JP2017007983A - 樹状細胞活性化剤 - Google Patents
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[1]ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする樹状細胞活性化剤。
[2]未熟樹状細胞を活性化するために用いられる、上記[1]記載の樹状細胞活性化剤。
[3]樹状細胞の免疫調節性サイトカインの産生能を高めるために用いられる、上記[1]記載の樹状細胞活性化剤。
[4]培養された樹状細胞に投与されるように用いられる、上記[1]記載の樹状細胞活性化剤。
[5]病原に由来するワクチン又は抗原とともに投与されるように用いられる、上記[1]記載の樹状細胞活性化剤。
[6]前記ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)である、上記[1]〜[5]のいずれか1つに記載の樹状細胞活性化剤。
(1)ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵処理物の調製
ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)をMRS液体培地に植菌して、25℃で前培養し、その一部を脱脂乳培地(イオン交換水90質量部に脱脂粉乳10質量部を混合し、オートクレーブ滅菌して調製した培地)に植菌して、25℃、5日間嫌気静置培養し発酵させた。得られた発酵培養物は、黄褐色をしたヨーグルト状の液体であった。加熱殺菌処理後、凍結乾燥した。これを1mg/mLの濃度で蒸留水に懸濁後、1200×gで5分間遠心分離して、その上澄みをフィルター滅菌して、以下これを「LbK-PFT」として試験に用いた。なお、以下の試験において、「LbK-PFT」の濃度は、上記凍結乾燥物の状態の量で換算した濃度である。
常法により、単球由来樹状細胞を調製した。具体的には以下のように調製した。
フィコール−ハイパーク密度勾配遠心分離により、健常なドナー(チャールズドリュー大学治験審査委員会(IRB)が承認した)から得た末梢血単核球(PBMC)を分離した。培養プレートにこれらの細胞を2時間接着させ、次いで、非接着細胞を除去した。接着単球を、37℃5%CO2の加湿雰囲気下、10%FBS、1mMグルタミン、100 U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン、50ng/mLヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)及び10ng/mL組換えヒトIL−4を添加したRPMI 1640培地中で、6時間培養した。2日毎に培地の半分を新鮮な培地と交換し、6日後に樹状細胞を回収した。樹状細胞マーカーであるCD11cを発現している細胞の割合によると、得られた樹状細胞の純度は95%超であった。
異なる濃度のLbK−PFT(1、10,20、40μg/mL)を添加した以外は、上記樹状細胞の調製のときと同じ培養条件で、単球由来樹状細胞(細胞数およそ0.5×106)を24時間培養して、培養後の樹状細胞の表現型を調べた。具体的には、フローサイトメトリーにより細胞表面マーカーであるCD80、CD86、及びHLA−DRの発現を解析した。図1A、図1Bには、4つの個別の実験から任意に選択した代表的な解析結果を示す。
試験例1の培養後の上清を採取し、その上清中のサイトカイン(TNF−α、IL−6、IL−10)を、それぞれ特定のELISAキット(BDファーミンゲン)により測定した。
LbK−PFTに加えて大腸菌LPS(1μg/mL)を添加した以外は、試験例1と同様にして、単球由来樹状細胞を24時間培養して、培養後の樹状細胞の表現型を調べた。図3A,図3Bには、4つの個別の実験から任意に選択した代表的な解析結果を示す。
試験例3の培養後の上清を採取し、その上清中のサイトカイン(TNF−α、IL−6、IL−10)を、それぞれ特定のELISAキット(BDファーミンゲン)により測定した。
Claims (6)
- ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)の乳発酵物又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする樹状細胞活性化剤。
- 未熟樹状細胞を活性化するために用いられる、請求項1記載の樹状細胞活性化剤。
- 樹状細胞の免疫調節性サイトカインの産生能を高めるために用いられる、請求項1記載の樹状細胞活性化剤。
- 培養された樹状細胞に投与されるように用いられる、請求項1記載の樹状細胞活性化剤。
- 病原に由来するワクチン又は抗原とともに投与されるように用いられる、請求項1記載の樹状細胞活性化剤。
- 前記ラクトバチルス ケフィリ(Lactobacillus kefiri)は、ラクトバチルス ケフィリP-IF(Lactobacillus Kefiri P-IF)(受託番号FERM BP-10896)である、請求項1〜5のいずれか1つに記載の樹状細胞活性化剤。
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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BIOSCI. BIOTECHNOL. BIOCHEM, vol. 72, no. 11, JPN6018046972, 2008, pages 847 - 2857 * |
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