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Abstract
Description
本発明者らは、予期しないことに、CD34+CD38− HSCが、高純度で存在する場合により効率的な形質導入を受けることを示した。本発明者らは、臨床使用のために好適な様式でこれらの細胞を精製および形質導入するためのプロトコールを開発した。
1.形質導入効率の上昇、
2.形質導入に必要な細胞数の低減(この結果、対象に浸透させるのに必要な組み込み量が少なくなる)
3.迅速な造血系回復の保証
により遺伝子療法の安全性および有効性を改善し得る。
a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団からCD38発現細胞を分離する工程、
b.CD38を発現しない工程(a)で得られた細胞集団からCD34発現細胞を分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD34発現細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程を含んでなる。
a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団をCD38に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
b.CD38反応性細胞をCD38非反応性細胞から分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD38非反応性細胞をCD34に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
d.CD34反応性細胞をCD34非反応性細胞から分離する工程、ここで、CD34反応性細胞は形質導入細胞集団を形成する、
e.前記形質導入細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなる。
a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団からCD34発現細胞を分離する工程、
b.CD34を発現する工程(a)で得られた細胞集団からCD38発現細胞を分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD38を発現しない細胞集団をベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなり得る。
本発明の種々の好ましい特徴および実施形態を以下、限定されない例によって説明する。
幹細胞は多くの細胞種に分化することができる。総ての細胞種に分化することができる細胞は全能性として知られる。哺乳動物では、接合子と初期胚細胞だけが全能性である。幹細胞は、総てではないとしてもほとんどの多細胞生物に見られる。幹細胞は、有糸分裂によりそれ自身再生しかつ多様な範囲の特定の細胞種に分化する能力を特徴とする。哺乳動物幹細胞の2つの主要なタイプとして、胚盤胞の内部細胞塊から単離される胚性幹細胞と成体組織に見られる成体幹細胞がある。発生中の胚で、幹細胞は特殊化した胚組織の総てに分化することができる。成体生物では、幹細胞および前駆細胞は身体の修復系として働き、特殊化した細胞を補充するだけでなく、血液、皮膚または腸管組織などの再生器官の通常のターンオーバーを維持する。
本発明の一実施形態では、造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団は、組織サンプルから得られる。
HSCは一般に、フローサイトメトリー法により低前方散乱および側方散乱性である。ミトコンドリア活性の判定を可能とするローダミン標識により示されるように、代謝を休止しているものもある。HSCは、CD34、CD45、CD133、CD90およびCD49fなどの特定の細胞表面マーカーを含んでなり得る。HSCは、CD38およびCD45RA細胞表面マーカーの発現を欠く細胞としても定義できる。しかしながら、これらのマーカーのいくつかの発現は、発生段階およびHSCの組織特異性に依存する。「サイドポピュレーション細胞」と呼ばれる一部のHSCは、フローサイトメトリーにより検出した場合、Hoechst 33342色素を排除する。従って、HSCは、それらの同定および単離を可能とする記述的特性を有する。
CD38は、ヒトHSCの最も確立された有用な陰性マーカーである。
