JP2017186270A - 皮脂腺細胞の活性化の抑制剤 - Google Patents
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Abstract
Description
ゴボウシ中のβ−グルコシダーゼ活性は、以下の方法で測定した。産地やロットが異なるゴボウシをウイレー氏粉砕機により粉砕し、このゴボウシ粉砕品0.1gを10mLの水で希釈し、試料溶液とした。
酵素活性(U/g)=(試料溶液の吸光度-ブランク溶液の吸光度)×4mL×1/18.1(p-ニトロフェノールの上記測定条件下でのミリモル分子吸光係数:cm2/μmol)×1/光路長(cm)×1/反応時間(分)×1/0.5mL×1/試料溶液濃度(g/mL)
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性8.23U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを29〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した。次いで、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに60分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン20%を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2%および7.1%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.89のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性8.23U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜33℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール265Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この溶液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン20%を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.0%および6.8%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.87のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性7.82U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて40分間攪拌した後、60分後にエタノール258Lを加えて85℃に昇温し、さらに30分間加熱還流した。この液を遠心分離し、ゴボウシ抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン20%を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.2%および6.7%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.93のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン20%含有)が得られた。
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシからエキス(抽出物)を抽出した。ゴボウシ(酵素活性7.82U/g)を切裁し、9.5mmの篩を全通するものをさらに0.85mmの篩に通し、75%が残ることを確認した。このゴボウシ細切80kgを30〜32℃に保温した水560Lに加えて30分間攪拌した後、エタノール253Lを加えて85℃に昇温し、さらに40分間加熱還流した。この液を遠心分離し、得られた抽出液を得た。この操作を2回繰り返して得られた抽出液を合わせて、減圧濃縮し、抽出物固形分に対してデキストリン25%を加えて、噴霧乾燥した。アルクチゲニンおよびアルクチイン含量は、それぞれ6.4%および7.2%であり、アルクチゲニン/アルクチイン(重量比)=0.89のゴボウシ抽出物粉末(デキストリン25%含有)が得られた。
本発明の組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス(抽出物)を抽出した。アルクチイン2.53%およびアルクチゲニン0.76%を含有するレンギョウ葉小刻み50gに水350mLを加えて37℃で30分間保温後、エタノール150mLを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を、100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が5.62%のシナレンギョウ葉抽出物18.62gを得た。
本発明の組成物の一実施例として、シナレンギョウ葉からエキス(抽出物)を抽出した。アルクチイン7.38%およびアルクチゲニン0.78%を含有するレンギョウ葉小刻み720gに水5Lを加えて37°Cで30分間保温後、エタノール2.16Lを添加し30分間加熱抽出した。この溶液を、100メッシュ篩を用いて固液分離し、凍結乾燥を行うことにより、アルクチゲニン含量が9.55%のシナレンギョウ葉抽出物343.07gを得た。
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記(1)〜(3)の成分をとり、顆粒状に製した。これを1.5gずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を0.5g含有する顆粒剤を得た。
(1)実施例2のゴボウシ抽出物粉末 33.3%
(2)乳糖 65.2%
(3)ヒドロキシプロピルセルロース 1.5%
合計 100%
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて顆粒剤を製造した。「日局」製剤総則、顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。すなわち、下記(1)〜(3)の成分をとり、顆粒状に製した。これを3.0gずつアルミラミネートフィルムに充填し、1包あたりゴボウシ抽出物粉末を2g含有する顆粒剤を得た。
