成物。
ｎ−３ＰＵＦＡの残存率が、４０℃で３か月後に少なくとも９４重量％であり、３０℃で３か月後に少なくとも９６重量％であり、２５℃で３か月後に少なくとも９８重量％であり、かつ５℃で３か月後に少なくとも９９重量％である請求項１記載の組成物。
レスベラトロールの残存率が、４０℃で３か月後に少なくとも８５重量％であり、３０℃３か月後に少なくとも９４重量％であり、２５℃で３か月後に少なくとも９７重量％であり、かつ５℃で３か月後に少なくとも９９重量％であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
ダイエタリーサプリメント又は経口投与用薬剤の形態である請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
さらに、１若しくは複数のビタミン、１若しくは複数のミネラル、１若しくは複数の補酵素、１若しくは複数の抗酸化剤及び／又は１若しくは複数の植物抽出物を含む請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
さらに、少なくとも１つの薬学的に許容可能なベヒクル又は賦形剤を含む請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
経口投与のために、腸溶性コーティング剤を必要に応じて含む軟ゼラチンカプセルによってカプセル化されることを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
脂質代謝障害及び血小板凝集の増大に起因する心臓血管疾患；アテローム性動脈硬化症、癌、炎症性関節疾患、喘息、糖尿病、老人性認知症及び変性眼疾患からなる群より選択されるフリーラジカルに起因する損傷；並びに／又はウイルス性疾患の予防又は治療に使用するための請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。