CD34およびCD133は、HSCの最も有用な陽性マーカーである。
細胞集団の分離は、特定の表現型または特徴を示す細胞集団をその表現型または特徴を示さない、または低い程度でしか示さない他の細胞から精製することを意味する。例えば、特定のマーカー(例えばCD38)を発現しない細胞集団を出発細胞集団から分離することができる。その代わりに、またはそれに加えて、別のマーカー(例えばCD34)を発現する細胞集団を分離することもできる。
a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団からCD38発現細胞を分離する工程、
b.CD38を発現しない工程(a)で得られた細胞集団からCD34発現細胞を分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD34発現細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなる。
a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団をCD38に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
b.CD38反応性細胞をCD38非反応性細胞から分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD38非反応性細胞をCD34に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
d.CD34反応性細胞をCD34非反応性細胞から分離する工程、ここで、CD34反応性細胞は形質導入細胞集団を形成する、
e.前記形質導入細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなる。
ベクターは、ある環境から別の環境へ実体の移入を可能とするまたは助けツールである。本発明においては、例として、組換え核酸技術で使用されるいくつかのベクターは、核酸のセグメント(例えば、異種DNAセグメント、例えば、異種cDNAセグメント)などの実体を標的細胞へ移入可能とする。ベクターは、異種核酸(DNAまたはRNA)を細胞内に維持し、核酸セグメントを含んでなるベクターの複製を助けるか、または核酸セグメントによりコードされるタンパク質の発現を助ける目的を果たし得る。ベクターは非ウイルスまたはウイルスであり得る。組換え核酸技術で使用されるベクターの例としては、限定されるものではないが、プラスミド、染色体、人工染色体およびウイルスが挙げられる。ベクターはまた、例えば、裸の核酸(例えば、DNA)であり得る。その最も単純な形態では、ベクターはそれ自体対象とするヌクレオチドであり得る。
一実施形態では、ウイルスベクターが本発明で使用される。
本発明で使用されるレトロウイルスベクターは、いずれの好適なレトロウイルスに由来してもよく、またはいずれの好適なレトロウイルスから誘導な可能であり得る。多数の異なるレトロウイルスが同定されている。例として、マウス白血病ウイルス(MLV)、ヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV)、マウス乳癌ウイルス(MMTV)、ラウス肉腫ウイルス(RSV)、藤浪肉腫ウイルス(FuSV)、モロニーマウス白血病ウイルス(Mo MLV)、FBRマウス骨肉腫ウイルス(FBR MSV)、モロニーマウス肉腫ウイルス(Mo−MSV)、エーベルソンマウス白血病ウイルス(A−MLV)、トリ骨髄芽球腫症ウイルス−29(MC29)およびトリ赤芽球症ウイルス(AEV)が挙げられる。レトロウイルスの詳細なリストはCoffin et al. (1997) “Retroviruses”, Cold Spring Harbour Laboratory Press Eds:JM Coffin, SM Hughes, HE Varmus pp 758-763に見出せる。
複製欠陥レンチウイルスベクターゲノムにおいて、gag、polおよびenvは存在しないかまたは機能しなくてよい。
ウイルスゲノムの一部を対象とするヌクレオチド(NOI)に置き換えてもよい。
本発明の別の実施形態では、ベクターは、アデノウイルスベクターであり得る。アデノウイルスは、RNA中間体を介さない二本鎖の直鎖DNAウイルスである。アデノウイルスには50を超える異なるヒト血清型が存在し、遺伝子の配列相同性に基づき6つのサブグループに分けられる。アデノウイルスの天然標的は呼吸器系および消化管上皮であり、一般に軽度の症状のみを生じる。アデノウイルスベクター系で血清型2および5(95%の配列相同性を有する)が最もよく用いられ、通常、若年者の上気道感染に関連する。
