JP2017006121A - 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 - Google Patents
酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017006121A JP2017006121A JP2016109693A JP2016109693A JP2017006121A JP 2017006121 A JP2017006121 A JP 2017006121A JP 2016109693 A JP2016109693 A JP 2016109693A JP 2016109693 A JP2016109693 A JP 2016109693A JP 2017006121 A JP2017006121 A JP 2017006121A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- yeast
- atcc
- expression
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 239
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 126
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 101
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 69
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 title claims abstract description 69
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 69
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 54
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 95
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 81
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 79
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 claims description 69
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 61
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 61
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 60
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 60
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 57
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 44
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 44
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 44
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 43
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 claims description 35
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 claims description 33
- 108020003891 Squalene monooxygenase Proteins 0.000 claims description 31
- 108010016219 Acetyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 claims description 29
- 108010018763 Biotin carboxylase Proteins 0.000 claims description 29
- 102000005782 Squalene Monooxygenase Human genes 0.000 claims description 29
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 28
- 102000000452 Acetyl-CoA carboxylase Human genes 0.000 claims description 26
- 108010022535 Farnesyl-Diphosphate Farnesyltransferase Proteins 0.000 claims description 26
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 24
- 102100037997 Squalene synthase Human genes 0.000 claims description 24
- DOMXUEMWDBAQBQ-WEVVVXLNSA-N terbinafine Chemical group C1=CC=C2C(CN(C\C=C\C#CC(C)(C)C)C)=CC=CC2=C1 DOMXUEMWDBAQBQ-WEVVVXLNSA-N 0.000 claims description 24
- 229960002722 terbinafine Drugs 0.000 claims description 24
- VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N Allylamine Chemical group NCC=C VVJKKWFAADXIJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108090000662 ATP citrate synthases Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004146 ATP citrate synthases Human genes 0.000 claims description 16
- 101100010303 Drosophila melanogaster PolG1 gene Proteins 0.000 claims description 16
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 claims description 16
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 claims description 16
- 108700040132 Mevalonate kinases Proteins 0.000 claims description 16
- 101150078890 POLG gene Proteins 0.000 claims description 16
- 102000002678 mevalonate kinase Human genes 0.000 claims description 16
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 claims description 5
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 claims description 3
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 claims description 3
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims 2
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960002749 aminolevulinic acid Drugs 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 173
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 39
- 241000580885 Cutaneotrichosporon curvatus Species 0.000 description 30
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 21
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene group Chemical group CC(C)=CCC\C(\C)=C\CC\C(\C)=C\CC\C=C(/C)\CC\C=C(/C)\CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 15
- 101150091750 HMG1 gene Proteins 0.000 description 14
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 14
- 101100178203 Arabidopsis thaliana HMGB3 gene Proteins 0.000 description 13
- 102000055207 HMGB1 Human genes 0.000 description 13
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 description 13
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical compound CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 description 10
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 8
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 102220005264 rs33974228 Human genes 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 description 5
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000010687 lubricating oil Substances 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 5-fluoroorotic acid Chemical compound OC(=O)C=1NC(=O)NC(=O)C=1F SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 ADE2 Proteins 0.000 description 4
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000221523 Rhodotorula toruloides Species 0.000 description 4
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000010720 hydraulic oil Substances 0.000 description 4
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N (R)-mevalonic acid Chemical compound OCC[C@](O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 3
- 102000018727 5-Aminolevulinate Synthetase Human genes 0.000 description 3
- 108010052384 5-Aminolevulinate Synthetase Proteins 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N DL-mevalonic acid Natural products OCCC(O)(C)CC(O)=O KJTLQQUUPVSXIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150093680 ERG1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 3
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910013594 LiOAc Inorganic materials 0.000 description 3
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000556225 Pseudozyma sp. Species 0.000 description 3
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 3
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 3
- 102000009822 Sterol Regulatory Element Binding Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010020396 Sterol Regulatory Element Binding Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 3
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 description 3
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 description 3
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 102220032323 rs104895307 Human genes 0.000 description 3
- 102200017280 rs267606661 Human genes 0.000 description 3
- 102220005318 rs33974277 Human genes 0.000 description 3
- 102220063362 rs786204851 Human genes 0.000 description 3
- 102220019024 rs80358597 Human genes 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 3
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 3
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 101100289888 Caenorhabditis elegans lys-5 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101150074296 HEM1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100022128 High mobility group protein B2 Human genes 0.000 description 2
- 101001045791 Homo sapiens High mobility group protein B2 Proteins 0.000 description 2
- 101000583616 Homo sapiens Polyhomeotic-like protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000583581 Homo sapiens Polyhomeotic-like protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101001047090 Homo sapiens Potassium voltage-gated channel subfamily H member 2 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 2
