JP2017507955A - 肝臓癌のためのソラフェニブとマイクロｒｎａの併用療法 - Google Patents

Abstract

肝臓癌を患う被験体を処置する方法は、肝臓癌を患う被験体に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含む合成オリゴヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５模倣体）を投与する工程；及び被験体にソラフェニブを投与する工程を含み得、ここで、被験体に投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００の範囲にある（例えば、優れた、例えば、相乗的な又は相加作用よりも大きな効果を提供する比率）。【選択図】図４

Description

本発明は、癌のための併用療法（又は多剤療法）、より具体的には、肝臓癌のためのソラフェニブとオリゴヌクレオチド（例えばマイクロＲＮＡ模倣体）の併用療法に関する。

肝臓癌（又は肝癌）は肝臓に生じる癌である。原発性肝癌は、世界中で５番目の最も頻繁に診断された癌であり、且つ２番目の癌死亡の主要原因である。肝臓癌は、肝臓の表面又は内部で増殖する悪性腫瘍である。肝臓癌は、肝臓自体、又は、血管又は胆管を含む肝臓内の構造から形成される。

肝臓癌の主要原因はＢ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスによるウイルス感染である。癌は通常、このようなウイルスにより引き起こされた肝硬変に付随して生じる。このため、肝臓癌の最も高い率は、東アジアとサハラ以南のアフリカを含む、このようなウイルスが風土性である場所で生じる。肝臓癌は二次的な肝臓癌としても知られる肝転移と混同されてはならず、これは、身体のあらゆる場所の臓器から生じ且つ肝臓に移動する癌である。

全ての原発性肝臓癌の約７５％を占める最も頻繁な肝臓癌は、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。ＨＣＣは、悪性になる肝細胞として知られる、肝臓細胞により形成される癌である。肝臓細胞により形成された癌の別の型は肝芽腫であり、これは未熟な肝臓細胞により特異的に形成される。これは、主として子供において進行し、且つ子供における全ての癌の約１％及び１５歳未満の全ての原発性肝臓癌の７９％を占める、珍しい悪性腫瘍である。

肝臓癌はまた、胆管、血管、及び免疫細胞などの肝臓内の他の構造から生じ得る。胆管癌（肝内胆管癌と胆管細胞嚢胞腺癌）は、原発性肝臓癌の約６％を占める。ＨＣＣと肝内胆管癌の両方から成る、異なる型のＨＣＣも存在する。肝臓血管の腫瘍は血管肉腫と血管内皮細胞腫を含む。胎児性肉腫と線維肉腫は、間葉として知られる一種の結合組織から生成される。肝臓の筋肉から生成された癌は平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫である。他のあまり一般的でない肝臓癌は、癌肉腫、奇形腫、卵黄嚢腫瘍、カルチノイド腫瘍、及びリンパ腫を含む。リンパ腫は通常、肝臓に対するびまん性浸潤を有するが、珍しい場合においては肝重（ｌｉｖｅｒ ｍａｓｓ）を形成する場合もある。

外科的切除は大抵、肝硬変の無い肝臓の処置の選択肢である。肝不全など合併症の危険性の増加が、硬変肝の切除により生じる場合がある。切除後の５年生存率は、ここ数十年にわたり大きく改善されてきたが、今では５０％を超える場合がある。初期の腫瘍の拡散又は新たな腫瘍の形成により切除後の再発率は、７０％を超える。このような形の処置が許容され得、且つ腫瘍が特異的な基準（例えばＭｉｌａｎ基準）を満たす、ＨＣＣの場合においては、肝臓移植も使用され得る。癌は大抵後期に検出されるので、ＨＣＣを患う個体の３０−４０％未満は外科手術及び移植に適格である。また、ＨＣＣは肝移植の待ち時間の間に進行する場合があり、最終的に移植を妨げ得る。

経皮切除は、治癒を提供することができる唯一の非外科的処置である。経皮切除には多くの形態があり、それは、肝臓への化学物質の注入（エタノール又は酢酸）、又は、高周波アブレーション、マイクロウェーブ、レーザー、又は寒冷療法を使用した過度の温度の生成から成る。このうち、高周波アブレーションは、ＨＣＣにおける最良の評判の１つを有しているが、その制限は、発熱とヒートシンク（ｈｅａｔ ｓｙｎｃ）効果それぞれにより他の臓器及び血管の近くにある腫瘍を処置することができないことを含む。

全身性の化学療法剤はＨＣＣにおいて慣例的に使用されないが、局所的な化学療法が経動脈的な化学塞栓術として知られる手順において使用される場合がある。この手順において、リピオドールを含むドキソルビシン又はシスプラチンなどの細胞毒性薬が投与され、肝臓を満たす動脈がゼラチンスポンジ又は他の粒子により塞がれる。大半の全身性の薬物がＨＣＣの処置に効果がないので、肝臓癌の生成に関与する分子経路に対する研究により、ソラフェニブ、細胞増殖を予防する標的化治療薬物、及び幾つかの状況における血液細胞増殖がもたらされた。

肝臓は放射線に耐性がないため、放射線療法はＨＣＣにおいてあまり使用されない。しかし現代の技術により、腫瘍に十分に標的化された放射線をもたらし、その残りに対する用量を最小限にすることが可能である。化学塞栓術、局所化学療法、全身化学療法、又は標的化治療薬物を加えた放射線療法の２重の処置は、放射線療法のみに対して利益を示すかもしれない。

ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）として市場に出ている）は、進行した原発性肝臓癌を患う患者のためのＦＤＡ承認薬である。ソラフェニブは、多数の細胞内キナーゼ及び細胞表面キナーゼと相互に作用する小分子であり、Ｒａｆ／Ｍｅｋ／Ｅｒｋ経路を標的とするという点で独特である。このようなキナーゼの阻害により、細胞増殖と血管新生に関する遺伝的転写が阻害される。しかし、ソラフェニブのような薬物の開発があっても、肝臓癌のための現在の処置の選択肢は、その限定された効果と重い毒性により不十分である。

新たな治療及び現存の治療に対する研究は進行中であるが、任意の臨床的に関係のある進展をもたらしてはいない。一例において、研究者は、マイクロＲＮＡ技術がソラフェニブなど既知の治療剤を改善するかもしれないと仮定した。Ｙａｎｇらの「ＭｉｃｒｏＲＮＡ−３４ａ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｂｃｌ−２ ａｎｄ Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ Ｈｕｍａｎ Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｔｏ Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」１−１０ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ２０１３ Ｊｕｌｙ １１を参照。しかし、この研究は、マイクロＲＮＡとソラフェニブとの間に相乗効果、或いは相加作用よりも大きな効果を確立しなかったという点で制限され、投薬時の任意の臨床的関連情報又はガイダンスを確立しなかった。薬物間の相互作用の性質、及び、２つの薬剤が相乗的、付加的、又は拮抗的に協働するかどうかについては、薬物比率、薬物濃度、及び所望の効能に依存して異なり得る。それ故、薬物の組み合わせは典型的に、相加性のＬｏｅｗｅのモデルに基づいて数学アルゴリズムを使用して評価される。このモデルにおいて、組み合わせ指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）（ＣＩ）値は、単独及び組み合わせで使用される場合の単一の薬剤単独の用量−反応曲線に由来すると計算される。ＣＩ＜１、ＣＩ＝１、及びＣＩ＞１はそれぞれ、相乗的、相加的、及び拮抗的な相互作用を示す。

故に、患者の結果を改善し且つ毒性を減らすための新たな治療が必要とされる。

本発明は、ソラフェニブとマイクロＲＮＡとの特定の組み合わせが、肝臓癌細胞の増殖の阻害及び予防時に特に有効であるという発見に、少なくとも部分的に基づく。この発見は、ソラフェニブ、ｍｉＲ−３４、並びにｍｉＲ−２１５、及び肝臓癌（例えばＨＣＣ）に特異的な相乗効果、又は相加作用よりも大きな効果として記載され得る。この発見は、多数の肝臓癌の細胞型にわたってｍｉＲ−３４及びｍｉＲ−２１５には一貫しているが、必ずしも他のマイクロＲＮＡ、化学療法剤、及び／又は癌には直接及ばない。更に、この発見は、ソラフェニブとｍｉＲ−３４又はｍｉＲ−２１５との全ての比率には及ばず、比率の中にはほぼ相加的なものもあれば、拮抗するものもある。従って、本発明は、被験体の肝臓癌細胞を含む肝臓癌を処置するための方法と組成物を提供し、それによりソラフェニブとｍｉＲ−３４又はｍｉＲ−２１５の模倣体が、特に有効な比率（例えば、相乗的、又は相加的よりも上）で投与される。

例えば、様々な態様及び実施形態において、本発明は、肝臓癌を患う被験体（又は、原発性肝臓癌を患う被験体、或いはＨＣＣを患う被験体）を処置する方法を含む。前記方法は、被験体に合成オリゴヌクレオチドを投与する工程を含む。オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。前記方法は被験体にソラフェニブを投与する工程も含む。ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比（即ち、被験体に投与されるソラフェニブとオリゴヌクレオチドとのモル比）は、約１０−２０００（即ち、約１０−２０００の範囲）である。

様々な態様及び実施形態において、本発明は、肝臓癌細胞（又は原発性肝癌細胞、或いはＨＣＣ細胞）の増殖を阻害する方法を含む。該方法は細胞に合成オリゴヌクレオチドを投与する工程を含む。オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含む。前記方法は細胞にソラフェニブを投与する工程も含む。ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は約１０−２０００である。

様々な態様及び実施形態において、本発明は、肝臓癌細胞の増殖を阻害する方法を含む。該方法は、肝臓癌細胞に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドを投与する工程；及び細胞にソラフェニブを投与する工程を含み、投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００である。

様々な態様及び実施形態において、本発明は、肝細胞癌（ＨＣＣ）を患う被験体を処置する方法を含む。該方法は、ＨＣＣを患う被験体に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドを投与する工程；及び被験体にソラフェニブを投与する工程を含み、投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００であり、＜１の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ。

様々な態様及び実施形態において、本発明は、肝細胞癌（ＨＣＣ）を患う被験体を処置する方法を含む。該方法は、ＨＣＣを患う被験体に、１日につき約１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、又は２５０ｍｇ／ｍ^２のオリゴヌクレオチドを投与する工程を含み、オリゴヌクレオチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つの配列と少なくとも８０％同一である配列を含み；及び前記方法は、被験体に約８００、６００、４００、又は２００ｍｇ／日のソラフェニブを投与する工程を含み、ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、１日間、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間で被験体に投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの量に基づいて約１０−２０００であり、ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約０．９５、０．９０、０．８５、０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、０．２５、又は０．２０未満の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ。