アデノ随伴ウイルス(AAV)は、高頻度の組み込みを有し非分裂細胞に感染可能であることから、本発明で使用するために魅力的なベクター系である。これにより、AAVは組織培養下の哺乳動物細胞への遺伝子送達に有用なものとなる。AAVは感染力に関して広い宿主域を有する。rAAVベクターの作製および使用に関する詳細は、米国特許第5,139,941号および米国特許第4,797,368号に記載されている。
単純ヘルペスウイルス(HSV)は、ニューロンに自然感染するエンベロープを有する二本鎖DNAウイルスである。HSVは外来DNAの大きな切片を収容することができ、これにより、HSVはベクター系として魅力的なものとなり、ニューロンへの遺伝子送達用のベクターとして使用されてきた。
本発明で使用されるベクターは好ましくは、対象とするヌクレオチドを含んでなる。
精製度の高いHSCはベクター、特に、レンチウイルスベクターによる形質導入能が高いという本発明者らの予期しない発見は、本発明者らをHSC遺伝子療法プロトコールの根本的に新しい設計を評価するように促した。この新規なプロトコールは、出発細胞集団(例えば、動員末梢血、骨髄または臍帯血から得られるもの)をHSC富化画分(例えば、CD34+細胞が富化されたHSC内容物を有する治療用細胞集団)と前駆細胞含有画分(支持細胞集団)に分離することを含んでなる。後者はex vivo操作を行わずに冷凍することができ、骨髄破壊的前処置の後に血液回復を増強するために対象に注入することができる。精製度の高いHSC含有画分は、本明細書に記載のように「最小の」ex vivo培養を用い、標準的CD34+細胞形質導入プロトコールよりも培養時間およびベクター用量を減じて形質導入される。
ベクターによる細胞集団の形質導入は、細胞がベクターに曝される培養の第2相の前に前刺激相を用いる。前刺激相では、細胞を、例えば、幹細胞因子(SCF)、FLT3リガンド(FLT3L)およびトロンボポエチン(TPO)、ならびに場合により、IL3、IL6、IL11、M−CSF、FGF−1、IGF−2、IGFBP2、ANGPTL3または5を含んでなる培養培地中で培養することができる。
本発明は、本発明の治療用細胞集団および/または支持細胞集団を含んでなる医薬組成物を提供する。
本発明は、医薬において使用するための、例えば、遺伝子療法において使用するための治療用細胞集団を提供する。
別の態様では、本発明は、本発明の治療用細胞集団および支持細胞集団を含んでなるキットを提供する。
本発明は、遺伝子療法において使用するための造血前駆細胞集団を提供し、この造血前駆細胞集団は対象とするヌクレオチドで形質導入されたものである。
1.長期:遺伝性の遺伝病の治癒のためのCD34+CD38−細胞(例えば、0〜10%パーセンタイル);
2.中期:約3〜4か月の処置期間でCD34+CD38int/lo細胞(例えば、12〜40%パーセンタイル)(例えば、抗癌タンパク質の微小環境標的化送達のため);
3.短期:約1〜2か月の処置時間でCD34+CD38+/int細胞(例えば、41〜70%パーセンタイル)(例えば、抗癌タンパク質の微小環境標的化送達のため)。
本明細書において処置という場合には総て、治癒的処置、待期的処置および予防的処置を含むが、本発明に関して予防という場合には、より一般的には予防的処置に関連すると認識されるべきである。哺乳動物、特にヒトの処置が好ましい。ヒトの処置および獣医学的処置の両方が本発明の範囲内にある。
プロスタグランジンE2またはプロスタグランジンE2誘導体は、造血幹細胞または前駆細胞をベクター、好ましくはウイルスベクターで形質導入する際に遺伝子導入効率を高めるために使用され得る。
高精製HSCはレンチウイルスベクターでより形質導入可能となる
本発明者らは造血幹細胞集団および前駆細胞集団に対するマイクロRNAの種々の効果を研究した。この目的で、CD34+CD38−およびCD34+CD38+臍帯血HSPCにレンチウイルスmiRNAスポンジまたは過剰発現ベクターで形質導入した(データは示されていない)。予期しないことに、当技術分野で広く想定されていることとは対照的に、本発明者らは、より始原的なCD34+CD38−HSCが富化されたサブセットへの遺伝子導入1.5倍増であったことを認めた。本発明者らは独自に、複数の臍帯血ドナーおよび成人骨髄ドナーに対して、マーカー遺伝子を発現する生物学的に中立なベクターを用いてこの所見を確認し、バルクCD34+細胞またはCD34+CD38+細胞の形質導入に比べて選別されたCD34+CD38−HSC富化画分への遺伝子導入効率が1.5〜2倍増であったことを示した(図1(A))。