- 102100030903 Polyhomeotic-like protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100030905 Polyhomeotic-like protein 3 Human genes 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical group C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102100025560 Squalene monooxygenase Human genes 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100215634 Yarrowia lipolytica (strain CLIB 122 / E 150) XPR2 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 101150116391 erg9 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 101150029559 hph gene Proteins 0.000 description 2
- 108010002685 hygromycin-B kinase Proteins 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000003879 lubricant additive Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000004844 protein turnover Effects 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 102200038856 rs150565592 Human genes 0.000 description 2
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- OKZYCXHTTZZYSK-ZCFIWIBFSA-N (R)-5-phosphomevalonic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@](O)(C)CCOP(O)(O)=O OKZYCXHTTZZYSK-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- YUVKUEAFAVKILW-UHFFFAOYSA-N 2-(4-{[5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]oxy}phenoxy)propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)C(O)=O)=CC=C1OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=N1 YUVKUEAFAVKILW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 2-trans,6-trans-farnesyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 0.000 description 1
- 102100026105 3-ketoacyl-CoA thiolase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVFOHMXILQEIHX-UHFFFAOYSA-N 8-[(6-bromo-1,3-benzodioxol-5-yl)sulfanyl]-9-[2-(2-bromophenyl)ethyl]purin-6-amine Chemical compound C=1C=2OCOC=2C=C(Br)C=1SC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1CCC1=CC=CC=C1Br PVFOHMXILQEIHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150058703 ACC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010006229 Acetyl-CoA C-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710190443 Acetyl-CoA carboxylase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100021334 Bcl-2-related protein A1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030981 Beta-alanine-activating enzyme Human genes 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235646 Cyberlindnera jadinii Species 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 101710178665 Error-prone DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- VWFJDQUYCIWHTN-FBXUGWQNSA-N Farnesyl diphosphate Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CC\C(C)=C/COP(O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-FBXUGWQNSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 244000168141 Geotrichum candidum Species 0.000 description 1
- 235000017388 Geotrichum candidum Nutrition 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol-phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(O)CO XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150009006 HIS3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101150089429 HMGR gene Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025076 Holoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000773364 Homo sapiens Beta-alanine-activating enzyme Proteins 0.000 description 1
- 108010000775 Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100028888 Hydroxymethylglutaryl-CoA synthase, cytoplasmic Human genes 0.000 description 1
- 101150062179 II gene Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 101150044775 LYS1 gene Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001489207 Lipomyces lipofer Species 0.000 description 1
- 241001149691 Lipomyces starkeyi Species 0.000 description 1
- 241000529878 Lipomyces tetrasporus Species 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 1
- 101100390535 Mus musculus Fdft1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001443590 Naganishia albida Species 0.000 description 1
- 101100390536 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) erg-6 gene Proteins 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 241000898487 Pachyneuron aphidis Species 0.000 description 1
- 235000021319 Palmitoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000222051 Papiliotrema laurentii Species 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000765883 Pseudozyma sp. JCC207 Species 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N Purine Natural products N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 101100394989 Rhodopseudomonas palustris (strain ATCC BAA-98 / CGA009) hisI gene Proteins 0.000 description 1
- 101150014136 SUC2 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001634922 Tausonia pullulans Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150044776 URA5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100129084 Yarrowia lipolytica (strain CLIB 122 / E 150) LYS5 gene Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192381 [Candida] diddensiae Species 0.000 description 1
- 108010064926 acyl-CoA carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 150000003868 ammonium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003225 biodiesel Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N cis-palmitoleic acid Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 150000003999 cyclitols Chemical group 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Chemical group 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- YLJRCXSSKLWCDE-UHFFFAOYSA-N methyl ethanesulfonate Chemical compound CCS(=O)(=O)OC YLJRCXSSKLWCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000008223 ribosides Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 239000010686 shark liver oil Substances 0.000 description 1
- 229940069764 shark liver oil Drugs 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000004059 squalene synthase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000003421 squalenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FUSNMLFNXJSCDI-UHFFFAOYSA-N tolnaftate Chemical compound C=1C=C2C=CC=CC2=CC=1OC(=S)N(C)C1=CC=CC(C)=C1 FUSNMLFNXJSCDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004880 tolnaftate Drugs 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/007—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons containing one or more isoprene units, i.e. terpenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
- C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
- C12P5/026—Unsaturated compounds, i.e. alkenes, alkynes or allenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/102—Plasmid DNA for yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/72—Candida
- C12R2001/73—Candida lipolytica
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本出願は、米国特許仮出願第61/263,775号(標題“Methods and Compositions for Producing Squalene Using Yeast”、2009年11月23日出願。参照によりその全体が全ての目
的において本明細書に組み込まれる)に対する優先権を主張する。
酵母を用いるイソプレノイド(例えばスクアレン)の生成のための方法および組成物を提供する。
以下の発明の背景に関する記載は単に本発明に関する理解を促すために提供するものであり、本発明の従前技術を記述する、またはそれを構成すると認めるものではない。
ルトンのオーダーであると推定される。
ンおよびいくつかの多価不飽和脂肪酸を産生する」野生型酵母、Pseudozyma属JCC207の発見について報告している。Changらの報告によれば、米国グアム近海で採取した海水からPseudozyma属JCC207を単離したが、Pseudozyma属JCC207が新種であるか、または、P. regulosaもしくはP. aphidisの変種であるかは明らかではない。報告によれば、「(Pseudozyma属JCC207の)スクアレン産生効率を異なる条件下で検討した」。
df)の開示によれば、「当社は、遺伝子工学を利用して油性酵母の代謝特性を改変し、酵母の生合成によるイソプレンの産生能力を向上させることを提案した」。特に、以下の4
つの酵素を標的としている:ACCase、ヒドロキシメチルグルタリルCoAレダクターゼ(HMGR)、スクアレンシンターゼ、およびスクアレンエポキシダーゼ。
を増加させる方法」を開示している。特に、「HMG-CoAレダクターゼ活性を有するポリペ
プチドをコードする遺伝子の発現レベル増加により、スクアレンおよびステロール蓄積が増加する」ことを開示している。
本発明は、酵母からスクアレンを生成するための組成物および方法を提供する。
バロン酸キナーゼ(例えばY. lipolyticaメバロン酸キナーゼ(Genolevures YALI0B16038g))、グリセロールキナーゼ(例えばY. lipolyticaグリセロールキナーゼ(Genolevures YALI0F00484g))、および/または5-アミノレブリン酸シンターゼ(例えばSaccharomyces cerevisiae HEM1遺伝子にコードされる)の改変、変異導入、または活性変更を行っ
てもよい。
、遺伝子銃、スフェロプラスト、および/またはアグロバクテリウム。例えばMcClelland, C.M., Chang, Y.C.,およびKwon-Chung, K.J. (2005) Fungal Genetics and Biology 42:904-913参照)のいずれかによって酵母細胞に導入し、変異型酵素を有する細胞を同定することを含む。
