JP2017192387A - Ｐ因子を標的とする抗体のための組成物および方法 - Google Patents

Ｐ因子を標的とする抗体のための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

【課題】補体Ｐ因子に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントおよびその使用ならびに抗Ｐ因子抗体と補体成分５(Ｃ５)と結合する抗体またはその抗原結合フラグメントの組み合わせの提供。
【解決手段】Ｐ因子と結合する第一抗体またはその抗原結合フラグメント及びＣ５と結合する第二抗体又はその抗原結合フラグメントを含み、ここで、該組み合わせは代替補体経路を阻害し、第一抗体又はその抗原結合フラグメントが特定の配列から選択される重鎖ＣＤＲ１、２、３及び軽鎖ＣＤＲ１、２、３を含む、組成物。
【選択図】なし

Description

発明の背景
加齢性黄斑変性症(ＡＭＤ)は進行性疾患であり、米国で６５歳以上の視力喪失および失
明の主原因である。ＡＭＤは読書または運転に必要な高い視力を担う網膜の一部である網
膜黄斑に主に影響する。ＡＭＤ患者の大部分はドルーゼンと呼ばれる細胞外網膜沈着物の
存在により特徴付けられる疾患の初期段階にある。ドルーゼンは、細胞残骸、炎症メディ
エータおよび細胞外マトリックス成分の細胞外網膜沈着物である。ＡＭＤの後期は萎縮型
または滲出型として顕在化し、いずれも視力喪失と関連する。萎縮型ＡＭＤはまた地図状
萎縮としても知られ、眼底検査で網膜色素上皮(ＲＰＥ)喪失の局所領域に対応する明瞭な
境界が画定された領域として現れる。滲出型ＡＭＤは脈絡膜の血管新生と関連し、ブルッ
フ膜の完全性喪失および網膜における血管増殖を起こし、そこでしばしば出血が起こりう
る。この漏出は網膜細胞に恒久的な損傷を与え、大量死させ、中心視野における盲点を形
成する。
先天的ヒト免疫系は補体経路から成る。補体経路は先天的および適応免疫の橋渡しをす
る化膿性細菌感染に対しての防御として働き、免疫複合体集積物および炎症性傷害を処理
する。補体は、血漿および細胞表面におけるカスケード反応に関与する３０を超えるタン
パク質の系である。補体系およびその補体成分は種々の免疫過程に関連する。例えば、補
体Ｃ５ｂ−９複合体は、終末複合体または膜侵襲複合体(ＭＡＣ)とも呼ばれ、膜透過性損
傷を誘発することにより細胞死における重要な役割を果たす。
古典的経路、レクチン経路および代替経路の３種の補体活性化経路が知られている。こ
れら３経路は全て、Ｃ３コンバターゼによるＣ３開裂、次いでＣ５コンバターゼによるＣ
５開裂を起こし、Ｃ３ａ、Ｃ５ａおよびＣ５ｂを遊離する。Ｐ因子は代替補体経路の主要
制御因子である。インビボで２つの主用機能を有することが提唱されている。第一に、Ｐ
因子は、コンバターゼ酵素のＣ３ｂに結合することによりＣ３およびＣ５コンバターゼを
安定化し、それによりＣ３コンバターゼの半減期を延長する。第二に、Ｐ因子は細胞表面
へ結合し、コンバターゼが形成できる鋳型として機能することにより溶解される細胞を決
定し、代替補体経路の活性化および細胞溶解に至る。
最近の研究は、補体成分Ｃ３およびＣ５がＡＭＤの患者のドルーゼンの主要成分である
ことを証明している(Mulling, R.F. et al. (2000) FASEB J 14, 835-46)。それらの存在
ならびにドルーゼンを覆うＲＰＥ細胞における膜侵襲複合体(ＭＡＣ)Ｃ５ｂ−９および他
の急性相反応物タンパク質の存在が、補体活性化およびＭＡＣ形成を誘発できる過程に関
与すると推測されている(Johnson, L et al. (2001) Exp Eye Res 73, 887-896)。それゆ
えに、補体成分が単なる自然免疫のメディエータ以上のものであることを示す証拠が増え
続けている。
萎縮型ＡＭＤから滲出型ＡＭＤへの進行阻止のために栄養療法が処方されている。現在
まで、ＦＤＡが承認している滲出型ＡＭＤは光線力学治療(ＰＤＴ)、抗ＶＥＧＦアプタマ
ー、例えばペガプタニブおよび抗ＶＥＧＦ抗体、ラニビズマブを含むのみである。これら
の薬物または治療は、典型的に既に実質的に視力喪失している患者に投与される。
現在の処置に代わるまたは補うＡＭＤ、特に萎縮型ＡＭＤの有効な処置の開発がまだ必
要とされている。特に、視力喪失の早期発見、予防または回復を提供できる処置への必要
性がある。
発明の要約
本発明は、ヒトまたはカニクイザルＰ因子に結合する単離抗体またはその抗原結合フラ
グメントに関し、ここで、該抗体はＴＳＲ５ドメイン(配列番号４０６)と結合する。例え
ば、ここに記載する抗体または抗原結合フラグメントは配列番号４０７の配列を含むＴＳ
Ｒ５ドメインの領域に結合し、より具体的に該抗体はまたアミノ酸配列ＫＳＩＳＣ(配列
番号４０８)を含むＰ因子ＴＳＲ５ドメインの領域とも結合する。ある態様において、単
離抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４０７のアミノ酸配列を含むＰ因子
エピトープと結合する。他の態様において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは
、配列番号４０８のアミノ酸配列を含むＰ因子エピトープに結合する。
ここに記載する単離抗体または抗原結合フラグメントは、Ｐ因子に１.２nM以下のＫＤ
で結合する。例えば、ここに記載する単離抗体または抗原結合フラグメントは、ヒトまた
はカニクイザルＰ因子と、１.１nM以下、１nM、６００pM以下、５００pM以下、４００pM
以下、３００pM以下、２００pM以下、１００pM以下、７５pM以下、５０pM以下、４０pM以
下、３０pM以下、２０pM以下または１０pM以下のＫＤで結合し得る。
ここに記載する単離抗体および抗原結合フラグメントの結合親和性は、溶液平衡滴定(
ＳＥＴ)により決定できる。ＳＥＴの方法は当分野で知られ、詳細は後記する。あるいは
、ここに記載する単離抗体またはフラグメントの結合親和性をBiacoreアッセイにより決
定できる。Biacore動態アッセイの方法は当分野で知られ、詳細は後記する。
ここに記載する単離抗体および抗原結合フラグメントは代替補体経路阻害に使用できる
。例えば、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、インビトロ溶血アッセイで測定
して、２５nM以下、２０nM以下、１６nM以下、１５nM以下、１４nM以下、１３nM以下、１
２nM以下、１１nM以下、１０nM以下、９nM以下、８nM以下、７nM以下のＩＣ５０で代替補
体経路を阻害できる。より具体的に、ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグ
メントは、インビトロ溶血アッセイで測定して、１６nM以下または９nM以下のＩＣ５０で
ヒトにおける代替補体経路を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、インビトロＣ３ｂ沈着ア
ッセイで測定して、１０nM以下、７nM以下、６nM以下、５nM以下、４nM以下、３nM以下、
２nM以下、１nM以下、１５nM以下、１nM以下、０.５nM以下または０.１nM以下のＩＣ５０
で代替補体経路を阻害できる。より具体的に、ここに記載する単離抗体またはその抗原結
合フラグメントは、インビトロＣ３ｂ沈着アッセイで測定して、３nM以下または２nM以下
のＩＣ５０でヒトにおける代替補体経路を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、補体膜侵襲複合体の沈着
により測定して２５nM以下、２０nM以下、１５nM以下、１０nM以下、９nM以下、８nM以下
、７nM以下または６nM以下のＩＣ５０で代替補体経路を阻害できる。より具体的に、ここ
に記載する単離抗体またはそのフラグメントは、補体膜侵襲複合体の沈着で測定して、２
５nM以下または７.５nM以下のＩＣ５０でヒトにおける代替補体経路を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ３ａの産生で測定して
、８０nM以下、５０nM以下、４５nM以下または３５nM以下のＩＣ５０で代替補体経路を阻
害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、ｉＣ３ｂの産生で測
定して、８０nM以下、５０nM以下、４５nM以下または３５nM以下のＩＣ５０で代替補体経
路を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまたＣ５ａの産生で測定し
て、８０nM以下、５０nM以下、４５nM以下または３５nM以下のＩＣ５０で代替補体経路を
阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、Ｃ５ｂの産生で測定
して、８０nM以下、５０nM以下、４５nM以下または３５nM以下のＩＣ５０で代替補体経路
を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、ｉ
Ｃ３ｂ、Ｃ５ａおよび／またはＣ５ｂの産生減少で測定して、Ｃ３および／またはＣ５コ
ンバターゼの不安定化および／または活性遮断により代替補体経路を阻害できる。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、Ｃ５ａの産生を８０
nM以下、５０nM以下、４５nM以下または３５nM以下のＩＣ５０で阻害できる。
単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまたＰ因子のＣ３ｂへの結合を遮断および
／またはＰ因子が細胞表面またはＤＮＡもしくはオリゴヌクレオチドに結合するのを阻止
し得る。
本発明の他の面は、ヒト、カニクイザル、ラットおよび／またはウサギＰ因子と特異的
に結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。さらなる面において、単離
抗体または抗原結合フラグメントは、表１に記載する抗体または抗原結合フラグメントと
結合について競合する。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体、ヒ
トまたはヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント
、Ｆ(ａｂ’)２フラグメントまたはＳｃＦｖフラグメントおよび／またはＩｇＧアイソタ
イプであり得る。
ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまたアミノ酸が抗体フレー
ムワーク内で各ヒトＶＨまたはＶＬ生殖系列配列から置換されているフレームワークも含
む。
本発明の他の面は、表１に記載する重鎖および軽鎖配列を有する単離抗体またはその抗
原結合フラグメントを含む。例えば、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆａ
ｂ ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５、ＮＶＳ９６６、ＮＶＳ
９６７、ＮＶＳ９６２−Ｇ、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ９６２−Ｔ、ＮＶＳ９６２−Ｑ、
ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａ、ＮＶＳ９６５−Ｑ、ＮＶＳ９６５−Ｓ、ＮＶＳ９６５−Ｔ、Ｎ
ＶＳ８０４、ＮＶＳ８０５、ＮＶＳ８０６、ＮＶＳ８０７またはＮＶＳ８０８の重鎖およ
び軽鎖配列を有し得る。
本発明の他の面は、表１に記載するＦａｂの重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を有する
単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。例えば、単離抗体またはその抗原結合
フラグメントは、Ｆａｂ ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５、
ＮＶＳ９６６、ＮＶＳ９６７、ＮＶＳ９６２−Ｇ、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ９６２−Ｔ
、ＮＶＳ９６２−Ｑ、ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａ、ＮＶＳ９６５−Ｑ、ＮＶＳ９６５−Ｓ、
ＮＶＳ９６５−Ｔ、ＮＶＳ８０４、ＮＶＳ８０５、ＮＶＳ８０６、ＮＶＳ８０７またはＮ
ＶＳ８０８の重鎖および軽鎖可変ドメイン配列を有し得る。
本発明はまた、配列番号１、１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１
２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、２２５、２３９、２５３およ
び２６７から成る群から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号２、１６、３０、４４、５８
、７２、８６、１００、１１４、１２８、１４２、１５６、１７０、１８４、１９８、２
１２、２２６、２４０、２５４および２６８から成る群から選択される重鎖ＣＤＲ２；お
よび配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５、１２９、１４
３、１５７、１７１、１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５および２６９か
ｒあ成る群から選択される重鎖ＣＤＲ３を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメント
に関し、ここで、単離抗体またはその抗原結合フラグメントはヒトＰ因子に結合する。他
の面において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントはさらに配列番号４、１８、３
２、４６、６０、７４、８８、１０２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１８
６、２００、２１４、２２８、２４２、２５６および２７０から成る群から選択される軽
鎖ＣＤＲ１；配列番号５、１９、３３、４７、６１、７５、８９、１０３、１１７、１３
１、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、２１５、２２９、２４３、２５７および
２７１から成る群から選択される軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号６、２０、３４、４８、
６２、７６、９０、１０４、１１８、１３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２
、２１６、２３０、２４４、２５８および２７２から成る群から選択される軽鎖ＣＤＲ３
を含む。
本発明はまた、配列番号４、１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０２、１１６、
１３０、１４４、１５８、１７２、１８６、２００、２１４、２２８、２４２、２５６お
よび２７０から成る群から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５、１９、３３、４７、６
１、７５、８９、１０３、１１７、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、
２１５、２２９、２４３、２５７および２７１から成る群から選択される軽鎖ＣＤＲ２；
および配列番号６、２０、３４、４８、６２、７６、９０、１０４、１１８、１３２、１
４６、１６０、１７４、１８８、２０２、２１６、２３０、２４４、２５８および２７２
から成る群から選択される軽鎖ＣＤＲ３を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメント
ｔに関し、ここで、単離抗体またはその抗原結合フラグメントはヒトＰ因子に結合する。
本発明はまた、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、
ＬＣＤＲ３を有するＰ因子と結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関し、
ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１、２、３を含み、ＬＣＤＲ１
、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号４、５、６を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣ
ＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１５、１６、１７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣ
ＤＲ３は配列番号１８、１９、２０を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ
３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、Ｈ
ＣＤＲ３は配列番号２９、３０、３１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配
列番号３２、３３、３４を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は
配列番号４３、４４、４５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号４６
、４７、４８を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１
、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号５７、５８
、５９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号６０、６１、６２を含む
か；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３
、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号７１、７２、７３を含み、Ｌ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号７４、７５、７６を含むか；またはＨＣＤ
Ｒ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号８５、８６、８７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、Ｌ
ＣＤＲ３は配列番号８８、８９、９０を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤ
Ｒ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ
３は配列番号９９、１００、１０１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列
番号１０２、１０３、１０４を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含
み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列
番号１１３、１１４、１１５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１
１６、１１７、１１８を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、Ｌ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１
２７、１２８、１２９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１３０、
１３１、１３２を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ
１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１４１、
１４２、１４３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１４４、１４５
、１４６を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１５５、１５６
、１５７を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１５８、１５９、１６
０を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ
２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１６９、１７０、１７
１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１７２、１７３、１７４を含
むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、Ｌ
ＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１８３、１８４、１８５を含
み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号１８６、１８７、１８８を含むか；
またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ
３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号１９７、１９８、１９９を含み、Ｌ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号２００、２０１、２０２を含むか；または
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、Ｈ
ＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号２１１、２１２、２１３を含み、ＬＣＤＲ
１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号２１４、２１５、２１６を含むか；またはＨＣＤ
Ｒ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ
１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号２２５、２２６、２２７を含み、ＬＣＤＲ１、Ｌ
ＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は配列番号２２８、２２９、２３０を含むか；またはＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、Ｈ
ＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３は配列番号２３９、２４０、２４１を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ
２、ＬＣＤＲ３は配列番号２４２、２４３、２４４を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤ
Ｒ２、ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２、ＨＣＤＲ３は配列番号２５３、２５４、２５５を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、Ｌ
ＣＤＲ３は配列番号２５６、２５７、２５８を含むか；またはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、
ＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、Ｈ
ＣＤＲ３は配列番号２６７、２６８、２６９を含み、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ
３は配列番号２７０、２７１、２７２を含む。
本発明の一つの態様において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号
７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、１３３、１４７、１６１、
１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９および２７３から成る群から
選択される重鎖可変ドメイン配列を含む。他の態様において、単離抗体または抗原結合フ
ラグメントはさらに軽鎖可変ドメイン配列を含み、ここで、重鎖可変ドメインおよび軽鎖
可変ドメインは一体となってＰ因子のための抗原結合を形成する。さらなる態様において
単離抗体または抗原結合フラグメントはさらに配列番号８、２２、３６、５０、６４、７
８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８
、２３２、２４６、２６０および２７４から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含み、こ
こで、該単離抗体またはその抗原結合フラグメントはＰ因子と結合する。
本発明はまた配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１
３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０およ
び２７４から成る群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む単離抗体またはその抗原
結合フラグメントに関し、ここで、該単離抗体またはその抗原結合フラグメントはヒトＰ
因子と結合する。一つの態様において、単離抗体または抗原結合フラグメントはさらに重
鎖可変ドメイン配列を含み、ここで、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは一体と
なってＰ因子のための抗原結合を形成する。
本発明の他の態様において、Ｐ因子と結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメン
トは、それぞれ配列番号７および８；２１および２２；３５および３６；４９および５０
；６３および６４；７７および７８；９１および９２；１０４および１０５；１１８およ
び１１９；１３２および１３３；１４６および１４７；１６０および１６１；１７４およ
び１７５；１８８および１８９；２０２および２０３；２１６および２１７；２３０およ
び２３１；２４４および２４５；２５８および２５９；または２７２および２７３の配列
を含む重鎖および軽鎖可変ドメインを含み得る。
本発明は、さらに、配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１
９、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５
９および２７３から成る群から選択される配列と少なくとも９０％配列同一性を有する重
鎖可変ドメインを含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関し、ここで、該抗体
はＰ因子と結合する。一つの面において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントはま
た配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８
、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０および２７４から
成る群から選択される配列と少なくとも９５％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含
む。
他の態様において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８、２２、
３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１
９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０および２７４から成る群から選択される
配列と少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可変ドメインを含み、ここで、該抗体は
Ｐ因子と結合する。
他の態様において、Ｐ因子と結合する単離抗体またはその抗原結合フラグメントは、配
列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９、１
６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６１または２７５の配列を
含む重鎖を有し得る。さらなる態様において、単離抗体は、また重鎖と一体となってヒト
Ｐ因子への抗原結合部位を形成できる軽鎖も含む。さらなる態様において、単離抗体また
はその抗原結合フラグメントは、配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、
１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、
２４８、２６２または２７６を含む配列を有する軽鎖を含む。
本発明は、さらに、配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２
１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６
１および２７５から成る群から選択される配列と少なくとも９０％配列同一性を有する重
鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関し、ここで、該抗体はＰ因子と結
合する。一つの面において、単離抗体またはその抗原結合フラグメントはまた配列番号１
０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、
１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２および２７６から成る群から
選択される配列と少なくとも９５％配列同一性を有する軽鎖を含む。
本発明は、さらに、配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２
１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６
１および２７５から成る群から選択される配列と少なくとも９０％配列同一性を有する軽
鎖を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関し、ここで、該抗体はＰ因子と結
合する。
本発明はまた、ここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物
に関し、また薬学的に許容される担体と組み合わせた抗体組成物に関する。具体的に、本
発明は、さらに、例えば抗体ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５
、ＮＶＳ９６６、ＮＶＳ９６７、ＮＶＳ９６２−Ｇ、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ９６２−
Ｔ、ＮＶＳ９６２−Ｑ、ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａ、ＮＶＳ９６５−Ｑ、ＮＶＳ９６５−Ｓ
、ＮＶＳ９６５−Ｔ、ＮＶＳ８０４、ＮＶＳ８０５、ＮＶＳ８０６、ＮＶＳ８０７または
ＮＶＳ８０８のような表１の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物に関
する。本発明はまた表１の単離抗体またはその抗原結合フラグメントの２個以上の組み合
わせを含む医薬組成物にも関する。
本発明はまた、配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、
１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９お
よび２７３から成る群から選択される配列と少なくとも９０％配列同一性を有する重鎖可
変ドメインを含むポリペチドをコードする配列を含む単離核酸に関する。
本発明はまた、配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、
１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０お
よび２７４から成る群から選択される配列と少なくとも９０％配列同一性を有する軽鎖可
変ドメインを含むポリペチドをコードする配列を含む単離核酸に関する。
本発明はまた、ここに記載する核酸分子の１個以上を含むベクターにも関する。
本発明はまた、上記抗体の重鎖をコードする組み換えＤＮＡ配列および上記抗体の軽鎖
をコードする第二組み換えＤＮＡ配列を含む単離宿主細胞に関し、ここで、該ＤＮＡ配列
はプロモータと操作可能に結合し、宿主細胞中で発現できる。抗体がヒトモノクローナル
抗体であり得ることが意図される。宿主細胞が非ヒト哺乳動物細胞であり得ることも意図
される。
本発明はまた補体介在細胞死の阻害方法に関し、ここで、該方法は、細胞をここに記載
する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物の有効量と接触させる過程を
含む。細胞がヒト細胞であることが意図される。さらに細胞が対象内にあることが意図さ
れる。さらに対象がヒトであることが意図される。
本発明は、さらに、細胞における代替補体経路の阻害方法に関し、ここで、該方法は、
細胞をここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物の有効量と
接触させる過程を含む。一つの面において、細胞がヒト細胞であることが意図される。さ
らに細胞が対象内にあることが意図される。さらに対象がヒトであることが意図される。
本発明はまた細胞における膜侵襲複合体の形成阻害方法に関し、ここで、該方法は、細
胞をここに記載する単離抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組成物の有効量と接
触させる過程を含む。細胞がヒト細胞であることが意図される。さらに細胞が対象内にあ
ることが意図される。さらに対象がヒトであることが意図される。
前記単離抗体またはその抗原結合フラグメントはモノクローナル抗体またはその抗原結
合フラグメントであり得る。
一つの面において、本発明はＰ因子と結合する第一抗体またはその抗原結合フラグメン
トおよびＣ５と結合する第二抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該
組み合わせは代替補体経路を阻害する。一つの面において、第一および第二抗体は組成物
として組み合わせてよい。
このような組み合わせは、眼炎症阻止に使用できる。眼炎症は網膜における好中球集積
および／またはマクロファージ動員の測定により決定できる。
一つの面において、このような組み合わせを網膜における好中球集積または網膜におけ
るマクロファージ動員の阻害に使用できる。
一つの面において、このような組み合わせにおけるＰ因子と結合する抗体は配列番号４
０８を含むＰ因子の領域と結合する。あるいはまたは組み合わせにおいて、このような抗
体は配列番号４０７を含むＰ因子の領域と結合する。
さらなる面において、Ｐ因子およびＣ５と結合する抗体またはその結合フラグメントの
組み合わせは、表１から選択される第一抗体または抗原結合フラグメントおよび表２から
選択される第二抗体または抗原結合フラグメントを含む。一つの面において、第一抗体ま
たはその抗原結合フラグメントは表１に記載の抗体と同じエピトープに結合し、第二抗体
またはその抗原結合フラグメントは、表２に記載する抗体と同じエピトープに結合する。
一つの面において、本発明は、ａ)それぞれ配列番号１、２および３に示す重鎖可変領
域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号４、５および６に示
す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｂ)それぞれ配列番号１５、
１６および１７に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれ
ぞれ配列番号１８、１９および２０に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬ
ＣＤＲ３；ｃ)それぞれ配列番号２９、３０および３１に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、
ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号３２、３３および３４に示す軽鎖可
変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｄ)それぞれ配列番号４３、４４およ
び４５に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列
番号４６、４７および４８に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３
；ｅ)それぞれ配列番号５７、５８および５９に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号６０、６１および６２に示す軽鎖可変領域Ｌ
ＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｆ)それぞれ配列番号７１、７２および７３に
示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号７４
、７５および７６に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｇ)そ
れぞれ配列番号８５、８６および８７に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および
ＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号８８、８９および９０に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１
、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｈ)それぞれ配列番号９９、１００および１０１に示す
重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号１０２、
１０３および１０４に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｉ)
それぞれ配列番号１１３、１１４および１１５に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号１１６、１１７および１１８に示す軽鎖可変
領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｊ)それぞれ配列番号１２７、１２８お
よび１２９に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ
配列番号１３０、１３１および１３２に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および
ＬＣＤＲ３；ｋ)それぞれ配列番号１４１、１４２および１４３に示す重鎖可変領域ＨＣ
ＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号１４４、１４５および１４
６に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｌ)それぞれ配列番号
１５５、１５６および１５７に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ
３およびそれぞれ配列番号１５８、１５９および１６０に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、
ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｍ)それぞれ配列番号１６９、１７０および１７１に示す
重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号１７２、
１７３および１７４に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｎ)
それぞれ配列番号１８３、１８４および１８５に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号１８６、１８７および１８８に示す軽鎖可変
領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｏ)それぞれ配列番号１９７、１９８お
よび１９９に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ
配列番号２００、２０１および２０２に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および
ＬＣＤＲ３；ｐ)それぞれ配列番号２１１、２１２および２１３に示す重鎖可変領域ＨＣ
ＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号２１４、２１５および２１
６に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｑ)それぞれ配列番号
２２５、２２６および２２７に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ
３およびそれぞれ配列番号２２８、２２９および２３０に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、
ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｒ)それぞれ配列番号２３９、２４０および２４１に示す
重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号２４２、
２４３および２４４に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｓ)
それぞれ配列番号２５３、２５４および２５５に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ
２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号２５６、２５７および２５８に示す軽鎖可変
領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；およびｔ)それぞれ配列番号２６７、２
６８および２６９に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそ
れぞれ配列番号２７０、２７１および２７２に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２
およびＬＣＤＲ３から成る群から選択される重鎖ＣＤＲ１、２、３および軽鎖ＣＤＲ１、
２、３を含む第一抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、第二抗体また
はその抗原結合フラグメントは、ａ)それぞれ配列番号４１０、４１１および４１２に示
す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号４１３
、４１４および４１５に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｂ
)それぞれ配列番号４２６、４２７および４２８に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤ
Ｒ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号４２９、４３０および４３１に示す軽鎖可
変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ｃ)それぞれ配列番号４４２、４４３
および４４４に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞ
れ配列番号４４５、４４６および４４７に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およ
びＬＣＤＲ３；ｄ)それぞれ配列番号４２６、４５８および４２８に示す重鎖可変領域Ｈ
ＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号４２９、４３０および４
５９に示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；およびｅ)それぞれ
配列番号４７０、４７１および４７２に示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および
ＨＣＤＲ３およびそれぞれ配列番号４７３、４７４および４７５に示す軽鎖可変領域ＬＣ
ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３から成る群から選択される重鎖ＣＤＲ１、２、３お
よび軽鎖ＣＤＲ１、２、３を含む。
一つの面において、本発明は、第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)に関し、ここで、第一抗体またはその抗原
結合フラグメントは、それぞれ配列番号７および８；配列番号２１および２２；配列番号
３５および３６；配列番号４９および５０；配列番号６３および６４；配列番号７７およ
び７８；配列番号９１および９２；配列番号１０５および１０６；配列番号１１９および
１２０；配列番号１３３および１３４；配列番号１４７および１４８；配列番号１６１お
よび１６２；配列番号１７５および１７６；配列番号１８９および１９０；配列番号２０
３および２０４；配列番号２１７および２１８；配列番号２３１および２３２；配列番号
２４５および２４６；配列番号２５９および２６０；または配列番号２７３および２７４
と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含み、第二抗
体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４１６および４１７；配列番号
４３２および４３３；配列番号４４８および４４９；配列番号４６０および４６１；また
は配列番号４７６および４７７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖およ
び軽鎖可変領域を含む。
一つの面において、本発明は、第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)に関し、ここで、第一抗体またはその抗原
結合フラグメントは、それぞれ配列番号７および８；配列番号２１および２２；配列番号
３５および３６；配列番号４９および５０；配列番号６３および６４；配列番号７７およ
び７８；配列番号９１および９２；配列番号１０５および１０６；配列番号１１９および
１２０；配列番号１３３および１３４；配列番号１４７および１４８；配列番号１６１お
よび１６２；配列番号１７５および１７６；配列番号１８９および１９０；配列番号２０
３および２０４；配列番号２１７および２１８；配列番号２３１および２３２；配列番号
２４５および２４６；配列番号２５９および２６０；または配列番号２７３および２７４
から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含み、第二抗体またはそ
の抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号４１６および４１７；配列番号４３２およ
び４３３；配列番号４４８および４４９；配列番号４６０および４６１；または配列番号
４７６および４７７から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む
。
さらなる面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、(ａ)第一抗体またはその
抗原結合フラグメントは配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１
１９、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２
５９または２７３を含む重鎖可変領域およびさらに軽鎖可変領域を含み、ここで、該重鎖
可変領域および該軽鎖可変領域は一体となってＰ因子への抗原結合部位を形成し、(ｂ)第
二抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４１６、４３２、４４８、４６０ま
たは４７６を含む重鎖可変領域およびさらに軽鎖可変領域を含み、ここで、該重鎖可変領
域および該軽鎖可変領域は一体となってＣ５への抗原結合部位を形成する。さらなる面に
おいて、第一抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号８、２２、３６、５０、６
４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、
２１８、２３２、２４６、２６０または２７４の軽鎖可変領域配列を含み、第二抗体また
はその抗原結合フラグメントは配列番号４１７、４３３、４４９、４６１または４７７の
軽鎖可変領域配列を含む。
さらなる面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、(ａ)第一抗体またはその
抗原結合フラグメントは配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１
２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２
６０または２７４を含む軽鎖可変ドメインおよびさらに重鎖可変ドメインを含み、ここで
、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは一体となってＰ因子への抗原結合部位を形
成し、(ｂ)第二抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号４１７、４３３、４４９
、４６１または４７７を含む軽鎖可変ドメインを含む軽鎖可変領域およびさらに重鎖可変
ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは一体となってＣ５
への抗原結合部位を形成する。
一つの面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(こ
れは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、(ａ)第一抗体またはその抗
原結合フラグメントは配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２
１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６
１または２７５の重鎖およびさらに軽鎖を含み、ここで、重鎖および軽鎖は一体となって
Ｐ因子への抗原結合部位を形成し、(ｂ)第二抗体またはその抗原結合フラグメントは配列
番号４１８、４３４、４５０、４６２または４７８の重鎖およびさらに軽鎖を含み、ここ
で、重鎖および軽鎖は一体となってＣ５への抗原結合部位を形成する。さらなる面におい
て、第一抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号１０、２４、３８、５２、６６
、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２
２０、２３４、２４８、２６２または２７６の軽鎖を含み、第二抗体またはその抗原結合
フラグメントは配列番号４１９、４３５、４５１、４６３または４７９の軽鎖を含む。
一つの面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(こ
れは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、(ａ)第一抗体またはその抗
原結合フラグメントは配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１
２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２
６２または２７６の軽鎖およびさらに重鎖を含み、軽鎖および重鎖は一体となってＰ因子
への抗原結合部位を形成し、(ｂ)第二抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号４
１９、４３５、４５１、４６３または４７９の軽鎖およびさらに重鎖を含み、軽鎖および
重鎖は一体となってＣ５への抗原結合部位を形成する。
一つの面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(こ
れは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、第一抗体またはその抗原結
合フラグメントは配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２１、
１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６１ま
たは２７５と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖およびさら
に配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５
０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２または２７６と
少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、第二抗体または
その抗原結合フラグメントは配列番号４１８、４３４、４５０、４６２または４７８と少
なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖およびさらに配列番号４１
９、４３５、４５１、４６３または４７９と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ
酸配列を有する軽鎖を含む。
さらなる面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、第一抗体またはその抗原
結合フラグメントは、配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２
１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６
１または２７５から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖およびさらに配列番号１０、２
４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８
、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２または２７６から選択されるアミノ
酸配列を有する軽鎖を含み、第二抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号４１８
、４３４、４５０、４６２または４７８から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖および
さらに配列番号４１９、４３５、４５１、４６３または４７９から選択されるアミノ酸配
列を有する軽鎖を含む。
さらなる面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、第一抗体またはその抗原
結合フラグメントは、それぞれ配列番号９および１０、２３および２４、３７および３８
、５１および５２、６５および６６、７９および８０、９３および９４、１０７および１
０８、１２１および１２２、１３５および１３６、１４９および１５０、１６３および１
６４、１７７および１７８、１９１および１９２、２０５および２０６、２１９および２
２０、２３３および２３４、２４７および２４８、２６１および２６２または２７５およ
び２７６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を
含み；第二抗体またはその抗原結合フラグメントはそれぞれ配列番号４１８および４１９
、４３４および４３５；４５０および４５１；４６２および４６３；または４７８および
４７９と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含
む。
さらなる面において、本発明は第一および第二抗体またはその抗原結合フラグメント(
これは組成物として組み合わさっていてよい)を含み、ここで、第一抗体またはその抗原
結合フラグメントはそれぞれ配列番号９および１０、２３および２４、３７および３８、
５１および５２、６５および６６、７９および８０、９３および９４、１０７および１０
８、１２１および１２２、１３５および１３６、１４９および１５０、１６３および１６
４、１７７および１７８、１９１および１９２、２０５および２０６、２１９および２２
０、２３３および２３４、２４７および２４８、２６１および２６２または２７５および
２７６から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含み；第二抗体またはその
抗原結合フラグメントはそれぞれ配列番号４１８および４１９、４３４および４３５；４
５０および４５１；４６２および４６３；または４７８および４７９から選択されるアミ
ノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含む。
本発明は、さらに、上記第一および／または第二抗体またはその抗原結合フラグメント
をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子に関する。このような核酸配列をベク
ターに挿入でき、これを続いて、一つの面において、このような核酸配列を発現できる宿
主細胞に包含させてよい。
本発明は、さらに、対象における加齢性黄斑変性症の処置方法であって、該対象に、第
一および第二抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を単独でまたは組成物として
組み合わせて投与することを含む、方法に関する。対象はヒトであり得る。
本発明は、さらに、対象における代替補体経路の阻害方法であって、該対象に第一およ
び第二抗体またはその抗原結合フラグメントの有効量を単独でまたは組成物として組み合
わせて投与することを含む、方法に関する。対象はヒトであり得る。
定義
特に断らない限り、ここで使用する全ての技術用語および科学用語は本発明が関与する
分野の通常の技術者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
ここで使用する用語“抗体”は、全抗体およびその任意の抗原結合フラグメント(すな
わち、“抗原結合部分”)または一本鎖を意味する。全抗体は、ジスルフィド結合により
相互接続した少なくとも２個の重(Ｈ)鎖および２個の軽(Ｌ)鎖を含む糖タンパク質である
。各重鎖は、重鎖可変領域(ここではＶＨと略す)および重鎖定常領域から成る。重鎖定常
領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３ドメインから成る。各軽鎖は軽鎖可変領域(こ
こではＶＬと略す)および軽鎖定常領域から成る。軽鎖定常領域はＣＬである１ドメイン
から成る。ＶＨ領域およびＶＬ領域はさらに、フレームワーク領域(ＦＲ)と呼ばれるより
保存性の領域に分散した相補性決定領域(ＣＤＲ)と呼ばれる超可変性の領域に細分できる
。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に次のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２
、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順番で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦ
Ｒから成る。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗
体の定常領域は、免疫グロブリンの、免疫系の種々の細胞(例えば、エフェクター細胞)お
よび古典的補体活性化経路の第一補体(Ｃｌｑ)を含む宿主組織または因子への結合を介在
し得る。
ここで使用する抗体の“抗原結合部分”または“抗原結合フラグメント”なる用語は、
ある抗原(例えば、Ｐ因子)と特異的に結合する能力を維持したインタクト抗体の１個以上
のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は、インタクト抗体のフラグメントによ
り実施できる。用語“抗体の抗原結合部分”または“抗原結合フラグメント”に包含され
る結合フラグメントの例は、Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメイ
ン；Ｆ(ａｂ)２フラグメントから成る一価フラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋
により結合した２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；ＶＨおよびＣＨ１ド
メインから成るＦｄフラグメント；抗体の一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成るＦ
ｖフラグメント；ＶＨドメインまたはＶＬドメインから成る一ドメイン抗体(ｄＡｂ)フラ
グメント(Ward et al., 1989 Nature 341:544-546)；および単離相補性決定領域(ＣＤＲ)
を含む。
さらに、Ｆｖフラグメントの２個のドメインであるＶＬおよびＶＨは別の遺伝子により
コードされているが、これらは、組み換え方法により、ＶＬおよびＶＨ領域が対となり一
価分子を形成する、一タンパク質鎖として製造されることを可能とする人工ペプチドリン
カーによりあわせることができる(一本鎖Ｆｖ(ｓｃＦｖ)として知られる；例えば、Bird
et al., 1988 Science 242:423-426; and Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci.