様々な実施形態において、態様及び実施形態の何れかは、以下の特徴の何れか１以上と組み合わせられ得る。例えば次の通りである：

幾つかの実施形態において、肝臓癌は原発性肝臓癌である。

幾つかの実施形態において、肝臓癌は肝細胞癌（ＨＣ）である。

幾つかの実施形態において、配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−４の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、配列は少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である。

幾つかの実施形態において、モル比は相乗効果を示す。

幾つかの実施形態において、相乗効果は、約０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、０．２５、又は０．２０未満の組み合わせ指数（ＣＩ）として定量化される。

幾つかの実施形態において、モル比は、約５０−５００、５０−４００、５０−３００、５０−２００、５０−１００、１００−５００、１００−４００、１００−３００、１００−２００、１５０−５００、１５０−４００、１５０−３００、１５０−２００、２００−５００、２００−４００、２００−３００、２５０−５００、２５０−４００、又は２５０−３００の範囲にある。

モル比は、約１５−１７２３、１５−４９２、６０−１９７、３０−４９２、５２−１７２３の範囲、又は約３０、４０、５３、６０、７０、７９、８９、９８、１０６、１４１、１９７、２６６、３１１、又は９３１である。

モル比は、１日間、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間で被験体に投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの量に基づく。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、７日にわたり１、２、３、４、５、又は７日投与量；１４日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４日投与量；２１日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１日投与量；或いは２８日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８日投与量で被験体に投与される。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２週間（合計１４日）；１週間の休止付きで１週間（合計１４日）；３週間連続（合計２１日）；１週間の休止付きで２週間（合計２１日）；２週間の休止付きで１週間（合計２１日）；４週間連続（合計２８日）；１週間の休止付きで３週間連続（合計２８日）；２週間の休止付きで２週間（合計２８日）；又は３週間連続の休止付きで１週間（合計２８日）、被験体に投与される。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、７、１４、２１、又は２８日のサイクルの１日目に；２１又は２８日のサイクルの１及び１５日目に；２１又は２８日のサイクルの１、８、及び１５日目に；又は、２１又は２８日のサイクルの１、２、８、及び１５日目に投与される。

オリゴヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、又は８週間ごとに１回投与される。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２のサイクルの間投与される。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ソラフェニブの前に、ソラフェニブと同時に、又はソラフェニブの後に投与される。

幾つかの実施形態において、ソラフェニブの用量は約８００、６００、４００、又は２００ｍｇ／日である。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの用量は、１日当たり約１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、又は２５０ｍｇ／ｍ^２である。

幾つかの実施形態において、肝臓癌はソラフェニブに対する一次耐性又は二次耐性を持つ。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である５’から３’への配列を持つマイクロＲＮＡ領域と、（ｉｉ）前記マイクロＲＮＡ領域に６０−１００％相補的な５’から３’への配列を持つ相補的領域とを含む。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）分子の相補鎖の５’末端におけるヌクレオチドのリン酸塩又はヒドロキシルに対する置換基；（ｉｉ）相補的領域の最初又は最後の１乃至６の残基における１以上の糖修飾；又は（ｉｉｉ）相補的領域の３’末端における最後の１乃至５の残基における１以上のヌクレオチドと、対応するマイクロＲＮＡ領域のヌクレオチドとの間の非相補性のうち１以上を含む。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）５’末端において５’ＯＨ又はリン酸塩を遮断する少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、少なくとも１つのヌクレオチド修飾は、ＮＨ_２、ビオチン、アミン基、低級アルキルアミン基、アセチル基、又は２’酸素−メチル（２’Ｏ−Ｍｅ）の修飾であり；又は前記オリゴヌクレオチドは（ｉｉ）２’Ｆ、２’ＮＨ_２、２’Ｎ_３、４’チオ、又は２’Ｏ−ＣＨ_３から選択された少なくとも１つのリボース修飾を含む。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である配列を有する第１のポリヌクレオチド；（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドに６０−１００％相補的な５’から３’への配列を持つ別個の第２のポリヌクレオチド；及び（ｉｉｉ）相補鎖の５’末端において低級アルキルアミン基を含む。

幾つかの実施形態において、肝臓癌は肝細胞癌（ＨＣＣ）であり；配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一であり；及びモル比は＜１の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ。

幾つかの実施形態において、前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−８の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９と少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０と少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２と少なくとも８０％同一である。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、７−１３０、７−３０、７−２５、１５−３０、１５−２５、１７−３０、１７−２５、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の核酸塩基長さである。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは二本鎖又はヘアピンの構造を持つ。

幾つかの実施形態において、オリゴヌクレオチドはトランスフェクションにより投与される。

幾つかの実施形態において、被験体は細胞培養物又は組織培養物ではない。

幾つかの実施形態において、被験体は、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、又は非ヒト霊長類である。

本発明の様々な態様、実施形態、及び特徴が、以下に詳しく記載され、且つ請求項に提示される。そうとは言え、前述及び後述の記載は単に例示的且つ説明的なものであり、請求されるように、本発明に制限されない。

肝臓癌細胞におけるｍｉＲＮＡ模倣体の用量効果曲線を示す。連続希釈されたｍｉＲＮＡ（０．０３−３０ｎＭ）は肝臓癌細胞においてリバーストランスフェクトされ、細胞増殖又はパーセント阻害（効果）は、トランスフェクションの６日後にＡｌａｍａｒＢｌｕｅで判定された。データはモック（ｍｏｃｋ）トランスフェクト細胞へと標準化された。図１のＡはｍｉＲ−３４のデータを示す。図１のＢはｍｉＲ−１２４ａのデータを示す。図１のＣはｍｉＲ−２１５のデータを示す。図１のＤはｍｉＲ−１０１のデータを示す。図１のＥはｍｉＲ−２６ａのデータを示す。 肝臓癌細胞におけるソラフェニブの用量効果曲線を示す。細胞は、１つのウェルにつき２０００の細胞で９６ウェルのプレートに蒔かれた。細胞を蒔いて３日後、連続希釈におけるソラフェニブ（０．１−１００μＭ）は培地に加えられた。細胞増殖又はパーセント阻害は、薬物処置の３日後にＡｌａｍａｒＢｌｕｅで判定された。データは、ソラフェニブ溶媒（１％ ＤＭＳＯの終末濃度）で処置された細胞へと標準化された。 ０（阻害無し）から１（１００％阻害）までの軸にある、癌細胞阻害のレベルに対する実際の組み合わせ指数（ＣＩ）値を示すＣＩのプロットを示す。相乗的であると考慮され且つ臨床値を有する組み合わせは、最大限の癌細胞阻害において低いＣＩ値（＜０．６）を持つものである。図３ＡはｍｉＲ−３４のデータを示す。 ０（阻害無し）から１（１００％阻害）までの軸にある、癌細胞阻害のレベルに対する実際の組み合わせ指数（ＣＩ）値を示すＣＩのプロットを示す。相乗的であると考慮され且つ臨床値を有する組み合わせは、最大限の癌細胞阻害において低いＣＩ値（＜０．６）を持つものである。図３ＢはｍｉＲ−１０１のデータを示す。 ０（阻害無し）から１（１００％阻害）までの軸にある、癌細胞阻害のレベルに対する実際の組み合わせ指数（ＣＩ）値を示すＣＩのプロットを示す。相乗的であると考慮され且つ臨床値を有する組み合わせは、最大限の癌細胞阻害において低いＣＩ値（＜０．６）を持つものである。図３ＣはｍｉＲ−２６ａのデータを示す。 ０（阻害無し）から１（１００％阻害）までの軸にある、癌細胞阻害のレベルに対する実際の組み合わせ指数（ＣＩ）値を示すＣＩのプロットを示す。相乗的であると考慮され且つ臨床値を有する組み合わせは、最大限の癌細胞阻害において低いＣＩ値（＜０．６）を持つものである。図３ＤはｍｉＲ−２１５のデータを示す。 同所性のヒトＨｅｐ３ｂ異種移植片におけるｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ソラフェニブの組み合わせの、インビボでの効果を示す。 様々な範囲のソラフェニブ：ｍｉＲ−３４の比率及び投薬を提示する。

本発明は、ソラフェニブとマイクロＲＮＡの特定の組合せが、肝臓癌細胞の増殖を阻害し予防するのに特に有効であるという発見に、少なくとも部分に基づく。この発見は、ソラフェニブと、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−２１５との特定の組合せに対し、および肝臓癌に対し、特異的な相乗効果として、または相加的作用よりも大きな効果として記載することができる。この発見は、複数の肝臓癌の細胞型にわたり、ｍｉＲ−３４およびｍｉＲ−２１５の特定濃度に対し適合するものであるが、必ずしも他のマイクロＲＮＡ、化学療法剤、及び／又は癌には直接的には及ばない。確かに、ほとんどの医薬品は相乗効果を示さず、多数は拮抗する可能性がある。相乗効果が存在する場合でも、それは濃度のある範囲内でのみ存在することができる。従って、本発明は、肝臓癌細胞を含む肝臓癌および被験体の肝臓癌細胞を処置するための、予測できない利点を有する方法および組成物を提供し、それによって、ソラフェニブと、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５の模倣体とが、特に効果的（例えば、相乗効果的、または相加作用よりも効果的）な比率で投与される。

マイクロＲＮＡおよび合成オリゴヌクレオチド
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡｓ）は、同義遺伝子生成物および細胞経路を制御することによって、転写後に遺伝子発現を調節し細胞運命を決定する、小さな非コード型の自然発生的ＲＮＡ分子である（Ｂａｒｔｅｌ，Ｃｅｌｌ，２００４．１１６（２）：２８１−９７）。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡの転写を低下させるか、またはタンパク質翻訳機構をブロックするかのいずれかにより、遺伝子発現を妨害する（Ｂａｒｔｅｌ，ｓｕｐｒａ）。ｍｉＲＮＡは、完全にまたは部分的に相補的な配列を有するｍＲＮＡを標的とし、これらの調節ＲＮＡに、広範でありながら特定的であるｍＲＮＡのセットを標的とする能力を付与する細胞増殖、分化、アポトーシス、幹細胞発生および免疫機能のような多くの工程において役割を有する、１５００ほどの注釈されたヒトのｍｉＲＮＡ遺伝子が、現在までに存在する（Ｃｏｓｔｉｎｅａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００６．１０３（１８）：７０２４−９）。ｍｉＲＮＡの誤調節はしばしば、癌を含むヒトの疾患の進行の一因となり得る（Ｅｓｑｕｅｌａ−Ｋｅｒｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２００６．６（４）：２５９−６９；Ｃａｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００６．６（１１）：８５７−６６）。癌内で脱調節されたマイクロＲＮＡは、真の腫瘍抑制因子または発癌遺伝子として機能し得る。単一のｍｉＲＮＡは、複数の発癌遺伝子および発癌遺伝子性のシグナル伝達経路を標的とすることができ（Ｆｏｒｇａｃｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌ Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｓ，２００１．７（１）：６−１３）、この能力を将来の処置へ翻訳することは、腫瘍の異質性に対し効果的な治療薬を作成する見込みを持つ可能性がある。したがってｍｉＲＮＡは、癌のための強力な治療薬になる潜在能力を有し（Ｖｏｌｉｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００６．１０３（７）：２２５７−６１；Ｔｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ， ２００８．１５（６）：３４１−５５）、前記治療薬は、複数の癌経路に介入したときにのみ首尾よく処置することが可能である「経路疾患」としての癌に関する現在の理解にしたがって作用する（Ｗｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１０．７０（１４）：５９２３−５９３０．；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８．３２１（５８９７）：１８０１−６；Ｐａｒｓｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００８．３２１（５８９７）：１８０７−１２）。