ビナフィンのようなアリルアミン抗真菌剤)に暴露すること、および同酵母からスクアレンを抽出することを含む。ある態様では、該方法は、遺伝子転換された酵母(例えば本明細書に記載するもの)を抗真菌剤(例えばテルビナフィンのようなアリルアミン抗真菌剤)に暴露すること、および同酵母からスクアレンを抽出することを含む。ある態様では、該方法は、遺伝子転換されていない酵母(例えば本明細書に記載するもの)を抗真菌剤(例えばテルビナフィンのようなアリルアミン抗真菌剤)に暴露すること、および同酵母からスクアレンを抽出することを含む。
μg/ml;または約5μg/ml;または約10μg/ml;または約11μg/ml;または約12μg/ml;
または約12.5μg/ml;または約13μg/ml;または約15μg/ml;または約16μg/ml;または約20μg/ml;または約25μg/ml;または約30μg/ml;または約40μg/ml;または約50μg/mlまたはそれ以上。本明細書に開示する、抗真菌剤(例えばテルビナフィンのようなアリルアミン抗真菌剤)を含む方法および組成物の特定の態様では、抗真菌剤(例えばテルビナフィンまたは他の抗真菌剤)を以下の範囲の濃度で添加または含有することができる:約0.5-100μg/ml;または0.5-50μg/ml;または1-50μg/ml;または5-50μg/ml;または8-50μg/ml;または10-50μg/ml;または12-50μg/ml;または15-50μg/ml;または15-50
μg/ml;または25-50μg/ml;または1-25μg/ml;または5-25μg/ml;または10-25μg/ml;または10-20μg/ml;または10-15μg/ml。
かの結合部分のうちの一つによって結合してもよく、それらの部分はリンを含有しても含有しなくてもよい。未置換型ホスホジエステル結合で結合したヌクレオシドをヌクレオチ
ドと称する。本明細書で使用する「核酸塩基」には、ペプチド核酸塩基、ペプチド核酸のサブユニット、およびモルホリン核酸塩基、並びにヌクレオシドおよびヌクレオチドが含まれる。
よび3'末端を一つずつ有し、これらはポリマーの最末端核酸塩基である。ある種のオリゴ核酸塩基鎖は、全ての型の核酸塩基を含有してもよい。オリゴ核酸塩基化合物は、相補的であってワトソン・クリック塩基対形成によってハイブリダイズする1つまたはそれ以上のオリゴ核酸塩基鎖を含有する化合物である。核酸塩基はデオキシリボ型またはリボ型のいずれかである。リボ型核酸塩基はペントースフラノシルを含有する核酸塩基であり、2'炭素はヒドロキシル、アルキルオキシ、またはハロゲンで置換されたメチレンである。デオキシリボ型核酸塩基は、リボ型核酸塩基以外の核酸塩基であって、ペントースフラノシル部分を含有しない全ての核酸塩基を含む。
選択される酵母から誘導される。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母は、Cryptococcus curvatus、Yarrowia lipolytica、およびRhodotorula glutinusから成る群から選択される酵母から誘導される。関連する態様では、遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母はCryptococcus curvatusおよ
びRhodotorula glutinusから成る群から選択される酵母から誘導される。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母はYarrowia lipolyticaから誘導されたものではない。ある態様では、遺伝子転換された酵母または遺伝子転換
されていない酵母はATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613
、およびYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia lipolytica株である。
は、遺伝子転換された酵母中のアセチルCoAカルボキシラーゼは、その活性および/また
は発現が、対応する野生型酵母に比較して低下するように;またはその活性および/または発現が除去されるように改変される。他の態様では、アセチルCoAカルボキシラーゼを
、その基質選択性が変更されるように改変してもよい。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、アセチルCoAカルボキシラーゼの活性および/または発現が、対応する
野生型酵母に比較して低下するが、活性は除去されないように改変される。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のアセチルCoAカルボキシ
ラーゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の約90%;または約80%;または約70%;または約60%;または約50%;または約40%;または約30%;または約20%;または約10%;または約5%まで低下するように改変される。関連する態
様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のアセチルCoAカルボキシラ
ーゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の約90-95%;または約80-90%;または約70-80%;または約60-70%;または約50-60%;または約40-50%;または約30-40%;または約20-30%;または約10-20%;または約5-10%;または約2-5%となるように改変される。
変更されるように改変してもよい。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のHMG-CoAレダクターゼの活性および/または発現が、対応する野
生型酵母の活性および/または発現の少なくとも1.2倍;または1.5倍;または2倍;また
は3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;または20倍;または50倍;ま
たは100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000倍;または1,000,000倍まで増加するように改変される。
クアレンエポキシダーゼを、Saccharomyces cerevisiaeのERG1遺伝子中にテルビナフィンに対する感受性の増加に関係する以下の変異の1つまたはそれ以上のホモログを含有するように改変する:G30S、L37P、およびR269G(例えばTurnowsky、2005、2007、および2008参照)。ある態様では、酵母スクアレンエポキシダーゼ遺伝子を、野生型遺伝子の合成および置換によって、またはRTDSによる変異導入によって本明細書に記載するように改変する。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のスクアレンエポキシダーゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現に比較して約90%;または約80%;または約70%;または約60%;または約50%;ま
たは約40%;または約30%;または約20%;または約10%;または約5%まで低下するように改変される。関連する態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のスクアレンエポキシダーゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の約90-95%;または約80-90%;または約70-80%;または約60-70%;または約50-60%;または約40-50%;または約30-40%;または約20-30%;または約10-20%;または約5-10%;または約2-5%となるように改変される。
が変更されるように改変してもよい。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のスクアレンシンターゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の少なくとも1.2倍;または1.5倍;または2倍;ま
たは3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;または20倍;または50倍;
または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000倍;または1,000,000倍まで増加するように改変される。
ある態様では、1つのサブユニットのホロ酵素を含む動物ATPリアーゼ遺伝子の挿入およ
び/または異種発現によって、改変された酵母中のATPクエン酸リアーゼの活性を増加さ
せる。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母中のATPクエン酸リアーゼは、その
活性および/または発現が、対応する野生型酵母に比較して増加するように改変される。ある好ましい態様では、遺伝子転換した酵母は、遺伝子転換された酵母中のATPクエン酸
リアーゼの活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の少なくとも1.2倍;または1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;または20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000倍;または1,000,000倍まで増加するように改変される。
ましくは、その活性および/または発現が、対応する野生型酵母に比較して増加される。
ナーゼ(例えばY. lipolyticaメバロン酸キナーゼ(Genolevures YALI0B16038g))は、
その活性および/または発現が、対応する野生型酵母に比較して増加するように改変される。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のメバロン酸キナーゼ(例えばY. lipolyticaメバロン酸キナーゼ(Genolevures YALI0B16038g)
)の活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または発現の少なくとも1.2倍;または1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;または20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000倍;または1,000,000倍まで増加するように改変される。
YALI0F00484g))である。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母中のグリセロ
ールキナーゼ(例えばY. lipolyticaグリセロールキナーゼ(Genolevures YALI0F00484g
))は、その活性および/または発現が、対応する野生型酵母に比較して増加するように改変される。ある好ましい態様では、遺伝子転換された酵母は、遺伝子転換された酵母中のグリセロールキナーゼ(例えばY. lipolyticaグリセロールキナーゼ(Genolevures YALI0F00484g))の活性および/または発現が、対応する野生型酵母の活性および/または
発現の少なくとも1.2倍;または1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;または20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000倍;または1,000,000倍まで増加するように改変される。
伝子転換されていない酵母において改変される酵素は(例えばSaccharomyces cerevisiae
HEM1遺伝子にコードされる)5-アミノレブリン酸シンターゼである。好ましくは、その
活性および/または発現が、対応する野生型酵母に比較して増加される。
の少なくとも28%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも30%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも32%がスクアレンである;または総脂質含有量
の少なくとも35%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも37%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも38%がスクアレンである;または総脂質含有量
の少なくとも40%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも42%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも45%がスクアレンである;または総脂質含有量
の少なくとも47%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも50%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも52%がスクアレンである;または総脂質含有量
の少なくとも55%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも57%がスクアレンである;または総脂質含有量の少なくとも60%もしくはそれ以上がスクアレンである。
とも約20%含有する酵母をいう。少なくとも約20% cdwのレベルの脂質を蓄積できる能力は、特定の属に限られたものではない;約20% cdw以上の脂質はLipomyces lipofer、L. starkeyi、L. tetrasporus、Candida lipolytica、C. diddensiae、C. paralipolytica、C. curvata、Cryptococcus albidus、Cryptococcus laurentii、Geotrichum candidum、Rhodotorula graminus、Trichosporon pullulans、Rhodosporidium toruloides、Rhodotor
ula glutinus、Rhodotorula gracilis、およびYarrowia lipolyticaで報告されている。
例えばTatsumiら, 米国特許第4,032,405号およびRattray, Microbial Lipids, Vol. 1 (1998)参照。
酵母の種類
本明細書に開示する組成物および方法は、多くの酵母種および株のうちの、任意のものに基づくことができる。ある態様では、酵母は油性酵母である。例えば酵母はCryptococcus curvatus(例えばATCC 20508)、Yarrowia lipolytica(例えばATCC 20688またはATCC
90811)、Rhodotorula glutinus(例えばATCC 10788またはATCC 204091)、およびRhorosporidium toruloidesであってもよい。発明者は、Cryptococcus curvatusおよびRhodotorula glutinisが他の酵母(例えばYarrowia lipolytica)と比較して、広範な基質上で非常に高密度まで増殖し、多くの培養条件下で多量の総脂質を産生することを発見した。従って、特定の態様では、Cryptococcus curvatusおよびRhodotorula glutinisは、本明細
書に開示する組成物および方法に特に有益である。Yarrowia lipolyticaに特異的な多く
の遺伝子ツール(例えば形質転換プロトコル、選択マーカー)が開発されている;そのため、ある態様では、Yarrowia lipolyticaは本明細書に開示する組成物および方法に特に
有益である。本明細書に開示する組成物および方法のある態様では、酵母(遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母)はYarrowia lipolytica株、例えばATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgであ
ってもよい。
本発明は、以下に詳述するコンフォメーションおよび化学的性質を有する「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」を用いて実施することができる。本発明の「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」には、混合2本鎖オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド非含有分子、1本鎖オリゴデオキシヌクレオチド、および以下に記載する特許および特許文献に記載される、他の遺伝子修復分子がある。本発明の「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」は、公開されている科学文献および特許文献に、以下の別称でも記載されている:「遺伝子組換え(recombinagenic)オリゴヌクレオチド」、「RNA/DNAキメラオリゴヌクレオチド」、「キメラオリゴヌクレオチ
ド」、「混合2本鎖オリゴヌクレオチド(MDON)」、「RNA DNAオリゴヌクレオチド(RDO)」「遺伝子ターゲッティング・オリゴヌクレオチド」、「ゲノプラスト(genoplast)
」、「1本鎖改変型オリゴヌクレオチド」、「1本鎖オリゴデオキシヌクレオチド変異ベクター」、「2本鎖変異ベクター」、および「ヘテロ2本鎖変異ベクター」。
よび化学的性質を有するオリゴ核酸塩基は、本発明の「遺伝子修復オリゴ核酸塩基」として使用するのに好適である。Kmiec Iおよび/またはKmiec IIの遺伝子修復オリゴ核酸塩
基は2つの相補的な鎖を含有し、その一方はRNAヌクレオチドの少なくとも1つのセグメ