85:5879-5883参照)。このような一本鎖抗体は１個以上の抗体の抗原結合部分またはフラ
グメントを含む。これらの抗体フラグメントは当業者に知られる慣用法を使用して得て、
フラグメントを、インタクト抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングする。
抗原結合フラグメントはまた一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体
、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ｖ−ＮＡＲおよびビス−ｓｃＦｖ
にも含まれ得る(例えば、Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology, 23, 9,
1126-1136参照)。抗体の抗原結合部分はポリペチドに基づきスキャフォールド、例えばフ
ィブロネクチンIII型(Ｆｎ３)に接木され得る(フィブロネクチンポリペチドモノボディを
記載する米国特許番号６,７０３,１９９参照)。
抗原結合フラグメントは、直列Ｆｖセグメント(ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１)の対を含
む一本鎖分子に包含され、相補的軽鎖ポリペチドと共に、抗原結合領域の対を形成し得る
(Zapata et al., 1995 Protein Eng. 8(10):1057-1062；および米国特許番号５,６４１,
８７０)。
ここで使用する用語“親和性”は、一抗原性部位での抗体と抗原の相互作用の強度を意
味する。各抗原性部位内で、抗体“アーム”の可変領域は、抗原と多くの部位で弱い非共
有結合的力を介して相互作用し、相互作用が多いほど、親和性が強くなる。ここで使用す
るＩｇＧ抗体またはそのフラグメント(例えば、Ｆａｂフラグメント)に対する“高親和性
”なる用語は、標的抗原に対して１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下または１０−１０ Ｍ
または１０−１１Ｍ以下または１０−１２Ｍ以下または１０−１３Ｍ以下のＫＤを有する
抗体を意味する。しかしながら、高親和性結合は他の抗体アイソタイプで変わり得る。例
えば、ＩｇＭアイソタイプに対する高親和性結合は、１０−７Ｍ以下または１０−８Ｍ以
下のＫＤを有する抗体を意味する。
用語“アミノ酸”は、天然に存在するおよび合成アミノ酸、ならびに天然に存在するア
ミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸模倣体を意味する。天然
に存在するアミノ酸は遺伝コードによりコードされるもの、ならびに後に修飾されたアミ
ノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメートおよびＯ−ホスホセリ
ンである。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち
、水素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基と結合したアルファ炭素を有する化合物、
例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホ
ニウムを意味する。このようなアナログは、修飾されたＲ基(例えば、ノルロイシン)また
は修飾されたペプチド主鎖を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保
持する。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的化学構造と異なる構造を有するが、天然に
存在するアミノ酸と類似の方法で機能する化合物を意味する。
ここで使用する用語“結合特異性”は、個々の抗体結合部位が唯一つの抗原性決定基と
反応する能力を意味する。
抗体(例えば、Ｐ因子結合抗体)に“特異的に(または選択的に)結合する”なる用語は、
タンパク質および他の生物製剤の異種性集団における同族抗原(例えば、ヒトＰ因子また
はカニクイザルＰ因子)の存在の決定因である結合反応を意味する。用語“抗原を認識す
る抗体”および“抗原に特異性の抗体”は、ここでは用語“抗原に特異的に結合する抗体
”と同義に使用する。
用語“黄斑変性症と関連する状態または障害”は、例えば、網膜黄斑の細胞の増殖減少
、網膜黄斑の細胞の死または再編成増加(例えば、ＲＰＥ細胞)、正常生物学的機能喪失ま
たはこれらの事象の組み合わせの結果、網膜黄斑が変性するかまたは機能障害性となる、
あらゆる数の状態を意味する。黄斑変性症は、正常網膜黄斑の細胞および／または細胞外
マトリックスの組織構造の完全性喪失および／または網膜黄斑の細胞の機能喪失となる。
黄斑変性症関連障害の例は、ＡＭＤ、ノースカロライナ黄斑ジストロフィー、ソースビー
眼底変性症、シュタルガルト病、パターンジストロフィー、ベスト病、優性ドルーゼンお
よびMalattia Leventinese(放射状ドルーゼン)を含む。本用語はまた網膜黄斑機能不全お
よび／または変性前または後に起こる黄斑外変化も包含する。それゆえに、用語“黄斑変
性症関連障害”は、また網膜黄斑の完全性または機能を変化または障害させる状態(例え
ば、ＲＰＥまたはブルッフ膜への損傷)を広く含む。例えば、本用語は網膜剥離、脈絡網
膜性変性症、網膜変性症、光受容体変性、ＲＰＥ変性、ムコ多糖症、杆体錐体ジストロフ
ィー、錐体杆体ジストロフィーおよび錐体変性を含む。
用語“補体成分”、“補体タンパク質”または“補体成分タンパク質”は、補体系の活
性化に関与する分子を意味する。古典的経路成分は、例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、
Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９およびＣ５ｂ−９複合体(膜侵襲複合
体：ＭＡＣ)を含む。代替経路成分は、例えば、因子Ｂ、因子Ｄ、因子Ｈ、因子Ｉおよび
プロパージンを含む。
用語“補体経路により制御される細胞活動”は、Ｃ５ｂ−９攻撃複合体、血管透過性変
化、平滑筋細胞収縮および遊走、Ｔ細胞増殖、免疫粘着性、樹状細胞、単球、顆粒球およ
び血小板の凝集、好中球(ＰＭＮ)およびマクロファージの食作用、遊走および活性化に由
来する細胞損傷を含む。
さらに、補体経路の活性は、補体経路の副産物が関与する炎症誘発性応答の増加をもた
らす。補体経路の活性化と関連する障害は腎炎、喘息、再灌流傷害、血液透析、リウマチ
性関節炎、全身性狼瘡、乾癬、多発性硬化症、移植、アルツハイマー病、ａＨＵＳ、ＭＰ
ＧＮ IIまたは何らかの他の補体介在疾患を含む。黄斑変性症と関連する障害は、ＡＭＤ
、ノースカロライナ黄斑ジストロフィー、ソースビー眼底変性症、シュタルガルト病、パ
ターンジストロフィー、ベスト病、優性ドルーゼンおよびMalattia Leventinese(放射状
ドルーゼン)、網膜黄斑の機能不全および／または変性の前または後に起こる黄斑外変化
、網膜剥離、脈絡網膜性変性症、網膜変性症、光受容体変性、ＲＰＥ変性、ムコ多糖症、
杆体錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィーおよび錐体変性を含む。
用語“キメラ抗体”は、(ａ)定常領域またはその部分が抗原結合部位(可変領域)が異な
る別のクラス、エフェクター機能および／または種の定常領域またはキメラ抗体に新規特
性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、増殖因子、薬物などと
結合するように変更され、置き換えられまたは交換されている；または(ｂ)可変領域また
はその部分が異なるまたは変更された抗原特異性を有する可変領域に変更され、置き換え
られまたは交換されている抗体分子を意味する。例えば、マウス抗体を、その定常領域を
ヒト免疫グロブリン由来定常領域で置き換えることにより修飾できる。ヒト定常領域での
置換により、キメラ抗体は抗原認識におけるその特異性特異性を維持しながら、元のマウ
ス抗体と比較してヒトにおける抗原性が減少している。
用語“Ｐ因子タンパク質”または“Ｐ因子抗原”または“Ｐ因子”は同義に使用し、種
々の種のＰ因子タンパク質を意味する。例えば、ヒトＰ因子は表１：配列番号４０１に示
す配列を有する。ヒトＰ因子は、Complement Tech, Tyler, TXから得ることができる。カ
ニクイザルＰ因子はカニクイザル血清から精製できる(Nakano et al., (1986) J Immunol
Methods 90:77-83から適用させた方法)。他の種由来のＰ因子タンパク質の例を表１、配
列番号４０２、４０３、４０４または４０５に示し、Ｐ因子タンパク質結合ドメインおよ
びフラグメント(例えば：配列番号４０６、４０７または４０８)も同様である。Ｐ因子は
当分野で“プロパージン”としても知られる。
用語“保存的修飾変異体”はアミノ酸および核酸配列のいずれにも使用する。特定の核
酸配列に関して、保存的修飾変異体は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコード
する核酸または核酸がアミノ酸配列をコードしないとき本質的に同一の配列を意味する。
遺伝暗号の縮重のため、多数の機能的に同一の核酸があるタンパク質をコードする。例え
ば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵは全てアミノ酸アラニンをコードする。
それゆえに、アラニンがコードにより特定される全ての位置で、該コドンは、コードされ
るポリペチドを変えることなく、記載した対応するコドンのいずれかに変えることができ
る。このような核酸多様性は“サイレント多様性”であり、これは、保存的修飾多様性の
１種である。ポリペチドをコードするここでの全ての核酸配列も、核酸の全ての可能なサ
イレント多様性を記載する。当業者は、核酸における各コドン(通常メチオニンの唯一の
コドンであるＡＵＧおよび通常トリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧ以外)を修飾
して、機能的に同一の分子が得られることを認識する。従って、ポリペチドをコードする
核酸の各サイレント多様性は、記載した配列の各々に潜在する。
ポリペチド配列に関して、“保存的修飾変異体”は、あるアミノ酸の化学的に類似のア
ミノ酸への置換を起こす、ポリペチド配列への個々の置換、欠失または付加を含む。機能
的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換の表は当分野で周知である。このような保存的
修飾変異体は本発明の多型変異体、種間相同体および対立遺伝子に加えられ、これらを除
外しない。次の８群は、互いに保存的置換であるアミノ酸を含む：１)アラニン(Ａ)、グ
リシン(Ｇ)；２)アスパラギン酸(Ｄ)、グルタミン酸(Ｅ)；３)アスパラギン(Ｎ)、グルタ
ミン(Ｑ)；４)アルギニン(Ｒ)、リシン(Ｋ)；５)イソロイシン(Ｉ)、ロイシン(Ｌ)、メチ
オニン(Ｍ)、バリン(Ｖ)；６)フェニルアラニン(Ｆ)、チロシン(Ｙ)、トリプトファン(Ｗ
)；７)セリン(Ｓ)、スレオニン(Ｔ)；および８)システイン(Ｃ)、メチオニン(Ｍ)(例えば
、Creighton, Proteins (1984)参照)。ある態様において、用語“保存的配列修飾”は、
該アミノ酸配列が包含される抗体の結合特徴に顕著に影響しないまたは変えないアミノ酸
修飾をいうために使用する。
用語“エピトープ”は、抗体と特異的に結合できるタンパク質決定基を意味する。エピ
トープは、通常アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面グルーピングか
ら成り、通常特異的三次元構造的特徴、ならびに特異的電荷特徴を有し得る。立体構造的
および非立体構造的エピトープは、前者へのが変性溶媒存在下で無くなるのに対し、後者
は違う点で区別される。
ここで使用する用語“ヒト抗体”は、フレームワークおよびＣＤＲ領域のいずれもヒト
起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含むなら
ば、定常領域はまたこのようなヒト配列、例えば、ヒト生殖系列配列またはヒト生殖系列
配列突然変異型またはヒトフレームワーク配列分析由来のコンセンサスフレームワーク配
列を含む抗体に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸
残基を含み得る(例えば、インビトロで無作為または部位特異的変異によりまたはインビ
ボで体細胞変異により導入された変異)。
用語“ヒトモノクローナル抗体”は、フレームワークおよびＣＤＲ領域のいずれもヒト
配列由来である可変領域を有する一結合特異性を示す抗体を意味する。一つの態様におい
て、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導
入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェ
ニックマウスから得たＢ細胞を含むハイブリドーマにより産生される。
“ヒト化”抗体は、非ヒト抗体の反応性を保持するが、ヒトで免疫原性が低い抗体であ
る。これは、例えば、非ヒトＣＤＲ領域を維持し、抗体の残りの部分をヒト対応物(すな
わち、定常領域ならびに可変領域のフレームワーク部分)で置き換えることにより達成で
きる。例えば、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855, 1984; M
orrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92, 1988; Verhoeyen et al., Science, 239:15
34-1536, 1988; Padlan, Molec. Immun., 28:489-498, 1991; and Padlan, Molec. Immun
., 31:169-217, 1994参照。ヒト工学技術の他の例は、ＵＳ５,７６６,８８６に開示するX
oma技術を含むが、これらに限定されない。
用語“同一パーセント”または“同一性パーセント”、２個以上の核酸またはポリペチ
ド配列の状況で、同じである２個以上の配列または部分配列を意味する。２個の配列は、
次の配列比較アルゴリズムの一つを使用してまたは手動整列および目視により測定して比
較ウィンドウまたは指定領域で最大一致について比較し、整列したとき、２個の配列の特
定のパーセンテージのアミノ酸残基またはヌクレオチドが同一であるならば、“実質的に
同一”である(すなわち、特定の領域にわたりまたは特定していないとき、全配列にわた
り６０％同一性、所望により６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
または９９％同一性)。所望により、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド(または１
０アミノ酸)長以上である領域、好ましくは１００〜５００または１０００またはそれ以
上のヌクレオチド(または２０、５０、２００またはそれ以上のアミノ酸)である領域にわ
たり存在する。
配列比較のために、典型的に１個の配列は参照配列として働き、それに対し試験配列を
比較する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験および参照配列をコンピュータに
入力し、必要であるならば、部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメ
ータを指定する。デフォルトプログラムパラメータを使用しても、別のパラメータを指定
してもよい。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき、参照配
列に対する試験配列の配列同一パーセントを計算する。
ここで使用する“比較ウィンドウ”は、配列を、２個の配列を最適に整列後同数の連続
位置の参照配列と比較し得る、２０〜６００、通常約５０〜約２００、さらに一般的には
約１００〜約１５０から成る群から選択される連続位置の数のいずれか一つのセグメント
も意味する。比較のための配列の整列方法は当分野で周知である。比較のための配列の最
適整列は、例えば、Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482cの局所相同性
アルゴリズム、Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443, 1970の相同性整列アルゴ
リズム、Pearson and Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444, 1988の類似性方
法の試験、これらのアルゴリズムのコンピュータでの実行(Wisconsin Genetics Software
Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WIのGAP、BESTFIT、F
ASTAおよびTFASTA)または手動整列および目視(例えば、 Brent et al., Current Protoco
ls in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (Ringbou ed., 2003)参照)により
実施できる。
配列同一性パーセントおよび配列類似度決定に適切な二つのアルゴリズムの例は、BLAS
TアルゴリズムおよびBLAST 2.0アルゴリズムであり、これらはAltschul et al., Nuc. Ac
ids Res. 25:3389-3402, 1977およびAltschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410, 199
0にそれぞれ記載されている。BLAST解析実施用ソフトウェアはNational Center for Biot
echnology Informationから公的に入手可能である。このアルゴリズムは、最初にクエリ
ー配列中の短ワード長Ｗの同定により高スコア配列対(ＨＳＰ)を同定し、これは、データ
ベース配列中の同じ長さのワードと整列したとき、ある正値閾値スコアＴとマッチするか
または充足する。Ｔは隣接ワードスコア閾値を意味する(Altschul et al., supra)。これ
らの初期隣接ワードヒットは、それらを含むより長いＨＳＰの探索を開始するための種と
して作用する。ワードヒットは累積的整列スコアが増え続ける限り、各配列に沿って両方
向に伸長する。累積的スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ(整合残基
対の報酬スコア；常に＞０)およびＮ(不整合残基のペナルティスコア；常に＜０)を使用
して計算する。アミノ酸配列については、スコア付けマトリクスを使用して、累積的スコ
アを計算する。各方向でのワードヒット伸長は、累積的整列スコアがその達成した最大価
から数Ｘ落ちたとき、累積的スコアが１個以上の負のスコアの残基整列の集積により０以
下になったときまたはいずれかの配列末端に達したとき停止する。BLASTアルゴリズムパ
ラメータＷ、ＴおよびＸは、感受性および整列速度を決定する。BLASTＮプログラム(ヌク
レオチド配列について)はデフォルトとしてワード長(Ｗ)１１、期待値(Ｅ)１０、Ｍ＝５
、Ｎ＝−４および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列について、BLASTＰプログラムは
、デフォルトとして、ワード長３および期待値(Ｅ)１０およびＢＬＯＳＵＭ６２スコア付
けマトリクス(Henikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915, 1989参
照)、整列(Ｂ)５０、期待値(Ｅ)１０、Ｍ＝５、Ｎ＝−４および両鎖の比較を使用する。
BLASTアルゴリズムはまた２配列間の類似度の統計学的分析も行う(例えば、Karlin and
Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787, 1993参照)。BLASTアルゴリズム
により提供される類似度の一つの指標は、２個のヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の
マッチが偶然起こる確率の指標を提供する、最小合計確率(Ｐ(Ｎ))である。例えば、核酸
は、試験核酸の参照核酸に対する比較における最小合計確率が約０.２未満、より好まし
くは約０.０１未満および最も好ましくは約０.００１未満であるならば、参照配列と類似
であると見なす。
２個のアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペ
ナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用する、ＡＬＩＧＮプログラム(version 2
.0)に組み込まれているE. Meyers and W. Miller, (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-
17のアルゴリズムを使用する。さらに、２個のアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Bl
ossom 62マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスおよびギャップ加重１６、１４、１２
、１０、８、６または４および長さ加重１、２、３、４、５または６を使用する、ＧＣＧ
ソフトウェアパッケージ(gcg.comのウェブサイトで入手可能)におけるＧＡＰプログラム
に組み込まれている、Needleman and Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970)アルゴ
リズムを使用して決定できる。
上記配列同一性パーセンテージ以外に、２個の核酸配列またはポリペチドが実質的に同
一との他の指標は、下記のとおり、第一核酸によりコードされるポリペチドが、第二核酸
によりコードされるポリペチドに対して惹起した抗体と免疫学的に交差反応性であること
である。それゆえに、ポリペチドは、例えば、２個のペプチドが保存的置換によってのみ
異なるとき、第二ポリペチドと典型的に実質的に同一である。２個の核酸配列が実質的に
同一である他の指標は、下記のとおり２個の分子またはそれらの補体がストリンジェント
な条件下で互いにハイブリダイズすることである。２個の核酸配列が実質的に同一である
さらに他の指標は、同じプライマーを使用して配列を増幅できることである。
用語“代替補体経路阻害”は、Ｐ因子抗体が代替補体経路活性化を妨害する能力を意味
する。具体的に、“阻害”は、ここに記載する抗Ｐ因子抗体またはそのフラグメントと接
触後、対照と比較して、細胞または対象におけるＭＡＣ形成、溶血アッセイまたはＣ３ｂ
沈着アッセイを含むここに記載する１個以上のアッセイで測定して、代替補体活性化にお
ける統計学的に有意な減少(すなわち、ｐ＜０.０５)を意味する。ここで使用する“代替
補体経路阻害”はまた、下記加齢性黄斑変性症と診断された患者における、ここに記載す
る抗Ｐ因子抗体での処置後の視覚機能または網膜解剖所見における臨床的に関連する改善
も意味する。
用語“単離抗体”は、異なる抗原性特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を
意味する(例えば、Ｐ因子と特異的に結合する単離抗体は、Ｐ因子以外の抗原と特異的に
結合する抗体を実質的に含まない)。Ｐ因子と特異的に結合する単離抗体は、しかしなが
ら、他の抗原と交差反応し得る。さらに、単離抗体は他の細胞性物質および／または化学
物質を実質的に含まない可能性がある。
用語“アイソタイプ”は、重鎖定常領域遺伝子により提供される抗体クラス(例えば、
ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のようなＩｇＧ)を意味する。アイソタイプは
また、これらのクラスの修飾されたバージョンも言い、修飾はＦｃ機能の変更、例えば、
エフェクター機能またはＦｃ受容体への結合を亢進または減少するために成されている。
ここで使用する用語“Ｋａｓｓｏｃ”または“Ｋａ”は特定の抗体−抗原相互作用の会
合速度を意味し、一方、ここで使用する用語“Ｋｄｉｓ”または“Ｋｄ”は特定の抗体−
抗原相互作用の解離速度を意味する。ここで使用する用語“ＫＤ”は、Ｋｄ対Ｋａ比(す
なわちＫｄ／Ｋａ)により得られる解離定数を言い、モル濃度(Ｍ)として表す。抗体のＫ
Ｄ値は、当分野で十分確立されている方法を使用して決定できる。抗体のＫＤを決定する
方法は、Biacore(登録商標)システムのようなバイオセンサーシステムの使用による表面
プラズモン共鳴の測定または溶液平衡滴定(ＳＥＴ)による溶液中の親和性測定を含む。
ここで使用する用語“モノクローナル抗体”または“モノクローナル抗体組成物”は、
一分子組成物の抗体分子の調製物を意味する。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピ
トープに対する一結合特異性および親和性を示す。
用語“核酸”は、ここでは用語“ポリヌクレオチド”と同義に使用し、一本鎖または二
本鎖形態のいずれかのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらの
ポリマーを意味する。本用語は、既知ヌクレオチドアナログまたは修飾された主鎖残基ま
たは結合を含み、合成され、天然に存在するおよび天然に存在せず、参照核酸と類似の結
合特性を有し、参照ヌクレオチドと類似の方法で代謝される核酸を意味する。このような
アナログの例は、ホスホロチオエート類、ホスホロアミデート類、メチルホスホネート類
、キラル−メチルホスホネート類、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸(
ＰＮＡ)を含むが、これらに限定されない。
特に断らない限り、特定の核酸配列はまたその保存的修飾変異体(例えば、コドン置換
変性)および相補的配列、ならびに明示的に示す配列も潜在的に包含する。具体的に、下
記のとおり、コドン置換変性は、１個以上の選択した(または全)コドンの３位が混合残基
および／またはデオキシイノシン残基で置換されている配列の産生により達成し得る(Bat
zer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:
2605-2608, 1985; and Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994)。
用語“操作可能に結合”は、２個以上のポリヌクレオチド(例えば、ＤＮＡ)セグメント
間の機能的関係を意味する。典型的に、本用語は転写調節配列と転写配列との機能的関連
を意味する。例えば、プロモータまたはエンハンサ配列は、適当な宿主細胞または他の発
現系においてコーディング配列の転写を刺激または調節するならば、コーディング配列に
操作可能に結合している。一般的に、転写配列に操作可能に結合しているプロモータ転写
調節配列は、転写配列と物理的に連続しており、すなわち、それらはシス作用性である。
しかしながら、ある転写調節配列、例えばエンハンサは、転写を促進するコーディング配
列に物理的に連続しているか近接している必要はない。
ここで使用する用語、“最適化”は、ヌクレオチド配列が、産生細胞または生物、一般
的に真核細胞、例えば、ピキア属の細胞、トリコデルマ属の細胞、チャイニーズハムスタ
ー卵巣細胞(ＣＨＯ)またはヒト細胞において好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコ
ードするように変えられていることを意味する。最適化ヌクレオチド配列は、“親”配列
としても知られる出発ヌクレオチド配列により元々コードされていたアミノ酸配列を完全
にまたは最大限残すように操作する。ここでの最適化配列は、哺乳動物細胞で好ましいコ
ドンを有するように改変されている。しかしながら、他の真核細胞または原核細胞におけ
るこれらの配列の最適化発現もここでは想定される。最適化ヌクレオチド配列によりコー
ドされるアミノ酸配列も最適化と呼ぶ。
用語“ポリペチド”および“タンパク質”は、ここでは同義にアミノ酸残基のポリマー
をいうために使用する。本用語は、１個以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するア
ミノ酸の人工的化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポ
リマーおよび天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用する。特に断らない限り、特定の
ポリペチド配列はまたその保存的修飾変異体を潜在的に包含する。
ここで使用する用語“組み換えヒト抗体”は、組み換え手段により製造、発現、調製ま
たは単離された全てのヒト抗体、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェ
ニックまたはトランスクロモソーマルである動物(例えば、マウス)から単離された抗体ま
たはそれらから調製されたハイブリドーマ、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿
主細胞、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、組み換え、コンビナトリア
ルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体およびヒト免疫グロブリン遺伝子の全てまた
は一部のスプライシング、他のＤＮＡ配列に対する配列決定を含む他の手段により製造、
発現、調製または単離された抗体を含む。このような組み換えヒト抗体は、フレームワー
クおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を含む。ある
態様において、しかしながら、このような組み換えヒト抗体はインビトロ突然変異誘発(
またはヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物を使用するとき、インビボ体細胞
突然変異誘発)に付し、それゆえに、組み換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸
配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連はしているものの、インビボで
ヒト抗体生殖系列レパートリーに天然に存在し得ない配列であり得る。
用語“組み換え宿主細胞”(または単に“宿主細胞”)は、組み換え発現ベクターが導入
されている細胞を意味する。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような
細胞の子孫も意味することを意図することは理解されるべきである。変異または環境的要
因により後代である修飾が起こり得るため、このような子孫は、実際親細胞とは同一では
ないかもしれないが、なおここで使用する用語“宿主細胞”の範囲には包含される。
用語“対象”はヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は全ての脊椎動物(例えば：
哺乳動物および非哺乳動物)、例えば、非ヒト霊長類(例えば：カニクイザル)、ヒツジ、
イヌ、ウシ、トリ、両生類および爬虫類を含む。示していない限り、用語“患者”または
“対象”はここでは同義に使用する。ここで使用する用語“cyno”または“カニクイザル
”はカニクイザル(Macaca fascicularis)を意味する。
ここで使用する何らかの疾患または障害(すなわち、ＡＭＤ)を“処置する”または“処
置”なる用語は、一つの態様において、疾患または障害の改善(すなわち、疾患またはそ
の症状の少なくとも一つの進行の遅延または停止または減少)を意味する。他の態様にお
いて、“処置”または“処置する”は、患者により認識し得ないものを含む身体的パラメ
ータの少なくとも１個の軽減または回復を意味する。さらに別の態様において、“処置”
または“処置する”は、疾患または障害の、身体的(例えば、認識できる症状の安定化)、
生理学的(例えば、身体的パラメータの安定化)のいずれか、または両者の調節を意味する
。さらに別の態様において、“処置”または“処置する”は、疾患または障害の予防また
は発症または進展または進行の遅延を意味する。“予防”は、ＡＭＤに関連する限り、悪
化の危険性のある患者における、下記視覚機能、網膜解剖所見および／またはＡＭＤ疾患
パラメータの悪化の予防または遅延をする何らかの作用を意味する。より具体的に、ＡＭ
Ｄの“処置”は、視覚機能および／または局所解剖所見の改善または保存をもたらす何ら
かの作用を意味する。疾患の処置および／または予防の評価方法は当分野で知られ、下に
記載する。
用語“ベクター”は、結合されている他のポリヌクレオチドの輸送ができるポリヌクレ
オチド分子をいうことを意図する。ベクターの一つのタイプは“プラスミド”であり、こ
れは、その中にさらなるＤＮＡセグメントがライゲートし得る環状二本鎖ＤＮＡループを
意味する。他のタイプのベクターはアデノ随伴ウイルスベクター(ＡＡＶまたはＡＡＶ２)
のようなウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム内にライ
ゲートし得る。ある種のベクターは、導入された宿主細胞内で自律増殖可能である(例え
ば、細菌複製開始点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター)。他のベ
クター(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター)は、宿主細胞への導入により宿主細胞の
ゲノムに統合でき、それにより宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある種のベクター
は、操作可能に結合した遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターはここでは“組
み換え発現ベクター”(または単に“発現ベクター”)と呼ぶ。一般に、組み換えＤＮＡ技
術で有用な発現ベクターはしばしばプラスミドの形態である。本明細書において、“プラ
スミド”および“ベクター”は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態で
あるため、同義に使用してよい。しかしながら、本発明は、同様の機能を有するウイルス
ベクター(例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス)
のようなこのような他の形態の発現ベクターも含むことを意図する。
Ｐ因子結合部位を記載する。図１Ａは、相対位置Ｐ因子のＴＳＲ５ドメインおよびＴＳＲ５配列フラグメント：Ａ、Ｂ、ＣおよびＤを説明する。図１Ｂは、マウス配列と整列させたヒトＴＳＲ５配列を示す。括弧はＴＳＲ５の配列フラグメントを示す。図１Ｃは、ＴＳＲ５の領域Ｂに結合した抗体を説明する。 ２０％ヒト血清における代替補体経路阻害を証明する溶血アッセイの結果を示す。 図２に記載する溶血アッセイのデータから作成したアイソボログラムを示す。 抗因子Ｐおよび抗Ｃ５抗体単独および組み合わせでの阻害を比較する、マウスポリ−ＩＣモデルにおけるマクロファージ浸潤の阻害％を示す。 図４に記載するポリ−ＩＣ結果のデータから作成したアイソボログラムを。
詳細な記載
本発明は、一部、ヒトおよびカニクイザルＰ因子の両方に特異的に結合する抗体分子の
発見に基づく。本発明は、完全ＩｇＧ形態抗体ならびにＦａｂフラグメントのようなその
抗原結合フラグメント(例えば、抗体ＮＶＳ９６５−Ｓ、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ８０
４およびＮＶＳ８０７参照)の両者に関する。
したがって、本発明は、Ｐ因子(例えば、ヒトＰ因子、カニクイザルＰ因子、ラットＰ
因子、ウサギＰ因子)と特異的に結合する抗体、医薬組成物、製造方法およびこのような
抗体および組成物の使用方法を提供する。
Ｐ因子抗体および抗原結合フラグメント
本発明は、Ｐ因子に特異的に結合する抗体を提供する。ある態様において、本発明は、
ヒト、カニクイザル、ラットおよび／またはウサギＰ因子と特異的に結合する抗体を提供
する。本発明の抗体は、実施例に記載するとおりに単離されたヒトモノクローナル抗体お
よびＦａｂｓを含むが、これらに限定されない。
本発明は、Ｐ因子タンパク質(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と特異
的に結合する抗体を提供し、ここで、抗体は配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７
、９１、１０５、１１９、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、
２３１、２４５、２５９または２７３のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。本発
明はまたＰ因子タンパク質と特異的に結合する抗体を提供し、ここで、抗体は下記表１に
挙げるＶＨ ＣＤＲのいずれか一つのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む。特に、
本発明は、Ｐ因子タンパク質と特異的に結合する抗体(例えば、ヒトおよび／またはカニ
クイザルＰ因子)を提供し、ここで、抗体は、１個、２個、３個またはそれ以上の下記表
１に挙げるＶＨ ＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲを含む(またはあるいは、
これらから成る)。
本発明は、Ｐ因子タンパク質と特異的に結合する抗体を提供し、該抗体は、配列番号８
、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１
７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０または２７４のアミノ酸配列を
有するＶＬドメインを含む。本発明はまたＰ因子タンパク質と特異的に結合する抗体(例
えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)を提供し、該抗体は、下記表１に挙げる
ＶＬ ＣＤＲのいずれか一つのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む。特に、本発明
はＰ因子タンパク質と特異的に結合する抗体(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザル
Ｐ因子)を提供し、該抗体は、１個、２個、３個またはそれ以上の下記表１に挙げるＶＬ
ＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲを含む(またはあるいは、これらから成る)
。
他の本発明の抗体は、変異されているが、なおＣＤＲ領域において表１に記載する配列
に示すＣＤＲ領域と少なくとも６０、７０、８０、８５、９０または９５％同一性を有す
るアミノ酸を含む。ある態様において、表１に記載する配列に示すＣＤＲ領域と比較した
とき、ＣＤＲ領域において１個、２個、３個、４個または５個までのアミノ酸が変異され
ている、変異体アミノ酸配列を含む。
本発明はまた、Ｐ因子タンパク質(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と
特異的に結合する抗体のＶＨ、ＶＬ、完全長重鎖および完全長軽鎖をコードする核酸配列
も提供する。このような核酸配列は、哺乳動物細胞での発現について最適化できる(例え
ば、表１は、本発明の抗体の重鎖および軽鎖の最適化核酸配列を示す)。
他の本発明の抗体は、アミノ酸またはアミノ酸をコードする核酸が変異されているが、
なお、表１に記載する配列と少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０また
は９５％同一性を有するものを含む。ある態様は、表１に記載する配列に示す可変領域と
比較して可変領域において１個、２個、３個、４個または５個までのアミノ酸が変異して
いるが、実質的に同じ抗原結合活性を維持する変異体アミノ酸配列を含む。
これらの抗体の各々がＰ因子と結合できるため、ＶＨ、ＶＬ、完全長軽鎖および完全長
重鎖配列(アミノ酸配列およびアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列)は、本発明の
他のＰ因子結合抗体を調製するために“混合および整合”させ得る。このような“混合お
よび整合”したＰ因子結合抗体を、当分野で知られた結合アッセイ(例えば、ＥＬＩＳＡ
および実施例セクションに記載する他のアッセイ)を使用して試験できる。これらの鎖を
混合および整合するとき、特定のＶＨ／ＶＬ対合からのＶＨ配列を、構造的に類似するＶ
Ｈ配列と置き換えなければならない。同様に特定の完全長重鎖／完全長軽鎖対合からの完
全長重鎖配列を、構造的に類似する完全長重鎖配列と置き換えなければならない。同様に
、特定のＶＨ／ＶＬ対合からのＶＬ配列を、構造的に類似するＶＬ配列と置き換えなけれ
ばならない。同様に特定の完全長重鎖／完全長軽鎖対合からの完全長軽鎖配列を、構造的
に類似する完全長軽鎖配列と置き換えなければならない。従って、一つの面において、本
発明は、配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、１３３、
１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９および２７
３から成る群から選択される重鎖可変ドメインおよび配列番号８、２２、３６、５０、６
４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、
２１８、２３２、２４６、２６０および２７４から成る群から選択されるアミノ酸配列を
含む軽鎖可変ドメインを有する単離抗体またはその抗原結合領域を提供し、ここで、抗体
はＰ因子(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と特異的に結合する
他の面において、本発明は、(ｉ)配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、
１０７、１２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、
２４７、２６１および２７５から成る群から選択される哺乳動物細胞での発現について最
適化されているアミノ酸配列を含む完全長重鎖および配列番号１０、２４、３８、５２、
６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６
、２２０、２３４、２４８、２６２および２７６から成る群から選択される哺乳動物細胞
での発現について最適化されているアミノ酸配列を含む完全長軽鎖を有する単離抗体；ま
たは(ii)その抗原結合部分を含む機能的タンパク質を提供する。
ここで使用する用語“相補性決定領域”および“ＣＤＲ”は、抗原特異性および結合親
和性に関与する抗体可変領域内のアミノ酸配列を意味する。一般に、各重鎖可変領域に３
個のＣＤＲ(ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３)および各軽鎖可変領域に３個のＣＤＲ
(ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３)がある。
あるＣＤＲの厳密なアミノ酸配列境界は、Kabat et al. (1991), “Sequences of Prot
eins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Instit
utes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” numbering scheme), Al-Lazikani et al., (
1997) JMB 273, 927-948 (“Chothia” numbering scheme)に記載のものを含む、多くの
周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定できる。
例えば、Kabat下で、重鎖可変ドメイン(ＶＨ)のＣＤＲアミノ酸残基は３１−３５(ＨＣ
ＤＲ１)、５０−６５(ＨＣＤＲ２)および９５−１０２(ＨＣＤＲ３)と番号付けられ；軽
鎖可変ドメイン(ＶＬ)のＣＤＲアミノ酸残基は２４−３４(ＬＣＤＲ１)、５０−５６(Ｌ
ＣＤＲ２)および８９−９７(ＬＣＤＲ３)と番号付けられる。Chothia下、ＶＨのＣＤＲア
ミノ酸は２６−３２(ＨＣＤＲ１)、５２−５６(ＨＣＤＲ２)および９５−１０２(ＨＣＤ
Ｒ３)と番号付けられ；ＶＬのアミノ酸残基は２６−３２(ＬＣＤＲ１)、５０−５２(ＬＣ
ＤＲ２)および９１−９６(ＬＣＤＲ３)と番号付けられる。KabatおよびChothiaのＣＤＲ
定義を組み合わせて、ＣＤＲは、ヒトＶＨにおいてアミノ酸残基２６−３５(ＨＣＤＲ１)
、５０−６５(ＨＣＤＲ２)および９５−１０２(ＨＣＤＲ３)およびヒトＶＬにおいてアミ
ノ酸残基２４−３４(ＬＣＤＲ１)、５０−５６(ＬＣＤＲ２)および８９−９７(ＬＣＤＲ
３)から成る。
他の面において、本発明は、表１に記載する重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および
ＣＤＲ３またはこれらの組み合わせを含むＰ因子結合抗体を提供する。抗体のＶＨ ＣＤ
Ｒ１のアミノ酸配列は配列番号１、１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３
、１２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、２２５、２３９、２５３
または２６７に示す。抗体のＶＨ ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２、１６、３０、
４４、５８、７２、８６、１００、１１４、１２８、１４２、１５６、１７０、１８４、
１９８、２１２、２２６、２４０、２５４または２６８に示す。抗体のＶＨ ＣＤＲ３の
アミノ酸配列は配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５、１
２９、１４３、１５７、１７１、１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５また
は２６９に示す。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号４、１８、３２、４６
、６０、７４、８８、１０２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１８６、２０
０、２１４、２２８、２４２、２５６または２７０に示す。抗体のＶＬ ＣＤＲ２のアミ
ノ酸配列は配列番号５、１９、３３、４７、６１、７５、８９、１０３、１１７、１３１
、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、２１５、２２９、２４３、２５７または２
７１に示す。抗体のＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号６、２０、３４、４８、６
２、７６、９０、１０４、１１８、１３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２、
２１６、２３０、２４４、２５８または２７２に示す。これらのＣＤＲ領域はKabatシス
テムを使用して描かれる。
あるいは、Chothiaシステム(Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948)を使用し
て規定して、抗体のＶＨ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号２８１、２８７、２９３、
２９９、３０５、３１１、３１７、３２３、３２９、３３５、３４１、３４７、３５３、
３５９、３６５、３７１、３７７、３８３、３８９または３９５に示す。抗体のＶＨ Ｃ
ＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２８２、２８８、２９４、３００、３０６、３１２、３
１８、３２４、３３０、３３６、３４２、３４８、３５４、３６０、３６６、３７２、３
７８、３８４、３９０または３９６に示す。抗体のＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列
番号２８３、２８９、２９５、３０１、３０７、３１３、３１９、３２５、３３１、３３
７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１または
３９７に示す。抗体のＶＬ ＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号２８４、２９０、２９６
、３０２、３０８、３１４、３２０、３２６、３３２、３３８、３４４、３５０、３５６
、３６２、３６８、３７４、３８０、３８６、３９２または３９８に示す。抗体のＶＬ
ＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号２８５、２９１、２９７、３０３、３０９、３１５、
３２１、３２７、３３３、３３９、３４５、３５１、３５７、３６３、３６９、３７５、
３８１、３８７、３９３または３９９に示す。抗体のＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列は配
列番号２８６、２９２、２９８、３０４、３１０、３１６、３２２、３２８、３３４、３
４０、３４６、３５２、３５８、３６４、３７０、３７６、３８２、３８８、３９４また
は４００に示す。
これらの抗体の各々がＰ因子と結合し、抗原結合特異性が主にＣＤＲ１、２および３領
域により提供されることを考慮して、ＶＨ ＣＤＲ１、２および３配列およびＶＬ ＣＤ
Ｒ１、２および３配列を“混合および整合”させ得る(すなわち、異なる抗体のＣＤＲを
混合および整合できるが、各抗体は、好ましくは本発明の他ののＰ因子結合分子を調製す
るＶＨ ＣＤＲ１、２および３およびＶＬ ＣＤＲ１、２および３を含む)。このような
“混合および整合”したＰ因子結合抗体を、当分野で知られ、実施例に記載した結合アッ
セイ(例えば、ＥＬＩＳＡｓ、ＳＥＴ、Biacore)を使用して試験できる。ＶＨ ＣＤＲ配
列を混合および整合するとき、特定のＶＨ配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／または
ＣＤＲ３配列を構造的に類似するＣＤＲ配列と置き換えなければならない。同様にＶＬ
ＣＤＲ配列を混合および整合するとき、特定のＶＬ配列からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および
／またはＣＤＲ３配列を、構造的に類似するＣＤＲ配列置き換えなければならない。新規
ＶＨおよびＶＬ配列を、本発明のモノクローナル抗体についてここに示すＣＤＲ配列から
の構造的に類似する配列で１個以上のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を置換す
ることにより調製できることは当業者には認識される。前記に加えて、一つの態様におい
て、ここに記載する抗体の抗原結合フラグメントは、ＶＨ ＣＤＲ１、２および３または
ＶＬ ＣＤＲ １、２および３を含むことができ、ここで、フラグメントは、一可変ドメ
インとしてＰ因子に結合する。
本発明のある態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、表１に記載する
Ｆａｂｓの重鎖および軽鎖配列を有し得る。より具体的に、抗体またはその抗原結合フラ