ビーズに基づくCD38およびCD34のそれぞれに関する一連の陰性/陽性選択は優れたNSG生着能を有する細胞の精製を可能とする
ビーズに基づくCD38およびCD34それぞれの一連の陰性/陽性選択の実現可能性を調べるために、本発明者らは市販のCD38選択キットをヒト臍帯血単核細胞に適用し、NSGマウスにおいて競合移植により、CD38−画分(陽性選択によりCD34がさらに富化されたもの)およびCD38+画分の生着能を調べた(図2)。第1世代の非最適化選択プロトコールを用いた場合であっても、本発明者らはCD38−画分に関して生着の優位性を明らかに示すことができた。CD38−細胞は移植細胞の20%未満を占めるに過ぎなかったが、長期生着細胞の70〜80%がこの画分に由来するものであり、この精製プロトコールのさらなる最適化の動機付けとなった。
NSGマウスにおける分割移植細胞のモデル化
遺伝的に改変された長期再定着細胞と短期前駆細胞の共移植をモデル化するために、本発明者らは幹細胞富化画分および種々の前駆細胞画分を蛍光タンパク質発現レンチウイルスベクター(LV)セットで示差的に標識し、競合的条件および非競合的条件の両方でNSGマウスの生着動態を検討した。
群1:27,000+/−細胞/マウス(n=3);
群2:248,000+/hi細胞/マウス(n=3);
群3:27,000+/−および248,000+/hi細胞/マウス(n=3)。
生着(群1、2、3)およびキメラ性(群3)を末梢血において経時的にモニタリングし、造血器官を移植18週間後に分析した(図3)。
群1:129,000+/−細胞/マウス(n=6);
群2:869,000前駆細胞(+/int1細胞、+/int2細胞および+/hi細胞を合わせたもの、各集団は前駆細胞混合物の33%を占める)/マウス(n=7);
群3:129,000+/−プール前駆細胞と869,000プール前駆細胞の混合物/マウス(n=6)
生着(群1、2、3)およびキメラ性(群3)を末梢血において経時的にモニタリングした(図4(A))。
・長期:遺伝病の治癒のためにCD34+CD38−細胞(0〜10%パーセンタイル);
・中期:3〜4か月の処置期間でCD34+CD38int/lo細胞(12〜40%パーセンタイル)(例えば、抗癌タンパク質の微小環境標的化送達のため);
・短期:1〜2か月の処置期間でCD34+CD38+/int細胞(41〜70%パーセンタイル)(例えば、抗癌タンパク質の微小環境標的化送達のため)。
プロスタグランジンE2は、NSG再定着能を有するヒト造血幹細胞および前駆細胞への遺伝子導入を高める。
プロスタグランジンE2(PGE2)の抗アポトーシス特性を利用する試みにおいて(Pelus LM et al. Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2011;96:3-9)、本発明者らはストレス(冷凍/解凍サイクル、毒性ベクターでの形質導入、エレクトロポレーション)に曝されたCD34+ HSPCを長時間作用するPGE2同族体16,16−ジメチルプロスタグランジンE2(dmPGE2;Cayman Chemical、Cat 14750)で処理した。予期しないことに、本発明者らは、dmPGE2処理後に臍帯血(図5(A))および成体骨髄(図6)由来のCD34+またはCD34+CD38− HSPCへの遺伝子導入効率が1.5倍高まったことを見出した。このベクターコピー数(VCN)の違いはNSGマウスへの細胞の移植後4か月を超えて維持され、生着レベルはdmPGE2処理によって悪影響を受けなかった。
臨床プロトコール(Biffi A et al. Science 2013;341:1233158から適合):全骨髄を、内部SOPに従い、全身麻酔を用いて腸骨稜から無菌条件下で採取する。あるいは、白血球分離の6〜9時間前に単回用量のプレリキサフォルを用いまたは用いずに、−3日から出発して、5〜10μg/kgのG−CSFにより患者にHSPC動員を施す。採取し、専用バッグに回収し、封止し、識別表示をした骨髄または動員末梢血を、次に、GMP施設に移す。細胞精製は、GMP条件で製造者の手順(MiltenyiBiotec、ベルギッシュ・グラートバッハ、ドイツ)に従い、免疫磁性ビーズを用いた陰性/陽性選択によって行う。