ント(「RNAセグメント」)であって、他方のDNAヌクレオチド鎖と塩基対を形成する。
、並びに国際特許出願PCT/US00/23457;そして国際公開WO 98/49350;WO 99/07865;WO 99/58723;WO 99/58702;およびWO 99/40789(参照によりその全体が本明細書に組み込ま
れる)。
となっている。好適な置換基にはKmiec IIに報告されている置換基がある。他の置換基には、米国特許第5,334,711号(Sproat)に報告されている置換基、そして欧州特許EP 629 387およびEP 679 657(総称、Martinアプリケーション)に報告されている置換基がある
(これらは参照により本明細書に組み込まれる)。本明細書の使用では、リボヌクレオチドの2'-フルオロ、クロロ、もしくはブロモ誘導体、またはMartinアプリケーションもし
くはSproatに記載される置換基で置換された2'-OHを有するリボヌクレオチドを「2'-置換型リボヌクレオチド」と称する。本明細書で使用する「RNAヌクレオチド」とは、2'-ヒドロキシルまたは2'-置換型ヌクレオチドで、混合2本鎖オリゴヌクレオチドの他方のヌク
レオチドに未置換型ホスホジエステル結合またはKmiec IもしくはKmiec IIに記載される
非天然型結合で結合しているものをいう。本明細書で使用する「デオキシリボヌクレオチド」とは2'-Hを有するヌクレオチドであり、これは遺伝子修復オリゴ核酸の他のヌクレオチドに未置換型ホスホジエステル結合またはKmiec IもしくはKmiec IIに記載される非天
然型結合で結合している。
それぞれ、2'-置換型ヌクレオチドである。ある好ましい態様では、2'-置換型リボヌクレオチドは2'-フルオロ、2'-メトキシ、2'-プロピルオキシ、2'-アリルオキシ、2'-ヒドロ
キシルエチルオキシ、2'-メトキシエチルオキシ、2'-フルオロプロピルオキシ、および2'-トリフルオロプロピルオキシ置換型リボヌクレオチドである。より好ましい態様では、2'-置換型リボヌクレオチドは2'-フルオロ、2'-メトキシ、2'-メトキシエチルオキシ、お
よび2'-アリルオキシ置換型ヌクレオチドである。別の態様では、混合2本鎖オリゴヌク
レオチドは未置換型ホスホジエステル結合で結合している。
混合2本鎖オリゴヌクレオチドを用いて実施することができる。RNAセグメントの機能は
2つのRNAトリヌクレオチド間にデオキシヌクレオチドを導入することによって起こる離
断に影響されないため、RNAセグメントという用語は「不連続型RNAセグメント」なども包含する。不連続的でないRNAセグメントを連続型RNAセグメントと称する。別の態様では、RNAセグメントはRNase耐性ヌクレオチドおよび未置換型2'-OHヌクレオチドを交互に含有
してもよい。混合2本鎖オリゴヌクレオチドは、好ましくは100未満、より好ましくは85
未満、かつ50より多いヌクレオチドを含有する。第1のストランドおよび第2のストランドはワトソン・クリック塩基対を形成している。ある態様では、混合2本鎖オリゴヌクレオチドのストランドはリンカー(例えば1本鎖ヘキサ、ペンタ、またはテトラヌクレオチ
ド)で共有結合しており、そのため第1および第2のストランドはそれぞれ、1つの3'
末端および1つの5'末端を有する1つのオリゴヌクレオチド鎖のセグメントである。3'および5'末端を保護するために、「ヘアピン・キャップ」の添加によって3'および5'末端ヌクレオチドを隣接するヌクレオチドとワトソン・クリック塩基対形成させてもよい。更に、第2のヘアピン・キャップを同3'および5'末端から遠位にある第1および第2ストランド間の接合部に配することによって、第1および第2ストランド間のワトソン・クリック塩基対形成を安定化させてもよい。
レオチドを含有し、DNAセグメントを連結させる1つまたはそれ以上のDNAヌクレオチドを含有してもよく、また、介在DNAセグメント内に存在しないDNAヌクレオチドを含有してもよい。2つの相同領域は、標的遺伝子の配列と異なる配列を有する領域(「非相同領域」と称する)で分離され、それぞれはこの非相同領域に隣接する。非相同領域は1、2、または3個のミスマッチ・ヌクレオチドを含有してもよい。ミスマッチ・ヌクレオチドは連続しているか、または、標的遺伝子と相同な1個もしくは2個のヌクレオチドで分離されていてもよい。あるいはまた、非相同領域は、1、2、3、または5個以下のヌクレオチドから成る挿入部分を含有してもよい。あるいはまた、混合2本鎖オリゴヌクレオチド配列の標的遺伝子配列との相違は、混合2本鎖オリゴヌクレオチドから1、2、3、または5個以下のヌクレオチドが欠失していることだけであってもよい。この場合、混合2本鎖オリゴヌクレオチドのヌクレオチドはいずれも非相同領域内に存在しないが、それでもなお、非相同領域の長さおよび位置は欠失の長さであると見なされる。置換(単数または複数)が企図される場合、2つの相同領域に相補的な標的遺伝子のフラグメント間の長さは、非相同領域の長さと同一である。非相同領域が挿入部分を含有する場合、相同領域は混合2本鎖オリゴヌクレオチド中で、それに相補的な相同フラグメントが遺伝子中で存在するより遠位に分離される。非相同領域が欠失をコードする場合はこの逆である。
的遺伝子のフラグメントと配列が同一である領域)の一部であり、それらのセグメントは、好ましくは共に少なくとも13個のRNAヌクレオチド、好ましくは16-25個のRNAヌ
クレオチド、更に好ましくは18-22個のRNAヌクレオチド、または最も好ましくは20個のヌクレオチドを含有する。ある態様では、相同領域のRNAセグメント(複数)は、介在DNAセグメントによって分離され、それぞれがこのDNAセグメントに隣接してもよい、すな
わち、「DNAセグメントによって連結されて」もよい。ある態様では、非相同領域の各ヌ
クレオチドは、介在DNAセグメントのヌクレオチドである。混合2本鎖オリゴヌクレオチ
ドの非相同領域を含有する介在DNAセグメントを「変異誘発セグメント」と称する。
本明細書に組み込まれる)に開示される1本鎖オリゴデオキシヌクレオチド変異ベクター(single stranded oligodeoxynucleotide mutational vector;SSOMV)である。SSOMVの配列は以下に報告されている変異ベクターと同じ原理に基づく:米国特許第5,756,325号
;第5,871,984号;第5,760,012号;第5,888,983号;第5,795,972号;第5,780,296号;第5,945,339号;第6,004,804号;および第6,010,907号、並びに、国際公開WO 98/49350;WO 99/07865;WO 99/58723;WO 99/58702;およびWO 99/40789。SSOMVの配列は、標的配列と相同な2つの領域を含有し、それらの領域は所望の遺伝子改変を含有する領域(変異誘発領域と称する)によって分離されている。変異誘発領域は、標的配列中の相同な領域を分離する配列と同じ長さであって、異なる配列を有してもよい。それらの変異誘発領域により、置換が起きてもよい。あるいはまた、SSOMV中の相同領域は互いに連続的であって、
同じ配列を有する標的遺伝子中の同領域は1、2、またはそれ以上のヌクレオチドで分離
されていてもよい。それらのSSOMVにより、SSOMV中に存在しないヌクレオチドが標的遺伝子から欠失される。最後に、相同領域と同一である標的遺伝子配列は、標的遺伝子中では隣接していて、SSOMV配列中では1、2、またはそれ以上のヌクレオチドで分離されてい
てもよい。それらのSSOMVにより、標的遺伝子配列に挿入が起こる。
オチドである。ただし、3'末端および/もしくは5'末端ヌクレオチド間結合、または2つの3'末端および/もしくは5'末端ヌクレオチド間結合はホスホロチオエートまたはホスホアミデートであってもよい。本明細書で使用するヌクレオチド間結合はSSOMVのヌクレオ
チド間の結合であって、3'末端ヌクレオチドまたは5'末端ヌクレオチドとブロッキング置換基(上記参照)との間の結合は含まない。特定の態様では、SSOMVは21から55デオキシ
ヌクレオチド長であり、従って、相同領域の全長は少なくとも20デオキシヌクレオチドであり、少なくとも2つの相同領域はそれぞれ、少なくとも8デオキシヌクレオチド長である。
あるように設計してもよい。所望する変異が単一塩基の置換である場合、変異誘発ヌクレオチドはいずれもピリミジンであるのが好ましい。所望する機能が得られるのであれば、変異誘発ヌクレオチドおよび相補鎖中の標的となるヌクレオチドがいずれもピリミジンであるのが好ましい。トランスバージョン変異をコードする(すなわちCまたはT変異誘発ヌクレオチドが、それぞれ相補鎖中のCまたはTヌクレオチドとミスマッチである)SSOMVは
特に好ましい。
、その長さは少なくとも6原子長であるのが好ましく、リンカーはフレキシブルであるべ
きである。種々の非毒性置換基、例えばビオチン、コレステロール、または他のステロイドもしくは非インターカレート・カチオン性蛍光色素を使用してもよい。SSOMVを生成す
るための試薬として特に好ましいのは、Glen Research社(バージニア州スターリング)
から販売されているCy3TMおよびCy5TMという試薬であり、これらはオリゴヌクレオチドへの導入の際、それぞれ3,3,3',3'-テトラメチルN,N'-イソプロピル置換されたインドモノ
カルボシアニンおよびインドジカルボシアニン色素を生成する、ブロッキングされたホスホロアミダイトである。Cy3が最も好ましい。インドカルボシアニンがN-オキシアルキル
置換されている場合、5'末端リン酸とのホスホジエステルとしてオリゴデオキシヌクレオチドの5'末端に便宜に結合できる。色素およびオリゴデオキシヌクレオチド間の色素リンカーの化学的性質は重要ではなく、合成の簡便性によって選択する。市販のCy3ホスホル
アミダイトを説明書に従って使用する場合、得られる5'修飾はブロッキング置換基およびリンカーから成り、それらは合わせてN-ヒドロキシプロピルN'-ホスファチジルプロピル3,3,3',3'-テトラメチルインドモノカルボシアニンとなる。
グ置換基の化学的性質は重要ではない。
ある態様では、異種発現によって外来遺伝子または内在性遺伝子の過剰コピーを酵母(例えばYarrowia lipolytica)中で発現させる。酵母における異種発現は、当該分野で公
知の方法を用いて行うことができる。異種発現を用いる酵母中での外来遺伝子または内在
性遺伝子の過剰コピーの発現は、以下を含有するベクターの使用を伴ってもよい:(a)転
写開始のためのプロモーター配列、(b)転写終了のための終結配列、および(c)選択マーカー。異種発現および発現ベクターは、例えば以下に報告されているものであってもよい:Madzak, C., Gaillardin, C.,およびBeckerich, J-M., 2004 Heterologous Protein Expression and Secretion in the Non-Conventional Yeast Yarrowia lipolytica: a review, Journal of Biotechnology 109:63-81。本明細書の組成物および方法のある態様では、ベクターはpYLEX1(Yeastern)である。使用できる選択マーカーの非制限的な例としてura3、lys5、trp1、leu2、ade1、ハイグロマイシン耐性をコードするE.coli hph、およびSaccharomyces cerevisiae由来のSUC2がある。使用できるプロモーターの非制限的な例としてpLEU2、pXPR2、pPOX2、pPOT1、pICL1、pG3P、pMTP、pTEF、およびpRPS7がある。ある態様では、プロモーターはhp4dプロモーターであり、これは強力な構成的ハイブリッド・プロモーターである(米国特許第6,083,717号(2000年7月4日出願))。使用できる終
結配列の非制限的な例としてXPR2t、LIP2t、およびPHO5tがある。
lipolytica URA3(GenBank: U40564.1)またはLEU2(Genoluveres YALI0C00407)を選択マーカーとして使用する。
カンもしくはグリセロール利用遺伝子、XPR2、ACC1、HMG1、ERG1、およびERG9から成る群から選択される1つもしくはそれ以上のプロモーターおよび/またはターミネーター配列を含む。
本明細書に開示する改変型または変異型酵素は、塩基対の変更、挿入、置換などによって改変または変異させることができる。
をコードする。他の態様では、標的遺伝子はHMG-CoAレダクターゼをコードする。他の態
様では、標的遺伝子はスクアレンエポキシダーゼをコードする。他の態様では、標的遺伝子はスクアレンシンターゼをコードする。ある態様では、標的遺伝子はATPクエン酸リア
ーゼをコードする。変異は、酵素の活性を低減もしくは除去する、酵素の活性を向上する、または酵素の活性を変更する(例えば基質選択性を変化させる)ように設計してもよい。
加するために、ACCaseの酵素発現および比活性を低減させることが望ましい。代表的なACCase遺伝子配列は、Saccharomyces cerevisiaeのACC1遺伝子(アクセッション番号:Z71631)である。従って、ACCaseの細胞内活性を低減させるある態様では、メバロン酸生合成とトリグリセリド生合成との分岐点における酵素によって、油脂合成に分配されるアセチルCoAの量が低減し、それによってイソプレン経路に利用できる量が増加する。
される。
路の下流酵素の操作を介して、多くの関連するイソプレノイド産物を産生できる、中核となるイソプレノイド産生菌体を作製することができる。
か、またはアセチルCoAアセチルトランスフェラーゼによってイソプレンおよび誘導体(例えばスクアレン)の生成に利用される。
、メバロン酸からメバロン酸5リン酸への変換を触媒する。従って、ある態様では、例えば酵素のアミノ酸配列中の触媒的に重要な残基を変更するか、またはその遺伝子量もしくは転写レベルを増加させることによって、酵母中のメバロン酸キナーゼの活性および/または発現レベルを増加させる。
酸が生成されるのを触媒する。従って、ある態様では、例えば酵素のアミノ酸配列中の触媒的に重要な残基を変更するか、またはその遺伝子量もしくは転写レベルを増加させることによって、酵母中のグリセロールキナーゼの活性および/または発現レベルを増加させる。
炭素の流れを巡る主な競合経路が減弱され、結果としてスクアレンの産生量が顕著に増加する。
任意の公知の方法を本発明の方法に使用して、酵母細胞を遺伝子修復オリゴ核酸塩基で形質転換することができる。代表的な方法として、エレクトロポレーション、LiOAc、遺
伝子銃、スフェロプラスト、および/またはアグロバクテリウムの使用がある(例えばMcClelland, C.M., Chang, Y.C.,およびKwon-Chung, K.J. (2005) Fungal Genetics and Biology 42:904-913参照)。
たは4000mw)および/または酢酸リチウムで処理した酵母細胞内に遺伝子修復オリゴ核酸塩基を導入する。ある態様では、PEG(3350または4000mw)および/または酢酸リチウム
を用いて、遺伝子修復オリゴ核酸塩基を酵母細胞に導入する。
、100%エタノールに再懸濁する。この粘性溶液中の典型的な成分濃度は8-10μg/μL
のマイクロキャリア、14-17μg/μLの混合2本鎖オリゴヌクレオチド、1.1-1.4MのCaCl2、および18-22mMのスペルミジンである。ある態様では、成分濃度は8μg/μLのマイクロキャリア、16.5μg/μLの混合2本鎖オリゴヌクレオチド、1.3MのCaCl2、およ
び21mMのスペルミジンである。
in Enzymology, vol. 194, section [12] pp. 182-186. 1991. Elsevier Academic Press, London参照)。
改変型酵素を発現する酵母の同定は、多くの方法のいずれを用いて行うことができる。ある方法では、同一実験で選択可能な転換(すなわちマーカー)および選択不能な転換(例えば目的の標的遺伝子)の両方を標的とする遺伝子修復オリゴ核酸塩基(gene repair oligonucleobases;GRON)を用いる、同時転換法を行う。この方法では、GRONが送達されなかった、またはGRONによって指定された転換が伝達されなかった細胞が除去される。非関連遺伝子を標的とするGRONの送達は選択的ではないと考えられるので、ある程度の頻度で、うまく選択された転換を含有するコロニーは、他の標的遺伝子の1つにも転換を有すると考えられる。転換事象は一塩基多型(SNP)分析によって解析される。
し、得られた増副産物を直接シーケンシングするか、またはクローニングして複数の挿入断片をシーケンシングしてもよい。
ドプライマー伸長のような増幅法)のいずれによって行ってもよい。より大きな変異の検出は、変異を導入すべき標的遺伝子領域の増幅およびシーケンシングによって行ってもよい。
Cryptococcus curvatus(ATCC株20508)およびRhodotorula glutinis(ATCC株10788お
よび204091)形質転換系を作製するために、S. cerevisiaeにカナマイシン耐性を付与す
るKANMX発現カセット(プロモーター-遺伝子-ターミネーター)を選択マーカーとして用
い、菌株をカナマイシン感受性から耐性に転換する(例えばBaudin, A.ら (1993) Nucleic Acids Research (21) 3329-3330参照)。菌株を、発現カセットのみ、並びに、DNA複製起点を含有するR. glutinusが報告するプラスミド(例えばOloke, J.K.およびGlick, B.R. (2006) African Journal of Biotechnology 5(4):327-332参照)の制限フラグメントにライゲートしたKANMXで形質転換した。エレクトロポレーション、LiOAc、遺伝子銃、スフェロプラスト、および/またはアグロバクテリウムによって、DNAをC. curvatusおよびR.