２０１３年３月時点で、ミルナ セラピューティクス（オースティン、テキサス州）は、ｃＧＭＰ物質の製造を支援するための前臨床開発プログラム、およびｍｉＲ−３４系補給処置（ｍｉＲ−３４ーＭｉｍ）のためのＩＮＤを可能にする研究の実行を完了させた。ミルナは、マウス、ラットおよび非ヒト霊長類を使用した非ＧＬＰのパイロット研究において、ｍｉＲ−３４模倣体を含む製剤の薬物動態プロファイルとともにその毒性も評価した。これらの試験は、臨床観察、体重、臨床化学（ＬＦＴ、ＲＦＴおよびその他を含む）、血液学、総体病理学、選択した器官の組織病理学、および補体（ＣＨ５０）によって測定されたように、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの予測された処置レベルで、有害事象を示さなかった。加えて、脂質ナノ粒子に処方されたｍｉＲＮＡ模倣体は、ヒトの全血試料と同様に、完全免疫適格性マウス、ラット、非ヒト霊長類において実証されるように、先天性免疫系システムを誘発しない。前臨床データのより詳細な評価は、Ｂａｄｅｒ，Ｆｒｏｎｔ Ｇｅｎｅｔ．２０１２；３：１２０において提供される。

本発明方法において、特定の合成オリゴヌクレオチド（例えば合成のマイクロＲＮＡ模倣体）が、ソラフェニブを組み合わせる併用療法の一部として被験体に投与される。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ、ｍｉＲ−４４９ｃ、ｍｉＲ−１９２またはｍｉＲ−２１５の模倣体である。これらのマイクロＲＮＡはこの技術分野において公知であり、また当業者は、それらが、従来の自然発生的配列、および、その任意の化学的修飾物、および、その配列同族体を含むと理解するだろう。代表的な配列は、下記の表１で提供される。

様々な様相および実施形態において、本発明は、マイクロＲＮＡ模倣体として合成オリゴヌクレオチドを使用する。そのため、オリゴヌクレオチドまたはマイクロＲＮＡは、被験体細胞内にトランスフェクトされない。むしろ、様々な実施形態において、オリゴヌクレオチドは、注射または輸液によって投与される。分離された細胞、組織またはそれらの培養物よりもむしろ、被験体は、哺乳動物（例えばヒト、またはマウス、ラット、モルモット、ウサギ、豚、非ヒト霊長類などのような実験動物）であり得る。同様に、本発明は、アンチセンス、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）または類似の技術を使用しない。繰り返すと、本発明のオリゴヌクレオチドまたはマイクロＲＮＡは、「有意」のストランドまたは模倣体であるという点で上記は重要な相違点であり、これはアンチセンスおよびＲＮＡｉの対極にある。

一般に、本発明に関連して使用されるオリゴヌクレオチドは、７−１３０のヌクレオチド長さであり、二本鎖ＲＮＡ分子を有し、２本の別々のストランド構造またはヘアピン構造を有する。例えば、オリゴヌクレオチドは、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、７−３０、７−２５、１５−３０、１５−２５、１７−３０または１７−２５のヌクレオチド長さである。２本のストランドの１本は、「ガイドストランド」と呼ばれ、下記の表に示される親マイクロＲＮＡ配列のシード配列（ヌクレオチド位置２−９）と同一または実質的に同一の配列を含んでいる。本明細書で使用されるように、「実質的に同一」とは、せいぜい１または２つの置換及び／又は欠損が許容されることを意味する。いくつかの実施形態において、ガイドストランドは、ここで提供される配列の全長それぞれに対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％が同一である配列を含む。２本のストランドのうちの他方は、「パッセンジャーストランド」と呼ばれ、対応する所与のマイクロＲＮＡのシード配列に対し相補的または実質的に相補的な配列を含む。本明細書で使用されるように、「実質的に相補的」とは、せいぜい１または２つのミスマッチ及び／又は欠損が許容されることを意味する。いくつかの実施形態において、パッセンジャーストランドは、ここで提供される配列の全長それぞれの相補体に対し、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％が同一である配列を含む。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ、ｍｉＲ−３４ｃ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ、ｍｉＲ−４４９ｃ、ｍｉＲ−１９２もしくはｍｉＲ−２１５の模倣体、またはそれらの類似体もしくは同族体である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、これらのマイクロＲＮＡのうちの１つのシード配列を含む。

合成オリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第７，８５８，１１７号および第７，３７１，４０４号、米国特許出願公開第２００９−０３０６１９４号および第２０１１−０００９６４１号において記載されたもののように、リポソームの形態に製剤することができる；脂質や様々なリガンドの活用などを含む、他の送達技術が利用可能である。

合成オリゴヌクレオチドも化学的に修飾することができ、例えば、合成オリゴヌクレオチドは、パッセンジャーストランド（例えばＮＨ２−（ＣＨ２）６−Ｏ−）上の５’キャップ、及び／又は、同じストランドの第１及び／又は第２のヌクレオチドのミスマッチを有する。他の可能な化学的修飾は、骨格修飾（例えばホスホロチオエート、モルフォリノ）、リボース修飾（例えば２’−ＯＭｅ、２’−Ｍｅ、２’−Ｆ、２’−４’−固定化／架橋化糖（例えばＬＮＡ、ＥＮＡ、ＵＮＡ））を、核酸塩基修飾とともに含むことができる（例えば、Ｐｅａｃｏｃｋ ｅｔ ａｌ，２０１１．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，１３３（２４）：９２００−９２０３を参照）。ある実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、米国特許第７，９６０，３５９号および米国特許出願公開第２０１２−０２７６６２７号および第２０１２−０２８８９３３号において記載されたような修飾を有する。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％が同一である５’から３’への配列を有するマイクロＲＮＡ領域、および（ｉｉ）マイクロＲＮＡ領域と６０−１００％が相補的である５から３’への配列を有する相補的領域、を含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１−１２のうちの少なくとも１つと、少なくとも８０、８５、９０、９５、または１００％同一である配列を含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、単一のポリヌクレオチド、または２本鎖ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、ヘアピン型ポリヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１−１２のうちの少なくとも１つと少なくとも８０％が同一である配列を有する第１のポリヌクレオチド；および（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドと６０−１００％相補的である５’から３’への配列を有する別個の第２のポリヌクレオチド、とを含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、次の１つ以上を含む。（ｉ）ＲＮＡ分子の相補的ストランドの５’末端のヌクレオチドのリン酸または水酸基に対する置換基；（ｉｉ）相補領域の最初または最後の１つから６番目までの残基における１つ以上の糖修飾；または（ｉｉｉ）相補的領域の３末端の最後１から５番目までの残基における１つ以上のヌクレオチドと、マイクロＲＮＡ領域の対応するヌクレオチドとの間の非相補性。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、（ｉ）５’末端において５’ＯＨまたはリン酸をブロックする、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドであって、少なくとも１つのヌクレオチド修飾は、ＮＨ_２、ビオチン、アミン基、低級アルキルアミン群、アセチル基、または２’酸素−メチル（２’ＯーＭｅ）修飾であるヌクレオチド；または（ｉｉ）２’Ｆ、２’ＮＨ_２、２’Ｎ_３、４’チオ、または２’Ｏ−ＣＨ_３から選択された少なくとも１つのリボース修飾、を含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％が同一の配列を有する第１のポリヌクレオチド；（ｉｉ）第１ポリヌクレオチドと６０−１００％が相補的である、５’から３’への配列を有する別個の第２のポリヌクレオチド；および（ｉｉｉ）相補ストランドの５’末端における低級アルキルアミン基、を含む。

いくつかの実施形態において、合成オリゴヌクレオチドは、長さが１７から３０のヌクレオチドであって、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１−１２の少なくとも１つと１００％同一の第１のポリヌクレオチド；（ｉｉ）第１ポリヌクレオチドに１００％相補的である、５’から３’への配列を有する分離した第２のポリヌクレオチド；および（ｉｉｉ）相補ストランドの５’末端の低級アルキルアミン基、を含む。

合成オリゴヌクレオチドは通常、低速大量注射として、１投与量当たり０．００１−６．０ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量で、例えば、１投与量当たり０．０１−３．０、０．０２５−１．０、または０．２５−０．５ｍｇ／ｋｇの量で、１週当たり１、２、３またはそれ以上の回数で、２、４、６、８週の間、あるいは、必要に応じ、より長い期間、静脈内へ投与することができる。合成オリゴヌクレオチドの用法および用量に関するさらなる記述および詳細は、下記の併用化学療法のセクションで提供される。

ソラフェニブ
本発明は、様々な様相および実施形態において、ソラフェニブ（すなわち、ソラフェニブトシラートと、ソラフェニブの薬学的に許容可能な形態、塩、および、エステル）の使用を含む。ソラフェニブは、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）として商業的に入手可能であり、これはソラフェニブのトシラート塩である。ソラフェニブトシラートは、化学名が４−（４−｛３−［４−クロロ−３（トリフルオロメチル）フェニル］ウレイド｝フェノキシ）Ｎ−メチルピリジン−２−カルボキサミド ４ーメチルベンゼンスルフォナートであり、その構造式は以下のとおりである：