次に、精製された細胞をレトロネクチンコーティングVueLifeバッグ(American Fluoroseal、ゲイザースバーグ、MD)内のGMPグレードのサイトカイン(上記参照)を添加した無血清培地中で培養し、GMPグレードの精製ベクターに30〜100の多重感染度で1回または2回、40〜60時間の総培養時間で曝す。形質導入手順の終了時に、形質導入されたCD34+細胞を採取し、Cell Grow培地で洗浄し、患者に注射するために生理食塩水中に2〜10×106細胞/mLの濃度で再懸濁させる。形質導入の終了時に、上記のようにクローン形成アッセイ、フローサイトメトリーおよびin vitro培養のために細胞の一画分を採取する。細胞は、品質管理試験(注射時に利用可能な生存力、免疫表現型、内毒素、ラージT Ag DNA、マイコプラズマに関する結果)に従い、バッチリリース(batch release)時に注射時まで4℃で維持する。
培養/形質導入CD34+CD38−幹細胞と非培養CD34+CD38int/+前駆細胞の共投与のモデル化
図7に示されるデータは、非培養CD34+CD38int/+動員末梢血前駆細胞(前駆細胞)と遺伝子改変CD34+CD38− HSPC(幹細胞(ステム))の併用移植に関する。この実験は、非培養CD34+CD38int/+(13〜100%CD38パーセンタイル)前駆細胞が長期持続し、培養/形質導入CD34+CD38int/+細胞よりも高い再定着能を有することを示す。
1.支持細胞集団として患者に与えられる新鮮な前駆細胞は、遺伝子療法患者において造血回復を加速化し、強化する可能性があり、従って、治療後の初期数ヶ月に感染性合併症および出血性合併症のリスクを実質的に軽減する。
2.遺伝子改変幹細胞と新鮮前駆細胞の比率(現行で1:8)は、効率的な長期遺伝子マーカーを改善するために幹細胞に有利になるように調整することができる(例えば、1:5)。
3.遺伝子改変CD34+CD38−細胞との競合を軽減するために、支持細胞集団からCD34+CD38int1集団の一部を除去することができる。
4.高機能の遺伝子改変HSCを得るためには短期の培養時間が重要である。遺伝子改変HSCの機能的特性を改善することで、1:5比と1:10比の両方でin vivoのCD34+およびCD33高細胞において類似の遺伝子マーカーにより示されるように、項目(2)および(3)に記載した介入の重要度が低くなる(図7B参照)。
図5、7および9のデータは、培養時間が動員末梢血由来の幹細胞および前駆細胞の両方の機能的生着能に悪影響を及ぼすことを示す。培養時間を24時間に短縮すると、培養の悪影響が軽減され、薬効のある遺伝子療法産物の質が改善され得る。dmPGE2の使用により、短期24時間のex vivo操作プロトコールにおけるHSCの効率的形質導入が可能となり(図5)、従って、今後の遺伝子療法研究において本プロトコールを実施するための強い根拠となる。これらのデータはまた、長期のex vivo培養からのCD34+細胞は新鮮なCD34+細胞または短期間の培養のCD34+細胞とは機能的に等価ではないことから、幹細胞移植物の投与に使用される標準的尺度であるCD34細胞数の情報価値が減ることを意味する。実際に、本発明者らが44時間培養よりも少ない24時間培養からのCD34+細胞を注射したとしても、前記のプロトコールからより高レベルの長期生着が得られた。
動員末梢血(G−CSFおよび/またはプレリキサフォルまたは新規の治験動員剤により動員)または骨髄由来のCD34+CD38− HSPCへの効率的遺伝子導入を得るために好ましい形質導入プロトコール
考察するプロトコールを図10に示す。
プロトコールA:IL3不含培地での「シングルヒット」プロトコール(38時間)を用いて形質導入されたCD34+CD38−細胞;
プロトコールB:LV暴露の120分前にdmPGE2暴露を行い、IL3不含培地での「シングルヒット」プロトコール(38時間)を用いて形質導入されたCD34+CD38−細胞;
プロトコールC:IL3不含培地での短縮「シングルヒット」プロトコール(24時間)を用いて形質導入されたCD34+CD38−細胞;
プロトコールD:LV暴露の120分前にdmPGE2暴露を行い、IL3不含培地での短縮「シングルヒット」プロトコール(24時間)を用いて形質導入されたCD34+CD38−細胞。
インキュベーター
培養は細胞培養インキュベーター(37℃、5%CO2)で維持する。
レトロネクチンコーティングプレートまたはバッグ
前刺激/形質導入培地