glutinisに導入する(McClelland, C.M., Chang, Y.C.,およびKwon-Chung, K.J. (2005)
Fungal Genetics and Biology 42:904-913)。
Cryptococcus curvatusおよびRhodotorula glutinisにおいてウラシル要求性変異株を
作製するために、細胞を抗代謝物(5-フルオロオロチン酸)を含有する最少量の培地中で培養し、ura3またはura5遺伝子中に変異を有する耐性変異体を選択した。Cryptococcus curvatusの安定な5-FOARコロニー33個およびRhodotorula glutinisの安定な5-FOARコロニ
ー20個をバンクに預託した。Cryptococcus curvatusおよびRhodotorula glutinis由来の
野生型URA3遺伝子をクローニングし、5-FOAR分離株中の変異ura3遺伝子をシーケンシングした。
Yarrowia lipolytica株ATCC 90811(leu2-35 lys5-12 ura3-18 XPR2B)由来のleu2、lys5、およびura3遺伝子の対立遺伝子をPCRによってクローニングし、その配列を野生型対
立遺伝子と比較して差異を同定した。
化が起こるが、1511位でインフレームとなって7個のアミノ酸付加となり、その後配列はGenBankのYL URA3として継続)、1511位(ATCC 90811に余剰塩基T)、および1978位(C→T変異。停止変異となり、これによってタンパク質のトランケーションが起こり、カルボキシ末端の24個のアミノ酸が短縮される)。停止(TGA)→R(CGA)の転換によって原栄養
性を回復するようにGRONオリゴヌクレオチドを設計し、YlUra3 - YLU40564アミノ酸ナン
バリングに基づく264Rを作製した。使用したGRONはYlUra31264/C/40/5’Cy3/3’idC(配
列はVCGAGGTCTGTACGGCCAGAACCGAGATCCTATTGAGGAGGH)およびYlUra31264/NC/40/5’Cy3/3
’idC(配列はVCCTCCTCAATAGGATCTCGGTTCTGGCCGTACAGACCTCGH)である(V=CY3;H=3'DMT dC CPG)。酢酸リチウム法を用いて10、30、および50μgの各GRONをYarrowia lipolytic
a株ATCC 90811に形質転換し、ura-2%グルコース上に播種した。コード鎖を用いて設計したGRONによって合計82個のura+コロニーを、非コード鎖を用いて設計したGRONによって6
個のコロニーを得、これはギャップ修復オリゴヌクレオチドでの形質転換では一般的なストランドバイアスを示した。18個のコード鎖形質転換体のシーケンシングにより、17個のクローンで意図された変異が確認された。
およびタンパク質の未成熟終結が起こる)、1896位(余剰T)、2036位(T→A変異。終結
コドンの後に位置する)、2177位(余剰Tの欠失。終結コドンの後に位置する)。
めの同様の戦略を、Yarrowia lipolyticaについて記載されているように実施する(ura3
変異が原栄養性を回復するように修正される)。
る。また、ハイグロマイシン耐性(HGH)遺伝子における2重変異を構築し、単一のGRONによって修正されるG34T A37T (E12ASTOP K13STOP)、および2つのGRONによって修正されるG34T T149G(E12STOP Y46 STOP)を含有させる。
ド系抗生物質、ハイグロマイシンBに対する天然の感受性を用いた。ハイグロマイシンB(hmB)はStreptomyces hygroscopicusによって産生されるアミノシクリトール系抗生物質
であり、原核生物および真核生物の両方において、リボソームのトランスロケーションおよびアミノアシルtRNA認識に干渉することによってタンパク質合成を阻害する。E. coli
由来のhph遺伝子(別名aph(4))(GENBANK V01499。シクリトール環の4位へのリン酸基
の共有結合的付加によってハイグロマイシンBを不活性化するアミノアシリトールホスホ
トランスフェラーゼをコードする)の導入によって、耐性を付与することができる。Yarrowia lipolytica株Polg(Yeastern由来 Mat a ura3-302::URA3 leu2-270 xpr2-322 axp-2)を、ベクターpyLEX1-2u-ura3-13にクローニングした単一変異(G34TによるE12stop)
または2重変異(E12stopK13stop (G34T.A37T))のいずれかを含有するE. coli hph遺伝
子(遺伝子はhpd4プロモーターおよびXPR2ターミネーターの制御下にある)で形質転換した。LEU2マーカーによって付与される原栄養性の回復に関する選択の際に、直線化したベクターをゲノムに融合させた。得られた菌株は不全型のハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子を保有し(従って、ハイグロマイシン感受性である)、これを、G34TまたはG34T.A37Tのいずれかを修正する以下のGRONによって野生型(ハイグロマイシン耐性
)に転換した。
HPH2/C/42/5'Cy3/3'idC
5’Cy3-GAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAG-3’idC
HPH2/NC/42/5'Cy3/3'idC
5’Cy3-HCTTTTCGATCAGAAACTTCTCGACAGACGTCGCGGTGAGTTC-3’idC
E12stopK13stopを修復して野生型とするGRON(T34G T37A)
HPH3/C/43/5'Cy3/3'idC
5’Cy3-CTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCG-3’idC
HPH3/NC/43/5'Cy3/3'idC
5’Cy3-CGAACTTTTCGATCAGAAACTTCTCGACAGACGTCGCGGTGAG-3’idC
未含有」コントロールに比較して有意数の転換されたと推定されるコロニーが、所定のハイグロマイシン濃度のいずれでも得られた。いずれの菌株でも、非コードGRON鎖に強いバイアスが見られた。考え合わせると、これらの結果は、Yarrowia lipolyticaにおけるハ
イグロマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子標的のGRON転換を示唆しており、更に、2つの変異(T34G T37A)の転換を単一のGRONを用いて行うことができることを示唆して
いる。DNAシーケンシングを行って、野生型遺伝子型に修復されていることを確認する。
NCBIデータベースに収録されているSaccharomycesおよび他の酵母由来のACCase、HMGR
、スクアレンシンターゼ、およびスクアレンエポキシダーゼの配列をPCRプライマー源と
して使用し、対応する遺伝子をCryptococcus curvatusおよびRhodotorula glutinisから
、それらに対応する調節領域(プロモーター、ターミネーター)と共にクローニングした
。プロモーターの「亢進」変異および「抑制」変異(それぞれ、転写を増加または低下させる)を同定するために、これら4つの遺伝子のプロモーターを相対的に誤りがちな(error-prone)DNAポリメラーゼを用いてクローニングし、プロモーター中に点変異を作製し、それらのフラグメントを、緑色蛍光タンパク質(GFP)またはβガラクトシダーゼレポ
ーター遺伝子と融合させたベクターにクローニングし、S. cerevisiaeまたはE. coliにおけるインビトロ試験に使用した。プロモーターの「亢進」変異はRTDSによってHMGRおよびスクアレンシンターゼゲノム配列に再導入し、「抑制」変異はゲノムACCaseおよびスクアレンエポキシダーゼ配列中で作製する。R. glutinisおよびC. curvatus中の必須遺伝子(例えばGAPDH、アクチン)由来のプロモーターをクローニングし、外来遺伝子発現に使用
する。PCRクローニング用のプライマーは、S. cerevisiae中のこれらの遺伝子との相同性から設計する。
ACCase。R. glutinis、C. curvatus、およびそれ以外の酵母中のACCase遺伝子のコピー数を測定する。RTDSを利用し、過剰コピー中の翻訳開始位置の直後に終結コドンを導入することによってACCase発現を低下させる。
2倍体におけるスクアレンエポキシダーゼの1コピーを破壊させて行う。Kamimura, N., Hidaka, M., Masaki, H.,およびUozumi, T. (1994) Appl. Microb. Biotech. 42: 353-357。R. glutinis、C. curvatus、およびそれ以外の酵母中のスクアレンエポキシダーゼの
コピー数を測定し、RTDSを利用し、第1のコピー以降の過剰コピー中の翻訳開始部位の直後に終結コドンを作製または挿入する。
型遺伝子の変異型での置換によってアミノ酸を変化させる。他の態様では、RTDSによって野生型遺伝子に変化を導入する。
代謝回転を低減させる。それらの類似配列はS. cerevisiaeのシンターゼ遺伝子中で発見
されており、Y. lipolytica、R. glutinis、および/またはC. curvatusのスクアレンシ
ンターゼ遺伝子中にそれらの配列が存在する場合は、これも測定する。Y. lipolytica、R. glutinis、および/またはC. curvatusのスクアレンシンターゼ中に配列が存在する場
合、RTDSを用いてこれを除去し、タンパク質代謝回転を低減する。
スクアレンの蓄積量が乾燥物で5.5%増加した(Polakowski, T.、Stahl, U.、およびLang, C. (1998) Appl. Microbiol. Biotech. 49:66-71)。Y. lipolytica、R. glutinis、およびC. curvatusのHMGRが類似の構造を有するか否かを確認し、有する場合は、可溶性触
媒ドメインのみを有するフラグメントを発現させてもよい。
保存されており、膜結合性N-末端ドメインおよび触媒性C-末端ドメインを有する。2つの
ドメインの境界はYarrowia lipolytica HMG1遺伝子(Genelouvres Yarrowia lipolytica YALI0E04807g)のアミノ酸500-600領域にマッピングされ、ここで疎水特性は疎水性から
親水性に移行する。Yarrowia lipolytica HMG1の疎水特性、並びにトランケートしたSaccharomyces cerevisiae(Donald, K.A.G.ら, 1997. Appl. Environ. Micro. 63(9): 3341-3344)およびCandida utilis(Shimada, H.ら, 1998. Appl. Environ. Micro. 64(7):2676-2680)タンパク質のN-末端へのそのホモロジー評価から残基548および544が選択される。従って、ある例では、Yarrowia lipolytica HMG1 IのC末端ドメインのアミノ酸548-1000が発現される。第2の例では、Yarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ
酸544-1000が発現される。関連する例では、Yarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ酸543-1000が発現される;またはYarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ酸545-1000が発現される;またはYarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ酸546-1000が発現される;またはYarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ酸547-1000が発現される;またはYarrowia lipolytica HMG1 IのC-末端ドメインのアミノ酸549-1000が発現される。
ン(残基543-1000、457アミノ酸)の発現により2%スクアレン/総脂質が産生され、ベクターのみを含有するコントロール株では0%であった。培養器を用いて工程を反復し、拡
大培養した。
化によって抑制的に調節され(Omkumar, R.V., Darnay, B.G.,およびRodwell, V.W. (1994) J. Biol. Chem. 269:6810-6814)、同様の調節様態がS. cerevisiaeで報告されている。R. glutinis、C. curvatus、およびそれ以外の酵母中のHMGRタンパク質が同様の調節を受けるか否かを確認し、受ける場合はRTDSを使用してリン酸化部位を除去する。
るコントロール株では0%であった。培養器を用いて工程を反復し、拡大培養した。
Cryptococcus curvatuの増殖を測定し、培地中の細胞量を最大にするのに最適な炭素源を検討した。酵母抽出物に基づくリッチな培地(10g/L 酵母抽出物、20g/L ペプトン)中で、C. curvatusは2-20% w/v グルコースの存在下で良好に増殖し、16% w/v グルコース
以上では、4日後に最大レベル55g/Lの細胞乾燥重量(CDW)を得た。同様に、C. curvatusは同じ培地中、3-12% w/v グルコースの存在下でも増殖し、12% w/v グルコースでは、5
日後のCDWは40g/Lであった。C. curvatusは、最大3.5% w/vのバイオディーゼルグリセロ
ール(Imperial Western Products社。カリフォルニア州コーチェラ)中でも増殖し、CDWは23g/Lであった。
スクアレンの正味の生成量を増加させるために環境操作についての検討を行った。それらには以下がある:(a)オレイン酸、オリーブもしくは他の植物油(単数または複数)、イノシトール、コリン、ソラフェン、フルアジホップ、およびクレトジム、または他のACCase阻害性除草剤を用いるACCaseの発現および/または活性の阻害、(b)テルビナフィン、トルナフテート、およびエルゴステロール、または他のスクアレンエポキシダーゼ阻害性防かび剤を用いるスクアレンエポキシダーゼの発現および/または活性の阻害、(c)(出発培地または追加培地中の)グリセロールに基づく培地のC/N比の操作、(d)
培地中の窒素源の変更(有機対無機対単体/複合体)、(e)炭素添加方式の変更(例えばバッチ対流加)、(f)炭素源以外の栄養素を枯渇させた場合の影響の検討、(g)糖、糖アルコール、アルコール、多価アルコール、および有機酸の混合物に添加する炭素源の変更、(h)HMGR阻害性化合物、例えばロバスタチン、または他のスタチン系阻害剤上での増殖に関する選択、および(i)親油性色素もしくは染料の使用、および/または(例えば重量分析法またはガスクロマトグラフィー分析法による)抽出可能な脂質の分析による、培地中での高油生成量に関する選択。
Rhodosporidium toruloides” Chinese Journal of Biotechnology 22(4): 650-656。以下、「CYM001培地」と記載する)中、30℃、300rpmで120時間培養した。12.5μg/mlまた