グメントは、Ｆａｂ ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５、ＮＶ
Ｓ９６６、ＮＶＳ９６７、ＮＶＳ８０５、ＮＶＳ８０６、ＮＶＳ８０７、ＮＶＳ８０８、
ＮＶＳ８０９、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ９６２−Ｑ、ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａ、ＮＶＳ
９６２−Ｇ、ＮＶＳ９６２−Ｔ、ＮＶＳ９６５−Ｓ、ＮＶＳ９６５−ＴまたはＮＶＳ９６
５−Ｑの重および軽配列を有し得る。
本発明の他の態様において、Ｐ因子と特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメン
トは、Kabatにより規定され、表１に記載する重鎖可変領域ＣＤＲ１、重鎖可変領域ＣＤ
Ｒ２、重鎖可変領域ＣＤＲ３、軽鎖可変領域ＣＤＲ１、軽鎖可変領域ＣＤＲ２および軽鎖
可変領域ＣＤＲ３を含む。本発明のさらに別の態様において、Ｐ因子と特異的に結合する
抗体または抗原結合フラグメントは、Chothiaにより規定され、表１に記載する重鎖可変
領域ＣＤＲ１、重鎖可変領域ＣＤＲ２、重鎖可変領域ＣＤＲ３、軽鎖可変領域ＣＤＲ１、
軽鎖可変領域ＣＤＲ２および軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含む。
具体的態様において、本発明は、配列番号１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２の重
鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号４の軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３
を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列
番号１５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７
の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１９の軽鎖可
変領域ＣＤＲ２；および配列番号２０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の
具体的態様において、本発明は、配列番号２９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０の
重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３２の軽鎖可変
領域ＣＤＲ１；配列番号３３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４を含むＰ因子
と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号４３の重
鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号４５の重鎖可変領
域ＣＤＲ３；配列番号４６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号４７の軽鎖可変領域ＣＤＲ
２；および配列番号４８を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様に
おいて、本発明は、配列番号５７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号５８の重鎖可変領域
ＣＤＲ２；配列番号５９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号６０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１
；配列番号６１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号６２を含むＰ因子と特異的に結
合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号７１の重鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号７２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号７３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；
配列番号７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配
列番号７６を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発
明は、配列番号８５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配
列番号８７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号８８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号８
９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号９０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を
含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号９９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列
番号１００の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１０１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号
１０２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１０３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番
号１０４を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明
は、配列番号１１３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１１４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号１１５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１１６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列
番号１１７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１１８を含むＰ因子と特異的に結合
する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号１２７の重鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号１２８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１２９の重鎖可変領域ＣＤＲ
３；配列番号１３０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１３１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；
および配列番号１３２を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様にお
いて、本発明は、配列番号１４１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１４２の重鎖可変領
域ＣＤＲ２；配列番号１４３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１４４の軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号１４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１４６を含むＰ因子と
特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号１５５の重
鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１５７の重鎖可
変領域ＣＤＲ３；配列番号１５８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１５９の軽鎖可変領
域ＣＤＲ２；および配列番号１６０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具
体的態様において、本発明は、配列番号１６９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７０
の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１７１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１７２の軽
鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１７４を
含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番
号１８３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１
８５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号１８６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号１８７
の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号１８８を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を
含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号１９７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配
列番号１９８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号１９９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番
号２００の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２０１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列
番号２０２を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発
明は、配列番号２１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２１２の重鎖可変領域ＣＤＲ２
；配列番号２１３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２１４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配
列番号２１５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２１６を含むＰ因子と特異的に結
合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号２２５の重鎖可変領域
ＣＤＲ１；配列番号２２６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２２７の重鎖可変領域ＣＤ
Ｒ３；配列番号２２８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２２９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２
；および配列番号２３０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様に
おいて、本発明は、配列番号２３９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２４０の重鎖可変
領域ＣＤＲ２；配列番号２４１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２４２の軽鎖可変領域
ＣＤＲ１；配列番号２４３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２４４を含むＰ因子
と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号２５３の
重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２５５の重鎖
可変領域ＣＤＲ３；配列番号２５６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２５７の軽鎖可変
領域ＣＤＲ２；および配列番号２５８を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の
具体的態様において、本発明は、配列番号２６７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２６
８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２６９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２７０の
軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２７１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２７１
を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。
他の具体的態様において、本発明は、配列番号２８１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番
号２８２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２８３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２
８４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号
２８６を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は
、配列番号２８７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２８８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配
列番号２８９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号２９０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番
号２９１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号２９２を含むＰ因子と特異的に結合す
る抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号２９３の重鎖可変領域ＣＤ
Ｒ１；配列番号２９４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号２９５の重鎖可変領域ＣＤＲ３
；配列番号２９６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号２９７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；お
よび配列番号２９８を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様におい
て、本発明は、配列番号２９９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３００の重鎖可変領域
ＣＤＲ２；配列番号３０１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３０２の軽鎖可変領域ＣＤ
Ｒ１；配列番号３０３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３０４を含むＰ因子と特
異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３０５の重鎖
可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３０７の重鎖可変
領域ＣＤＲ３；配列番号３０８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３０９の軽鎖可変領域
ＣＤＲ２；および配列番号３１０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体
的態様において、本発明は、配列番号３１１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１２の
重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３１４の軽鎖
可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３１６を含
むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号
３１７の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３１８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３１
９の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３２０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２１の
軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３２２を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含
む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３２３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列
番号３２４の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３２５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号
３２６の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３２７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番
号３２８を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明
は、配列番号３２９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３３０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；
配列番号３３１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３３２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列
番号３３３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３３４を含むＰ因子と特異的に結合
する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３３５の重鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号３３６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３３７の重鎖可変領域ＣＤＲ
３；配列番号３３８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３３９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；
および配列番号３４０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様にお
いて、本発明は、配列番号３４１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４２の重鎖可変領
域ＣＤＲ２；配列番号３４３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３４４の軽鎖可変領域Ｃ
ＤＲ１；配列番号３４５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３４６を含むＰ因子と
特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３４７の重
鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３４８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３４９の重鎖可
変領域ＣＤＲ３；配列番号３５０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５１の軽鎖可変領
域ＣＤＲ２；および配列番号３５２を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具
体的態様において、本発明は、配列番号３５３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５４
の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３５５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３５６の軽
鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３５７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３５８を
含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番
号３５９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３
６１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３６２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６３
の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３６４を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を
含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３６５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配
列番号３６６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３６７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番
号３６８の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３６９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列
番号３７０を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発
明は、配列番号３７１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３７２の重鎖可変領域ＣＤＲ２
；配列番号３７３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配
列番号３７５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３７６を含むＰ因子と特異的に結
合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３７７の重鎖可変領域
ＣＤＲ１；配列番号３７８の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３７９の重鎖可変領域ＣＤ
Ｒ３；配列番号３８０の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８１の軽鎖可変領域ＣＤＲ２
；および配列番号３８２を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様に
おいて、本発明は、配列番号３８３の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３８４の重鎖可変
領域ＣＤＲ２；配列番号３８５の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３８６の軽鎖可変領域
ＣＤＲ１；配列番号３８７の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号３８８を含むＰ因子
と特異的に結合する抗体を含む。他の具体的態様において、本発明は、配列番号３８９の
重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９１の重鎖
可変領域ＣＤＲ３；配列番号３９２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９３の軽鎖可変
領域ＣＤＲ２；および配列番号３９４を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。他の
具体的態様において、本発明は、配列番号３９５の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９
６の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号３９７の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号３９８の
軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号３９９の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号４００
を含むＰ因子と特異的に結合する抗体を含む。
ある態様において、本発明は、表１に記載するＰ因子と特異的に結合する抗体または抗
原結合フラグメントを含む。好ましい態様において、Ｐ因子と結合する抗体または抗原結
合フラグメントはＦａｂ ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５、
ＮＶＳ９６６、ＮＶＳ９６７、ＮＶＳ８０４、ＮＶＳ８０５、ＮＶＳ８０６、ＮＶＳ８０
７、ＮＶＳ８０８、ＮＶＳ８０９、ＮＶＳ９６２−Ｓ、ＮＶＳ９６２−Ｑ、ＮＶＳ９６２
−Ｇ、ＮＶＳ９６２−Ｔ、ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａ、ＮＶＳ９６５−Ｔ、ＮＶＳ９６５−
ＱまたはＮＶＳ９６５−Ｓである。
ここで使用するヒト抗体は、抗体の可変領域または完全長鎖がヒト生殖系列免疫グロブ
リン遺伝子を使用する系から得られるならば、特定の生殖系列配列の“産物である”また
はこれに“由来する”重鎖または軽鎖可変領域または完全長重鎖または軽鎖を含む。この
ような系は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを目的の抗
原で免疫化するかまたはファージ上に示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーを
目的の抗原についてスクリーニングすることを含む。ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の
“産物である”またはこれに“由来する”ヒト抗体は、それ自体、ヒト抗体のアミノ酸配
列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列と配列が最も
近い(すなわち、最大％同一性)ヒト生殖系列免疫グロブリン配列を選択することにより同
定できる。特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列の“産物である”またはこれに“由来
する”ヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞変異または部位特異的変異の意図的導
入により、生殖系列配列と比較してアミノ酸差異を有し得る。しかしながら、ＶＨまたは
ＶＬフレームワーク領域において、選択したヒト抗体は、典型的に、ヒト生殖系列免疫グ
ロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一
であり、他種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列(例えば、マウス生殖系列配列)と比
較したとき、ヒト抗体をヒトと同定するアミノ酸残基を含む。ある場合において、ヒト抗
体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と、アミノ酸配列
が少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または少なくとも９５％またはさらに少な
くとも９６％、９７％、９８％または９９％同一であり得る。典型的に、組み換えヒト抗
体は、ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域においてにおいて、ヒト生殖系列免疫グロブリ
ン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列と１０個を超えないアミノ酸差異を示す。ある
場合において、ヒト抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸
配列と５個を超えないまたは４個、３個、２個または１個を超えないアミノ酸差異を示し
得る。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子の例は、下記可変ドメイン生殖系列フラグメン
ト、ならびにＤＰ４７およびＤＰＫ９を含む。
相同抗体
さらに別の態様において、本発明は、表１に記載する配列と相同であるアミノ酸配列を
含む抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、抗体はＰ因子タンパク質(例えば、
ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と結合し、所望の表１に記載する抗体の機能的
特性を維持する。
例えば、本発明は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む単離抗体またはそ
の機能的抗原結合フラグメントを提供し、ここで、重鎖可変ドメインは配列番号７、２１
、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、１３３、１４７、１６１、１７５、
１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９および２７３から成る群から選択され
るアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一のア
ミノ酸配列を含み；軽鎖可変ドメインは配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９
２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３
２、２４６、２６０および２７４から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８
０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み；そして
、抗体はＰ因子(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と特異的に結合する。
他の態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、表１に示す配列と５０％
、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一
であり得る。他の態様において、ＶＨおよび／またはＶＬアミノ酸配列は、１、２、３、
４または５アミノ酸位置のアミノ酸置換以外同一であり得る。表１に記載するＶＨおよび
ＶＬ領域のものと高い(すなわち、８０％以上)同一性を有するＶＨおよびＶＬ領域を有す
る抗体は、それぞれ配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９
、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９
または２７３および配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０
、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０
または２７４をコードする核酸分子の突然変異誘発(例えば、部位特異的またはＰＣＲ介
在突然変異誘発)、その後のここに記載する機能的アッセイを使用するコードされた改変
された抗体の残存機能についての試験により得ることができる。
他の態様において、完全長重鎖および／または完全長軽鎖アミノ酸配列は、表１に示す
配列と５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％また
は９９％同一であり得る。配列番号：９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７
、１２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７
、２６１または２７５のいずれかの完全長重鎖および配列番号１０、２４、３８、５２、
６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６
、２２０、２３４、２４８、２６２または２７６のいずれかの完全長軽鎖と高い(すなわ
ち、８０％以上)同一性を有する完全長重鎖および完全長軽鎖を有する抗体は、このよう
なポリペチドをコードする核酸分子の突然変異誘発(例えば、部位特異的またはＰＣＲ介
在突然変異誘発)、その後のここに記載する機能的アッセイを使用するコードされた改変
された抗体の残存機能についての試験により得ることができる。
他の態様において、完全長重鎖および／または完全長軽鎖ヌクレオチド配列は、表１に
示す配列と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９
９％同一であり得る。
他の態様において、重鎖の可変領域および／または軽鎖の可変領域のヌクレオチド配列
は、表１に示す配列と６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％または９９％同一であり得る。
ここで使用する、２配列間の同一性パーセントは、２配列の最適整列のために導入する
必要がある、ギャップ数およびギャップ長を考慮に入れた、これらの配列により共有され
る同一位置の数の関数(すなわち、％同一性は同一位置数／位置の総数×１００である)で
ある。２配列間の配列比較および同一性パーセント決定は、下記非限定的例に記載する数
学的アルゴリズムを使用して達成できる。
これに加えてまたはこれ以外に、本発明のタンパク質配列は、さらに、例えば、関連配
列を同定するための、公的データベースに対する検索を実施するための“クエリー配列”
として使用できる。例えば、このような検索はAltschul, et al., 1990 J.Mol. Biol. 21
5:403-10のBLASTプログラム(version 2.0)を使用して実施できる。
保存的修飾を有する抗体
ある態様において、本発明の抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重
鎖可変領域およびＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を有し、こ
こで、これらのＣＤＲ配列の１個以上がここに記載する抗体またはその保存的修飾に基づ
く特定のアミノ酸配列を有し、該抗体は、本発明のＰ因子結合抗体の所望の機能的特性を
維持する。したがって、本発明は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可
変領域およびＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む単離抗体
またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、重鎖可変領域ＣＤＲ１アミノ酸配列
は配列番号１、１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１２７、１４１、
１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、２２５、２３９、２５３および２６７および
その保存的修飾体からなる群から選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ２アミノ酸配列は配列番
号２、１６、３０、４４、５８、７２、８６、１００、１１４、１２８、１４２、１５６
、１７０、１８４、１９８、２１２、２２６、２４０、２５４および２６８およびその保
存的修飾体からなる群から選択され；重鎖可変領域ＣＤＲ３アミノ酸配列は配列番号３、
１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５、１２９、１４３、１５７、１７
１、１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５および２６９およびその保存的修
飾体からなる群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ１アミノ酸配列は配列番号４、１８、
３２、４６、６０、７４、８８、１０２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１
８６、２００、２１４、２２８、２４２、２５６および２７０およびその保存的修飾体か
らなる群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ２アミノ酸配列は配列番号５、１９、３３、
４７、６１、７５、８９、１０３、１１７、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、
２０１、２１５、２２９、２４３、２５７および２７１およびその保存的修飾体からなる
群から選択され；軽鎖可変領域ＣＤＲ３アミノ酸配列は配列番号６、２０、３４、４８、
６２、７６、９０、１０４、１１８、１３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２
、２１６、２３０、２４４、２５８および２７２およびその保存的修飾体からなる群から
選択され；そして抗体またはその抗原結合フラグメントはＰ因子に特異的に結合する。
他の態様において、本発明の抗体は、哺乳動物細胞での発現について最適化され、完全
長重鎖配列および完全長軽鎖配列を有し、ここで、これらの配列の１個以上はここに記載
する抗体に基づく特定したアミノ酸配列またはその保存的修飾体を有し、該抗体は、本発
明のＰ因子結合抗体の所望の機能的特性を維持する。したがって、本発明は、完全長重鎖
および完全長軽鎖から成る哺乳動物細胞での発現について最適化された単離抗体を提供し
、ここで、完全長重鎖は配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１
２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２
６１および２７５およびその保存的修飾体から成る群から選択されるアミノ酸配列を有し
；完全長軽鎖は配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、
１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２お
よび２７６およびその保存的修飾体から成る群から選択されるアミノ酸配列を有し；そし
て、抗体はＰ因子(例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＰ因子)と特異的に結合する
。
同じエピトープに結合する抗体
本発明は、表１に記載するＰ因子結合抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する
。それゆえに、さらなる抗体は、Ｐ因子結合アッセイにおいて本発明の他の抗体と交差競
合(例えば、統計学的に有意な方法での結合の競合的阻害)する能力に基づき同定できる(
例えば実施例に記載のもの)。試験抗体が本発明の抗体のＰ因子タンパク質への結合を阻
害する能力は、試験抗体がＰ因子への結合について抗体と競合できる能力を証明し、この
ような抗体は、理論に縛られないが、Ｐ因子タンパク質上の競合する抗体と同じまたは関
連(例えば、構造的に類似または空間的に近位)エピトープに結合する。ある態様において
、Ｐ因子上の本発明の抗体と同じエピトープに結合する抗体はヒトモノクローナル抗体で
ある。このようなヒトモノクローナル抗体はここに記載するとおり製造および単離できる
。ここで使用する抗体は、等モル濃度の競合抗体存在下で、競合抗体が、本発明の抗体ま
たは抗原結合フラグメントのＰ因子結合を５０％を超えて阻害するとき、結合について“
競合”する。
他の態様において、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、Ｐ因子のトロンボス
ポンジンタイプ５反復(ＴＳＲ５)ドメイン(配列番号４０６)と結合する。他の態様におい
て、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４０７を含むＰ因子ＴＳＲ５
ドメインの領域と結合する。さらに他の態様において、該領域は配列番号４０８を含む。
本発明の他の態様において、単離抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４０７
を含むエピトープと結合し、他の態様において、エピトープは配列番号４０８を含む。本
発明の他の態様において、抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号４０７のペプチ
ドと結合し、さらに他の態様において、Ｐ因子エピトープは配列番号４０８を含む。
操作および修飾抗体
本発明の抗体は、さらに、ここに示すＶＨおよび／またはＶＬ配列の１個以上を有する
抗体を出発物質として使用して、修飾抗体を設計し、その修飾抗体は出発抗体から変更さ
れた特性を有し得る。抗体は、可変領域の一方または両方(すなわち、ＶＨおよび／また
はＶＬ)内、例えば１個以上のＣＤＲ領域および／または１個以上のフレームワーク領域
内の１個以上の残基の修飾により操作し得る。これに加えてまたはこれとは別に、抗体は
、例えば抗体のエフェクター機能を変更するために、定常領域内の残基の修飾により操作
してよい。
実施できる可変領域操作の一つのタイプはＣＤＲ移植である。抗体は、標的抗原と主に
６個の重鎖および軽鎖相補性決定領域(ＣＤＲ)に位置するアミノ酸残基を介して相互作用
する。この理由のため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ以外の配列よりも抗体毎によ
り多様性である。ＣＤＲ配列がほとんどの抗体−抗原相互作用を担うため、異なる特性を
有する異なる抗体由来のフレームワーク配列に移植した特異的天然に存在する抗体由来の
ＣＤＲ配列を含む発現ベクターの構築により、特異的な天然に存在する抗体の特性を模倣
する組み換え抗体を発現させることが可能である(例えば、Riechmann, L. et al., 1998
Nature 332:323-327;Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522-525;Queen, C. et al., 1
989 Proc. Natl. Acad., U.S.A. 86:10029-10033；Winterの米国特許番号５,２２５,５３
９およびQueen et al.の米国特許番号５,５３０,１０１；５,５８５,０８９；５,６９３,
７６２および６,１８０,３７０参照)
したがって、本発明の他の態様は、それぞれ配列番号１、１５、２９、４３、５７、７
１、８５、９９、１１３、１２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、
２２５、２３９、２５３および２６７から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＣ
ＤＲ１配列；配列番号２、１６、３０、４４、５８、７２、８６、１００、１１４、１２
８、１４２、１５６、１７０、１８４、１９８、２１２、２２６、２４０、２５４および
２６８から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ２配列；配列番号３、１７
、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５、１２９、１４３、１５７、１７１、
１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５および２６９から成る群から選択され
るアミノ酸配列を有するＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域；およびそれぞれ配列番号４、
１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７
２、１８６、２００、２１４、２２８、２４２、２５６および２７０から成る群から選択
されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列；配列番号５、１９、３３、４７、６１、７５
、８９、１０３、１１７、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、２１５、
２２９、２４３、２５７および２７１から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＣ
ＤＲ２配列；および配列番号６、２０、３４、４８、６２、７６、９０、１０４、１１８
、１３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２、２１６、２３０、２４４、２５８
および２７２から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３配列を有する軽鎖
可変領域を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。それゆえに、このよ
うな抗体はモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ配列を含むが、これらの抗体と
異なるフレームワーク配列を含み得る
あるいは、本発明の他の態様は、それぞれ配列番号２８１、２８７、２９３、２９９、
３０５、３１１、３１７、３２３、３２９、３３５、３４１、３４７、３５３、３５９、
３６５、３７１、３７７、３８３、３８９および３９５から成る群から選択されるアミノ
酸配列を有するＣＤＲ１配列；配列番号２８２、２８８、２９４、３００、３０６、３１
２、３１８、３２４、３３０、３３６、３４２、３４８、３５４、３６０、３６６、３７
２、３７８、３８４、３９０および３９６から成る群から選択されるアミノ酸配列を有す
るＣＤＲ２配列；配列番号２８３、２８９、２９５、３０１、３０７、３１３、３１９、
３２５、３３１、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、
３８５、３９１および３９７から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤＲ３配
列を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；およびそれぞれから成る群から選択される
アミノ酸配列を有するＣＤＲ１配列；配列番号２８５、２９１、２９７、３０３、３０９
、３１５、３２１、３２７、３３３、３３９、３４５、３５１、３５７、３６３、３６９
、３７５、３８１、３８７、３９３および３９９から成る群から選択されるアミノ酸配列
を有するＣＤＲ２配列；および配列番号２８６、２９２、２９８、３０４、３１０、３１
６、３２２、３２８、３３４、３４０、３４６、３５２、３５８、３６４、３７０、３７
６、３８２、３８８、３９４および４００から成る群から選択されるアミノ酸配列を有す
るＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域を含む単離抗体またはその抗原結合フラグメントに
関する。それゆえに、このような抗体はモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ配
列を含むが、これらの抗体と異なるフレームワーク配列を含み得る
このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公的ＤＮＡデータベ
ースまたは公表された刊行物から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領
域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は“VBase”ヒト生殖系列配列データベース(mrc-cpe.cam.