ソラフェニブトシラートは、分子式がＣ_２１Ｈ_１６ＣｌＦ_３Ｎ_４Ｏ_３×Ｃ_７Ｈ_８Ｏ_３Ｓであり、分子量が６３７．０ｇ／ｍｏｌである、白色から帯黄色または褐色を帯びた固体である。ソラフェニブトシラートは、水性溶媒に実際的に不溶性であり、エタノールにわずかに可溶性であり、ＰＥＧ４００に可溶性である。ソラフェニブは、米国特許第７，２３５，５７６号、第７，２３５，５７６号、第７，８９７，６２３号および第８，１２４，６３０号においても記述されている。

ソラフェニブの用法および用量は、食物なしで、４００ｍｇ（タブレット２錠）を１日２回、経口服用することが承認されている。しかしながら、疑念がある副作用に対処するために、処置の中断及び／又は用量の低減が必要とされる場合がある。そのような場合、用量は、一日１回４００ｍｇから一日おきに４００ｍｇまで減量され得る。（たとえば、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）ｔａｂｌｅｔｓ，ｏｒａｌ，Ｉｎｉｔｉａｌ Ｕ．Ｓ．Ａｐｐｒｏｖａｌ：２００５のＦＤＡラベルを参照）。当業者は、ソラフェニブの用法・用量については、医学的に容認されたガイドラインと、同じくそのようなガイドラインに対する医学的に容認された偏移または変更とに従うことができることを理解するであろう。ソラフェニブの用法および用量中のさらなる記述および詳細は、下記の併用化学療法のセクションで提供される。

肝臓癌
本発明は、様々な様相および実施形態において、被験体内の癌細胞を含む肝臓癌細胞の処置、または分離された癌細胞のインビトロの処置に適用可能である。癌細胞が被験体内にある場合、被験体は、肝臓癌を患う、ヒトのような霊長類であり得る。被験体は、マウス以外の哺乳動物のような、哺乳動物であり得る。被験体は、成人（すなわち１８歳以上）、または未成年（すなわち１８歳未満）であり得る。

様々な実施形態において、肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、ソラフェニブ耐性ではない。あるいは、肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、ソラフェニブに対する一次的耐性または二次的耐性を有し得る。被験体は、マイクロＲＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドの不存在下で、ソラフェニブに対する反応者となり得る。被験体は、マイクロＲＮＡまたは合成オリゴヌクレオチドの不存在下で、ソラフェニブに対する不反応者になり得る。いくつかの実施形態において、被験体は、少なくとも２、４、６、８、１０か月以上続くソラフェニブの先行処置を受けている。他の実施形態において、被験体は、ソラフェニブに対する１以上の重大で有害な副作用を経験しており、そのため、用量の低減を必要とする患者である。

様々な実施形態において、肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、中期、進行期、または末期である。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、転移性または非転移性であり得る。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、切除可能または切除不可能であり得る。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、単一の腫瘍、外発性腫瘍、（門脈または肝静脈の内部への）浸潤性増殖パターンを有する定義しにくい腫瘍を含み得る。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、線維層板型、偽腺管型（アデノイド）、多形態型（巨細胞）、または明細胞パターンを含み得る。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は高分化型形態を含み得るとともに、腫瘍細胞は、肝細胞に類似し、線維柱体、索状組織および胞巣を形成し、及び／又は、細胞質内に胆汁色素を含む。肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、分化が不十分な形態を含み得るとともに、悪性上皮細胞は、非凝集性、多形態型、未分化、及び／又は巨大である。いくつかの実施形態において、肝臓癌（例えばＨＣＣ）は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、または２型糖尿病に関連する。

いくつかの実施形態において、被験体は、Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）の活動度が≦２であるヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、以下に規定される許容可能な肝機能を有するヒトである。（ｉ）総ビリルビン≦標準値上限（ＵＬＮ）の１．５倍；肝細胞癌のみを有する被験体に対し、総ビリルビン≦３ｍｇ／ｄＬ（すなわち、ビリルビンのＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈスコアが２以下である）；（ｉｉ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）≦５ｘＵＬＮ；または（ｉｉｉ）許容可能な腎機能：クレアチニンレベルがインスティテューショナルノーマル（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ ｎｏｒｍａｌ）の１．５倍である患者に対し、血清中クレアチニン≦ＵＬＮの１．５倍、またはクレアチニン・クリアランスの測定値≧６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２。

いくつかの実施形態において、被験体は、以下のように規定される、許容可能な血液状態を有するヒトである。（ｉ）絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１５００細胞／ｍｍ^３；（ｉｉ）血小板数≧１００，０００ｐｌｔｓ／ｍｍ^３（輸血なし）；肝細胞癌のみを有する被験体に対しては、≧７５，０００ｐｌｔｓ／ｍｍ^３；または（ｉｉｉ）ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ。

いくつかの実施形態において、被験体は、プロトロンビン時間（ＰＴ）または国際標準比（ＩＮＲ）≦１．２５×ＵＬＮ；ＩＮＲ＜１．７またはプロトロンビン時間（ＰＴ）または＜ＵＬＮより４秒上（つまり、凝固パラメータに対するＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈスコアが、１以下である）；または血清アルブミン＞２．８ｇ／ｄＬ（つまり、アルブミンに対するＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈスコアが２以下である）ヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、プロトロンビンＣｈｉｌｄ−ＰｕｇｈクラスＡ（スコア５−６）の疾患を有するヒトである。Ｃｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈクラスの決定のための、肝性脳障害のスコアは１でなければならず；腹水のスコアは２以下であり、臨床的に無関係でなければならない。

いくつかの実施形態において、被験体は、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＹＨＡ）のクラスＩＩＩまたはＩＶの心臓病、過去６か月以内の心筋梗塞、不安定な及び／又は徴候的な不整脈、またはＥＣＧ上で虚血の形跡を持たないヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、全身処置を必要とする、活動中の、制御されないバクテリア性、ウイルス性、または真菌性の感染症を持たない。

いくつかの実施形態において、被験体は、妊娠中でも保育中でもない女性である。

いくつかの実施形態において、被験体は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）による既知の感染がないヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、処置の信用を貶め得る重篤な非悪性の疾患（例えば水腎症、肝不全または他の症状）を持たないヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、最近の出血の経歴がないヒト、および凝固障害または構造的異常のために出血を起こしやすい患者である。

いくつかの実施形態において、被験体は、クマリン型抗凝血薬の処置的投与による処置を必要としないヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、Ｃｈｉｌｄ−ＰｕｇｈのＢまたはＣとして分類される肝硬変を持たないヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、アルファ胎児蛋白質（ＡＦＰ）＞１０、５０、１００、２００、３００、４００または５００ｎｇ／ｍＬを有するヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、ＡＦＰ−Ｌ３レベルを上昇（＞１０％）させるヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、デズーガンマーカルボキシ（異常）プロトロンビン（ＤＣＰ）＞５、７．５、１０、２５、５０、７０または１００ｎｇ／ｍＬを有するヒトである。

いくつかの実施形態において、被験体は、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）（ｅｒｂＢ−１）、ｃ−ｅｒｂ−２（Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）、ｃ−ｅｒｂ−３（ＨＥＲ−３）、ｃ−ｅｒｂ−４（ＨＥＲ−４）またはこれらの組合せの異常レベルを有するヒトである。

いくつかの実施形態では、被験体は異常なレベルのアルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）；グリピカン−３（ＧＰＣ３）；Ｄｅｓ−ガンマ−カルボキシ（異常な）プロトロンビン（ＤＣＰ）；血清ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）；アルファ−１−フコシダーゼ（ＡＦＵ）；ヒトカルボニル還元酵素２；ゴルジリン酸化タンパク質２（ＧＯＬＰＨ２）；トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦベータ）；腫瘍特異的成長因子（ＴＳＧＦ）；肝細胞増殖因子／散乱係数（ＨＧＦ／ＳＦ）；塩基性線維芽細胞増殖因子；アルファ−フェトプロテインｍＲＮＡ（ＡＦＰ ｍＲＮＡ）；ガンマ−グルタミルトランスフェラーゼｍＲＮＡ（ＧＧＴ ｍＲＮＡ）；インスリン様成長因子ＩＩ（ＩＧＦ−ＩＩ）ｍＲＮＡ；アルブミンｍＲＮＡ；ＤＫＫ１；ゴルジタンパク質７３（ＧＰ７３）；ビタミンＫ依存性凝固因子前駆体ＩＩ（ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＩＩ）（ＰＩＶＫＡＩＩ）；ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２６ａ、ｍｉＲ−２７ａ、および、ｍｉＲ−８０１、あるいはこれらの組み合わせを有するヒトである。
（併用化学療法）

併用化学療法または多剤療法は、１つを超える薬物の使用または他の治療（例えば、任意の治療を単独で受ける単剤療法に対立するものとして）の使用である。本発明に関連して本明細書で使用されるように、この用語はソラフェニブとオリゴヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５模倣体）の特定の組み合わせ（例えば、比率および／または投薬スケジュール）を使用することを指す。

具体的には、本発明は、ソラフェニブとオリゴヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５模倣体）が特に効果的な（例えば、相乗的であるか、または、相加的よりも多い）比率で投与される肝臓癌を処置するための方法と組成物を提供する。様々な実施形態では、比率（例えばソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比）は、約５０−５００、５０−４００、５０−３００、５０−２００、５０−１００、１００−５００、１００−４００、１００−３００、１００−２００、１５０−５００、１５０−４００、１５０−３００、１５０−２００、２００−５００、２００−４００、２００−３００、２５０−５００、２５０−４００、または２５０−３００である。いくつかの実施形態では、モル比は約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１０００であるか、あるいは少なくとも約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１０００である。いくつかの実施形態では、モル比は約１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１５５０、１６００、１６５０、１７００、１７５０、１８００、１８５０、１９００、または２０００であるか、あるいは少なくとも約１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１５５０、１６００、１６５０、１７００、１７５０、１８００、１８５０、１９００、または２０００である。モル比の例は、約１５−１７２３、１５−４９２、６０−１９７、３０−４９２、５２−１７２３、３０、４０、５３、６０、７０、７９、８９、９８、１０６、１４１、１９７、２６６、３１１、または９３１である。他の例は本明細書と実施例にわたって提供される。

例えば、比率、投与量、回数などの範囲を記載するために本明細書で用いられるように、用語「約」は、適切な誤差限界内にある、本質的に同じ（例えば正規分布またはガウス分布に従う現象の９５％などの当該技術分野で認められている信頼区間内で）変動を包含し、あるいはさもなければ、定量化されているものの効果を実質的に変更しない。

ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は異なる時間にわたって測定可能である。例えば、モル比は１日、１週間、１４日、２１日、または２８日間被験体に投与されたソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの量であり得る。