はそれ以上の濃度のテルビナフィンで、最大で総脂質の18.5%のスクアレンが得られた。
。例えば、Yarrowia lipolytica株polg(Yeastern)を、0-50μg/mlのテルビナフィンを
添加した高炭素/窒素比培地(C/N = 420。Li, Y-H., Liu, B., Zhao, Z-B.,およびBai, F-W. 2006 “Optimized Culture Medium and Fermentation Conditions for Lipid Production by Rhodosporidium toruloides” Chinese Journal of Biotechnology 22(4): 650-656。以下、「CYM001培地」と記載する)中、30℃、300rpmで120時間培養した。12.5μg/mlまたはそれ以上の濃度のテルビナフィンで、最大で総脂質の38%のスクアレンが得られ、総脂質/細胞乾燥重量は最大51%であった。
脂質蓄積量が脂質/CDW(細胞乾燥重量)が、無添加の場合の10倍に向上された。
フラスコ当たりのスクアレン産生量(mg)が60倍増加した。
され、HMG2の迅速な分解およびHMG1の発現増加が起こることが明らかになっている(Casey, W.M., Keesler, G.A., Parks, L.W. (1992) J. Bact. 174:7283-7288)。出願人の油
性酵母中のHMGR遺伝子の数が酸素によって影響を受けるか否かを確認し、受ける場合は、培養機内の酸素レベルを改変することによって、その発現および活性を操作する。
Journal of Biotechnology 22(4):650-656)から出発し、成分および成分濃度を種々に
変更し(新たな成分の添加を含む)、細胞増殖、総脂質含量/単位細胞量(%)、およびスクアレン/総脂質(%)を向上させる。評価した培地成分には以下が含まれる:炭素源:グリセロール、グルコース;窒素源:アンモニウム化合物、硝酸塩、アミノ酸;無機塩:カリウム、マグネシウム、ナトリウム、鉄、マンガン、亜鉛、カルシウム、銅;酵母抽出物、脂質前駆体、および脂質合成影響因子:テルビナフィン、クレトジム、オレイン酸、パルミトレイン酸、リノール酸、リノレン酸、および消泡剤。評価を行った他の因子には以下が含まれる:接種物のパーセント、培養時間、温度、pH、背圧、溶存酸素(DO)、供給栄養組成、栄養供給方式、および撹拌方式。
慣例的な菌株選択法を油性酵母に使用し、正味のスクアレン生産性を増加させる。UV、ニトロソグアニジン、またはエタンスルホン酸メチルによって変異させた菌株を高スクアレン蓄積量でスクリーニングおよび/または選択した。また、菌株を逐次選択圧(例えば3%グリセロール含有YEP(15g/L酵母抽出物、5g/Lペプトン)培地またはロバスタチンお
よび他の公知のHMGR阻害剤を含有する培地での反復継代培養)に施与する。また、菌株を、種々の量のグリセロールおよび/またはグルコースを含有するCYM001培地、あるいは、ロバスタチンおよび/もしくは他の公知のHMGR阻害剤および/またはスクアレンシンターゼ阻害剤を含有する培地で反復継代し、HMGRおよび/またはスクアレンシンターゼ活性が高い自然発生突然変異体を得る。それらの変異はHMGR、スクアレンシンターゼ、または他の遺伝子中に存在してもよい(「第2部位変異」)。
Claims (68)
- 高レベルのイソプレノイドを産生するように改変された酵母を含む組成物であって;該酵母は、ATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia lipolytica株である組成物。
- 遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母から抽出されたイソプレノイドを含有する組成物であって、該酵母は、ATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia lipolytica株である組成物。
- 遺伝子転換された酵母を含有する組成物であって、該遺伝子転換された酵母は1つまたはそれ以上の意図的変異を有する1つまたはそれ以上の改変型酵素を発現し、該1つまたはそれ以上の意図的変異は該酵素中の所定の位置に存在し、該酵母は野生型酵母に比較して多量のイソプレノイドを産生し、かつ、該酵母はATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia
lipolytica株である組成物。 - 遺伝子転換された酵母によってスクアレンを生成する方法であって、該方法は、イソプレノイド生合成経路中の1つまたはそれ以上の酵素の活性または発現を増加または低下させることを含み、該酵素の活性または発現は1つまたはそれ以上の意図的変異によって増加または低下され、該1つまたはそれ以上の意図的変異は該酵素中の所定の位置に存在し、該遺伝子転換された酵母は野生型酵母に比較して多量のイソプレノイドを産生し、該酵母は、ATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia lipolytica株である、上記方法。
- 該イソプレノイドはスクアレンである、請求項1−4のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該酵母は対応する野生型酵母に比較して高レベルのスクアレンを産生する、請求項1−5のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該遺伝子転換された酵母は油性酵母に由来する、請求項1−6のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該改変された酵素はイソプレノイド生合成経路中のものである、請求項3−7のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該改変された酵素は、アセチルCoAカルボキシラーゼ(「ACCase」)、HMG-CoAレダクターゼ、スクアレンエポキシダーゼ、スクアレンシンターゼ、ATPクエン酸リアーゼ、ATPクエン酸シンターゼ、メバロン酸キナーゼ、グリセロールキナーゼ、および5-アミノレブリン酸シンターゼから成る群から選択される改変された酵素である、請求項3−8のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該改変された酵素はアセチルCoAカルボキシラーゼである、請求項3−9のいずれかに
記載される組成物または方法。 - 該アセチルCoAカルボキシラーゼの活性または発現が低減されている、請求項9−10
のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の約90%、または約80%、または約70%、または約60%、または約50%、または約40%、または約30%、または約20%、または約10%、または約5%まで低減される、請求項9−11のいずれかに記載される組成物ま
たは方法。 - 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の90-95%;または80-90%;または70-80%;または60-70%;または50-60%;または40-50%;または約30-40%;または約20-30%;または約10-20%;または約5-10%;または約2-5%まで低減される、請求項9−1
1のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該改変された酵素はHMG-CoAレダクターゼである、請求項3−13のいずれかに記載さ
れる組成物または方法。 - 該HMG-CoAレダクターゼの活性または発現が増加されている、請求項3−14のいずれ
かに記載される組成物または方法。 - 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の少なくとも1.2倍;また
は1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;ま
たは20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000
倍;または1,000,000倍まで増加される、請求項14−15のいずれかに記載される組成
物または方法。 - 該改変された酵素はスクアレンエポキシダーゼである、請求項3−16のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該スクアレンエポキシダーゼの活性または発現が低減されている、請求項3−17のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の約90%;または約80%;または約70%;または約60%;または約50%;または約40%;または約30%;または約20%;または約10%;または約5%まで低減される、請求項17−18のいずれかに記載される組成物
または方法。 - 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の90-95%;または80-90%;または70-80%;または60-70%;または50-60%;または40-50%;または約30-40%;または約20-30%;または約10-20%;または約5-10%;または約2-5%である、請求項17−18のい
ずれかに記載される組成物または方法。 - 該改変された酵素はスクアレンシンターゼまたはATPクエン酸リアーゼである、請求項
3−20のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該スクアレンシンターゼまたはATPクエン酸リアーゼの活性または発現が増加されてい
る、請求項3−21のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の少なくとも1.2倍;また
は1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;ま
たは20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000
倍;または1,000,000倍まで増加される、請求項21−22のいずれかに記載される組成
物または方法。 - 該改変された酵素はメバロン酸キナーゼである、請求項3−23のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該改変された酵素はY.lipolyticaメバロン酸キナーゼ(Genolevures YALI0B16038g)である、請求項24記載の組成物または方法。
- 該メバロン酸キナーゼの活性または発現が増加されている、請求項24−25のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の少なくとも1.2倍;また
は1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;ま
たは20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000
倍;または1,000,000倍まで増加される、請求項24−26のいずれかに記載される組成
物または方法。 - 該改変された酵素はグリセロールキナーゼである、請求項3−23のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該改変された酵素はY.lipolyticaグリセロールキナーゼ(Genolevures YALI0F00484g)である、請求項24記載の組成物または方法。
- 該グリセロールキナーゼの活性または発現が増加されている、請求項24−25のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該活性または発現は、対応する野生型酵母の活性または発現の少なくとも1.2倍;また
は1.5倍;または2倍;または3倍;または4倍;または5倍;または10倍;または15倍;ま
たは20倍;または50倍;または100倍;または1,000倍;または10,000倍;または100,000
倍;または1,000,000倍まで増加される、請求項24−26のいずれかに記載される組成
物または方法。 - 該改変された酵素は遺伝子修復オリゴ核酸塩基によって変異を受ける、請求項3−31のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該遺伝子修復オリゴ核酸塩基は、混合2本鎖オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド非含有分子、および1本鎖オリゴデオキシヌクレオチドから成る群から選択される、請求項3−32のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該遺伝子修復オリゴ核酸塩基は混合2本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項3−33のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドのRNAヌクレオチドの2'-ヒドロキシルがフルオロ、クロロ、またはブロモで機能的に置換されている、請求項32−34のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドのRNAヌクレオチドが2'-Oに置換基を有する、請求項
32−35のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドは未置換型ホスホジエステル結合のみによって結合している、請求項32−34のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドは2'-置換型ヌクレオチドである、請求項32−34
のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該2'-置換型ヌクレオチドは、2'-フルオロ、2'-メトキシ、2'-プロピルオキシ、2'-ア
リルオキシ、2'-ヒドロキシルエチルオキシ、2'-メトキシエチルオキシ、2'-フルオロプ
ロピルオキシ、および2'-トリフルオロプロピルオキシ置換型リボヌクレオチドから成る
群から選択される、請求項32-38のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該2'-置換型ヌクレオチドは、2'-フルオロ、2'-メトキシ、2'-メトキシエチルオキシ、および2'-アリルオキシ置換型ヌクレオチドから成る群から選択される、請求項32-39のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドは未置換型ホスホジエステル結合によって結合している、請求項34−40のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドは100ヌクレオチド長未満かつ50ヌクレオチド長を超