ac.uk/vbaseのワールドワイドウェブから入手可能)、ならびにKabat, E. A., et al., 19
91 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Departme
nt of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M.,
et al., 1992 J. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Im
munol. 24:827-836に見ることができ；これらの内容は、本明細書に引用により明示的に
包含させる。
本発明の抗体で使用するためのフレームワーク配列の例は、選択した本発明の抗体によ
り使用されるフレームワーク配列、例えば、本発明のモノクローナル抗体により使用され
るコンセンサス配列および／またはフレームワーク配列と構造的に類似するものである。
ＶＨ ＣＤＲ１、２および３配列およびＶＬ ＣＤＲ１、２および３配列をフレームワー
ク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子に見られるものと同一配列を有するフレ
ームワーク領域に移植できまたはＣＤＲ配列を生殖系列配列と比較して１個以上の変異を
含むフレームワーク領域に移植できる。例えば、ある場合には抗体の抗原結合能力の維持
または亢進のためにフレームワーク領域内の残基を変異させることが有利であることが判
明している(例えば、Queen et al.の米国特許番号５,５３０,１０１；５,５８５,０８９
；５,６９３,７６２および６,１８０,３７０参照)。ここに記載する抗体および抗原結合
フラグメントを建設するためのスキャフォールドとして利用できるフレームワークは、Ｖ
Ｈ１Ａ、ＶＨ１Ｂ、ＶＨ３、Ｖｋ１、Ｖｌ２およびＶｋ２を含むが、これらに限定されな
い。さらなるフレームワークは当分野で知られ、例えば、vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/inde
x.php?&MMN_position=1:1のワールドワイドウェブ上のvBaseデータベースに見ることがで
きる。
したがって、本発明の態様は、配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１
０５、１１９、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２
４５、２５９および２７３から成る群から選択されるアミノ酸配列またはこのような配列
のフレームワーク領域内に１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失また
は付加を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域およびさらに配列番号８、２２、３６、
５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、
２０４、２１８、２３２、２４６、２６０および２７４から成る群から選択されるアミノ
酸配列またはこのような配列のフレームワーク領域内に１個、２個、３個、４個または５
個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む単
離Ｐ因子結合抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
他のタイプの可変領域修飾は、“親和性成熟”として知られる、ＶＨおよび／またはＶ
Ｌ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異させ、それ
により目的の抗体の１個以上の結合特性(例えば、親和性)を改善させることである。部位
特異的突然変異誘発またはＰＣＲ介在突然変異誘発を変異の導入のために行ってよく、目
的の抗体結合または他の機能的特性に対する影響をここに記載するおよび実施例に提供す
るインビトロまたはインビボアッセイで評価できる。保存的修飾(上記のとおり)を導入で
きる。変異はアミノ酸置換、付加または欠失であり得る。さらに、典型的にＣＤＲ領域内
の１個、２個、３個、４個または５個を超えない残基を変更する。
したがって、他の態様において、本発明は、配列番号１、１５、２９、４３、５７、７
１、８５、９９、１１３、１２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、
２２５、２３９、２５３および２６７または配列番号１、１５、２９、４３、５７、７１
、８５、９９、１１３、１２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、２
２５、２３９、２５３または２６７と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミ
ノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列
を有するＶＨ ＣＤＲ１領域；配列番号２、１６、３０、４４、５８、７２、８６、１０
０、１１４、１２８、１４２、１５６、１７０、１８４、１９８、２１２、２２６、２４
０、２５４および２６８または配列番号２、１６、３０、４４、５８、７２、８６、１０
０、１１４、１２８、１４２、１５６、１７０、１８４、１９８、２１２、２２６、２４
０、２５４または２６８と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、
欠失または付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ
Ｈ ＣＤＲ２領域；配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５
、１２９、１４３、１５７、１７１、１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５
および２６９または配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１、１１５
、１２９、１４３、１５７、１７１、１８５、１９９、２１３、２２７、２４１、２５５
または２６９と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または
付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ
３領域を有する重鎖可変領域；配列番号４、１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０
２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１８６、２００、２１４、２２８、２４
２、２５６および２７０または配列番号４、１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０
２、１１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１８６、２００、２１４、２２８、２４
２、２５６または２７０と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、
欠失または付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ
Ｌ ＣＤＲ１領域；配列番号５、１９、３３、４７、６１、７５、８９、１０３、１１７
、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、２１５、２２９、２４３、２５７
および２７１または配列番号５、１９、３３、４７、６１、７５、８９、１０３、１１７
、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、２０１、２１５、２２９、２４３、２５７
または２７１と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または
付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ
２領域；および配列番号６、２０、３４、４８、６２、７６、９０、１０４、１１８、１
３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２、２１６、２３０、２４４、２５８およ
び２７２または配列番号６、２０、３４、４８、６２、７６、９０、１０４、１１８、１
３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２、２１６、２３０、２４４、２５８また
は２７２と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または付加
を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３領
域から成る単離Ｐ因子結合抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
したがって、他の態様において、本発明は、配列番号２８１、２８７、２９３、２９９、
３０５、３１１、３１７、３２３、３２９、３３５、３４１、３４７、３５３、３５９、
３６５、３７１、３７７、３８３、３８９および３９５または配列番号２８１、２８７、
２９３、２９９、３０５、３１１、３１７、３２３、３２９、３３５、３４１、３４７、
３５３、３５９、３６５、３７１、３７７、３８３、３８９または３９５と比較して１個
、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列か
ら成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１領域；配列番号２８２、２
８８、２９４、３００、３０６、３１２、３１８、３２４、３３０、３３６、３４２、３
４８、３５４、３６０、３６６、３７２、３７８、３８４、３９０および３９６または配
列番号２８２、２８８、２９４、３００、３０６、３１２、３１８、３２４、３３０、３
３６、３４２、３４８、３５４、３６０、３６６、３７２、３７８、３８４、３９０また
は３９６と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または付加
を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２領
域；配列番号２８３、２８９、２９５、３０１、３０７、３１３、３１９、３２５、３３
１、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９
１および３９７または配列番号２８３、２８９、２９５、３０１、３０７、３１３、３１
９、３２５、３３１、３３７、３４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７
９、３８５、３９１または３９７と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ
酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を
有するＶＨ ＣＤＲ３領域を有する重鎖可変領域；配列番号２８４、２９０、２９６、３
０２、３０８、３１４、３２０、３２６、３３２、３３８、３４４、３５０、３５６、３
６２、３６８、３７４、３８０、３８６、３９２および３９８または配列番号２８４、２
９０、２９６、３０２、３０８、３１４、３２０、３２６、３３２、３３８、３４４、３
５０、３５６、３６２、３６８、３７４、３８０、３８６、３９２または３９８と比較し
て１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸
配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１領域；配列番号２８
５、２９１、２９７、３０３、３０９、３１５、３２１、３２７、３３３、３３９、３４
５、３５１、３５７、３６３、３６９、３７５、３８１、３８７、３９３および３９９ま
たは配列番号２８５、２９１、２９７、３０３、３０９、３１５、３２１、３２７、３３
３、３３９、３４５、３５１、３５７、３６３、３６９、３７５、３８１、３８７、３９
３または３９９と比較して１個、２個、３個、４個または５個のアミノ酸置換、欠失また
は付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤ
Ｒ２領域；および配列番号２８６、２９２、２９８、３０４、３１０、３１６、３２２、
３２８、３３４、３４０、３４６、３５２、３５８、３６４、３７０、３７６、３８２、
３８８、３９４および４００または配列番号２８６、２９２、２９８、３０４、３１０、
３１６、３２２、３２８、３３４、３４０、３４６、３５２、３５８、３６４、３７０、
３７６、３８２、３８８、３９４または４００と比較して１個、２個、３個、４個または
５個のアミノ酸置換、欠失または付加を有するアミノ酸配列から成る群から選択されるア
ミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３領域から成る単離Ｐ因子結合抗体またはその抗原結合
フラグメントを提供する。
抗体フラグメントの代替的フレームワークまたはスキャフォールドへの移植
得られたポリペチドがＰ因子と特異的に結合する少なくとも１個の結合領域を含む限り
、多種多様な抗体／免疫グロブリンフレームワークまたはスキャフォールドを用いること
ができる。このようなフレームワークまたはスキャフォールドはヒト免疫グロブリンの５
個の主用なイディオタイプまたはそのフラグメントを含み、好ましくはヒト化側面を有す
る他の動物種の免疫グロブリンを含む。新規フレームワーク、スキャフォールドおよびフ
ラグメントは当業者により発見および開発され続けている。
一つの面において、本発明は、本発明のＣＤＲが移植できる非免疫グロブリンスキャフ
ォールドを使用する非免疫グロブリンに基づく抗体の製造方法に関する。現在または将来
的に知られる非免疫グロブリンフレームワークおよびスキャフォールドを、標的Ｐ因子タ
ンパク質に特異的な結合領域を含む限り、用い得る。既知の非免疫グロブリンフレームワ
ークまたはスキャフォールドは、フィブロネクチン(Compound Therapeutics, Inc., Walt
ham, MA)、アンキリン(Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland)、ドメイン抗体(D
omantis, Ltd., Cambridge, MAおよびAblynx nv, Zwijnaarde, Belgium)、リポカリン(Pi
eris Proteolab AG, Freising, Germany)、小モジュラー免疫薬(Trubion Pharmaceutical
s Inc., Seattle, WA)、マキシボディ(Avidia, Inc., Mountain View, CA)、プロテイン
Ａ(Affibody AG, Sweden)およびアフィリン(ガンマ結晶またはユビキチン)(Scil Protein
s GmbH, Halle, Germany)を含むが、これらに限定されない。
フィブロネクチンスキャフォールドはフィブロネクチンIII型ドメイン(例えば、フィブ
ロネクチンIII型の第１０モジュール(１０Ｆｎ３ドメイン))に基づく。フィブロネクチン
III型ドメインは、７個または８個のベータ鎖を有し、これは２個のベータシートに分散
し、これ自体互いに包装されて、タンパク質のコアを形成し、さらにループ(ＣＤＲに類
似)を含み、これはベータ鎖を互いに連結し、溶媒に晒される。ベータシートサンドイッ
チの各端に少なくとも３個のこのようなループがあり、ここで、該端はベータ鎖の方向に
対して垂直なタンパク質の境界である(ＵＳ６,８１８,４１８参照)。これらのフィブロネ
クチンに基づくスキャフォールドは免疫グロブリンではないが、全体的折り畳みは、ラク
ダおよびラマＩｇＧにおける全抗原認識単位を含む重鎖の可変領域である、最小機能的抗
体フラグメントのものと密接に関連する。この構造のために、非免疫グロブリン抗体は、
自然に近い抗原結合特性および抗体の親和性を模倣する。これらのスキャフォールドは、
インビボの抗体親和性成熟の過程に類似するインビトロでのループ無作為化およびシャフ
リング方法に使用できる。これらのフィブロネクチンに基づく分子をスキャフォールドと
して使用でき、そこで、分子のループ領域を標準的クローニング技術を使用して本発明の
ＣＤＲに置き換えることができる。
アンキリン方法は、アンキリン由来反復モジュールを有するタンパク質を、異なる標的
への結合に使用できる可変領域を担持するスキャフォールドとして使用することに基づく
。アンキリン反復モジュールは、２個の逆平行α螺旋およびβターンから成る３３アミノ
酸ポリペチドである。可変領域の結合は、リボソームディスプレイを使用してほとんど最
適化される。
アビマーは天然Ａドメイン含有タンパク質、例えばＨＥＲ３由来である。これらのドメ
インは、本来タンパク質−タンパク質相互作用に使用され、ヒトに置いて２５０を超える
タンパク質が構造的にＡドメインに基づく。アビマーは、アミノ酸リンカーを介して結合
する多くの異なる“Ａドメイン”モノマー(２−１０)から成る。アビマーは、例えば、米
国特許出願公開２００４０１７５７５６；２００５００５３９７３；２００５００４８５
１２；および２００６０００８８４４に記載する方法を使用して、標的抗原に結合できる
ように調製できる。
アフィボディ親和性リガンドは、プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１個のスキャフ
ォールドに基づく３螺旋束から成る小さく、単純なタンパク質である。プロテインＡは黄
色ブドウ球菌である細菌由来の表面タンパク質である。このスキャフォールドドメインは
５８アミノ酸から成り、そのうち１３個は無作為化されて、多数のリガンド変異体と共に
アフィボディライブラリーを産生する(例えば、ＵＳ５,８３１,０１２参照)。アフィボデ
ィ分子は抗体を模倣し、１５０kDaである抗体の分子量と比較して、６kDaの分子量を有す
る。サイズが小さいにも係らず、アフィボディ分子の結合部位は抗体のものに類似する。
アンチカリンはPieris ProteoLab AG社により開発された製品である。リポカリンに由
来し、通常化学的に感受性のまたは不溶性の化合物の生理学的輸送または貯蔵する、小さ
く、堅牢なタンパク質のどこにでもある群である。数種の天然リポカリンはヒト組織また
は体液に生じる。タンパク質構造は免疫グロブリンを案じし、強固なフレームワークの頂
上に超可変ループがある。しかしながら、抗体またはそれらの組み換えフラグメントとは
対照的に、リポカリンは、１６０〜１８０アミノ酸残基の一ポリペチド鎖からなり、一免
疫グロブリンドメインよりほんのわずかだけ大きい。結合ポケットを形成する４個のルー
プの組は明白な構造的可塑性を示し、多様な側鎖を許容する。結合部位は、それゆえに、
高親和性および特異性で異なる形の処方標的分子を認識するために、独自の工程で再形成
され得る。リポカリンファミリーの１タンパク質であるPieris Brassicaeのビリン結合タ
ンパク質(ＢＢＰ)は、４個のループの組の突然変異誘発によりアンチカリンを開発するた
めに使用されている。アンチカリンを記載する特許の一例は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ１９９
９１６８７３である。
アフィリン分子は、タンパク質および小分子に対する特異的親和性のために設計された
小非免疫グロブリンタンパク質である。新規アフィリン分子を２個のライブラリーから極
めて迅速に選択でき、その各々は異なるヒト由来スキャフォールドタンパク質に基づく。
アフィリン分子は免疫グロブリンタンパク質に対する構造的相同性を示さない。現在、２
種のアフィリンスキャフォールドが用いられ、その一方はヒト構造的眼水晶体タンパク質
であるガンマ結晶であり、他方は“ユビキチン”スーファーファミリータンパク質である
。両ヒトスキャフォールドとも極めて小さく、高温安定性を示し、ｐＨ変化および変性剤
にほとんど耐性である。この高安定性は主にタンパク質のベータシート構造の伸長による
。ガンマ結晶由来タンパク質の例はＷＯ２００１０４１４４に記載させ、“ユビキチン様
”タンパク質の例はＷＯ２００４１０６３６８に記載される。
タンパク質エピトープ模倣物(ＰＥＭ)は、タンパク質−タンパク質相互作用に関与する
主二次構造であるタンパク質のベータハルピン二次構造を模倣する中程度のサイズの、環
状、ペプチド様分子(ＭＷ １〜２kDa)である。
本発明は、Ｐ因子タンパク質と特異的に結合する完全なヒト抗体を提供する。キメラま
たはヒト化抗体と比較して、本発明のヒトＰ因子結合抗体は、ヒト対象に投与したとき、
抗原性がさらに低減されている。
ラクダ科抗体
新世界メンバー、例えばラマ種(Lama paccos、Lama glamaおよびLama vicugna)を含む
ラクダおよびヒトコブラクダ(Camelus bactrianusおよびCalelus dromaderius)ファミリ
ーのメンバーから得た抗体タンパク質は、サイズ、構造的複雑性およびヒト対象への抗原
性について特徴づけされている。哺乳動物のこのファミリー由来のある種のＩｇＧ抗体は
生来軽鎖を欠き、それゆえに、他の動物由来の抗体の２個の重鎖および２個の軽鎖の典型
的４鎖四次構造と構造的に区別されることが判明している。ＰＣＴ／ＥＰ９３／０２２１
４(１９９４年３月３日公開のＷＯ９４／０４６７８)参照。
ＶＨＨとして同定される小さな一可変ドメインであるラクダ科抗体の領域は、標的に対
して高親和性を有する小タンパク質を産生するために遺伝子操作することにより得ること
ができ、“ラクダ科ナノボディ”として知られる低分子量抗体由来タンパク質をもたらす
。１９９８年６月２日発行の米国特許番号５,７５９,８０８参照；またStijlemans, B. e
t al., 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261; Dumoulin, M. et al., 2003 Nature 424: 78
3-788; Pleschberger, M. et al. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamo
zo, V. et al. 2002 Int J Cancer 89: 456-62; and Lauwereys, M. et al. 1998 EMBO J
17: 3512-3520も参照。ラクダ科抗体および抗体フラグメントの操作されたライブラリー
は、例えば、Ablynx、Ghent、Belgiumから商業的に入手可能である。非ヒト起源の他の抗
体と同様、ラクダ科抗体のアミノ酸配列を組み換えにより変更して、ヒト配列をより密接
に模倣する配列を得ることができ、すなわち、ナノボディを“ヒト化”できる。こうして
、ラクダ科抗体のヒトに対する天然の低抗原性をさらに減らすことができる。
ラクダ科ナノボディは、ヒトＩｇＧ分子の１／１０の分子量であり、タンパク質はわず
か数ナノメートルの物理的直径を有する。サイズが小さいことによる一つの結果は、ラク
ダ科ナノボディが大型抗体タンパク質で機能的に探知されない抗原性部位に結合する能力
であり、すなわち、ラクダ科ナノボディは古典的免疫学的技術を使用して他の場合には隠
れている抗原を検出する試薬としておよび可能な治療剤として有用である。それゆえに、
サイズが小さいことによる別の結果は、ラクダ科ナノボディが標的タンパク質の溝または
狭い隙間における特異的部位への結合の結果阻害でき、それ故に古典的抗体よりも古典的
低分子量剤の機能をより模倣した能力において役立ち得ることである。
低分子量および小型サイズにより、さらに、ラクダ科ナノボディは極めて熱安定であり
、厳しいｐＨおよびタンパク分解消化に安定であり、抗原性が低い。他の結果は、ラクダ
科ナノボディが循環系から組織に容易に移動し、血液脳関門すら通過し、神経組織に影響
する障害を処置できることである。ナノボディはさらに血液脳関門を通過する薬物輸送を
促進できる。２００４年８月１９日公開の米国特許出願２００４０１６１７３８参照。こ
れらの特性は、ヒトへの低抗原性と組み合わさって、大きな治療可能性を示す。さらに、
これらの分子は原核細胞、例えば大腸菌で完全に発現でき、バクテリオファージと融合タ
ンパク質で発現され、機能的である。
従って、本発明の特性は、Ｐ因子に対する高親和性を有するラクダ科抗体またはナノボ
ディである。ここでのある種の態様において、ラクダ科抗体またはナノボディはラクダ科
動物で天然に産生され、すなわち、ラクダ科でここで他の抗体について記載した技術を使
用したＰ因子またはそのペプチドフラグメントでの免疫化後に産生される。あるいは、Ｐ
因子結合ラクダ科ナノボディは改変され、すなわち、例えば、ここでの実施例に記載する
とおりＰ因子を標的として用いるパニング法を使用した、突然変異誘発したラクダ科ナノ
ボディタンパク質を適当に示すファージのライブラリーからの選択により製造する。改変
ナノボディは、さらにレシピエント対象における４５分〜２週間の半減期を有するように
遺伝子操作によりカスタマイズできる。具体的態様において、ラクダ科抗体またはナノボ
ディは、本発明のヒト抗体の重鎖または軽鎖のＣＤＲ配列を、例えばＰＣＴ／ＥＰ９３／
０２２１４に記載のとおり、ナノボディまたは一ドメイン抗体フレームワーク配列に移植
することにより得る。
二重特異性分子および多価抗体
他の面において、本発明は、本発明のＰ因子結合抗体またはそのフラグメントを含む二
重特異性または多特異的分子に関する。本発明の抗体またはその抗原結合部位を誘導体化
または他の機能的分子、例えば、他のペプチドまたはタンパク質(例えば、他の抗体また
は受容体に対するリガンド)と結合して、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分
子と結合する二重特異性分子を産生できる。本発明の抗体は、実際、誘導体化または１個
を超える他の機能的分子と結合して、２個を超える異なる結合部位および／または標的分
子と結合する多特異的分子を産生できる；このような多特異的分子もここで使用する養母
“二重特異性分子”に包含することを意図する。本発明の二重特異性分子を製造するため
に、本発明の抗体を、二重特異性分子が得られるように、１個以上の他の結合分子、例え
ば他の抗体、抗体フラグメント、ペプチドまたは結合模倣物と機能的に結合(例えば、化
学カップリング、遺伝的融合、非共有結合的結合またはその他)できる。
したがって、本発明は、Ｐ因子に対する少なくとも１個の第一結合特異性および第二標
的エピトープに対する第二結合特異性を含む、二重特異性分子を含む。例えば、第二標的
エピトープは、第一標的エピトープと異なるＰ因子の他のエピトープである。
加えて、二重特異性分子が多特異性である本発明について、分子は、第一および第二標
的エピトープに加えてさらに第三の結合特異性を含み得る。
一つの態様において、本発明の二重特異性分子は、結合特異性として、例えば、Ｆａｂ
、Ｆａｂ’、Ｆ(ａｂ’)２、Ｆｖまたは一本鎖Ｆｖを含む、少なくとも１個の抗体または
抗体そのフラグメントを含む。抗体はまた軽鎖または重鎖二量体またはＦｖのようなその
最小フラグメントまたはLadner et al. 米国特許番号４,９４６,７７８に記載の一本鎖構
築物であり得る。
二重特異性抗体は、同じ鎖上の２ドメイン間の対形成を可能にするには短すぎるリンカ
ーにより接続したＶＨおよびＶＬドメインが一ポリペチド鎖上に発現される、二価の、二
重特異性分子である。ＶＨおよびＶＬドメインは他の鎖の相補性ドメインと結合し、それ
によ２個の抗原結合部位を生成する(例えば、Holliger et al., 1993 Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 90:6444-6448; Poljak et al., 1994 Structure 2:1121-1123参照)。二重特異
性抗体は、構造ＶＨＡ−ＶＬＢおよびＶＨＢ−ＶＬＡ(ＶＨ−ＶＬ配置)またはＶＬＡ−Ｖ
ＨＢおよびＶＬＢ−ＶＨＡ(ＶＬ−ＶＨ配置)の２個のポリペチド鎖を同じ細胞上に発現さ
せることにより製造できる。そのほとんどが細菌中で可溶性形態で発現できる。一本鎖二
重特異性抗体(ｓｃＤｂ)は、２個の二重特異性抗体形成ポリペチド鎖と、約１５アミノ酸
残基のリンカーの接続により製造する(Holliger and Winter, 1997 Cancer Immunol. Imm
unother., 45(34): 128-30; Wu et al., 1996 Immunotechnology, 2(1):21-36; Pluckthu
n and Pack, 1997 Immunotechnology, 3(2): 83-105; Ridgway et al., 1996 Protein En
g., 9(7):617-21参照)。二重特異性抗体をＦｃと融合して、“二二重特異性抗体”を製造
できる(Lu et al., 2004 J. Biol. Chem., 279(4):2856-65参照)。
本発明の二重特異性分子に用いることができる他の抗体は、マウス、キメラおよびヒト
化モノクローナル抗体である。
二重特異性分子は、当分野で知られた方法を使用して、成分結合特異性をコンジュゲー
トすることにより製造できる。結合特異性がタンパク質またはペプチドであるとき、二重
特異性分子の各結合特異性を別々に製造し、次いで互いにコンジュゲートし、例えば、多
様なカップリングまたは架橋剤を共有結合に使用できる。架橋剤の例はプロテインＡ、カ
ルボジイミド、Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート(ＳＡＴＡ)、５,
５’−ジチオビス(２−ニトロ安息香酸)(ＤＴＮＢ)、ｏ−フェニレンジマレイミド(ｏＰ
ＤＭ)、Ｎ−スクシンイミジル−３−(２−ピリジルジチオ)プロピオネート(ＳＰＤＰ)お
よびスルホスクシンイミジル４−(Ｎ−マレイミドメチル)シクロヘキサン−１−カルボキ
シレート(スルホ−ＳＭＣＣ)(例えば、Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med. 160:1686;
Liu, MA et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648). 他の方法はPaulus, 198
5 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83), an
d Glennie et al., 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375に記載のものを含む。コンジュゲ
ーション剤(Conjugating agent)はＳＡＴＡおよびスルホ−ＳＭＣＣであり、いずれもPie
rce Chemical Co.(Rockford, IL)から入手可能である。
結合特異性が抗体であるとき、２個の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合に
よりコンジュゲートできる。具体的態様において、ヒンジ領域を、コンジュゲーション前
に奇数、例えば１個のスルフヒドリル残基を含むように修飾する。
あるいは、両結合特異性を同じベクターでコード化させ、発現させ、同じ宿主細胞で集
合させ得る。この方法は、二重特異性分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×
Ｆ(ａｂ’)２またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質であるとき特に有用である。本発明
の二重特異性分子は、１個の一本鎖抗体および結合決定基を含む一本鎖分子または２個の
結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であり得る。二重特異性分子は、少なくとも２個
の一本鎖分子を含み得る。二重特異性分子の製造方法は、例えば米国特許番号５,２６０,
２０３；米国特許番号５,４５５,０３０；米国特許番号４,８８１,１７５；米国特許番号
５,１３２,４０５；米国特許番号５,０９１,５１３；米国特許番号５,４７６,７８６；米
国特許番号５,０１３,６５３；米国特許番号５,２５８,４９８；および米国特許番号５,
４８２,８５８に記載されている。
二重特異性分子のその特異的標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着検定法(ＥＬ
ＩＳＡ)、放射免疫アッセイ(ＲＥＡ)、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ(例えば、増殖阻害
)またはウェスタンブロットアッセイにより確認できる。これらのアッセイの各々は、一
般的に特に興味深いタンパク質−抗体複合体の存在を、目的の複合体に特異的な標識試薬
(例えば、抗体)を用いて検出する。
他の面において、本発明は、本発明のＰ因子に結合する本発明の抗体の少なくとも２個
の同一または異なる抗原結合部位を含む多価化合物を提供する。本発明の抗体の抗原結合
部位は、タンパク質融合または共有結合または非共有結合的結合を介して互いに結合でき
る。あるいは、結合方法は二特異性分子について記載している。四価化合物は、例えば、
本発明の抗体の抗体と本発明の抗体の定常領域と結合する抗体、例えばＦｃまたはヒンジ
領域の架橋により得ることができる。
三量体形成ドメインは、例えばBorean特許ＥＰ１０１２２８０Ｂ１に記載されている。
五量体化モジュールは、例えばＰＣＴ／ＥＰ９７／０５８９７に記載されている。
半減期が延長した抗体
本発明は、インビボでの半減期が延長したＰ因子タンパク質と特異的に結合する抗体を
提供する。
多くの因子がインビボでのタンパク質の半減期に影響し得る。例は、腎臓濾過、肝臓で
の代謝、タンパク分解酵素(プロテアーゼ類)での分解および免疫原性応答(例えば、抗体
によるタンパク質中和およびマクロファージおよび樹状細胞による取り込み)である。多
様な戦略が本発明の抗体の半減期を伸ばすために使用できる。例えば、ポリエチレングリ
コール(ＰＥＧ)、ｒｅＣＯＤＥ ＰＥＧ、抗体スキャフォールド、ポリシアル酸(ＰＳＡ)
、ヒドロキシエチルデンプン(ＨＥＳ)、アルブミン結合リガンドおよび炭水化物シールド
への化学結合；血清タンパク質に結合するタンパク質、例えばアルブミン、ＩｇＧ、Ｆｃ
Ｒｎおよびトランスフェリンとの遺伝子融合；血清タンパク質に結合する他の結合部分、
例えばナノボディ、Ｆａｂｓ、ＤＡＲＰｉｎｓ、アビマー、アフィボディおよびアンチカ
リンへのカップリング(遺伝的または化学的)；ｒＰＥＧ、アルブミン、アルブミンのドメ
イン、アルブミン結合タンパク質およびＦｃへの遺伝子融合；またはナノ担体、徐放性製
剤または医療デバイスへの取り込み。
インビボでの抗体の血清循環を延長するために、不活性ポリマー分子、例えば高分子量
ＰＥＧを、ＰＥＧの抗体のＮ末端またはＣ末端への部位特異的コンジュゲーションまたは
リシン残基に存在するイプシロン−アミノ基を介して、多機能的リンカーと共にまたは伴
わず、抗体またはそのフラグメントに結合できる。抗体をペグ化するために、抗体または
そのフラグメントは、典型的にポリエチレングリコール(ＰＥＧ)、例えばＰＥＧの反応性
エステルまたはアルデヒド誘導体と、１個以上のＰＥＧ基が抗体または抗体フラグメント
と結合する条件下で反応させる。ペグ化は反応性ＰＥＧ分子(または類似の反応性水可溶
性ポリマー)とのアシル化反応またはアルキル化反応により実施できる。ここで使用する
、用語“ポリエチレングリコール”は、他のタンパク質の誘導体化に使用されているあら
ゆる形態のＰＥＧ、例えばモノ(Ｃ１−Ｃ１０)アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリ
エチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドを包含することを意図す
る。ある態様において、ペグ化する抗体は非グリコシル化抗体である。生物学的活性の最
小限の喪失となる直鎖または分枝鎖ポリマー誘導体化を有する。コンジュゲーション程度
はＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびマススペクトロメトリーにより厳しくモニターし、抗体へのＰ
ＥＧ分子の適切なコンジュゲーションを確実にする。未反応ＰＥＧを、分子ふるいまたは
イオン交換クロマトグラフィーにより抗体−ＰＥＧコンジュゲートから分離できる。ＰＥ
Ｇ誘導体化抗体を、当業者に周知の方法を使用して、例えば、ここに記載した免疫アッセ
イにより結合活性ならびにインビボ有効性について試験できる。タンパク質のペグ化方法