ソラフェニブの投薬量および／または投薬スケジュールは、臨床的に承認された、または実験的なガイドラインに従うことがある。様々な実施形態では、ソラフェニブの投与量は、約８００、６００、４００、または２００ｍｇ／日である。４００ｍｇの投与量を一日おきに投与することができ、２００ｍｇ／日の投与量を投与することができる。

同様に、オリゴヌクレオチドの投薬量および／または投薬スケジュールは、臨床的に承認された、または実験的なガイドラインに従うことがある。様々な実施形態では、オリゴヌクレオチドの投与量は、１日当たり約１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、または２５０ｍｇ／ｍ２である。投与量は、ソラフェニブの選択された比率と投与量に基づいて、治療上有効な範囲内に設定可能である。上で議論されるように、比率は、１日、１週間、１４日、２１日、または２８日にわたって被験体に投与されたオリゴヌクレオチドの量を使用して決定することができる。

様々な実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１週間（７日）にわたって１、２、３、４、５、６、または７回の１日投与量で被験体に投与される。オリゴヌクレオチドは、１４日にわたって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４回の１日投与量で被験体に投与可能である。オリゴヌクレオチドは、２１日にわたって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１回の１日投与量で被験体に投与可能である。オリゴヌクレオチドは、２８日にわたって、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８回の１日投与量で被験体に投与可能である。

様々な実施形態では、オリゴヌクレオチドは：２週間（合計１４日）；１週間の休薬期間を伴って１週間（合計１４日）；３週間連続して（合計２１日）；１週間の休薬期間を伴って２週間（合計２１日）；２週間の休薬期間を伴って１週間（合計２１日）；４週間連続して（合計２８日）；１週間の休薬期間を伴って３週間連続して（合計２８日）；２週間の休薬期間を伴って２週間（合計２８日）；３週間の休薬期間を伴って１週間（合計２８日）投与される。

様々な実施形態では、オリゴヌクレオチドは：７、１４、２１、または２８日のサイクルの１日目に投与され；２１日または２８日のサイクルの１日目と１５日目に投与され；２１日または２８日のサイクルの１、８、および１５日目に投与され；あるいは、２１日または２８日のサイクルの１、２、８、および１５日目に投与される。オリゴヌクレオチドは１、２、３、４、５、６、７、または８週毎に一度投与可能である。

臨床医は、ソラフェニブ−オリゴヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５模倣体）治療のコースを規定することができる。オリゴヌクレオチド（従って併用療法）は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２回のサイクルにわたって投与可能である。

ソラフェニブ−オリゴヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５模倣体）治療のコースは臨床エンドポイントが満たされるまで継続可能である。いくつかの実施形態では、病状の悪化または承諾しがたい毒性が生じるまで、治療は継続される。いくつかの実施形態では、治療は、肝臓癌（例えばＨＣＣ）の欠如として定義される病理学的な完全寛解（ｐＣＲ）速度を達成するまで継続される。いくつかの実施形態では、治療は肝臓癌の部分的または完全に寛解するまで継続される。ＨＣＣを抱える複数の被験体にオリゴヌクレオチドとソラフェニブを投与することで、全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、奏効率（ＲＲ）、生活の質（ＱｏＬ）、またはその組み合わせが増大する。

様々な実施形態では、処置は、肝臓癌腫瘍のサイズおよび／または数を減らす。処置は、肝臓癌腫瘍がサイズおよび／または数を増加させるのを防ぐことができる。処置は、肝臓癌腫瘍が転移するのを防ぐことができる。

本発明の方法では、投与は任意の特定の送達システムに限定されず、制限されることなく、非経口（皮下、静脈内、髄内、関節内、筋肉内、または腹腔内の注入）、直腸、局所、経皮、または、経口（例えばカプセル剤、懸濁剤、または錠剤の中で）を含み得る。個体への投与は、単回投与または繰り返し投与で、および、様々な生理学的に許容可能な塩形態において、および／または、医薬組成物の一部として許容可能な製薬の担体および／または添加剤を伴って生じることがある。生理学的に許容可能な塩形態と標準的な医薬製剤の技術、用量、および賦形剤は当業者には周知である（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ （ＰＤＲ（登録商標）） ２００５， ５９ｔｈ ｅｄ．， Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ， ２００４； ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ｅｄｓ． Ｇｅｎｎａｄｏ ｅｔ ａｌ． ２１ｔｈ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， ２００５を参照）。

さらに、１匹の動物で達成される有効量は、当該技術分野で知られている変換係数を使用して、ヒトを含む別の動物で使用するために推定されることがある。例えば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｒｅｐｏｒｔｓ ５０（４）：２１９−２４４ （１９６６） と、等価な表面積の投与量係数に関する表２を参照。

本発明の併用療法は、任意の特定のコースまたはレジメンに具体的に限定されず、別々に、または他の治療手段（例えば、化学療法または放射線療法）と共に使用されてもよい。

様々な実施形態では、オリゴヌクレオチドはソラフェニブの前に、ソラフェニブと同時に、ソラフェニブの後に、またはこれらを組み合わせて投与される。オリゴヌクレオチドは静脈内に投与可能である。オリゴヌクレオチドは全身的にまたは局部的に投与可能である。

本発明に係る併用療法は、ソラフェニブとオリゴヌクレオチド以外に追加の治療（例えば、医薬品、放射線など）を含み得る。同様に、本発明はアジュバント療法（例えば外科手術と組み合わせるとき）として使用可能である。様々な実施形態では、被験体は、外科的切除、経皮へのエタノールまたは酢酸の注入、経カテーテル動脈化学塞栓療法、ラジオ波焼灼療法、レーザー焼灼術、凍結融解壊死治療、集束外部ビーム放射線定位放射線治療、選択的な内部放射線療法、動脈内ヨウ素−１３１−リピオドール投与、および／または高輝度集束超音波によって処置される。

オリゴヌクレオチドとソラフェニブの組み合わせは、アジュバント、ネオアジュバント、併用療法、同時療法、または対症療法として使用することができる。オリゴヌクレオチドとソラフェニブの組み合わせは一次治療、二次治療、またはクロスオーバー治療として使用することができる。

いくつかの実施形態では、治療上有効なソラフェニブの量は、オリゴヌクレオチドとの併用で減少される。例えば、ソラフェニブの毎週または毎月の投与量は、最大推奨量または最大耐用量に対して、少なくとも１０％ ２０％ ３０％ ４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少可能である。他の実施形態において、ソラフェニブは、オリゴヌクレオチド（またはマイクロＲＮＡ阻害剤）の投与のない状態で効果的となるために必要とされる投与量の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以下の有効量で投与される。いくつかの実施形態では、ソラフェニブのＩＣ５０は、合成オリゴヌクレオチド（またはマイクロＲＮＡ阻害剤）のない状態のＩＣ５０に対して少なくとも４−、５−、１０−、２０−、３０−、４０−、５０−、または１００−倍減少する。

併用療法のさらなる記載と実施形態が以下の実施例の段落で提供される。

（相乗作用と組み合わせ指数（ＣＩ）値）
上に議論され、さらに以下の実施例で例証されるように、本発明は、ソラフェニブとｍｉＲ−３４が特に効果的な（例えば、相乗的であるか、または、相加的よりも多い）比率で投与される肝臓癌を治療するための方法と組成物を提供する。相乗作用と同意語の用語は当該技術分野で一般に使用されているが、その特性は必ずしも常に定義または定量化されるわけではない（従って、主張される相乗作用が実際に存在しないことがある）。本発明と以下の実施例に関連して、組み合わせ指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）（ＣＩ）値は、ソラフェニブとオリゴヌクレオチドの様々な組み合わせの効果を定量化するために使用された。

ＣＩ値はＬｏｅｗｅの相加性モデルに基づき、様々な薬物−薬物濃度と効果レベル（Ｆａ、影響を受けた画分；癌細胞増殖の阻害）について付加的（ＣＩ＝１）、拮抗的（ＣＩ＞１）、または相乗的（ＣＩ＜１）であり得る薬物−薬物相互作用の性質を評価するために測定された。ＣＩ値は、Ｃｈｏｕらの方法に従ってＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェア（ＣｏｍｂｏＳｙｎ Ｉｎｃ．，Ｐａｒａｍｕｓ、ＮＪ）を使用して直線回帰傾向線に基づいて計算され、それによって、双曲線とＳ字型の用量効果曲線は線形形式に変換される（Ｃｈｏｕ ＴＣ （２０１０） Ｄｒｕｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｙｎｅｒｇｙ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ ｍｅｔｈｏｄ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ７０： ４４０−６， ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ ａｌｓｏ ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ＣｏｍｂｏＳｙｎ， Ｉｎｃ．， ｗｗｗ．ｃｏｍｂｏｓｙｎ．ｃｏｍ）。

様々な実施形態において、ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、肝臓癌（例えばＨＣＣ）においてＣＩ＜１を示す。ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、肝臓癌（例えばＨＣＣ）において、ＣＩ＜０．９５、０．９０、０．８５、０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、または０．２０を示すことがある。１つの実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−３４（例えば、ｍｉＲ−３４模倣体）であり、ＣＩ＜０．６０である。例えば、ＣＩは他のパラメータと共に使用することができ、ＣＩ＜０．６０、ＤＲＩ＞２、および、Ｆａ＞６５％である。１つの実施形態では、オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１５（またはｍｉＲ−２１５模倣体）であり、ＣＩ＜０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、または０．５０（および、随意に他のパラメータと組み合わせて、例えば、ＤＲＩ＞２、およびＦａ＞６５％である）である。

以下の実施例は本発明の実例となる実施形態を提供する。当業者は本発明の精神や範囲を変えることなく行われ得る多くの修正と変更を認識する。こうした修正と変更は本発明の範囲内に包含される。実施例はいかなる方法でも本発明を制限するものではない。

実施例１−肝臓癌細胞中のソラフェニブとｍｉＲＮＡの併用に関する研究

目的：治療用のｍｉＲＮＡ模倣体がソラフェニブと相乗的に協同して、培養された肝臓癌細胞を阻害するかどうかを調査する。

要約：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−１２４ａ−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−１０１−Ｍｉｍ、およびｍｉＲ−２６ａ−Ｍｉｍは、それぞれ有力な治療用のｍｉＲＮＡｓ ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−１０１、およびｍｉＲ−２６ａの模倣体である。ｍｉＲ−４４９がｍｉＲ−３４と同じ種子配列を有するため、ｍｉＲ−３４−ＭｉｍをｍｉＲ−４４９模倣体であるとみなすこともできる。ｍｉＲ−１９２がｍｉＲ−２１５と同じ種子配列を有するため、ｍｉＲ−２１５−ＭｉｍをｍｉＲ−１９２模倣体であるとみなすこともできる。ここで、我々はｍｉＲ−３４−ＭｉｍとｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍを、４つの肝臓癌細胞株中のソラフェニブとともに相乗作用を与えるｍｉＲＮＡ模倣体であると同定した。データは、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍとソラフェニブとの間の相乗効果が特定の組み合わせ比率と高レベルの癌細胞阻害で観察されたことを示している。

導入：小さな非コードＲＮＡのクラスであるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は腫瘍抑制遺伝子としての役目を果たすことができる。ｍｉＲＮＡは多くの発癌性の遺伝子産物と経路を阻害し、したがって、薬物抵抗性を改善し、他の抗癌剤と相乗的に機能する傾向にある。この例は、ソラフェニブとの併用に関する研究の課題である一連の前臨床および臨床薬物候補を示す。ｍｉＲＮＡ／ソラフェニブの組み合わせは、相加的（ＣＩ＝１）、相乗的（ＣＩ＜１）、または拮抗的（ＣＩ＞１）な薬物効果を示す組み合わせ指数（ＣＩ）値をもたらすために、Ｌｏｅｗｅの相加性モデルに基づいてＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙのアルゴリズムによって試験された。併用効果は４つの肝臓癌細胞株中で測定された。

材料と試薬：
ｍｉＲＮＡ： ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ （Ａｍｂｉｏｎ， Ｃａｔ＃ ＡＭ１６０９９， Ｌｏｔ＃ ＡＳＯ００１２ＸＥ）
ｍｉＲ−１２４ａ−Ｍｉｍ （Ａｍｂｉｏｎ， Ｃａｔ＃ ＡＭ１７１０４， Ｌｏｔ＃ ＡＳＯ０Ｌ５ＶＣ）
ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍ （Ａｍｂｉｏｎ， Ｃａｔ＃ ＡＭ１７１０４， Ｌｏｔ＃ ＡＳＯ０Ｍ５４Ｖ）
ｍｉＲ−１０１−Ｍｉｍ （Ａｍｂｉｏｎ， Ｃａｔ＃ ＡＭ１７１０４， Ｌｏｔ＃ ＡＳＯ０Ｍ５ＶＡ）
ｍｉＲ−２６ａ−Ｍｉｍ （ＴｒｉＬｉｎｋ， Ｌｏｔ＃ Ｍ１０９−Ｅ０１Ｂ）
ｍｉＲＮＡ製品はインビボでの使用準備の整った品質であり、ヌクレアーゼを含まないＨ２Ｏ中の６００ｎＭの保存溶液として調製される。
ソラフェニブ：ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＣＡＴ＃ Ｓ−８５０２， Ｌｏｔ＃ ＢＳＦ−１０５）
細胞株：Ｈｅｐ３ｂ、ＨｅｐＧ２、Ｃ３Ａ（ＡＴＣＣ ＨＢ−８０６４、ＨＢ−８０６５、ＣＲＬ−１０７４１）およびＨｕｈ７（日本）
細胞培養培地：ＥＭＥＭ （ＡＴＣＣ， Ｃａｔ＃ ３０−２００３， Ｌｏｔ＃６０９４６３７１）
ＤＭＥＭ （Ｇｉｂｃｏ， Ｃａｔ＃ １１３２０−０３３， Ｌｏｔ＃ １１４７３７３）
トリプシン（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃ ２５３００−０５４）
ＰＢＳ（Ａｍｂｉｏｎ、Ｃａｔ＃ ＡＭ９６２５）
Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ＃ ３１９８５−０７０、Ｌｏｔ＃１２９３６２５）
リポフェクタミン ＲＮＡｉＭＡＸトランスフェクション試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃａｔ＃ １３７７８−１５０， Ｌｏｔ＃ １２３３８６３）
機器：ＰｏｌａｒＳｔａｒ Ｏｐｔｉｍａプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）
データ分析：ソラフェニブとｍｉＲＮＡｓのＩＣ５０はＧｒａｐｈＰａｄ（プリズム）ソフトウェアを使用して測定された。組み合わせ指数値（ＣＩ）と用量減少指数値（ＤＲＩ）はＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを使用して測定された。ＤＲＩは、（ｉ）単剤療法中の薬物と（ｉｉ）併用療法中の同じ薬物との間のあらかじめ定義された効果を達成するのに要する薬物濃度の変化（例えば相乗作用が存在する場合の減少）を反映する。

実験手順：連続希釈法におけるｍｉＲＮＡ模倣体は、ＬＡＢ−ＳＯＰ−０１８に記載のプロトコルに従ってリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸを使用して肝臓癌細胞へとリバーストランスフェクトされた。

細胞増殖はＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して測定された。トランスフェクション後６日目に、ＧｒａｐｈＰａｄ（Ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを使用して、非線形の回帰曲線とＩＣ５０値を計算した。

ソラフェニブ用量反応曲線は各細胞株において確立され、薬物療法後３日目にＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて細胞増殖を測定した。ＧｒａｐｈＰａｄ（Ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを使用して非線形回帰とＩＣ５０値を計算した。

以下の表３のプレートレイアウトにおいて示されるように、ｍｉＲＮＡおよびソラフェニブの各々が、一定の比率で使用されるように、併用の研究を行った。各データポイントを、３回繰り返して行った。

第１に、ｍｉＲＮＡを、表３に示されるような濃度でリバーストランスフェクトした。
次に、トランスフェクションの３日後、上清を、新鮮な培地（１ウェル当たり９０μＬ）と取り替え、ソラフェニブを、表３に示されるような濃度で加えた（１ウェル当たり１０μＬ）。細胞増殖を、ソラフェニブ処置の３日後に判定さした。ＣＩおよびＤＲＩの値を、ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを使用して計算した。

ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ソラフェニブの組み合わせに対して、フルプレートレイアウト（ｆｕｌｌ ｐｌａｔｅ ｌａｙｏｕｔ）を使用して、Ｈｅｐ３Ｂ細胞における複数の薬物比率で効果を判定した（一定濃度および一定の比率法の両方、以下を参照）。各データポイントを、３回繰り返して行い、実験を、別々に３回繰り返した。

すべての対照および基準値は、アッセイの範囲内であった。

結果：肝臓癌細胞におけるｍｉＲＮＡｓおよびソラフェニブの用量反応曲線およびＩＣ５０値を、図１および図２に示す。

図１は、肝臓癌細胞における試験したｍｉＲＮＡ模倣体の用量効果曲線を例証する。
上に記載されるように、連続希釈したｍｉＲＮＡｓ（０．０３−３０ｎＭ）を、肝臓癌細胞においてリバーストランスフェクトし、細胞増殖またはパーセント阻害（効果）を、トランスフェクションの６日後にＡｌａｍａｒＢｌｕｅによって判定した。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して計算した。図１のＡは、ｍｉＲ−３４に対するデータを示し、図１のＢは、ｍｉＲ−１２４ａに対するデータを示し、図１のＣは、ｍｉＲ−２１５に対するデータを示し、図１のＤは、ｍｉＲ−１０１に対するデータを示し、および図１のＥは、ｍｉＲ−２６ａに対するデータを示す。

図２は、肝臓癌細胞におけるソラフェニブの用量効果曲線を例証する。細胞を、１ウェル当たり２０００個の細胞で９６ウェルのプレートにおいて播種した。細胞を接種した３日後、（０．１−１００μＭ）からの連続希釈中のソラフェニブを、培地に加えた。細胞増殖またはパーセント阻害を、薬物処置の３日後にＡｌａｍａｒＢｌｕｅによって判定し、ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して計算した。

表５は、ＧｒａｐｈＰａｄを使用して判定したソラフェニブおよびｍｉＲＮＡｓのＩＣ５０を列挙している。表５は、２回あるいは回３の実験から引き出した一連のＩＣ５０値を示す。ｍｉＲ−２６−Ｍｉｍが、Ｈｕｈ７細胞においてあまり強力ではなかったため、ＩＣ５０の計算は不可能であり、組み合わせを、この細胞株中で試験しなかった。

図３は、ｍｉＲＮＡ／ソラフェニブの組み合わせ（単比）の組み合わせ指数（ＣＩ）プロットを例証する。ＣＩプロットは、０（阻害なし）から１（１００％阻害）までの軸上の癌細胞阻害のレベルに対する実際のＣＩ値を示している。Ｃｏｍｐｕｓｙｎソフトウェアを使用して、傾向線を作成した。相乗効果があると考えられ、臨床的価値を有する組み合わせは、最大癌細胞阻害で低いＣＩ値（好ましくは０．６未満）を有する組み合わせである。上に示すように、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、４つのＨＣＣ細胞株すべてにわたって一貫してソラフェニブとともに相乗効果を与える唯一の模倣体であった。ＣＩ、組み合わせ指数；Ｆａ、影響を受けた画分（＝増殖の阻害）。横線より下のデータポイントは、相乗効果を示す。図３Ａは、ｍｉＲ−３４に対するデータを示し、図３Ｂは、ｍｉＲ−１０１に対するデータを示し、図３Ｃは、ｍｉＲ−２６ａに対するデータを示し、および図３Ｄは、ｍｉＲ−２１５に対するデータを示す。

結果が、薬物比率、薬物濃度および所望の効能に依存するため、薬物−薬物相互作用の正確な評価は複雑である。具体的には、および図３に示すように、ＣＩ値は、低い薬物濃度では１を超え、より高い薬物濃度では１を下回り、これは、低い薬物濃度での拮抗的相互作用およびより高い濃度での相乗効果を示している。

表６Ａにおける４つのＨＣＣ細胞株中のｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、／ソラフェニブの組み合わせ（単比）のＣＩおよびＤＲＩの値。ソラフェニブと組み合わせたｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの与えられた効果でのＣＩおよびＤＲＩの値。ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを使用して、値を測定した。上下のデータは、２回の独立した実験を示した。

表６Ｂにおける４つのＨＣＣ細胞株中のｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍ／ソラフェニブの組み合わせ（単比）のＣＩおよびＤＲＩの値。ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを使用して、値を測定した。

Ｈｅｐ３Ｂ細胞中のｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ソラフェニブの組み合わせ（相乗比）のＣＩおよびＤＲＩの値を、表７−１０に列挙する。

ソラフェニブとｍｉＲ−３４−Ｍｉｍとの間の相乗効果を、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において相乗配合比（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏｓ）で観察した。強調された領域は、以下の基準を満たす相乗効果を示している：癌細胞阻害のレベル＞７０％；ＣＩ＜０．６；ＤＲＩ＞２。