参照プロトコール:ペニシリン/ストレプトマイシンおよびSCF 300ng/ml、FLT3L(300ng/ml)、TPO(100ng/ml)、IL3(60ng/ml)を添加し、使用前に濾過除菌した(0.22μm)CellGro(CellGenix)。
Claims (47)
- 造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団から臨床使用のための治療用細胞集団を調製する方法であって、前記出発細胞集団からCD38を実質的に発現しないがCD34を発現する細胞の集団を分離すること、および分離した細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得ることを含んでなる、方法。
- a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団からCD38発現細胞を分離する工程、
b.CD38を発現しない工程(a)で得られた細胞集団からCD34発現細胞を分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD34発現細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなる、請求項1に記載の方法。 - a.造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団をCD38に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
b.CD38反応性細胞をCD38非反応性細胞から分離する工程、
c.工程(b)で得られたCD38非反応性細胞をCD34に対して反応性のある薬剤と接触させる工程、
d.CD34反応性細胞をCD34非反応性細胞から分離する工程、ここで、CD34反応性細胞は形質導入細胞集団を形成する、
e.前記形質導入細胞集団にベクターで形質導入して治療用細胞集団を得る工程
を含んでなる、請求項1に記載の方法。 - 治療用細胞集団がCD34+CD38−表現型を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 造血幹細胞を含んでなる出発細胞集団が動員末梢血、骨髄または臍帯血から得られる、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- CD38またはCD34に対して反応性のある薬剤がそれぞれ抗CD38抗体または抗CD34抗体である、請求項3〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 抗CD38抗体および/または抗CD34抗体が磁性ビーズまたは検出可能なマーカーにコンジュゲートされている、請求項6に記載の方法。
- CD38発現細胞および/またはCD34発現細胞が磁性ビーズに基づく分離またはフローサイトメトリーを用いて分離される、請求項2または4〜7のいずれか一項に記載の方法。
- CD38反応性細胞および/またはCD34反応性細胞が磁性ビーズに基づく分離またはフローサイトメトリーを用いて分離される、請求項3〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクターがウイルスベクターである、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、請求項10に記載の方法。
- 前記ウイルスベクターが対象とするヌクレオチドを含んでなる、請求項10に記載の方法。
- 細胞集団にベクターで形質導入する工程が約44時間未満細胞を培養することを含んでなる、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 分離したCD38発現細胞またはその一部を保持して支持細胞集団とする、請求項2、4〜8または10〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 分離したCD38反応性細胞またはその一部を保持して支持細胞集団とする、請求項3〜7または9〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記支持細胞集団がCD34+CD38int1、CD34+CD38int2および/またはCD34+CD38+表現型を有する、請求項14または15のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法に従って調製された治療用細胞集団。