える、請求項34−41のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドは85ヌクレオチド長未満かつ50ヌクレオチド長を超える、請求項34−41のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該混合2本鎖オリゴヌクレオチドのストランドはリンカーによって共有結合している、請求項34−41のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該リンカーは1本鎖ヘキサ、ペンタ、またはテトラヌクレオチドであり、第1および第2のストランドは単一の3'末端および単一の5'末端を有する1本鎖オリゴヌクレオチドのセグメントである、請求項44記載の組成物または方法。
- 該3'および5'末端はヘアピン・キャップを有する、請求項45記載の組成物または方法。
- 3'および5'末端から遠位にある第1および第2ストランド間の接合部に第2のヘアピン・キャップを更に含有し、第1および第2ストランド間のワトソン・クリック塩基対形成が安定化されている、請求項45記載のの組成物または方法。
- 混合2本鎖オリゴヌクレオチドの第1および第2ストランドが標的遺伝子の2つのフラグメントと相同である2つの領域を含有する、請求項32−47のいずれかに記載される組成物または方法。
- 請求項3−48の遺伝子転換された酵母から抽出されたイソプレノイドを含有する組成物。
- 該イソプレノイドはスクアレンである、請求項49記載の組成物。
- 遺伝子転換された酵母または遺伝転換されていない酵母によるスクアレンの生成法であって、該方法は該酵母を抗真菌剤と共に培養することを含む方法。
- 遺伝子転換された酵母または遺伝転換されていない酵母によるスクアレンの生成法であって、該方法は該酵母を抗真菌剤と共に培養することを含み、該酵母は、ATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、またはYeastern polgから成る群か
ら選択されるYarrowia lipolytica株である方法。 - 該酵母は、ATCC 20688、ATCC 90811、ATCC 90904、ATCC 90812、ATCC MYA-2613、また
はYeastern polgから成る群から選択されるYarrowia lipolytica株である、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該酵母はYarrowia lipolyticaのYeastern polg株である、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加される、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が0.5-100μg/mlの濃度で組成物中に含有されるか、または酵
母に添加される、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該方法において抗真菌剤が1-25μg/mlの濃度で組成物中に含有されるか、または酵母に添加される、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が10-15μg/mlの濃度で組成物中に含有されるか、または酵母
に添加される、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。 - 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤はアリルアミン抗真菌剤である、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は0.5-100μg/mlの濃度のアリルアミン抗真菌剤である、上記請求項のいずれかに記載
される組成物または方法。 - 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は1-25μg/mlの濃度のアリルアミン抗真菌剤である、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は10-15μg/mlの濃度のアリルアミン抗真菌剤である、上記請求項のいずれかに記載さ
れる組成物または方法。 - 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤はテルビナフィンである、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は0.5-100μg/mlの濃度のテルビナフィンである、上記請求項のいずれかに記載される
組成物または方法。 - 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は1-25μg/mlの濃度のテルビナフィンである、上記請求項のいずれかに記載される組成物または方法。
- 該方法において抗真菌剤が組成物中に含有されるか、または酵母に添加され、該抗真菌剤は10-15μg/mlの濃度のテルビナフィンである、上記請求項のいずれかに記載される組
成物または方法。 - 遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母によるスクアレンの生成法であって、該方法は該酵母を抗真菌剤と共に培養することを含み、該酵母は、Yarrowia lipolyticaのYeastern polg株であり、抗真菌剤はテルビナフィンであることを特徴とする方法。
- 遺伝子転換された酵母または遺伝子転換されていない酵母によるスクアレンの生成法であって、該方法は該酵母を抗真菌剤と共に培養することを含み、該酵母は、Yarrowia lipolyticaのYeastern polg株であり、抗真菌剤は約12.5μg/mlまたはそれ以上のテルビナフィンであることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US26377509P | 2009-11-23 | 2009-11-23 | |
US61/263,775 | 2009-11-23 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012540136A Division JP5978132B2 (ja) | 2009-11-23 | 2010-11-22 | 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017006121A true JP2017006121A (ja) | 2017-01-12 |
JP6479711B2 JP6479711B2 (ja) | 2019-03-06 |
Family
ID=43587556
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012540136A Active JP5978132B2 (ja) | 2009-11-23 | 2010-11-22 | 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 |
JP2016109693A Active JP6479711B2 (ja) | 2009-11-23 | 2016-06-01 | 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012540136A Active JP5978132B2 (ja) | 2009-11-23 | 2010-11-22 | 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8470568B2 (ja) |
EP (2) | EP2504421B1 (ja) |
JP (2) | JP5978132B2 (ja) |
KR (1) | KR101951051B1 (ja) |
CN (2) | CN107058145A (ja) |
AU (2) | AU2010321722B2 (ja) |
CA (1) | CA2781303A1 (ja) |
DK (2) | DK2504421T3 (ja) |
EA (1) | EA201290199A1 (ja) |
ES (2) | ES2625154T3 (ja) |
HU (1) | HUE034245T2 (ja) |
IL (1) | IL219962A0 (ja) |
PL (1) | PL2504421T3 (ja) |
PT (1) | PT2504421T (ja) |
UA (1) | UA111813C2 (ja) |
WO (1) | WO2011063350A2 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2625154T3 (es) * | 2009-11-23 | 2017-07-18 | Nucelis Llc | Métodos y composiciones para producir escualeno empleando levaduras |
WO2011146833A1 (en) * | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Evolva Inc. | Method of producing isoprenoid compounds in yeast |
WO2012149491A2 (en) * | 2011-04-29 | 2012-11-01 | Danisco Us Inc. | Recombinant microorganisms for enhanced production of mevalonate, isoprene, and isoprenoids |
US9957515B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-05-01 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for targeted gene modification |
IL307456A (en) | 2013-03-15 | 2023-12-01 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for increasing the efficiency of targeted gene modification using oligonucleotide-mediated gene repair |
GB2518927A (en) * | 2013-05-21 | 2015-04-08 | Univ Swansea | The production of biomolecules using yeast |
JP6626819B2 (ja) * | 2014-04-09 | 2019-12-25 | 株式会社Adeka | 変異酵素及び前記変異酵素を用いたテルペノイドの製造方法 |
EP3184639B1 (en) * | 2014-08-21 | 2019-06-12 | Chung-Ang University Industry-Academy Cooperation Foundation | Rdna nts based gene multiple insertion cassette set and gras-grade recombinant yeast strain |
CN104560731B (zh) * | 2014-12-26 | 2018-10-09 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高产角鲨烯的类酵母菌及其应用 |
WO2017047651A1 (ja) * | 2015-09-18 | 2017-03-23 | 神戸天然物化学株式会社 | 形質転換体、およびテルペノイドの製造方法 |
BR112018008710B1 (pt) | 2015-10-29 | 2022-04-12 | Firmenich Incorporated | Adoçantes de alta intensidade |
WO2018204483A2 (en) | 2017-05-03 | 2018-11-08 | Senomyx, Inc. | Methods for making high intensity sweeteners |
CN110452931A (zh) * | 2018-05-08 | 2019-11-15 | 中国科学院微生物研究所 | 一种提高酵母中角鲨烯含量的方法 |
CN109666683B (zh) * | 2019-02-27 | 2021-10-29 | 昆明理工大学 | 乙酰辅酶A乙酰转移酶基因RKAcaT2及其应用 |
CN110607247B (zh) * | 2019-08-15 | 2021-06-08 | 宜昌东阳光生化制药有限公司 | 一种提高酿酒酵母合成角鲨烯能力的方法 |
CN110628795B (zh) * | 2019-09-30 | 2021-07-16 | 北京市农林科学院 | 以失活的筛选剂抗性基因为报告体系的a·g碱基替换的细胞富集技术及其应用 |
CN113234610B (zh) * | 2021-03-05 | 2023-06-13 | 江南大学 | 一种合成角鲨烯的酿酒酵母菌株及其应用 |
CN113444701B (zh) * | 2021-06-30 | 2024-01-30 | 江南大学 | 酿酒酵母内源角鲨烯单加氧酶突变体及应用 |
CN114058525A (zh) * | 2021-10-29 | 2022-02-18 | 湖北冠众通科技有限公司 | 一种高产角鲨烯基因工程菌及其构建方法与应用 |
CN117487681A (zh) * | 2023-11-16 | 2024-02-02 | 湖南农业大学 | 一种生产角鲨烯的酵母工程菌及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008130372A2 (en) * | 2006-09-28 | 2008-10-30 | Microbia, Inc. | Production of sterols in oleaginous yeast and fungi |
Family Cites Families (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US411969A (en) | 1889-10-01 | Apparatus for forming glasses | ||
US625586A (en) | 1899-05-23 | Cooking utensil | ||
JPS5834114B2 (ja) | 1975-04-17 | 1983-07-25 | フジセイユ カブシキガイシヤ | カカオバタ−ダイヨウシノセイゾウホウ |
US4628033A (en) * | 1983-10-06 | 1986-12-09 | Pfizer Inc. | Novel host strain for transformation of Yarrowia lipolytica |
US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US5302523A (en) | 1989-06-21 | 1994-04-12 | Zeneca Limited | Transformation of plant cells |