結論：相乗効果は、ソラフェニブと組み合わせた抗腫瘍ｍｉｃｒｏＲＮＡｓの共有の特性ではない。ｍｉＲ−３４−ＭｉｍおよびｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍは、ソラフェニブと組み合わせた相乗効果を示したが、ｍｉＲ−１２４ａ−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−１０１−Ｍｉｍ、またはｍｉＲ−２６ａ−Ｍｉｍはいずれも、そのような効果を示さなかった。さらに、相乗効果は、２つの他の化学療法剤−ドキソルビシンおよび５−ＦＵとの組み合わせでは特定されなかった（データは示されず）。特定のソラフェニブ：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの組み合わせの相乗効果は、４つの肝臓癌細胞株すべてにわたって一貫していた。特定のソラフェニブ：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍの組み合わせの相乗効果が、高レベルの癌細胞阻害で観察された。相乗効果のソラフェニブ：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍの組み合わせが、ｍｉＲＮＡ模倣体およびソラフェニブの多くの比率で観察され、これは、肝臓癌治療の開発に適用することができる。

実施例２ − 肝臓癌のマウスモデルにおけるソラフェニブと組み合わせたｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの優れた効果
雌のＮｏｄ／Ｓｃｉｄマウスにおける肝臓の外側左葉に２×１０^６のＨｅｐ３ｂ細胞を同所的に注入した。腫瘍成長をモニタリングするために、血清サンプルを、２週間に１回収集し、肝臓癌用のバイオマーカーである、ＤＲＧ Ｈｕｍａｎ ＡＦＰ ＥＬＩＳＡを使用して、アルファ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）のレベルを判定した。３週間後、平均ＡＦＰ濃度が各群（ｎ＝８）において同じとなるように、マウスを、無作為に５つの群に分けた。動物を、以下のような用量レベルおよび間隔で単一の薬剤単独で処置した：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍを、１回の投与当たり０．１ｍｇ／ｋｇで静脈内に１週間に３回投与し；ソラフェニブを、１０ｍｇ／ｋｇ（Ｍ−Ｆ）で強制経口投与によって毎日与えた。組み合わせに関して、両方の薬物を、単一の薬剤の各々と同じ用量および比率で与えた。対照マウスを、（ｉ）０．１ｍｇ／ｋｇのｍｉＲ−３４−Ｍｉｍと同等な脂質濃度を使用してＩＶ注入（３ｘ／週）により充填されない（ｕｎｌｏａｄｅｄ）リポソーム（ＮＯＶ３４０、空のリポソーム）；または（ｉｉ）毎日（Ｍ−Ｆ）のＰＯビヒクル（１２．５％のＥｔＯＨ：１２．５％のＣｒｅｍａｐｈｏｒ：７５％のＨ２Ｏ）のいずれかで処置した。処置の２週間後、血清ＡＦＰ濃度を、腫瘍成長に対して測定し、屠殺後の腫瘍重量を収集して、腫瘍退縮を評価した。データを、スチューデントｔ検定及び／又はＤｕｎｎｅｔｔ'ｓ Ｐｏｓｔ検定を用いる一元配置分散分析（ＭＳ−ＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して、統計的変化のために分析した。結果を、図４に示し、これは、同所性のヒトＨｅｐ３ｂ異種移植片におけるｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ／ソラフェニブの組み合わせのインビボの効果を例証する。

実施例３ − ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの比率および投与量の選択
図５は、様々な範囲のソラフェニブ：ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの比率および投与量を示す。第１段のコホート（１^ｓｔ ｔｉｅｒ ｃｏｈｏｒｔ）は、８００ｍｇ／日のソラフェニブ投与量を表わし、第２段のコホート（２^ｎｄ ｔｉｅｒ ｃｏｈｏｒｔ）は、４００ｍｇ／日のソラフェニブ投与量を表わす。すべての臨床的比率は、２００ｍｇ／日のソラフェニブ投与量の他に、第１段および第２段のコホートを含む。毎週投与Ｒ１は、１週当たり２日のｍｉＲ−３４投与を示し、１週当たり５日間連続のｍｉＲ−３４投与を示す。日用量は、１日の投与にわたって計算された比率を示し、一方で、毎週投与は、１週間の投与にわたって計算された比率を示す。他の投薬スケジュールも可能である（例えば、１週当たり１回）。オリゴヌクレオチド（リポソーム製剤中の）薬注は５０−２５０ｍｇ／ｍ２から変動することができる。

したがって、様々な実施形態では、モル比は、約１５−１７２３、１５−４９２、６０−１９７、３０−４９２、３０、４０、５３、６０、７０、７９、９８、１０６、１４１、１９７、２９８、または４９２となり得る。相乗的に増加した効果によって、ｍｉＲ−３４投与量は、減少され（例えば、ｍｉＲ−３４単剤療法におけるよりも少ない）、ソラフェニブの事前承認された投与量（例えば、単剤療法に対してＦＤＡ承認された投与量）を維持しながら、所望の比率を達成することができる。相乗的に増加した効果によって、幾つかの実施形態では、ソラフェニブ投与量は、減少され（例えば、８００ｍｇ／日または４００ｍｇ／日の特定のＦＤＡ承認された投与量の単剤療法投与量より下）、毒性（例えば、ソラフェニブ毒性）が減少したなかで、所望の比率を達成することができる。様々な実施形態では、そのような組み合わせによって、ソラフェニブ単剤療法よりも効果を改善することができる。

本発明に従うすべてのオリゴヌクレオチドと同様に、ｍｉＲ−２１５に対する比率および投与量は、同じ基準で判定され得る。

すべての比率が、治療上有効なレジメンを提供するとは限らないことに留意されるべきである。例えば、相乗効果は、少量では存在しない。また、相乗効果であると技術的に考えられ得るより少ない投与量でさえ、有効な治療を提供しないかもしれない。同様に、特定の時点での比率は、拮抗性を証明し得る。例えば、図５における「ＨｅｐＧ２の相乗効果比率」および「ＨｅｐＧ２の拮抗作用比率」の比率を参照。したがって、様々な実施形態では、本発明は、ソラフェニブおよびｍｉＲ−３４が肝臓癌治療において（例えば、ｍｉＲ−３４ａおよびＨＣＣ）相乗効果を与えるデータだけでなく、相乗効果のみが特定の治療上有効な範囲内に存在するデータにも基づいている。同様の結果を、ｍｉＲ−２１５に対しても観察した。

実施例４−ソラフェニブ：オリゴヌクレオチド例示的な投薬範囲
以下の表１１−１３は、（例えばヒトの肝臓ガン治療において）例示的なソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの臨床的に関連のある投薬比率を示す。本実施例における比率は（質量ではなく）部分に基づく。オリゴヌクレオチドは、本発明に記載のオリゴヌクレオチドのいずれかであり得る（例えば、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１１−インビトロで調査した例示的な投薬範囲を。投薬量は１：１４３（最小）から１：９１４３（最大）までの範囲である。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１２−ヒト肝臓癌の動物（マウス）モデルで調査した例示的な投薬範囲。投薬量は１：２（最小）から１：２１７３３８（最大）の範囲であり、１：２３２９（実測）を含む。ｍｉＲ−Ｍｉｍ投薬量は２０ｇのマウス体重に基づいた。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１３−ヒト被験体における例示的な投薬範囲。投薬量は１：２２（最小）から１：３１０５（最大）までの範囲である。ｍｉＲ−Ｍｉｍ投薬量は７０ｋｇのヒト体重に基づいた。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１４−ソラフェニブとｍｉＲ−Ｍｉｍの一日の投薬量に基づく、７０ｋｇの患者に基づいた、例示的なヒトの臨床の投薬範囲（ソラフェニブ ｍｗ＝６３７、ｍｉＲ−３４ ｍｗ＝１４８３４）。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１５−毎日のソラフェニブの投薬、及び隔週のｍｉＲ−Ｍｉｍの投薬に基づく７０ｋｇの患者に基づいた、ヒトにおける例示的な臨床の投薬範囲（ソラフェニブ ｍｗ＝６３７、ｍｉＲ−３４ ｍｗ＝１４８３４）。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

表１６−７０ｋｇの患者に基づいた、毎日のソラフェニブの投与、および１週当たり５回の日用量に基づいたｍｉＲ−Ｍｉｍの投薬量に基づく例示的な臨床の投薬範囲（ソラフェニブ ｍｗ＝６３７、ｍｉＲ−３４ ｍｗ＝１４８３４）。ｍｉＲ−Ｍｉｍは、本発明に従うオリゴヌクレオチドであり得る（例えばｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ、ｍｉＲ−２１５−Ｍｉｍなど）。

ヒト被験体を処置するいくつかの実施形態では、ソラフェニブ投薬量は８００ｍｇ／日であり、（例えばリポソーム製剤においてｍｉＲ−３４−Ｍｉｍなどの）ｍｉＲ−Ｍｉｍは、１ｍｇ／ｋｇ／日であり、その結果として一日あたり、および週あたりそれぞれ１：２６６および１：９３１の比率になる。

ヒト被験体を処置する他の実施形態では、ソラフェニブ及びｍｉＲ−Ｍｉｍの両方が、最大耐用量（ＭＴＤ）で投与される。（リポソーム製剤中における）ｍｉＲ−３４のためのＭＴＤを３ｍｇ／ｋｇと仮定して、投薬量は、一日あたり、及び週あたりそれぞれ１：８９および１：３１０の比率になる。このような投薬量は、上記の実施例で議論されたインビトロの研究を通じて同定された相乗効果の比率に一致している。様々な実施形態において、ソラフェニブに対するｍｉＲ−Ｍｉｍの投薬量を減らすことにより、望ましい比率を達成することが可能である。

実施例５ ８００ｍｇ／日のソラフェニブに基づく併用療法。
臨床診療については、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ＋ソラフェニブの組み合わせを以下のように使用する。患者は、毎日８００ｍｇのソラフェニブの経口投与（４００ｍｇを１日当たり２度）、および５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２の範囲の投薬量レベルでｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの３０分から３時間の静脈注射を受ける。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき、６０〜１９７のソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体のモル比を示す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づいて１日ごとのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の１９７、１４１、１０６、７９および６０のモル比を示す。

別の例において、ソラフェニブは１日８００ｍｇの経口投与量として与えられ、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２の範囲の投薬量レベルで３０分から３時間の注入の間、週２回を３回（例えば月曜日と木曜日など）与えられる。これらの投量薬レベルは、７０ｋｇの患者に基づき、ソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体の２０９から６８９の１週間当たりのモル比を示す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき週当たりのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の６８９、４９２、３７１、２７８および２０９のモル比を示す。