は当分野で知られ、本発明の抗体に適用できる。例えば、Nishimura et al. のＥＰ０１
５４３１６およびIshikawa et al.のＥＰ０４０１３８４参照。
他の修飾ペグ化方法は、再構成化学的直交操作技術(ReCODE PEG)であり、これは、化学
的に特定の側鎖を生合成タンパク質に、ｔＲＮＡシンセターゼおよびｔＲＮＡを含む再構
成系を介して取り込む。この方法は、３０を超える新アミノ酸の大腸菌、酵母および哺乳
動物細胞における生合成タンパク質への取り込みを可能にする。ｔＲＮＡは非天然アミノ
酸を、アンバーコドンが位置する任意の場所に取り込み、アンバーを停止コドンから化学
的に特定のアミノ酸の取り込みのシグナルとなるものに変換する。
組み換えペグ化方法(ｒＰＥＧ)も血清半減期延長に使用できる。この方法は、３００〜
６００アミノ酸の不定形タンパク質尾部に既存の医薬タンパク質を遺伝的融合させること
を含む。このような不定形タンパク質鎖の見かけの分子量がその実際の分子量の約１５倍
大きくなるため、タンパク質の血清半減期は、大きくのびる。化学コンジュゲーションお
よび再精製を必要とする伝統的ペグ化と比較して、製造工程は極めて単純であり、産物は
均質である。
ポリシアル化は他の方法であり、これは、治療ペプチドおよびタンパク質の活性寿命を
延長し、安定性を改善するのに天然ポリマーポリシアル酸(ＰＳＡ)を使用する。ＰＳＡは
、シアル酸(糖)のポリマーである。タンパク質および治療ペプチド薬物送達に使用したと
き、ポリシアル酸はコンジュゲーションに保護的微小環境を提供する。これが循環中の治
療タンパク質の活性寿命を延ばし、免疫系により認識されるのを妨げる。ＰＳＡポリマー
はヒト体内で天然に見られる。何百万年の壁をこれで覆うように進化したある種の細菌に
より導入された。これらの天然にポリシアル化された細菌は、次いで、分子模写により、
体内の防御系から逃れることに成功した。ＰＳＡは、天然の最終的な隠蔽方法であり、こ
のような細菌により大量に、予定された物理的特徴で産生できる。細菌ＰＳＡは、ヒト体
内でのＰＳＡと化学的同一である限り、タンパク質とカップリングしたときでさえ完全に
非免疫原性である。
他の方法は、抗体に結合したヒドロキシエチルデンプン(“ＨＥＳ”)誘導体である。Ｈ
ＥＳは、蝋状トウモロコシ澱粉由来の修飾天然ポリマーであり、体内の酵素により代謝さ
れ得る。ＨＥＳ溶液を、通常血液量不足を補い、血液のレオロジー的特性を改善するため
に投与し。抗体のヘシル化(hesylation)は、分子の安定性の増加ならびに腎クリアランス
減少により循環半減期の延長を可能にし、生物学的活性を高める。種々のパラメータ、例
えばＨＥＳの分子量を変えることにより、広範なＨＥＳ抗体コンジュゲートをカスタマイ
ズできる。
インビボで長い半減期を有する抗体はまたＩｇＧ定常ドメインまたはＦｃＲｎ結合その
フラグメント(好ましくはＦｃまたはヒンジＦｃドメインフラグメント)への１個以上のア
ミノ酸修飾(すなわち、置換、挿入または欠失)の導入によっても産生できる。例えば、国
際公開番号ＷＯ９８／２３２８９；国際公開番号ＷＯ９７／３４６３１；および米国特許
番号６,２７７,３７５参照。
さらに、抗体または抗体フラグメントをインビボでより安定にしまたはインビボで半減
期を長くするために、抗体をアルブミンとコンジュゲートできる。本技術は当分野で周知
であり、例えば、国際公開番号ＷＯ９３／１５１９９、ＷＯ９３／１５２００およびＷＯ
０１／７７１３７；および欧州特許番号ＥＰ４１３,６２２を参照のこと。さらに上記二
特異性抗体の状況で、抗体の特異性は、抗体の１結合ドメインがＰ因子に結合し、抗体の
第二結合ドメインが血清アルブミン、好ましくはＨＳＡに結合するように設計できる。
半減期を延長する戦略は、特にナノボディ、フィブロネクチンベースの結合剤およびイ
ンビボ半減期延長が望まれる他の抗体またはタンパク質で有用である。
抗体コンジュゲート
本発明は、融合タンパク質を産生するために異種タンパク質またはポリペチド(または
そのフラグメント、好ましくは少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少な
くとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少な
くとも９０または少なくとも１００アミノ酸のポリペチド)と組み換え的融合または化学
的結合(共有結合および非共有結合の両者を含む)したＰ因子タンパク質に特異的に結合す
る抗体またはそのフラグメントを提供する。特に、本発明は、ここに記載する抗体の抗原
結合フラグメント(例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント
、Ｆ(ａｂ)２フラグメント、ＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ、ＶＬドメインまたはＶＬ Ｃ
ＤＲ)および異種タンパク質、ポリペチドまたはペプチドを含む融合タンパク質を提供す
る。タンパク質、ポリペチドまたはペプチドを抗体または抗体フラグメントと融合または
結合する方法は当分野で知られている。例えば、米国特許５,３３６,６０３、５,６２２,
９２９、５,３５９,０４６、５,３４９,０５３、５,４４７,８５１および５,１１２,９４
６；欧州特許番号ＥＰ３０７,４３４およびＥＰ３６７,１６６；国際公開番号ＷＯ９６／
０４３８８およびＷＯ９１／０６５７０；Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 88: 10535-10539; Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-5600; and Vil
et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337- 11341参照)。
さらなる融合タンパク質を、遺伝子混合、モチーフ混合、エクソン混合および／または
コドン混合(ここでは纏めて“ＤＮＡ混合”と呼ぶ)の技術を介して産生し得る。ＤＮＡ混
合は、本発明の抗体またはそのフラグメントの活性改変に使用し得る(例えば、高親和性
および低解離速度の抗体またはそのフラグメント)。一般的に、米国特許５,６０５,７９
３、５,８１１,２３８、５,８３０,７２１、５,８３４,２５２および５,８３７,４５８；
Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends
Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson, et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; and Lo
renzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308- 313参照(これら特許および刊行物
の各々は、引用によりその全体を本明細書に包含させる)。抗体またはそのフラグメント
またはコードする抗体またはそのフラグメントは、組換え前にエラープローンＰＣＲ、無
作為ヌクレオチド挿入または他の方法による無作為突然変異誘発に付すことにより変え得
る。Ｐ因子タンパク質に特異的に結合する抗体またはそのフラグメントをコードするポリ
ヌクレオチドを１個以上の異種分子の１個以上の成分、モチーフ、セクション、パーツ、
ドメイン、フラグメントなどと組み換えし得る。
さらに、抗体またはそのフラグメントは、マーカー配列、例えば精製を容易にするため
のペプチドと融合し得る。好ましい態様において、マーカーアミノ酸配列はヘキサ−ヒス
チジンペプチド、例えば特にｐＱＥベクター(QIAGEN, Inc., 9259 Eton Avenue, Chatswo
rth, CA, 91311)で提供されるタグであり、その多くが市販されている。Gentz et al., (
1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824に記載のとおり、例えば、ヘキサ−ヒス
チジンは、融合タンパク質の簡便な精製のために提供される。精製に有用な他のペプチド
タグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する赤血球凝集
素(“ＨＡ”)タグ(Wilson et al., 1984, Cell 37:767)および“フラッグ”タグを含むが
、これらに限定されない。
他の態様において、本発明の抗体またはそのフラグメントは診断剤または検出可能剤と
オン樹ゲートできる。このような抗体は、臨床的試験法の一部として疾患または障害の発
症、進展、進行および／または重症度のモニタリングまたは予後診断、例えば特定の治療
の有効性の決定に有用であり得る。このような診断および検出は、例えば、オースラディ
ッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼまたはア
セチルコリンエステラーゼを含むが、これらに限定されない種々の酵素；例えば、ストレ
プトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンであるがこれらに限定されない接合団
；例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ロ
ーダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライドまたはフィ
コエリトリンであるが、これらに限定されない蛍光物質；例えば、ルミノールであるが、
これに限定されない発光物質；例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリン
であるが、これらに限定されない生物発光物質；例えば、ヨウ素(１３１Ｉ、１２５Ｉ、
１２３Ｉおよび１２１Ｉ)、炭素(１４Ｃ)、硫黄(３５Ｓ)、トリチウム(３Ｈ)、インジウ
ム(１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎおよび１１１Ｉｎ)、テクネチウム(９９Ｔｃ)、
タリウム(２０１Ｔｉ)、ガリウム(６８Ｇａ、６７Ｇａ)、パラジウム(１０３Ｐｄ)、モリ
ブデン(９９Ｍｏ)、キセノン(１３３Ｘｅ)、フッ素(１８Ｆ)、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、
１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１
８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５
Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１
１３Ｓｎおよび１１７Ｔｉｎであるが、これらに限定されない放射性物質；および種々の
陽電子放出断層撮影および非放射性常磁性金属イオンを使用する陽電子放出金属を含むが
、これらに限定されない検出可能物質に抗体をカップリングさせることにより達成できる
。
本発明は、さらに治療部分とコンジュゲートした抗体またはそのフラグメントの使用を
包含する。抗体またはそのフラグメントは治療部分、例えば細胞毒、例えば、細胞増殖阻
止または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、アルファ−エミッターとコ
ンジュゲートし得る。細胞毒または細胞毒性剤は細胞に有害な薬剤を含む。
さらに、抗体またはそのフラグメントを、ある生物学的応答を修飾する治療部分または
薬物部分とコンジュゲートし得る。治療部分または薬物部分は古典的化学治療剤に限定さ
れない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質、ペプチドまたは
ポリペチドであり得る。このようなタンパク質は、例えば、毒素、例えばアブリン、リシ
ンＡ、シュードモナス外毒素、コレラ毒素またはジフテリア毒素；タンパク質、例えば腫
瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経増殖因子、血小板由来
増殖因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、アポトーシス剤、抗血管形成剤；または生
物学的応答修飾剤、例えば、例えば、リンホカインを含み得る。
さらに、抗体を、２１３Ｂｉのようなアルファエミッタのような放射性物質または、１
３１Ｉｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍを含むが、これらに限定され
ない放射性金属イオンのポリペチドへのコンジュゲートに有用な大環状キレート剤とコン
ジュゲートできる。ある態様において、大環状キレート剤は１,４,７,１０−テトラアザ
シクロドデカン−Ｎ,Ｎ’,Ｎ”,Ｎ”’−四酢酸(ＤＯＴＡ)であり、これはリンカー分子
を介して抗体に結合できる。このようなリンカー分子は通常当分野で知られ、Denardo et
al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Ch
em. 10(4):553-7; and Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50に記載
され、各々その全体を引用により本明細書に包含させる。
治療部分を抗体にコンジュゲートさせる技術は周知であり、例えば、Arnon et al., “
Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, in Monoc
lonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R.
Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, in Contro
lled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker,
Inc. 1987); Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:
A Review”, in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, P
inchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); “Analysis, Results, And Future Prosp
ective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in M
onoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp
. 303-16 (Academic Press 1985), and Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58
を参照のこと。
抗体は、標的抗原の免疫アッセイまたは精製に特に有用である固体支持体とも結合し得
る。このような固体支持体は、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポ
リスチレン、ポリビニルクロライドまたはポリプロピレンを含むが、これらに限定されな
い。
本発明の抗体の製造方法
抗体をコードする核酸
本発明は、上記Ｐ因子結合抗体鎖のセグメントまたはドメインを含むポリペチドをコー
ドする実質的に精製された核酸分子を提供する。本発明の核酸のいくつかは、列番号７、
２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、１３３、１４７、１６１、１７
５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９または２７３に示す重鎖可変領域
をコードするヌクレオチド配列および／または配列番号８、２２、３６、５０、６４、７
８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８
、２３２、２４６、２６０または２７４に示す軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配
列を含む。具体的態様において、核酸分子は表１に同定したものである。ある別の本発明
の核酸分子は、表１に同定したヌクレオチド配列と実質的に同一(例えば、少なくとも６
５、８０％、９５％または９９％)なヌクレオチド配列である。適当な発現ベクターから
発現されたとき、これらのポリヌクレオチドによりコードされるポリペチドはＰ因子抗原
結合能力を示すことができる。
また本発明で提供されるのは、上記Ｐ因子結合抗体の重鎖または軽鎖の少なくとも１個
のＣＤＲ領域および通常全３個のＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドである。いく
つかの他のポリヌクレオチドは、上記Ｐ因子結合抗体の重鎖および／または軽鎖の全てま
たは実質的に全ての可変領域配列をコードする。コード縮重のため、多様な核酸配列が免
疫グロブリンアミノ酸配列の各々をコードする。
本発明の核酸分子は抗体の可変領域および定常領域のいずれもコードし得る。本発明の
核酸配列のいくつかは、配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１
２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２
６１または２７５に示すＰ因子結合抗体の成熟重鎖配列と実質的に同一(例えば、少なく
とも８０％、９０％または９９％)な成熟重鎖配列をコードするヌクレオチドである。あ
る他の核酸配列は配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２
、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２
または２７６に示す成熟軽鎖配列と実質的に同一(例えば、少なくとも８０％、９０％ま
たは９９％)である成熟軽鎖配列をコードするヌクレオチドを含む。
ポリヌクレオチド配列は、デノボ固相ＤＮＡ合成またはＰ因子結合抗体またはその結合
フラグメントをコードする既存配列(例えば、下記実施例に記載する配列)のＰＣＲ突然変
異誘発により製造できる。核酸の直接化学合成は当分野で知られる方法、例えばNarang e
t al., 1979, Meth. Enzymol. 68:90のホスホトリエステル方法；Brown et al., Meth. E
nzymol. 68:109, 1979のホスホジエステル方法；Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:18
59, 1981のジエチルホスホロアミデート方法；および米国特許番号４,４５８,０６６の固
体支持方法により達成できる。ＰＣＲによるポリヌクレオチド配列への変異導入は、例え
ば、PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erli
ch (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992; PCR Protocols: A Guide to Methods and App
lications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990; Mattila et a
l., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991; and Eckert et al., PCR Methods and Applicat
ions 1:17, 1991に記載のとおり達成できる。
また本発明で提供されるのは、上記Ｐ因子結合抗体の製造のための発現ベクターおよび
宿主細胞である。種々の発現ベクターを、Ｐ因子結合抗体鎖または結合フラグメントをコ
ードするポリヌクレオチドを発現させるために使用できる。ウイルスベースおよび非ウイ
ルス発現ベクターの両方とも、哺乳動物宿主細胞での抗体の産生に使用できる。非ウイル
スベクターおよび系は、プラスミド、典型的にタンパク質またはＲＮＡを発現するための
発現カセットを伴うエピソームベクターおよびヒト人工的染色体を含む(例えば、Harring
ton et al., Nat Genet 15:345, 1997参照)。例えば、哺乳動物(例えば、ヒト)細胞での
Ｐ因子結合ポリヌクレオチドおよびポリペチド発現に有用な非ウイルスベクターは、pThi
oHis A、BおよびC、pcDNA3.1/His、pEBVHis A、BおよびC(Invitrogen, San Diego, CA)、
ＭＰＳＶベクターおよび他のタンパク質を発現することが当分野で知られる多数の他のベ
クターを含む。有用なウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随
伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ＳＶ４０を使用したベクター、乳頭腫ウイルス、ＨＢＰ
エプスタイン・バーウイルス、ワクシニアウイルスベクターおよびセムリキ森林ウイルス
(ＳＦＶ)に基づくベクターを含む。Brent et al., supra; Smith, Annu. Rev. Microbiol
. 49:807, 1995; and Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992参照。
発現ベクターの選択は、ベクターを発現させることを意図する宿主細胞による。典型的
に、発現ベクターは、Ｐ因子結合抗体鎖またはフラグメントをコードするポリヌクレオチ
ドに操作可能に結合したプロモータおよび他の調節配列(例えば、エンハンサ)を含む。あ
る態様において、誘導性プロモータを使用して、誘導条件下以外での挿入配列の発現を阻
止する。誘導性プロモータは、例えば、アラビノース、ｌａｃＺ、メタロチオネインプロ
モータまたはヒートショックプロモータを含む。形質転換生物培養物を、発現産物が宿主
細胞に十分に耐容性であるコーディング配列に対する集団を阻害することなく、非誘導条
件下で増幅できる。プロモータに加えて、他の調節要素がＰ因子結合抗体鎖またはフラグ
メントの効率的発現のために必要であるかまたは望ましいことがある。これらの要素は、
典型的にＡＴＧ開始コドンおよび隣接リボゾーム結合部位または他の配列を含む。さらに
、発現効率は、使用する細胞系への適当なエンハンサの導入により高められ得る(例えば
、Scharf et al., Results Probl. Cell Differ. 20:125, 1994; and Bittner et al., M
eth. Enzymol., 153:516, 1987参照)。例えば、ＳＶ４０エンハンサまたはＣＭＶエンハ
ンサを、哺乳動物宿主細胞における発現増加に使用し得る。
発現ベクターはまた挿入されたＰ因子結合抗体配列によりコードされるポリペチドとの
融合タンパク質を形成するために分泌シグナル配列位置を提供し得る。多くの場合、挿入
されたＰ因子結合抗体配列は、ベクターへの挿入前にシグナル配列と結合させる。Ｐ因子
結合抗体軽および重鎖可変ドメインをコードする配列を受け入れるために使用するベクタ
ーは、しばしば定常領域またはその一部もコードする。このようなベクターは、定常領域
との融合タンパク質としての可変領域の発現を可能にし、それにより、インタクト抗体ま
たはそのフラグメントの産生に至る。典型的に、このような定常領域はヒト型である。
Ｐ因子結合抗体鎖を担持し、発現させる宿主細胞は原核細胞でも真核細胞でもよい。大
腸菌は、本発明のポリヌクレオチドのクローニングおよび発現に有用な原核宿主の一つで
ある。使用に適する他の微生物宿主は、桿菌、例えばバチルス・スブチリスおよび他の腸
内細菌科、例えばサルモネラ、セラチアおよび種々のシュードモナス種を含む。これらの
原核宿主において、典型的に宿主細胞に適合する制御配列(例えば、複製開始点)を含む発
現ベクターも製造できる。さらに、任意の数の多様な周知のプロモータ、例えばラクトー
スプロモータ系、トリプトファン(ｔｒｐ)プロモータ系、ベータ−ラクタマーゼプロモー
タ系またはファージラムダのプロモータ系が存在し得る。プロモータは、典型的に発現を
、所望によりオペレータ配列と共に制御し、転写および翻訳の開始および完了のためのリ
ボゾーム結合部位配列などを含む。他の微生物、例えば酵母も本発明のＰ因子結合ポリペ
チドの発現に使用できる。バキュロウイルスベクターと組み合わせた昆虫細胞も使用でき
る。
ある好ましい態様において、哺乳動物宿主細胞を、本発明のＰ因子結合ポリペチドの発
現および産生に使用する。例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子を発現するハイブリドー
マ細胞株(例えば、実施例に記載する１Ｄ６.Ｃ９骨髄腫ハイブリドーマクローン)または
外因性発現ベクターを担持する哺乳動物細胞株(例えば、下に例示するＳＰ２／０骨髄腫
細胞)であり得る。これらは、任意の正常死または正常または異常不死動物またはヒト細
胞を含む。例えば、インタクト免疫グロブリンを分泌できる多くの適切な宿主細胞株が開
発されており、ＣＨＯ細胞株、種々のＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞株、形質
転換Ｂ細胞およびハイブリドーマなどがある。ポリペチド発現のための哺乳動物組織細胞
培養の使用は、一般的に、例えば、Winnacker, FROM GENES TO CLONES, VCH Publishers,
N.Y., N.Y., 1987に記載されている。哺乳動物宿主細胞のための発現ベクターは、発現
制御配列、例えば複製開始点、プロモータおよびエンハンサ(例えば、Queen, et al., Im
munol. Rev. 89:49-68, 1986参照)および必要な処理情報部位、例えばリボゾーム結合部
位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位および転写ターミネータ配列を含み得る
。これらの発現ベクター通常は、哺乳動物遺伝子または哺乳動物ウイルス由来のプロモー
タを含む。適切なプロモータは構成的、細胞型特異的、段階特異的および／または調節可
能または制御可能であり得る。有用なプロモータは、メタロチオネインプロモータ、構成
的アデノウイルス主要後期プロモータ、デキサメサゾン−誘導性ＭＭＴＶプロモータ、Ｓ
Ｖ４０プロモータ、MRP polIIIプロモータ、構成的ＭＰＳＶプロモータ、テトラサイクリ
ン−誘導性ＣＭＶプロモータ(例えばヒト最初期ＣＭＶプロモータ)、構成的ＣＭＶプロモ
ータおよび当分野で知られるプロモータ−エンハンサ組み合わせを含むが、これら限定さ
れない。
目的のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターの挿入方法は細胞性宿主のタイプによ
る。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションが原核細胞で通常利用され、一方リン
酸カルシウム処理またはエレクトロポレーションが他の細胞性宿主で使用されうる(一般
的にSambrook, et al., supra参照)。他の方法は、例えば、エレクトロポレーション、リ
ン酸カルシウム処理、リポソーム介在形質転換、注入および微量注入、弾道法、ビロソー
ム、免疫リポソーム、ポリカチオン：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工的ウイルス
粒子、ヘルペスウイルス構造的タンパク質ＶＰ２２への融合(Elliot and O'Hare, (1997)
Cell 88:223)、薬物によるＤＮＡ取込増進およびエクスビボ形質導入を含む。組み換え
タンパク質の長期、高収率産生のために、安定した発現がしばしば望まれる。例えば、Ｈ
ＥＲ３結合抗体鎖または結合フラグメントを安定して発現する細胞株を、ウイルス複製開
始点または内因性発現要素および選択可能マーカー遺伝子を含む本発明の発現ベクターを
使用して製造できる。ベクター導入後、細胞を１〜２日間富化培地で増殖させ、選択培地
に移す。選択可能マーカーの目的は選択への耐性の付与であり、その存在により、選択培
地中の導入配列の完全発現を成功させた細胞の増殖を可能にする。耐性の、安定形質移入
細胞を、細胞型に適当な組織培養技術を使用して増殖できる。
本発明のモノクローナル抗体の産生
モノクローナル抗体(ｍＡｂｓ)を、モノクローナル抗体のための常套的方法、例えば、
Kohler and Milstein, 1975 Nature 256:495の標準的体細胞ハイブリダイゼーション技術
を含む多様な技術により製造できる。モノクローナル抗体製造のための多くの技術、例え
ば、ウイルスによるまたは発癌的手法によるＢリンパ球の形質転換を使用し得る。
ハイブリドーマ製造のための動物系はマウス、ラットおよびウサギ系を含む。マウスで
産生されるハイブリドーマは確立された方法である。免疫化プロトコルおよび融合用免疫
化脾細胞の単離技術は当分野で知られている。融合パートナー(例えば、マウス骨髄腫細
胞)および融合法も知られている。
本発明のキメラまたはヒト化抗体を、上記のとおり製造したマウスモノクローナル抗体
の配列に基づき製造できる。重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡを目的の
マウスハイブリドーマから得て、標準的分子生物学技術を使用して非マウス(例えばヒト)
免疫グロブリン配列を含むように改変できる。例えば、キメラ抗体を製造するために、マ
ウス可変領域を、当分野で知られた方法を使用してヒト定常領域と結合できる(例えば、C
abilly et al.の米国特許番号４,８１６,５６７参照)。ヒト化抗体を産生するために、マ
ウスＣＤＲ領域を、当分野で知られた方法を使用してヒトフレームワークに挿入できる。
例えば、Winterの米国特許番号５２２５５３９およびQueen et alの米国特許５５３０１
０１；５５８５０８９；５６９３７６２および６１８０３７０参照。
ある態様において、本発明の抗体はヒトモノクローナル抗体である。Ｐ因子に対するこ
のようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を担持するトラ
ンスジェニックまたは染色体転移マウスを使用して産生できる。これらのトランスジェニ
ックおよび染色体転移マウスは、ここではそれぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと
呼び、ここでは纏めて“ヒトＩｇマウス”と呼ぶ。
ＨｕＭＡｂマウス(登録商標)(Medarex, Inc.)は、非再配列ヒト重(μおよびγ)および
κ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子微小遺伝子座を、不活
性化内因性μおよびκ鎖座である標的変異と共に含む(例えば、Lonberg, et al., 1994 N
ature 368(6474): 856-859参照)。従って、マウスはマウスＩｇＭまたはκの発現が低く
、免疫化に応答して、導入したヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子がクラス転換および体細胞
変異に付され、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナルを産生する(Lonberg, N. et al., 1
994 supra; reviewed in Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 1
13:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol.13: 65-93, and
Harding, F. and Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546参照)。ＨｕＭ
Ａｂマウスの産生および使用およびこのようなマウスで行うゲノム修飾は、さらにTaylor
, L. et al., 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et at., 1993 Int
ernational Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA 94:3720-3724; Choi et al., 1993 Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al., 1
993 EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al., 1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor
, L. et al., 1994 International Immunology 579-591; and Fishwild, D. et al., 199
6 Nature Biotechnology 14: 845-851に記載され、その内容全体を引用によりその全体を
特に本明細書に包含させる。さらに、米国特許５,５４５,８０６；５,５６９,８２５；５
,６２５,１２６；５,６３３,４２５；５,７８９,６５０；５,８７７,３９７；５,６６１,
０１６；５,８１４,３１８；５,８７４,２９９；および５,７７０,４２９；全てLonberg
およびKay；Surani et al.の米国特許番号５,５４５,８０７；全てLonbergおよびKayのＰ
ＣＴ公開番号ＷＯ９２１０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、Ｗ
Ｏ９７１１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４およびＷＯ９９／４５９６２；およびKorman
et alのＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４も参照のこと。
他の態様において、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グ
ロブリン配列を担持するマウス、例えばヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を
担持するマウスを使用して惹起できる。このようなマウスは“ＫＭマウス”と呼び、Ishi
da et alのＰＣＴ公開ＷＯ０２／４３４７８に詳述されている。
なおさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスジェニック動物系が当
分野で利用可能であり、本発明のＰ因子結合抗体の惹起に使用できる。例えば、Xenomous
e(Abgenix, Inc.)と呼ぶ代替トランスジェニック系を使用できる。このようなマウスは、
例えば、Kucherlapati et alの米国特許５,９３９,５９８；６,０７５,１８１；６,１１
４,５９８；６、１５０,５８４および６,１６２,９６３に記載されている。
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替染色体転移動物系が当分野で利用可
能であり、本発明のＰ因子結合抗体の惹起に使用できる。例えば、“ＴＣマウス”と呼ぶ
ヒト重鎖導入染色体およびヒト軽鎖導入染色体の両者を担持するマウスを使用でき、この
ようなマウスはTomizuka et al., (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727に記
載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を担持するウシが文献に記載され
ており(Kuroiwa et al., (2002) Nature Biotechnology 20:889-894)、本発明のＰ因子結
合抗体の惹起に使用できる。
ヒト本発明のモノクローナル抗体はまたヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをス
クリーニングするためのファージディスプレイ方法を使用しても製造できる。ヒト抗体を
単離するためのこのようなファージディスプレイ方法は当分野で確立され、下記実施例に
記載する。例えば：Ladner et al.の米国特許５,２２３,４０９；５,４０３,４８４；お
よび５,５７１,６９８；Dower et al.の米国特許５,４２７,９０８および５,５８０,７１
７；McCafferty et al.の米国特許５,９６９,１０８および６,１７２,１９７；およびGri
ffiths et al.の米国特許５,８８５,７９３；６,５２１,４０４；６,５４４,７３１；６,