- 請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法によって調製された支持細胞集団。
- 請求項17に記載の治療用細胞集団を含んでなる医薬組成物。
- 請求項18に記載の支持細胞集団を含んでなる医薬組成物。
- 医薬において使用するための請求項17に記載の治療用細胞集団。
- 治療用細胞集団が請求項18に記載の支持細胞集団と組み合わせて投与される、医薬において使用するための請求項17に記載の治療用細胞集団。
- 支持細胞集団が請求項17に記載の治療用細胞集団と組み合わせて投与される、医薬において使用するための請求項18に記載の支持細胞集団。
- 治療用細胞集団が自己幹細胞移植法または同種幹細胞移植法の一部として投与される、請求項21または22に記載の使用のための治療用細胞集団。
- 支持細胞集団が自己幹細胞移植法または同種幹細胞移植法の一部として投与される、請求項23に記載の使用のための支持細胞集団。
- 治療用細胞集団が支持細胞集団の投与の前に対象に投与される、請求項21〜24のいずれか一項に記載の使用のための治療用細胞集団または支持細胞集団。
- 治療用細胞集団が支持細胞集団の投与と同期または同時に対象に投与される、請求項22〜25のいずれか一項に記載の使用のための治療用細胞集団または支持細胞集団。
- 請求項17および18に記載の治療用細胞集団および支持細胞集団を含んでなるキット。
- 請求項17に記載の治療用細胞集団を、それを必要とする対象に投与することを含んでなる治療方法。
- 請求項17に記載の治療用細胞集団と請求項18に記載の支持細胞集団を、それを必要とする対象に投与することを含んでなる治療方法。
- 治療用細胞集団が支持細胞集団の投与の前に対象に投与される、請求項30に記載の方法。
- 治療用細胞集団が支持細胞集団の投与と同期または同時に対象に投与される、請求項30に記載の方法。
- 対象とするヌクレオチドで形質導入されている、遺伝子療法において使用するための造血前駆細胞集団。
- 造血幹細胞および前駆細胞を含んでなる細胞集団から分離された後に対象とするヌクレオチドで形質導入された、遺伝子療法において使用するための造血前駆細胞集団。
- CD34+CD38int表現型を有する、請求項33または34に記載の使用のための造血前駆細胞集団。
- CD34+CD38int1、CD34+CD38int2および/またはCD34+CD38+表現型を有する、請求項33または34に記載の使用のための造血前駆細胞集団。
- 形質導入前駆細胞集団が造血幹細胞集団と組み合わせて投与される、請求項33〜36のいずれか一項に記載の使用のための造血前駆細胞集団。
- 造血前駆細胞集団を、それを必要とする対象に投与することを含んでなり、前記造血前駆細胞集団に対象とするヌクレオチドで形質導入されている、遺伝子療法の方法。
- 造血前駆細胞集団を、それを必要とする対象に投与することを含んでなり、前記細胞は造血幹細胞および前駆細胞を含んでなる細胞集団から分離された後に対象に投与する前に対象とするヌクレオチドで形質導入されたものである、遺伝子療法の方法。
- 造血前駆細胞集団がCD34+CD38int表現型を有する、請求項38または39に記載の方法。
- 造血前駆細胞集団がCD34+CD38int1、CD34+CD38int2および/またはCD34+CD38+表現型を有する、請求項38または39に記載の方法。
- 形質導入前駆細胞集団が造血幹細胞集団と組み合わせて投与される、請求項38〜41のいずれか一項に記載の方法。
- 患者において導入遺伝子発現の持続時間を制御する方法であって、導入遺伝子発現の持続時間が形質導入造血幹細胞および/または前駆細胞をCD38発現レベルに基づいて選択的に投与することにより制御される、方法。
- 導入遺伝子発現の持続時間の延長が低レベルのCD38発現を有する細胞を投与することにより達成される、請求項43に記載の方法。
- 造血幹細胞または前駆細胞にベクターで形質導入する際の遺伝子導入効率を高めるためのプロスタグランジンE2またはプロスタグランジンE2誘導体の使用。
- プロスタグランジンE2誘導体が16,16−ジメチルプロスタグランジンE2である、請求項45に記載の使用。
- 造血幹細胞の形質導入が請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法の一部として実施される、請求項45または46に記載の使用。
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