JP2016538300A - Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−n−(1−メチル−1h−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用 - Google Patents

Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−n−(1−メチル−1h−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2016538300A
JP2016538300A JP2016534655A JP2016534655A JP2016538300A JP 2016538300 A JP2016538300 A JP 2016538300A JP 2016534655 A JP2016534655 A JP 2016534655A JP 2016534655 A JP2016534655 A JP 2016534655A JP 2016538300 A JP2016538300 A JP 2016538300A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
substitution
hppd
methyl
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2016534655A
Other languages
English (en)
Inventor
ポレ,フアビアン
ヴアルドラフ,クリステイアン
ラバー,ベルント
ケーン,アルニム
ガツツヴアイラー,エルマー
トラボルト,クラウス
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer CropScience AG
Original Assignee
Bayer CropScience AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer CropScience AG filed Critical Bayer CropScience AG
Publication of JP2016538300A publication Critical patent/JP2016538300A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/32Ingredients for reducing the noxious effect of the active substances to organisms other than pests, e.g. toxicity reducing compositions, self-destructing compositions
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N31/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic oxygen or sulfur compounds
    • A01N31/04Oxygen or sulfur attached to an aliphatic side-chain of a carbocyclic ring system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/64Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/661,3,5-Triazines, not hydrogenated and not substituted at the ring nitrogen atoms
    • A01N43/681,3,5-Triazines, not hydrogenated and not substituted at the ring nitrogen atoms with two or three nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/64Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/7071,2,3- or 1,2,4-triazines; Hydrogenated 1,2,3- or 1,2,4-triazines
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/713Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with four or more nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N57/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
    • A01N57/18Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds
    • A01N57/20Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-carbon bonds containing acyclic or cycloaliphatic radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0069Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y113/00Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13)
    • C12Y113/11Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13) with incorporation of two atoms of oxygen (1.13.11)
    • C12Y113/110274-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (1.13.11.27)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(I)(a)カラスムギ属(Avena)、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、(d)ブレファリスミダエ(Blepharismidae)、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、(f)ピクロフィラセアエ(Picrophilaceae)、(g)コルディア(Kordia)からなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列、又は(II)前記で定義の生物の、好ましくはシュードモナス(Pseudomonas)からのHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列、又は(III)WO2012/021785に記載の方法でそれぞれ変異した変異トウモロコシ(Zea mays)若しくはダイズ(Glycine max)HPPDをコードする1以上のDNA配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用。

Description

本発明は、HPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用に関する。
WO2012/028579(PCT/EP2011/064820)には、いくつかの新たなN−(テトラゾール−5−イル)−又はN−(トリアゾール−3−イル)アリールカルボキサミド類及びそれの雑草防除用のHPPD阻害薬型除草剤としての使用が開示されており、WO2012/130685(PCT/EP2012/054981)には、トランスジェニック植物でのN−(テトラゾール−5−イル)−又はN−(トリアゾール−3−イル)アリールカルボキサミド類の使用が開示されており、ある種のトランスジェニック植物に施用される個々のN−(テトラゾール−5−イル)−又はN−(トリアゾール−3−イル)アリールカルボキサミド類が挙げられている。
HPPD阻害薬型除草剤をトウモロコシ(Zea mays)などの代謝耐性を示す作物におけるイネ科及び/又は広葉雑草に対して用いることができ、それら雑草は急速に枯死する(Schulz et al., (1993). FEBS letters, 318, 162−166;Mitchell et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 120−128; Garcia et al., (2000) Biochem., 39, 7501−7507; Pallett et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 133−142)。これらのHPPD阻害薬型除草剤の範囲を拡大するため、植物、特には代謝耐性がないか代謝耐性が低い植物に対して、農学的圃場条件下で許容される耐性レベルを与えるため、いくつかの努力が行われている。
一方、ホモゲンチシン酸のHPPD介在産生を迂回(US6,812,010)することによりトランスジェニック植物の操作を行って、感受性酵素を過剰発現させて、植物において、除草剤に関して十分な量の標的酵素を産生させている(WO96/38567)。
あるいは、各種位置で変異することでHPPDタンパク質を発現するトランスジェニック植物を発生させて、HPPのホモゲンチシン酸への変換を触媒するそれの特性を保持しながら、変異前の天然HPPDと比較してHPPD阻害薬型除草剤に対する感受性が低い標的酵素が得られている(例えばEP496630、WO99/24585を参照)。
さらに最近では、タバコ及びダイズのプラスチドゲノムへのシュードモナスHPPD遺伝子の導入が、核形質転換より有効であり、少なくとも1種類のHPPD阻害薬の発芽後施用に対する耐性ですら与えることが明らかになっている(Dufourmantel et al., 2007, Plant Biotechnol J. 5(1):118−33)。
WO2009/144079では、蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の336位の変異ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードする核酸配列及びHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性である植物を得る上でのそれの使用が開示されている。
各種部位に変異を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質のさらに別の変異体及びそれらがある種のHPPD阻害薬型除草剤に対する抵抗性を付与可能であることが、PCT出願番号PCT/US2013/59598(WO2014/043435)下に出願され(2013年9月13日)、US61/701,037(2012年9月14日出願)、US61/766,057(2013年2月18日出願)及びUS61/790,404(2013年3月15日出願)の優先権を主張するPCT出願に記載されている。
これら変異体の一部、すなわち(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換を含み(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されている)、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換を含み(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)で配列番号8下に開示されている)、又は(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換を含む(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されている)蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異体が、それぞれ略称PfHPPDEvo33、PfHPPDEvo40、及びPfHPPDEvo41下にHPPD阻害薬型除草剤に耐性を付与する個々のトランスジェニック植物の生産に関して、参照によって本明細書に組み込まれる。
前記において、最初に挙げられたアミノ酸は、そのアミノ酸が野生型蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質中に存在することを特徴とし、括弧内にある文字は3文字コードで個々のアミノ酸を識別するものであるが、括弧の前にある文字は1文字コードで個々のアミノ酸を識別するものである。
WO04/024928において、発明者らは、HPP前駆体の植物細胞へのフラックスを増加させることで、その植物細胞におけるプレニルキノン生合成(例えば、プラストキノン類及びトコフェロール類の合成)を増加させようと努めた。これは、前記前駆体の合成をプレフェン酸デヒドロゲナーゼ(PDH)の過剰発現によって「シキミ酸」経路に連結させることで行った。その発明者らは、PDH酵素をコードする遺伝子による植物の形質転換によって、その植物のHPPD阻害薬に対する耐性を高めることができるとも記載している。
WO2002/046387では、HPPDをコードするカラスムギ(Avena sativa)から得られた遺伝子が、そのような遺伝子を過剰発現し、それによって各種HPPD阻害薬型除草剤に対する耐性を生じさせる植物を発生させることが記載されている。
WO2008/150473では、二つの異なる耐性機序−変異体HPPD酵素をコードする改変カラスムギ(Avena sativa)遺伝子及びCYP450トウモロコシモノオキシゲナーゼ(nsf1遺伝子)−の組み合わせの例を用いて、HPPD阻害薬型除草剤に対する改善された耐性を得ているが、両方のタンパク質の組み合わせに基づく相乗効果を示すデータは全く開示されていない。
WO2010/085705では、カラスムギ(Avena sativa)HPPDのいくつかの変異体が記載されており、そしてそのような変異HPPDをコードすることで、非変異HPPDと比較して各種HPPD阻害薬型除草剤に対する耐性を高くする遺伝子を含む植物が記載されている。
WO2012/021785では、各種生物のHPPDタンパク質、好ましくはトウモロコシから得られるHPPDにおけるいくつかの変異体が記載されている。イン・ビトロでそのような変異HPPD酵素から、並びにそのような変異HPPDをコードすることで非変異HPPDと比較して各種HPPD−阻害薬型除草剤に対する耐性を高める遺伝子を含む植物から、データが得られている。
WO2012/028579(PCT/EP2011/064820) WO2012/130685(PCT/EP2012/054981) US6,812,010 WO96/38567 EP496630 WO99/24585 WO2009/144079 PCT/US2013/59598(WO2014/043435) US61/701,037 US61/766,057 US61/790,404 PCT/US2013/59598(WO2014/043435) WO04/024928 WO2002/046387 WO2008/150473 WO2010/085705 WO2012/021785
Schulz et al., (1993). FEBS letters, 318, 162−166. Mitchell et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 120−128. Garcia et al., (2000) Biochem., 39, 7501−7507. Pallett et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 133−142. Dufourmantel et al., 2007, Plant Biotechnol J. 5(1):118−33.
最近、各種生物からのHPPD酵素をコードするいくつかの新規な遺伝子が確認されており、各種HPPD阻害薬型除草剤の施用に関して農業的に有用なレベルの耐性を示す作物植物を得るのに用いられており、例えば(i)WO2011/076877(PCT/EP2010/070561)に開示のシネココッコイデアエ(Synechococcoideae)亜科に属する細菌及びそれのある種の変異体から得られるもの、(ii)WO2011/076882(PCT/EP2010/070567)に開示のブレファリスミダエ(Blepharismidae)科に属する原生生物から得られるもの;(iii)WO2011/076892(PCT/EP2010/070578)に開示のロドコッカス(Rhodococcus)属に属する細菌及びそれのある種の変異体から得られるもの;(iv)WO2011/076885(PCT/EP2010/070570)に開示のピクロフィラセアエ(ピクロフィラセアエ(Picrophilaceae))科に属するユリアーキオータ(Euryarchaeota)及びそれのある種の変異体から得られるもの;又は(v)WO2011/076889(PCT/EP2010/070575)に開示のコルディア(Kordia)属に属する細菌及びそれのある種の変異体から得られるもの(これら文献は、HPPD阻害薬型除草剤に対して耐性を付与する個々のトランスジェニック植物の生産に関して参照によって本明細書に組み込まれる。)などがある。
特定のN−(テトラゾール−5−イル)アリールカルボキサミド、すなわち2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、HPPD阻害薬型除草剤に耐性を付与する1以上の遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物に用いることができることが見出された。
本発明の主題は、下記式(I):
Figure 2016538300
によっても記載される2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用であって、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子、特別に好ましくはトウモロコシ(Zea mays)からのHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号25下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号27下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号29下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域において望ましくない植物を防除するための使用である。
本発明に従って使用される2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)−ベンズアミドは、WO2012/028579(参照によって本明細書に組み込まれる)に詳細に記載の方法に従って製造することができる。
それは2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドの塩に関するものであることから、好ましくはナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、(C−C)−アルキルアンモニウム、ジ−(C−C−アルキル)アンモニウム、トリ−(C−C−アルキル)アンモニウム、テトラ−(C−C−アルキル)アンモニウム、トリ−(C−C−アルキル)スルホニウム、(C−又はC)−シクロアルキルアンモニウム若しくはジ−(C−C−アルキル)ベンジルアンモニウム塩、より好ましくはナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム塩、さらにより好ましくはナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム塩、非常に特にはナトリウム、カリウム若しくはアンモニウム塩を意味する。
WO2012/028579ですでに開示されているように、トランスジェニック植物についてのN−(テトラゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類及び本発明に従って使用される2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド及びそれの塩を包含する列記された個々のN−(テトラゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類も、広いスペクトラムの経済的に重要な単子葉及び双子葉一年生有害植物に対する優れた除草効力を有する。当該活性化合物は、根茎、台木及び他の多年生器官から芽を生じ、防除が困難である多年生雑草に対してであっても有効に作用する。
従って本発明は、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(コマモナス(Comamonas))・テステロニ(testeroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域において望ましくない植物を防除する方法であって、植物(例えば単子葉若しくは双子葉雑草若しくは望ましくない作物などの有害植物)、種子(例えば穀粒、種子若しくは栄養繁殖体(vegetative propagules)、例えば塊茎若しくは芽が出た苗条部分)又は植物が成長する区域(例えば、耕作下の区域)に、上記で定義の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することを含む方法に関するものである。具体例としては、本発明による化合物によって防除することができる単子葉及び双子葉雑草叢のいくつかの代表的なものを挙げることができるが、列記は一定の種類に限定されるものではない。
単子葉有害植物の属:エギロプス属(Aegilops)、カモジグサ属(Agropyron)、コヌカグサ属(Agrostis)、スズメノテッポウ属(Alopecurus)、セイヨウヌカボ属(Apera)、カラスムギ属(Avena)、ニクキビ属(Brachiaria)、スズメノチャヒキ属(Bromus)、クリノイガ属(Cenchrus)、ツユクサ属(Commelina)、ギョウギシバ属(Cynodon)、カヤツリグサ属(Cyperus)、タツノツメガヤ属(Dactyloctenium)、メヒシバ属(Digitaria)、ヒエ属(Echinochloa)、ハリイ属(Eleocharis)、オヒシバ属(Eleusine)、カゼクサ属(Eragrostis)、ナルコビエ属(Eriochloa)、ウシノケグサ属(Festuca)、テンツキ属(Fimbristylis)、アメリカコナギ属(Heteranthera)、チガヤ属(Imperata)、カモノハシ属(Ischaemum)、アゼガヤ属(Leptochloa)、ドクムギ属(Lolium)、ミズアオイ属(Monochoria)、キビ属(Panicum)、スズメノヒエ属(Paspalum)、クサヨシ属(Phalaris)、アワガエリ属(Phleum)、イチゴツナギ属(Poa)、ツノアイアシ属(Rottboellia)、オモダカ属(Sagittaria)、アブラガヤ属(Scirpus)、エノコログサ属(Setaria)、モロコシ属(Sorghum)。
双子葉雑草の属:イチビ属(Abutilon)、ヒユ属(Amaranthus)、ブタクサ属(Ambrosia)、アノダ属(Anoda)、カミツレモドキ属(Anthemis)、アファネス(Aphanes)、ヨモギ属(Artemisia)、アトリプレックス属(Atriplex)、ヒナギク属(Bellis)、センダングサ属(Bidens)、ナズナ属(Capsella)、ヒレアザミ属(Carduus)、ナンバンサイカチ属(Cassia)、ヤグルマギク属(Centaurea)、アカザ属(Chenopodium)、アザミ属(Cirsium)、セイヨウヒルガオ属(Convolvulus)、チョウセンアサガオ属(Datura)、ヌスビトハギ属(Desmodium)、エメックス(Emex)、エゾスズシロ属(Erysimum)、トウダイグサ属(Euphorbia)、チシマオドリコソウ属(Galeopsis)、コゴメギク属(Galinsoga)、ヤエムグラ属(Galium)、フヨウ属(Hibiscus)、サツマイモ属(Ipomoea)、ホウキギ属(Kochia)、オドリコソウ属(Lamium)、マメグンバイナズナ属(Lepidium)、アゼナ属(Lindernia)、シカレギク属(Matricaria)、ハッカ属(Mentha)、ヤマアイ属(Mercurialis)、ムルゴ(Mullugo)、ワスレナグサ属(Myosotis)、ケシ属(Papaver)、アサガオ属(Pharbitis)、オオバコ属(Plantago)、タデ属(Polygonum)、スベリヒユ属(Portulaca)、キンポウゲ属(Ranunculus)、ダイコン属(Raphanus)、イヌガラシ属(Rorippa)、キカシグサ属(Rotala)、スイバ属(Rumex)、オカヒジキ属(Salsola)、キオン属(Senecio)、ツノクサネム属(Sesbania)、キンゴジカ属(Sida)、シロガラシ属(Sinapis)、ナス属(Solanum)、ハチジョウナ属(Sonchus)、ナガボノウルシ属(Sphenoclea)、ハコベ属(Stellaria)、タンポポ属(Taraxacum)、グンバイナズナ属(Thlaspi)、ジャジクソウ属(Trifolium)、イラクサ属(Urtica)、クワガタソウ属(Veronica)、スミレ属(Viola)、オナモミ属(Xanthium)。
2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することができると考えられる経済的に重要な作物のトランスジェニック作物は、例えばラッカセイ属(Arachis)、フダンソウ属(Beta)、アブラナ属(Brassica)、キュウリ属(Cucumis)、カボチャ属(Cucurbita)、ヒマワリ属(Helianthus)、ニンジン属(Daucus)、ダイズ属(Glycine)、ワタ属(Gossypium)、サツマイモ属(Ipomoea)、アキノノゲシ属(Lactuca)、アマ属(Linum)、トマト属(Lycopersicon)、タバコ属(Nicotiana)、インゲンマメ属(Phaseolus)、エンドウ属(Pisum)、ナス属(Solanum)、ソラマメ属(Vicia)の双子葉作物、又はネギ属(Allium)、アナナス属(Ananas)、アスパラガス属(Asparagus)、カラスムギ属(Avena)、オオムギ属(Hordeum)、イネ属(Oryza)、キビ属(Panicum)、サトウキビ属(Saccharum)、ライムギ属(Secale)、モロコシ属(Sorghum)、ライコムギ属(Triticale)、コムギ属(Triticum)、トウモロコシ属(Zea)の単子葉作物、特にはトウモロコシ属(Zea)及びコムギ属(Triticum)である。
これが理由で、本発明は好ましくは、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域において望ましくない植物を防除する方法であって、ラッカセイ属(Arachis)、フダンソウ属(Beta)、アブラナ属(Brassica)、キュウリ属(Cucumis)、カボチャ属(Cucurbita)、ヒマワリ属(Helianthus)、ニンジン属(Daucus)、ダイズ属(Glycine)、ワタ属(Gossypium)、サツマイモ属(Ipomoea)、アキノノゲシ属(Lactuca)、アマ属(Linum)、トマト属(Lycopersicon)、タバコ属(Nicotiana)、インゲンマメ属(Phaseolus)、エンドウ属(Pisum)、ナス属(Solanum)、ソラマメ属(Vicia)の双子葉作物、又はネギ属(Allium)、アナナス属(Ananas)、アスパラガス属(Asparagus)、カラスムギ属(Avena)、オオムギ属(Hordeum)、イネ属(Oryza)、キビ属(Panicum)、サトウキビ属(Saccharum)、ライムギ属(Secale)、モロコシ属(Sorghum)、ライコムギ属(Triticale)、コムギ属(Triticum)、トウモロコシ属(Zea)の単子葉作物、特にはトウモロコシ属(Zea)及びコムギ属(Triticum)において、植物(例えば単子葉若しくは双子葉雑草若しくは望ましくない作物などの有害植物)、種子(例えば穀粒、種子若しくは栄養繁殖体(vegetative propagules)、例えば塊茎若しくは芽が出た苗条部分)又は植物が成長する区域(例えば、耕作下の区域)に、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することを含む方法に関するものである。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む、有用な植物及び観賞植物の、例えばコムギ、オオムギ、ライムギ、カラスムギ、モロコシ/キビ、イネ、キャッサバ及びトウモロコシなどの穀類又はサトウダイコン、サトウキビ、ワタ、ダイズ、アブラナ、ジャガイモ、トマト、エンドウマメ及び他の野菜の作物の経済的に重要なトランスジェニック作物において、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を用いることが好ましい。
本発明はさらに、植物の形質転換方法における、マーカー遺伝子として又はHPPD阻害薬である除草剤に対する植物耐性を与えることを可能とするコード配列としてHPPDをコードする核酸の使用、並びに(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む植物での2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用に関するものでもある。
作物の商業的生産では、信頼性の高い農薬管理下で、作物農地から望ましくない植物(即ち、「雑草」)を除去することが望まれる。理想的な処理は、農地全体に施用することができる処理であるが、作物に影響を与えず、望ましくない植物のみを除去することができる処理であると考えられる。そのような処理システムの一つは、除草剤に耐性を有する作物の使用であって、それによって、除草剤が除草剤耐性作物の農地に散布されたとき、除草剤耐性ではない雑草が死滅するか、又は重大な損傷を受ける一方で、作物が成長し続ける使用が関与するものである。理想的には、そのような処理システムは、雑草の防除により適応性と経済性の最良の可能な組み合わせが提供されるように、除草剤特性を変更する利点を有するであろう。例えば、個々の除草剤は農地で異なる寿命を有しており、一部の除草剤は長く持続して、農地に施用後も比較的長期間有効であるが、一方で、他の除草剤は、急速に分解して他の化合物及び/又は非活性な化合物となる。理想的な処理システムは、栽培者が除草剤の選択を特定の状況に合わせて調整することができるように異なる除草剤の使用が可能とするものであると考えられる。
多数の除草剤耐性作物が現在市販されているが、多くの市販の除草剤及び除草剤/作物の組み合わせに関して生じている一つの問題は、個々の除草剤が、代表的には、共通の雑草種に対して不十分な活性スペクトラムを有することである。以前から使用されてきた各除草剤の多くに関して、除草剤に耐性の雑草種の集団及びバイオタイプがさらに蔓延するようになった(例えば、Tranel and Wright (2002) Weed Science 50: 700−712; Owen and Zelaya (2005) Pest Manag. Sci. 61:301−311参照)。複数の除草剤に耐性を有するトランスジェニック植物が記載されている(例えば、WO2005/012515参照)。しかし、作物生産のあらゆる局面の改善、雑草の防除の選択肢、残留雑草防除の拡大、及び作物収量の改善が引き続き求められている。
HPPD阻害薬2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対して耐性を示す上でトランスジェニック植物において機能する1以上のHPPDタンパク質をコードする上記で定義のキメラ遺伝子若しくはそれの変異体は、植物において、そのような植物に有用な農学的特性を付与するタンパク質又はRNAをコードする他の遺伝子と組み合わせることが有利である。形質転換植物に有用な農学的特性を付与するタンパク質又はRNAをコードする遺伝子の中で、化学構造に基づきHPPD阻害型除草剤とは異なる1以上の除草剤に対する耐性を付与するタンパク質をコードするDNA配列、及びある種の昆虫に対する耐性を付与する他のもの、ある種の病気及び/又は生物ストレス及び非生物ストレスに対して耐性を付与するもの、線虫又は昆虫防除を提供するRNAをコードするDNAなどを挙げることができる。
そのような遺伝子は、特に、公開PCT特許出願WO91/02071及びWO95/06128に記載されている。
形質転換植物細胞及び植物に、ある種の除草剤に対する耐性を付与するタンパク質をコードするDNA配列の中で、グルホシネート除草剤に対する耐性を付与するWO2009/152359に記載のbar若しくはPAT遺伝子又はストレプトミセス・コエリコロール(Streptomyces coelicolor)遺伝子、グリホセート及びその塩などの標的としてEPSPSを有する除草剤に対する耐性を付与する好適なEPSPSをコードする遺伝子(US4,535,060、US4,769,061、US5,094,945、US4,940,835、US5,188,642、US4,971,908、US5,145,783、US5,310,667、US5,312,910、US5,627,061、US5,633,435)、又はグリホセートオキシドレダクターゼをコードする遺伝子(US5,463,175)を挙げることができる。
標的としてEPSPSを有する除草剤に対する耐性を付与する好適なEPSPSをコードするDNA配列の中で、より詳細には、植物EPSPS、特に、トウモロコシEPSPS、特には二つの変異、特にはアミノ酸102位の変異とアミノ酸106位の変異を含むトウモロコシEPSPSをコードする遺伝子(WO2004/074443)であり、本明細書下記で二重変異トウモロコシEPSPS又は2mEPSPSと称されるアグロバクテリウム(特許出願US6566587に記載の遺伝子、又はアグロバクテリウム(Agrobacterium)から単離されたEPSPSをコードし、米国特許第5,633,435号の配列番号2及び配列番号3で記載される遺伝子(CP4とも称される)が挙げられる。
標的としてEPSPSを有する除草剤に対する耐性を付与する好適なEPSPSをコードするDNA配列の中で、詳細には、アルトロバクター・グロビホルミス(Arthrobacter globiformis)由来のEPSPS GRG23をコードする遺伝子、さらには、変異体GRG23 ACE1、GRG23 ACE2又はGRG23 ACE3、特にはWO2008/100353に記載されているGRG23の変異体及びバリアント、例えば、WO2008/100353の配列番号29のGRG23(ace3)R173Kが挙げられる。
EPSPSをコードする、より詳細には、上記遺伝子をコードするDNA配列の場合、これらの酵素をコードする配列の前に、輸送ペプチドをコードする配列、特には米国特許第5,510,471号又は第5,633,448号に記載の「最適化された輸送ペプチド」が先行することが有利である。
WO2007/024782では、グリホセート及び少なくとも一つのALS(アセト乳酸シンターゼ)阻害剤に耐性を有する植物が開示されている。より具体的には、GAT(グリホセート−N−アセチルトランスフェラーゼ)ポリペプチド及びALS阻害剤に対する耐性を付与するポリペプチドをコードする遺伝子を含有する植物が開示されている。
US6,855,533では、変異アラビドプシス(Arabidopsis)ALS/AHAS遺伝子を含有するトランスジェニックタバコ植物が開示されている。
US6,153,401では、代謝により、2,4−D(2,4−ジクロロフェノキシ酢酸)に対する耐性を付与する2,4−D−モノオキシゲナーゼをコードする遺伝子を含有する植物が開示されている。
US7838733、WO2005/107437、WO2007/053482、WO2008/141154、及びUS2010/0251432では、代謝によって2,4−D(2,4−ジクロロフェノキシ酢酸)、他のフェノキシオーキシン除草剤及びアリールオキシフェノキシプロピオネート系除草剤に対する耐性を付与する2,4−D−ジオキシゲナーゼ類をコードする遺伝子を含む植物が開示されている。
US2008/0119361及びUS2008/0120739では、代謝により、ジカンバ(3,6−ジクロロ−2−メトキシ安息香酸)に対する耐性を付与するジカンバモノオキシゲナーゼをコードする遺伝子を含有する植物が開示されている。
WO2011/028833及びWO2011/028832では、アロキシジム、ブトロキシジム、クレトジム、クロプロキシジム、シクロキシジム、セトキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、クロラジホップ、クロジナホップ、クロホップ(clofop)、ジクロホップ、フェノキサプロップ、フェノキサプロプ−P、フェンチアプロプ、フルアジホップ、フルアジホップ−P、ハロキシホップ、ハロキシホップ−P、イソキサピリホップ、プロパキザホップ、キザロホップ、キザロホップ−P、トリホップ(trifop)及びピノキサデン又はこれら除草剤のいずれかの農業的に許容される塩若しくはエステルからなる群から選択される少なくとも1種類の除草剤に対する耐性を与える変異若しくは組換えアセチル−コエンザイム−Aカルボキシラーゼ(ACCase)をコードする遺伝子を含む植物が開示されている。
上記の除草剤耐性形質はいずれも、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことで、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に関して植物においてHPPD耐性を発揮する形質と組み合わせることができる。
昆虫に対する耐性特性に関係するタンパク質をコードするDMA配列の中で、詳細には、文献に広く記載されており、当業者に公知のBtタンパク質を挙げることができる。フォトラブダス(Photorhabdus)などの細菌から抽出されたタンパク質も挙げられる(WO97/17432及びWO98/08932)。
昆虫に対する新規な耐性特性を付与する対象のタンパク質をコードするそのようなDNA配列の中で、詳細には、文献に広く記載されており、当業者に公知のBt Cry又はVIPタンパク質を挙げることができる。これらは、Cry1Fタンパク質又はCry1Fタンパク質から誘導されるハイブリッド(例えば、US 6,326,169;US 6,281,016;US 6,218,188に記載のハイブリッドCry1A−Cry1Fタンパク質、又はその毒性断片)、Cry1A型タンパク質又はその毒性断片、好ましくは、Cry1Acタンパク質又はCry1Acタンパク質から誘導されるハイブリッド(例えば、US 5,880,275に記載のハイブリッドCry1Ab−Cry1Acタンパク質)又はEP451878に記載されているCry1Ab若しくはBt2タンパク質又はその殺虫性断片、WO02/057664に記載されているCry2Ae、Cry2Af又はCry2Agタンパク質又はその毒性断片、WO 2007/140256に記載のCry1A.105タンパク質(配列番号7)又はその毒性断片、NCBI寄託番号ABG20428のVIP3Aa19タンパク質、NCBI寄託番号ABG20429のVIP3Aa20タンパク質(WO 2007/142840の配列番号2)、COT202又はCOT203のコットンイベントで産生されたVIP3Aタンパク質(それぞれ、WO 2005/054479及びWO 2005/054480)、WO01/47952に記載のCryタンパク質、Estruchら(1996)、Proc Natl Acad Sci U S A. 28;93(11):5389−94及びUS6,291,156に記載のVIP3Aaタンパク質又はその毒性断片、ゼノラブダス(Xenorhabdus)由来の殺虫性タンパク質(WO98/50427に記載のもの)、セラチア(Serratia)種株(特に、セラチア・エントモフィラ(S. entomophila)由来)又はフォトラブダス(Photorhabdus)種株、例えば、WO98/08932に記載のフォトラブダス(Photorhabdus)由来のTc−タンパク質(例えば、Waterfield et al., 2001, Appl Environ Microbiol. 67(11):5017−24; Ffrench−Constant and Bowen, 2000, Cell Mol Life Sci.; 57(5):828−33)を含む。また、いくつかの(1から10、好ましくは、1から5)アミノ酸が、上記配列、特に、その毒性断片の配列のいずれかと異なっているか、又は輸送ペプチド、例えば、色素体輸送ペプチド、又は別のタンパク質又はペプチドに融合している、これらのタンパク質のいずれか一つのバリアント又は変異体も本発明に含まれる。
本発明はまた、宿主生物において、特には植物細胞若しくは植物において機能することができる5′及び/又は3′位、少なくとも5′位にコード配列並びに異種調節要素を有するキメラ遺伝子(又は発現カセット)を含むトランスジェニック植物での2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用であって、当該コード配列が、(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avenasativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員に由来する、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含むHPPDをコードする少なくとも一つの核酸配列を含む使用に関するものでもある。
別の特定の実施形態において、本発明は、前述のキメラ遺伝子を含むトランスジェニック植物での2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用であって、前記キメラ遺伝子が、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avenasativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員に由来する、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含むヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードする核酸配列の5′位に、植物輸送ペプチドをコードする核酸配列を含み、その配列がプロモーター領域と(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avenasativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員に由来する、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願で
は配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含むヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードする核酸配列との間に配置されていることで、輸送ペプチド/HPPD融合タンパク質の発現を可能とする使用に関するものである。
さらに別の特定の実施形態において、本発明は、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む植物、植物部分又は植物種子における2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用、又はそのような植物、植物部分若しくは種子が成長すべき又は蒔かれるべき土壌での単独で又はHPPD阻害薬とは異なる形で作用する1以上の他の公知の除草剤と組み合わせての2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)−ベンズアミド又はそれの塩の使用に関するものである。
さらに別の特定の実施形態では、トリケトン類(トリケトンHPPD阻害剤と呼ぶ)、例えば、テンボトリオン、スルコトリオン、メソトリオン、ビシクロピロン、テフリルトリオン、特にはテンボトリオン、ジケトン類、例えば、ジケトニトリル、イソオキサゾール類、例えば、イソキサフルトール、又はピラゾリネート類(ピラゾリネートHPPD阻害剤と呼ぶ)、例えば、ピラスルホトール、ピラゾレート、トプラメゾン、ベンゾフェナップからなる群から選択されるHPPD阻害薬型除草剤との混合物で、同時に若しくは順次にて2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することができ、さらにより具体的には、本発明は、(I)(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子からなる生物群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むそのようなHPPD阻害薬耐性植物、植物部分若しくは植物種子へのテンボトリオン、メソトリオン、ジケトニトリル、ビシクロピロン、テフリルトリオン、ベンゾフェナップ、ピラスルホトール、ピラゾレート及びスルコトリオンの施用に関するものである。
植物細胞及び植物でプロモーターとして機能する調節配列としては、植物で自然に発現される遺伝子のプロモーター配列、特には、植物の葉で特に発現されるプロモーター、例えば、細菌、ウイルス又は植物起源の「構成的」プロモーター、又は「光依存性」プロモーター、例えば、植物のリブロース−ビスカルボキシラーゼ/オキシゲナーゼ(RuBisCO)小サブユニット遺伝子のプロモーター、又は使用することができるいずれか好適な公知の発現可能なプロモーターを使用することができる。植物起源のプロモーターの中で、EP0507698A1に記載されているヒストンプロモーター、イネアクチンプロモーター(US5,641,876)、又は植物のユビキチンプロモーター(US5,510,474)が挙げられる。植物ウイルス遺伝子のプロモーターの中で、カリフラワーモザイクウイルス(CaMV 19S又は35S、Sanders et al.(1987), Nucleic Acids Res. 15(4):1543−58)、サーコウイルス(AU689311)、又はキャッサバベインモザイクウィルス(CsVMV、US7,053,205)のプロモーターが挙げられる。
さらに別の特定の実施形態では、本発明は、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を発現させるのに用いることができる植物の特定の領域若しくは組織に特異的なプロモーター配列、例えば、種子特異的なプロモーター(Datla, R. et al., 1997、Biotechnology Ann. Rev. 3, 269−296)、特に、napinプロモーター(EP255378A1)、ファゼオリンプロモーター、グルテニンプロモーター、ヘリアンチニンプロモーター(WO92/17580)、アルブミンプロモーター(WO98/45460)、オレオシンプロモーター(WO98/45461)、SAT1プロモーター又はSAT3プロモーター(PCT/US98/06978)を含む植物、植物部分若しくは植物種子に対する2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用に関するものである。
また、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ(PAL)、HMG−CoAレダクターゼ(HMG)、キチナーゼ、グルカナーゼ、プロティナーゼ阻害剤(PI)、PR1ファミリー遺伝子、ノパリンシンターゼ(nos)及びvspBプロモーター(US5670349、表3)、HMG2プロモーター(US5670349)、リンゴβ−ガラクトシダーゼ(ABG1)プロモーター及びリンゴアミノシクロプロパンカルボン酸シンターゼ(ACCシンターゼ)プロモーター(WO98/45445)から有利に選択される誘導プロモーターを使用することもできる。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子からなる生物群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)(I)をコードする遺伝子を、プロモーターとコード配列間に位置している他の調節配列、例えば、転写アクチベーター(「エンハンサー」)、例えば、特許出願WO87/07644に記載のタバコモザイクウイルス(TMV)の翻訳アクチベーター、又は、例えばCarrington & Freed 1990, J. Virol. 64: 1590−1597に記載のタバコエッチウイルス(TEV)の翻訳アクチベーター、又はトウモロコシのadh1イントロン若しくはイネアクチンのイントロン1などのイントロンを、プロモーターと組み合わせて使用して、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)−ベンズアミド又はそれの塩に対する十分な耐性を発揮させることもできる。
別の特定の実施形態において本発明は、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する耐性を与えるための、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含み、さらには同一若しくは異なる植物発現可能プロモーターの制御下にあるCYP450トウモロコシモノオキシゲナーゼ(nsf1遺伝子)を含む植物、植物部分若しくは植物種子への2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用に関するものである。
調節ターミネータ又はポリアデニル化配列としては、細菌起源の相当する配列、例えばアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)のnosターミネータなど、ウイルス起源の相当する配列、例えば、CaMV35Sターミネータなど、又は植物起源の相当する配列、例えば、公開特許出願EP0633317A1に記載されるヒストンターミネータなどを使用することができる。
理解すべき点として、個々のキメラ遺伝子の宿主適応したコドン使用による至適な発現を得るためには、そのようなキメラ遺伝子を挿入する個々の植物生命体のコドン使用に対して非植物遺伝子を採用することができるものと考えられる。従って、非植物起源のHPPDを発現する記載のキメラ遺伝子の全てにおいて、個々のHPPDコードDNA配列を、同一のアミノ酸配列をコードする修正DNA配列によって置き換えることができる。すなわち、配列番号3を配列番号5によって置き換えることができ、配列番号6を配列番号18によって置き換えることができ、配列番号8を配列番号19によって置き換えることができ、配列番号10を配列番号20によって置き換えることができ、配列番号12を配列番号21によって置き換えることができ、配列番号14を配列番号22によって置き換えることができ、配列番号16を配列番号23によって置き換えることができる。
本明細書で使用される場合の「遺伝子」という用語は、代表的には、少なくともプロモーター領域を含む、タンパク質に翻訳することができるRNAを転写可能とする5′及び/又は3′調節配列が隣接するDNAコード領域を指す。「キメラ遺伝子」は、HPPDコードDNAに関する場合、そのネイティブ宿主細胞においてHPPDタンパク質の発現を駆動する、天然の細菌の5′及び/又は3′調節配列とは異なる5′及び/又は3′調節配列を有するHPPDコードDNA配列を指す(「異種プロモーター」又は「異種調節配列」とも称される)。
本明細書で使用される場合の「配列Xを含むDNA/タンパク質」及び「配列Xを含む配列を有するDNA/タンパク質」という用語は、他のヌクレオチド又はアミノ酸配列が、5′(又はN末端)末端及び/又は3′(又はC末端)末端に含まれ得るように(例えば、N末端輸送又はシグナルペプチド)、そのヌクレオチド又はアミノ酸配列に少なくとも配列Xを含む又は含有するDNA又はタンパク質を指す。本明細書で使用される場合の「含む(comprising)」という用語は、「含む(including)」の意味で非制限的な言葉であり、具体的に列挙される以外の他の要素も存在し得ることを意味する。本明細書で使用される場合の「からなる(consisting of)」という用語は、限定的な言葉であり、すなわち、具体的に列挙される要素のみが存在する。本明細書で使用される場合の「配列Xを含むタンパク質をコードするDNA」という用語は、転写及び翻訳後に、少なくともアミノ酸配列Xを含有するタンパク質を生じるコード配列を含むDNAを指す。タンパク質をコードするDNAは天然のDNAである必要はなく、半合成、完全合成又は人工DNAであってもよく、そして、イントロン及び5′及び/又は3′隣接領域を含むことができる。本明細書で使用される場合の「ヌクレオチド配列」という用語は、一本鎖又は二本鎖形態であることができるDNA又はRNA分子の配列を指す。
本発明によるHPPDタンパク質は、当技術分野で公知の手順(例えば、公開PCT特許出願WO96/10083を参照)に従ってシグナルペプチドを備えていてもよく、又は別のペプチド、例えば、当該タンパク質を葉緑体に輸送する葉緑体輸送ペプチド(例えば、Van Den Broeck et al., 1985, Nature 313, 358、又は米国特許第5、510,471号の改変葉緑体輸送ペプチド)、分泌シグナルペプチド、又は当該タンパク質を他の色素体、ミトコンドリア、ER若しくは別の細胞小器官に標的化するペプチドで置換されていてもよく、又はメチオニンアミノ酸又はメチオニン−アラニンジペプチドで置き換わっていても良い。細胞内小器官を標的とする又は植物細胞外又は細胞壁へ分泌するシグナル配列、好ましくは、Klosgenら(1989, Mol. Gen. Genet. 217, 155−161)、Klosgen及びWeil(1991, Mol. Gen. Genet. 225, 297−304)、Neuhaus & Rogers(1998, Plant Mol. Biol. 38, 127−144)、Bihら(1999, J. Biol. Chem. 274, 22884−22894)、Morrisら(1999, Biochem. Biophys. Res. Commun. 255, 328−333)、Hesseら(1989, EMBO J. 8 2453−2461)、Tavladorakiら(1998, FEBS Lett. 426, 62−66)、Terashimaら(1999, Appl. Microbiol. Biotechnol. 52, 516−523)、Parkら(1997, J. Biol. Chem. 272、6876−6881)、Shcherbanら(1995, Proc. Natl. Acad. Sci USA 92, 9245−9249)(これらの全てが参照により本明細書に組み込まれる)により記載されるシグナル配列、特に、トウモロコシ、ワタ、ダイズ又はイネの標的又は分泌タンパク質由来のシグナルペプチド配列が、天然の標的又は分泌タンパク質に見出されている。そのような植物シグナルペプチドをコードするDNA配列は、植物で発現するためにHPPDタンパク質をコードするキメラ遺伝子内に挿入することができる。
本発明はまた、配列番号2、配列番号4、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号25;配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、及び配列番号41、配列番号43、配列番号46のHPPDアミノ酸配列に類似のアミノ酸配列であり、前記の1以上のアミノ酸のそれぞれにおいて挿入、欠失又は置換されている変異HPPD酵素も包含する。本発明の文脈において、アミノ酸配列の変異体とは、アミノ酸の置換、付加若しくは欠失があったとしても本明細書に記載のアミノ酸配列と同様の触媒活性を有するポリペプチド、酵素若しくはタンパク質を指すものである。好ましくは変異アミノ酸配列は、配列番号2、配列番号4、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、及び配列番号41、配列番号43、及び配列番号46のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも約80%、又は85%若しくは90%、95%、97%、98%若しくは99%の配列同一性を有する。やはり好ましくは、変異アミノ酸配列を含むポリペプチドは、HPPD酵素活性を有する。HPPD酵素活性を求める方法は当業界で公知であり、それにはWO2009/144079若しくはWO2002/046387、又はPCT/EP2010/070561で広く記載されているアッセイなどがある。
置換は、アミノ酸が異なる天然又は非従来的アミノ酸残基で置き換わっているアミノ酸変化を包含する。そのような置換は、本発明のHPPDタンパク質に含有されるアミノ酸残基が類似の性質の別の天然アミノ酸で置き換わっている「保存的」に分類することができ、例えば、Gly⇔Ala、Val⇔Ile⇔Leu、Asp⇔Glu、Lys⇔Arg、Asn⇔Gln又はPhe⇔Trp⇔Tyrである。本発明により包含される置換は、また、本発明のHPPDタンパク質に存在するアミノ酸残基が、異なる性質のアミノ酸、例えば、異なるグループの天然アミノ酸で置換されている(例えば、荷電又は疎水性アミノ酸をアラニンで置換する)「非保存的」であってもよい。アミノ酸置換は、代表的には、単一残基の置換であるが、集合又は分散した複数の残基のものであってもよい。アミノ酸の欠失は、通常、約1から10個程度のアミノ酸残基のものであるが、一方で、挿入はいずれの長さが挿入されてもよい。欠失及び挿入は、N末端、C末端で起こってもよく、内部の欠失又は挿入でもよい。一般的に、アミノ酸配列内の挿入は、アミノ又はカルボキシ末端融合よりも小さく、1から4個程度のアミノ酸残基の挿入である。本明細書で使用される場合の「類似アミノ酸」は、類似のアミノ酸側鎖を有するアミノ酸、すなわち、極性、非極性又は実質的に中性の側鎖を有するアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合の「非類似アミノ酸」は、異なるアミノ酸側鎖を有するアミノ酸を指し、例えば、極性側鎖を有するアミノ酸は、非極性側鎖を有するアミノ酸と非類似である。極性側鎖は、通常、細胞内で認められる水性環境と相互作用することができる、タンパク質の表面に存在する傾向がある(「親水性」アミノ酸)。他方、「非極性」アミノ酸は、類似の非極性の隣接物と相互作用することができるタンパク質の中心内部に存在する傾向がある(「疎水性」アミノ酸)。極性側鎖を有するアミノ酸の例は、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリン及びトレオニンである(疎水性であるシステインを除いて、いずれも親水性)。非極性側鎖を有するアミノ酸の例は、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン及びトリプトファンである(中性であるグリシンを除いて、いずれも疎水性)。
例示において別段の断りがない限り、組換えDNAを製造及び操作する手順はいずれも、Sambrook et al., Molecular Cloning−A Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY (1989)及びAusubel et al. (1994) Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, USAの1巻及び2巻に記載の標準的手順により実施される。植物分子生物学研究の標準的な材料及び方法が、R. R. D. CroyによるPlant Molecular Biology Labfax (1993)(BIOS Scientific Publications Ltd (UK)及びBlackwell Scientific Publications (UK)による共同出版)に記載されている。PCR技術の手順は、″PCR protocols: a guide to methods and applications″, Edited by M. A. Innis, D. H. Gelfand, J. J. Sninsky and T. J. White (Academic Press, Inc., 1990)に記載されている。
「耐性(tolerance)」、「耐性がある(tolerant)」又は「低感受性」という用語は互換的に使用され、異なる濃度の各種HPPD阻害薬型除草剤の存在下で、各HPPDタンパク質をコードする遺伝子を含む核酸で形質転換した菌株又は植物の肉眼観察可能な指標表現型によってスクリーニングされる、HPPDの内在的耐性の相対レベルを意味する。これらの指標表現型(褐色の呈色、増殖阻害、白化、除草効果など)と関連する用量応答及び用量応答における相対的シフトは、従来より、広範囲の異なる除草剤濃度での、植物の損傷、分裂組織の白化症状などに基づく通常の方法で、例えば、GR50(生育を50%減少させる濃度)又はMIC(最小発育阻止濃度)値によって表され、ここで、値の増加は、発現されたHPPDの内在的耐性の増加に相当する。これらのデータは、例えば、x軸にプロットされる「用量」とy軸にプロットされた「死滅パーセント」、「除草効果」、「緑色植物の発芽数」などを有する用量/応答曲線から誘導されるGR50値によって表すことができ、ここで、GR50値の増加は、発現されたHPPDの内在的耐性レベルの増加に相当する。除草剤は好適には、発芽前又は出芽後に施用することができる。
同様に、耐性レベルは、タバコなどの試験植物、又はダイズ若しくはワタなどの作物の遺伝子組換え、再生、育種及び散布試験を介してスクリーニングされ、これらの結果に従って、そのような植物は、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4(トリフルオロメチル)−ベンズアミドに対して、HPPDタンパク質をコードする外来遺伝子を全く含有しない植物と比較して少なくとも2から4倍耐性が高い。
「宿主生物」又は「宿主」は、HPPDを産生する目的のために本発明による核酸又はキメラ遺伝子を導入することができる単細胞又は多細胞異種生物であると理解される。これらの生物は、特に、細菌、例えば、大腸菌、酵母、特に、サッカロミセス(Saccharomyces)属又はクリベロミセス(Kluyveromyces)属、ピチア(Pichia)属、真菌、特に、アスペルギルス(Aspergillus)属、バキュロウイルス、又は、好ましくは、植物細胞及び植物である。
「植物細胞」は、本発明によれば、植物に由来又は見出され、カルスなどの未分化組織、胚、植物の部分、植物若しくは種子などの分化組織を生成することができるか、又はその一部である細胞であると理解される。これは、プロトプラスト及び花粉、培養植物細胞又はイン・ビトロで成長したプロトプラスト並びに完全な植物に再生することができる植物細胞を含む。
「植物」は、本発明によれば、光合成することができる分化多細胞生物、特に、単子葉植物又は双子葉植物、とりわけ、動物又はヒトの栄養を意図する又は意図しない栽培植物、例えば、トウモロコシ又はコーン、コムギ、アブラナ(Brassica)属種植物、例えば、ブラッシカ・ナプス(Brassica napus)又はブラッシカ・ジュンセア(Brassica juncea)、ダイズ類、イネ、サトウキビ、ビート根、タバコ、ワタ、野菜植物、例えば、キュウリ、リーキ、ニンジン、トマト、レタス、コショウ、メロン、スイカなどであると理解される。トランスジェニック植物は、本明細書で使用される場合、ゲノムに安定に挿入された1以上の外来又は異種遺伝子を含む植物を指す。
2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する耐性を発揮するため、植物で自然に発現される遺伝子のプロモーター配列、又はアグロバクテリウム属(Agrobacterium)又は植物ウイルスプロモーターなどの植物で自然に発現される遺伝子のプロモーター要素のハイブリッド若しくは組み合わせ、又は植物の除草剤耐性遺伝子の転写の制御に好適なプロモーター(本明細書において、「植物で発現可能なプロモーター」と呼ぶ)を、本発明の植物において、プロモーター配列として使用することができる。そのような好適な植物で発現可能なプロモーターの例は上述されている。本発明の1実施形態では、そのような植物で発現可能なプロモーターが、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含むものに操作可能に連結される。
本発明によれば、プロモーター調節配列と組み合わせて、プロモーターとコード配列との間に位置している他の調節配列、例えば、イントロン配列、又は転写アクチベーター(エンハンサー)を使用して、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する耐性を発揮することも可能である。そのような好適な調節配列の例は上述されている。
細菌又はウイルス起源の相当する配列、例えば、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)由来のnosターミネータ、又は植物起源のもの、例えば特許出願EP0633317A1に記載されるヒストンターミネータなどを転写終結(及びポリアデニル化)調節配列として使用することができる。
さらに別の特定の実施形態において本発明は、輸送ペプチド−HPPD融合タンパク質の発現を可能とするための、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む外因性キメラ遺伝子をコードする核酸配列の5′(上流)で用いられる輸送ペプチドをコードする核酸配列を含み、さらにはこの輸送ペプチド配列がプロモーター領域と外因性HPPDをコードする配列との間に配置されている植物、植物部分若しくは植物種子への2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用に関するものである。輸送ペプチドにより、HPPDを色素体、特に、葉緑体に移動させることが可能となり、融合タンパク質は色素体にHPPDタンパク質が導入されたときに輸送ペプチドとHPPDタンパク質間で開裂される。輸送ペプチドは、単一ペプチド、例えば、EPSPS輸送ペプチド(米国特許第5,188,642号に記載)又は植物のリブロース二リン酸カルボキシラーゼ/オキシゲナーゼ小サブユニット(RuBisCO ssu)の輸送ペプチド(適切な場合は、成熟RuBisCO ssuのN末端部分の数個のアミノ酸を含む(EP189707A1))であってもよく、又はいくつかの輸送ペプチドの融合物、例えば、特許第EP508909A1号に記載されている、色素体位置を有する成熟タンパク質のN末端配列の一部に融合した第一の植物輸送ペプチドと、この一部分に融合している第二の植物輸送ペプチドを含む輸送ペプチドであってもよく、そして、より具体的には、トウモロコシRuBisCO ssuのN末端の22個のアミノ酸に融合し、そしてトウモロコシRuBisCO ssuの輸送ペプチドに融合しているヒマワリRuBisCO ssuの輸送ペプチドを含む最適化された輸送ペプチドであってもよい(特許第EP508909A1号においてそのコード配列と共に記載されている)。
本発明は、また、輸送ペプチドHPPD融合タンパク質及びそのような融合タンパク質をコードする核酸又は植物で発現可能なキメラ遺伝子に関するものであり、この融合タンパク質の2つの要素は上記で定義されている。
さらに別の特定の実施形態において、本発明は、クローニング、発現ベクターによる形質転換によって得られる植物、植物部分若しくは植物種子での2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用であって、発現ベクターが、(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードする、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(A3xmi09H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む少なくとも一つのキメラ遺伝子を含む使用に関するものである。上記キメラ遺伝子の他に、このベクターは複製起点を含むことができる。このベクターは、本発明によるキメラ遺伝子を導入することにより形質転換されたプラスミド若しくはプラスミドの部分、コスミド又はバクテリオファージ若しくはウイルスであることができる。形質転換ベクターは当業者によく知られており、文献に広く記載されている。特に、植物細胞又は植物の形質転換に使用することができる形質転換ベクターは、植物細胞又は植物の形質転換に用いることができ、自己の複製及び発現要素をさらに含むウイルスであることができる。植物細胞又は植物を形質転換するためのベクターは、好ましくは、プラスミド、例えば、不活化アグロバクテリウム(Agrobacterium)Tiプラスミドである。
さらに別の特定の実施形態において、本発明は、(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードする配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含むキメラ遺伝子を含む植物、植物部分若しくは植物種子における2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用、並びに農地における、作物を成長させ、植物生産物、例えば、ダイズ類、イネ、コムギ、オオムギ若しくはトウモロコシ穀粒又はワタボールを収穫する上での植物又は種子の使用であって、1実施態様において、当該使用が、雑草を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩のそのような植物への施用を含む使用に関するものである。
別の特定の実施形態において、本発明は、植物、植物部分若しくは植物種子における2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用であって、その対象物が、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含み、その上さらに、上記の植物発現可能プロモーターを含み、PDH(プレフェン酸デヒドロゲナーゼ)酵素(US2005/0257283)をコードする核酸配列に操作可能に連結されているキメラ遺伝子を含むことで、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する耐性を与えることを特徴とする使用に関するものである。そのような2つの導入遺伝子を含む植物は、当技術分野でよく知られているように、植物を一つの導入遺伝子で形質転換し、次に、このトランスジェニック植物を第二の導入遺伝子で再度形質転換することによるか、又は植物を二つの導入遺伝子で同時に形質転換する(同じ又は二つの異なる形質転換DNA又はベクターで)ことによるか、又は第一の導入遺伝子を含む植物を、第二の導入遺伝子を含む植物と交配させることにより得ることができる。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことで2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対して耐性である植物、植物部分若しくは種子を得るための一つの形質転換方法は、DNAが付着した又はDNAを含有する固体又は液体粒子を、細胞、プロトプラスト又は組織に衝突させることを含む。別の形質転換方法は、植物に導入する手段として、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)Tiプラスミド又はアグロバクテリウム・リゾゲネス(Agrobacterium rhizogenes)Riプラスミドに挿入されたキメラ遺伝子を使用することを含む。マイクロインジェクション又はエレクトロポレーション、又はPEGを用いる直接遺伝子導入などの他の方法を使用してもよい。当業者であれば、選択の宿主生物、特に、植物細胞又は植物を形質転換する適切な方法を選択することができる。例として、ダイズの形質転換技術がEP1186666A1に開示の実施例1から3に詳しく記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。イネの場合では、アグロバクテリウム(Agrobacterium)介在の形質転換(Hiei et al., 1994 Plant J 6:271−282及びHiei et al., 1997 Plant Mol Biol. 35:205−21、これは参照により本明細書に組み込まれる)、エレクトロポレーション(US5,641,664及びUS5,679,558、これは参照により本明細書に組み込まれる)、又は衝突(Christou et al., 1991, Biotechnology 9:957、これは参照により本明細書に組み込まれる)を実施することができると考えられる。単子葉植物、特に、イネの形質転換の好適な技術は、WO92/09696に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。ワタの場合では、アグロバクテリウム(Agrobacterium)介在の形質転換(Gould J. H. and Magallanes−Cedeno M., 1998 Plant Molecular Biology reporter, 16:1−10及びZapata C., 1999, Theoretical Applied Genetics, 98(2):1432−2242、これらは参照により本明細書に組み込まれる)、ポリブレン及び/又は処理介在の形質転換(Sawahel W. A., 2001, −Plant Molecular Biology reporter, 19:377a−377f、これは参照により本明細書に組み込まれる)が記載されている。
あるいは、HPPDが、色素体、例えば葉緑体ゲノムの形質転換を用いて、色素体、例えば葉緑体で直接発現される、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む植物、植物部分若しくは植物種子において、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を用いることができる。好適な方法は、DNAでコーティングされた固体粒子又はDNAを含む液体粒子による植物細胞又は組織の衝突、及び相同的組換えによる導入遺伝子の組み込みを含む。好適なベクター及び選択システムは当業者に公知である。タバコ植物の葉緑体ゲノムへのそのような組み込みに使用することができる手段及び方法の例が、WO06/108830に提供されており、この内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明はまた、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対して耐性である植物を得る方法であって、その植物が,(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子によって形質転換されることを特徴とする方法に関するものである。
従って、本発明は、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことで2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対して耐性の植物を得る方法であって、その植物が、5′位及び適宜に3′位に、宿主生物で機能することが可能なコード配列並びに異種調節要素を含む(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO
2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことを特徴とし、前記コード配列が上述の本発明のHPPDをコードする遺伝子を定義する核酸配列を少なくとも含むことで、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する十分に高レベルの耐性を発揮することを特徴とする方法に関するものでもある。
本発明の1実施態様においては、上記方法におけるHPPD阻害剤は、単独で、又はトリケトン又はピラゾリネート除草剤、好ましくは、テンボトリオン、メソトリオン、ビシクロピロン、テフリルトリオン、ピラスルホトール、ピラゾレート、ジケトニトリル、ベンゾフェナップ又はスルコトリオン、特にはテンボトリオンからなる群から選択される1以上のHPPD阻害薬型除草剤と組み合わせた2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩である。
本発明は、植物を植える若しくは種子を播種する農地又は作物において、そのような農地若しくは作物に2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することで、雑草を選択的に除去する又は雑草の発芽を防止する方法であって、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、作物を播種する前(以下、播種前施用と称する)、作物の発芽前(以下、発芽前施用と称する)、又は作物の発芽後(以下、出芽後施用と称する)のいずれかで、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子に従って形質転換された植物に施用することを特徴とする方法に関するものでもある。
本発明は、また、本発明において前述の形質転換種子を含む区域又は農地を管理する方法であって、農地の前記区域に、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む種子又は植物にほとんど影響を与えることなく、前記雑草に毒性である用量の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用することを含む方法に関するものでもある。
本発明は、また、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子で形質転換された植物を栽培する方法であって、前記のキメラ遺伝子を含む種子を前記植物の栽培に適した農地の区域に播種し、そして、雑草が存在する場合、前記農地の前記区域に、前記形質転換種子又は前記形質転換植物にほとんど影響を与えることなく、雑草に毒性である用量の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を施用し、次に、所望の成熟期に達したときに栽培植物又は植物部分を収穫し、適切な場合には、収穫した植物から種子を分離することを含む方法に関するものでもある。
上記方法において、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、本発明に従って、作物を播種する前、作物の出芽前又は作物の出芽後のいずれかに施用することができる。
本発明の意味の範囲内において、「除草剤」は、それ自身で除草活性な物質又はそれの効力を変える添加剤、例えば、それの活性を高める薬剤(相乗作用剤)又はそれの活性を制限する薬剤(薬害軽減剤)と組み合わせたそのような物質であると理解される。当然のことながら、実際のそれらの施用においては、上記除草剤は、農芸化学で慣例的に用いられる製剤補助剤とそれ自体公知の方法で組み合わせるものと理解すべきである。
従って、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子に加えて、相同(=天然)遺伝子又は遺伝子配列の過剰発現、抑制若しくは阻害、又は非相同(=外来)遺伝子又は遺伝子配列の発現の結果として改変された特性を有するトランスジェニック植物を得ることができる。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含む植物、植物細胞若しくは種子に関して、トリケトン類、例えば、テンボトリオン、スルコトリオン及びメソトリオン、又はピラゾリネート類、例えば、ピラスルホトール及びトプラメゾン、特には、テンボトリオン、スルコトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、テフリルトリオン及びメソトリオンから選択される、詳細にはテンボトリオンに属する1以上の別のHPPD阻害薬型除草剤と組み合わせた2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、例えば、2,4−D若しくはジカンバなどの成長調節剤に対して、又は必須の植物酵素、例えばアセト乳酸シンターゼ(ALS)、EPSPシンターゼ、グルタミンシンターゼ(GS)、アセチル−コエンザイムAカルボキシラーゼ(ACCase)を阻害する除草剤に対して、又はALS阻害薬、グリホセート、グルホシネート、ACCase阻害薬及び類似の活性物質の群からの除草剤に対しても耐性であるトランスジェニック作物において用いることが好ましい。
従って本発明は、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩に対する抵抗性以外に、第2以上の除草剤抵抗性を含むトランスジェニック作物にも拡大される、有害植物(すなわち雑草)防除のための、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むHPPD耐性植物に施用される除草剤の使用に関するものでもある。
2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩は、必要とされる支配的な生理的及び/又は物理化学的パラメータに応じて、各種形態で製剤することができる。可能な製剤の例としては、水和剤(WP)、水溶剤(SP)、水溶性濃縮物、乳剤(EC)、乳濁液(EW)、例えば水中油及び油中水型乳濁液、噴霧液、懸濁液の濃縮物(SC)、油若しくは水に基づく分散液、油剤、カプセル懸濁液(CS)、粉剤(DP)、種子粉衣製品、散布による及び土壌への施用用の粒剤、微粒剤の形態の粒剤(GR)、噴霧粒剤、被覆粒剤及び吸着粒剤、水分散性粒剤(WG)、水溶性粒剤(SG)、ULV製剤、マイクロカプセル並びにロウなどがある。
これらの個々の製剤タイプは基本的に公知であり、例えば、Winnacker−Kuechler, ″Chemische technologie″[Chemical Technology], 第7巻, C. Hanser Verlag Munich, 第4版 1986, Wade van Valkenburg, ″Pesticide Formulations″, Marcel Dekker, N.Y., 1973; K. Martens, ″Spray Drying″ Handbook, 第3版 1979, G. Goodwin Ltd. Londonに記載されている。
また、不活性材料、界面活性剤、溶媒及びさらなる添加剤のような必要な製剤補助剤も知られており、例えばWatkins, ″Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers″, 第2版, Darland Books, Caldwell N. J.;H.v.Olphen, ″Introduction to Clay Colloid Chemistry″; 第2版, J. Wiley & Sons, N.Y.; C. Marsden, ″Solvents Guide″; 第2版, Interscience, N.Y. 1963; McCutcheon′s ″Detergents and Emulsifiers Annual″, MC Publ.Corp., Ridgewood N.J.; Sisley and Wood, ″Encyclopedia of Surface Active Agents″, Chem. Publ. Co. Inc., N.Y. 1964; Schoenfeldt, ″Grenzflaechenaktive Aethylenoxidaddukte″ [Interface−active ethylene oxide adducts], Wiss. Verlagsgesell., Stuttgart 1976; Winnacker−Kuechler, ″Chemische Technologie″[Chemical technology], 第7巻, C.Hanser Verlag Munich, 第4版 1986.に記載されている。
これらの製剤に基づいて、例えば調合済み剤又はタンクミックスの形態で、例えば殺虫剤、殺ダニ剤、除草剤、殺菌剤などの他の農薬活性物質との、そして薬害軽減剤、肥料及び/又は成長調節剤との組み合わせ剤を製造することも可能である。
水和剤は、水中に均一に分散可能であり、そして活性物質に加えて、希釈剤又は不活性物質は別として、イオン系及び/又はノニオン系界面活性剤(湿潤剤、分散剤)、例えばポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポリオキシエチル化脂肪族アルコール、ポリオキシエチル化脂肪族アミン、脂肪族アルコールポリグリコールエーテルサルフェート、アルカンスルホン酸エステル、アルキルベンゼンスルホン酸エステル、リグノスルホン酸ナトリウム、2,2′−ジナフチルメタン−6,6′−ジスルホン酸ナトリウム、ジブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム又は他にオレオイルメチルタウリン酸ナトリウムを含む製剤である。水和剤を調製するには、除草活性物質を、例えばハンマーミル、ブロワミル及びエアジェットミルのような慣用の装置中で微粉砕し、そして同時に又はその後で製剤補助剤と混合する。
乳剤は、活性物質を有機溶媒、例えばブタノール、シクロヘキサノン、ジメチルホルムアミド、キシレン又は他に相対的に高沸点の芳香族若しくは炭化水素又は有機溶媒の混合物中に溶解し、1以上のイオン系及び/又はノニオン系界面活性剤(乳化剤)を添加することによって製造される。使用可能な乳化剤の例は、アルキルアリールスルホン酸カルシウム塩、例えばドデシルベンゼンスルホン酸カルシウム、又はノニオン系乳化剤、例えば脂肪酸ポリグリコールエステル、アルキルアリールポリグリコールエーテル、脂肪族アルコールポリグリコールエーテル、プロピレンオキサイド−エチレンオキシド縮合物、アルキルポリエーテル、ソルビタンエステル、例えばソルビタン脂肪酸エステル又はポリオキシエチレンソルビタンエステル、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである。
粉剤は、微粉砕された固体材料、例えばタルク、自然粘土、例えばカオリン、ベントナイト及びピロフィライト又は珪藻土と共に有効成分を粉砕することによって得られる。
懸濁濃縮物は、水又は油に基づくものであることができる。それは、例えば、市販のビーズミルによる湿式粉砕によって、適切な場合は、例えば他の製剤タイプの場合にすでに上記で挙げた界面活性剤を添加して製造することができる。
乳濁液、例えば水中油型乳濁液(EW)は、例えば水系有機溶媒及び適切であれば、例えば他の製剤タイプについて前記ですでに挙げた界面活性剤を用いて撹拌機、コロイドミル及び/又はスタティックミキサーによって製造することができる。
粒剤は、吸着性の顆粒状不活性材料上に活性物質を噴霧することによって、又は粘着剤、例えばポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム若しくは他に鉱油を用いて、担体物質、例えば砂土、カオリナイト若しくは顆粒状不活性材料の表面に活性物質濃縮液を塗布することによって製造することができる。また、好適な活性物質を、所望の場合に肥料との混合物として、肥料顆粒の製造に慣用のやり方で造粒することもできる。
顆粒水和剤は、一般に噴霧乾燥、流動床造粒、ディスク造粒、高速撹拌機による混合、及び固形不活性材料なしの押出といったような慣用の方法によって製造される。
ディスク粒剤、流動床粒剤、押出粒剤及び噴霧粒剤を製造するためには、例えば″Spray−Drying Handbook″ 第3版 1979, G.Goodwin Ltd., London; J.E. Browning, ″Agglomeration″, Chemical and Engineering 1967, 第147頁以下; ″Perry′s Chemical Engineer′s Handbook″, 第5版, McGraw−Hill, New York 1973, 第8−57頁における方法を参照する。
作物保護製品の製剤のさらなる詳細については、例えば、G.C.Klingman, ″Weed Control as a Science″, John Wiley and Sons, Inc., New York, 1961, 第81−96頁及びJ.D.Freyer, S.A.Evans, ″Weed Control Handbook″, 第5版, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1968, 第101−103頁を参照する。
基本的に、農薬製剤は、0.1から99重量%、特には0.1から95重量%の本発明による化合物を含む。水和剤では、活性物質の濃度は、例えば約10から90重量%であり;100重量%までの残りは、慣用の製剤成分からなる。乳剤の場合、活性物質の濃度は、約1から90重量%、好ましくは5から80重量%であることができる。粉剤タイプの製剤は、1から30重量%の活性物質、好ましくはほとんどの場合で5から20重量%の活性物質の量を含むことができ;噴霧液は、約0.05から80重量%、好ましくは2から50重量%の活性物質を含む。顆粒水和剤の場合、活性物質含量は、活性化合物が固体であるか液体であるか、そして造粒助剤、充填剤などが使用されるかによって部分的に決まる。水中に分散可能な顆粒剤の場合、例えば、活性物質の含量は、1から95重量%、好ましくは10から80重量%である。
さらに、記載された活性物質製剤は、粘着付与剤、湿展剤、分散剤、乳化剤、浸透剤、保存剤、不凍剤及び溶媒、充填剤、担体、着色剤、消泡剤、蒸発抑制剤並びにpH及び粘度調節剤などの各場合で従来からの補助剤を含んでいる。
これらの製剤に基づいて、例えば、本発明によるHPPD耐性植物に施用される成分調合済み剤の又はタンクミックスの形態で、例えば殺虫剤、殺ダニ剤、除草剤、殺菌剤などの他の農薬活性物質と、そして薬害軽減剤、肥料及び/又は成長調節剤と、トリケトン類、例えば、テンボトリオン、スルコトリオン及びメソトリオン、又はピラゾリネート類、例えば、ピラスルホトール及びトプラメゾン、特には、テンボトリオン、スルコトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、テフリルトリオン及びメソトリオンから選択される、より詳細にはテンボトリオンであるHPPD阻害薬型除草剤との組み合わせ剤を製造することも可能である。
製剤例
a)粉剤は式(I)の化合物及び/又はそれの塩10重量部と不活性物質としてのタルク90重量部を混合し、その混合物をハンマーミルで粉砕することにより得られる。
b)容易に水に分散しうる水和剤は式(I)の化合物及び/又はそれの塩25重量部、不活性物質としてのカオリン含有石英64重量部、リグノスルホン酸カリウム10重量部並びに湿展剤及び分散剤としてのオレオイルメチルタウリン酸ナトリウム1重量部のを混合し、その混合物をピン付きディスクミルで粉砕することにより得られる。
c)容易に水に分散しうる分散液濃縮物は式(I)の化合物及び/又はそれの塩20重量部をアルキルフェノールポリグリコールエーテル(Triton(登録商標)X207)6重量部、イソトリデカノールポリグリコールエーテル(8EO)3重量部及びパラフィン系鉱油(沸点範囲:例えば約255から277℃)71重量部と混合し、その混合物をボールミルで5ミクロン以下の粉末度まで粉砕することにより得られる。
d)乳剤は式(I)の化合物及び/又はそれの塩15重量部、溶媒としてのシクロヘキサノン75重量部及び乳化剤としてのオキシエチル化ノニルフェノール10重量部から得られる。
e)顆粒水和剤は、
式(I)の化合物及び/又はそれの塩75重量部、
リグノスルホン酸カルシウム10重量部、
ラウリル硫酸ナトリウム5重量部、
ポリビニルアルコール3重量部及び
カオリン7重量部
を混合し、その混合物をピン付きディスクミルで粉砕し、造粒液としての水を噴霧してその粉末を流動床で造粒することにより得られる。
f)顆粒水和剤はまた、
式(I)の化合物及び/又はそれの塩25重量部、
ナトリウム2,2′−ジナフチルメタン−6,6′−ジスルホン酸ナトリウム5重量部、
オレオイルメチルタウリン酸ナトリウム2重量部、
ポリビニルアルコール1重量部、
炭酸カルシウム17重量部及び
水50重量部
をコロイドミルで均質化及び予備粉砕し、次にその混合物をビーズミルで粉砕し、得られた懸濁液を噴霧塔で単一物質ノズルにより噴霧及び乾燥することにより得られる。
本発明のさらに別の態様は、混合製剤又はタンクミックスの形態でトリケトン類、例えば、テンボトリオン、スルコトリオン及びメソトリオンに属する、又はピラゾリネート類、例えば、ピラスルホトール及びトプラメゾンに属する、特にはテンボトリオン、スルコトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、テフリルトリオン及びメソトリオンから選択される、より具体的には、テンボトリオンである別のHPPD阻害型除草剤と組み合わせての、及び/又は例えばWeed Research 26 (1986) 441−445又は″The Pesticide Manual″, 14th edition, The British Crop Protection Council and the Royal Soc. of Chemistry, 2003及びそこで引用されている文献に記載の、例えばアセト乳酸シンターゼ、アセチル−CoAカルボキシラーゼ、セルロースシンターゼ、エノールピルビルシキミ酸−3−リン酸シンターゼ、グルタミンシンテターゼ、p−ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ、フィトエンデサチュラーゼ、光化学系I、光化学系II、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼの阻害に基づく別の公知の活性物質と組み合わせての、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むHPPD耐性植物に対する2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用である。本発明による化合物と組み合わせることができる公知の除草剤又は植物成長調節剤は、例えば、下記活性物質(その化合物は、国際標準化機構(ISO)に従って一般名称又は化学名で、適切な場合にはそのコード番号と共に標記される)であり、常に、酸、塩、エステル及び異性体、例えば立体異性体及び光学異性体などの全ての使用形態を含む。この文脈において、一つ及び場合により、いくつかの使用形態を例を挙げて記載する。
アセトクロル、アシベンゾラル、アシベンゾラル−S−メチル、アシフルオルフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、アクロニフェン、アラクロール、アリドクロール、アロキシジム、アロキシジム−ナトリウム、アメトリン、アミカルバゾン、アミドクロル、アミドスルフロン、アミノピラリド、アミトロール、スルファミン酸アンモニウム、アンシミドール、アニロホス、アスラム、アトラジン、アザフェニジン、アジムスルフロン、アジプロトリン、BAH−043、BAS−140H、BAS−693H、BAS−714H、BAS−762H、BAS−776H、BAS−800H、ベフルブタミド、ベナゾリン、ベナゾリン−エチル、ベンカルバゾン、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンスリド、ベンスルフロン−メチル、ベンタゾン、ベンズフェンジゾン、ベンゾビシクロン、ベンゾフェナップ、ベンゾフルオル、ベンゾイルプロップ、ビフェノックス、ビラナホス、ビラナホス−ナトリウム、ビスピリバック、ビスピリバック−ナトリウム、ブロマシル、ブロモブチド、ブロモフェノキシム、ブロモキシニル、ブロムロン、ブミナホス、ブソキシノン(busoxinone)、ブタクロール、ブタフェナシル、ブタミホス、ブテナクロール、ブトラリン、ブトロキシジム、ブチレート、カフェンストロール、カルベタミド、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン−エチル、クロメトキシフェン、クロランベン、クロラジホップ、クロラジホップ−ブチル、クロルブロムロン、クロルブファム、クロルフェナク、クロルフェナク−ナトリウム、クロルフェンプロップ、クロルフルレノール、クロルフルレノール−メチル、クロリダゾン、クロリムロン、クロリムロン−エチル、クロルメコート−クロリド、クロルニトルフェン、クロロフタリム(chlorophthalim)、クロルタール−ジメチル、クロロトルロン、クロルスルフロン、シニドン、シニドン−エチル、シンメチリン、シノスルフロン、クレトジム、クロジナホップ、クロジナホップ−プロパルギル、クロフェンセット、クロマゾン、クロメプロップ、クロプロップ、クロピラリド、クロランスラム、クロランスラム−メチル、クミルロン、シアナミド、シアナジン、シクラニリド、シクロエート、シクロスルファムロン、シクロキシジム、シクルロン、シハロホップ、シハロホップ−ブチル、シペルコート、シプラジン、シプラゾール、2,4−D、2,4−DB、ダイムロン(daimuron)/ダイムロン(dymron)、ダラポン、ダミノジド、ダゾメット、n−デカノール、デスメジファム、デスメトリン、デトシル−ピラゾレート(DTP)、ダイアレート(diallate)、ジカンバ、ジクロベニル、ジクロルプロップ、ジクロルプロップ−P、ジクロホップ、ジクロホップ−メチル、ジクロホップ−P−メチル、ジクロスラム、ジエタチル、ジエタチル−エチル、ジフェノクスロン、ジフェンゾコート、ジフルフェニカン、ジフルフェンゾピル、ジフルフェンゾピル−ナトリウム、ジメフロン、ジケグラック−ナトリウム、ジメフロン、ジメピペレート、ジメタクロール、ジメタメトリン、ジメテナミド、ジメテナミド−P、ジメチピン、ジメトラスルフロン、ジニトラミン、ジノセブ、ジノテルブ、ジフェナミド、ジプロペトリン、ジクワット、ジクワット−ジブロミド、ジチオピル、ジウロン、DNOC、エグリナジン−エチル、エンドタール、EPTC、エスプロカルブ、エタルフルラリン、エタメツルフロン−メチル、エテホン、エチジムロン、エチオジン、エトフメセート、エトキシフェン、エトキシフェン−エチル、エトキシスルフロン、エトベンザニド、F−5331、すなわちN−[2−クロロ−4−フルオロ−5−[4−(3−フルオロプロピル)−4,5−ジヒドロ−5−オキソ−1H−テトラゾール−1−イル]フェニル]エタンスルホンアミド、フェノプロップ、フェノキサプロップ、フェノキサプロップ−P、フェノキサプロップ−エチル、フェノキサプロップ−P−エチル、フェントラザミド、フェヌロン、フラムプロップ、フラムプロップ−M−イソプロピル、フラムプロップ−M−メチル、フラザスルフロン、フロラスラム、フルアジホップ、フルアジホップ−P、フルアジホップ−ブチル、フルアジホップ−P−ブチル、フルアゾレート(fluazolate)、フルカルバゾン、フルカルバゾン−ナトリウム、フルセトスルフロン、フルクロラリン、フルフェナセット(チフルアミド(thiafluamide))、フルフェンピル、フルフェンピル−エチル、フルメトラリン、フルメツラム、フルミクロラック、フルミクロラック−ペンチル、フルミオキサジン、フルミプロピン、フルオメツロン、フルオロジフェン、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン−エチル、フルポキサム、フルプロパシル、フルプロパネート、フルピルスルフロン、フルピルスルフロン−メチル−ナトリウム、フルレノール、フルレノール−ブチル、フルリドン、フルロクロリドン、フルロキシピル、フルロキシピル−メプチル、フルルプリミドール、フルルタモン(flurtamone)、フルチアセット、フルチアセット−メチル、フルチアミド(fluthiamide)、ホメサフェン、ホラムスルフロン、ホルクロルフェニュロン、ホサミン、フリルオキシフェン(furyloxyfen)、ジベレリン酸、グルホシネート、L−グルホシネート、L−グルホシネート−アンモニウム、グルホシネート−アンモニウム、グリホセート、グリホセート−イソプロピルアンモニウム、H−9201、ハロサフェン(halosafen)、ハロスルフロン、ハロスルフロン−メチル、ハロキシホップ、ハロキシホップ−P、ハロキシホップ−エトキシエチル、ハロキシホップ−P−エトキシエチル、ハロキシホップ−メチル、ハロキシホップ−P−メチル、ヘキサジノン、HNPC−9908、HOK−201、HW−02、イマザメタベンズ、イマザメタベンズ−メチル、イマザモックス、イマザピック、イマザピル、イマザキン、イマゼタピル、イマゾスルフロン、イナベンフィド、インダノファン、インドール酢酸(IAA)、4−インドール−3−イル酪酸(IBA)、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、イオキシニル、イソカルバミド、イソプロパリン、イソプロツロン、イソウロン、イソキサベン、イソキサクロトール、イソキサフルトール、イソキサピリホップ、KUH−043、KUH−071、カルブチレート、ケトスピラドックス(ketospiradox)、ラクトフェン、レナシル、リニュロン、マレイン酸ヒドラジド、MCPA、MCPB、MCPB−メチル、−エチル及び−ナトリウム、メコプロップ、メコプロップ−ナトリウム、メコプロップ−ブトチル、メコプロップ−P−ブトチル、メコプロップ−P−ジメチルアンモニウム、メコプロップ−P−2−エチルヘキシル、メコプロップ−P−カリウム、メフェナセット、メフルイジド、メピコート−クロリド、メソスルフロン、メソスルフロン−メチル、メタベンズチアズロン、メタム、メタミホップ(metamifop)、メタミトロン、メタザクロール、メタゾール、メトキシフェノン、メチルダイムロン、1−メチルシクロプロペン、イソチオシアン酸メチル、メトベンズロン、メトブロムロン、メトラクロール、S−メトラクロール、メトスラム、メトクスロン、メトリブジン、メツルフロン、メツルフロン−メチル、モリネート、モナリド、モノカルバミド、モノカルバミド二水素硫酸塩、モノリニュロン、モノスルフロン、モニュロン、MT 128、MT−5950、すなわちN−[3−クロロ−4−(1−メチルエチル)−フェニル]−2−メチルペンタンアミド、NGGC−011、ナプロアニリド、ナプロパミド、ナプタラム、NC−310、すなわち4−(2,4−ジクロロベンゾイル)−1−メチル−5−ベンジルオキシピラゾール、ネブロン、ニコスルフロン、ニピラクロフェン、ニトラリン、ニトロフェン、ニトロフェノラト−ナトリウム(nitrophenolat sodium)(異性体混合物)、ニトロフルオルフェン、ノナン酸、ノルフルラゾン、オルベンカルブ、オルソスルファムロン、オリザリン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキサスルフロン、オキサジクロメフォン、オキシフルオルフェン、パクロブトラゾール、パラコート、パラコートジクロリド、ペラルゴン酸(ノナン酸)、ペンジメタリン、ペンドラリン(pendralin)、ペノキススラム、ペンタノクロル、ペントキサゾン、ペルフルイドン、ペトキサミド、フェニソファム、フェンメジファム、フェンメジファム−エチル、ピクロラム、ピコリナフェン、ピノキサデン、ピペロホス、ピリフェノップ、ピリフェノップ−ブチル、プレチラクロール、プリミスルフロン、プリミスルフロン−メチル、プロベナゾール、プロフルアゾール(profluazol)、プロシアジン、プロジアミン、プリフルラリン(prifluraline)、プロホキシジム(profoxydim)、プロヘキサジオン、プロヘキサジオン−カルシウム、プロヒドロジャスモン(prohydrojasmone)、プロメトン、プロメトリン、プロパクロル、プロパニル、プロパキザホップ、プロパジン、プロファム、プロピソクロール、プロポキシカルバゾン、プロポキシカルバゾン−ナトリウム、プロピザミド、プロスルファリン、プロスルホカルブ、プロスルフロン、プリナクロール、ピラクロニル、ピラフルフェン、ピラフルフェン−エチル、ピラゾリネート(ピラゾレート)、ピラゾスルフロン−エチル、ピラゾキシフェン、ピリバムベンズ(pyribambenz)、ピリバムベンズ−イソプロピル、ピリベンゾキシム、ピリブチカルブ、ピリダフォル(pyridafol)、ピリデート、ピリフタリド、ピリミノバック(pyriminobac)、ピリミノバック−メチル、ピリミスルファン、ピリチオバック、ピリチオバック−ナトリウム、ピロキサスルホン(pyroxasulfone)、ピロキシスラム(pyroxsulam)、キンクロラック、キンメラック、キノクラミン、キザロホップ、キザロホップ−エチル、キザロホップ−P、キザロホップ−P−エチル、キザロホップ−P−テフリル、リムスルフロン、サフルフェナシル、セクブメトン、セトキシジム、シデュロン、シマジン、シメトリン、SN−106279、スルファレート(CDEC)、スルフェントラゾン、スルホメツロン、スルホメツロン−メチル、スルホセート(グリホセート−トリメシウム)、スルホスルフロン、SYN−523、SYP−249、SYP−298、SYP−300、テブタム、テブチウロン、テクナゼン、テプラロキシジム、テルバシル、テルブカルブ、テルブクロル、テルブメトン、テルブチラジン、テルブトリン(terbutryne)、TH−547、テニルクロール、チアフルアミド(thiafluamide)、チアザフルロン、チアゾピル、チジアジミン、チジアズロン(thidiazuron)、チエンカルバゾン、チエンカルバゾン−メチル、チフェンスルフロン、チフェンスルフロン−メチル、チオベンカルブ、チオカルバジル、トラルコキシジム、トリアラート、トリアスルフロン、トリアジフラム(triaziflam)、トリアゾフェナミド、トリベヌロン、トリベヌロン−メチル、トリクロロ酢酸(TCA)、トリクロピル、トリジファン、トリエタジン、トリフロキシスルフロン、トリフロキシスルフロン−ナトリウム、トリフルラリン、トリフルスルフロン、トリフルスルフロン−メチル、トリメツロン、トリネキサパック、トリネキサパック−エチル、トリトスルフロン(tritosulfuron)、チトデフ、ユニコナゾール、ユニコナゾール−P、ベルノレート、ZJ−0166、ZJ−0270、ZJ−0543、ZJ−0862及び以下の化合物。
Figure 2016538300
2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩及び上記で挙げた化合物の1以上の組成物は、当業界ではまだ知られていない。
従って、本発明のさらに別の主題は、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩(成分(A))及び下位群B1からB11から選択される1以上、好ましくは一つの成分(B)を含む組成物である。
B1:1,3−ジケト化合物からなるもの[これは、以下のものを包含する:
プロヘキサジオン、プロヘキサジオン−カルシウム、トリネキサパック−エチ(ethy)、
アロキシジム、アロキシジム−ナトリウム、ブトロキシジム、クレトジム、シクロキシジム、ケトスピラドックス(ketospiradox)、プロホキシジム、セトキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、
メソトリオン、スルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、ビシクロピロン、フェンキノトリオン、SL−261、
ピノキサデン]。
B2:(スルホン)アミド類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
ベフルブタミド、ブロモブチド、ジメテナミド、ジメテナミド−P、ジフェナミド、ナプロパミド、ペトキサミド、N−[3−クロロ−4−(1−メチルエチル)−フェニル]−2−メチルペンタンアミド、
ナプタラム、プロピザミド、
ジフルフェニカン、エトベンザニド、フルフェナセット、メフェナセット、メフルイジド、ペンタノクロル、ピコリナフェン、プロパニル、N−フェニルフタルアミド酸、
アセトクロール、アラクロール、アミドクロール(amidochlor)、ブタクロール、ブテナクロール、ジメタクロール、メタザクロール、メトラクロール、S−メトラクロール、プレチラクロール、プロパクロール、プロピソクロール、(2−クロロ−6′−エチル−N−イソプロポキシメチルアセト−o−トルイジド)、テニルクロール、
アシュラム、カルバリル、カルベタミド、クロルプロファム、デスメディファム、フェンメディファム、プロファム、
ブチレート、シクロエート、ジメピペレート、EPTC、エスプロカルブ、メタスルホカルブ、モリネート、オルベンカルブ、ペブレート、プロスルホカルブ、ピリブチカルブ、チオベンカルブ、トリアラート、ベルノレート、
アミドスルフロン、アジムスルフロン、ベンスルフロン、ベンスルフロン−メチル、クロリムロン、クロリムロン−エチル、クロルスルフロン、シノスルフロン、シクロスルファムロン、エタメトスルフロン、エタメトスルフロン−メチル、エトキシスルフロン、フラザスルフロン、フルセトスルフロン、フルピルスルフロン−メチル−ナトリウム、ホラムスルフロン、ハロスルフロン−メチル、イマゾスルフロン、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、メソスルフロン、メソスルフロン−メチル、メタゾスルフロン、メチオピルスルフロン(methiopyrsulfuron)、メトスルフロン、メトスルフロン−メチル、モノスルフロン、モノスルフロン−エステル、ニコスルフロン、オルトスルファムロン、オキサスルフロン、プリミスルフロン−メチル、プロピリスルフロン、プロスルフロン、ピラスルフロン(pyrasulfuron)、ピラゾスルフロン−エチル、リムスルフロン、スルホメツロン、スルホメツロン−メチル、スルホスルフロン、チフェンスルフロン、チフェンスルフロン−メチル、トリアスルフロン、トリベヌロン、トリベヌロン−メチル、トリフロキシスルフロン、トリフロキシスルフロン(ナトリウム)、トリフルスルフロン、トリフルスルフロン−メチル、トリトスルフロン、(安息香酸、2−[[[[[4−メトキシ−6−(メチルチオ)−2−ピリミジニル]アミノ]カルボニル]アミノ]スルホニル]メチルエステル)、
フルカルバゾン、フルカルバゾン−ナトリウム、イプフェンカルバゾン、プロポキシカルバゾン、プロポキシカルバゾン−ナトリウム、チエンカルバゾン、チエンカルバゾン−メチル、
クロランスラム、クロランスラム−メチル、ジクロスラム、フロラスラム、フルメツラム、メトスラム、ペノキススラム、ピロクススラム、
3−クロロ−N−[(4,6−ジメトキシピリミジン−2−イル)カルバモイル]−1−メチル−4−(5−メチル−5,6−ジヒドロ−1,4,2−ジオキサジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−スルホンアミド]。
B3:アリールニトリル類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
ブロモキシニル、ブロモキシニル−ブチレート、ブロモキシニル−カリウム、ブロモキシニル−ヘプタノエート、ブロモキシニル−オクタノエート、デトシル−ピラゾレート(DTP)、ジクロベニル、アイオキシニル、アイオキシニル−オクタノエート、アイオキシニル−カリウム、アイオキシニル−ナトリウム、ピラクロニル]。
B4:アゾール類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
ベンゾフェナップ、ピラゾリネート(ピラゾレート)、ピラゾキシフェン、ピロキサスルホン、トプラメゾン、ピラスルホトール、トルピラレート、3−(3−クロロ−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−1−メチル−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、3−(3−ヨード−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−1−メチル−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、1−エチル−3−(3−フルオロ−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、ピラフルフェン、ピラフルフェン−エチル、フェノキサスルホン、フルアゾレート、イソウロン、イソキサベン、イソキサフルトール、イマザメタベンズ、イマザメタベンズ−メチル、イミザピック、イミザピック−アンモニウム、イマザピル、イマザピル−イソプロピル−アンモニウム、イミザキン、イミザキン−アンモニウム、イマゼタピル、イマゼタピル−アンモニウム、アザフェニジン、メタゾール、オキサジアルギル、オキサジアゾン、アミカルバゾン、ベンカルバゾン、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン−エチル、スルフェントラゾン、
アミトロール、パクロブトラゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−P、カフェンストロール、
フェントラザミド]。
B5:別の除草剤からなるもの[これは、以下のものを包含する:
アリドクロル、アミノシクロピラクロル、アミノシクロピラクロル−カリウム、アミノシクロピラクロル−メチル、N−アセチルチアゾリジン−4−カルボン酸、アクロレイン、アミノピラリド、ペラルゴン酸アンモニウム、スルファミン酸アンモニウム、アビグリシン、ベナゾリン、ベナゾリン−エチル、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンタゾン、ベンゾビシクロン、6−ベンジルアミノプリン、ホウ砂、ブラシノリド、ブロモフェノキシム、ブトルアリン、カルボン、カテキン、クロルフェナック、クロルフェナック−ナトリウム、クロルフェンプロップ、クロルフルレノール、クロルフルレノール−メチル、クロリダゾン、クロルメコートクロリド、クロロ酢酸、クロルフタリム、クロルタール−ジメチル、シニドン、シニドン−エチル、シンメチリン、クロフェンセット、クロマゾン、クロキシホナック、シアナミド、シクラニリド、シクロピリモレート、6−イソペンチルアミノプリン、キネチン、ゼアチン、ダラポン、ダミノジッド、ダゾメット、n−デカノール、ジフェンゾコートメチル硫酸塩、2,6−ジイソプロピルナフタレレン、ジケグラック、ジケグラック−ナトリウム、ジメチピン、ジメチルヒ酸、ジニトラミン、ジノテルブ、ジクワット、ジクワットジブロミド、ジチオピル、DNOC、エンドタール、エンドタール−ジカリウム、エンドタール−ジナトリウム、エンドタール−モノ(N,N−ジメチルアルキルアンモニウム)、エタフルラリン、エトフメセート、エチルクロゼート(ethylchlozate)、硫酸第一鉄、フランプロップ、フランプロップ−M−イソプロピル、フランプロップ−M−メチル、フルクロラリン、フルフェンピル、フルフェンピル−エチル、フルメトラリン、フルミクロラック、フルミクロラック−ペンチル、フルミオキサジン、フルプロパネート、フルレノール、フルレノール−ブチル、フルレノール−ジメチルアンモニウム−メチル、フルリドン、フルロクロリドン、フルルタモン、フルチアセット、フルチアセット−メチル、ジベレリン酸(gibberillic acid)、ハラウキシフェン、ハロウキシフェン−メチル、ハロウキシフェン塩類、インダノファン、イソプロパリン、イソプロチオラン、マレイン酸ヒドラジド、メピコートクロリド、メタム、メチオゾリン、メチルアルソン酸、1−メチルシクロプロペン、イソチオシアン酸メチル、ニトロフェノラート混合物、ノナン酸、ノルフルラゾン、オレイン酸、オリザリン、オキサジクロメフォン、パラコート、パラコートジクロリド、ペンディメタリン、ペンタクロロフェノール、ペントキサゾン、石油、プロジアミン、ジヒドロジャスモン酸n−プロピル、ピリダフォル、ピリデート、キノクラミン、シントフェン、塩素酸ナトリウム、硫酸、タール油類、TCA、TCAナトリウム、テクナゼン、チアゾピル、トリアコンタノール、トリアファモン、トリフルラリン及び尿素硫酸塩]。
B6:(ヘタ)アリールカルボン酸類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
クロランベン、ジカンバ、ジカンバ塩類、2,3,6−TBA、クロピラリド、フルロキシピル、フルロキシピル−メチル、イナベンフィド、ピクロラム、トリクロピル、キンクロラック、キンメラック、インドール−3−イル酢酸、4−インドール−3−イル−酪酸、2−(1−ナフチル)アセトアミド、1−ナフチル酢酸、2−ナフチルオキシ酢酸]。
B7:有機リン化合物からなるもの[これは、以下のものを包含する:
アニロホス、ベンスリド、ビラナホス、ビラナホス−ナトリウム、ブチマホス(butimafos)、クラシホス、ホサミン、グルホシネート、グルホシネート塩、グルホシネート−アンモニウム、グルホシネート−ナトリウム、グルホシネート−P、L−グルホシネート−アンモニウム、L−グルホシネート−ナトリウム、グリホセート、グリホセート塩、グリホセート−イソプロピル−アンモニウム、グリホセート−アンモニウム、グリホセート−ジメチルアンモニウム、グリホセート−トリメシウム(=スルホセート)、グリホセート−ジアンモニウム、グリホセート−カリウム、グリホセート−ナトリウム、ピペロホス、エテホン及びトリブホス]。
B8:フェニルエーテル類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
アシフルオルフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、アクロニフェン、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン−エチル、ホメサフェン、ホメサフェン−ナトリウム、ハロサフェン、ラクトフェン、オキシフルオルフェン、ビフェノックス、エトキシフェン−エチル、クロメプロップ、クロプロップ、ジクロルプロップ、ジクロルプロップ−P、メコプロップ、メコプロップ−ナトリウム、メコプロップ−ブトチル、メコプロップ−P、メコプロップ−P−ブトチル、メコプロップ−P−ジメチルアンモニウム、メコプロップ−P−2−エチルヘキシル、メコプロップ−P−カリウム、4−CPA、2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、MCPA、MCPA−ブトチル、MCPA−ジメチルアンモニウム、MCPA−2−エチルヘキシル、MCPA−イソプロピルアンモニウム、MCPA−カリウム、MCPA−ナトリウム、MCPA−チオエチル、2,4−DB、MCPB、MCPB−メチル、MCPB−エチル−ナトリウム、
クロジナホップ−エチル、クロジナホップ−プロパルギル、シハロホップ、シハロホップ−ブチル、ジクロホップ、ジクロホップ−メチル、ジクロホップ−P、ジクロホップ−P−メチル、フェノキサプロップ、フェノキサプロップ−P、フェノキサプロップ−P−エチル、フルアジホップ、フルアジホップ−ブチル、フルアジホップ−P、フルアジホップ−P−ブチル、ハロキシホップ、ハロキシホップ−P、メタミホップ、プロパキザホップ、キザロホップ(quizalafop)、キザロホップ(quizalafop)−エチル、キザロホップ(quizalafop)−P、キザロホップ(quizalafop)−P−エチル、キザロホップ(quizalafop)−P−テフリル]。
B9:ピリミジン類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
アンシミドール、フルルプリミドール、ピリミスルファン、ビスピリバック、ビスピリバック−ナトリウム、ピリベンゾキシム、ピリミノバック、ピリミノバック−メチル、ピリバムベンズ(pyribambenz)、ピリバムベンズ−イソプロピル、ピリバムベンズ−プロピル、ピリフタリド、ピリチオバック、ピリチオバック−ナトリウム、ベンズフェンジゾン、ブロマシル、ブタフェナシル、レナシル、サフルフェナシル、ターバシル、チアフェナシル、2−クロロ−4−フルオロ−5−[3−メチル−2,6−ジオキソ−4−(トリフルオロメチル)−3,6−ジヒドロピリミジン−1(2H)−イル]−N−[メチル(1−メチルエチル)スルファモイル]ベンズアミド、[(3−{2−クロロ−5−[2,6−ジオキソ−4−(トリフルオロメチル)−3,6−ジヒドロピリミジン−1(2H)−イル]−4−フルオロフェノキシ}ピリジン−2−イル)オキシ]酢酸エチル]。
B10:(チオ)尿素類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
クミルロン、クロルブロムロン、クロロトルロン、クロロクスロン、ダイムロン、ジフルフェンゾピル、ジフルフェンゾピル−ナトリウム、ジメフロン、ジウロン、フルオメツロン、ホルクロルフェニュロン、イソプロツロン、カルブチレート、リニュロン、メチルダイムロン、メトブロムロン、メトクスロン、モノリニュロン、ネブロン、シデュロン、テルブカルブ、チジアズロン、メチウロン、テブチウロン、メタベンズチアズロン]。
B11:トリアジン類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
トリアジフラム、インダジフラム、アトラジン、シアナジン、シプラジン、プロパジン、シマジン、テルブメトン、テルブチラジン、トリエタジン、プロメトン、アメトリン、ジメタメトリン、プロメトリン、シメトリン、テルブトリン、エトジン(ethozin)、ヘキサジノン、メタミトロン、メトリブジン、トリフルジモキサジン(trifludimoxazin)]。
さらなる実施形態では、これらの除草剤組成物は、
ベノキサコール(C1)、クロキントセット−メキシル(C2)、シプロスルファミド(C3)、ジクロルミド(C4)、フェンクロリム(C5)、フェンクロラゾール(C6)、フリラゾール(C7)、イソキサジフェン−エチル(C8)、メフェンピル−ジエチル(C9)、CAS 71526−07−3の4−(ジクロロアセチル)−1−オキサ−4−アザスピロ[4.5]デカン(C10)、CAS 52836−31−4の2,2,5−トリメチル−3−(デクロロアセチル)−1,3−オキサゾリジン(C11)、CAS 129531−12−0の2−メトキシ−N−({4−[(メチルカルバモイル)アミノ]フェニル}スルホニル)ベンズアミド(C12)
からなる群から選択される1種類以上の薬害軽減剤(成分C)を含んでいる。
成分(B)及び成分(C)は、例えば、「“The Pesticide Manual”, 15th edition, The British Crop Protection Council and the Royal Soc. of Chemistry」から、そしてウェブサイトhttp://www.alanwood.net/pesticides/から知られている。
これら本発明の組成物のいずれも、別のさらなる成分、例えば他の種類の作物保護有効成分及び/又は作物保護で一般的な添加剤及び/又は製剤補助剤を含むことができるか、それらと一緒に用いることができる。
成分(A)、成分(B)及び、場合により、薬害軽減剤(成分(C))は、既知方法で、例えば、一緒に(例えば、共製剤(co−formulation)として、又は、タンクミックスとして)、又は、短い間隔で連続して異なった時間に(分割施用(splitting))、例えば、当該植物、植物の部分、植物の種子又は当該植物が成育している場所に施用することができる。例えば、当該個々の有効成分又は当該除草剤−薬害軽減剤組合せを、幾つかの部分に分けて(体系処理)、例えば、発生前施用とその後の発生後施用、又は、早期発生後施用とその後の中間段階若しくは後期段階における発生後施用などで、施用することが可能である。好ましいのは、それぞれの組合せにおける有効成分を、共同で施用するか、又は、直ぐに続けて施用することである。当該個々の活性化合物又は除草剤−薬害軽減剤組合せを種子処理に使用することも可能である。
好ましいものは、成分(A)として(2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドを含む本発明による組成物である。
下位群B1から選択される好ましい成分(B)は、クレトジム、メソトリオン、スルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン及びビシクロピロンである。
下位群B1から選択される特に好ましい成分(B)は、クレトジム、メソトリオン、ビシクロピロン及びテンボトリオンである。
下位群B1から選択される特別に好ましい成分(B)は、ビシクロピロン及びテンボトリオンである。
下位群B2から選択される好ましい成分(B)は、アセトクロール、ジクロスラム、ジフルフェニカン、フルメツラム、ホラムスルフロン、ニコスルフロン、S−メトラクロール、チエンカルバゾン−メチル、ジメテナミド−P、リムスルフロン、アラクロール、クロリムロン−エチル、フロラスラム、フルカルバゾン−ナトリウム、フルフェナセット、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、エトキシスルフロン、イプフェンカルバゾン、メトスルフロン−メチル、プロポキシカルバゾン−ナトリウム及びトリベヌロン−メチルである。
下位群B2から選択される特に好ましい成分(B)は、アセトクロール、ジクロスラム、ジフルフェニカン、ホラムスルフロン、ニコスルフロン、S−メトラクロール、チエンカルバゾン−メチル、ジメテナミド−P、リムスルフロン、アラクロール、クロリムロン−エチル、フロラスラム、フルカルバゾン−ナトリウム、フルフェナセット及びヨードスルフロン−メチル−ナトリウムである。
下位群B2から選択される最も好ましい成分(B)は、アセトクロール、ジクロスラム、ジフルフェニカン、ホラムスルフロン、ニコスルフロン、S−メトラクロール及びチエンカルバゾン−メチルである。
下位群B3から選択される好ましい成分(B)は、ブロモキシニル及びアイオキシニルである。
群B3の特に好ましい除草剤は、ブロモキシニルである。
下位群B4から選択される好ましい成分(B)は、アミカルバゾン、カルフェントラゾン−エチル、イマザピル、イマゼタピル、イソキサフルトール、オキサジアルギル、オキサジアゾン、ピラスルホトール、ピロキサスルホン及びトプラメゾンである。
群B4の特に好ましい除草剤は、カルフェントラゾン−エチル、イマザピル、イマゼタピル、イソキサフルトール、オキサジアルギル、オキサジアゾン及びピロキサスルホンである。
群B4の特別に好ましい除草剤は、イマザピル、イソキサフルトール及びピロキサスルホンである。
下位群B5から選択される好ましい成分(B)は、パラコートジクロリド、ペンディメタリン、アミノピラリド、フルミオキサジン、フルルタモン、ハラウキシフェン、ハラウキシフェン−メチル、ハラウキシフェン塩類、ピリデート、ベンタゾン、シニドン−エチル、クロマゾン及びトリフルラリンである。
群B5の特に好ましい除草剤は、パラコートジクロリド、ペンディメタリン、アミノピラリド、フルミオキサジン、フルルタモン、ハラウキシフェン、ハラウキシフェン−メチル、ハラウキシフェン塩類及びピリデートである。
下位群B5から選択される特別に好ましい成分(B)は、パラコートジクロリド及びペンディメタリンである。
下位群B6から選択される好ましい成分(B)は、ジカンバ、ジカンバ塩類及びフルロキシピルである。
下位群B6から選択される特に好ましい成分(B)は、ジカンバ及びジカンバ塩類である。
下位群B6から選択される特別に好ましい成分(B)は、ジカンバである。
下位群B7から選択される好ましい成分(B)は、グルホシネート、グルホシネート−アンモニウム、L−グルホシネート−アンモニウム、グリホセート、グリホセート−イソプロピル−アンモニウムである。
下位群B7から選択される特に好ましい成分(B)は、グルホシネート−アンモニウム及びグリホセートである。
下位群B7から選択される特別に好ましい成分(B)は、グルホシネート−アンモニウム及びグリホセートである。
下位群B8から選択される好ましい成分(B)は、2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、フェノキサプロップ−P−エチル、ラクトフェン、フルアジホップ−P−ブチル、アクロニフェン及びハロキシホップ−Pである。
下位群B8から選択される特に好ましい成分(B)は、2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、フェノキサプロップ−P−エチル、ラクトフェン及びフルアジホップ−P−ブチルである。
下位群B8から選択される特別に好ましい成分(B)は、2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、フェノキサプロップ−P−エチル及びラクトフェンである。
下位群B9から選択される好ましい成分(B)は、サフルフェナシルである。
下位群B10から選択される好ましい成分(B)は、ジウロン、ジフルフェンゾピル及びフルオメツロンである。
下位群B10から選択される特に好ましい成分(B)は、ジウロン及びジフルフェンゾピルである。
下位群B10から選択される特別に好ましい成分(B)は、ジウロンである。
下位群B11から選択される好ましい成分(B)は、アトラジン、インダジフラム、テルブチラジン及びメトリブジンである。
本発明による除草剤組成物において、(2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド成分(A)又はそれの塩の除草剤の施用量は、通常は1から500gの有効成分(a.i.)/ヘクタール、好ましくは2から300gのa.i./ha、特に好ましくは3から200gのa.i./haである。成分(B)の施用量は、通常は1から5000gの有効成分/ヘクタール、好ましくは2から3000gのa.i./ha、特に好ましくは3から2000gのa.i./haである。薬害軽減剤(成分(C))の施用量は、通常は1から500gの有効成分/ヘクタール、好ましくは2から400gのa.i./ha、特に好ましくは3から300gのa.i./haである。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むHPPD耐性植物が成長している区域に施用される2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の必要な施用量は、温度、湿度、使用される除草剤の性質などの外部条件に応じて変動する。それは広い範囲内で変動し得るものであり、例えば0.001から1.0kg/ha以上の活性物質であるが、好ましくはそれは0.005から750g/haである。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むHPPD耐性植物に対して、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド若しくはそれの塩と2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド若しくはそれの塩とは異なる除草剤との組み合わせ施用を行う場合、これらの混合物は、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩とは異なる除草剤の存在によって作物に被害をもたらす可能性がある。そのような作物被害を低減/排除するために、適切な薬害軽減剤を加えてもよい。これらの薬害軽減剤は解毒的に活性な量で用いられ、例えば穀類(コムギ、オオムギ、ライムギ、トウモロコシ、イネ、キビ)、アルファルファ、サトウダイコン、サトウキビ、アブラナ、ワタ及びダイズ類、好ましくは、トウモロコシ、ワタ、サトウダイコン又はダイズ類などの経済的に重要な作物において、使用される除草剤/農薬の植物毒性副作用を低減する。
薬害軽減剤は好ましくは、下記のものからなる群から選択される。
A)式(S−1)の化合物:
Figure 2016538300
[記号及び指数は下記の意味を有し、
は0から5、好ましくは0から3の自然数であり;
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、ニトロ又は(C−C)−ハロアルキルであり;
は、N及びO型の1から3個のヘテロ環原子を有する部分不飽和若しくは芳香族の5員複素環からなる群からの置換されていないか置換されている2価複素環基であり、その環には少なくとも1個の窒素原子及び最大で1個の酸素原子が存在し、好ましくは下記の(W )から(W ):
Figure 2016538300
からなる群からの基であり;
は0又は1であり;
は、OR 、SR 若しくはNR 又は好ましくはO及びSからなる群からの少なくとも1個の窒素原子及び3個以下のヘテロ原子を有する飽和若しくは不飽和の3から7員複素環(それは窒素原子を介して(S−1)におけるカルボニル基に結合しており、置換されていないか(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ及び置換されていても良いフェニルからなる群からの基によって置換されている。)、好ましくは式OR 、NHR 又はN(CHの基、特には式OR の基であり;
は、水素又は好ましくは合計で1から18個の炭素原子を有する置換されていないか置換されている脂肪族炭化水素基であり;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ又は置換されている又は置換されていないフェニルであり;
は、H、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−アルコキシ−(C−C)−アルキル、シアノ又はCOOR であり、R は水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−アルコキシ−(C−C)−アルキル、(C−C)−ヒドロキシアルキル、(C−C12)−シクロアルキル又はトリ−(C−C)−アルキルシリルであり;
、R 、R は同一であるか異なっており、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C12)−シクロアルキル又は置換されているか置換されていないフェニルである。];
好ましくは:
a)ジクロロフェニルピラゾリン−3−カルボン酸型の化合物、好ましくは1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−(エトキシカルボニル)−5−メチル−2−ピラゾリン−3−カルボン酸エチル(S1−1)(「メフェンピル−ジエチル」、Pestic. Man.参照)などの化合物、及びWO91/07874に記載の関連化合物;
b)ジクロロフェニルピラゾールカルボン酸の誘導体、好ましくは1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−メチルピラゾール−3−カルボン酸エチル(S1−2)、1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−イソプロピルピラゾール−3−カルボン酸エチル(S1−3)、1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−(1,1−ジメチルエチル)ピラゾール−3−カルボン酸エチル(S1−4)、1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−フェニルピラゾール−3−カルボン酸エチル(S1−5)などの化合物及びEP−A−333131及びEP−A−269806に記載の関連化合物;
c)トリアゾールカルボン酸型の化合物、好ましくはフェンクロラゾール(エチルエステル)、すなわち1−(2,4−ジクロロフェニル)−5−トリクロロメチル−(1H)−1,2,4−トリアゾール−3−カルボン酸エチル(S1−6)などの化合物、及びEP−A−174562及びEP−A−346620に記載の関連化合物;
d)5−ベンジル−若しくは5−フェニル−2−イソオキサゾリン−3−カルボン酸型又は5,5−ジフェニル−2−イソオキサゾリン−3−カルボン酸型の化合物、好ましくは5−(2,4−ジクロロベンジル)−2−イソオキサゾリン−3−カルボン酸エチル(S1−7)又は5−フェニル−2−イソオキサゾリン−3−カルボン酸エチル(S1−8)などの化合物及びWO91/08202に記載の関連化合物、又は特許出願WO95/07897に記載の5,5−ジフェニル−2−イソオキサゾリンカルボン酸エチル(S1−9)(「イソキサジフェン−エチル」)若しくは5,5−ジフェニル−2−イソオキサゾリンカルボン酸n−プロピル(S1−10)若しくは5−(4−フルオロフェニル)−5−フェニル−2−イソオキサゾリン−3−カルボン酸エチル(S1−11)。
B)下記式(S−II)のキノリン誘導体:
Figure 2016538300
[式中、記号及び指数は下記の意味を有し、
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、ニトロ又は(C−C)−ハロアルキルであり;
は、0から5、好ましくは0から3の自然数であり;
は、OR 、SR 若しくはNR 又は好ましくはO及びSからなる群からの少なくとも1個の窒素原子及び3個以下のヘテロ原子を有する飽和若しくは不飽和の3から7員複素環(それは窒素原子を介して(S−II)におけるカルボニル基に結合しており、置換されていないか(C−C)アルキル、(C−C)アルコキシ若しくは置換されていても良いフェニルからなる群からの基によって置換されている。)、好ましくは式OR 、NHR 又はN(CHの基、特には式OR の基であり;
は、水素又は好ましくは合計で1から18個の炭素原子を有する置換されていないか置換されている脂肪族炭化水素基であり;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ又は置換されている又は置換されていないフェニルであり;
は、置換されていないか1個若しくは2個の(C−C)−アルキル基又は[(C−C)−アルコキシ]カルボニルによって置換されている(C又はC)−アルカンジイル鎖である。];
好ましくは、
a)8−キノリンオキシ酢酸型の化合物(S2)、好ましくは(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸1−メチルヘキシル(一般名「クロキントセット−メキシル」、S2−1)(Pestic. Man.参照)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸1,3−ジメチルブト−1−イル(S2−2)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸4−アリルオキシブチル(S2−3)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸1−アリルオキシプロプ−2−イル(S2−4)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸エチル(S2−5)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸メチル(S2−6)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸アリル(S2−7)、
(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸2−(2−プロピリデンイミノキシ)−1−エチル(S2−8)、(5−クロロ−8−キノリンオキシ)酢酸2−オキソプロプ−1−イル(S2−9)及びEP−A−86750、EP−A−94349及びEP−A−191736又はEP−A−0492366に記載の関連化合物、さらにはWO−A−2002/034048に記載のそれらの水和物及び塩;
b)(5−クロロ−8−キノリンオキシ)マロン酸型の化合物、好ましくは(5−クロロ−8−キノリンオキシ)マロン酸ジエチル、(5−クロロ−8−キノリンオキシ)マロン酸ジアリル、(5−クロロ−8−キノリンオキシ)マロン酸メチルエチルなどの化合物及びEP−A−0582198に記載の関連化合物。
C)下記式(S−III)の化合物:
Figure 2016538300
[式中、記号及び指数は下記の意味を有し、
は、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−ハロアルケニル、(C−C)−シクロアルキル、好ましくはジクロロメチルであり;
C2、R は同一であるか異なっており、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−アルキニル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−ハロアルケニル、(C−C)−アルキルカルバモイル−(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニルカルバモイル−(C−C)アルキル、(C−C)−アルコキシ−(C−C)−アルキル、ジオキソラニル−(C−C)−アルキル、チアゾリル、フリル、フリルアルキル、チエニル、ピペリジル、置換されている又は置換されていないフェニルであり、又はRC2及びR が一体となって、置換されている又は置換されていない複素環、好ましくはオキサゾリジン、チアゾリジン、ピペリジン、モルホリン、ヘキサヒドロピリミジン又はベンゾオキサジン環を形成している。]、
好ましくは:
発芽前薬害軽減剤(土壌作用性薬害軽減剤)として使用されるジクロロアセトアミド型の活性化合物、例えば、
「ジクロルミド」(Pestic. Man.参照)(=N,N−ジアリル−2,2−ジクロロアセトアミド)、
Staufferからの「R−29148」(=3−ジクロロアセチル−2,2,5−トリメチル−1,3−オキサゾリジン)、
Staufferからの「R−28725」(=3−ジクロロアセチル−2,2−ジメチル−1,3−オキサゾリジン)、
「ベノキサコール」(Pestic. Man.参照)(=4−ジクロロアセチル−3,4−ジヒドロ−3−メチル−2H−1,4−ベンゾオキサジン)、
PPG Industriesからの「PPG−1292」(=N−アリル−N−[(1,3−ジオキソラン−2−イル)メチル]ジクロロアセトアミド)、
Sagro−Chemからの「DKA−24」(=N−アリル−N−[(アリルアミノカルボニル)メチル]ジクロロアセトアミド)、
Nitrokemia又はMonsantoからの「AD−67」又は「MON4660」(=3−ジクロロアセチル−1−オキサ−3−アザスピロ[4.5]デカン)、
TRI−Chemical RTからの「TI−35」(=1−ジクロロアセチルアゼパン)、
「ジクロノン(diclonon)」(ジシクロノン(dicyclonone))又はBASFからの「BAS145138」又は「LAB145138」(=3−ジクロロアセチル−2,2,5−トリメチル−1,3−ジアザビシクロ[4.3.0]ノナン)、
「フリラゾール(furilazole)」又は「MON13900」(Pestic. Man.参照)(=(RS)−3−ジクロロアセチル−5−(2−フリル)−2,2−ジメチルオキサゾリジン)。
D)下記式(S−IV)のN−アシルスルホンアミド類及びそれの塩。
Figure 2016538300
[式中、
はCH又はNであり;
はCO−NR 又はNHCO−R であり;
は、ハロゲン、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−ハロアルコキシ、ニトロ、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、(C−C)−アルキルスルホニル、(C−C)−アルコキシカルボニル又は(C−C)−アルキルカルボニルであり;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニル又は(C−C)−アルキニルであり;
は、ハロゲン、ニトロ、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−ハロアルコキシ、(C−C)−シクロアルキル、フェニル、(C−C)−アルコキシ、シアノ、(C−C)−アルキルチオ、(C−C)−アルキルスルフィニル、(C−C)−アルキルスルホニル、(C−C)−アルコキシカルボニル又は(C−C)−アルキルカルボニルであり;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−シクロアルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−アルキニル、(C−C)−シクロアルケニル、フェニル又は窒素、酸素及び硫黄からなる群からのv個のヘテロ原子を含む3から6員複素環であり、最後に挙げた7種類の基は、ハロゲン、(C−C)−アルコキシ、(C−C)−ハロアルコキシ、(C−C)−アルキルスルフィニル、(C−C)−アルキルスルホニル、(C−C)−シクロアルキル、(C−C)−アルコキシカルボニル、(C−C)−アルキルカルボニル及びフェニル、そして環状基の場合にはさらに(C−C)−アルキル及び(C−C)−ハロアルキルからなる群からのv個の置換基によって置換されており;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニル又は(C−C)−アルキニルであり、最後に挙げた3種類の基はハロゲン、ヒドロキシル、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ及び(C−C)−アルキルチオからなる群からのv個の基によって置換されており、又は
及びR がそれらが有する窒素原子とともに、ピロリジニル又はピペリジニル基を形成しており;
は、水素、(C−C)−アルキルアミノ、ジ−(C−C)−アルキルアミノ、(C−C)−アルキル、(C−C)−シクロアルキルであり、最後に挙げた2種類の基はハロゲン、(C−C)−アルコキシ、ハロゲン−(C−C)−アルコキシ及び(C−C)−アルキルチオ、そしてさらに環状基の場合には(C−C)−アルキル及び(C−C)−ハロアルキルからなる群からのv個の置換基によって置換されており;
は0、1又は2であり;
は1又は2であり;
は0、1、2又は3である。]。
これらのうち、好ましいものは、N−アシルスルホンアミド型の化合物、例えばWO97/45016から公知である下記の式(S−V)の化合物:
Figure 2016538300
[式中、
は、(C−C)−アルキル、(C−C)−シクロアルキルであり、最後に挙げた2種類の基は、ハロゲン、(C−C)−アルコキシ、ハロゲン−(C−C)−アルコキシ及び(C−C)−アルキルチオ、そして環状基の場合はさらに(C−C)−アルキル及び(C−C)−ハロアルキルからなる群からのv個の置換基によって置換されており;
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、CFであり;
は1又は2であり;
は0、1、2又は3である。]
及び
例えばWO99/16744から公知である下記式(S−VI)のアシルスルファモイルベンズアミド類:
Figure 2016538300
例えば、
=シクロプロピル及び(R )=2−OMe(「シプロスルファミド」、S3−1)、
=シクロプロピル及び(R )=5−Cl−2−OMe(S3−2)、
=エチル及び(R )=2−OMe(S3−3)、
=イソプロピル及び(R )=5−Cl−2−OMe(S3−4)及び
=イソプロピル及び(R )=2−OMe(S3−5)
であるもの、
及び
例えばEP−A−365484から公知である式(S−VII)のN−アシルスルファモイルフェニル尿素型の化合物:
Figure 2016538300
[式中、
及びR は互いに独立に、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−シクロアルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−アルキニルであり、
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、CFであり、
は1又は2である。];
これらの中では特に、
1−[4−(N−2−メトキシベンゾイルスルファモイル)フェニル]−3−メチル尿素、
1−[4−(N−2−メトキシベンゾイルスルファモイル)フェニル]−3,3−ジメチル尿素、
1−[4−(N−4,5−ジメチルベンゾイルスルファモイル)フェニル]−3−メチル尿素。
G)ヒドロキシ芳香族及び芳香族−脂肪族カルボン酸誘導体の種類からの活性化合物、例えばWO2004084631、WO2005015994、WO2005016001に記載の3,4,5−トリアセトキシ安息香酸エチル、3,5−ジメトキシ−4−ヒドロキシ安息香酸、3,5−ジヒドロキシ安息香酸、4−ヒドロキシサリチル酸、4−フルオロサリチル酸、1,2−ジヒドロ−2−オキソ−6−トリフルオロメチルピリジン−3−カルボキサミド、2−ヒドロキシ桂皮酸、2,4−ジクロロ桂皮酸。
H)1,2−ジヒドロキノキザリン−2−オンの種類からの活性化合物、例えばWO2005112630に記載の
1−メチル−3−(2−チエニル)−1,2−ジヒドロキノキザリン−2−オン、
1−メチル−3−(2−チエニル)−1,2−ジヒドロキノキザリン−2−チオン、
1−(2−アミノエチル)−3−(2−チエニル)−1,2−ジヒドロキノキザリン−2−オン塩酸塩、
1−(2−メチルスルホニルアミノエチル)−3−(2−チエニル)−1,2−ジヒドロキノキザリン−2−オン。
I)有害植物に対する除草作用の他に、イネなどの作物において薬害軽減剤作用も有する活性化合物、例えば、
「ジメピペレート」又は「MY−93」(Pestic. Man.参照)(=ピペリジン−1−チオカルボン酸S−1−メチル−1−フェニルエチル)(イネの除草剤モリネートによる損傷に対する薬害軽減剤として知られている)、
「ダイムロン」又は「SK23」(Pestic. Man.参照)(=1−(1−メチル−1−フェニルエチル)−3−p−トリル尿素)(イネの除草剤イマゾスルフロンによる損傷に対する薬害軽減剤として知られている)、
「クミルロン」=「JC−940」(=3−(2−クロロフェニルメチル)−1−(1−メチル−1−フェニル−エチル)尿素(JP−A−60087254参照、イネの多くの除草剤による損傷に対する薬害軽減剤として知られている)、
「メトキシフェノン」又は「NK049」(=3,3′−ジメチル−4−メトキシベンゾフェノン)(イネの多くの除草剤による損傷に対する薬害軽減剤として知られている)、
「CSB」(=1−ブロモ−4−(クロロメチルスルホニル)ベンゼン)(CAS登録番号54091−06−4、Kumiai社)(イネの多くの除草剤による損傷に対する薬害軽減剤として知られている)。
K)WO−A−1998/38856に記載の下記式(S−IX)の化合物:
Figure 2016538300
[式中、記号及び指数は下記の意味を有し、
、R は、互いに独立に、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルコキシ、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−アルキルアミノ、ジ−(C−C)−アルキルアミノ、ニトロであり;
は、COOR 又はCOOR であり;
、R は、互いに独立に、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−アルキニル、シアノアルキル、(C−C)−ハロアルキル、フェニル、ニトロフェニル、ベンジル、ハロベンジル、ピリジニルアルキル又はアルキルアンモニウムであり;
は、0又は1であり;
、n は、互いに独立して、0、1又は2である。]、
好ましくは、(ジフェニルメトキシ)酢酸メチル(CAS登録番号41858−19−9)。
L)WO A−98/27049に記載の下記式(S−X)の化合物:
Figure 2016538300
[式中、記号及び指数は下記の意味を有し、
は、CH又はNであり;
は、
X=Nである場合、0から4の整数であり、
X=CHである場合、0から5の整数であり;
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、(C−C)−ハロアルキル、(C−C)−アルコキシ、(C−C)−ハロアルコキシ、ニトロ、(C−C)−アルキルチオ、(C−C)−アルキルスルホニル、(C−C)−アルコキシカルボニル、置換されていても良いフェニル、置換されていても良いフェノキシであり;
は、水素又は(C−C)−アルキルであり;
は、水素、(C−C)−アルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−アルキニル又はアリールであり、ここで、上記の炭素含有基の各々は、置換されていないか1個以上の、好ましくは3個以下のハロゲン及びアルコキシからなる群からの同一若しくは異なる基により置換されている。];又はその塩。
M)3−(5−テトラゾリルカルボニル)−2−キノロン類の活性化合物、例えば、
1,2−ジヒドロ−4−ヒドロキシ−1−エチル−3−(5−テトラゾリルカルボニル)−2−キノロン(CAS登録番号219479−18−2)、1,2−ジヒドロ−4−ヒドロキシ−1−メチル−3−(5−テトラゾリルカルボニル)−2−キノロン(CAS登録番号95855−00−8)(WO−A−1999000020に記載)。
N)WO−A−2007023719及びWO−A−2007023764に記載の下記式(S−XI)又は(S−XII)の化合物:
Figure 2016538300
[式中、
は、ハロゲン、(C−C)−アルキル、メトキシ、ニトロ、シアノ、CF、OCFであり;
Y、Zは、互いに独立に、O又はSであり;
は、0から4の整数であり;
は、(C−C16)−アルキル、(C−C)−アルケニル、(C−C)−シクロアルキル、アリール、ベンジル、ハロベンジルであり;
は、水素、(C−C)アルキルである。]。
O)
1,8−ナフタル酸無水物、
ジチオリン酸O,O−ジエチルS−2−エチルチオエチル(ジスルホトン)、
メチル4−クロロフェニルカーバメート(メフェナート)、
チオリン酸O,O−ジエチルO−フェニル(ジエトラート)、
4−カルボキシ−3,4−ジヒドロ−2H−1−ベンゾピラン−4−酢酸(CL−304415、CAS登録番号31541−57−8)、
1−オキサ−4−アザスピロ[4.5]デカン−4−カルボジチオ酸2−プロペニル(MG−838、CAS登録番号133993−74−5)、
[(3−オキソ−1H−2−ベンゾチオピラン−4(3H)−イリデン)メトキシ]酢酸メチル(WO−A−98/13361より;CAS登録番号205121−04−6)、
シアノメトキシイミノ(フェニル)アセトニトリル(シオメトリニル)、
1,3−ジオキソラン−2−イルメトキシイミノ(フェニル)アセトニトリル(オキサベトリニル)、
4′−クロロ−2,2,2−トリフルオロアセトフェノンO−1,3−ジオキソラン−2−イルメチルオキシム(フルキソフェニム)、
4,6−ジクロロ−2−フェニルピリミジン(フェンクロリム)、
2−クロロ−4−トリフルオロメチル−1,3−チアゾール−5−カルボン酸ベンジル(フルラゾール)、
2−ジクロロメチル−2−メチル−1,3−ジオキソラン(MG−191)
からなる群からの1以上の化合物(立体異性体を含む)及び農業で一般的な塩。
殺菌剤、殺虫剤、殺ダニ剤、殺線虫剤、鳥忌避剤、植物栄養剤及び土壌改良剤などの他の公知の活性化合物と組み合わせて、(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むトランスジェニック植物に施用される2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の混合物も同様に可能である。
一部の薬害軽減剤がすでに除草剤として知られていることから、有害植物に対する除草作用の他に、さらに作物に保護作用を示す。除草剤(混合物)の薬害軽減剤に対する重量比は、一般的に、除草剤施用量及び対象の薬害軽減剤の有効性によって決まるものであり、広い範囲で変動させることができ、例えば、200:1から1:200、好ましくは100:1から1:100、特には20:1から1:20の範囲である。薬害軽減剤は、式(I)の化合物又はそれの混合物と同様に、他の除草剤/農薬と共に製剤してもよく、そして、最終製剤又は除草剤とのタンクミックスとして提供及び使用することができる。
(I)(a)カラスムギ属、好ましくはカラスムギ(Avena sativa)、より好ましくは配列番号2によって定義されるHPPDをコードする配列番号1と同一のDNA配列を含むもの、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、好ましくは蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)、より好ましくは配列番号4によって定義されるHPPDをコードする配列番号3と同一のDNA配列を含むもの、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、好ましくはシネココッカス(Synechococcus)属種、より好ましくは配列番号7によって定義されるHPPDをコードする配列番号6と同一のDNA配列を含むもの、(d)アミカ(Blepharismidae)、好ましくはブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)、より好ましくは配列番号9によって定義されるHPPDをコードする配列番号8と同一のDNA配列を含むもの、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、好ましくはロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro03041、より好ましくは配列番号11によって定義されるHPPDをコードする配列番号10と同一のDNA配列又はロドコッカス(Rhodococcus)属種(RHA1株)、分離株ro02040、より好ましくは配列番号13によって定義されるHPPDをコードする配列番号12と同一のDNA配列を含むもの、(f)ピクロフィルス科(Picrophilaceae)、好ましくはピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)、より好ましくは配列番号15によって定義されるHPPDをコードする配列番号14と同一のDNA配列を含むもの、(g)コルディア(Kordia)、好ましくはコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)、より好ましくは配列番号17によって定義されるHPPDをコードする配列番号16と同一のDNA配列を含むものからなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列を含む、又は(II)前記で定義の生物、好ましくはWO2010/085705、US6,245,968、WO2009/144079、WO2011/076877、WO2011/076882、WO2011/076892、WO2011/076885、WO2011/076889、WO2012/021785に記載の変異体のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、後者によれば、より特別にはトウモロコシ(Zea mays)又はダイズ(Glycine max)から得られるHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列を含む、又は(III)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換及び位置336のG(Gly)→W(Trp)置換(PfHPPDEvo33と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号6下に開示されており、本願では配列番号254下に開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(PfHPPDEvo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号8下に開示されており、本願では配列番号275下に開示されている)を含む、若しくは(iii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号296下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(IV)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→S(Ser)置換及び位置356のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi428H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号55下で開示されており、本願においては配列番号32下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(V)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置342のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi305H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号51下で開示されており、本願においては配列番号40下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置337のE(Glu)→P(Pro)置換、位置338のG(Gly)→W(Trp)置換、位置341のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置342のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi305H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号52下で開示されており、本願においては配列番号41下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)株ATX22717HPPDタンパク質の変異配列を含む、又は(VI)PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に記載の変異DNA配列、より具体的には(i)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→S(Ser)置換、及び位置340のA(Ala)→E(Glu)置換(Axmi309H−Evo40と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)においては配列番号53下で開示されており、本願においては配列番号36下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含む、(ii)位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むそのようなトランスジェニック植物の区域への2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の必要な施用量は、特には外的条件、例えば温度、湿度及び使用される除草剤の種類に応じて変わるものである。それは、広い範囲内で変動し得るものであり、例えば0.001から10000g/ha又はそれ以上の活性物質が、好ましくは、0.5から5000g/ha、特に好ましくは0.5から1000g/ha、非常に特に好ましくは0.5から500g/haである。
配列表
配列番号1:大腸菌細胞における発現に至適化されたカラスムギ(Avena sativa)HPPDをコードする核酸配列
配列番号2:配列番号1によってコードされたタンパク質
配列番号3:位置336で変異した蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDをコードする核酸配列;変異Gly→Trp(Pfw336)
配列番号4:配列番号3によってコードされたタンパク質(PfHPPD336W)
配列番号5:位置336で変異した蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDをコードする核酸配列;変異Gly→Trp;ダイズ及びワタでの発現に至適化されたもの
配列番号6:シネココッカス(Synechococcus)属種HPPDをコードする核酸配列
配列番号7:配列番号6によってコードされたタンパク質
配列番号8:ブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)HPPDをコードする核酸配列(FMP37)
配列番号9:配列番号8によってコードされたタンパク質
配列番号10:ロドコッカス(Rhodococcus)属種(株RHA1)、分離株ro03041HPPDをコードする核酸配列(FMP22)
配列番号11:配列番号10によってコードされたタンパク質
配列番号12:ロドコッカス(Rhodococcus)属種(株RHA1)、分離株ro02040HPPDをコードする核酸配列
配列番号13:配列番号12によってコードされたタンパク質
配列番号14:ピクロフィルス・トリズス(Picrophilus torridus)HPPDをコードする核酸配列
配列番号15:配列番号14によってコードされたタンパク質
配列番号16:コルディア・アルギシダ(Kordia algicida)HPPDをコードする核酸配列(FMP27)
配列番号17:配列番号16によってコードされたタンパク質
配列番号18:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたシネココッカス(Synechococcus)属種HPPDをコードする核酸配列
配列番号19:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたブレファリスマ・ジャポニクム(Blepharisma japonicum)HPPDをコードする核酸配列
配列番号20:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたロドコッカス(Rhodococcus)属種(株RHA1)、分離株ro0341HPPDをコードする核酸配列
配列番号21:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたロドコッカス(Rhodococcus)属種(株RHA1)、分離株ro0240HPPDをコードする核酸配列
配列番号22:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたピクロフィルス・トリズス(Picropphilus torridus)HPPDをコードする核酸配列
配列番号23:ダイズ及びワタでの発現に至適化されたコルディア・アルギシダ(Kordia algicida)HPPDをコードする核酸配列
配列番号24:蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDをコードする核酸配列(PfHPPD−Evo33)
位置335で変異、変異Glu→Pro;
位置336で変異;変異Gly→Trp
配列番号25:配列番号24によってコードされるタンパク質
配列番号26:蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDをコードする核酸配列PfHPPD−Evo40)
位置335で変異、変異Glu→Pro、
位置336で変異、変異Gly→Ser、
位置340で変異、変異Ala→Glu
配列番号27:配列番号26によってコードされるタンパク質
配列番号28:蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDをコードする核酸配列(PfHPPD−Evo41)
位置335で変異、変異Glu→Pro、
位置336で変異、変異Gly→Trp、
位置339で変異、変異Lys→Ala、
位置340で変異、変異Ala→Gln
配列番号29:配列番号28によってコードされるタンパク質
配列番号30:シュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))テストステロンAxmi428H HPPDをコードする核酸配列
配列番号31:配列番号30によってコードされるタンパク質
配列番号32:シュードモナス(Pseudomons)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)Axmi428H HPPDのタンパク質配列(Axmi428−Evo40)
位置351で変異、変異Glu→Pro、
位置352で変異、変異Gly→Ser、及び
位置356で変異、変異Ala→Glu
配列番号33:シュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)Axmi428H HPPDのタンパク質配列(Axmi428−Evo41)
位置351で変異、変異Glu→Pro、
位置352で変異、変異Gly→Trp、
位置355で変異、変異Lys→Ala、及び
位置356で変異、変異Ala→Gln
配列番号34:シュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)Axmi309H HPPDをコードする核酸配列
配列番号35:配列番号34によってコードされるタンパク質
配列番号36:シュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)Axmi309H HPPDのタンパク質配列(Axmi309−Evo40)
位置335で変異、変異Glu→Pro、
位置336で変異、変異Gly→Ser、及び
位置340で変異、変異Ala→Glu
配列番号37:シュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)Axmi309H HPPDのタンパク質配列(Axmi309−Evo41)
位置335で変異、変異Glu→Pro、
位置336で変異、変異Gly→Trp、
位置339で変異、変異Lys→Ala、及び
位置340で変異、変異Ala→Gln
配列番号38:シュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)Axmi305H HPPDの核酸コード
配列番号39:配列番号38によってコードされるタンパク質
配列番号40:シュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)Axmi305Hのタンパク質配列(Axmi305−Evo40)
位置337で変異、変異Glu→Pro、
位置338で変異、変異Gly→Ser、及び
位置342で変異、変異Ala→Glu
配列番号41:シュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)Axmi305Hのタンパク質配列(Axmi305−Evo41)
位置337で変異、変異Glu→Pro、
位置338で変異、変異Gly→Trp、
位置341で変異、変異Lys→Ala、及び
位置342で変異、変異Ala→Gln
配列番号42:カラスムギ(Avena sativa)によってコードされるHPPDタンパク質
配列番号43:位置109に欠失を有する配列番号42のHPPDタンパク質(Avena sativa ΔA109)
配列番号44:トウモロコシ(Zea mays)によってコードされるHPPDタンパク質
配列番号45:蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDの核酸コード(PfHPPD)
配列番号46:配列番号45によってコードされるタンパク質。
実施例
A.カラスムギ属(Avena)HPPDのクローニング(WO02/46387による)
A1−大腸菌細胞での発現のためのクローニング
カラスムギ(Avena sativa)HPPD(AvHPPD;配列番号1)をコードするcDNAを、大腸菌細胞での遺伝子発現に至適化されたコドン利用を用いて、GeneArt(Regensburg、ドイツ)で発注した。開始コドンATGの上流で、制限酵素BamHIの認識部位に相当する配列を添加し、停止コドンの下流で、酵素HindIIIの認識部位に相当する配列ストレッチを添加した。予め開いておいたベクターpET32a(Novagen、Darmstadt、Germany)において制限酵素BamHI及びHindIIIを用いて合成断片をクローニングすることで、AvHPPDタンパク質(配列番号2)からのN末端先端のベクターに存在するHisTagとの融合を得た。得られたベクターは、pET32a−AvHPPDeと称した。
そのタンパク質を大腸菌で産生させ、標準的なプロトコール(例えばWO2009/144097に記載のもの)に従って単離した。
A2−植物での発現のためのpBin19バイナリーベクターでのAvHPPD遺伝子のクローニング
AvHPPDタンパク質をコードする遺伝子に相当するcDNAを、制限酵素NcoI及びNotIを用いてプラスミドpET32a−AvHPPDeから切り取った。NotI制限から得られたオーバーハング配列を埋め、次に、得られた断片を酵素NcoI及びSmaIで予め制限しておいたベクターpRT100−OTPcにクローニングした(例えばTopfer(1987), Nucleic Acids Res. 15:5890及びPCT/EP2010/070561参照)。得られたプラスミドはpBin19−CaMV35S−OTPc−AvHPPDe−35Sと称し、それを用いてアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)株ATHVの形質転換を行った(例えばPCT/EP2010/070561参照)。
B.PfHPPD−G336Wのクローニング
B1−大腸菌細胞での発現のためのPfHPPD−G336Wのクローニング
プラスミドpKK233−2(Clontech)(US6245968)における蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)からの変異体HPPDG336W(配列番号3)(US6,245,968)をコードする遺伝子を、PCRがそれの5′先端でその配列に、酵素NcoIの認識部位に相当する配列を、それの3′先端で、酵素XbaIの認識部位に相当する配列を添加するための鋳型として用いた(WO2009/144079参照)。そのクローニングを行って、「pSE420(RI)NX−PfG336W」という名称のシュードモナス(Pseudomonas)HPPD G336W(配列番号4)のN末端先端でHis tag融合タンパク質を得た。
B2−植物における発現のためのPfHPPD−G336Wのクローニング
タバコ若しくはダイズ形質転換用のバイナリーベクターは、例えば双子葉植物での発現に至適化されたコドン利用を有する遺伝子PfHPPD−G336W(配列番号5)の発現を駆動するCaMV35プロモーターで構築され、それの5′先端で、OTPをコードする配列を添加し、さらに上流で植物におけるmRNAの安定性を向上させるための配列TEV(タバコエッチウィルス)と次にCaMV35Sターミネーターを添加した。さらに、その形質転換ベクターはさらに、遺伝子がCaVM35Sプロモーターによって駆動されるPAT遺伝子カセットを含み、次に形質転換プロセス中のグルホシネートに基づく選択のためのCaMV35Sターミネーター及び遺伝子がアラビドプシス(Arabidopsis)からのヒストンプロモーターによって駆動されて形質転換植物に除草剤グリホセートに対する耐性を与える2mEPSPS遺伝子カセットを含む。そのバイナリーベクターは、pFCO117と称した。
全ての他の変異シュードモナス(Pseudomonas)遺伝子及び本発明に従って他の生物から得られる遺伝子は、上記と同様にしてクローニングすることができる。
B3−HPPD遺伝子の植物発現カセットへのクローニングの別途手法
本明細書に記載のHPPD遺伝子のそれぞれについて、読み取り枠(ORF)を全長DNA鋳型によって増幅する。PCR時にORFの各末端にHind III制限部位を添加する。さらに、ヌクレオチド配列ACCを遺伝子の開始コドンの5′側直前に添加して、翻訳効率を高める(Kozak (1987) Nucleic Acids Research 15:8125−8148; Joshi (1987) Nucleic Acids Research 15:6643−6653)。当業界で公知の技術を用いてPCR産物のクローニング及び配列決定を行って、PCR時に変異が全く導入されないようにする。
PCR産物を含むプラスミドをHind IIIによって消化させ、無傷のORFを含む断片を単離する。この断片をプラスミド、例えばpAX200、イネアクチンプロモーターを含む植物発現ベクター(McElroy et al. (1991) Molec. Gen. Genet. 231:150−160)及びPinIIターミネーター(An et al. (1989) The Plant Cell 1:115−122)のHindIII部位にクローニングする。次に、この中間プラスミドからのプロモーター−遺伝子−ターミネーター断片をプラスミドpSB11(Japan Tobacco, Inc.)にサブクローニングして、最終pSB11に基づくプラスミドを形成する。これらのpSB11に基づくプラスミドは代表的には、プロモーター−遺伝子−ターミネーター構築物を含むDNA断片をKpnI及びPmeIなどの制限酵素による二重消化によって切り出し、エアロゾルビーム注入によって植物に形質転換するのに用いることができるように構築される。得られたpSB11に基づくクローンの構造は、制限酵素消化及びゲル電気泳動、並びに各種クローニング接合部横断的に配列決定することで確認される。
当該技術分野において公知である三親接合手順を用いて、プラスミドpSB1(Japan Tobacco, Inc.)も有しているアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)株LBA4404に当該プラスミドを導入した後、スペクチノマイシンを含む培地に蒔く。pSB11に基づくプラスミドクローンは、スペクチノマイシン抵抗性ではあるが、宿主範囲の狭いプラスミドであり、アグロバクテリウム(Agrobacterium)では複製できない。pSB11に基づくプラスミドを、相同組換えによって宿主範囲の広いプラスミドpSB1に組み込むと、スペクチノマイシン抵抗性コロニーが出現する。pSB1とpSB11に基づくプラスミドの融合体産物は、サザンハイブリダイゼーションによって確認される。その融合体を有するアグロバクテリウム(Agrobacterium)株は、当該技術分野において公知の方法、例えばPureIntro法(Japan Tobacco)によって、トウモロコシを形質転換させるのに用いられる。
C 各種HPPD酵素の変異
C1−第一世代点変異体ライブラリ(PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に詳細に記載)
Pfw336変異体を、いくつかの位置でさらに変異誘発した。これらの位置の無作為化を、QUIKCHANGE(登録商標) lightningキットを用いて行った。そのライブラリの理論的多様性は約300であった。変異体をプールし、DH5α大腸菌(E. coli)細胞に形質転換した。600種類の個々のクローンを、HPPD阻害薬テンボトリオン(TBT)に対する耐性についてスクリーニングした。振盪器において37℃でカナマイシンを加えたLB培地で、OD600nmが0.3となるまでクローンを成長させた。次に、培地を30℃に切り換え、さらに17時間インキュベートした。培地を遠心し、細胞ペレットを10mM Hepes/KOH pH7.6、4mM MgCl、1mM DTT中に懸濁させた。ビーズ破砕によって細胞を溶解させ、遠心後に可溶性細胞抽出液を得た。
変異体を、褐色アッセイ(brown color assay)を用いて分析した。具体的には、LB−寒天、カナマイシン、5mMチロシン、42mMコハク酸及びHPPD阻害薬を含む固体培地上にスポッティングすることで、HPPD阻害薬耐性に関して96ウェル方式で、HPPD抽出液のアッセイを行った。一次スクリーニングでは、抽出液20μLを、250μMテンボトリオンを含むプレートに三連でスポッティングした。プレートをエアポア(airpore)テープで覆い、37℃でインキュベートした。24時間後、褐色色素形成を、PfHPPD336Wを含むサンプルと肉眼で比較した。TBT存在下に色素形成増加を示した異型を、250μM TBT及び250μMジケトニトリル(DKN)活性化合物イソキサフルトール(IFT)で再アッセイした。再度向上された阻害薬耐性を示した異型を再度発現させ、抽出液を250μM TBT及び250μM DKNで力価測定して、向上の程度を求めた。抽出液サンプルについてSDS−PAGEによっても分析したところ、その抽出液は等量のHPPDタンパク質を含むことが認められた。
C2−第2世代置換ライブラリスクリーニング(PCT/US2013/59598(WO2014/043435)に詳細に記載)
成績の良い第一世代異型の配列を分析し、位置335、336、339、340を組み合わせた領域における第二世代置換ライブラリを作った。上記のC1下に記載の方法に従って、スクリーニングを行った。下記の力価測定データは、異型PfHPPDEvo40がPfHPPD336Wと比較してTBT及びDKNに対して向上した耐性を有していたことを示している。SDS−PAGE分析を行ったところ、異型間でHPPD発現レベルに差は示されなかった。
各種HPPD阻害薬を含む培地にHPPDを発現する全大腸菌(E. coli)細胞を蒔くことで異型についても調べた。これらの実験において、HPPD発現プラスミドを含むDH5α細胞を、OD600nm=0.5に達するまで、LB培地+カナマイシン中で増殖させた。LB培地+カナマイシンで、OD600値0.016、0.008、0.004及び0.002に相当する細胞の連続希釈液を調製した。各希釈液10μLを、HPPD阻害薬を含まない、250μM TBT、250μM DKN及び250μM メソトリオン(MST)を含むプレートに三連で蒔いた。プレートを37℃で18時間インキュベートした。SDS−PAGE分析を行ったところ、異型間でHPPD発現レベルに差は示されなかった。
C3−蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPD変異体G336W(Pfw336)の製造及びHPPD酵素の速度論的特性決定
最初に、配列番号45として本明細書に挙げられ、WO2009144079、WO96/38567、及びRuetschiら(Ruetschi et al., Eur. J. Biochem., 205, 459−466, 1992)に記載されているアミノ酸配列をコードする天然蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDヌクレオチド配列(PfHPPD、1077bp、WO2009144079に記載)を、開始コドンを提供する発現ベクターpKK233−2(Pharmacia)の固有NcoI部位にクローニングした。
5′末端で、ATGのすぐ下流に、アラニンアミノ酸をコードする核酸配列及びN末端HIS6−Tagをコードする核酸配列を挿入した。ATGの上流に、二つの別のシステイン塩基対を添加して、制限酵素NcoIの認識部位に相当する配列を得て、停止コドンの下流に、制限酵素XbaIの認識部位に相当する配列を添加した。HIS−TAGをコードする配列などの当該遺伝子に相当するDNA配列を制限酵素NcoI及びXbaIによって切断し、改変発現ベクターpSE420(RI)NX(5261bp)にクローニングした。
クローニング及び発現ベクターpSE420(RI)NX(5261bp)は、Invitrogen(Karlsruhe、Germany)によるプラスミドpSE420に基づくものである。このベクターの改変には、抗生物質であるカナマイシンに対する耐性を付与し、スーパーリンカー(superlinker)領域(多重クローニング部位)の大半を持たないnptII遺伝子(ネオマイシンリン酸転移酵素;Sambrook and Russell, 2001, Molecular Cloning: a laboratory manual (Third edition))の添加などがある。
そのプラスミドはtrp−lac(trc)プロモーター及びあらゆる大腸菌(E. coli)宿主株でlacリプレッサーを提供するlacI遺伝子を有する。lacリプレッサーは、lacオペレーター(lacO)に結合し、標的遺伝子の発現を制限する。この阻害は、イソプロピルβ−D−1−チオガラクトピラノシド(IPTG)による誘発によって軽減され得る。
得られたベクターは、pSE420(RI)NX−PfHPPDと称され、それを用いて大腸菌(Escherichia coli)BL21細胞(Merck, Darmstadt, Germany)の形質転換を行った。
プラスミドpSE420(RI)NX−PfHPPDについて、PCR介在部位特異的変異誘発を行って、PfHPPD遺伝子の相当する部位での規定のコドンを変えた。位置336のグリシン(G)をコードするコドンを、トリプトファン(W)をコードするコドンに置き換えた。得られた変異体はPfw336と称され、得られたベクターはpSE420(RI)NX−Pfw336であった。
pSE420(RI)NX−PfHPPD又はpSE420(RI)NX−Pfw336を含む大腸菌(E.coli)K−12 BL21で、HPPDの発現を行った。ODが0.5に達するまで細胞を増殖させ、次にlacリプレッサーに結合し、lacオペロンからのそれの解離を生じさせる1mM IPTGによる誘発によって、trp−lac(trc)プロモーターから発現を開始した。発現は、28℃で15時間かけて行った。
前スターター培養液を調製するため、TB培地(100μg*mL−1カルベニシリン)2mLに、大腸菌K−12BL21グリセロール原液50μLを接種した。前スターター培養液を、140rpmで15時間振盪しながら37℃でインキュベートした。前スターター培養液200μLを用いて、スターター培養(100μg*L−1でTB補充5mL)を開始し、それを37℃で3時間インキュベートした。
主培養液を調製するため、TB培地(100μg*mL−1カルベニシリン)400mLに、スターター培養液4mLを接種した。このスターター培養液を、OD600 0.5に達するまで140rpmで振盪しながら37℃でインキュベートした。次に、組換えタンパク質発現を、1M IPTG溶液400μLで誘発した。これらの条件下に細胞をさらに1時間増殖させ、次に温度を下げて28℃とし、培養液を140rpmで15時間振盪した。6000×gで15分間4℃にて遠心することで細胞を回収した。次に、細胞ペレットを−80℃で保存した。
D−大腸菌(E. coli)でのHPPDタンパク質の産生、His−Tagを介した精製
アラビドプシス・タリアナ(Arabidopsis thaliana)AtHPPDコード配列(1335bp;GenebankAF047834;WO96/38567)を最初に、BamHI及びHindIIIの制限部位間で発現ベクターpQE−30(QIAGEN、Hilden、Germany)にクローニングした。得られたベクターは、「pQE30−AtHPPD」と称した(WO2009/144079参照)。
そのプラスミドは、trp−lac(trc)プロモーター及びあらゆる大腸菌宿主株でlacリプレッサーを提供するlacI遺伝子を有する。lacリプレッサーは、lacオペレーター(lacO)に結合し、標的遺伝子の発現を制限する。この阻害は、イソプロピルβ−D−1−チオガラクトピラノシド(IPTG)での誘発によって軽減することができる。
上記で定義の全ての大腸菌発現ベクターを用いて、大腸菌BL21細胞(Merck、Darmstadt、Germany)の形質転換を行った。
基準として用いたAtHPPD(アラビドプシス・タリアナ(Arabidopsis thaliana)HPPD)については、WO2009/144079を参照する。
pQE30−AtHPPD、pET32a−AvHPPDe、pSE420(RI)NX−Pfw336、pSE420(RI)NX−FMP27若しくはpSE420(RI)NX−FMP37を含む大腸菌K−12 BL21で、HPPDの発現を行った。ODが0.5に達するまで細胞を増殖させ、次にlacリプレッサーに結合し、lacオペロンからのそれの解離を生じさせる1mM IPTGによる誘発によって、trp−lac(trc)プロモーターから発現を開始した。発現は、28℃で15時間かけて行った。
前スターター培養液を調製するため、TB培地(100μg*mL−1カルベニシリン)2mLに、大腸菌K−12BL21グリセロール原液50μLを接種した。前スターター培養液を、140rpmで15時間振盪しながら37℃でインキュベートした。前スターター培養液200μLを用いて、スターター培養(100μg*L−1でTB補充5mL)を開始し、それを37℃で3時間インキュベートした。
主培養液を調製するため、TB培地(100μg*mL−1カルベニシリン)400mLに、スターター培養液4mLを接種した。このスターター培養液を、OD600 0.5に達するまで140rpmで振盪しながら37℃でインキュベートした。次に、組換えタンパク質発現を、1M IPTG溶液400μLで誘発した。これらの条件下に細胞をさらに1時間増殖させ、次に温度を下げて28℃とし、培養液を140rpmで15時間振盪した。6000×gで15分間4℃にて遠心することで細胞を回収した。次に、細胞ペレットを−80℃で保存した。
D1−天然型でのHis−タグ付きHPPDの単離及び精製
細胞の溶解
細菌細胞壁を形成するペプチドグリカンでN−アセチルムラミン酸とN−アセチル−D−グルコサミン残基との間の1,4−β−連結を開裂させる酵素であるリゾチームを用いて細胞を溶解した。次に、細菌細胞の内部圧力によって細胞膜を破壊した。さらに、溶菌緩衝液には、タンパク質に損傷を与えることなく全ての形態のDNA及びRNAを加水分解することで、細胞溶解物の粘度を大幅に低下させるエンドヌクレアーゼであるベンゾナーゼ(Benzonase)(登録商標)ヌクレアーゼを含有させた。自然条件下での溶菌を、氷上で行った。
His標識タンパク質の精製のため、QIAexpress(登録商標)Ni−NTA Fast Startキットをユーザーマニュアルの説明に従って用いた。
D2−固定化金属イオンアフィニティクロマトグラフィー(IMAC)によるHis標識タンパク質の精製
溶解反応物の遠心後に得られた透明細胞溶解物(10mL)を、QIAexpress(登録商標)Ni−NTA Fast Start Kit(Qiagen、Hilden、Germany)からのNi−NTA Fast Startカラムに負荷し、使用説明書に従って精製を行った。溶離緩衝液2.5mLでHis標識タンパク質を溶離した。
D3−ゲル濾過によるHPPD溶液の脱塩
溶離緩衝液2.5mLでNi−NTA Fast Startカラムから溶離したHPPD溶液を、ユーザーマニュアルの説明に従ってSephadex G−25PD−10カラム(GE Healthcare、Freiburg、Germany)に負荷した。サンプル全体がゲル床に入った後、貯蔵緩衝液3.5mLを用いて溶離を行った。
脱塩カラムから溶離したHPPD溶液を、小分けサンプル1mL中−80℃で冷凍した。
D4−ブラッドフォード(Bradford)タンパク質アッセイを用いるHPPDタンパク質濃度の測定
標準的なブラッドフォードアッセイ(Bradford, (1976), Anal Biochem 72:248−254)を用いて、タンパク質濃度を求めた。
D5−SDS−PAGEを用いるHPPD溶液の純度の測定
ゲルNuPAGE(登録商標)Novex4−12%Bis−Tris Gels(Invitrogen、Karlsruhe、Germany)を用いるSDS−PAGEタンパク質ゲル電気泳動によって溶離したタンパク質の完全性を調べ、タンパク質約10μgを負荷した。Laemmliサンプル緩衝液10μLをタンパク質溶液1から10μLに加え、混合物を90℃で10分間インキュベートした。短い遠心段階後、混合物全体を、NuPAGE(登録商標)MOPS SDS泳動干渉液(ddHOで20倍溶液から希釈)を充填したXCell SureLock(商標名)Novex Mini−Cellゲルチャンバにおいて固定しておいたSDSゲルのスロットに負荷した。次に、ゲルチャンバに電圧150を1時間印加した。タンパク質帯域を染色するため、ゲルをCoomassie Brilliant Blue R−250染色溶液に浸漬した。ポリアクリルアミドゲルの脱染を行うため、タンパク質帯域が白色ゲル上で青色に見えるまで、それをCoomassie Brilliant Blue R−250脱染溶液に浸漬した。
E−2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド存在下でのHPPD活性の測定
いわゆるHGDアッセイ及びID Business Solutions社XLfitソフトウェアスイートの4パラメータロジスティックモデル又はシグモイド用量−反応モデルを用い、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドについてのpI50値(モル濃度での酵素活性の50%を阻害するのに必要な阻害薬の濃度の対数値。表1の第3欄を参照する。)を、HPPD活性対阻害薬濃度の用量−応答プロットから求めた。HGDアッセイにより、合計体積1mLでの200mM Tris−HCl pH7.6、10mMアスコルビン酸、20μM FeSO、650単位のカタラーゼ、8μgHGAジオキシゲナーゼ(HGA:ホモゲンチシン酸)及び600μM HPPの溶液に適切な量のHPPDを加えることで、HPPD活性を室温で測定した。マレイルアセトアセテート形成による318nmでの吸光度上昇から、初期反応速度を求めた(ε318=11,900M−1cm−1)。
記号「>」を用いる場合、それは、その値が示された値よりかなり高いが、調べた阻害薬濃度の範囲内では正確に計算できなかったことを意味する。
表1の第1列において、アッセイで用いたHPPDを挙げており、表1の第2列では、本発明の相当する配列番号を開示している。
表1の第4列では、0.2μMの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド濃度での個々の酵素の酵素活性の阻害を開示している。
全ての結果を表1に示してある。
表1
Figure 2016538300
これらのデータは、各種生物由来のHPPDが2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド(PfHPPD、Axmi309H、FMP22、FMP27、FMP37)に対して許容される耐性を示し、前記のものの一部のある種の変異体(PfHPPD336W、PfHPPD−Evo33、PfHPPD−Evo40、PfHPPD−Evo41、Axmi428H−Evo40、Axmi428H−Evo41、Axmi309H−Evo41参照)が2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドに対して感受性がさらに低いことを示している。
F−ダイズ形質転換
ダイズの形質転換を、当該技術分野において公知の方法、例えば実質的にPaz et al.(2006), Plant cell Rep.25:206に記載の方法を用いるアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)介在形質転換ダイズ半種子外植体を用いることで行う。形質転換体は、選択マーカーとして各種HPPD阻害薬を用いて確認する。若芽の出現を観察し、個々の除草剤に対する耐性の指標として記録する。耐性のトランスジェニック苗条は、個々のHPPD阻害剤で処理されていない野生型ダイズ苗条と同等の正常な緑色を示すが、同量の個々のHPPD阻害薬で処理した野生型ダイズ苗条は完全に白化する。このことは、HPPDタンパク質が存在すると、HPPD阻害剤除草剤に対して耐性となることを示している。
耐性の若芽を、発根培地に移すか、移植する。根付いた小植物を、順応期間後に温室に移す。次に、導入遺伝子を含む植物に、HPPD阻害剤除草剤、例えばテンボトリオンを100g ΑΙ/haの施用量で噴霧する。施用10日後に、除草剤施用による症状を評価し、同じ条件下で野生型植物に認められる症状と比較する。
上記に従って得られるダイズ植物を用いて、圃場試験データを収集する。
G−ワタT0植物の確立及び選択
ワタの形質転換を、当該技術分野において公知の方法、PCT特許公開WO 00/71733に記載される方法における特に好ましい方法を用いることで行う。再生した植物を温室に移す。順応期間後、十分に成長した植物に、HPPD阻害除草剤、例えば硫酸アンモニウム及び菜種油メチルエステルを補充した100g AI/haと等価なテンボトリオンを噴霧する。噴霧から7日後に、除草剤での処理による症状を評価し、同じ条件下で同じ処理を施した野生型ワタ植物について認められる症状と比較する。
H−アグロバクテリウム(Agrobacterium)介在形質転換によるトウモロコシ植物細胞の形質転換
トウモロコシ植物での安定な発現のための植物発現カセットの構築及びトウモロコシ形質転換は当業界では公知であり、この特定の例では、方法はPCT特許公開W02014/043435及びWO2008/100353に記載され、それから使用される。HPPD異型(PCT/US2013/59598(WO2014/043435))をコードするポリヌクレオチド配列が、EPSPSタンパク質をコードするDNA配列とともにスタッキングされて、PSPSを標的とする除草剤に対する耐性が付与されている。EPSPS遺伝子をアルスロバクター−グロビフォルミス(Arthrobacter globiformis)から単離し(WO2008/100353)、インフレームで輸送ペプチド配列に接合して、翻訳されたタンパク質の葉緑体への転座を誘導している。ユビキタスプロモーター(サトウキビからのユビキチン4プロモーター、米国特許第6,638,766号)、及びそれぞれEPSPS遺伝子の上流及び下流でクローニングしたカリフラワーモザイクウィルスからの35Sターミネーター配列により、安定な発現が達成された。
相当するHPPD異型を、EPSPS遺伝子発現カセットについて記載のものと同じプロモーター、葉緑体輸送ペプチド及びターミネーター配列でクローニングした。両方の遺伝子についてのコード配列は、トウモロコシ発現に関して至適化されたコドンであったものである。
トウモロコシ形質転換のため、受粉後8から12日で、穂を非常に良好な状態で採取した。穂から胚を単離し、大きさ0.8から1.5mmの胚が形質転換で使用するのに好ましかった。胚は、好適なインキュベーション培地に胚盤を上にして蒔き、暗所にて25℃で終夜インキュベートした。しかしながら、胚を終夜インキュベートすることは本来、必要ではない。胚をTiプラスミド介在導入のための本発明のヌクレオチド配列を有する適切なベクターを含むアグロバクテリウム(Agrobacterium)株と約5から10分間接触させ、約3日間(暗所で25℃)にわたり共培養培地に蒔いた。共培養後、外植体を回復期培地に移して約5日間経過させた(暗所で25℃)。外植体を、用いられる特定の選択の性質及び特徴に応じて、8週間までの期間にわたりグリホセートとともに選択培地中でインキュベートした。選択期間後、得られたカルスを、成熟体細胞胚の形成が認められるまで、胚成熟培地に移した。次に、得られた成熟体細胞胚を微光下に置き、当業界で公知のように再生のプロセスを開始した。得られた苗条を発根培地上で発根させ、得られた植物を苗床ポットに移し、トランスジェニック植物として繁殖させた。ELISAタンパク質検出法を用いて、導入遺伝子の発現及び存在に関して、植物を常法によって分析した。選択培地で再生中で検出可能なHPPD導入遺伝子タンパク質発現を有する唯一の植物を、除草剤耐性分析に用いた。
I−変異HPPDタンパク質異型を発現するトランスジェニック植物の除草剤耐性評価
I1−トランスジェニックトウモロコシT0植物による温室試験
組織培養からの再生T0事象を、合成土壌(Fafard(登録商標)Mix)及び徐放肥料(Haifa Multicote(商標名);ポリマーコーティングされた徐放肥料、NPK Pro 18−6−12+微量栄養素)を入れた2インチ正方形ポットに移植し、日中は最高30℃、夜間は最低22℃で12日間にわたる補助高圧ナトリウム光下で温室(GH)中で栽培した。完全に再生した植物を、同じ環境条件下で合成土壌及び徐放肥料を入れた5インチ正方形ポットに移した。7日後に、T0植物に、エステル化植物油混合物(Hasten(商標名)噴霧剤補助剤、0.578体積%)及び硫酸アンモニウム(AMS、0.97%(重量/体積))を補充したWP20(水和剤20%)製剤から調製した25g AI/ha(「ヘクタール当たり有効成分グラム数」を意味する「g AI/ha」)、50g AI/ha、又は100g AI/haの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドで噴霧した。除草剤処理はいずれも、当業界で公知である標準的な施用プロトコールを用いるDeVries Tracker Sprayerシステムで実施した。噴霧剤対照として、T0事象に除草剤を含まない補助剤混合物で噴霧した。この混合物を噴霧した全てのT0事象が白化葉を示したわけではなかった。
別段の断りがなければ、2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドの処理(DAT)から6日後に、トランスジェニックT0事象の損傷を評価した。
EPSPS選択可能なマーカー遺伝子を発現し、HPPD異型を持たないT0事象を対照トウモロコシ植物として用い、25g AI/haの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドですでに100%葉損傷を示した。
非形質転換トウモロコシ植物も、25g AI/haの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドですでに100%葉損傷を示した。
表2に、位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(PfHPPDEvo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号16下に開示されており、本願では配列番号29下に開示されている)を含む蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質の変異体、又は位置351のE(Glu)→P(Pro)置換、位置352のG(Gly)→W(Trp)置換、位置355のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置356のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi428H−Evo41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号56下で開示されており、本願においては配列番号33下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス(Pseudomonas)(=コマモナス(Comamonas))・テストステロニ(testosteroni)HPPDタンパク質の変異配列、又は位置335のE(Glu)→P(Pro)置換、位置336のG(Gly)→W(Trp)置換、位置339のK(Lys)→A(Ala)置換及び位置340のA(Ala)→Q(Gln)置換(Axmi309H−EVO41と称され、PCT/US2013/59598(WO2014/043435)において配列番号54下で開示されており、本願においては配列番号37下のHPPDタンパク質配列として開示されている)を含むシュードモナス・アガリシ(Pseudomonas agarici)HPPDタンパク質の変異配列を発現するトランスジェニックトウモロコシ植物の結果をまとめてある。
対照トウモロコシ植物は、EPSPS選択可能なマーカー遺伝子を発現し、HPPDタンパク質異型を持たない。「0」の評点に分類された植物は、総葉面積の41%から100%の損傷範囲で重度の葉白化を示した。「1」の評点は、総葉面積の16%から40%損傷の中等度耐性を有する植物に割り当てた。「2」の評点は、総葉面積の6%から15%損傷の範囲内の良好な耐性を有する植物に割り当てた。「3」の評点を有する植物は、除草剤処理によって損傷された葉面積が5%以下で白化がほぼないことを示した。
表2中の結果は、トランスジェニックHPPDタンパク質を発現する試験トウモロコシ事象は、対照植物と比較して農業的に妥当な用量でHPPD除草剤2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドに対する耐性が高いことを示している。
全ての対照事象が、25g AI/haの除草剤濃度ですでに重度の白化症状を示した。対照的に、PfHPPDEvo41(n=21)及びAxmi428H−Evo41(n=29)を発現する試験事象の約70%が100g AI/haの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドの除草剤濃度による処理後で5%以下の白化葉面積の高い耐性を示した。試験HPPD異型Axmi309H−Evo41の60%も、100g AI/haによる同じ処理後に15%以下の白化葉面積の許容される抵抗性を付与している。
表2
25から100g AI/haの施用量での2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド施用から6日後のトウモロコシ対照植物及びトウモロコシトランスジェニックT0事象からの葉面積損傷の評価。下記の除草剤耐性分類を、「0」=わずかな耐性;41%から100%損傷葉面積;「1」=中等度耐性;16%から40%損傷葉面積;「2」=良好な耐性;6%から15%損傷葉面積;「3」=高い耐性;0%から5%損傷葉面積と定義した。除草剤を、それぞれPfHPPDEvo41、Axmi428H−Evo41、及びAxmi309H−Evo41について9、12及び1の独立のトランスジェニック事象を起源とする植物に施用した。
Figure 2016538300
I1−トランスジェニックダイズT1植物での温室試験
野生型ダイズ(Merlin及びThorne)及び蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質PfHPPD−G336W(WO99/24585)、又はPfHPPD−Evo33、又はPfHPPD−Evo40、又はPfHPPD−Evo41の異型を発現するトランスジェニックダイズT1植物(PCT/US2013/59598(WO2014/043435))に、ダイズ発育のV2からV3段階で、硫酸アンモニウム及びメチル化ナタネ油(Actirob)を補充した製剤型WP20の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド(6.25g AI/haから75g AI/haの濃度範囲)を噴霧した。噴霧剤対照として、野生型ダイズ(Merlin及びThorne)及びトランスジェニックダイズT1植物に、除草剤を含まない補助剤混合物を噴霧した。噴霧21日後に、除草剤耐性を評価した。下記の除草剤耐性分類を、「0」=わずかな耐性;41%から100%損傷葉面積;「1」=中等度耐性;16%から40%損傷葉面積;「2」=良好な耐性;6%から15%損傷葉面積;「3」=高い耐性;0%から5%損傷葉面積と定義した。
表3には、植物体へのHPPD阻害薬耐性分析の結果をまとめてある。
除草剤を含まない対照補助剤混合物で処理した全ての植物(野生型ダイズ事象を含む)は、白化葉面積を生じなかった。野生型ダイズ植物(Merlin及びThorne)はすでに、6.25g AI/haの2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド濃度で総葉面積の45%から50%の重度の白化を示しており、25g AI/haのより高い濃度で90%から100%損傷葉面積となった。蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質PfHPPD−G336W、又はPfHPPD−Evo33、又はPfHPPD−Evo40、又はPfHPPD−Evo41の異型を発現するトランスジェニックダイズT1植物のほとんどが、25g AI/haの濃度に対して高い耐性を付与する。
蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質PfHPPD−Evo41の異型を発現するいくつかのトランスジェニックダイズT1植物も、5%未満損傷葉面積で50g AI/haに対して高い耐性を示す。従って、PfHPPD−Evo41事象は、PfHPPD−G336Wを発現する事象より2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドに対する耐性が高かった。
表3
野生型(wt)ダイズ植物(Merlin及びThorne)及び蛍光菌(Pseudomonas fluorescens)HPPDタンパク質PfHPPD−G336W(WO99/24585)、又はPfHPPD−Evo33、又はPfHPPD−Evo40、又はPfHPPD−Evo41(PCT/US2013/59598(WO2014/043435))の異型を発現するT1ダイズトランスジェニック事象からのHPPD阻害薬の評価。植物を6.25、25、50、又は75g AI/haの最終濃度の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドで処理した。処理21日後に、除草剤耐性を評点した。対照として、野生型ダイズ及びトランスジェニックダイズT1植物を、除草剤2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドを含まない噴霧剤混合物で処理した。これら対照植物全てが白化葉面積を示したわけではなかった。下記の葉面積損傷分類:「0」=わずかな耐性;41%から100%損傷葉面積;「1」=中等度耐性;16%から40%損傷葉面積;「2」=良好な耐性;6%から15%損傷葉面積;「3」=高い耐性;0%から5%損傷葉面積を、除草剤耐性評点に関して定義した。
Figure 2016538300
J 圃場試験
2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド(成分(A))及び他の除草活性化合物(成分(B))の各種組み合わせの雑草効力に関する圃場試験
JA) 試験方法
水200リットル/ヘクタールの施用容量及び2回繰り返しで施用後圃場試験として、実験を行った。
施用14日後の評価を肉眼で判定した。
処理植物を未処理植物と比較した(0%から100%スケール)。
結果(二連の平均として)を下記の表で報告している。
単独使用又は併用使用した場合の除草剤有効成分の施用量を下記の表に示している。
標準として、補助剤系Stefes Mero(登録商標)を用いた。
JB) 表4から7で用いた略称
用量g ai/ha=1ヘクタール当たりの有効成分グラム数での施用量
EC=コルビーによる期待値(E=A+B)
Δ=測定値(%)の期待値(%)に対する差(%)(測定値−期待値)
判定=測定値:各(A)+(B)について(%)
評価:
測定値(%)がEより大きい>相乗効果(+Δ)
測定値(%)がEに等しい>相加効果(Δ±0)

JC) 他の除草剤化合物と組み合わせた2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミドについての圃場データ結果を、下記の表4から7に示してある。
これらのデータはいずれも、各種雑草に対するそのような組み合わせの相乗効果を示している。
表4:2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド+アトラジン
Figure 2016538300
表5:2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド+グルホシネート−アンモニウム
Figure 2016538300
表6:2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド+グリホセート
Figure 2016538300
表7:2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド+メトリブジン
Figure 2016538300
本発明によるさらなる組み合わせの施用によって、同等の結果が得られている。
本明細書で言及されている全ての刊行物及び特許出願は、本発明が係わる分野の技術を有する者の技術レベルを示すものである。全ての刊行物及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物及び特許出願が具体的且つ個別に参照によって組み込まれると示されているかのような程度に、参照によって本明細書に組み込まれるものとする。
以上、理解を深めることを目的として、例示及び実施例によって前記発明についてやや詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲内であれば、一定の変更及び修正を行うことが可能であることは明らかであろう。

Claims (11)

  1. (I)(a)カラスムギ属(Avena)、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、(d)ブレファリスミダエ(Blepharismidae)、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、(f)ピクロフィラセアエ(Picrophilaceae)、(g)コルディア(Kordia)からなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列、又は(II)前記で定義の生物のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列、又は(III)WO2012/021785に記載の方法でそれぞれ変異した変異トウモロコシ(Zea mays)若しくはダイズ(Glycine max)HPPDをコードする1以上のDNA配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用。
  2. トランスジェニック作物に含まれるキメラ遺伝子のうちの少なくとも一つが配列番号2、配列番号4、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号25、及び配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号43、配列番号46からなる群から選択されるヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNAを含む、請求項1に記載の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用。
  3. (I)(a)カラスムギ属(Avena)、(b)シュードモナス(Pseudomonas)、(c)シネココッコイデアエ(Synechococcoideae)、(d)ブレファリスミダエ(Blepharismidae)、(e)ロドコッカス(Rhodococcus)、(f)ピクロフィラセアエ(Picrophilaceae)、(g)コルディア(Kordia)からなる生物の群の1構成員由来のヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNA配列、又は(II)前記で定義の生物のHPPDコード遺伝子の1以上の変異DNA配列、又は(III)WO2012/021785に記載の方法でそれぞれ変異した変異トウモロコシ(Zea mays)若しくはダイズ(Glycine max)HPPDをコードする1以上のDNA配列を含む1以上のキメラ遺伝子を含むことでHPPD阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の区域で請求項1に記載の2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド若しくはそれの塩を施用することを含み、当該施用を(a)望ましくない植物、(b)望ましくない植物の種子、及び/又は(c)当該植物が成長する区域に対して行う、望ましくない植物の防除方法。
  4. 前記トランスジェニック作物に含まれるキメラ遺伝子のうちの少なくとも一つが、配列番号2、配列番号4、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号25、及び配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号43、配列番号46からなる群から選択されるヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ(HPPD)をコードするDNAを含む、請求項3に記載の方法。
  5. 前記トランスジェニック作物植物が、ラッカセイ属(Arachis)、フダンソウ属(Beta)、アブラナ属(Brassica)、キュウリ属(Cucumis)、カボチャ属(Cucurbita)、ヒマワリ属(Helianthus)、ニンジン属(Daucus)、ダイズ属(Glycine)、ワタ属(Gossypium)、サツマイモ属(Ipomoea)、アキノノゲシ属(Lactuca)、アマ属(Linum)、トマト属(Lycopersicon)、タバコ属(Nicotiana)、インゲンマメ属(Phaseolus)、エンドウ属(Pisum)、ナス属(Solanum)及びソラマメ属(Vicia)からなる双子葉作物の群、又はネギ属(Allium)、アナナス属(Ananas)、アスパラガス属(Asparagus)、カラスムギ属(Avena)、オオムギ属(Hordeum)、イネ属(Oryza)、キビ属(Panicum)、サトウキビ属(Saccharum)、ライムギ属(Secale)、モロコシ属(Sorghum)、ライコムギ属(Triticale)、コムギ属(Triticum)、トウモロコシ属(Zea)からなる単子葉作物の群に属する、請求項3又は4に記載の方法。
  6. 2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、混合製剤若しくはタンクミックスでトリケトン又はピラゾリネート除草剤からなる群から選択される1以上のHPPD阻害薬型除草剤と組み合わせて、及び/又はアセト乳酸シンターゼ、アセチル−CoAカルボキシラーゼ、セルロースシンターゼ、エノールピルビルシキミ酸−3−リン酸シンターゼ、グルタミンシンテターゼ、p−ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ、フィトエンデサチュラーゼ、光化学系I、光化学系II、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼの阻害に基づく別の公知の活性物質と組み合わせて施用するか、成長調節剤として作用させる、請求項3、4又は5のいずれか1項に記載の方法。
  7. 2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩を、テンボトリオン、メソトリオン、ビシクロピロン、テフリルトリオン、ピラスルホトール、ピラゾレート、ジケトニトリル、ベンゾフェナップ、又はスルコトリオンからなる群から選択される1以上の他のHPPD阻害薬型除草剤と組み合わせて施用する、請求項6に記載の方法。
  8. 2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−N−(1−メチル−1H−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩(成分(A))及び下位群B1からB11:
    B1:1,3−ジケト化合物からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    プロヘキサジオン、プロヘキサジオン−カルシウム、トリネキサパック−エチ(ethy)、
    アロキシジム、アロキシジム−ナトリウム、ブトロキシジム、クレトジム、シクロキシジム、ケトスピラドックス(ketospiradox)、プロホキシジム、セトキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、
    メソトリオン、スルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、ビシクロピロン、フェンキノトリオン、SL−261、
    ピノキサデン];
    B2:(スルホン)アミド類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    ベフルブタミド、ブロモブチド、ジメテナミド、ジメテナミド−P、ジフェナミド、ナプロパミド、ペトキサミド、N−[3−クロロ−4−(1−メチルエチル)−フェニル]−2−メチルペンタンアミド、
    ナプタラム、プロピザミド、
    ジフルフェニカン、エトベンザニド、フルフェナセット、メフェナセット、メフルイジド、ペンタノクロル、ピコリナフェン、プロパニル、N−フェニルフタルアミド酸、
    アセトクロール、アラクロール、アミドクロール(amidochlor)、ブタクロール、ブテナクロール、ジメタクロール、メタザクロール、メトラクロール、S−メトラクロール、プレチラクロール、プロパクロール、プロピソクロール、(2−クロロ−6′−エチル−N−イソプロポキシメチルアセト−o−トルイジド)、テニルクロール、
    アシュラム、カルバリル、カルベタミド、クロルプロファム、デスメディファム、フェンメディファム、プロファム、
    ブチレート、シクロエート、ジメピペレート、EPTC、エスプロカルブ、メタスルホカルブ、モリネート、オルベンカルブ、ペブレート、プロスルホカルブ、ピリブチカルブ、チオベンカルブ、トリアラート、ベルノレート、
    アミドスルフロン、アジムスルフロン、ベンスルフロン、ベンスルフロン−メチル、クロリムロン、クロリムロン−エチル、クロルスルフロン、シノスルフロン、シクロスルファムロン、エタメトスルフロン、エタメトスルフロン−メチル、エトキシスルフロン、フラザスルフロン、フルセトスルフロン、フルピルスルフロン−メチル−ナトリウム、ホラムスルフロン、ハロスルフロン−メチル、イマゾスルフロン、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、メソスルフロン、メソスルフロン−メチル、メタゾスルフロン、メチオピルスルフロン(methiopyrsulfuron)、メトスルフロン、メトスルフロン−メチル、モノスルフロン、モノスルフロン−エステル、ニコスルフロン、オルトスルファムロン、オキサスルフロン、プリミスルフロン−メチル、プロピリスルフロン、プロスルフロン、ピラスルフロン(pyrasulfuron)、ピラゾスルフロン−エチル、リムスルフロン、スルホメツロン、スルホメツロン−メチル、スルホスルフロン、チフェンスルフロン、チフェンスルフロン−メチル、トリアスルフロン、トリベヌロン、トリベヌロン−メチル、トリフロキシスルフロン、トリフロキシスルフロン(ナトリウム)、トリフルスルフロン、トリフルスルフロン−メチル、トリトスルフロン、(安息香酸、2−[[[[[4−メトキシ−6−(メチルチオ)−2−ピリミジニル]アミノ]カルボニル]アミノ]スルホニル]メチルエステル)、
    フルカルバゾン、フルカルバゾン−ナトリウム、イプフェンカルバゾン、プロポキシカルバゾン、プロポキシカルバゾン−ナトリウム、チエンカルバゾン、チエンカルバゾン−メチル、
    クロランスラム、クロランスラム−メチル、ジクロスラム、フロラスラム、フルメツラム、メトスラム、ペノキススラム、ピロクススラム、
    3−クロロ−N−[(4,6−ジメトキシピリミジン−2−イル)カルバモイル]−1−メチル−4−(5−メチル−5,6−ジヒドロ−1,4,2−ジオキサジン−3−イル)−1H−ピラゾール−5−スルホンアミド];
    B3:アリールニトリル類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    ブロモキシニル、ブロモキシニル−ブチレート、ブロモキシニル−カリウム、ブロモキシニル−ヘプタノエート、ブロモキシニル−オクタノエート、デトシル−ピラゾレート(DTP)、ジクロベニル、アイオキシニル、アイオキシニル−オクタノエート、アイオキシニル−カリウム、アイオキシニル−ナトリウム、ピラクロニル];
    B4:アゾール類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    ベンゾフェナップ、ピラゾリネート(ピラゾレート)、ピラゾキシフェン、ピロキサスルホン、トプラメゾン、ピラスルホトール、トルピラレート、3−(3−クロロ−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−1−メチル−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、3−(3−ヨード−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−1−メチル−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、1−エチル−3−(3−フルオロ−5−{[1−メチル−3−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール−5−イル]オキシ}フェノキシ)−5−(トリフルオロメチル)−1H−ピラゾール、ピラフルフェン、ピラフルフェン−エチル、フェノキサスルホン、フルアゾレート、イソウロン、イソキサベン、イソキサフルトール、イマザメタベンズ、イマザメタベンズ−メチル、イミザピック、イミザピック−アンモニウム、イマザピル、イマザピル−イソプロピル−アンモニウム、イミザキン、イミザキン−アンモニウム、イマゼタピル、イマゼタピル−アンモニウム、アザフェニジン、メタゾール、オキサジアルギル、オキサジアゾン、アミカルバゾン、ベンカルバゾン、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン−エチル、スルフェントラゾン、
    アミトロール、パクロブトラゾール、ウニコナゾール、ウニコナゾール−P、カフェンストロール、
    フェントラザミド];
    B5:別の除草剤からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    アリドクロル、アミノシクロピラクロル、アミノシクロピラクロル−カリウム、アミノシクロピラクロル−メチル、N−アセチルチアゾリジン−4−カルボン酸、アクロレイン、アミノピラリド、ペラルゴン酸アンモニウム、スルファミン酸アンモニウム、アビグリシン、ベナゾリン、ベナゾリン−エチル、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンタゾン、ベンゾビシクロン、6−ベンジルアミノプリン、ホウ砂、ブラシノリド、ブロモフェノキシム、ブトルアリン、カルボン、カテキン、クロルフェナック、クロルフェナック−ナトリウム、クロルフェンプロップ、クロルフルレノール、クロルフルレノール−メチル、クロリダゾン、クロルメコートクロリド、クロロ酢酸、クロルフタリム、クロルタール−ジメチル、シニドン、シニドン−エチル、シンメチリン、クロフェンセット、クロマゾン、クロキシホナック、シアナミド、シクラニリド、シクロピリモレート、6−イソペンチルアミノプリン、キネチン、ゼアチン、ダラポン、ダミノジッド、ダゾメット、n−デカノール、ジフェンゾコートメチル硫酸塩、2,6−ジイソプロピルナフタレレン、ジケグラック、ジケグラック−ナトリウム、ジメチピン、ジメチルヒ酸、ジニトラミン、ジノテルブ、ジクワット、ジクワットジブロミド、ジチオピル、DNOC、エンドタール、エンドタール−ジカリウム、エンドタール−ジナトリウム、エンドタール−モノ(N,N−ジメチルアルキルアンモニウム)、エタフルラリン、エトフメセート、エチルクロゼート(ethylchlozate)、硫酸第一鉄、フランプロップ、フランプロップ−M−イソプロピル、フランプロップ−M−メチル、フルクロラリン、フルフェンピル、フルフェンピル−エチル、フルメトラリン、フルミクロラック、フルミクロラック−ペンチル、フルミオキサジン、フルプロパネート、フルレノール、フルレノール−ブチル、フルレノール−ジメチルアンモニウム−メチル、フルリドン、フルロクロリドン、フルルタモン、フルチアセット、フルチアセット−メチル、ジベレリン酸(gibberillic acid)、ハラウキシフェン、ハロウキシフェン−メチル、ハロウキシフェン塩類、インダノファン、イソプロパリン、イソプロチオラン、マレイン酸ヒドラジド、メピコートクロリド、メタム、メチオゾリン、メチルアルソン酸、1−メチルシクロプロペン、イソチオシアン酸メチル、ニトロフェノラート混合物、ノナン酸、ノルフルラゾン、オレイン酸、オリザリン、オキサジクロメフォン、パラコート、パラコートジクロリド、ペンディメタリン、ペンタクロロフェノール、ペントキサゾン、石油、プロジアミン、ジヒドロジャスモン酸n−プロピル、ピリダフォル、ピリデート、キノクラミン、シントフェン、塩素酸ナトリウム、硫酸、タール油類、TCA、TCAナトリウム、テクナゼン、チアゾピル、トリアコンタノール、トリアファモン、トリフルラリン及び尿素硫酸塩];
    B6:(ヘタ)アリールカルボン酸類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    クロランベン、ジカンバ、ジカンバ塩類、2,3,6−TBA、クロピラリド、フルロキシピル、フルロキシピル−メチル、イナベンフィド、ピクロラム、トリクロピル、キンクロラック、キンメラック、インドール−3−イル酢酸、4−インドール−3−イル−酪酸、2−(1−ナフチル)アセトアミド、1−ナフチル酢酸、2−ナフチルオキシ酢酸];
    B7:有機リン化合物からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    アニロホス、ベンスリド、ビラナホス、ビラナホス−ナトリウム、ブチマホス(butimafos)、クラシホス、ホサミン、グルホシネート、グルホシネート塩、グルホシネート−アンモニウム、グルホシネート−ナトリウム、グルホシネート−P、L−グルホシネート−アンモニウム、L−グルホシネート−ナトリウム、グリホセート、グリホセート塩、グリホセート−イソプロピル−アンモニウム、グリホセート−アンモニウム、グリホセート−ジメチルアンモニウム、グリホセート−トリメシウム(=スルホセート)、グリホセート−ジアンモニウム、グリホセート−カリウム、グリホセート−ナトリウム、ピペロホス、エテホン及びトリブホス];
    B8:フェニルエーテル類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    アシフルオルフェン、アシフルオルフェン−ナトリウム、アクロニフェン、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン−エチル、ホメサフェン、ホメサフェン−ナトリウム、ハロサフェン、ラクトフェン、オキシフルオルフェン、ビフェノックス、エトキシフェン−エチル、クロメプロップ、クロプロップ、ジクロルプロップ、ジクロルプロップ−P、メコプロップ、メコプロップ−ナトリウム、メコプロップ−ブトチル、メコプロップ−P、メコプロップ−P−ブトチル、メコプロップ−P−ジメチルアンモニウム、メコプロップ−P−2−エチルヘキシル、メコプロップ−P−カリウム、4−CPA、2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、MCPA、MCPA−ブトチル、MCPA−ジメチルアンモニウム、MCPA−2−エチルヘキシル、MCPA−イソプロピルアンモニウム、MCPA−カリウム、MCPA−ナトリウム、MCPA−チオエチル、2,4−DB、MCPB、MCPB−メチル、MCPB−エチル−ナトリウム、
    クロジナホップ−エチル、クロジナホップ−プロパルギル、シハロホップ、シハロホップ−ブチル、ジクロホップ、ジクロホップ−メチル、ジクロホップ−P、ジクロホップ−P−メチル、フェノキサプロップ、フェノキサプロップ−P、フェノキサプロップ−P−エチル、フルアジホップ、フルアジホップ−ブチル、フルアジホップ−P、フルアジホップ−P−ブチル、ハロキシホップ、ハロキシホップ−P、メタミホップ、プロパキザホップ、キザロホップ(quizalafop)、キザロホップ(quizalafop)−エチル、キザロホップ(quizalafop)−P、キザロホップ(quizalafop)−P−エチル、キザロホップ(quizalafop)−P−テフリル];
    B9:ピリミジン類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    アンシミドール、フルルプリミドール、ピリミスルファン、ビスピリバック、ビスピリバック−ナトリウム、ピリベンゾキシム、ピリミノバック、ピリミノバック−メチル、ピリバムベンズ(pyribambenz)、ピリバムベンズ−イソプロピル、ピリバムベンズ−プロピル、ピリフタリド、ピリチオバック、ピリチオバック−ナトリウム、ベンズフェンジゾン、ブロマシル、ブタフェナシル、レナシル、サフルフェナシル、ターバシル、チアフェナシル、2−クロロ−4−フルオロ−5−[3−メチル−2,6−ジオキソ−4−(トリフルオロメチル)−3,6−ジヒドロピリミジン−1(2H)−イル]−N−[メチル(1−メチルエチル)スルファモイル]ベンズアミド、[(3−{2−クロロ−5−[2,6−ジオキソ−4−(トリフルオロメチル)−3,6−ジヒドロピリミジン−1(2H)−イル]−4−フルオロフェノキシ}ピリジン−2−イル)オキシ]酢酸エチル];
    B10:(チオ)尿素類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    クミルロン、クロルブロムロン、クロロトルロン、クロロクスロン、ダイムロン、ジフルフェンゾピル、ジフルフェンゾピル−ナトリウム、ジメフロン、ジウロン、フルオメツロン、ホルクロルフェニュロン、イソプロツロン、カルブチレート、リニュロン、メチルダイムロン、メトブロムロン、メトクスロン、モノリニュロン、ネブロン、シデュロン、テルブカルブ、チジアズロン、メチウロン、テブチウロン、メタベンズチアズロン];
    B11:トリアジン類からなるもの[これは、以下のものを包含する:
    トリアジフラム、インダジフラム、アトラジン、シアナジン、シプラジン、プロパジン、シマジン、テルブメトン、テルブチラジン、トリエタジン、プロメトン、アメトリン、ジメタメトリン、プロメトリン、シメトリン、テルブトリン、エトジン(ethozin)、ヘキサジノン、メタミトロン、メトリブジン、トリフルジモキサジン(trifludimoxazin)]
    から選択される1以上、好ましくは一つの成分(B)を含む組成物。
  9. ベノキサコール(C1)、クロキントセット−メキシル(C2)、シプロスルファミド(C3)、ジクロルミド(C4)、フェンクロリム(C5)、フェンクロラゾール(C6)、フリラゾール(C7)、イソキサジフェン−エチル(C8)、メフェンピル−ジエチル(C9)、CAS 71526−07−3の4−(ジクロロアセチル)−1−オキサ−4−アザスピロ[4.5]デカン(C10)、CAS 52836−31−4の2,2,5−トリメチル−3−(デクロロアセチル)−1,3−オキサゾリジン(C11)、CAS 129531−12−0の2−メトキシ−N−({4−[(メチルカルバモイル)アミノ]フェニル}スルホニル)ベンズアミド(C12)からなる群から選択される1種類以上の薬害軽減剤(成分C)をさらに含む請求項8に記載の組成物。
  10. 1以上、好ましくは一つの成分(B)が、下記の下位群B1からB11:
    B1:クレトジム、メソトリオン、スルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン及びビシクロピロンからなるもの;
    B2:アセトクロール、ジクロスラム、ジフルフェニカン、フルメツラム、ホラムスルフロン、ニコスルフロン、S−メトラクロール、チエンカルバゾン−メチル、ジメテナミド−P、リムスルフロン、アラクロール、クロリムロン−エチル、フロラスラム、フルカルバゾン−ナトリウム、フルフェナセット、ヨードスルフロン−メチル−ナトリウム、エトキシスルフロン、イプフェンカルバゾン、メトスルフロン−メチル、プロポキシカルバゾン−ナトリウム及びトリベヌロン−メチルからなるもの;
    B3:ブロモキシニル及びアイオキシニルからなるもの;
    B4:アミカルバゾン、カルフェントラゾン−エチル、イマザピル、イマゼタピル、イソキサフルトール、オキサジアルギル、オキサジアゾン、ピラスルホトール、ピロキサスルホン及びトプラメゾンからなるもの;
    B5:パラコートジクロリド、ペンディメタリン、アミノピラリド、フルミオキサジン、フルルタモン、ハラウキシフェン、ハラウキシフェン−メチル、ハラウキシフェン塩類、ピリデート、ベンタゾン、シニドン−エチル、クロマゾン及びトリフルラリンからなるもの;
    B6:ジカンバ、ジカンバ塩類及びフルロキシピルからなるもの;
    B7:グルホシネート、グルホシネート−アンモニウム、L−グルホシネート−アンモニウム、グリホセート、グリホセート−イソプロピル−アンモニウムからなるもの;
    B8:2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、フェノキサプロップ−P−エチル、ラクトフェン、フルアジホップ−P−ブチル、アクロニフェン及びハロキシホップ−Pからなるもの;
    B9:サフルフェナシルからなるもの;
    B10:ジウロン、ジフルフェンゾピル及びフルオメツロンからなるもの;並びに
    B11:アトラジン、インダジフラム、テルブチラジン及びメトリブジンからなるもの
    から選択される、請求項8及び9のいずれか1項に記載の組成物。
  11. 1以上、好ましくは一つの成分(B)が、下記の下位群B1からB11:
    B1:クレトジム、メソトリオン、ビシクロピロン及びテンボトリオンからなるもの;
    B2:アセトクロール、ジクロスラム、ジフルフェニカン、ホラムスルフロン、ニコスルフロン、S−メトラクロール、チエンカルバゾン−メチル、ジメテナミド−P、リムスルフロン、アラクロール、クロリムロン−エチル、フロラスラム、フルカルバゾン−ナトリウム、フルフェナセット及びヨードスルフロン−メチル−ナトリウムからなるもの;
    B3:ブロモキシニルからなるもの;
    B4:カルフェントラゾン−エチル、イマザピル、イマゼタピル、イソキサフルトール、オキサジアルギル、オキサジアゾン及びピロキサスルホンからなるもの;
    B5:パラコートジクロリド、ペンディメタリン、アミノピラリド、フルミオキサジン、フルルタモン、ハラウキシフェン、ハラウキシフェン−メチル、ハラウキシフェン塩類及びピリデートからなるもの;
    B6:ジカンバ及びジカンバ塩類からなるもの;
    B7:グルホシネート−アンモニウム及びグリホセートからなるもの;
    B8:2,4−D、2,4−D−ブトチル、2,4−D−ブチル、2,4−D−コリン、2,4−D−ジメチルアンモニウム、2,4−D−ジオラミン、2,4−D−エチル、2,4−D−2−エチルヘキシル、2,4−D−イソブチル、2,4−D−イソオクチル、2,4−D−イソ−プロピル−アンモニウム、2,4−D−カリウム、2,4−D−トリイソプロパノールアンモニウム、2,4−D−トロラミン、フェノキサプロップ−P−エチル、ラクトフェン及びフルアジホップ−P−ブチルからなるもの;
    B9:サフルフェナシルからなるもの;
    B10:ジウロン及びジフルフェンゾピルからなるもの;並びに
    B11:アトラジン、インダジフラム、テルブチラジン及びメトリブジンからなるもの
    から選択される、請求項7及び8のいずれか1項に記載の組成物。
JP2016534655A 2013-11-28 2014-11-25 Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−n−(1−メチル−1h−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用 Pending JP2016538300A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13194780.6 2013-11-28
EP13194780 2013-11-28
PCT/EP2014/075454 WO2015078828A2 (en) 2013-11-28 2014-11-25 Use of 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-n-(1-methyl-1h-tetrazol-5-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide or its salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2016538300A true JP2016538300A (ja) 2016-12-08

Family

ID=49674203

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016534655A Pending JP2016538300A (ja) 2013-11-28 2014-11-25 Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域で望ましくない植物を防除するための2−クロロ−3−(メチルスルファニル)−n−(1−メチル−1h−テトラゾール−5−イル)−4−(トリフルオロメチル)ベンズアミド又はそれの塩の使用

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10159249B2 (ja)
EP (1) EP3073828A2 (ja)
JP (1) JP2016538300A (ja)
KR (1) KR20160090823A (ja)
CN (1) CN106414741A (ja)
AR (1) AR098560A1 (ja)
AU (2) AU2014356608B2 (ja)
BR (1) BR112016011883A2 (ja)
CA (1) CA2931549A1 (ja)
EA (1) EA201600415A1 (ja)
MX (1) MX2016006624A (ja)
WO (1) WO2015078828A2 (ja)
ZA (1) ZA201702870B (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020022579A1 (ko) 2018-07-23 2020-01-30 삼성디스플레이주식회사 유기 발광 소자
WO2020166477A1 (ja) * 2019-02-13 2020-08-20 住友化学株式会社 除草剤組成物および雑草防除方法
EP3706185A1 (en) 2019-02-15 2020-09-09 Samsung Display Co., Ltd. Organic light-emitting device and electronic apparatus including the same
EP3823053A1 (en) 2019-11-14 2021-05-19 Samsung Display Co., Ltd. Organic light-emitting device and apparatus including the same

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA117816C2 (uk) * 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
EA038476B1 (ru) * 2015-08-07 2021-09-03 Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт Комбинация, содержащая 2-(2,4-дихлорфенил)метил-4,4-диметил-3-изоксазолидон и мефенпир-диэтил, и способ борьбы с нежелательными растениями
MX2018003044A (es) * 2015-09-11 2018-04-11 Bayer Cropscience Ag Variantes de hppd y metodos de uso.
CN105420172B (zh) * 2016-01-08 2018-12-14 南京农业大学 一种嗪草酮农药残留降解菌及其生产的菌剂和应用
AU2017229131A1 (en) 2016-03-07 2018-09-27 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Herbicidal compositions containing 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-N-(1-methyl-1H-tetrazole-5-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide
WO2018162330A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Hppd variants and methods of use
WO2018165091A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
US11180770B2 (en) 2017-03-07 2021-11-23 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC HPPD variants and methods of use
US11371056B2 (en) 2017-03-07 2022-06-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC HPPD variants and methods of use
WO2018162329A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Hppd variants and methods of use
CN107410320A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含嘧啶肟草醚的除草组合物
CN107410345A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含氯吡嘧磺隆的除草组合物
CN107410313A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含氰氟草酯的除草组合物
CN107410344A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含五氟磺草胺和嘧苯胺磺隆的除草组合物
CN107279170A (zh) * 2017-06-23 2017-10-24 北京科发伟业农药技术中心 氟噻草胺、氟唑磺隆和氨唑草酮的除草组合物
CN107372565A (zh) * 2017-08-04 2017-11-24 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和唑啉草酯的除草组合物
CN107455381A (zh) * 2017-08-11 2017-12-12 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和trifludimoxazin的除草组合物
CN107455382A (zh) * 2017-08-11 2017-12-12 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和pyroxasulfone的除草组合物
US20220132854A1 (en) 2019-02-19 2022-05-05 Gowan Company, L.L.C. Stable liquid compositions and methods of using the same
CN110786325B (zh) * 2019-05-18 2021-06-22 陆琳 一种缓解氟磺胺草醚对部分落叶乔木药害的方法
CN114431249A (zh) * 2022-02-15 2022-05-06 华丰作物科技(黑龙江)有限公司 一种有机无机复合型玉米田用除草剂及其制备方法
WO2023173103A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 United Industries Corporation Composition and method for weed and grass control
WO2024068473A1 (de) * 2022-09-27 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid/safener-kombinationen basierend auf safenern aus der klasse der substituierten [(1,5-diphenyl1h-1,2,4-triazol-3-yl)oxy]essigsäuren sowie deren salze

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010085705A2 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
WO2012130685A1 (en) * 2011-03-25 2012-10-04 Bayer Cropscience Ag Use of n-(tetrazol-4-yl)- or n-(triazol-3-yl)arylcarboxamides or their salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides
JP2013536817A (ja) * 2010-09-01 2013-09-26 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー N−(テトラゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類及びn−(トリアゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類並びに除草剤としてのそれらの使用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4885025A (en) * 1986-12-23 1989-12-05 Fmc Corporation Herbicidal tetrazolinones and use thereof
JP2004528821A (ja) 2000-12-07 2004-09-24 シンジェンタ リミテッド 除草剤抵抗性植物
CN105368799A (zh) 2008-04-14 2016-03-02 拜耳作物科学公司 新的突变羟基苯基丙酮酸双加氧酶,dna序列和耐受hppd抑制剂除草剂的植物分离
BR112012015690A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
EA201290559A1 (ru) 2009-12-23 2013-01-30 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Растения, устойчивые к гербицидам - ингибиторам hppd
AU2010334818B2 (en) 2009-12-23 2015-07-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
MX2012007358A (es) 2009-12-23 2012-11-06 Bayer Ip Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd.
AR079882A1 (es) 2009-12-23 2012-02-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
CN103237894A (zh) 2010-08-13 2013-08-07 先锋国际良种公司 包含具有羟基苯丙酮酸双加氧酶(hppd)活性的序列的组合物和方法
CA2872374A1 (en) * 2012-05-03 2013-11-07 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-(tetrazol-5-yl)- and n-(triazol-5-yl)arylcarboxamide salts and use thereof as herbicides
UA117810C2 (uk) 2012-05-24 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидні композиції, які містять n-(тетразол-5-іл)арилкарбоксаміди
UA119532C2 (uk) 2012-09-14 2019-07-10 Байєр Кропсайєнс Лп Варіант hppd та спосіб його застосування
UA117816C2 (uk) 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
CA2942171C (en) * 2014-03-11 2023-05-09 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
JP2017514457A (ja) * 2014-03-11 2017-06-08 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト Hppdバリアントおよび使用方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010085705A2 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
JP2013536817A (ja) * 2010-09-01 2013-09-26 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー N−(テトラゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類及びn−(トリアゾール−5−イル)アリールカルボキサミド類並びに除草剤としてのそれらの使用
WO2012130685A1 (en) * 2011-03-25 2012-10-04 Bayer Cropscience Ag Use of n-(tetrazol-4-yl)- or n-(triazol-3-yl)arylcarboxamides or their salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020022579A1 (ko) 2018-07-23 2020-01-30 삼성디스플레이주식회사 유기 발광 소자
WO2020166477A1 (ja) * 2019-02-13 2020-08-20 住友化学株式会社 除草剤組成物および雑草防除方法
EP3706185A1 (en) 2019-02-15 2020-09-09 Samsung Display Co., Ltd. Organic light-emitting device and electronic apparatus including the same
EP3823053A1 (en) 2019-11-14 2021-05-19 Samsung Display Co., Ltd. Organic light-emitting device and apparatus including the same

Also Published As

Publication number Publication date
CN106414741A (zh) 2017-02-15
CA2931549A1 (en) 2015-06-04
WO2015078828A2 (en) 2015-06-04
AU2014356608A1 (en) 2016-05-19
US10159249B2 (en) 2018-12-25
KR20160090823A (ko) 2016-08-01
WO2015078828A3 (en) 2015-10-01
US20170027174A1 (en) 2017-02-02
ZA201702870B (en) 2018-08-29
EP3073828A2 (en) 2016-10-05
AU2018267571A1 (en) 2018-12-06
BR112016011883A2 (pt) 2017-09-26
MX2016006624A (es) 2016-12-02
AU2014356608B2 (en) 2018-09-06
EA201600415A1 (ru) 2016-10-31
AR098560A1 (es) 2016-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10159249B2 (en) Use of 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-N-(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide or its salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to HPPD inhibitor herbicides
JP5847921B2 (ja) Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物の区域で望ましくない植物を防除するためのn−(テトラゾール−4−イル)−もしくはn−(トリアゾール−3−イル)アリールカルボキサミド類またはそれらの塩の使用
US8853495B2 (en) Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
JP5871814B2 (ja) Hppd阻害型除草剤に耐性を有する植物
JP5852009B2 (ja) Hppd阻害型除草剤に耐性を有する植物
US8853496B2 (en) Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
US8847017B2 (en) Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
JP2017514789A (ja) Hppd阻害薬型除草剤に対して耐性を示すトランスジェニック作物植物の区域内における望ましくない植物を防除するためのn−(1,3,4−オキサジアゾール−2−イル)アリールカルボキサミド類又はそれらの塩の使用
JP5847920B2 (ja) Hppdインヒビター除草剤に対して耐性であるトランスジェニック作物植物の領域において望まぬ植物を制御するためのn−(1,2,5−オキサジアゾール−3−イル)ベンズアミドの使用
WO2013092552A1 (en) Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides.
WO2013092551A1 (en) Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
WO2013092555A1 (en) Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20171122

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20181010

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20181016

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20190110

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20190128

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20190423

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422

Effective date: 20190605

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20190605

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20190607

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20190806

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20191112