５５５,３１３；６,５８２,９１５および６,５９３,０８１参照。
ヒト本発明のモノクローナル抗体はまた、ヒト免疫細胞が、ヒト抗体応答が免疫化によ
り産生されるように再構成されているＳＣＩＤマウスを使用しても製造できる。このよう
なマウスは、例えば、Wilson et al.の米国特許５,４７６,９９６および５,６９８,７６
７に記載されている。
フレームワークまたはＦｃ操作
改変された本発明の抗体は、例えば抗体の特性を改善するために、ＶＨおよび／または
ＶＬ内のフレームワーク残基に修飾されているものを含む。典型的にこのようなフレーム
ワーク修飾は、抗体の免疫原性を減らすために行う。例えば、一つの手法は、１個以上の
フレームワーク残基の対応する生殖系列配列への“復帰突然変異”である。より具体的に
、体細胞変異に付された抗体は、抗体が由来する生殖系列配列と異なるフレームワーク残
基を有し得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列と抗体が由来する生殖系列配
列の比較により同定できる。フレームワーク領域配列をその生殖系列配置に戻すために、
体細胞変異を、例えば、部位特異的突然変異誘発により生殖系列配列に“復帰突然変異”
させる。このような“復帰突然変異”抗体もまた本発明に包含されることを意図する。
他のタイプのフレームワーク修飾は、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜
在的免疫原性を減らすために、フレームワーク領域または１個以上のＣＤＲ領域内でさえ
１個以上の残基を突然変異させることを含む。この技法は“脱免疫原性化”と呼ばれ、Ca
rr et al.の米国特許公開２００３０１５３０４３にさらに詳述される。
フレームワークまたはＣＤＲ領域内で行われる修飾に加えてまたはそれとは別に、本発明
の抗体は、典型的に抗体の１個以上の機能的特性、例えば血清半減期、補体固定化、Ｆｃ
受容体結合および／または抗原依存性細胞毒性を変えるために、Ｆｃ領域内に修飾を含む
ように改変し得る。さらに、本発明の抗体は、同様に抗体の１個以上の機能的特性を変え
るために化学的修飾(例えば、１個以上の化学部分を抗体に結合できる)できまたはそのグ
リコシル化を変えるように修飾し得る。これらの態様の各々を下に詳述する。Ｆｃ領域の
残基の番号付けは、KabatのＥＵ指数である。
一つの態様において、ＣＨ１のヒンジ領域を、ヒンジ領域におけるシステイン残基数が
変わるように、例えば、増えるまたは得るように修飾する。この技法はさらにBodmer et
al.の米国特許番号５,６７７,４２５に記載される。ＣＨ１のヒンジ領域のシステイン残
基数を、例えば、軽鎖および重鎖の集合を促進するまたは抗体の安定性を上昇または減少
させるために変える。
他の態様において、抗体のＦｃヒンジ領域を、抗体の生物学的半減期を減らすように変
異させる。より具体的に、１個以上のアミノ酸変異を、抗体が天然Ｆｃ−ヒンジドメイン
ｐＡ結合に対してブドウ球菌性プロテインＡ(ＳｐＡ)結合が障害されるように、Ｆｃ−ヒ
ンジフラグメントのＣＨ２−ＣＨ３ドメイン界面領域に導入する。この技法はさらにWard
et al.の米国特許番号６,１６５,７４５に詳述される。
他の態様において、抗体は、その生物学的半減期を延長するように修飾する。種々の手
法が可能である。例えば、Wardの米国特許番号６,２７７,３７５に記載のとおり次の変異
の１個以上を導入できる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半
減期を延長するために、Presta et al.の米国特許５,８６９,０４６および６,１２１,０
２２に記載のとおり、抗体をＣＨ１またはＣＬ領域内で修飾して、ＩｇＧのＦｃ領域のＣ
Ｈ２ドメインの２ループから取ったサルベージ受容体結合エピトープを含むように変更で
きる。
さらに別の態様において、Ｆｃ領域を、抗体のエフェクター機能を変えるために少なく
とも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することにより変える。例えば、１
個以上のアミノ酸を、抗体のエフェクターリガンドに対する親和性が変わるが、親抗体の
抗原結合能力を維持するように異なるアミノ酸残基で置換する。親和性が変えられるエフ
ェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。この技法は
、Winter et al.の米国特許５,６２４,８２１および５,６４８,２６０にさらに詳述され
る。
他の態様において、アミノ酸残基から選択された１個以上のアミノ酸を、抗体のＣ１ｑ
結合が変えられおよび／または補体依存性細胞毒性(ＣＤＣ)が減らされるかまたはなくな
るように異なるアミノ酸残基で置換する。この技法は、Idusogie et al.の米国特許６,１
９４,５５１にさらに詳述される。
他の態様において、１個以上のアミノ酸残基を変え、それにより、抗体が補体を固定す
る能力を変える。この技法はBodmer et al.のＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに
詳述される。
さらに他の態様において、Ｆｃ領域を、１個以上のアミノ酸修飾により、抗体が抗体依
存性細胞毒性(ＡＤＣＣ)を仲介する能力を高めるおよび／または抗体のＦｃγ受容体に対
する親和性を高めるように修飾する。この技法はPrestaのＰＣＴ公開ＷＯ００／４２０７
２にさらに詳述される。さらに、ヒトＩｇＧ１のＦｃγＲｌ、ＦｃγＲII、ＦｃγＲIII
およびＦｃＲｎに対する結合部位は位置づけられており、結合が改善された変異体が記載
されている(Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604参照)。
さらに別の態様において、抗体のグリコシル化を修飾する。例えば、非グリコシル化抗
体(すなわち、グリコシル化を欠く抗体)を製造できる。グリコシル化は、例えば、抗体の
“抗原”への親和性を高めるために変え得る。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体
配列内の１箇所以上のグリコシル化部位を変えることにより達成できる。例えば、１個以
上の可変領域フレームワークグリコシル化部位を除き、それによりその部位でのグリコシ
ル化を無くすような１個以上のアミノ酸置換を行う。このような非グリコシル化は、抗原
に対する抗体の親和性を高める。このような手法は、Co et al.の米国特許５,７１４,３
５０および６,３５０,８６１にさらに詳述される。
これに加えてまたはこれとは別に、抗体は、グリコシル化のタイプが変わるように修飾
でき、例えばフコシル残基の量が少ない低フコシル化抗体または二分ＧｌｃＮａｃ構造が
多い抗体である。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を
高めることが証明されている。このような炭水化物修飾は、例えば、グリコシル化機構が
変更された宿主細胞での抗体の発現により達成できる。グリコシル化機構が変えられた細
胞は文献に記載され、組み換え本発明の抗体を発現し、それによりグリコシル化が変えら
れた抗体を産生する宿主細胞として使用できる。例えば、Hang et al.のＥＰ１,１７６,
１９５は、細胞株で発現された抗体が低フコシル化であるような、フコシルトランスフェ
ラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子が機能的に破壊された細胞株を記載する。PrestaのＰ
ＣＴ公開ＷＯ０３／０３５８３５は、フコースをＡｓｎ(２９７)結合炭水化物に結合させ
る能力が減少し、また宿主細胞で発現された抗体が低フコシル化である変異体ＣＨＯ細胞
株、Ｌｅｃｌ３細胞を記載する(またShields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:2
6733-26740参照)。Umana et al.のＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４３４２は、改変細胞株で発
現された抗体で二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加されるように糖タンパク質修飾グリコシルト
ランスフェラーゼ類(例えば、ベータ(１,４)−Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラ
ーゼIII(ＧｎＴIII))が改変された細胞株を記載し、これは抗体のＡＤＣＣ活性を高める(
また Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180参照)。
改変抗体の製造方法
ここに示すＶＨおよびＶＬ配列または完全長重鎖および軽鎖配列を有する本発明のＰ因
子結合抗体を使用して、完全長重鎖および／または軽鎖配列、ＶＨおよび／またはＶＬ配
列またはそれに結合する定常領域の修飾により新規Ｐ因子結合抗体を調製できる。それに
より、本発明の他の面において、本発明のＰ因子結合抗体の構造的特性を使用して、ヒト
Ｐ因子の結合およびまたＰ因子の１個以上の機能的特性の阻害のような本発明の抗体の少
なくとも１個の機能的特性を保持する構造的に関連するＰ因子結合抗体を調製する(例え
ば、ＭＡＣ沈着アッセイにおけるＭＡＣ沈着阻害、溶血アッセイにおける赤血球溶解阻害
)。
例えば、本発明の抗体の１個以上のＣＤＲ領域またはその変異体を既知フレームワーク
領域および／または他のＣＤＲと組み合え的に組み合わせて、さらなる組み換え操作され
た、上記本発明のＰ因子結合抗体を調製できる。他のタイプの修飾は先のセクションに記
載したものを含む。製造方法のための出発物質は、ここに提供するＶＨおよび／またはＶ
Ｌ配列の１個以上または１個以上のそのＣＤＲ領域である。改変抗体を製造するために、
実際ここに提供するＶＨおよび／またはＶＬ配列の１個以上または１個以上のそのＣＤＲ
領域を有する抗体の製造(すなわち、タンパク質としての発現)が必要である。むしろ、配
列に含まれる情報を出発物質として使用して、元の配列由来の“第二世代”配列を製造し
、次いで“第二世代”配列を製造し、タンパク質として発現させる。
したがって、他の態様において、本発明は、配列番号１、１５、２９、４３、５７、７
１、８５、９９、１１３、１２７、１４１、１５５、１６９、１８３、１９７、２１１、
２２５、２３９、２５３および２６７から成る群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号
２、１６、３０、４４、５８、７２、８６、１００、１１４、１２８、１４２、１５６、
１７０、１８４、１９８、２１２、２２６、２４０、２５４および２６８から成る群から
選択されるＣＤＲ２配列および／または配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８
７、１０１、１１５、１２９、１４３、１５７、１７１、１８５、１９９、２１３、２２
７、２４１、２５５および２６９から成る群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重鎖可
変領域抗体配列；および配列番号４、１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０２、１
１６、１３０、１４４、１５８、１７２、１８６、２００、２１４、２２８、２４２、２
５６および２７０から成る群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号５、１９、３３、４
７、６１、７５、８９、１０３、１１７、１３１、１４５、１５９、１７３、１８７、２
０１、２１５、２２９、２４３、２５７および２７１から成る群から選択されるＣＤＲ２
配列および／または配列番号６、２０、３４、４８、６２、７６、９０、１０４、１１８
、１３２、１４６、１６０、１７４、１８８、２０２、２１６、２３０、２４４、２５８
および２７２から成る群から選択されるＣＤＲ３配列を有する軽鎖可変領域抗体配列から
成るＰ因子結合抗体の製造方法であって、重鎖可変領域抗体配列および／または軽鎖可変
領域抗体配列内の少なくとも１個のアミノ酸残基を少なくとも１個の変更された抗体配列
を作るように変更し、変更された抗体配列をタンパク質として発現させることを含む、方
法を提供する。
したがって、他の態様において、本発明は、配列番号２８１、２８７、２９３、２９９
、３０５、３１１、３１７、３２３、３２９、３３５、３４１、３４７、３５３、３５９
、３６５、３７１、３７７、３８３、３８９および３９５から成る群から選択されるＣＤ
Ｒ１配列、配列番号２８２、２８８、２９４、３００、３０６、３１２、３１８、３２４
、３３０、３３６、３４２、３４８、３５４、３６０、３６６、３７２、３７８、３８４
、３９０および３９６から成る群から選択されるＣＤＲ２配列および／または配列番号２
８３、２８９、２９５、３０１、３０７、３１３、３１９、３２５、３３１、３３７、３
４３、３４９、３５５、３６１、３６７、３７３、３７９、３８５、３９１および３９７
から成る群から選択されるＣＤＲ３配列を有する重鎖可変領域抗体配列；および配列番号
２８４、２９０、２９６、３０２、３０８、３１４、３２０、３２６、３３２、３３８、
３４４、３５０、３５６、３６２、３６８、３７４、３８０、３８６、３９２および３９
８から成る群から選択されるＣＤＲ１配列、配列番号２８５、２９１、２９７、３０３、
３０９、３１５、３２１、３２７、３３３、３３９、３４５、３５１、３５７、３６３、
３６９、３７５、３８１、３８７、３９３および３９９から成る群から選択されるＣＤＲ
２配列および／または配列番号２８６、２９２、２９８、３０４、３１０、３１６、３２
２、３２８、３３４、３４０、３４６、３５２、３５８、３６４、３７０、３７６、３８
２、３８８、３９４および４００から成る群から選択されるＣＤＲ３配列から成るＰ因子
結合抗体の製造方法であって、重鎖可変領域抗体配列および／または軽鎖可変領域抗体配
列内の少なくとも１個のアミノ酸残基を少なくとも１個の変更された抗体配列を得るよう
に変更し、変更された抗体配列をタンパク質として発現させることを含む、方法を提供す
る。
したがって、他の態様において、本発明は、配列番号９、２３、３７、５１、６５、７
９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９
、２３３、２４７、２６１および２７５から成る群から選択される配列を有する完全長重
鎖抗体配列；および配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２
２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６
２および２７６から成る群から選択される配列を有する完全長軽鎖抗体配列からなる哺乳
動物細胞での発現のために最適化されたＰ因子結合抗体最適化の製造方法であって、完全
長重鎖抗体配列および／または完全長軽鎖抗体配列の少なくとも１個のアミノ酸残基を少
なくとも１個の変更された抗体配列を得るように変更し、変更された抗体配列をタンパク
質として発現させることを含む、方法を提供する。一つの態様において、重鎖または軽鎖
の変更は、重鎖または軽鎖のフレームワーク領域内である。
変更された抗体配列はまたＵＳ２００５０２５５５５２に記載のとおり固定されたＣＤ
Ｒ３配列または最小必須結合決定基およびＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列の多様性を有する
抗体ライブラリーのスクリーニングにより製造できる。スクリーニングは、抗体を抗体ラ
イブラリーからスクリーニングするのに適当なスクリーニング方法、例えばファージディ
スプレイ方法により実施できる。
標準的分子生物学技術を使用して、変更された抗体配列を製造および発現できる。変更
された抗体配列によりコードされる抗体は、ここに記載するＨＥＲ３結合抗体の機能的特
性の１個、いくつかまたは全てを維持し、該機能的特性は、ヒトおよび／またはカニクイ
ザルＰ因子への特異的結合を含むが、これらに限定されず、抗体は溶血アッセイにおいて
赤血球溶解を阻害する。
本発明の抗体の製造方法のある種の態様において、変異を無作為にまたは選択的にＰ因
子結合抗体コーディング配列の全てまたは一部に導入でき、得られた修飾Ｐ因子結合抗体
を、ここに記載するとおり結合活性および／または他の機能的特性についてスクリーニン
グできる。変異的方法は文献に記載されている。例えば、ShortのＰＣＴ公開ＷＯ０２／
０９２７８０は、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリまたはこれらの組み
合わせを使用する抗体変異の調製およびスクリーニング方法を記載する。あるいは、Laza
r et al.のＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、抗体の生理化学特性を最適化するため
のコンピュータ利用スクリーニング方法を記載する。
本発明のある態様において抗体は、脱アミドの部位を除去するように操作されている。
脱アミドはペプチドまたはタンパク質の構造的および機能的変化をもたらすことが知られ
ている。脱アミドは生理活性の減少、ならびにタンパク質医薬の薬物動態および抗原性を
変えることができる(Anal Chem. 2005 Mar 1;77(5):1432-9)。
改変抗体の機能的特性は、当分野で利用可能なおよび／またはここに記載する標準的ア
ッセイ、例えば実施例に記載のもの(例えば、ＥＬＩＳＡｓ)を使用して、評価できる。
予防および治療的使用
ここに記載するＰ因子と結合する抗体は、処置を必要とする対象に本発明の抗体または
抗原結合フラグメントの有効量を投与することにより、上昇した補体活性と関連する疾患
または障害の処置のための治療的に有用な濃度で使用できる。具体的態様において、本発
明は、処置を必要とする対照に本発明の抗体の有効量を投与することを含む、加齢黄斑変
性症(ＡＭＤ)の処置方法を提供する。
本発明の抗体は、特に、萎縮型ＡＭＤから滲出型ＡＭＤへの進行、地図状萎縮の進行の
遅延および／または阻止、黄斑性浮腫の予防または処置、ルセンティス注射頻度減少およ
び萎縮型および滲出型ＡＭＤ進行による視力喪失の阻止に使用できる。滲出型ＡＭＤ患者
の処置のために抗ＶＥＧＦ治療と組み合わせて使用もできる。
ＡＭＤのような眼疾患の処置および／または予防は、臨床的に関連する視覚機能の測定
および／または網膜解剖所見を使用して眼科医または医療専門家により決定できる。ＡＭ
Ｄの処置は、視覚機能および／または局所解剖所見の改善または保存をもたらす何らかの
作用(例えば、ここに記載する抗Ｐ因子抗体の投与)を意味する。さらに、予防は、ＡＭＤ
に関する限り、悪化の危険性のある患者における、下記視覚機能、網膜解剖所見および／
またはＡＭＤ疾患パラメータの悪化の予防または遅延をする何らかの作用(例えば、ここ
に記載する抗Ｐ因子抗体の投与)を意味する。
視覚機能は、例えば、視力、低照度での視力、視野、中心視野、末梢視覚、コントラス
ト感受性、暗順応、光ストレス回復、色の識別、読む速度、補助器具への依存度(例えば
、大活字書体、拡大デバイス、望遠鏡)、顔認識、動力者操作時の熟達、日常生活の１つ
以上の活動の実行能力および／または患者が報告する視覚機能に関する満足度であり得る
。それゆえに、ＡＭＤの処置は、対象で予め特定した暗順応の程度が少なくとも１０％減
少したときまたは１０％以上の時間を要するときに実施されるということができる。さら
に、ＡＭＤの処置は、認定医療専門家(すなわち、眼科医)が決定して、視覚角として表し
て中心視野暗点が少なくとも１０％減少したときまたは１０％以上の総領域が欠けたとき
に実施されるということができる。
視覚機能測定の例は、Snellen視力、ＥＴＤＲＳ視力、低照度視力、アムスラーグリッド
、Goldmann視野、Humphrey視野、微小視野検査、ペリ−ロブソン・チャート、ＳＫＩＬＬ
カード、石原式色覚検査表、Farnsworth D15またはD100色試験および読む速度、顔認識、
模擬運転についての確認された試験および患者の報告する満足度を含む。それゆえに、Ａ
ＭＤの処置は、ＥＴＤＲＳスケールで視覚の２段階以上(または１０文字)の獲得または喪
失により達成されたということができる。さらに、ＡＭＤの処置は、対象の読む速度(文
字／分)が少なくとも１０％増加したまたは１０％以上の減少を欠くときに実施されると
いうことができる。さらに、ＡＭＤの処置は、対象が石原試験のまたはFarnsworth試験の
配列ディスク上の正確に同定したプレートの割合が少なくとも２０％増加するまたは２０
％減少を欠くときに実施されるということができる。
処置または予防し得る網膜解剖所見の望ましくない面は、例えば、ドルーゼン、軟ドル
ーゼン、硬ドルーゼン、角質ドルーゼン、基底層状ドルーゼン、集密的ドルーゼン、大ド
ルーゼン(例えば、直径１２５ミクロン以上)、ＲＰＥ萎縮、光受容体萎縮、地図状萎縮、
脈絡膜新生血管、網膜下血管新生、網膜血管新生、古典的脈絡膜新生血管、潜在性脈絡膜
新生血管、網膜血管腫増殖、脈絡網膜性吻合、脈絡膜解剖所見異常、網膜下出血、網膜内
出血、硝子体出血、黄斑性瘢痕、網膜下線維症および網膜線維症を含む。それゆえに、例
えば、地図状萎縮の処置は、対照または同じ対象の同じ眼の先に報告された増殖速度と比
較した病変における増殖速度の２０％以上の減少により決定できる。
網膜解剖所見を評価する方法の例は眼底検査、眼底撮影法、蛍光眼底造影、インドシア
ニングリーン蛍光眼底撮影法、光干渉断層撮影(ＯＣＴ)、スペクトラルドメイン光干渉断
層撮影、走査型レーザー検眼鏡、共焦点顕微鏡、補償光学、眼底自発蛍光、組織診、剖検
および免疫組織化学を含む。それゆえに、ＡＭＤは、ＯＣＴで測定した黄斑性厚の１０％
減少および／または蛍光眼底造影で測定した過蛍光の減少により対象において処置された
ということができる。
網膜解剖所見の測定例は、ドルーゼン面積、ドルーゼン体積、地図状萎縮病変面積、地
図状萎縮増殖速度および新血管膜面積を含む。
ある態様において、本発明は、処置を必要とする対象に本発明の抗体の有効量を投与す
ることによる、補体関連疾患または障害の処置方法を提供する。既知補体関連疾患または
障害の例は、神経障害、多発性硬化症、卒中、ギランバレー症候群、外傷性脳傷害、パー
キンソン病、不適切なまたは望ましくない補体活性化の障害、血液透析合併症、超急性同
種移植片拒絶反応、異種移植拒絶反応、インターロイキン−２治療中のＩＬ−２誘発毒性
、炎症性障害、自己免疫性疾患の炎症、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、熱傷または凍
傷を含む熱的傷害、虚血後再灌流状態、心筋梗塞、バルーン血管形成術、心肺バイパスま
たは腎臓バイパスにおけるポンプ後症候群、血液透析、腎臓虚血、皮膚腺再構築後の腸間
膜動脈再灌流、感染性疾患または敗血症、免疫複合体障害および自己免疫性疾患、リウマ
チ性関節炎、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、ＳＬＥ腎炎、増殖性腎炎、溶血性貧血お
よび重症筋無力症を含む。さらに、他の既知の補体関連疾患は、呼吸困難、喀血、ＡＲＤ
Ｓ、喘息、慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、気腫、肺塞栓症および梗塞、肺炎、線維形成粉
塵疾患、不活性粉塵および鉱物(例えば、シリコン、石炭塵、ベリリウムおよびアスベス
ト)、肺線維症、有機粉塵疾患、化学傷害(刺激性ガスおよび化学物、例えば、塩素、ホス
ゲン、二酸化硫黄、硫化水素、二酸化窒素、アンモニアおよび塩酸)、煙傷害、熱的傷害(
例えば、熱傷、凍傷)、喘息、アレルギー、気管支収縮、過敏性肺炎、寄生虫疾患、グッ
ドパスチャー症候群、肺脈管炎および免疫複合体関連炎症のような肺疾患および障害であ
る。
具体的態様において、本発明は、処置を必要とする対象に本発明の抗体の有効量を投与
することを含む補体関連疾患または障害の処置方法を提供し、ここで、該疾患または障害
は喘息、関節炎(例えば、リウマチ性関節炎)、自己免疫性心臓疾患、多発性硬化症、炎症
性腸疾患、虚血−再灌流傷害、バラケル−ジーモンス症候群、血液透析、全身性狼瘡、エ
リテマトーデス、乾癬、多発性硬化症、移植、アルツハイマー病および他の神経変性状態
のような中枢神経系の疾患、ａＨＵＳ、糸球体腎炎、類天疱瘡またはＭＰＧＮ IIである
。
具体的態様において、本発明は、処置を必要とする対象に本発明の抗体を含む組成物の
有効量を投与することによる、糸球体腎炎の処置方法を提供する。糸球体腎炎の症状は、
タンパク尿；糸球体濾過速度(ＧＦＲ)減少；高血圧および浮腫をもたらす水保持にいたる
高窒素血症(尿毒症、過剰な血中尿窒素−ＢＵＮ)および塩保持を含む血清電解質変化；赤
血球円柱を含む血尿および異常尿沈渣；低アルブミン血症；高脂血症；および脂肪尿を含
むが、これらに限定されない。具体的態様において、本発明は、処置を必要とする対象に
本発明の抗体を含む組成物の有効量を投与することによる、発作性夜間ヘモグロビン尿(
ＰＮＨ)の処置方法を提供する。
具体的態様において、本発明は、処置を必要とする対象に本発明の抗体を含む組成物の
有効量を投与することによる、外循環と関連する免疫および止血系の機能不全を減少する
方法を提供する。本発明の抗体は、患者血液を患者の血管から、導管を通って循環させ、
患者の血管に戻すことを含むあらゆる過程に使用でき、導管は補体活性化、血小板活性化
、白血球活性化または血小板−白血球接着の少なくとも一つを誘発できる物質を含む管腔
表面を有する。このような工程は、全ての形態のＥＣＣ、ならびに人工または外来臓器、
組織または血管を患者の血液循環に導入することを含む方法を含むが、これらに限定され
ない。
本発明の治療剤で処置する対象は、黄斑変性症と関連する状態を処置する方法が知られ
ている他の治療剤、例えば、米国特許番号６,２１８,３６８に記載の抗生物質処置も問う
よできる。他の処置において、シクロスポリンのような免疫抑制性剤は、免疫応答を抑制
できる薬剤である。これらの薬剤は、細胞毒性剤、コルチコステロイド、非ステロイド性
抗炎症剤(ＮＳＡＩＤｓ)、特異的Ｔリンパ球免疫抑制剤および抗体またはそのフラグメン
トを含む(Physicians’ Desk Reference, 53rd edition, Medical Economics Company In
c., Montvale, N.J. (1999)参照)。免疫抑制性処置は、典型的に１週間、１ヶ月、３ヶ月
、６ヶ月または１年の間隔で継続する。ある患者において、処置を患者が死ぬまで投与す
る。
本発明の治療剤を他の薬剤と共に投与したとき、２剤を任意の順番で連続的または同時
に投与できる。ある面において、本発明の抗体を、また第二財(例えば、ベルテポルフィ
ン)での処置も受けている対象に投与する。他の面において、結合分子を外科的処置と関
連して投与する。
Ｐ因子結合抗体との組み合わせ処置のための適切な薬剤は、補体成分の活性を調節でき
ることが知られている薬剤を含む(例えば、米国特許番号５,８０８,１０９参照)。他の薬
剤は補体介在活性を減少と報告されている。このような薬剤は、アミノ酸(Takada, Y. et
al. Immunology 1978, 34, 509)；ホスホネートエステル類(Becker, L. Biochem. Bioph
y. Acta 1967, 147, 289)；ポリアニオン性物質(Conrow, R. B. et al. J. Med. Chem. 1
980, 23, 242)；スルホニルフルオライド類(Hansch, C.;Yoshimoto, M. J. Med. Chem. 1
974, 17, 1160およびそこに引用されている引用文献)；ポリヌクレオチド(DeClercq, P.
F. et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975, 67, 255)；ピマール酸(Glovsky, M.
M. et al. J. Immunol. 1969, 102, 1)；ポルフィン類(Lapidus, M. and Tomasco, J. Im
munopharmacol. 1981, 3, 137)；いくつかの抗炎症剤(Burge, J. J. et al. J. Immunol.
1978, 120, 1625)；フェノール類(Muller-Eberhard, H. J. 1978, in Molecular Basis
of Biological Degradative Processes, Berlin, R. D. et al., eds. Academic Press,
New York, p. 65)；およびベンズアミジン類(Vogt, W. et al Immunology 1979, 36, 138
)を含む。これらの薬剤のいくつかは、プロテアーゼおよびエステラーゼの一般的阻害に
より機能する。その他は補体経路における何らかの特定の中間工程に特異的ではなく、む
しろ、補体活性化の１工程以上を阻害する。後者の化合物の例は、Ｃ１、Ｃ４およびＣ３
ｂ利用を阻害するベンズアミジン類を含む(例えば、Vogt et al. Immunol. 1979, 36, 13
8参照)。
補体成分活性を阻害することが知られているさらなる薬剤は、スタキボトリス属の真菌
代謝物であるＫ−７６である(Corey et al., J. Amer. Chem. Soc. 104:5551, 1982)。Ｋ
−７６およびＫ−７６ ＣＯＯＨのいずれも、補体を主にＣ３ｂ工程で阻害することが示
されており(Hong et al., J. Immunol. 122:2418, 1979;Miyazaki et al., Microbiol. I
mmunol. 24:1091, 1980)、正常ヒト補体で走化性因子の産生を阻害することが示されてい
る(Bumpers et al., Lab. Clinc. Med. 102:421, 1983)。高濃度のＫ−７６またはＫ−７
６ ＣＯＯＨで、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ７およびＣ９とそのそれぞれの前の中間体との反
応の幾分環阻害が示される。Ｋ−７６またはＫ−７６ ＣＯＯＨはまた補体アクティベー
ター系におけるＣ３ｂを阻害するとも報告されている(Hong et al., J. Immunol. 127:10
4-108, 1981)。本発明の方法の実施に際し他の適切な薬剤は、グリセオフルビン(Weinber
g, in Principles of Medicinal Chemistry, 2d Ed., Foye, W. O., ed., Lea & Febiger
, Philadelphia, Pa., p. 813, 1981)、イソパンナリン(Djura et al., Aust. J. Chem.3
6:1057, 1983)およびSiphonodictyon coralliphagumの代謝物(Sullivan et al., Tetrahe
dron 37:979, 1981)を含む。
組み合わせ治療レジメンは、相化的であってよく、症状的結果を生じることもある(例
えば、２剤の組み合わせ使用により予測される以上の補体経路活性減少)。ある態様にお
いて、本発明は、本発明のＰ因子結合抗体および抗血管形成、例えば抗ＶＥＧＦ剤または
他の抗補体抗体、例えば補体因子５(Ｃ５)と結合する抗体またはその抗原結合フラグメン
トによる、上記ＡＭＤまたは他の補体関連疾患の予防および／または処置のための組み合
わせを提供する。
抗補体抗体の組み合わせ
一つの面において、本発明は、任意の１個以上の抗Ｐ因子と補体経路の他の成分と結合
し、活性を阻害する付加的抗体の組み合わせを提供する。特に、本発明は、補体成分５(
Ｃ５)と結合する抗体または抗原結合フラグメントと組み合わせた任意の１個以上の抗こ
こに記載するＰ因子抗体または抗原結合フラグメントを含む。Ｃ５に結合し、補体活性化
を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントの例は、例えば米国特許８,２４１,６２
８(引用により本明細書に包含させる)に見ることができる。より具体的に、Ｃ５と結合し
、補体経路を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントを表２に示し、記載する。一
つの面において、本発明は、表１に示し、記載する抗Ｐ因子抗体またはその抗原結合フラ
グメントと表２からの抗Ｃ５抗体８１０９の組み合わせに関する。より具体的に、本発明
の一つの面は、表１からの抗体ＮＶＳ９６２(またはその抗原結合フラグメント)と表２か
らの抗体８１０９(またはその抗原結合フラグメント)の組み合わせに関する。
一つの面において、ここに記載する抗Ｐ因子および抗Ｃ５抗体の組み合わせは補体経路
、特に代替補体経路の相乗的阻害を証明する。このような阻害は、例えば、下記実施例に
記載する溶血またはポリ−ＩＣアッセイにより証明できる。ここに記載する抗Ｐ因子およ
び抗Ｃ５抗体の組み合わせの使用により達成される代替補体経路阻害における相乗は、当
分野で周知の方法を使用して決定できる。例えば、抗Ｐ因子抗体および抗Ｃ５抗体の相乗
効果は、Chalice Analyzerのような特定のソフトウェアを使用して単なる相加に対して決
定できる。
要約すると、Chalice Analyzer(Lehar et al, Nature Biotechnology 2009, 7:659)ソ
フトウェアを使用して、補体阻害抗体(例えば、抗Ｐ因子および抗Ｃ５)が、補体活性化遮
断に対して相乗的に作用するか否かを決定できる。組み合わせ効果は、単剤曲線に基づく
組み合わせ参照モデルと、各データ点の比較により特徴付けることができる(Greco, Brav
o, Parsons (1995). The search for synergy: a critical review from a response sur
face perspective. Pharmacol Rev 47(2): 331-85)。Loewe加算性モデル(Loewe (1928).
Die quantitativen Probleme der Pharmakologie. Ergebn. Physiol. 27: 47-187)におい
て、ＩLoewe(ＣＸ,ＣＹ)は、(ＣＸ／ＩＣＸ)＋(ＣＹ／ＩＣＹ)＝１を満たす阻害であり、
ＩＣＸ,Ｙは、適合単剤曲線のＩLoeweでの有効濃度である。Loewe加算性は、ＸおよびＹ
が同じ化合物であるときに産生された組み合わせ応答を表すため、相乗性の一般的に認め
られた参照である(Greco et al.)。
効力変化を、通常、同じ効果に到達するのに必要な単剤と比較したときに、所望の効果
レベルに到達するのに必要な薬剤がどの程度少ないかを示すアイソボログラム(Greco et
al.)を使用して示す。アイソボログラム表示および組み合わせ指数計算のための効果レベ
ルの選択は、手動でも、Chalice Analyzerで自動に選択させてもよい。自動等レベル選択
アルゴリズムは、観察したＩデータを最大Ｉデータ−ＩLoeweと共に発見し、少ない単剤
Ｉｍａｘを超えるＩデータのデータ点を除外する。この除外は、アイソボログラムが両方
の単剤によりカバーされるレベルで最良の相乗性を反映することを確実にするために適用
する。アイソボログラムレベルＩｃｕｔの選択で、アイソボログラムは、選択した等レベ
ルとの交差に対応する濃度の位置を同定することにより描かれる。アイソボログラムは、
Loewe用量相加的“薬物それ自体”標準と比較した、相乗性の標準的アイソボログラム解
析を示す。特定したアイソボログラムレベルについて、観察された等効果カウンター(例
えば、図３における曲線)を理論的用量相加カウンター(例えば、図３における直線)と、
組み合わせの両物質のＩＣ効果標準化直線濃度スケール上に示す。用量相加参照は、常に
２個のＩＣ効果濃度を接続する線である。ＩＣ効果交差点は、近似シグモイド用量応答曲
線の内挿により見ることができる。
効力変化を組み合わせ指数ＣＩとしてスコア化する(Chou, Talalay (1984). Quantitat
ive analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drug
s or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22: 27-55)。選択した等効果レベルＩｃｕ
ｔについて、ＣII＝(ＣＸ／ＥＣＸ)Ｉ＋(ＣＹ／ＥＣＹ)Ｉ(式中、特定のデータ点の(ＣＸ
／ＥＣＸ)Ｉは選択阻害レベルでのその有効濃度に対するＸ化合物の測定濃度の比である)
である。ＣＩは、どの程度の薬剤が選択した効果レベルを達成するために単剤に対して組
み合わせで必要であるかを概算すると考えることができ、０.１の値は、単剤のわずか１
／１０当量が同じ効果レベルを達成するために必要であったことを意味する。０.５〜０.
７の範囲のＣＩ値が、現在の臨床組み合わせのインビトロ測定で典型的である(Greco et
al.)。１.０のＣＩ値は抗体の組み合わせの相加効果の指標であり、一方０.５未満のＣＩ
値は、抗体組み合わせから得られる強い相乗効果の指標である。Chalice Analyzerにおい
て、最高ＣＩが、各Ｉｃｕｔ交差濃度について計算した多くの組み合わせ指数値から報告
される。全測定ＣＩ値の中で、最大シグナル対ノイズレベルを最高組み合わせ指数として
記載する。
ここに記載する抗Ｐ因子および抗Ｃ５抗体の組み合わせは、個々にまたは一組成物とし
て投与してよい。さらに、ｒ抗Ｐ因子および抗Ｃ５抗体の相対量は１：１比であってよく
、異なる比でもよい。抗Ｃ５抗体に対する抗Ｐ因子抗体の特定の量は、最終的に処置医ま
たは医療専門家が処置する病態の改善を達成するために選択してよい。例えば、ここに記
載する組み合わせをＡＭＤ処置に使用するとき、医師または医療専門家は、ここに記載す
る測定および基準を使用して決定して、最適治療利益を達成するために、抗Ｐ因子および
抗Ｃ５抗体の相対量を調整してよい。
医薬組成物
本発明は、薬学的に許容される担体と製剤されたＰ因子結合抗体(インタクトまたは結
合フラグメント)を含む医薬組成物を提供する。組成物は、さらに、例えば、病的血管新
生または腫瘍増殖の処置または予防に適切な、１種以上の他の治療剤を含み得る。薬学的
に許容される担体は、組成物を亢進または安定化でき、または組成物の製造を容易にする
ために使用できる。薬学的に許容される担体は、生理学的に適合性である溶媒、分散媒体
、コーティング、抗細菌および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。
本発明の医薬組成物は、当分野で知られる種々の方法により投与できる投与経路および
／または方法は所望の結果により変わる。硝子体内、静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下
への投与または標的部位の近位への投与が好ましい。薬学的に許容される担体は、硝子体
内、静脈内、筋肉内、皮下、非経腸、脊髄または上皮投与(例えば、注射または注入によ
る)が好ましい。投与経路によって、活性化合物、すなわち、抗体、二重特異性および多
選択性分子を、該化合物を不活性化し得る酸および他の条件の活性から化合物を守るため
に物質でコーティングしてよい。
組成物は無菌および液体でなければならない。適切な流動性は、例えば、レシチンのよ
うなコーティングの使用により、分散剤の場合必要な粒子径の維持によりおよび界面活性
剤の使用により維持できる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、マンニトールまたはソ
ルビトールのようなポリアルコール類および塩化ナトリウムを組成物に包含させることが
好ましい。注射可能組成物の長期吸収は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、例えば、ステ
アリン酸アルミニウムまたはゼラチンを包含させることにより達成できる。
本発明の医薬組成物は、当分野で周知のおよび当分野で日常的に実施されている方法に
従い製造できる。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Pu
blishing Co., 20th ed., 2000; and Sustained and Controlled Release Drug Delivery
Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978参照。医薬組成
物は、好ましくはＧＭＰ条件下に製造する。典型的に、治療的有効量または有効量のＰ因
子結合抗体を本発明の医薬組成物に用いる。Ｐ因子結合抗体を、当業者に知られた慣用法
により薬学的に許容される投与形態に製剤する。投与量レジメンを、最適な所望応答(例
えば、治療応答)を提供するように調節する。例えば、単回ボーラスを投与してよく、数
回の分割投与量を一定時間かけて投与してよくまたは投与量を治療状況の緊急度により示
されるように徐々に減らしても増やしてもよい。非経腸組成物を投与の容易さおよび投与
量の均一さのために投与量単位形態に製剤するのが特に有利である。ここで使用する投与
量単位形態は、処置する対象への均一投与に適した物理的に分けられた単位を言い、各単
位は、所望の治療を生じると計算された予め決定された量の活性化合物を必要な医薬担体
と共に含む。
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性ではなく、特定
の患者、組成物および投与方法で所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量を得
るために、変わり得る。選択した投与量は、用いる特定の本発明の組成物またはそのエス
テル、塩またはアミドの活性、投与時間、用いる特定の化合物の排泄速度、処置期間、他
の薬物、用いる特定の組成物と組み合わせて使用する化合物および／または物質、処置す
る患者の年齢、性別、体重、状態、一般的状態および薬歴などの医学分野で知られた因子
を含む、多様な薬物動態因子による。
医師または獣医師は、医薬組成物中で用いる本発明の抗体を、所望の治療効果が達成さ
れるのに必要であるより低いレベルを用いて開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に
投与量を増やし得る。一般に、ここに記載するアレルギー性炎症性障害の処置のための本
発明の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトである
か動物であるか、他の併用剤および処置が予防的であるか治療的であるかを含む多くの多
様な因子により変わる。処置投与量は安全性および有効性を最適化するためにタイトレー
ションする必要がある。抗体の全身投与について、投与量は約０.０００１〜１００mg／k
g、より一般にには０.０１〜１５mg／kg宿主体重の範囲であり得る。抗体の硝子体内投与
について、投与量は０.１mg／眼〜５mg／眼の範囲であり得る。例えば、０.１mg／ml、０
.２mg／ml、０.３mg／ml、０.４mg／ml、０.５mg／ml、０.６mg／ml、０.７mg／ml、０.
８mg／ml、０.９mg／ml、１.０mg／ml、１.１mg／ml、１.２mg／ml、１.３mg／ml、１.４
mg／ml、１.５mg／ml、１.６mg／ml、１.７mg／ml、１.８mg／ml、１.９mg／ml、２.０mg
／ml、２.１mg／ml、２.２mg／ml、２.３mg／ml、２.４mg／ml、２.５mg／ml、２.６mg／
ml、２.７mg／ml、２.８mg／ml、２.９mg／ml、３.０mg／ml、３.１mg／ml、３.２mg／ml
、３.３mg／ml、３.４mg／ml、３.５mg／ml、３.６mg／ml、３.７mg／ml、３.８mg／ml、
３.９mg／ml、４.０mg／ml、４.１mg／ml、４.２mg／ml、４.３mg／ml、４.４mg／ml、４
.５mg／ml、４.６mg／ml、４.７mg／ml、４.８mg／ml、４.９mg／mlまたは５.０mg／ml。
処置レジメの例は、２週間毎または月１回または３〜６ヶ月毎の全身投与を必要とする。
処置レジメの例は、２週間毎または月１回または３〜６ヶ月の全身投与を必要とする。
抗体は、通常複数回投与する。各投与の間隔は週、月または年であり得る。患者のＰ因
子結合抗体の毛中レベルの測定により示されるとおり間隔は不定期であってもよい。さら
に、別の投与間隔が医師により決定されてよく、毎月または有効であるための必要に応じ
て投与される。有効性は病変増殖、ルセンティスレスキューの割合、スペクトラルドメイ
ン光干渉断層撮影(ＳＤ−ＯＣＴ)で決定した網膜厚および二次的視力に基づく。全身投与
のいくつかの方法において、１〜１０００μg／ml、ある方法では２５〜５００μg／mlの
血漿抗体濃度を達成するように投与量を調節する。あるいは、抗体を徐放性製剤として投
与でき、この場合、少ない頻度の投与が必要である。投与量および頻度は、患者の抗体半
減期により代わる。一般に、ヒト化抗体はキメラ抗体および非ヒト抗体より長い半減期を
示す。投与量および投与頻度は処置が予防的であるかまたは治療的であるかにより変わる
。予防適用において、相対的に低投与量を、相対的に低頻度で、長期間にわたり投与する
。ある患者は、死ぬまで処置を受け続ける。治療的適用において、相対的に高投与量を、
相対的に短い間隔が、疾患進行が減少するまたは停止するまで、好ましくは患者が疾患症
状の部分的または完全な改善を示すまで必要であることがある。その後、患者に予防的レ
ジメを投与してよい。
次の実施例は本発明をさらに説明するために提供するが、その範囲に限定されない。本
発明の他の変法が当業者には容易に明らかであり、添付する特許請求の範囲に包含される
。
実施例１：親和性成熟Ｐ因子抗体の産生
完全なヒトファージ表示ライブラリーを使用して、ここに記載するＰ因子結合抗体を産
生した。
ビオチニル化および非ビオチニル化ヒトおよびカニクイザルＰ因子を溶液および固相パ
ニングに使用した。標準的パニングをＲａpMＡＴ手法と同様行った(Prassler et al., (2
009) Immunotherapy 1(4):571-583)。親和性成熟後(Knappik et al., (2000) J.Mol.Biol
., 296:57-86)、一連の１０抗体をその後ジスルフィド架橋Ｆａｂ形式への変換のために
選択した。得られたジスルフィド架橋Ｆａｂｓを表１に示す(ＮＶＳ９６２、ＮＶＳ９６
３、ＮＶＳ９６４、ＮＶＳ９６５、ＮＶＳ９６６、ＮＶＳ９６７)。
実施例２：さらなる抗体最適化
次の実施例は、ここに記載する抗体のさらなる最適化に使用し得る方法を記載する。
脱アミド部位の除去
脱アミド部位を、還元状態で行ったペプチド位置づけおよび分子ふるいクロマトグラフ
ィー(ＳＥＣ)により同定した。脱アミド物質はＭＡＣ沈着アッセイにおいて効果が減少し
、BiacoreおよびＳＥＴで測定して、ヒトおよびカニクイザルＦＰに対する親和性が減少
している。脱アミドの程度は経時的(３週間)、高温度(５日間、３７Ｃ)および還元条件下
に増加した。脱アミドをイオン交換カラムを使用して検出でき、複数ピークおよび付加的
脱アミドピークの観察をもたらす。最も脱アミドされやすいアミノ酸配列はＳＮＧ、ＬＮ
Ｇ、ＬＮＮ、ＥＬＮである(Daugherty, A. and Mrsny, R. (2010) Current Trends in Mo
noclonal Antibody Development and Manufacturing. Springer. p103-129)。したがって
、我々は、脱アミド部位を除去し、機能保持について修飾抗体を試験するため一連の試験
をした。
２個のＦａｂｓ、ＮＶＳ９６２およびＮＶＳ９６５を、重鎖の脱アミド部位、特異的に
３０位にあるアスパラギンを置換するために再設計した。次の新規Ｆａｂｓを産生して脱
アミド部位を除去し、対応するアミノ酸置換を表２に示す。
産生したさらなるＦａｂは、Ｆａｂ ＮＶＳ９６２におけるセリン３１をアラニンで置
換し、Ｆａｂ ＮＶＳ９６２−Ｓ３１Ａを産生した。修飾されたＦａｂｓの配列は表１に
示す。
開裂部位の除去
さらに最適化をＮＶＳ９６２−ＳおよびＮＶＳ９６５−Ｓで行って、重鎖ＣＤＲ３にお
ける開裂部位を除去した。特異的に、重鎖をＹ１０２Ｓ１０３で開裂した。下記表は開裂
部位破壊のために行ったアミノ酸置換を記載する。修飾されたＦａｂｓの配列は表１に示
す。
実施例３：最適化抗体の特徴づけ
次の実施例は、抗体親和性の測定に使用し得る方法を記載する。これらおよび他の結合
親和性測定法は当分野で知られている。
親和性決定
Ｐ因子の抗体親和性を、Biacore T200(Biacore)を使用する表面プラズモン共鳴(ＳＰＲ
)および溶液平衡滴定(ＳＥＴ)により測定した。Ｐ因子結合についての各技術および対応
する平均結果を下に記載する。モデリング仮定は、系中のＰ因子濃度、Ｐ因子生合成の動
態および半減期、ならびに所望の投与スケジュールを考慮に入れて、Ｐ因子に対して５０
０pMより大きい親和性のＦａｂが遊離Ｐ因子レベル低下に十分であることを示唆する。
Biacore決定
相互作用の動態、すなわち複合体形成(ｋａ)および解離(ｋｄ)の速度をセンサーグラム
の情報から決定できる。サンプルが調製したセンサー表面を通過するとき結合が起こるな
らば、センサーグラムの応答は増加する。平衡に達したならば、一定シグナルが見られる
。サンプルを緩衝液で置き換えると、結合分子が解離し、応答が減少する。Biacore評価
ソフトウェアは、相互作用モデルにデータを適合させることによりｋａおよびｋｄの値を
得る(表４)。
Biacore動態実験を、ＣＭ５センサーチップ(GE Healthcare、BR-1005-30)を使用するBi
acore T100(GE Healthcare)で２５℃で行った。流動緩衝液はＨＢＳ−ＥＰ(＋)(GE Healt
hcare、BR-1001-88)であった。要約すると、結合親和性決定のために次の工程を行った。
・ 抗ＦＰ ＩｇＧ固定化センサーチップ製造：マウス抗ＦＰモノクローナル抗体(Quide
l、Ａ２３５)(アセテートｐＨ５.０カップリング緩衝液(GE Healthcare、BR-1003-51)中
３０μg／ml)を、ＣＭ５チップ上の２個のフローセル(Ｆｃ１および２)に１０μl／分の
流速で６００秒、製造者の指示に従うアミノカップリング法を使用してカップリングさせ
た(GE Healthcare、BR-1000-50)。最終固定化レベルは＞７０００ＲＵであった。
・ 第二フローセルへのＦＰ捕捉：流動緩衝液中１μg／mlのＦＰを１０μl／分で第二フ
ローセル(Ｆｃ２)に注入し、Ｆａｂのための捕捉レベル〜２０ＲＵまたはＩｇＧ動態分析
のための〜７ＲＵに到達させた。
・ 両フローセルへの種々の濃度の抗ＦＰ ＦａｂまたはＩｇＧ注入：両フローセル(Ｆ
ｃ１および２)に抗ＦＰ溶液(流動緩衝液中０.３１２５nM〜１０nM；１：２連続希釈)を６
０μl／分で２４０秒注入。
・ 解離：ＨＢＳ−ＥＰ(＋)流動緩衝液を６０μl／分で両フローセルに注入し、ＦＰと
抗ＦＰ Ｆａｂ／ＩｇＧの解離をモニター。解離時間を５nMおよび２.５Ｍ Ｆａｂ／Ｉ
ｇＧ濃度では２４００秒および別の５nM Ｆａｂ／ＩｇＧ濃度を含む他の全濃度で３００
秒に設定した。
・ 再生：再生を、両フローセルで各サイクルの最後に１０mM グリシン−ＨＣｌ ｐＨ
１.７(GE Healthcareにより提供)＋０.０５％Ｐ２０ 界面活性剤(GE Healthcare、BR-10
00-54)で流速６０μl／分で１５秒、２回行った。
・ 動態分析：動態速度定数を、１：１結合モデルをBIAevaluation 1.1ソフトウェアに
適合させることにより得て、ここで、Ｒｍａｘ値を局所的に適合させた。
Biacore結合動態決定の結果を表４に示す。示されるとおり、ここに記載する抗体はヒ
トＰ因子に対し高親和性結合を示し、ＫＤ値は典型的に１nM以下、多くの場合２００pM以
下であった。これらの抗体はまたカニクイザルＰ因子に極めて高い親和性を示す(結合親
和性５００pM未満)。
ＳＥＴ決定
ＳＰＲのようなセンサー表面を使用する動態アッセイとは対照的に、ＳＥＴは、溶液で
の親和性を決定する方法である。動態データを送達しない平衡測定である。
ＳＥＴにおいて、一定量の抗体を種々の濃度の抗原と、平衡に達するまでインキュベー
トする。平衡化溶液中の遊離抗体濃度を、溶液を抗原被覆ＭＳＤＴＭプレート(Meso Scal
e DiscoveryＴＭ)に適用し、続いてＥＣＬ標識二次的抗体とインキュベートし、シグナル
強度を測定することにより決定する。低抗原濃度で、強シグナルが達成され(プレート上
の抗原と結合する高濃度の遊離抗体)、高抗原濃度については、抗体が完全に抗原捕捉さ
れ、低シグナルとなる。マッチング範囲での十分な数の抗原濃度が利用可能であるならば
、適当な適合モデルを使用して、滴定曲線は親和性の合理的決定を可能にする。完全滴定
のために、予測ＫＤの少なくとも１０倍高い抗原濃度を適用する。アッセイに適用する抗
体の一定濃度はＫＤの範囲またはそれより下でなければならない(表４)。
溶液平衡滴定(ＳＥＴ)でのＫＤ決定のために、抗体タンパク質の単量体フラクションを
使用した(少なくとも９０％単量体含量、分析的ＳＥＣにより分析；ＦａｂについてはSup
erdex75 (Amersham Pharmacia)またはＩｇＧについてはTosoh G3000SWXL(Tosoh Bioscien
ce))。
溶液での親和性決定を基本的に文献に記載のとおり行った(Friguet et al. 305-19)。
ＳＥＴ方法の感受性および精度を改善するために、古典的ＥＬＩＳＡからＥＣＬベースの
技術に変えた(Haenel et al., 2005).
１mg／mlヤギ抗ヒト(Ｆａｂ)２フラグメント特異的抗体(Dianova)をＭＳＤスルホＴＡ
ＧＴＭ ＮＨＳ−エステル(Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD, USA)で製造者の
指示に従いラベルした。
ヒトＰ因子(Complement Technology cat#：A139)およびカニクイザル血清から精製した
カニクイザルＰ因子(Nakano, et al., (1986) J Immunol Methods 90:77-83を応用したプ
ロトコル)を、標準的結合ＭＳＤプレート(Meso Scale Discovery、３８４ウェル：MSD ca
t#:L21XA、９６ウェル：MSD cat#:L15XA)に、２５μl ＰＢＳ中０.２〜０.３μg／mlで
被覆し、一夜、４℃でインキュベートした。Ｐ因子阻害剤を固定濃度(１pMまたは１０pM)
にインキュベーション緩衝液(ＰＢＳと２％ＢＳＡ(Sigma cat#：Ａ４５０３)および１％
Ｔｗｅｅｎ２０および１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ(Sigma cat#：２３４７２９))で希釈し、イ
ンキュベーション緩衝液中のＰ因子(ヒトまたはカニクイザル)の一連の希釈物に天下した
。サンプルを、ＲＴで一夜インキュベートして平衡化させた。プレートを洗浄緩衝液(Ｐ
ＢＳと０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０)で３回洗浄し、１００μl インキュベーション緩衝液
でＲＴで２時間遮断した。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。Ｐ因子阻害剤およびＰ
因子滴定含有サンプルをプレート(２５μl)に天下し、ＲＴで１５分インキュベートした
。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。２５μl 検出抗体(抗ヒト(ヤギ)スルホＴＡＧ
、インキュベーション緩衝液中１：１０００、MSD cat#:R32AJ-1)を添加し、ＲＴで６０
分インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、５０μlの１×ＭＳＤ Ｒ
ｅａｄ緩衝液Ｔを添加した(界面活性剤と共に、MSD cat#:R92TC-1)。プレートをMSD Spec
tor Imager 6000で読んだ。
データをGraphPad Prismソフトウェアｖ４で、バックグラウンド(Ｆａｂ非含有ウェル
の平均)を各値から減算した。Ｘ軸値(溶液中のＰ因子濃度)をｌｏｇ１０ｘに変換した。
ＫＤ値(ＫＤ)を次のモデルから適合させた：
Ｆａｂ：
Ｔｏｐ＝抗原濃度＝０でのシグナル
ｘ＝溶液中のＰ因子濃度
Ｆａｂ＝一価検体(Ｆａｂ)に適応した濃度
実施例４：Ｐ因子抗体は代替補体経路を阻害する
溶血アッセイ
溶血手法において、全ての補体成分が存在し、機能的でなければならない。それゆえに
、溶血手法は機能的完全性および補体系の欠損の両方をスクリーニングできる(van et al
., 1980;Minh et al., 1983;Tanaka et al., 1986)。古典的経路の機能的能力を測定する
ために、溶血素で被覆したヒツジ赤血球(ウサギＩｇＧをヒツジ赤血球に)またはウサギ抗
ニワトリ抗体で感作したニワトリ赤血球を標的細胞(感作細胞)として使用した。これらの
Ａｇ−Ａｂ複合体は、成分が機能的であり、適切な濃度で存在するとき、古典的経路を活
性化し、標的細胞を溶解する。ヒトおよびカニクイザル血清における代替経路の機能的能
力を決定するために、ウサギ赤血球を標的細胞として使用する(米国特許番号６,０８７,
１２０参照)。
溶血アッセイは、補体活性化について試験する基本的機能的アッセイであり、抗ヒトＦ
Ｐ ｍＡｂｓおよびＦａｂ分子が補体経路による赤血球(ＲＢＣｓ)溶解を遮断する能力を
評価するために使用されている。ヒトＣ５を認識する一本鎖Ｆｖフラグメントによる補体
活性のインビトロおよびインビボ阻害を、溶血アッセイを使用して測定できる(Thomas et
al., 1996;Rinder et al., 1995;Rinder et al., 1995)。Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９産生
の遮断は、体外循環中の白血球および血小板活性化を遮断する。要約すると、古典的経路
アッセイのために、感作赤血球(例えば、ニワトリＲＢＣｓ)を血清に存在する補体タンパ
ク質による溶解の標的として使用する。次のアッセイが、代替補体経路阻害についてのＰ
因子抗体の特徴づけおよびスクリーニングに興味深い。
この方法はRinder et al., 1995;Thomas et al., 1996の応用である。
試薬：
・ ウサギ赤血球(Ｒｂ ＲＢＣｓ) − Lampire, Cat# 7246408
・ ヒト血清 − Novartis Blood Research Program；またはカニクイザル血清 − A
lpha Genesis
・ ゼラチンベロナール緩衝液(ＧＶＢ) − Boston BioProducts, Cat# IBB-300
・ ＥＧＴＡ − Boston BioProducts, Cat# BM-151
・ ＭｇＣｌ２
・ Ｕ底９６ウェルプレート − Corning, Cat# 3795
・ Ｆｌａｔ底９６ウェルプレート − Corning, Cat# 3370
・ ＮＰ−４０ − Sigma, Cat# 74385
プロトコル：
ウサギ赤血球(ＲＢＣｓ)を洗浄し、ＧＶＢ／ＥＧＴＡ／Ｍｇ＋＋中で８.３３×１０７
細胞／mlに調節した。ＧＶＢで希釈した５０μl Ｆａｂを９６ウェル丸底プレートのウ
ェルに添加した。ＥＧＴＡおよびＭｇ＋＋含有ＧＶＢで希釈した５０μl血清をついで添
加した。コントロールウェルを次の方法で調製した：Ｆａｂ非含有血清(ネガティブコン
トロール)および細胞＋０.１％ＮＰ−４０(１００％溶解コントロール)およびＮＰ−４０
ブランクウェル。Ｆａｂ含有および非含有血清およびコントロールを室温で３０分インキ
ュベートした。この時点で、３０μl Ｒｂ ＲＢＣｓをサンプルおよコントロールウェ
ルに添加し、３０μlの緩衝液をブランクウェルに添加した。細胞を一般的に３０分、３
７℃でインキュベートし、プレートを２０００rpmで５分遠心分離した。上清を回収し、
平底プレートに移した。上清の吸光度をＯＤ４１５およびＯＤ５７０で読んだ。溶血パー
セントを次の式を使用して計算した。
表５は、Ｐ因子抗体および抗原結合フラグメントが１０％ヒトまたは２０％カニクイザ
ル血清で溶血を阻害する能力を例示する。ここに記載するＰ因子抗体の各々は、溶血を５
０nM以下のＩＣ５０で阻害する。
対照的に、古典的補体経路活性化を試験するためにアッセイを感作赤血球で行ったとき
、ここに記載するＰ因子抗体は、古典的補体経路を阻害しないことが判明した(データは
示していない)。
Ｃ３ｂ沈着アッセイ
代替経路における補体Ｃ３に対して活性な阻害剤を測定する一つの方法は、ザイモサン
上に沈着する分解産物であるＣ３ｂの測定である。このＥＬＩＳＡに基づくアッセイを、
次の工程で行った：カーボネート緩衝液、ｐＨ９.６(Pierce Cat# 28382)中の２５μlの
１mg／ml ザイモサンＡ(Sigma Z4250)を、Maxisorp３８４ウェルＥＬＩＳＡプレート(Nu
nc 464718)に一夜、４℃で被覆した。次の日、ザイモサン被覆プレートを吸引し、１００
μl／ウェルのＥＬＩＳＡ遮断緩衝液であるSynblock(AbD Serotec BUFO34C)で、２時間、
室温で遮断した。別の反応において、ゼラチンベロナール緩衝液(Boston Bioproducts IB
B320−１０mM バルビタール、１４５mM ＮａＣｌ、０.１％ゼラチン、０.５mM ＭｇＣ
ｌ２、１０mM ＥＧＴＡ)で連続希釈した阻害剤を、１mM ＭｇＣｌ２および１０mM Ｅ
ＧＴＡの最終総反応濃度となるようにＭｇＣｌ２およびＥＧＴＡを添加した１０％血清に
添加した。ポジティブコントロールは阻害剤を含まず、ネガティブコントロールは２５mM
ＥＤＴＡを含んだ。混合物を室温で３０分インキュベートすることにより再平衡化した
。遮断緩衝液を除去するために、緩衝液を吸引し、プレートをＴＢＳ／０.０５％Ｔｗｅ
ｅｎ−２０で１回洗浄した。２５μl／ウェルの阻害剤含有１０％血清またはコントロー
ルをプレートに添加し、３７℃で３０分インキュベートした(ザイモサン上のＣ３ｂ沈着
の直線状範囲内にあることを予め時間経過により決定した)。３０分のインキュベーショ
ン後、プレートをＴＢＳ／０.０５％Ｔｗｅｅｎ−２０で３回インキュベートした。ザイ
モサン上のＣ３ｂ沈着を検出するために、製造者の指示に従いＰＢＳと２％BSA Fraction
V(Fisher Cat# ICN 16006980)で希釈した２５μl／ウェルのニワトリ抗ヒトＣ３−ＨＲ
Ｐコンジュゲートポリクローナル抗体(Immunology Consultants Laboratory, Inc. Cat#
CC3-80P-1)、０.１％Ｔｗｅｅｎ２０(Sigma cat# P1379)および０.１％ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００(Sigma cat# P234729)をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。そ
の後、プレートをＴＢＳ／０.０５％Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄し、ついで２５μlのUl
tra TMB基質溶液(Pierce Cat#34028)を添加した。ウェル中の溶液が青色に変わったら、
１５μlの２Ｎ 硫酸で反応を停止させた。プレートを、Spectromaxを使用して４５０nm
で読み、プラスチックプレートについて５７０nm(ＯＤ４５０−５７０ｎｍ読み取り)で補
正した。ザイモサン上のＣ３ｂ沈着を次の式により計算した：
試験した抗体の各々は、少なくとも１０nM以下のＩＣ５０でＣ３ｂ沈着を阻害した(表
５)。
ＭＡＣ沈着アッセイ
Ｐ因子抗体が代替補体経路を阻害する能力の決定に使用できる他のアッセイは、抗体が
、Ｃ３コンバターゼおよびＰ因子活性の下流である膜侵襲複合体(ＭＡＣ)産生を阻害する
能力である。要約すると、ザイモサンＡ(Sigma)を、プレートに、カーボネート緩衝液、
ｐＨ９.５中１mg／mlで被覆し、代替経路を活性化した。Ｆａｂｓを血清(２０％血清、５
mM ＭｇＣｌ２、１０mM ＥＤＴＡ)とプレインキュベートし、ついでプレートに添加し
、一夜、室温でインキュベートした。プレートをＴＢＳＴで３回洗浄後、ＭＡＣを抗Ｃ５
ｂ−９−ＡＬＰ(Diatec)と１時間インキュベートし、ＴＢＳＴで３回洗浄し、２mM Ｍｇ
Ｃｌ２添加４−メチルウンベリフェリルホスフェート(Fisher)と３０分間インキュベート
することにより検出した。０.２Ｍ ＥＤＴＡで反応を停止させ、プレートをｅｘ＝３５
５nm、ｅｍ＝４６０nmで読んだ。ＭＡＣ沈着阻害を、各サンプルについてベースライン(
ＥＤＴＡ処置ヒト血清)およびポジティブコントロール(ヒト血清)に対して計算し、ＰＲ
ＩＳＭでのＩＣ５０曲線の作成に使用した。
表５は、Ｐ因子抗体がＭＡＣの沈着を阻害する能力を証明するデータを示し、それ故に
、抗体が代替補体経路を阻害することを示唆する。具体的に、抗体は、ＭＡＣ沈着を２５
nM以下のＩＣ５０で阻害した。
Ｃ３ａ沈着アッセイ
Ｐ因子抗体の代替補体経路を阻害する能力を評価するために使用する他の方法は、Ｃ３
コンバターゼによるＣ３開裂後抗体がＣ３ａの産生を阻害する能力の測定である。本アッ
セイを、１０mg／mlおよび１０％および２０％ヒト血清でで被覆し、２ｎシリーズで希釈
した抗プロパージンＦａｂとプレインキュベートしたザイモサン−被覆Maxisorpプレート
被覆で行った。血清をプレートに３０分間添加し、その時点で血清をＣ３ａ産生の評価の
ために回収した。
Maxisorpプレートを、抗C3a des-arg neo抗体(１μg／ml)で一夜被覆し、３回洗浄し、
希釈剤で２時間、室温で遮断した。希釈剤吸引後、血清を１時間添加した。プレートを３
回洗浄し、希釈剤で希釈した１００μL／ウェル検出抗体マウス抗ヒトＣ３ａ−ビオチン
１：１０００を添加した。さらに１時間のインキュベーション後、希釈剤で１：５０００
希釈したストレプトアビジン−ＨＲＰ二次抗体をウェルに１時間、室温で添加した。プレ
ートを４回洗浄し、ＴＭＢ検出基質を添加した。標準停止溶液を使用して反応を停止し、
吸光度を４５０〜５７０nmで読んだ。
血清添加と平行して、標準曲線を血清で希釈した精製C3a des-argを使用して作成した
。５μg／mlから出発して、C3a des-argを１：４で連続的に希釈して、７点曲線を作成し
た。標準曲線ウェルを上記のとおり処理し、洗浄し、読んだ。
ＮＤ：測定せず
実施例５：種交差反応性
ヒトおよびカニクイザルに加えて、ここに記載する抗Ｐ因子抗体が他の種由来のＰ因子
と結合するか否かを決定するために、ＭＡＣ沈着および溶血アッセイを上記のとおり行っ
た。Biacore分析または溶血アッセイを上記のとおり行った。各種類として使用した血清
濃度は次のとおりであった：１０および２０％ウサギ、１０および２０％カニクイザルお
よび１０および２０％ヒト血清。ラットＰ因子結合をBiacoreで評価した。下記表６に示
すとおり、Ｐ因子抗体は、ウサギ、ラットおよびカニクイザルを含む数種で交差反応可能
であった。
ＮＤ：測定せず
実施例６：エピトープ位置づけ
Ｐ因子は、数個のトロンボスポンジン反復ドメイン(ＴＳＲ０−６)から成る。ＴＳＲ０
ドメインはまたＮ末端ドメインとも呼ばれる。Ｐ因子Ｆａｂｓのエピトープ位置づけを、
各ＴＳＲについてマウスおよびヒトキメラを調製することにより行った。先の機能的アッ
セイはＦａｂｓがマウスＰ因子と結合しないことを示したが(溶血アッセイ)、キメラの各
々はＰ因子枯渇血清で機能的であった。この方法を使用して、全てのＦａｂｓがＴＳＲ５
(配列番号４０６)に結合することが決定された。図１Ｃは、抗体がＴＳＲ５の領域Ｂに結
合することを示す。市販の抗体であるＡ２３３はこの領域に結合しないことが示された。
結合を、標準方法を使用してＥＬＩＳＡまたはBiacoreで評価できる。１個のＡｂ、ＮＶ
Ｓ４８７について、データは、マウスＰ因子との交差反応性のために決定的ではなかった
。マウスとヒトＰ因子ＴＳＲ５ドメインの配列整列化は、エピトープが配列番号４０８の
アミノ酸を含むことを示す。
実施例７：代替補体経路のインビボ阻害
カニクイザルで本発明の抗体を用いて実験を行い、代替補体経路を阻害する能力を決定
した。
試験アイテムであるＮＶＳ９６２を表７に示す投与レベルで投与した。投与経路は硝子
体内(ＩＶＴ)または静脈内(ＩＶ)のいずれかであった。
表７に示すとおり、試験アイテムおよび媒体溶液(媒体：１０mM Ｈｉｓ／Ｈｉｓ−Ｈ
Ｃｌ；１０％トレハロース；０.０２％Ｔｗｅｅｎ ２０；ｐＨ５.５)を硝子体内および
静脈内に実験１日目、１５日目および２９日目に投与した。
毒性評価は死亡率、臨床所見、体重、薬力学(溶血分析)、眼科検査、眼内圧測定、網膜
電図検査、血液所見、臨床試験、臓器重量および病理に基づいた。
実験中死亡例はなく、臨床所見、体重、眼科検査、眼内圧測定、網膜電図検査、血液所
見、臨床試験、臓器重量および病理の評価で試験アイテムに関連した関連知見はなかった
。
補体介在溶血活性を上記溶血アッセイを使用して測定した(実施例４参照)。溶血アッセ
イデータの分析は、ＮＶＳ９６２のＩＶ投与が、投与直後溶血補体活性の完全なまたはほ
ぼ完全な、しかし短命の、阻害に至ることを示した。ＩＶＴ経路で１mg／眼の投与量で投
与したとき、試験アイテムは血清溶血補体活性にわずかしか効果がないかまったく効果が
なかった。５mg／眼および１０％カニクイザル血清で、溶血補体活性の完全なまたはほぼ
完全な阻害が観察された。
実施例８：抗体組み合わせによる代替補体経路の阻害
溶血アッセイ
表２からの抗Ｃ５抗体８１０９および表１からの抗Ｐ因子抗体ＮＶＳ９６２のＦａｂバ
ージョンを使用する溶血アッセイを実施例４に記載のとおり行った。
図２は、抗Ｃ５抗体および抗原結合フラグメントと組み合わさったＰ因子抗体および抗
原結合フラグメントが２０％ヒト血清において溶血を阻害する能力を例示する。５００nM
抗Ｐ因子および５００nM抗Ｃ５ Ｆａｂｓは、個々では６０分インキュベートしたとき、
溶血阻害の効果がないことが証明されている。対照的に、抗Ｐ因子および抗Ｃ５抗体の同
じ濃度および１６７nMほども低い濃度での組み合わせが、ほぼ完全な溶血阻害を証明した
。さらに、ほぼ完全な溶血阻害は２５０分まで続いた。
溶血アッセイからのデータをChalice AnalyzerソフトウェアChalice Analyzerソフトウ
ェアを使用して、補体阻害抗体が、補体活性化遮断に対して相乗的に作用するか否かを決
定。組み合わせ効果は、単剤曲線に基づく組み合わせ参照モデルと、各データ点の比較に
より特徴付けることができる(Greco, Bravo, Parsons (1995). The search for synergy:
a critical review from a response surface perspective. Pharmacol Rev 47(2): 331
-85)。Loewe加算性モデル(Loewe (1928). Die quantitativen Probleme der Pharmakolog
ie. Ergebn. Physiol. 27: 47-187)において、ＩLoewe(ＣＸ,ＣＹ)は、(ＣＸ／ＩＣＸ)＋
(ＣＹ／ＩＣＹ)＝１を満たす阻害であり、ＩＣＸ,Ｙは、適合単剤曲線のＩLoeweでの有効
濃度である。加算性は、ＸおよびＹが同じ化合物であるときに産生された組み合わせ応答
を表すため、相乗性の一般的に認められた参照である(Greco et al.)。
効力変化を、通常、同じ効果に到達するのに必要な単剤と比較したときに、所望の効果
レベルに到達するのに必要な薬剤がどの程度少ないかを示すアイソボログラム(Greco et
al.)を使用して示す。アイソボログラム表示および組み合わせ指数計算のための効果レベ
ルの選択は、手動でも、Chalice Analyzerで自動に選択させてもよい。自動等レベル選択
アルゴリズムは、観察したＩデータを最大Ｉデータ−ＩLoeweと共に発見し、少ない単剤
Ｉｍａｘを超えるＩデータのデータ点を除外する。この除外は、アイソボログラムが両方
の単剤によりカバーされるレベルで最良の相乗性を反映することを確実にするために適用
する。アイソボログラムレベルＩｃｕｔの選択で、アイソボログラムは、選択した等レベ
ルとの交差に対応する濃度の位置を同定することにより描かれる。アイソボログラムは、
Loewe用量相加的“薬物それ自体”標準と比較した、相乗性の標準的アイソボログラム解
析を示す。特定したアイソボログラムレベルについて、観察された等効果カウンター(例
えば、図３における曲線)を理論的用量相加カウンター(例えば、図３における直線)と、
組み合わせの両物質のＩＣ効果標準化直線濃度スケール上に示す。用量相加参照は、常に
２個のＩＣ効果濃度を接続する線である。ＩＣ効果交差点は、近似シグモイド用量応答曲
線の内挿により見ることができる。
効力変化を組み合わせ指数ＣＩとしてスコア化する(Chou, Talalay (1984). Quantitat
ive analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drug
s or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22: 27-55)。選択した等効果レベルＩｃｕ
ｔについて、ＣII＝(ＣＸ／ＥＣＸ)Ｉ＋(ＣＹ／ＥＣＹ)Ｉ(式中、特定のデータ点の(ＣＸ
／ＥＣＸ)Ｉは選択阻害レベルでのその有効濃度に対するＸ化合物の測定濃度の比である)
である。ＣＩは、どの程度の薬剤が選択した効果レベルを達成するために単剤に対して組
み合わせで必要であるかを概算すると考えることができ、０.１の価は、単剤のわずか１
／１０当量が同じ効果レベルを達成するために必要であったことを意味する。０.５〜０.