別の例において、ソラフェニブは１日８００ｍｇの経口投与量として与えられ、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、5日間連続で５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２の範囲の投薬量レベルでｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの３０分から３時間の静脈注入、その後１週間に２日間の休薬期間が続く。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき、１週間当たりのソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体の８４から２７６のモル比を示す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づいて週当たりのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の２７６、１９７、１４８、１１１および８４のモル比を示す。

現在の本発明に従うすべてのオリゴヌクレオチドに加えて、ｍｉｒ−２１５比率および投薬量も同様の方式で決定することができる。

実施例６−４００ｍｇ／日のソラフェニブに基づいた併用療法
別の例において、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍ＋ソラフェニブの組み合わせを以下のように使用する。患者は毎日４００ｍｇのソラフェニブの経口投与、および５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２の範囲である投薬量レベルでｍｉＲ−３４−Ｍｉｍの３０分から３時間の静脈注射を受ける。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づいた１日当たりのソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体の３０から９８のモル比を示す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づいた、１日当たりのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の９８、７０、５３、４０および３０のモル比を表す。

別の例において、ソラフェニブは、1日４００ｍｇの経口投与量として与えられ、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２に及ぶ投薬量レベルで３０分から３時間の注入の間、週２回を３回（例えば月曜日と木曜日など）与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき１週あたりソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体の１０４から３４５のモル比を表す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき１週あたりのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の３４５、２４６、１８５、１３９および１０４のモル比を表す。

別の例において、ソラフェニブは１日４００ｍｇの経口投与量として与えられ、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５日間連続して、５０ｍｇ／ｍ^２から１６５ｍｇ／ｍ^２の範囲の投薬量レベルで３０分から３時間の静脈注入によって毎日与えられ、その後１週間に２日間の休薬期間が続く。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき１週当たりのソラフェニブ対ｍｉＲ−３４模倣体の４２〜１３８のモル比を表す。特定の状況では、ｍｉＲ−３４−Ｍｉｍは、５０、７０、９３、１２４、または１６５ｍｇ／ｍ^２の投薬量レベルで与えられる。これらの投薬量レベルは、７０ｋｇの患者に基づき週あたりのソラフェニブとｍｉＲ−３４模倣体の間の１３８、９８、７４、５６および４２のモル比を表す。

現在の本発明に従うすべてのオリゴヌクレオチドに加えて、ｍｉｒ−２１５比率および投薬量も同様の方式で決定することができる。

本明細書は、明細書内において引用される参考文献の教示を参照することでほとんど十分に理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態の実例を提供し、本発明の範囲を制限するようには解釈されるべきでない。当業者は、本発明が他の多くの実施形態を包含することを容易に認識する。それらの当業者は、わずかに慣例的な実験を行うだけで、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態と同等のものを多数認識するか、または確認することが出来るだろう。そのような等価物は下記の請求項によって包含されるように意図されている。

Claims (40)

1. 肝臓癌を患う被験体を処置する方法であって、該方法は：
   肝臓癌を患う被験体に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である配列を含む合成オリゴヌクレオチドを投与する工程；及び
   被験体にソラフェニブを投与する工程
   を含み、
   投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００の範囲にある
   ことを特徴とする方法。
2. 肝臓癌は原発性肝臓癌である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
3. 肝臓癌は肝細胞癌（ＨＣＣ）である、ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
4. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−４の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
5. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
6. 前記配列は少なくとも８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
7. モル比は相乗効果を示す、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
8. 相乗効果は、約０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、０．２５、又は０．２０未満の組み合わせ指数（ＣＩ）として定量化される、ことを特徴とする請求項７に記載の方法。
9. モル比は、約５０−５００、５０−４００、５０−３００、５０−２００、５０−１００、１００−５００、１００−４００、１００−３００、１００−２００、１５０−５００、１５０−４００、１５０−３００、１５０−２００、２００−５００、２００−４００、２００−３００、２５０−５００、２５０−４００、又は２５０−３００の範囲にある、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
10. モル比は、約１５−１７２３、１５−４９２、６０−１９７、３０−４９２、５２−１７２３の範囲、又は約３０、４０、５３、６０、７０、７９、８９、９８、１０６、１４１、１９７、２６６、３１１、又は９３１である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
11. モル比は、１日間、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間で被験体に投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの量に基づく、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
12. オリゴヌクレオチドは、
    ７日にわたり１、２、３、４、５、又は７日投与量；
    １４日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４日投与量；
    ２１日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１日投与量；或いは
    ２８日にわたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８日投与量
    で被験体に投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
13. オリゴヌクレオチドは、
    ２週間（合計１４日）；
    １週間の休止付きで１週間（合計１４日）；
    ３週間連続（合計２１日）；
    １週間の休止付きで２週間（合計２１日）；
    ２週間の休止付きで１週間（合計２１日）；
    ４週間連続（合計２８日）；
    １週間の休止付きで３週間連続（合計２８日）；
    ２週間の休止付きで２週間（合計２８日）；又は
    ３週間連続の休止付きで１週間（合計２８日）
    被験体に投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
14. オリゴヌクレオチドは：
    ７、１４、２１、又は２８日のサイクルの１日目；
    ２１又は２８日のサイクルの１及び１５日目；
    ２１又は２８日のサイクルの１、８、及び１５日目；又は
    ２１又は２８日のサイクルの１、２、８、及び１５日目
    に投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
15. オリゴヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、又は８週間ごとに１回投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
16. オリゴヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２のサイクルの間投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
17. オリゴヌクレオチドは、ソラフェニブの前に、ソラフェニブと同時に、又はソラフェニブの後に投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
18. ソラフェニブの用量は約８００、６００、４００、又は２００ｍｇ／日である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
19. オリゴヌクレオチドの用量は、１日当たり約１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、又は２５０ｍｇ／ｍ^２である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
20. 肝臓癌はソラフェニブに対する一次耐性又は二次耐性を持つ、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
21. オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である５’から３’への配列を持つマイクロＲＮＡ領域と、（ｉｉ）前記マイクロＲＮＡ領域に６０−１００％相補的な５’から３’への配列を持つ相補的領域とを含む、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
22. オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）分子の相補鎖の５’末端におけるヌクレオチドのリン酸塩又はヒドロキシルに対する置換基；（ｉｉ）相補的領域の最初又は最後の１乃至６の残基における１以上の糖修飾；又は（ｉｉｉ）相補的領域の３’末端における最後の１乃至５の残基における１以上のヌクレオチドと、対応するマイクロＲＮＡ領域のヌクレオチドとの間の非相補性のうち１以上を含む、ことを特徴とする請求項２１に記載の方法。
23. オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）５’末端において５’ＯＨ又はリン酸塩を遮断する少なくとも１つの修飾されたヌクレオチドを含み、少なくとも１つのヌクレオチド修飾は、ＮＨ_２、ビオチン、アミン基、低級アルキルアミン基、アセチル基、又は２’酸素−メチル（２’Ｏ−Ｍｅ）の修飾であり；又は前記オリゴヌクレオチドは（ｉｉ）２’Ｆ、２’ＮＨ_２、２’Ｎ_３、４’チオ、又は２’Ｏ−ＣＨ_３から選択された少なくとも１つのリボース修飾を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
24. オリゴヌクレオチドは、長さが１７と３０の間のヌクレオチドであり、且つ、（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である配列を有する第１のポリヌクレオチド；（ｉｉ）第１のポリヌクレオチドに６０−１００％相補的な５’から３’への配列を持つ別個の第２のポリヌクレオチド；及び（ｉｉｉ）相補鎖の５’末端において低級アルキルアミン基を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
25. 肝臓癌細胞の増殖を阻害する方法であって、該方法は：
    肝臓癌細胞に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つの配列と少なくとも８０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドを投与する工程；及び
    細胞にソラフェニブを投与する工程
    を含み、
    投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００の範囲にある
    ことを特徴とする方法。
26. 肝臓癌は肝細胞癌（ＨＣＣ）であり；
    配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一であり；及び
    モル比は＜１の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ
    ことを特徴とする請求項２５に記載の方法。
27. 肝細胞癌（ＨＣＣ）を患う被験体を処置する方法であって、該方法は：
    ＨＣＣを患う被験体に、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である配列を含むオリゴヌクレオチドを投与する工程；及び
    被験体にソラフェニブを投与する工程
    を含み、
    投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約１０−２０００の範囲にあり、＜１の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ
    ことを特徴とする方法。
28. 相乗効果は、約０．９５、０．９０、０．８５、０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、０．２５、又は０．２０未満の組み合わせ指数（ＣＩ）として定量化される、ことを特徴とする請求項２７に記載の方法。
29. モル比は、約１５−１７２３、１５−４９２、６０−１９７、３０−４９２、５２−１７２３の範囲、又は約３０、４０、５３、６０、７０、７９、８９、９８、１０６、１４１、１９７、２６６、３１１、又は９３１である、ことを特徴とする請求項２７に記載の方法。
30. 肝細胞癌（ＨＣＣ）を患う被験体を処置する方法であって、該方法は：
    ＨＣＣを患う被験体に１日につき約１０、２０、２５、３０、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、又は２５０ｍｇ／ｍ^２のオリゴヌクレオチドを投与する工程を含み、
    オリゴヌクレオチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１−１２の少なくとも１つの配列と少なくとも８０％同一である配列を含み；及び
    前記方法は、
    被験体に約８００、６００、４００、又は２００ｍｇ／日のソラフェニブを投与する工程を含み、
    ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、１日間、１週間、１４日間、２１日間、又は２８日間で被験体に投与されるソラフェニブ：オリゴヌクレオチドの量に基づいて約１０−２０００の範囲にあり、ソラフェニブ：オリゴヌクレオチドのモル比は、約０．９５、０．９０、０．８５、０．８０、０．７５、０．７０、０．６５、０．６０、０．５５、０．５０、０．４５、０．４０、０．３５、０．３０、０．２５、又は０．２０未満の組み合わせ指数（ＣＩ）を持つ
    ことを特徴とする方法。
31. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５−８の少なくとも１つと少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
32. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９と少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
33. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０と少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
34. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１と少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
35. 前記配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２と少なくとも８０％同一である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
36. オリゴヌクレオチドは、７−１３０、７−３０、７−２５、１５−３０、１５−２５、１７−３０、１７−２５、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の核酸塩基長さである、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
37. オリゴヌクレオチドは二本鎖構造又はヘアピン構造を持つ、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
38. オリゴヌクレオチドはトランスフェクションにより投与されない、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
39. 被験体は細胞培養物又は組織培養物ではない、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
40. 被験体は、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、又は非ヒト霊長類である、ことを特徴とする請求項１に記載の方法。