(1)実施例2のゴボウシ抽出物粉末 66.7%
(2)乳糖 30.3%
(3)ヒドロキシプロピルセルロース 3.0%
合計 100%
本発明の組成物の一実施例として、ゴボウシ抽出物を用いて錠剤を製造した。「日局」製剤総則、錠剤の項に準じて錠剤を製した。すなわち、下記(1)〜(6)の成分をとり、錠剤を得た。
(1)実施例2のゴボウシ抽出物粉末 37.0%
(2)結晶セルロース 45.1%
(3)カルメロースカルシウム 10.0%
(4)クロスポピドン 3.5%
(5)含水二酸化ケイ素 3.4%
(6)ステアリン酸マグネシウム 1.0%
合計 100%
(ハムスター皮脂線細胞の培養)
細胞は、ハムスター皮脂腺細胞(クラボウ、KB-4009)を用いた。無菌下(クリーンベンチ内)で、1×104cells/cm2(生細胞数)の密度で細胞をHuMedia-BG培地(クラボウ社、KB-2150)に接種し、37℃で24時間培養した。24時間後、培地を交換した。70〜80%コンフルエントで継代培養を行った。細胞が十分に増えたところで、2.5×104cells/cm2の密度で、24ウェルプレートに500μLずつ、細胞懸濁液を接種した。プレートを37℃のインキュベーターに入れ、24時間培養した。細胞が十分にコンフルエントになったら、さらに2〜3日培養の上、HuMedia-BG(クラボウ、KB-2150)をHuMedia-BD(クラボウ、KB-2250)(以後、これら培地を「アッセイ培地」と呼ぶ。)に交換し、分化誘導を開始した。分化誘導開始と同時に、アルクチゲニン(ゴボウシから精製)を各濃度(0.1、10、25、50μM)に調整し処理した。アルクチゲニンは、それぞれジメチルスルホキシドに溶解し、全てのサンプルにおいてジメチルスルホキシド濃度0.1%になるように処理した。対照サンプルとして、溶媒のみを処理したものを用いた。処理培地は、1日おきに交換し、13〜14日間培養を続けた。
細胞数の測定は、脂質合成測定キット(クラボウ、SE-3001)を用いて行った。細胞数測定溶液WST-8は、WST-8、1-メトキシ-5-メチルフェナジニウムメチル硫酸塩および塩化ナトリウムの成分からなる。WST-8は新規テトラゾリウム塩で、細胞内脱水素酵素により還元され、水溶性のホルマザンを生成する。このホルマザンを450nmの吸光度で直接測定することにより、容易に生細胞数を計測することができる。0.6mlの細胞数測定溶液WST-8を培地にて25倍希釈した。24ウェルプレートの各ウェルの培地を除去し、希釈した細胞数測定溶液を0.5mlずつ各ウェルに添加し、30分間37℃でインキュベートした。0.2ml/ウェルの上清を96ウェルプレートに移し、450nmの波長で吸光度を測定した。
脂肪滴の染色は、脂質合成測定キット(クラボウ、SE-3001)を用いて行った。オイルレッドO原液9mlとオイルレッドO希釈液6mlを混合し、ろ過用フィルター「ニューステラディスク」(0.45μm)を用いてろ過した。細胞数を測定した各ウェルの細胞数測定溶液を除去し、PBS(-)緩衝液を0.5ml添加した。上清を除去し、PBS(-)緩衝液0.5mlを添加し、細胞を2回洗浄した。上清を除去し、10%ホルマリン溶液を0.5ml添加し、10分間室温で静置し、細胞を固定した。上清を除去し、PBS(-)緩衝液を0.5ml添加した(細胞を2回洗浄した)。上清を除去し、60%イソプロパノールを0.5ml添加し、1分間室温で静置した。上清を除去し、調製したオイルレッドO溶液を0.3ml添加し、30分間室温で静置した。上清を除去し、60%イソプロパノールを0.5ml添加した(細胞を2回洗浄した)。上清を除去し、PBS(-)緩衝液を0.5ml添加し、染色された脂質の顕微鏡画像を撮影した。
染色された脂質の顕微鏡画像を用いて、脂肪滴の直径を測定した。脂肪滴の直径の測定方法について、図1を用いて説明する。1つの処理は、3つのウェルにて行った。1つのウェルにつき、脂肪滴形成が顕著に見られる2つの区画を選択して200倍にて撮影した。撮影した画像中の脂肪滴の大きいものから10個選択し、それぞれの脂肪滴の大きさを測定した。すなわち、1つの処理につき、脂肪滴60個の直径を測定し、その平均値を脂肪滴の大きさとした。
上述した方法を用いて、皮脂腺細胞を各種の濃度のアルクチゲニンで処理し、細胞毒性を評価した。アルクチゲニンで処理した場合に、皮脂腺細胞の生細胞数の減少は見られなかった(図示せず)。したがって、アルクチゲニンは、皮脂腺細胞に対する細胞毒性を有しないことが示された。この結果から、以下の試験において示される脂質合成の抑制は、アルクチゲニン処理による皮脂腺細胞数の減少によるものではないことが確認できた。
上述した方法により皮脂腺細胞を各種の濃度のアルクチゲニン(ゴボウシより精製)で処理し、皮脂腺細胞内で形成された脂肪滴の直径を測定した。図2は、皮脂腺細胞をアルクチゲニンで処理したときの脂肪滴の直径(長さ)を示すグラフである。また、図3は、皮脂腺細胞における染色された脂質の顕微鏡画像を表す図である。
Claims (7)
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、皮脂腺細胞の活性化の抑制剤。
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、皮脂腺細胞の活性化を抑制するための組成物。
- 前記アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらから抽出したエキスとして含有する、請求項2に記載の組成物。
- 請求項2または3に記載の組成物を含有する医薬品。
- 請求項2または3に記載の組成物を含有する化粧品。
- アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを有効成分として含有する、皮脂腺細胞の活性化を抑制するための食品組成物。
- 前記アルクチゲニンおよび/またはアルクチインを、ゴボウ、ゴボウシ、ゴボウスプラウトもしくはレンギョウまたはこれらから抽出したエキスとして含有する、請求項6に記載の食品組成物。
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