７の範囲のＣＩ値が、現在の臨床組み合わせのインビトロ測定で典型的である(Greco et
al.)。１.０のＣＩ値は抗体の組み合わせの相加効果の指標であり、一方０.５未満のＣＩ
値は、抗体組み合わせから得られる強い相乗効果の指標である。Chalice Analyzerにおい
て、最高ＣＩが、各Ｉｃｕｔ交差濃度について計算した多くの組み合わせ指数価から報告
される。全測定ＣＩ値の中で、最大シグナル対ノイズレベルを最高組み合わせ指数として
記載する。
溶血アッセイからのデータを阻害％で示し、８×８Excel表に載せ、ここで、抗体濃度
をμＭ値として示した。ExcelテンプレートをChaliceソフトウェア(Lehar et al. 2009)
にアップロードし、組み合わせ指数を、各抗体のＩＣ２０を使用してアイソボログラム曲
線を作成することにより産生した(ＣＩ＝ＣＸ／ＩＣＸ＋ＣＹ／ＩＣＹ、ここで、ＩＣＸ
およびＩＣｙはそれぞれ２０阻害％効果をもたらす抗Ｐ因子抗体および抗Ｃ５抗体単独の
濃度であり、ＣＸおよびＣｙは２０％阻害をもたらす混合物の各薬剤の濃度である)。２
０％阻害での組み合わせ指数は０.３６であり、抗Ｐ因子抗体と抗Ｃ５抗体の相乗作用を
示す(図３)。
マクロファージ浸潤
抗ｆＰおよび抗Ｃ５ Ｆａｂｓの効果を個々にまたは組み合わせてインビボで眼炎症の
ポリ−ＩＣマウスモデルを使用して。マウスに合成ｄｓＲＮＡアナログであるポリＩ：Ｃ
を０.１ml ＰＢＳ中、全身的にＣ５７ＢＬ／６マウスにi.v.注射し、抗ｆＰ(表１からの
抗体ＮＶＳ９６２)および抗Ｃ５抗体(表２からの抗体８０１９)を個々にまたは組み合わ
せて併用した。示す時点でマウスを屠殺した。眼および網膜を回収し、タンパク質抽出物
をサイトカインで調整し、Multiplexアッセイ(Pierce)を使用してケモカイン分析した。
網膜白血球浸潤を決定するために、眼を４％パラホルムアルデヒドに固定し、マクロファ
ージに対するAlexa Fluor-488コンジュゲートＦ４／８０抗体で染色した。網膜を、網膜
脈管構造がスライドガラスの上面に向くように平らにマウントし、１滴のVectashieldマ
ウンティング媒体(Vector Laboratories Inc, Burtingame, CA)と共にカバースライドを
載せた。各網膜の５(５００μm)領域の蛍光像をAxio.ImageM1顕微鏡(Zeiss)上のAxiocam
MR3カメラで撮った。好中球およびマクロファージの数をAxiovisionソフトウェア(Versio
n 4.5 Zeiss)で定量した。光干渉断層撮影(ＯＣＴ)を使用して、ポリＩ：Ｃで処置したマ
ウスからの網膜像を得て、分析した。これらの結果(図４)は、試験した最高濃度(２０μg
)で、４５阻害％と同程度のマクロファージ阻害が観察された。対照的に、抗Ｐ因子とＣ
５抗体の２μgほどの低濃度での組み合わせは７９阻害％を証明し、濃度を挙げると１０
０阻害％を達成した(抗Ｃ５および抗Ｐ因子抗体個々ではそれぞれ１３％および３２阻害
％と対照的)。
前段に記載するインビボポリ−ＩＣモデル(マクロファージ浸潤)からのデータを阻害％
として表し、４×４Excel表に載せ、ここで、抗体濃度をμＭ値として示した。Excelテン
プレートをChalice Analyzer(上記)にアップロードし、組み合わせ指数を、各抗体のＩＣ
５０を使用してアイソボログラム曲線を作成することにより産生した(ＣＩ＝ＣＸ／ＩＣ
Ｘ＋ＣＹ／ＩＣＹ、ここでＩＣＸおよびＩＣｙはそれぞれ５０阻害％効果をもたらす抗Ｐ
因子抗体および抗Ｃ５抗体単独の濃度であり、ＣＸおよびＣｙは５０阻害％をもたらす混
合物の各薬剤の濃度である)。５０阻害％での組み合わせ指数は０.４２であり(図５参照)
、抗Ｐ因子抗体と抗Ｃ５抗体の相乗作用を示す。

Claims (87)

  1. 配列番号４０８を含むＰ因子の領域と結合する、抗体またはその抗原結合フラグメント
    。
  2. 配列番号４０７を含むＰ因子の領域と結合する、抗体またはその抗原結合フラグメント
    。
  3. 溶液平衡滴定で測定して、１.２nM以下のＫＤでＰ因子と結合する、請求項１または２
    に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
  4. ５００pM以下のＫＤでＰ因子と結合する、請求項１〜３のいずれかに記載の抗体または
    抗原結合フラグメント。
  5. ２００pM以下のＫＤでＰ因子と結合する、請求項１〜４のいずれかに記載の抗体または
    抗原結合フラグメント。
  6. ヒトＰ因子と結合する、請求項１〜５のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメ
    ント。
  7. カニクイザル、ウサギまたはラットＰ因子とも結合する、請求項１〜６のいずれかに記
    載の抗体または抗原結合フラグメント。
  8. さらに代替補体経路をインビトロ溶血アッセイで測定して２５nM以下のＩＣ５０で阻害
    する、請求項１〜７のいずれかに記載の単離抗体または抗原結合フラグメント。
  9. ヒトＰ因子と結合し、代替補体経路をインビトロ溶血アッセイで測定して１６nM以下の
    ＩＣ５０で阻害する、請求項１〜８のいずれかに記載の単離抗体または抗原結合フラグメ
    ント。
  10. さらに代替補体経路をインビトロＣ３ｂ沈着アッセイで測定して１０nM以下のＩＣ５０
    で阻害する、請求項１〜９のいずれかに記載の単離抗体またはその抗原結合フラグメント
    。
  11. ヒトＰ因子と結合し、代替補体経路をインビトロＣ３ｂ沈着アッセイで測定して３nM以
    下のＩＣ５０で阻害する、請求項１０に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
  12. さらに代替補体経路をインビトロＭＡＣ沈着アッセイで測定して２５nM以下のＩＣ５０
    で阻害する、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離抗体または抗原結合フラグメント。
  13. ヒトＰ因子と結合し、代替補体経路をインビトロＭＡＣ沈着アッセイで測定して２５nM
    以下のＩＣ５０で阻害する、請求項１〜１２のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラ
    グメント。
  14. さらに代替補体経路をインビトロ溶血アッセイで測定して以下の２５nMＩＣ５０で阻害
    し、インビトロＣ３ｂ沈着アッセイで測定して１０nM以下のＩＣ５０で阻害し、インビト
    ロＭＡＣ沈着アッセイで測定して２５nM以下のＩＣ５０で阻害する、請求項１〜１３のい
    ずれかに記載の単離抗体または抗原結合フラグメント。
  15. Ｐ因子と結合し、表１に記載する抗体と競合する、単離抗体またはその抗原結合フラグ
    メント。
  16. Ｐ因子と結合する抗体または抗原結合フラグメントであって、
    ａ)配列番号１、２および３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および
    ＨＣＤＲ３および配列番号４、５および６にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣ
    ＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｂ)配列番号１５、１６および１７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号１８、１９および２０にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｃ)配列番号２９、３０および３１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号３２、３３および３４にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｄ)配列番号４３、４４および４５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号４６、４７および４８にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｅ)配列番号５７、５８および５９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号６０、６１および６２にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｆ)配列番号７１、７２および７３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号７４、７５および７６にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｇ)配列番号８５、８６および８７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号８８、８９および９０にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｈ)配列番号９９、１００および１０１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤ
    Ｒ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１０２、１０３および１０４にそれぞれ示す軽鎖可
    変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｉ)配列番号１１３、１１４および１１５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１１６、１１７および１１８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｊ)配列番号１２７、１２８および１２９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１３０、１３１および１３２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｋ)配列番号１４１、１４２および１４３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１４４、１４５および１４６にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｌ)配列番号１５５、１５６および１５７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１５８、１５９および１６０にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｍ)配列番号１６９、１７０および１７１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１７２、１７３および１７４にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｎ)配列番号１８３、１８４および１８５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１８６、１８７および１８８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｏ)配列番号１９７、１９８および１９９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２００、２０１および２０２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｐ)配列番号２１１、２１２および２１３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２１４、２１５および２１６にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｑ)配列番号２２５、２２６および２２７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２２８、２２９および２３０にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｒ)配列番号２３９、２４０および２４１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２４２、２４３および２４４にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｓ)配列番号２５３、２５４および２５５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２５６、２５７および２５８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；または
    ｔ)配列番号２６７、２６８および２６９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２７０、２７１および２７２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３
    を含む、単離抗体または抗原結合フラグメント。
  17. それぞれ配列番号７および８；配列番号２１および２２；配列番号３５および３６；配
    列番号４９および５０；配列番号６３および６４；配列番号７７および７８；配列番号９
    １および９２；配列番号１０５および１０６；配列番号１１９および１２０；配列番号１
    ３３および１３４；配列番号１４７および１４８；配列番号１６１および１６２；配列番
    号１７５および１７６；配列番号１８９および１９０；配列番号２０３および２０４；配
    列番号２１７および２１８；配列番号２３１および２３２；配列番号２４５および２４６
    ；配列番号２５９および２６０；または配列番号２７３および２７４と少なくとも９０％
    同一のアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む、請求項１〜１６のいずれか
    に記載の抗体または抗原結合フラグメント。
  18. 配列番号７、２１、３５、４９、６３、７７、９１、１０５、１１９、１３３、１４７
    、１６１、１７５、１８９、２０３、２１７、２３１、２４５、２５９または２７３を含
    む重鎖可変領域およびさらに軽鎖可変領域を含み、ここで、該重鎖可変領域および該軽鎖
    可変領域は一体となってＰ因子への抗原結合部位を形成する、単離抗体または抗原結合フ
    ラグメント。
  19. 配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８
    、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、２６０または２７４を含
    む軽鎖可変ドメインおよびさらに重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインお
    よび重鎖可変ドメインは一体となってＰ因子への抗原結合部位を形成する、単離抗体また
    は抗原結合フラグメント。
  20. 軽鎖可変ドメイン領域が配列番号８、２２、３６、５０、６４、７８、９２、１０６、
    １２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８、２３２、２４６、
    ２６０または２７４を含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の単離抗体または抗原結合
    フラグメント。
  21. 配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９
    、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６１または２７５の重
    鎖およびさらに軽鎖を含み、ここで、重鎖および軽鎖は一体となってＰ因子への抗原結合
    部位を形成する、単離抗体または抗原結合フラグメント。
  22. 配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５
    ０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２または２７６の
    軽鎖およびさらに重鎖を含み、軽鎖および重鎖は一体となってＰ因子への抗原結合部位を
    形成する、単離抗体または抗原結合フラグメント。
  23. 軽鎖が配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６
    、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２または２
    ７６を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の単離抗体または抗原結合フラグメント。
  24. 配列番号９、２３、３７、５１、６５、７９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９
    、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９、２３３、２４７、２６１または２７５と少
    なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖およびさらに配列番号１０
    、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１
    ７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２４８、２６２または２７６と少なくとも９０
    ％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、Ｐ因子と結合する単離抗体また
    は抗原結合フラグメント。
  25. 配列番号９および１０、２３および２４、３７および３８、５１および５２、６５およ
    び６６、７９および８０、９３および９４、１０７および１０８、１２１および１２２、
    １３５および１３６、１４９および１５０、１６３および１６４、１７７および１７８、
    １９１および１９２、２０５および２０６、２１９および２２０、２３３および２３４、
    ２４７および２４８、２６１および２６２または２７５および２７６と少なくとも９０％
    配列同一性であるアミノ酸配を有する重鎖および軽鎖を含む、Ｐ因子と結合する単離抗体
    または抗原結合フラグメント。
  26. 抗体がヒト抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、
    Ｆ(ａｂ’)２、ＦｖまたはｓｃＦｖである、請求項１〜２５のいずれかに記載の抗体また
    は抗原結合フラグメント。
  27. 抗体がＩｇＧアイソタイプである、請求項１〜２６のいずれかに記載の抗体または抗原
    結合フラグメント。
  28. 請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体またはフラグメントをコードするヌクレオチド
    を含む、単離核酸分子。
  29. 請求項１〜２８のいずれかに記載の重鎖可変領域を含むポリペチドをコードする、単離
    核酸分子。
  30. 核酸配列が配列番号１１、２５、３９、５３、６７、８１、９５、１０９、１２３、１
    ３７、１５１、１６５、１７９、１９３、２０７、２２１、２３５、２４９、２６３およ
    び２７７から選択される配列と少なくとも９５％配列同一性を有する、請求項１〜２９の
    いずれかに記載の核酸分子。
  31. 請求項１〜３０のいずれかに記載の軽鎖可変領域を含むポリペチドをコードする、単離
    核酸分子。
  32. 核酸配列が配列番号１２、２６、４０、５４、６８、８２、９６、１１０、１２４、１
    ３８、１５２、１６６、１８０、１９４、２０８、２２２、２３６、２５０、２６４およ
    び２７８と９５％配列同一性を有する、請求項１〜３１のいずれかに記載の核酸分子。
  33. 請求項１〜３２のいずれかに記載の重鎖を含むポリペチドをコードする、単離核酸分子
    。
  34. 核酸配列が配列番号１３、２７、４１、５５、６９、８３、９７、１１１、１２５、１
    ３９、１５３、１６７、１８１、１９５、２０９、２２３、２３７、２５１、２６５およ
    び２７９と９５％配列同一性を有する、請求項１〜３３のいずれかに記載の核酸分子。
  35. 請求項１〜３４のいずれかに記載の軽鎖を含むポリペチドをコードする、単離核酸分子
    。
  36. 核酸配列が配列番号１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８、１１２、１２６、１
    ４０、１５４、１６８、１８２、１９６、２１０、２２４、２３８、２５２、２６６およ
    び２８０。と９５％配列同一性を有する、請求項１〜３５のいずれかに記載の核酸分子。
  37. 請求項２８〜３６のいずれかに記載の核酸分子を含む、ベクター。
  38. 請求項３７に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
  39. 請求項１〜３８のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントおよび薬学的に許
    容される希釈剤または担体を含む、組成物。
  40. 対象に請求項１〜３９のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成
    物の有効量を投与することを含む、対象における加齢性黄斑変性症の処置方法。
  41. 請求項４０対象がヒトである、請求項４０に記載の方法。
  42. 対象に請求項１〜４１のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成
    物の有効量を投与することを含む、対象における代替補体経路の阻害方法。
  43. 対象がヒトである、請求項４２に記載の方法。
  44. 細胞と請求項１〜４３のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成
    物を接触させることを含む、補体介在細胞死の阻害方法。
  45. 細胞と請求項１〜４４のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成
    物を接触させることを含む、細胞におけるＣ３ｂ形成の阻害方法。
  46. 細胞と請求項１〜４５のいずれかに記載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成
    物を接触させることを含む、細胞における膜侵襲複合体の阻害方法。
  47. 細胞における代替補体経路の阻害方法であって、細胞と請求項１〜４６のいずれかに記
    載の抗体または抗原結合フラグメントを含む組成物を接触させ、該経路活性をインビトロ
    溶血アッセイ、インビトロＣ３ｂ沈着アッセイまたはインビトロＭＡＣ沈着アッセイによ
    り測定し、ここで経路活性減少が溶血、Ｃ３ｂ沈着および／またはＭＡＣ沈着における１
    ０％減少により測定される、方法。
  48. Ｐ因子と結合する第一抗体またはその抗原結合フラグメントおよびＣ５と結合する第二
    抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、ここで、該組み合わせは代替補体経路を阻
    害する組成物。
  49. 組み合わせが眼炎症を阻害する、請求項４８に記載の組成物。
  50. 眼炎症が網膜における好中球集積および／またはマクロファージ動員により測定される
    、請求項４８または４９に記載の組成物。
  51. 組み合わせが網膜における好中球集積を阻害する、請求項４８〜５０のいずれかに記載
    の組み合わせ。
  52. 該組み合わせが網膜におけるマクロファージ動員を阻害する、請求項４８〜５１のいず
    れかに記載の組み合わせ。
  53. Ｐ因子と結合する抗体が配列番号４０８を含むＰ因子の領域と結合する、請求項４８〜
    ５２のいずれかに記載の組成物。
  54. Ｐ因子と結合する抗体が配列番号４０７を含むＰ因子の領域と結合する、請求項４８〜
    ５２のいずれかに記載の組成物。
  55. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが表１から選択される抗体であり、該第二抗
    体または抗原結合そのフラグメントが表２から選択される抗体または抗原結合フラグメン
    トである、請求項４８〜５４のいずれかに記載の組成物。
  56. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが表１に記載の抗体と同じエピトープに結合
    し、第二抗体またはその抗原結合フラグメントが表２に記載する抗体と同じエピトープに
    結合する、請求項４８〜５５のいずれかに記載の組成物。
  57. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが：
    ａ)配列番号１、２および３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および
    ＨＣＤＲ３および配列番号４、５および６にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣ
    ＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｂ)配列番号１５、１６および１７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号１８、１９および２０にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｃ)配列番号２９、３０および３１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号３２、３３および３４にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｄ)配列番号４３、４４および４５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号４６、４７および４８にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｅ)配列番号５７、５８および５９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号６０、６１および６２にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｆ)配列番号７１、７２および７３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号７４、７５および７６にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｇ)配列番号８５、８６および８７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２
    およびＨＣＤＲ３および配列番号８８、８９および９０にそれぞれ示す軽鎖可変領域ＬＣ
    ＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｈ)配列番号９９、１００および１０１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤ
    Ｒ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１０２、１０３および１０４にそれぞれ示す軽鎖可
    変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｉ)配列番号１１３、１１４および１１５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１１６、１１７および１１８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｊ)配列番号１２７、１２８および１２９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１３０、１３１および１３２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｋ)配列番号１４１、１４２および１４３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１４４、１４５および１４６にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｌ)配列番号１５５、１５６および１５７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１５８、１５９および１６０にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｍ)配列番号１６９、１７０および１７１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１７２、１７３および１７４にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｎ)配列番号１８３、１８４および１８５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号１８６、１８７および１８８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｏ)配列番号１９７、１９８および１９９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２００、２０１および２０２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｐ)配列番号２１１、２１２および２１３にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２１４、２１５および２１６にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｑ)配列番号２２５、２２６および２２７にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２２８、２２９および２３０にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｒ)配列番号２３９、２４０および２４１にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２４２、２４３および２４４にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｓ)配列番号２５３、２５４および２５５にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２５６、２５７および２５８にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；および
    ｔ)配列番号２６７、２６８および２６９にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号２７０、２７１および２７２にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３
    からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１、２、３および軽鎖ＣＤＲ１、２、３を含み、
    第二抗体またはその抗原結合フラグメントが：
    ａ)配列番号４１０、４１１および４１２にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号４１３、４１４および４１５にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｂ)配列番号４２６、４２７および４２８にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号４２９、４３０および４３１にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｃ)配列番号４４２、４４３および４４４にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号４４５、４４６および４４７にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；
    ｄ)配列番号４２６、４５８および４２８にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号４２９、４３０および４５９にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３；ａｎｄ
    ｅ)配列番号４７０、４７１および４７２にそれぞれ示す重鎖可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣ
    ＤＲ２およびＨＣＤＲ３および配列番号４７３、４７４および４７５にそれぞれ示す軽鎖
    可変領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３
    からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１、２、３および軽鎖ＣＤＲ１、２、３を含む、請
    求項４８〜５６のいずれかに記載の組成物。
  58. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントがそれぞれ配列番号７および８；配列番号２
    １および２２；配列番号３５および３６；配列番号４９および５０；配列番号６３および
    ６４；配列番号７７および７８；配列番号９１および９２；配列番号１０５および１０６
    ；配列番号１１９および１２０；配列番号１３３および１３４；配列番号１４７および１
    ４８；配列番号１６１および１６２；配列番号１７５および１７６；配列番号１８９およ
    び１９０；配列番号２０３および２０４；配列番号２１７および２１８；配列番号２３１
    および２３２；配列番号２４５および２４６；配列番号２５９および２６０；または配列
    番号２７３および２７４とそれぞれ少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有する重鎖お
    よび軽鎖可変領域を含み、第二抗体またはその抗原結合フラグメントがそれぞれ配列番号
    ４１６および４１７；配列番号４３２および４３３；配列番号４４８および４４９；配列
    番号４６０および４６１；または配列番号４７６および４７７と少なくとも９０％同一の
    アミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖可変領域を含む、請求項４８〜５７のいずれかに記
    載の組成物。
  59. (ａ)第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号７、２１、３５、４９、６３
    、７７、９１、１０５、１１９、１３３、１４７、１６１、１７５、１８９、２０３、２
    １７、２３１、２４５、２５９または２７３を含む重鎖可変領域およびさらに軽鎖可変領
    域を含み、ここで、該重鎖可変領域および該軽鎖可変領域は一体となってＰ因子への抗原
    結合部位を形成する、および(ｂ)第二抗体またはその抗原結合フラグメントｃｏｍｐｒｉ
    ｓｅｓ配列番号４１６、４３２、４４８、４６０または４７６を含む重鎖可変領域および
    さらに軽鎖可変領域を含み、ここで、該重鎖可変領域および該軽鎖可変領域は一体となっ
    てＣ５への抗原結合部位を形成する、請求項４８〜５８のいずれかに記載の組成物。
  60. (ａ)第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号８、２２、３６、５０、６４
    、７８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２
    １８、２３２、２４６、２６０または２７４を含む軽鎖可変ドメインおよびさらに重鎖可
    変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは一体となってＰ
    因子への抗原結合部位を形成する、および(ｂ)第二抗体またはその抗原結合フラグメント
    が配列番号４１７、４３３、４４９、４６１または４７７を含む軽鎖可変ドメインを含む
    軽鎖可変領域およびさらに重鎖可変ドメインを含み、ここで、軽鎖可変ドメインおよび重
    鎖可変ドメインは一体となってＣ５への抗原結合部位を形成する、請求項４８〜５９のい
    ずれかに記載の組成物。
  61. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号８、２２、３６、５０、６４、７
    ８、９２、１０６、１２０、１３４、１４８、１６２、１７６、１９０、２０４、２１８
    、２３２、２４６、２６０または２７４の軽鎖可変領域配列を含み、第二抗体またはその
    抗原結合フラグメントが配列番号４１７、４３３、４４９、４６１または４７７の軽鎖可
    変領域配列を含む、請求項５９に記載の組成物。
  62. (ａ)第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号９、２３、３７、５１、６５
    、７９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２
    １９、２３３、２４７、２６１または２７５の重鎖およびさらに軽鎖を含み、ここで、重
    鎖および軽鎖は一体となってＰ因子への抗原結合部位を形成する、および(ｂ)第二抗体ま
    たはその抗原結合フラグメントが配列番号４１８、４３４、４５０、４６２または４７８
    の重鎖およびさらに軽鎖を含み、ここで、重鎖および軽鎖は一体となってＣ５への抗原結
    合部位を形成する、請求項４８〜６１のいずれかに記載の組成物。
  63. (ａ)第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号１０、２４、３８、５２、６
    ６、８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、
    ２２０、２３４、２４８、２６２または２７６の軽鎖およびさらに重鎖を含み、軽鎖およ
    び重鎖は一体となってＰ因子への抗原結合部位を形成する、および(ｂ)第二抗体またはそ
    の抗原結合フラグメントが配列番号４１９、４３５、４５１、４６３または４７９の軽鎖
    およびさらに重鎖を含み、軽鎖および重鎖は一体となってＣ５への抗原結合部位を形成す
    る、請求項４８〜６２のいずれかに記載の組成物。
  64. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号１０、２４、３８、５２、６６、
    ８０、９４、１０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２
    ０、２３４、２４８、２６２または２７６の軽鎖を含み、第二抗体またはその抗原結合フ
    ラグメントが配列番号４１９、４３５、４５１、４６３または４７９の軽鎖を含む、請求
    項６２に記載の組成物。
  65. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号９、２３、３７、５１、６５、７
    ９、９３、１０７、１２１、１３５、１４９、１６３、１７７、１９１、２０５、２１９
    、２３３、２４７、２６１または２７５と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸
    配列を有する重鎖およびさらに配列番号１０、２４、３８、５２、６６、８０、９４、１
    ０８、１２２、１３６、１５０、１６４、１７８、１９２、２０６、２２０、２３４、２
    ４８、２６２または２７６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する
    軽鎖を含み、第二抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号４１８、４３４、４５
    ０、４６２または４７８と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重
    鎖およびさらに配列番号４１９、４３５、４５１、４６３または４７９と少なくとも９０
    ％配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項４８〜６４のいずれかに
    記載の組成物。
  66. 第一抗体またはその抗原結合フラグメントがそれぞれ配列番号９および１０、２３およ
    び２４、３７および３８、５１および５２、６５および６６、７９および８０、９３およ
    び９４、１０７および１０８、１２１および１２２、１３５および１３６、１４９および
    １５０、１６３および１６４、１７７および１７８、１９１および１９２、２０５および
    ２０６、２１９および２２０、２３３および２３４、２４７および２４８、２６１および
    ２６２または２７５および２７６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を
    有する重鎖および軽鎖を含み；第二抗体またはその抗原結合フラグメントがそれぞれ配列
    番号４１８および４１９、４３４および４３５；４５０および４５１；４６２および４６
    ３；または４７８および４７９と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を有
    する重鎖および軽鎖を含む、４８〜６５のいずれかに記載の組成物。
  67. 請求項４８〜６６のいずれかに記載の第一抗体またはフラグメントをコードするヌクレ
    オチド配列を含む、単離核酸分子。
  68. 請求項４８〜６６のいずれかに記載の第二抗体またはその抗原結合フラグメントをコー
    ドするヌクレオチド配列を含む、単離核酸分子。
  69. 請求項６７または６８に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  70. 請求項６９に記載のベクターを含む、単離宿主細胞。
  71. 対象に請求項４８〜６６のいずれかに記載の組成物の有効量を投与することを含む、対
    象における加齢性黄斑変性症の処置方法。
  72. 対象がヒトである、請求項７１に記載の方法。
  73. 対象に請求項４８〜６６のいずれかに記載の組成物の有効量を投与することを含む、対
    象における代替補体経路の阻害方法。
  74. 対象がヒトである、請求項７３に記載の方法。
  75. 医薬として使用するための、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  76. 医薬として使用するための、請求項４８に記載の組成物。
  77. 加齢性黄斑変性症処置に使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体また
    はその抗原結合フラグメント。
  78. 代替補体経路阻害に使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体またはそ
    の抗原結合フラグメン。
  79. 補体介在細胞死阻害に使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体または
    その抗原結合フラグメント。
  80. 細胞におけるＣ３ｂ形成阻害に使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記載の抗
    体またはその抗原結合フラグメント。
  81. 細胞における膜侵襲複合体形成阻害に使用するための、請求項１〜２７のいずれかに記
    載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  82. 加齢性黄斑変性症の処置に使用するための、請求項４８〜６６のいずれかに記載の組成
    物。
  83. 代替補体経路阻害に使用するための、請求項４８〜６６のいずれかに記載の組成物。
  84. 対照に請求項４８に記載の組成物の有効量を投与することを含む、対象における加齢性
    黄斑変性症の処置方法。
  85. 対象がヒトである、請求項８４に記載の方法。
  86. 対照に請求項４８に記載の組成物の有効量を投与することを含む、対象における代替補
    体経路の阻害方法。
  87. 対象がヒトである、請求項８６に記載の方法。
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