US5204253A (en) | 1990-05-29 | 1993-04-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method and apparatus for introducing biological substances into living cells |
US5460949A (en) | 1990-11-15 | 1995-10-24 | Amoco Corporation | Method and composition for increasing the accumulation of squalene and specific sterols in yeast |
DE4216134A1 (de) | 1991-06-20 | 1992-12-24 | Europ Lab Molekularbiolog | Synthetische katalytische oligonukleotidstrukturen |
IT230274Y1 (it) | 1993-06-11 | 1999-06-02 | Silc Spa | Pannolone assorbente sagomato per incontinenza |
EP0733059B1 (en) | 1993-12-09 | 2000-09-13 | Thomas Jefferson University | Compounds and methods for site-directed mutations in eukaryotic cells |
ES2203635T3 (es) | 1994-04-27 | 2004-04-16 | Novartis Ag | Nucleosidos y oligonucleotidos con grupos 2'-eter. |
US5780296A (en) | 1995-01-17 | 1998-07-14 | Thomas Jefferson University | Compositions and methods to promote homologous recombination in eukaryotic cells and organisms |
EP0747484A1 (en) | 1995-06-08 | 1996-12-11 | Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) | Upstream activator sequences and recombinant promoter sequences functional in yarrowia and vectors containing them |
US5888983A (en) | 1996-05-01 | 1999-03-30 | Thomas Jefferson University | Method and oligonucleobase compounds for curing diseases caused by mutations |
US5731181A (en) | 1996-06-17 | 1998-03-24 | Thomas Jefferson University | Chimeric mutational vectors having non-natural nucleotides |
US5760012A (en) | 1996-05-01 | 1998-06-02 | Thomas Jefferson University | Methods and compounds for curing diseases caused by mutations |
JP2002511851A (ja) | 1997-04-30 | 2002-04-16 | リージェンツ オブ ジ ユニバーシティー オブ ミネソタ | 肝細胞の遺伝的病変を修正するためのリコンビナジェニックオリゴヌクレオ塩基のin vivoでの使用 |
US6524613B1 (en) | 1997-04-30 | 2003-02-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Hepatocellular chimeraplasty |
KR20010022652A (ko) | 1997-08-05 | 2001-03-26 | 키메라젠, 인크. | 식물에서 국소적인 유전자변형을 유발하기 위한 혼성 이중나선올리고뉴클레오티드의 용도 |
US6004804A (en) | 1998-05-12 | 1999-12-21 | Kimeragen, Inc. | Non-chimeric mutational vectors |
US6010907A (en) | 1998-05-12 | 2000-01-04 | Kimeragen, Inc. | Eukaryotic use of non-chimeric mutational vectors |
EP2305825B1 (en) | 1998-07-06 | 2015-01-14 | DCV Inc. doing business as Bio-Technical Resourses | Method of vitamin production |
US6271360B1 (en) | 1999-08-27 | 2001-08-07 | Valigen (Us), Inc. | Single-stranded oligodeoxynucleotide mutational vectors |
US6822142B2 (en) * | 2001-01-05 | 2004-11-23 | Monsanto Company | Transgenic plants containing altered levels of steroid compounds |
MXPA06013502A (es) | 2004-05-21 | 2007-03-01 | Univ California | Metodo para mejorar la produccion de compuestos isoprenoides. |
CN103589650A (zh) * | 2005-03-18 | 2014-02-19 | 米克罗比亚公司 | 产油酵母和真菌中类胡萝卜素的产生 |
US20080193937A1 (en) * | 2005-03-30 | 2008-08-14 | Jitao Zou | Identification of a Sterol Acyltransferase Gene |
US9119132B2 (en) | 2007-10-10 | 2015-08-25 | Qualcomm Incorporated | Efficient system identification schemes for communication systems |
US8425310B2 (en) | 2008-04-18 | 2013-04-23 | Konami Gaming, Inc. | System and method for tracking patrons non-gaming casino spend |
KR20110023862A (ko) * | 2008-05-23 | 2011-03-08 | 시부스 오일즈, 엘엘씨 | 효모를 사용한 스쿠알렌 생산 |
ES2761697T3 (es) | 2008-08-28 | 2020-05-20 | Novartis Ag | Proceso para preparar una emulsión de aceite en agua que contiene escualeno procedente de levaduras |
ES2625154T3 (es) * | 2009-11-23 | 2017-07-18 | Nucelis Llc | Métodos y composiciones para producir escualeno empleando levaduras |
-
2010
- 2010-11-22 ES ES10782791.7T patent/ES2625154T3/es active Active
- 2010-11-22 EA EA201290199A patent/EA201290199A1/ru unknown
- 2010-11-22 ES ES17156088T patent/ES2760911T3/es active Active
- 2010-11-22 PT PT107827917T patent/PT2504421T/pt unknown
- 2010-11-22 US US12/952,161 patent/US8470568B2/en active Active
- 2010-11-22 CN CN201710102947.7A patent/CN107058145A/zh active Pending
- 2010-11-22 KR KR1020127014053A patent/KR101951051B1/ko active IP Right Grant
- 2010-11-22 AU AU2010321722A patent/AU2010321722B2/en active Active
- 2010-11-22 HU HUE10782791A patent/HUE034245T2/en unknown
- 2010-11-22 UA UAA201207689A patent/UA111813C2/uk unknown
- 2010-11-22 EP EP10782791.7A patent/EP2504421B1/en active Active
- 2010-11-22 DK DK10782791.7T patent/DK2504421T3/en active
- 2010-11-22 CA CA2781303A patent/CA2781303A1/en not_active Abandoned
- 2010-11-22 CN CN2010800529388A patent/CN102666837A/zh active Pending
- 2010-11-22 WO PCT/US2010/057668 patent/WO2011063350A2/en active Application Filing
- 2010-11-22 JP JP2012540136A patent/JP5978132B2/ja active Active
- 2010-11-22 PL PL10782791T patent/PL2504421T3/pl unknown
- 2010-11-22 DK DK17156088.1T patent/DK3219815T3/da active
- 2010-11-22 EP EP17156088.1A patent/EP3219815B1/en active Active
-
2012
- 2012-05-23 IL IL219962A patent/IL219962A0/en unknown
-
2013
- 2013-06-25 US US13/926,288 patent/US9540662B2/en active Active
-
2016
- 2016-06-01 JP JP2016109693A patent/JP6479711B2/ja active Active
- 2016-06-24 AU AU2016204319A patent/AU2016204319A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-01-09 US US15/401,776 patent/US11952577B2/en active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008130372A2 (en) * | 2006-09-28 | 2008-10-30 | Microbia, Inc. | Production of sterols in oleaginous yeast and fungi |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JOURNAL OF ANTIMICROBIAL CHEMOTHERAPY, 2005, VOL.55, PP.905-913, JPN6017024024 * |
MOLEC. GEN. GENET., 1977, VOL.154, NO.3, PP.269-277, JPN6017024021 * |
USING YEAST FERMENTATION TO PRODUCE COST-EFFECTIVE AND BIODEGRADABLE LUBRICANTS, 2004, [2011.8.4検, JPN6017024023 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6479711B2 (ja) | 酵母を用いるスクアレン生成のための方法および組成物 | |
AU2015238919B2 (en) | Production Of Squalene Using Yeast | |
US20220186267A1 (en) | Biosynthetic Cannabidiol Production In Engineered Microorganisms | |
CN105189731A (zh) | 制备脂肪二羧酸的生物学方法 | |
JP4803584B2 (ja) | 脂質生産性の高い形質転換微生物 | |
JP2014054239A (ja) | 脂質生産性の高い形質転換酵母 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20170616 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170704 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170929 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171228 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180612 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180906 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20181106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181212 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190108 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190206 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6479711 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |