KR20160090823A - Hppd 저해제 제초제에 대해서 내성인 형질전환 농작물 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-n-(1-메틸-1h-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도 - Google Patents

Hppd 저해제 제초제에 대해서 내성인 형질전환 농작물 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-n-(1-메틸-1h-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도 Download PDF

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Abstract

(I) (a) 아베나(Avena), (b) 슈도모나스(Pseudomonas), (c) 시네코코코이데아에(Synechococcoideae), (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), (e) 로도코커스(Rhodococcus), (f) 피크로필라세아에(Picrophilaceae), (g) 코르디아(Kordia)로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체, 바람직하게 슈도모나스의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) WO 2012/021785에 기술된 바와 같이 각각 돌연변이되는 돌연변이 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max) HPPD를 코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하므로써 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 작물의 영역에서 원하지 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도.

Description

HPPD 저해제 제초제에 대해서 내성인 형질전환 농작물 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도{USE OF 2-CHLORO-3-(METHYLSULFANYL)-N-(1-METHYL-1H-TETRAZOL-5-YL)-4-(TRIFLUOROMETHYL)BENZAMIDE OR ITS SALTS FOR CONTROLLING UNWANTED PLANTS IN AREAS OF TRANSGENIC CROP PLANTS BEING TOLERANT TO HPPD INHIBITOR HERBICIDES}
본 발명은 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 농작물의 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다.
WO2012/028579 (PCT/EP2011/064820)에서는 여러 개의 신규한 N-(테트라졸-5-일)- 또는 N-(트리아졸-3-일)아릴카복사미드와 잡초 방제를 위한 HPPD 저해제 제초제로서 그의 용도를 기술하였고, WO2012/130685 (PCT/EP2012/054981)에서는 형질전환 식물에 대한 N-(테트라졸-5-일)- 또는 N-(트리아졸-3-일)아릴카복사미드 및 특정한 형질전환 식물에 적용될 별칭의 N-(테트라졸-5-일)- 또는 N-(트리아졸-3-일)아릴카복사미드의 용도를 일반적으로 기술하였다.
HPPD 저해제 제초제는 이들이 빠르게 분해되는 옥수수 (Zea mays)와 같은, 대사 내성(metabolic tolerance)을 나타내는 농작물에서 풀 및/또는 광엽 잡초에 대해 사용될 수 있다[Schulz et al., (1993). FEBS letters, 318, 162-166; Mitchell et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 120-128; Garcia et al., (2000) Biochem., 39, 7501-7507; Pallett et al., (2001) Pest Management Science, Vol 57, 133-142]. 이들 HPPD 저해제 제초제의 범위를 넓히기 위해서, 몇 가지의 노력이 식물, 특히 수준이 낮은 대사 내성이 있거나 없는 식물에게 작물 현장조건 하에서 허용되는 내성 수준을 부여하기 위하여 개발되었다.
한편, 형질전환 식물은 호모겐티세이트 (homogentisate)의 HPPD-매개된 생산을 우회하거나 (US 6,812,010), 민감성 효소를 과발현시켜 식물에서 제초제와 관련하여 충분한 양의 표적 효소의 생산이 수행되도록 조작되었다 [WO96/38567].
대안적으로, HPP의 호모겐티세이트로의 변형을 촉진시키는 그의 특성을 유지하면서 돌연변이 전의 천연 HPPD보다 HPPD 억제 제초제에 대해서 덜 민감한 표적 효소를 수득하도록 다양한 위치에서 돌연변이된 HPPD 단백질을 발현하는 형질전환 식물이 생성되었다(예를 들어, EP496630, WO 99/24585 참조).
보다 최근에, 담배 및 대두의 색소체 게놈 내로의 슈도모나스(Pseudomonas) HPPD 유전자의 도입이 적어도 하나의 HPPD 저해제의 발아-후 적용에 대한 내성까지를 부여하여 핵 변형보다 더 효과적인 것으로 나타났다(Dufourmantel et al., 2007, Plant Biotechnol J.5(1):118-33).
WO2009/144079에는 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) HPPD 단백질의 위치 336에서 돌연변이된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 핵산 서열, 및 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 식물을 수득하기 위한 그의 용도가 기술되어 있다.
US 61/701,037(2012년 9월 14일 출원), US 61/766,057(2013년 2월 18일 출원), 및 US 61/790,404(2013년 3월 15일 출원)를 우선권으로 하는 국제특허출원 PCT/US2013/59598 (WO2014/043435) 하의 PCT 출원(2013년 9월 13일 출원)에서는 다양한 부위에 돌연변이를 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 다른 돌연변이체와 특정한 HPPD 저해제 제초제에 대한 저항성(restistance)을 제공하는 이들의 능력에 대하여 기술하였다. 이러한 돌연변이체 일부, 즉 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환을 포함(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 6에 기재)하거나, (ii) 위치 335에서 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환을 포함(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8에 기재)하거나, (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환을 포함(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16에 기재)하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이체는 이에 각각 그의 약어 PfHPPDEvo33, PfHPPDEvo40, 및 PfHPPDEvo41로 HPPD 저해제 제초제에 대한 내성(tolerance)을 제공하는 개별 형질전환 식물의 제조와 관련하여 참조로 포함되었다.
앞서, 먼저 기재된 아미노산은 야생형 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질 내에 존재하는 아미노산을 특정하고 괄호 안의 글자는 3글자 코드의 각 아미노산을 나타내는 한편, 괄호 앞에 주어진 글자는 1글자 코드의 개별 아미노산을 나타낸다.
WO 04/024928에서, 발명자들은 이들 식물의 세포 내로 HPP 전구체의 흐름을 증가시킴으로써 식물의 세포에서 프레닐퀴논 생합성 (예를 들어, 플라스토퀴논, 토코페롤의 합성)을 증가시키고자 하였다. 이것은 프레페네이트-데하이드로게나제 (PDH)의 과발현에 의해 상기 전구체의 합성을 "시키메이트 (shikimate)" 경로에 연결시킴으로써 수행되었다. 이들은 또한, PDH 효소를 코딩하는 유전자에 의한 식물의 형질전환이 HPPD 저해제에 대한 상기 식물의 내성을 증가할 수 있도록 한다는 점에 주목하였다.
WO 2002/046387에는, HPPD를 코딩하는 아베나 사티바 (Avena sativa)로부터 수득된 유전자가 이러한 유전자를 과발현하며, 따라서 다양한 HPPD-억제 제초제에 대한 내성을 야기하는 식물을 생성시키기 위해서 기술되었다.
WO 2008/150473에는, HPPD 저해제 제초제에 대한 개선된 내성을 수득하기 위한 두 가지 별개의 내성 기전, 즉 돌연변이체 HPPD 효소에 대해 코딩하는 변형된 아베나 사티바 (Avena sativa) 유전자 및 CYP450 옥수수 모노옥시게나제 (nsf1 유전자)의 조합이 예시되어 있지만, 두 가지 단백질의 조합에 근거한 상승적 효과를 입증하는 어떤 데이터도 기술되지 않았다.
WO 2010/085705에는, 아베나 사티바 HPPD의 몇 가지 돌연변이체뿐만 아니라 이러한 돌연변이된 HPPD를 코딩하는 유전자를 포함하며, 따라서 비-돌연변이된 HPPD에 비해 다양한 HPPD 저해제 제초제에 대해 증가된 내성을 야기하는 식물이 기술되어 있다.
WO 2012/021785에는, 다양한 유기체의 HPPD 단백질, 바람직하게 옥수수에서 얻어진 HPPD에 따른 여러 돌연변이체가 기술되었다. 시험관 내의 이같은 돌연변이된 HPPD 효소뿐만 아니라 이처럼 돌연변이된 HPPD를 코딩하는 유전자를 포함하고, 그리하여 비-돌연변이된 HPPD에 비해 다양한 HPPD 저해제 제초제에 대해 증가된 내성을 야기하는 식물로부터 데이터를 얻었다.
최근, 다양한 유기체 유래의 HPPD 효소를 코딩하는 몇 가지 새로운 유전자가 확인되었으며, 다양한 HPPD 저해제 제초제의 적용과 관련한 내성의 작물학적으로 유용한 수준을 나타내는 농작물을 수득하기 위해 사용되었고, 예컨대 하기한 것들이 있으며 여기에서 HPPD 저해제 제초제에 대한 내성을 제공하는 개별 형질전환 식물의 생산에 관하여 참고로 인용되었다: (i) WO 2011/076877 (PCT/EP2010/070561)에 기술된 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae) 아과 및 그의 특정한 돌연변이체에 속하는 박테리아로부터 수득된 것, (ii) WO 2011/076882(PCT/EP2010/070567)에 기재된 블레파리스미다에 (Blepharismidae) 과에 속하는 원생생물로부터 수득된 것, (iii) WO 2011/076892 (PCT/EP2010/070578)에 기재된 로도코커스(Rhodococcus) 속 및 그의 특정한 돌연변이체에 속하는 박테리아로부터 수득된 것, (iv) WO　2011/076885 (PCT/EP2010/070570)에 기재된 피크로필라세아에 (Picrophilaceae) 과에 속하는 유리아르카에오타 (Euryarchaeota) 및 그의 특정한 돌연변이체로부터 수득된 것, 또는 (v) WO2011/076889(PCT/EP2010/070575)에 기재된 코르디아 (Kordia) 속 및 그의 특정한 돌연변이체에 속하는 박테리아로부터 수득된 것.
특정한 N-(테트라졸-5-일)아릴카복사미드, 즉 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 HPPD 저해제 제초제에 대한 내성을 부여하는 하나 이상의 유전자를 함유함으로써 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 농작물에 적용할 수 있는 것을 발견하였다.
본 발명의 요지는 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하여 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 농작물의 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 다음 화학식 (I)의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도이다:
Figure pct00001
(I) (a) 아베나(Avena), 바람직하게 아베나 사티바(Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에(Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종(Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자, 특히 바람직하게 옥수수(Zea mays)에서 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 25로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 27로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 29로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
본 발명에 따라 사용될 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)-벤즈아미드는 여기에 참고로 포함된 WO2012/028579에 상세하게 기술된 바와 같이 제조할 수 있다.
본 발명은 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드의 염에 관한 것으로, 바람직하게 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 암모늄, (C1-C4)-알킬암모늄, 디-(C1-C4-알킬)암모늄, 트리-(C1-C4-알킬)암모늄, 테트라-(C1-C4-알킬)암모늄, 트리-(C1-C4-알킬)설포늄, (C5- 또는 C6)-사이클로알킬암모늄, 또는 디-(C1-C2-알킬)벤질암모늄 염, 더욱 바람직하게 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 암모늄 염, 보다 더 바람직하게 소듐, 포타슘, 마그네슘, 칼슘, 암모늄 염, 매우 특별하게 소듐, 포타슘, 또는 암모늄 염을 의미한다.
WO2012/028579에 이미 기술된 바와 같이, 형질전환 식물에 대한 N-(테트라졸-5-일)아릴카복사미드와 본 발명에 따라 사용될 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드와 그의 염을 총칭적으로 커버하는 별칭된 N-(테트라졸-5-일)아릴카복사미드는 광범위한 스펙트럼의 경제적으로 중요한 단자엽 및 쌍자엽 한해살이 유해식물에 대해 우수한 제초제 효능을 갖는다. 활성 화합물들은 근경의 순, 뿌리줄기 및 방제가 어려운 다른 다년생 기관을 생성하는 다년생 잡초에도 효과적으로 작용한다.
따라서, 본 발명은 위에서 정의된 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 식물(예를 들어, 단자엽 또는 쌍자엽 잡초 같은 유해식물 또는 원치 않는 농작물), 종자(예를 들어, 낟알, 종자 또는 식물 번식체, 예컨대 괴경 또는 눈을 가진 순부) 또는 식물이 성장하는 영역(예를 들어, 경작 영역)에 적용하는 것을 포함하는, 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하여 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 농작물의 영역에서 원치 않는 식물을 방제하는 방법에 관한 것이다: (I) (a) 아베나(Avena), 바람직하게 아베나 사티바(Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/ 59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
다음 속의 단자엽 유해식물: 에이질롭스 (Aegilops), 아그로파이론 (Agropyron), 아그로스티스 (Agrostis), 알로페큐러스 (Alopecurus), 아페라 (Apera), 아베나 (Avena), 브라키아리아 (Brachiaria), 브로무스 (Bromus), 센크러스 (Cenchrus), 코멜리나 (Commelina), 사이노돈 (Cynodon), 사이페러스 (Cyperus), 닥틸록테늄(Dactyloctenium), 디기타리아 (Digitaria), 에키노클로아 (Echinochloa), 엘레오카리스 (Eleocharis), 엘로이신 (Eleusine), 에라그로스티스 (Eragrostis), 에리오클로아 (Eriochloa), 페스투카 (Festuca), 핌브리스틸리스 (Fimbristylis), 헤테란테라 (Heteranthera), 임페라타 (Imperata), 이스케뭄 (Ischaemum), 렙토클로아 (Leptochloa), 롤리움 (Lolium), 모노코리아 (Monochoria), 파니쿰 (Panicum), 파스팔룸 (Paspalum), 팔라리스 (Phalaris), 플레움 (Phleum), 포아 (Poa), 로트보엘리아 (Rottboellia), 사기타리아 (Sagittaria), 시르푸스 (Scirpus), 세타리아 (Setaria), 소르검 (Sorghum).
다음 속의 쌍자엽 잡초: 아부틸론 (Abutilon), 아마란투스 (Amaranthus), 암브로시아 (Ambrosia), 아노다 (Anoda), 안테미스 (Anthemis), 아페인스 (Aphanes), 아르테미시아 (Artemisia), 아트리플렉스 (Atriplex), 벨리스 (Bellis), 비덴스 (Bidens), 캅셀라 (Capsella), 카르두스 (Carduus), 카시아 (Cassia), 센타우레아 (Centaurea), 케노포듐 (Chenopodium), 시르시움 (Cirsium), 컨볼부루스 (Convolvulus), 다투라 (Datura), 데스모듐 (Desmodium), 에멕스 (Emex), 에리시뭄 (Erysimum), 유포르비아 (Euphorbia), 갈레옵시스 (Galeopsis), 갈린소가 (Galinsoga), 갈륨 (Galium), 히비스커스 (Hibiscus), 이포모에아 (Ipomoea), 코키아 (Kochia), 라뮴 (Lamium), 레피듐 (Lepidium), 린데르니아 (Lindernia), 마트리카리아 (Matricaria), 멘타 (Mentha), 머큐리알리스 (Mercurialis), 멀루고 (Mullugo), 마이오소티스 (Myosotis), 파파베르 (Papaver), 파르비티스 (Pharbitis), 플란타고 (Plantago), 폴리고눔 (Polygonum), 포르투라카 (Portulaca), 라눈쿨러스 (Ranunculus), 라파누스 (Raphanus), 로리파 (Rorippa), 로탈라 (Rotala), 루멕스 (Rumex), 살소라 (Salsola), 세네시오 (Senecio), 세스바니아 (Sesbania), 시다 (Sida), 시나피스 (Sinapis), 솔라눔 (Solanum), 손커스 (Sonchus), 스페노클레아 (Sphenoclea), 스텔라리아 (Stellaria), 타락사쿰 (Taraxacum), 트라스피 (Thlaspi), 트리폴륨 (Trifolium), 우르티카 (Urtica), 베로니카 (Veronica), 비올라 (Viola), 크산튬 (Xanthium).
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염이 적용될 수 있는 경제적으로 중요한 작물의 형질전환 농작물은, 예를 들어 아라키스 (Arachis), 베타 (Beta), 브라시카 (Brassica), 쿠쿠미스 (Cucumis), 쿠쿠르비타 (Cucurbita), 헬리안투스 (Helianthus), 다우쿠스 (Daucus), 글리신(Glycine), 고시퓸(Gossypium), 이포모에아(Ipomoea), 락투카 (Lactuca), 리눔(Linum), 라이코페르시콘 (Lycopersicon), 니코티아나 (Nicotiana), 파세올루스 (Phaseolus), 피숨 (Pisum), 솔라눔 (Solanum), 비시아 (Vicia) 속의 쌍자엽 작물, 또는 알륨 (Allium), 아나나스 (Ananas), 아스파라거스 (Asparagus), 아베나, 호르데움(Hordeum), 오리자(Oryza), 파니쿰(Panicum), 사카룸(Saccharum), 세케일(Secale), 소르검(Sorghum), 트리티케일(Triticale), 트리티쿰(Triticum), 제아(Zea), 특히 제아 및 트리티쿰 속의 단자엽 작물이다.
이것이 본 발명이 바람직하게 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 아라키스(Arachis), 베타(Beta), 브라시카(Brassica), 쿠쿠미스(Cucumis), 쿠쿠르비타(Cucurbita), 헬리안투스(Helianthus), 다우쿠스(Daucus), 글리신(Glycine), 고시퓸(Gossypium), 이포모에아(Ipomoea), 락투카(Lactuca), 리눔(Linum), 라이코페르시콘 (Lycopersicon), 니코티아나 (Nicotiana), 파세올루스 (Phaseolus), 피숨 (Pisum), 솔라눔 (Solanum), 비시아 (Vicia) 속의 쌍자엽 작물, 또는 알륨 (Allium), 아나나스 (Ananas), 아스파라거스 (Asparagus), 아베나 (Avena), 호르데움 (Hordeum), 오리자 (Oryza), 파니쿰 (Panicum), 사카룸 (Saccharum), 세케일 (Secale), 소르검 (Sorghum), 트리티케일 (Triticale), 트리티쿰 (Triticum), 제아 (Zea), 특히 제아 및 트리티쿰 속의 단자엽 작물에서 식물(예를 들어, 단자엽 또는 쌍자엽 잡초 같은 유해식물 또는 원치 않는 농작물), 종자(예를 들어, 낟알, 종자 또는 식물 번식체, 예컨대 괴경 또는 눈을 가진 순부) 또는 식물이 성장하는 영역(예를 들어, 경작 영역)에 적용하는 것을 포함하는, 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하여 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 농작물의 영역에서 원치 않는 식물을 방제하는 상기한 방법에 관한 것인지의 이유이다: (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 이들의 염은 유용한 식물 및 관상 식물, 예를 들어, 밀, 보리, 호밀, 귀리, 수수/기장, 쌀, 카사바 및 옥수수와 같은 곡물류 또는 사탕무, 사탕수수, 목화, 대두, 평지, 감자, 토마토, 완두콩 및 그 밖의 다른 식물류의 경제적으로 중요한 형질전환 작물에서 사용하는 것이 바람직하며, 여기에서 상기 작물은 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유한다: (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
본 발명은 또한, HPPD 저해제인 제초제에 대한 내성을 식물에 부여하도록 할 수 있는 코딩 서열로서 또는 마커 유전자로서 HPPD를 코딩하는 핵산의 식물을 형질전환시키는 방법에서의 용도, 및 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 식물에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다: (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
작물의 상업적 생산에 있어서는, 신뢰할 수 있는 농약 관리 하에 농작물의 필드 (field)로부터 원치 않는 식물 (즉, "잡초")를 제거하는 것이 바람직하다. 이상적인 처리는 전체 필드에 적용될 수 있지만, 농작물은 영향이 없게 놓아두면서 원치 않는 식물만을 제거할 수 있는 것일 수 있다. 이러한 처리 시스템의 한가지는 제초제를 제초제-내성 농작물의 필드에 스프레이하는 경우에, 비-제초제-내성 잡초는 사멸시키거나 심하게 손상시키면서 농작물은 계속해서 잘 자랄 수 있도록, 제초제에 대해 내성인 농작물의 사용을 포함할 수 있다. 이상적으로, 이러한 처리 시스템은 잡초 방제가 유연성 및 경제성의 최상의 가능한 조합을 제공할 수 있도록 다양한 제초제 특성을 이용할 수 있다. 예를 들어, 개별적인 제초제는 필드에서 상이한 수명을 가지며, 일부의 제초제는 이들이 필드에 적용된 후에 존속하며, 비교적 긴 시간 동안 효과적인 반면에 다른 제초제는 다른 것 및/또는 비-활성 화합물로 빠르게 분해된다. 이상적인 처리 시스템은 재배자가 제초제의 선택을 특별한 상황에 맞출 수 있도록 상이한 제초제의 사용을 허용할 수 있다.
다수의 제초제-내성 농작물을 현재 상업적으로 이용할 수 있지만, 다수의 상업적 제초제 및 제초제/작물 조합에 대해 야기된 한 가지 문제는 개개의 제초제가 전형적으로 통상적인 잡초 종에 대해 불완전한 활성 스펙트럼을 갖는다는 점이다. 한동안 사용되어온 대부분의 개개 제초제의 경우에, 제초제 저항성 잡초 종 및 생물형 (biotypes)의 집단이 만연해졌다[예를 들어, Tranel 및 Wright (2002) Weed Science 50: 700-712; Owen 및 Zelaya (2005) Pest Manag . Sci . 61: 301-311 참조]. 하나 이상의 제초제에 대해서 저항성인 형질전환 식물은 기술되어 있다[예를 들어, W02005/012515 참조]. 그러나, 작물 생산, 잡초 방제 옵션, 잔류 잡초 방제의 확대의 모든 관점에서의 개선 및 작물 수율에서의 개선이 지속적으로 요구된다.
HPPD 저해제 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 내성을 수행하기 위해 형질전환 식물에서 작용하는 하나 이상의 HPPD 단백질(들) 또는 그의 돌연변이체를 코딩하는 위에서 정의된 키메릭 유전자(들)은 유리하게는 식물에서, 이러한 식물에 유용한 작물학적 특성을 부여하는 단백질 또는 RNA를 코딩하는 다른 유전자와 조합된다. 형질전환된 식물에 유용한 작물학적 특성을 부여하는 단백질 또는 RNA를 코딩하는 유전자 중에서는, 그들의 화학구조에 따라 HPPD 저해제 제초제와는 다른 하나 이상의 제초제에 내성을 부여하는 단백질을 코딩하는 DNA 서열, 및 특정 곤충에 대한 내성을 부여하는 다른 것, 특정 질병 및/또는 생물 및 비생물적 스트레스에 대한 내성을 부여하는 것, 선충 또는 곤충 방제를 제공하는 RNA를 코딩하는 DNA 등이 언급될 수 있다.
이러한 유전자는 특히 공개된 PCT 특허출원 WO91/02071 및 WO95/06128에 기술되어 있다.
형질전환된 식물 세포 및 식물에 특정의 제초제에 대한 내성을 부여하는 단백질을 코딩하는 DNA 서열 중에서는, bar 또는 PAT 유전자 또는 글루포시네이트 제초제에 대한 내성을 부여하는 WO2009/152359에 기술된 스트렙토마이세스 코엘리칼라 (Streptomyces coelicolor) 유전자, 글리포세이트 및 그의 염과 같이 표적으로 EPSPS를 갖는 제초제에 대한 내성을 부여하는 적합한 EPSPS를 코딩하는 유전자 [US 4,535,060, US 4,769,061, US 5,094,945, US 4,940,835, US 5,188,642, US 4,971,908, US 5,145,783, US 5,310,667, US 5,312,910, US 5,627,061, US 5,633,435], 또는 글리포세이트 옥시도리덕타제를 코딩하는 유전자 [US 5,463,175]가 언급될 수 있다.
표적으로 EPSPS를 갖는 제초제에 대한 내성을 부여하는 적합한 EPSPS를 코딩하는 DNA 서열 중에서는, 더욱 특히 식물 EPSPS, 특히 옥수수 EPSPS, 특히 두 개의 돌연변이, 특히 아미노산 위치 102에서의 돌연변이 및 아미노산 위치 106에서의 돌연변이(WO2004/074443)를 포함하며, 미국 특허출원 US　6566587에 기술되어 있는 것으로서 이하에서 이중 돌연변이체 옥수수 EPSPS 또는 2mEPSPS로 불리는 옥수수 EPSPS를 코딩하는 유전자, 또는 아그로박테리움(Agrobacterium)으로부터 단리된 EPSPS를 코딩하며 미국 특허 제5,633,435호의 서열번호 2 및 서열번호　3으로 기술되고 또한 CP4로 불리는 유전자가 언급될 수 있다.
표적으로 EPSPS를 갖는 제초제에 대한 내성을 부여하는 적합한 EPSPS를 코딩하는 DNA 서열 중에서는, 더욱 특히 아트로박터 글로비포르미스 (Arthrobacter globiformis)로부터의 EPSPS GRG23뿐만 아니라 돌연변이체 GRG23 ACE1, GRG23 ACE2, 또는 GRG23 ACE3, 특히 WO2008/100353에서의 서열번호　29의 GRG23(ace3)R173K와 같은 WO2008/100353에 기술된 GRG23의 돌연변이체 또는 변이체를 코딩하는 유전자가 언급될 수 있다.
EPSPS를 코딩하며, 더욱 특히 상기 유전자를 코딩하는 DNA 서열의 경우에, 유리하게는 이들 효소를 코딩하는 서열에 앞서 수송 펩타이드(transit peptide), 특히 미국 특허 제5,510,471 또는 5,633,448호에 기술된 "최적화 수송 펩타이드"가 선행한다.
WO 2007/024782에는 글리포세이트 및 적어도 하나의 ALS (아세토락테이트 신타제) 억제제에 대해 내성인 식물이 기술되어 있다. 더욱 구체적으로, GAT (글리포세이트-N-아세틸트랜스퍼라제) 폴리펩타이드 및 ALS 억제제에 대한 저항성을 부여하는 폴리펩타이드를 코딩하는 유전자를 함유하는 식물이 기술되어 있다.
US 6855533에는 돌연변이된 아라비돕시스 (Arabidopsis) ALS/AHAS 유전자를 함유하는 형질전환 담배 식물이 기술되었다.
US 6,153,401에는 대사화(metabolisation)에 의해 2,4-D (2,4-디클로로페녹시아세트산)에 대한 내성을 부여하는 2,4-D-모노옥시게나제를 코딩하는 유전자를 함유하는 식물이 기술되어 있다.
US7838733, WO2005/107437, WO2007/053482, WO2008/141154, 및 US2010/ 0251432에는 대사화에 의해 2,4-D (2,4-디클로로페녹시아세트산), 다른 페녹시 옥신 제초제 및 아릴옥시페녹시프로피오네이트 제초제에 대한 내성을 부여하는 2,4-D-디옥시게나제를 코딩하는 유전자를 함유하는 식물이 기술되어 있다.
US 2008/0119361 및 US 2008/0120739에는 대사화에 의해 디캄바 (dicamba) (3,6-디클로로-2-메톡시벤조산)에 대한 내성을 부여하는 디캄바 모노옥시게나제를 코딩하는 유전자를 함유하는 식물이 기술되어 있다.
WO2011/028833 및 WO2011/028832에는 알록시딤, 부트록시딤, 클레토딤, 클로프록시딤, 사이클록시딤, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤, 클로라지포프, 클로디나포프, 클로포프, 디클로포프, 페녹사프로프, 페녹사프로프-P, 펜티아프로프, 플루아지포프, 플루아지포프-P, 할록시포프, 할록시포프-P, 이속사피리포프, 프로파퀴자포프, 퀴잘로포프, 퀴잘로포프-P, 트리포프, 및 피녹사덴 또는 이들 제초제 중의 어떤 것의 작물학적으로 허용되는 염 또는 에스테르로 구성된 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 제초제에 대한 내성을 부여하는 돌연변이화 또는 재조합체 아세틸-코엔자임-A 카보일라제 (ACCase)를 코딩하는 유전자를 함유하는 식물이 기술되어 있다.
위에 언급된 모든 제초제 내성 형질은 다음을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하므로써 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염과 관련하여 식물에서 HPPD 내성을 수행하는 것들과 조합될 수 있다: (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열.
곤충에 대한 내성의 특징에 관한 단백질을 코딩하는 DNA 서열 중에서는, 더욱 특히 문헌에 광범하게 기술되고 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 Bt 단백질이 언급될 수 있다. 또한, 포토랍두스(Photorhabdus)와 같은 박테리아로부터 추출된 단백질이 언급될 수 있다 [WO 97/17432 & WO 98/08932].
곤충에 대한 내성의 신규한 특성을 부여하는, 관심이 있는 단백질을 코딩하는 이러한 DNA 서열 중에서는, 더욱 특히 문헌에 광범하게 기술되고 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 잘 알려진 Bt Cry 또는 VIP 단백질이 언급될 수 있다. 이들에는 Cry1F 단백질 또는 Cry1F 단백질로부터 유도된 하이브리드 (예를 들어, US 6,326,169; US 6,281,016; US 6,218,188에 기술된 하이브리드 Cry1A-Cry1F 단백질, 또는 그의 독성 단편), Cry1A-타입 단백질 또는 그의 독성 단편, 바람직하게는 Cry1Ac 단백질 또는 Cry1Ac 단백질로부터 유도된 하이브리드 (예를 들어, US 5,880,275에 기술된 하이브리드 Cry1Ab-Cry1Ac 단백질) 또는 EP451878에 기술된 바와 같은 Cry1Ab 또는 Bt2 단백질 또는 그의 살충성 단편, WO02/057664에 기술된 바와 같은 Cry2Ae, Cry2Af 또는 Cry2Ag 단백질 또는 그의 독성 단편, WO 2007/140256에 기술된 Cry1A.105 단백질(서열번호　7) 또는 그의 독성 단편, NCBI 수탁번호 ABG20428의 VIP3Aa19 단백질, NCBI 수탁번호 ABG20429의 VIP3Aa20 단백질 (WO 2007/142840에서 서열번호　2), COT202 또는 COT203 코튼 이벤트 (cotton events)에서 생산된 VIP3A 단백질 (각각 WO 2005/054479 및 WO 2005/054480), WO01/47952에 기술된 바와 같은 Cry 단백질, 문헌 [Estruch et al. (1996), Proc Natl Acad Sci U S A. 28;93(11):5389-94 및 US 6,291,156]에 기술된 바와 같은 VIP3Aa 단백질 또는 그의 독성 단편, WO98/08932에 기술된 바와 같은 포토랍두스로부터의 Tc-단백질과 같은 제노랍투스 (Xenorhabdus) (WO98/50427에 기술된 바와 같음), 세라티아 (Serratia) (특히, 세라티아 엔토모필라(S. entomophila)) 또는 포토랍투스 종 균주으로부터의 살충성 단백질[예를 들어, Waterfield et al., 2001, Appl Environ Microbiol. 67(11):5017-24; Ffrench-Constant 및 Bowen, 2000, Cell Mol Life Sci.; 57(5):828-33]이 포함된다. 또한, 상기 서열, 특히 그들의 독성 단편의 서열과 일부의 (1-10 개, 바람직하게는 1-5 개) 아미노산이 상이하거나, 플라스티드 (plastid) 수송 펩타이드와 같은 수송 펩타이드, 또는 또 다른 단백질 또는 펩타이드에 융합된 이들 단백질 중의 어느 하나의 모든 변이체 또는 돌연변이체가 여기에 포함된다.
본 발명은 또한 5' 및/또는 3' 위치, 적어도 5' 위치에서 숙주 유기체, 특히 식물 세포 또는 식물에서 작용할 수 있는 이종 조절 요소뿐만 아니라 코딩 서열을 포함하는 키메릭 유전자 (또는 발현 카세트)를 포함하는 형질전환 식물에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것으로, 코딩 서열은 (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 함유하는 코딩 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 함유한다.
또 다른 특별한 구체예에서, 본 발명은 전술한 바와 같은 키메릭 유전자를 포함하는 형질전환 식물에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이며, 여기에서 키메릭 유전자는 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 핵산 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 핵산 서열의 5' 위치에 함유되고 핵산 서열은 식물 수송 펩타이드를 코딩하며, 이 서열은 프로모터 영역과, (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 핵산 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 핵산 서열 사이에 수송 펩타이드/HPPD 융합 단백질의 발현을 허용하도록 배열된다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도, 또는 단독으로, 또는 HPPD 저해제에 대해 상이한 방식으로 작용하는 하나 이상의 다른 공지된 제초제와의 조합으로 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 이러한 식물, 식물 부분 또는 종자가 성장하거나 파종되는 토양 상에서의 용도에 관한 것이다.
추가의 특별한 구체예에서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염은 템보트리온, 술코트리온, 메소트리온, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온, 특히 템보트리온과 같은 트리케톤 (트리케톤 HPPD 저해제라 칭함), 디케토니트릴과 같은 디케톤 부류, 이속사플루톨과 같은 이속사졸 부류, 또는 피라설포톨, 피라졸레이트, 토프라메존, 벤조페납과 같은 피라졸리네이트 부류 (피라졸리네이트 HPPD 저해제라 칭함)로 구성된 그룹으로부터 선택된 HPPD 저해제 제초제와 조합물 또는 혼합물로, 동시에 또는 연속적으로 적용될 수 있으며, 보다 더 구체적으로 본 발명은 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/ 043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 상기한 HPPD 저해제 내성 식물, 식물 부분 또는 식물 종자에 대한 템보트리온, 메소트리온, 디케토니트릴, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온, 벤조페납, 피라설포톨, 피라졸레이트 및 술코트리온의 적용에 관한 것이다.
식물 세포 및 식물에서 작용하는 조절 서열로서는, 식물-리뷸로즈-비스카복실라제/옥시게나제 (RuBisCO) 소형 서브유니트 유전자 또는 사용될 수 있는 발현가능한 모든 적합한 공지의 프로모터와 같은 예를 들어, "광-의존적" 프로모터 또는 박테리아, 바이러스 또는 식물 기원의 "구성적 프로모터"와 같이 식물에서 자연적으로 발현되는 유전자의 모든 프로모터 서열, 특히 식물의 잎에서 특별하게 발현되는 프로모터를 사용할 수 있다. 식물 기원의 프로모터 중에서는 EP 0 507 698 A1에 기술된 바와 같은 히스톤 프로모터, 쌀 액틴 프로모터 (US 5,641,876), 또는 식물 유비퀴틴 프로모터 (US 5,510,474)가 언급될 수 있다. 식물 바이러스 유전자의 프로모터 중에서는 컬리플라워 모자익 바이러스 (cauliflower mosaic virus) [CaMV 19S 또는 35S, Sanders et al. (1987), Nucleic Acids Res. 15(4):1543-58.], 시르코바이러스 (circovirus) (AU 689 311) 또는 카사바 베인 (Cassava vein) 모자익 바이러스 (CsVMV, US 7,053,205)의 프로모터가 언급될 수 있다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자를 발현하기 위해 사용할 수 있는 식물의 조직 또는 특정 영역에 특이적인 프로모터 서열, 예컨대 종자에 대해 특이적인 프로모터 [Datla, R. et al., 1997, Biotechnology Ann. Rev. 3, 269-296], 특히 나핀(napin) 프로모터[EP　255　378 A1], 파세올린 프로모터, 글루테닌 프로모터, 헬리안티닌 프로모터[WO 92/17580], 알부민 프로모터 [WO 98/45460], 올레오신 프로모터[WO　98/45461], SAT1 프로모터 또는 SAT3 프로모터 [PCT/US98/06978]를 포함하는 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다.
유리하게는 페닐알라닌 암모니아 리아제 (PAL), HMG-CoA 리덕타제 (HMG), 키티나제, 글루카나제, 프로테이나제 억제제 (PI), PR1 패밀리 유전자, 노팔린 신타제 (nos) 및 vspB 프로모터 (US 5 670 349, 표 3), HMG2 프로모터 (US 5 670 349), 애플 베타-갈락토시다제 (ABG1) 프로모터 및 애플 아미노사이클로프로판 카복실레이트 신타제 (ACC 신타제) 프로모터 (WO 98/45445)로부터 선택된 유도 가능한 프로모터의 사용이 또한 언급될 수 있다.
(I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)로 이루어진, 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 유전자는 또한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 충분한 내성을 수행하기 위해서 프로모터와 코딩 서열 사이에 위치하는 다른 조절 서열의 프로모터, 예를 들어, 전사 활성화인자("인핸서(enhancers)"), 예를 들어 국제특허출원 공개 WO 87/07644에 기술된 담배 모자이크 바이러스 (TMV) 또는 문헌 [Carrington & Freed 1990, J. Virol. 64: 1590-1597]에 기술된 담배 식각 바이러스(TEV)의 전사 활성화인자, 예를 들어, 또는 옥수수의 adh1 인트론 또는 쌀 액틴의 인트론 1과 같은 인트론과 함께 사용될 수도 있다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 내성을 부여하기 위해서 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들) 및, 동일하거나 상이한 식물 발현 프로모터 제어 하에 있는 CYP450 옥수수 모노옥시게나제 (nsf1 유전자) 유전자를 또한 함유하는 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다.
조절 종결인자 (regulatory terminator) 또는 폴리아데닐화 서열로서는 예를 들어, 아그로박테리움 투메파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens)의 nos 종결인자와 같은 박테리아 기원의, 예를 들어, CaMV 35S 종결인자와 같은 바이러스 기원의, 또는 예를 들어, 공개 특허출원 EP　0 633 317 A1에 기술된 바와 같은 히스톤 종결인자와 같은 식물 기원의 상응하는 서열 중의 어떤 것이라도 사용될 수 있다.
숙주 적합 코돈 사용에 의해 각각의 키메릭 유전자(들)의 최적화된 발현을 수득하기 위해서, 이러한 키메릭 유전자가 삽입될 각각의 식물 유기체의 코돈 사용에 대해 비-식물 유전자를 채택할 수 있는 것으로 이해된다. 따라서, 비-식물 기원의 HPPD를 발현하는 기술된 키메릭 유전자 모두에서, 각각의 HPPD 코드화 DNA 서열은 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 보정된 DNA 서열에 의해서 대체될 수 있으며, 즉 서열번호 3은 서열번호 5에 의해서 대체될 수 있고, 서열번호 6은 서열번호 18에 의해서 대체될 수 있으며, 서열번호 8은 서열번호 19에 의해서 대체될 수 있고, 서열번호 10은 서열번호 20에 의해서 대체될 수 있으며, 서열번호 12는 서열번호 21에 의해서 대체될 수 있고, 서열번호 14는 서열번호 22에 의해서 대체될 수 있으며, 서열번호 16은 서열번호 23에 의해서 대체될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "유전자"는 전형적으로 적어도 하나의 프로모터 부분을 포함하며, 단백질로 해독될 수 있는 RNA가 해독되도록 허용하는 5' 및/또는 3' 조절 서열이 측면에 있는 DNA 코드화 부분을 나타낸다. HPPD를 코딩하는 DNA를 언급하는 경우에 "키메릭 유전자"는 그의 천연 숙주 세포에서 HPPD 단백질을 발현을 구동시키는 천연적으로 존재하는 박테리아 5' 및/또는 3' 조절 서열과는 상이한 5' 및/또는 3' 조절 서열 (또한, "이종 프로모터" 또는 "이종 조절 서열"로도 칭함)을 갖는 HPPD 코드화 DNA 서열을 나타낸다.
본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "서열 X를 포함하는 DNA/단백질" 및 "서열 X를 포함하는 서열을 갖는 DNA/단백질"은 다른 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열, 예를 들어 N-말단 수송 또는 시그날 펩타이드가 5' (또는 N-말단) 및/또는 3' (또는 C-말단)에서 포함될 수 있도록, 그들의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 내에 적어도 서열 X를 포함하거나 함유하는 DNA 또는 단백질을 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "포함하는(comprising)"은 구체적으로 열거된 것 이외의 다른 요소들이 또한 존재할 수 있음을 의미하는, "포함하는(including)"의 의미로서의 개방형(open-ended) 언어이다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "~로 구성되는"은 폐쇄형(closed-ended) 언어이며, 즉 단지 구체적으로 열거된 요소들만이 존재한다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "서열 X를 포함하는 단백질을 코딩하는 DNA"는 전사 및 해독 후에 적어도 아미노산 서열 X를 함유하는 단백질을 제공하는 코딩 서열을 포함하는 DNA를 나타낸다. 단백질을 코딩하는 DNA는 천연적으로 존재하는 DNA일 필요는 없으며, 반-합성, 완전 합성 또는 인공 DNA일 수 있고, 인트론 및 5' 및/또는 3' 측면 부분 (flanking region)을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, 용어 "뉴클레오타이드 서열"은 단일- 또는 이중-스트랜드 형태일 수 있는 DNA 또는 RNA 분자의 서열을 나타낸다.
본 발명에 따르는 HPPD 단백질은 본 기술분야에서, 예를 들어, 공개된 PCT 특허출원 WO 96/10083에서 공지된 절차에 따라 단일 펩타이드를 가질 수 있거나, 이들은 단백질의 엽록체로의 수송을 야기하는 엽록체 수송 펩타이드 [예를 들어, Van Den Broeck et al., 1985, Nature 313, 358, 또는 미국 특허 5, 510,471의 변형된 엽록체 수송 펩타이드)와 같은 또 다른 펩타이드에 의해서, 분비 시그날 펩타이드 또는 단백질을 다른 플라스티드, 미토콘드리아, ER 또는 또 다른 세포기관에 대해 표적화하는 펩타이드에 의해서 대체될 수 있거나, 또는 이것은 메티오닌 아미노산에 의해서 또는 메티오닌-알라닌 디펩타이드에 의해서 대체될 수 있다. 세포내 세포기관에 대한 표적화 또는 식물 세포 밖으로 또는 세포벽에 대한 분비를 위한 시그날 서열은 천연적으로 표적화되거나 분비된 단백질, 바람직하게는 문헌 [Klosgen et al., 1989, Mol. Gen. Genet. 217, 155-161; Klosgen 및 Weil, 1991, Mol. Gen. Genet. 225, 297-304; Neuhaus & Rogers, 1998, Plant Mol. Biol. 38, 127-144; Bih et al., 1999, J. Biol. Chem. 274, 22884-22894; Morris et al., 1999, Biochem. Biophys. Res. Commun. 255, 328-333; Hesse et al., 1989, EMBO J. 8 2453-2461; Tavladoraki et al., 1998, FEBS Lett. 426, 62-66; Terashima et al., 1999, Appl. Microbiol. Biotechnol. 52, 516-523; Park et al., 1997, J. Biol. Chem. 272, 6876-6881; Shcherban et al., 1995, Proc. Natl. Acad. Sci USA 92, 9245-9249; 이들은 모두 본 발명에 참고로 포함된다]에 기술된 것, 특히 옥수수, 목화, 대두 또는 쌀의 표적화되거나 분비된 단백질로부터의 시그날 펩타이드 서열에서 발견된다. 이러한 식물 시그날 펩타이드를 코딩하는 DNA 서열은 식물에서의 발현을 위해 HPPD 단백질을 코딩하는 키메릭 유전자 내에 삽입될 수 있다.
본 발명은 또한, 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 25; 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 및 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 46의 HPPD 아미노산 서열과 유사한 아미노산 서열이며, 여기에서 전술한 것의 각각에 하나 이상의 아미노산이 삽입, 결실 또는 치환된 변이체 HPPD 효소를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 아미노산 서열의 변이체는 그에 대한 어떤 아미노산 치환, 부가 또는 결실에도 불구하고, 본 발명에 기술된 아미노산 서열과 유사한 촉매적 활성을 갖는 이들 폴리펩타이드, 효소 또는 단백질을 나타낸다. 바람직하게는, 변이체 아미노산 서열은 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 25; 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 및 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 46의 아미노산 서열과 각각 적어도 약 80%, 또는 85 또는 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다. 또한 바람직하게는, 변이체 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 HPPD 효소 활성을 갖는다. HPPD 효소 활성을 측정하는 방법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있으며, WO2009/144079 또는 WO2002/046387, 또는 PCT/EP2010/070561에 광범하게 기술된 것과 같은 측정방법을 포함한다.
치환은 아미노산이 상이한 천연적으로 존재하거나 비-통상적인 아미노산 잔기로 대체되는 아미노산 변화를 포함한다. 이러한 치환은 "보존적"인 것으로 분류될 수 있으며, 여기에서는 본 발명의 HPPD 단백질에 함유된 아미노산 잔기가 유사한 특징의 또 다른 천연적으로 존재하는 아미노산으로, 예를 들어, Gly↔Ala, Val↔Ile↔Leu, Asp↔Glu, Lys↔Arg, Asn↔Gln 또는 Phe↔Trp↔Tyr로 대체된다. 본 발명에 포함되는 치환은 또한, "비-보존적"일 수도 있으며, 여기에서는 본 발명의 HPPD 단백질 내에 존재하는 아미노산 잔기가 상이한 그룹으로부터의 천연적으로 존재하는 아미노산과 같은 상이한 특성을 갖는 아미노산으로 치환된다 (예를 들어, 하전되거나 소수성인 아미노산을 알라닌으로 치환). 아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기의 치환이지만, 군집화되거나 분산된 다수의 잔기의 치환일 수도 있다. 아미노산 결실은 통상적으로 약 1-10 개의 아미노산 잔기 정도일 수 있는 반면에, 삽입은 어떤 길이라도 될 수 있다. 결실 및 삽입은 N-말단, C-말단에 대해서 만들어질 수 있거나 내부 결실 또는 삽입일 수 있다. 일반적으로, 아미노산 서열 내에서의 삽입은 아미노- 또는 카복시-말단 융합보다는 더 작을 수 있고, 1-4 개의 아미노산 잔기 정도일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, "유사한 아미노산"은 유사한 아미노산 측쇄를 갖는 아미노산, 즉 극성, 비-극성 또는 실질적으로 중성인 측쇄를 갖는 아미노산을 나타낸다. 본 명세서에서 사용된 것으로서, "비-유사 아미노산"은 상이한 아미노산 측쇄를 갖는 아미노산을 나타내며, 예를 들어, 극성 측쇄를 갖는 아미노산은 비-극성 측쇄를 갖는 아미노산과 비-유사한 것이다. 극성 측쇄는 통상적으로 단백질의 표면 상에 존재하는 경향이 있고, 여기에서 이들은 세포 내에 존재하는 수성 환경과 상호작용할 수 있다 ("친수성" 아미노산). 다른 한편으로, "비-극성" 아미노산은 단백질의 중심에 존재하는 경향이 있으며, 여기에서 이들은 유사한 비-극성 이웃과 상호작용할 수 있다 ("소수성" 아미노산). 극성 측쇄를 갖는 아미노산의 예는 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르테이트, 시스테인, 글루타민, 글루타메이트, 히스티딘, 리신, 세린 및 트레오닌이다 (소수성인 시스테인을 제외하고는 모두 친수성이다). 비-극성 측쇄를 갖는 아미노산의 예는 알라닌, 글리신, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린 및 트립토판이다 (중성인 글리신을 제외하고는 모두 소수성이다).
실시예에서 다른 식으로 언급되지 않는 한, 재조합 DNA를 제조 및 조작하는 모든 절차는 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY (1989), 및 Volumes 1 및 2 of Ausubel et al. (1994) Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols, USA]에 기술된 표준 절차에 의해서 수행된다. 식물 분자생물학 작업을 위한 표준 재료 및 방법은 BIOS Scientific Publications Ltd (UK) 및 Blackwell Scientific Publications (UK)에 의해서 공동으로 발행된 문헌 [Plant Molecular Biology Labfax (1993) by R.R.D. Croy]에 기술되어 있다. PCR 기술을 위한 절차는 문헌 ["PCR protocols: a guide to methods 및 applications", Edited by M.A. Innis, D.H. Gelfand, J.J. Sninsky 및 T.J. White (Academic Press, Inc., 1990)]에서 확인될 수 있다.
용어 "내성", "내성인" 또는 "덜 민감한"은 상호 교환하여 사용되며, 다양한 HPPD 억제 제초제의 상이한 농도의 존재 하에서 각각의 HPPD 단백질에 대해 코딩하는 유전자를 포함하는 핵산에 의해서 형질전환된 균주 또는 식물의 가시적 지표 표현형 (visible indicator phenotype)에 따라 스크리닝된 HPPD의 고유 내성의 상대적 레벨을 의미한다. 용량 반응 및 이들 지표 표현형 (갈색 색상의 형성, 성장 억제, 표백, 제초효과 등)과 연관된 용량 반응에서의 상대적 이동은 편리하게는, GR50 (성장의 50% 감소를 위한 농도) 또는 MIC (최소 억제 농도) 값의 관점에서 표현되며, 여기에서 이들 값의 증가는 제초제의 상이한 농도의 범위에서 식물 손상, 분열조직 표백 증상 등에 기초한 표준 방식으로, 발현된 HPPD의 고유 내성에 있어서의 증가에 상응한다. 이들 데이터는 예를 들어, x-축 상에 표시된 "용량" 및 y-축 상에 표시된 "사멸 백분율", "제초 효과", "발아한 녹색 식물의 수" 등을 갖는 용량/반응 곡선으로부터 유도된 GR50 값의 관점으로 표현될 수 있으며, 여기에서 증가된 GR50 값은 발현된 HPPD의 고유 내성의 증가된 레벨에 상응한다. 제초제는 적합하게는 발아-전 또는 발아-후에 적용될 수 있다.
마찬가지로, 내성 레벨은 담배, 또는 대두 또는 목화와 같은 농작물과 같은 시험 식물의 형질전환(transgenesis), 재생 (regeneration), 번식 (breeding) 및 스프레이 시험을 통해서 스크리닝되며, 이들 결과에 따라 이러한 식물은 HPPD 단백질을 코딩하는 어떤 외인성 유전자도 함유하지 않는 식물보다 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대해서 적어도 2-4x 더 내성이다.
"숙주 유기체" 또는 "숙주"는 HPPD를 생산할 목적으로 본 발명에 따르는 핵산 또는 키메릭 유전자가 도입될 수 있는 모든 단세포성 또는 다세포성 이종 유기체인 것으로 이해된다. 이들 유기체는 특히, 박테리아, 예를 들어, 이. 콜라이 (E.　coli), 효모, 특히 사카로마이세스 (Saccharomyces) 또는 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces), 피치아 (Pichia) 속의 효모, 진균, 특히 아스퍼질러스 (Aspergillus), 바큘로바이러스 (baculovirus) 또는, 바람직하게는 식물 세포 및 식물이다.
"식물 세포"는 본 발명에 따라, 식물로부터 유도되거나 식물에서 발견되며, 캘러스 (calli)와 같은 비분화된 조직의 일부분, 배아와 같은 분화된 조직, 식물의 부분, 식물 또는 종자이거나 이들을 형성하는 모든 세포인 것으로 이해된다. 이것은 원형질체 (protoplasts) 및 화분, 배양된 식물 세포 또는 시험관내에서 성장한 원형질체, 및 완전한 식물로 재생시킬 수 있는 식물 세포를 포함한다.
"식물"은 본 발명에 따라, 광합성을 할 수 있는 모든 분화된 다세포 유기체, 특히 단자엽 또는 쌍자엽 유기체, 더욱 특히는 옥수수 또는 콘, 밀, 브라시카 나푸스 (Brassica napus) 또는 브라시카 준세아 (Brassica juncea)와 같은 브라시카 종 (Brassica spp .) 식물, 대두 종, 쌀, 사탕수수, 비트 (beetroot), 담배, 목화, 오이, 리크 (leek), 당근, 토마토, 상추, 후추, 멜론, 수박 등과 같은 야채 식물과 같은 동물 또는 인간의 영양을 목적으로 하거나 하지 않는 배양된 식물인 것으로 이해된다. 본 명세서에서 사용된 것으로서 형질전환 식물은 그들의 게놈 내로 안정하게 삽입된 하나 또는 그 이상의 외래 또는 이종 유전자(들)를 포함하는 식물을 나타낸다.
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 내성을 실행하기 위해서, 식물에서 천연적으로 발현된 유전자의 모든 프로모터 서열, 또는 아그로박테리움 (Agrobacterium) 또는 식물 바이러스 프로모터를 포함한, 식물에서 천연적으로 발현된 유전자의 프로모터 요소의 모든 하이브리드 또는 조합, 또는 식물에서 제초제 내성 유전자의 전사를 제어하는데 적합한 모든 프로모터가 본 발명의 식물에서 프로모터 서열로 사용될 수 있다 (본 발명에서는 "식물-발현 프로모터"로 칭함). 이러한 적합한 식물-발현 프로모터의 예는 상기에 기술하였다. 본 발명의 일 구체예에서, 이러한 식물-발현 프로모터는 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열에 작동적으로-연결된다.
본 발명에 따르면, 또한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 내성을 실행시키기 위해서 인트론 서열 또는 전사 활성화인자 (인핸서)와 같은, 프로모터와 코딩 서열 사이에 위치하는 다른 조절 서열을 프로모터 조절 서열과 함께 사용할 수도 있다. 이러한 적합한 조절 서열의 예는 위에 기술하였다.
아그로박테리움 투메파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens)로부터의 nos 종결인자와 같은 박테리아 또는 바이러스 기원, 또는 출원 EP　0　633　317 A1에 기술된 것과 같은 히스톤 종결인자와 같은 식물 기원의 모든 상응하는 서열이 전사 종결 (및 폴리아데닐화) 조절 서열로 사용될 수 있다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 수송 펩타이드-HPPD 융합 단백질의 발현을 허용하도록 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 외인성 키메릭 유전자(들)를 코딩하는 핵산 서열의 5'(상류)가 적용된 수송 펩타이드를 코딩하는 핵산 서열 및, 프로모터 영역과 외인성 HPPD를 코딩하는 서열 사이에 배열된 수송 펩타이드 서열을 함유하는 식물, 식물 부위 또는 식물 종자에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다. 수송 펩타이드는 HPPD를 플라스티드, 더욱 특히는 엽록체 내로 유도할 수 있으며, 여기에서 융합 단백질은 후자가 플라스티드에 들어가면 수송 펩타이드와 HPPD 단백질 사이에서 분해된다. 수송 펩타이드는 경우에 따라 성숙 RuBisCO ssu (EP　189　707 A1)의 N-말단 부분의 몇 개의 아미노산을 포함하는 식물 리뷸로즈 비스포스페이트 카복실라제/옥시게나제 소형 서브유니트(RuBisCO ssu)의 수송 펩타이드 또는 EPSPS 수송 펩타이드 (미국 특허 5,188,642에 기술됨)와 같은 단일 펩타이드일 수 있거나, 그렇지 않으면 플라스티드 위치를 갖는 성숙 단백질의 N-말단 서열의 일부분에 융합된 제1 식물 수송 펩타이드를 포함하며, 이 부분은 다시 특허 EP　508　909 A1에 기술된 바와 같은 제2 식물 수송 펩타이드에 융합된 수송 펩타이드, 및 더욱 특히는 옥수수 RuBisCO ssu의 N-말단성 말단의 22 아미노산에 융합되고, 다시 그의 코딩 서열에 의해 특허 EP　508　909 A1에 기술된 바와 같이 옥수수 RuBisCO ssu의 수송 펩타이드에 융합된 해바라기 RuBisCO ssu의 수송 펩타이드를 포함하는 최적화된 수송 펩타이드와 같은 몇 가지 수송 펩타이드의 융합물일 수 있다.
본 발명은 또한, 수송 펩타이드 HPPD 융합 단백질 및 이러한 융합 단백질을 코딩하는 핵산 또는 식물-발현 키메릭 유전자에 관한 것이며, 여기에서 이 융합 단백질의 두 개의 요소는 위에서 정의된 바와 같다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 클로닝, 발현벡터에 의한 형질전환에 의해서 수득된 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이며, 여기에서 상기 발현벡터는 (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰 (Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하거나, (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 적어도 하나의 키메릭 유전자를 함유한다. 상기 키메릭 유전자 이외에도, 이 벡터는 복제의 기원을 함유할 수 있다. 이 벡터는 본 발명에 따른 키메릭 유전자를 도입시킴으로써 형질전환된 플라스미드 또는 플라스미드 일부분, 코스미드, 또는 박테리오파지 또는 바이러스일 수 있다. 형질전환 벡터는 숙련된 전문가에게 잘 공지되어 있으며, 문헌에 광범위하게 기술되어 있다. 특히 식물 세포 또는 식물을 형질전환시키는데 사용될 수 있는 형질전환 벡터는 식물 세포 또는 식물을 형질전환시키기 위해서 사용될 수 있고, 추가로 그 자신의 복제 및 발현 요소를 함유하는 바이러스일 수 있다. 식물 세포 또는 식물을 형질전환시키기 위한 벡터는 바람직하게는 무력화된(disarmed) 아그로박테리움 Ti 플라스미드와 같은 플라스미드이다.
추가의 특별한 구체예에서, 본 발명은 (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 키메릭 유전자를 함유하는 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도, 및 작물을 성장시키고, 식물 생성물, 예를 들어, 대두 종, 쌀, 밀, 보리, 또는 콘 그레인 (corn grains) 또는 목화 꼬투리를 수확하는 분야에서의 상기 식물 또는 종자의 용도에 관한 것이며, 여기에서 일 구체예로 상기 용도는 잡초를 방제하기 위해서 이러한 식물에 대해 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 적용하는 것을 포함한다.
다른 특별한 구체예에서, 본 발명은 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 내성을 부여하기 위해 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하고, 또한 PDH (프리페네이트 데하이드로게나제) 효소를 코딩하는 핵산 서열 (US 2005/0257283)에 작동적으로 연결된, 상기한 바와 같은 식물-발현 프로모터를 포함하는 키메릭 유전자를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 식물, 식물 부분 또는 식물 종자 상에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도에 관한 것이다. 이러한 두 개의 이식유전자를 포함하는 식물은 본 기술분야에서 잘 알려진 바와 같이, 식물을 하나의 이식유전자로 형질전환시킨 다음에, 이 형질전환 식물을 제2 이식유전자로 재-형질전환시키거나, 식물을 두 개의 이식유전자로 동시에 형질전환시키거나(동일하거나, 2개의 상이한 형질전환 DNAs 또는 벡터 내에서), 제1 이식유전자를 포함하는 식물을 제2 이식유전자를 포함하는 식물과 교배시킴으로써 수득될 수 있다.
(I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유함으로써 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대해 내성인 식물, 식물 부분 또는 식물 종자를 수득하기 위한 한 가지 형질전환 방법은 세포, 원형질체 또는 조직에 DNA가 부착되거나 DNA를 함유하는 고체 또는 액체 입자로 충격을 가하는 것을 포함한다. 또 다른 형질전환 방법은 식물 내로 전이시키기 위한 수단으로서 아그로박테리움 투메파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens) Ti 플라스미드 또는 아그로박테리움 라이조게네스 (Agrobacterium rhizogenes) Ri 플라스미드 내로 삽입된 키메릭 유전자를 사용하는 것을 포함한다. 미량주사(microinjection) 또는 전기천공 (electroporation) 또는 그렇지 않으면 PEG를 사용한 직접 유전자 전이와 같은 그 밖의 다른 방법이 사용될 수 있다. 숙련된 전문가는 선택된 숙주 유기체, 특히 식물 세포 또는 식물을 형질전환시키는 어떤 적절한 방법을 선택할 수 있다. 예를 들어, 대두 형질전환을 위한 기술은 본 명세서에 참고로 포함된 EP 1186666 A1에 기술된 실시예 1 내지 3에 광범위하게 기술되어 있다. 쌀의 경우에는, 아그로박테리움-매개 형질전환 [Hiei et al., 1994 Plant J 6:271-282, 및 Hiei et al., 1997 Plant Mol Biol. 35:205-21; 본 명세서에 참고로 포함됨], 전기천공 [본 명세서에 참고로 포함된 US 5,641,664 및 US 5,679,558], 또는 충격(bombardment)[Christou et al., 1991, Biotechnology 9:957; 본 명세서에 참고로 포함됨]이 실행될 수 있었다. 단자엽 식물, 특히 쌀의 형질전환을 위한 적합한 기술은 본 명세서에 참고로 포함된 WO 92/09696에 기술되었다. 목화의 경우에는, 아그로박테리움-매개된 형질전환[Gould J.H. 및 Magallanes-Cedeno M., 1998 Plant Molecular Biology reporter, 16: 1-10 및 Zapata C., 1999, Theoretical Applied Genetics, 98(2):1432-2242; 본 명세서에 참고로 포함됨], 폴리브렌 및/또는 처리-매개된 형질전환 [Sawahel W.A., 2001, - Plant Molecular Biology reporter, 19:377a-377f; 본 명세서에 참고로 포함됨]이 기술되었다.
경우에 따라, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염은 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/ 043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 식물, 식물 부분, 또는 식물 종자에 대해 사용될 수 있으며, 여기에서 HPPD는 엽록체 게놈과 같은 플라스티드의 형질전환을 사용하여 엽록체와 같은 플라스티드 내에서 직접 발현된다. 적합한 방법은 DNA로 코팅된 고체 입자 또는 DNA를 포함하는 액체 입자에 의한 식물 세포 또는 조직의 충격, 및 상동 재조합에 의한 도입된 유전자의 통합 (integration)을 포함한다. 적합한 벡터 및 선택 시스템은 본 기술분야에서 숙련된 전문가에게 공지되어 있다. 담배 식물의 엽록체 게놈 내로의 이러한 통합을 위해서 사용될 수 있는 수단 및 방법의 예는 그의 내용이 이에 의해서 참고로 포함된 WO 06/108830에 제시되어 있다.
본 발명은 또한 식물이 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)로 형질전환되는 것을 특징으로 하는, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대해 내성인 식물을 얻는 방법에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 또한 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하므로써 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대해 내성인 식물을 얻는 방법에 관한 것으로, 여기에서 식물은 (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바, 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 포함하고, 5'에서, 및 임의로 3' 위치에서 이종 조절 요소뿐만 아니라 숙주 유기체에서 기능을 할 수 있는 코딩 서열을 포함하는 하나 또는 그 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 것을 특징으로 하며, 여기에서 코딩 서열은 적어도 이전에 기술된 바와 같은 본 발명의 HPPD를 코딩하는 유전자를 정의하는 핵산 서열을 포함하여 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 충분히 높은 수준의 내성을 수행하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 방법에서의 HPPD 저해제가 단독이거나 트리케톤 또는 피라졸리네이트 제초제, 바람직하게는 템보트리온, 메소트리온, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온, 피라설포톨, 피라졸레이트, 디케토니트릴, 벤조페납, 또는 술코트리온, 특히 템보트리온으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 HPPD 저해제 제초제와 조합한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염이다.
본 발명은 또한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 식물이 식재되거나 종자가 파종될 필드 또는 농작물에 적용함으로써 이러한 필드에서, 또는 농작물에서 잡초를 선택적으로 제거하거나 잡초의 발아를 방지하는 방법에 관한 것으로, 이 방법은 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 (I) (a) 아베나m 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)에 따라 형질전환된 식물에 작물을 파종하기 전(이하에서는 식재-전 (pre-planting) 적용이라 칭함), 작물의 발아 전 (이하에서는 발아-전 적용이라 칭함), 또는 작물의 발아 후 (이하에서는 발아-후 적용이라 칭함)에 적용되는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 본 발명에서 상기한 바와 같이 형질전환된 종자를 포함하는 영역 또는 포장(field)에서의 방제방법에 관한 것으로, 본 방법은 상기한 필드 영역에 잡초에 대해 독성인 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용량을, (I) (a) 아베나, 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 포함하는 종자 또는 식물에는 유의하게 영향을 미치지 않으면서 적용하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)로 형질전환된 식물을 배양하는 방법에 관한 것으로, 본 방법은 상기 식물을 재배하는데 적합한 필드의 영역에 전술한 키메릭 유전자를 포함하는 종자를 식재하고, 잡초가 존재한다면 상기 형질전환된 종자 또는 상기 형질전환 식물에는 유의하게 영향을 미치지 않으면서 잡초에 대해서는 독성인 용량의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을 상기 필드의 영역에 적용한 다음, 재배된 식물 또는 식물 부분이 원하는 성숙 단계에 도달하면 이들을 수확하고, 적절한 경우에, 수확된 식물로부터 종자를 분리시키는 것을 포함한다.
상기 방법에서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염은 본 발명에 따라 작물을 파종하기 전, 작물이 발아하기 전, 또는 작물이 발아한 후에 적용될 수 있다.
본 발명의 의미 내에서, "제초제"는 그 자체로 제초 활성인 물질, 또는 예를 들어 그의 활성을 증가시키거나 (상승적 작용제) 또는 그의 활성을 제한하는(완화제(safener)) 작용제와 같이 그의 효능을 변화시키는 첨가제와 조합된 물질인 것으로 이해된다. 물론, 실제 그들의 적용을 위해서 상기 제초제는 그 자체가 공지된 방식으로, 농업 화학에서 통상적으로 사용되는 제제화 보조제와 조합될 수 있다.
따라서, (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들) 이외에도, 상동(=천연) 유전자 또는 유전자 서열의 과발현, 억제 또는 저해 또는 이종 (= 외래) 유전자 또는 유전자 서열의 발현의 결과로서 변형된 특성을 갖는 형질전환 식물이 수득될 수 있다.
(I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰 (Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 식물, 식물 세포, 또는 종자에서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을, 예를 들어 2,4-D 또는 디캄바와 같은 성장 조절제에 대해서, 또는 필수 식물 효소를 저해하는 제초제, 예를 들어 아세토락테이트 신타제(ALS), EPSP 신타제, 글루타민 신타제(GS), 아세틸-조효소 A 카복실라제 (ACCase)에 대해서, 또는 ALS 저해제, 글리포세이트, 글루포시네이트, ACCase 억제제 및 유사한 활성 물질군의 제초제에 대해서 또한 저항성인 형질전환 작물에서 템보트리온, 술코트리온 및 메소트리온과 같은 트리케톤의 부류, 또는 피라설포톨 및 토프라메존과 같은 피라졸리네이트의 부류에 속하며, 특히 템보트리온, 술코트리온, 토프라메존, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온 및 메소트리온, 및 보다 특별하게 템보트리온으로부터 선택된 하나 이상의 추가 HPPD 저해제 제초제와 함께 사용하는 것이 바람직하다.
그러므로, 본 발명은 또한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염에 대한 저항성 이외에 제2 또는 그 이상의 제초제 저항성(들)을 포함하는 형질전환 농작물까지 확대되는 유해 식물(즉, 잡초)을 방제하기 위한, (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 HPPD 내성 식물에 적용된 제초제의 용도에 관한 것이다.
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염은 지배적인 생물학적 및/또는 물리-화학적 파라미터에 따라 다양한 방식으로 제제화될 수 있다. 가능한 제제의 예는 다음과 같다: 수화제 (wettable powders; WP), 수용성 분말 (SP), 수용성 농축물, 유화성 농축물 (EC), 수중유 및 유중수 에멀전과 같은 에멀전 (EW), 스프레이 가능한 용액, 현탁 농축물 (SC), 유성 또는 수성 분산액, 오일-혼화성 용액, 캅셀 현탁제 (CS), 더스트 (dusts; DP), 종자-드레싱 생성물 (seed-dressing products), 살포함으로써 토양 상에 적용하기 위한 과립제, 미세과립의 형태인 과립제 (GR), 스프레이 과립제, 코팅 과립제 및 흡착 과립제, 수-분산성 과립제 (WG), 수용성 과립제 (SG), ULV 제제, 마이크로캅셀제 및 왁스.
이들 각각의 제제 타입은 원칙적으로 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Winnacker-Kuchler, "Chemische Technologie" [Chemical technology], volume　7, C.　Hanser Verlag Munich, 4th Ed. 1986; Wade van Valkenburg, "Pesticide Formulations", Marcel Dekker, N.Y., 1973; K. Martens, "Spray Drying" Handbook, 3rd Ed. 1979, G. Goodwin Ltd. London]에 기술되어 있다.
불활성 물질, 계면활성제, 용매 및 추가의 첨가제와 같은 필요한 제제화 보조제는 또한 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Watkins, "Handbook of Insecticide Dust Diluents 및 Carriers", 2nd Ed., Darland Books, Caldwell N.J., H.v. Olphen, "Introduction to Clay Colloid Chemistry"; 2nd Ed., J. Wiley & Sons, N.Y.; C. Marsden, "Solvents Guide"; 2nd Ed., Interscience, N.Y. 1963; McCutcheon's "Detergents 및 Emulsifiers Annual", MC Publ. Corp., Ridgewood N.J.; Sisley 및 Wood, "Encyclopedia of Surface Active Agents", Chem. Publ. Co. Inc., N.Y. 1964; Schonfeldt, "Grenzflachenaktive Athylenoxidaddukte" [Interface-active ethylene oxide adducts], Wiss. Verlagsgesell., Stuttgart 1976; Winnacker-Kuchler, "Chemische Technologie" [Chemical technology], volume　7, C.　Hanser Verlag Munich, 4th Ed. 1986]에 기술되어 있다.
이들 제제를 기초로 하여, 또한 예를 들어, 살충제, 살비제, 제초제, 살진균제와 같은 살충 활성 물질, 및 완화제, 비료 및/또는 성장 조절제와의 조합물을 예를 들어, 레디 믹스 (ready mix) 또는 탱크 믹스 (tank mix)의 형태로 제조할 수도 있다.
수화제(wettable powder)는 물에 균일하게 분산될 수 있고, 활성 물질 이외에 또한 희석제 또는 불활성 물질과 함께 이온성 및/또는 비이온성 계면활성제 (습윤제 (wetters), 분산제), 예를 들어 폴리옥시에틸화 알킬페놀, 폴리옥시에틸화 지방 알콜, 폴리옥시에틸화 지방 아민, 지방 알콜 폴리글리콜 에테르 설페이트, 알칸설포네이트, 알킬벤젠설포네이트, 나트륨 리그노설포네이트, 나트륨 2,2'-디나프틸메탄-6,6'-디설포네이트, 나트륨 디부틸나프탈렌설포네이트, 또는 그렇지 않으면 나트륨 올레오일메틸타우리네이트를 포함하는 제제이다. 수화제를 제조하기 위해서, 제초 활성 물질은 예를 들어, 햄머 밀 (hammer mills), 블로워 밀 (blower mills), 에어-제트 밀 (air-jet mills)과 같은 통상적인 기구 내에서 미세하게 분쇄하고, 제제화 보조제와 동시에 또는 순차적으로 혼합시킨다.
유화성 농축물은 활성 물질을 유기 용매, 예를 들어, 부탄올, 사이클로헥사논, 디메틸포름아미드, 크실렌, 또는 그렇지 않으면 고비점 방향족 또는 탄화수소, 또는 하나 또는 그 이상 이온성 및/또는 비이온성 계면활성제 (유화제)를 첨가한 유기 용매의 혼합물에 용해시킴으로써 제조된다. 사용될 수 있는 유화제의 예는 다음과 같다: 칼슘 도데실벤젠설포네이트와 같은 칼슘 알킬아릴설포네이트, 또는 비이온성 유화제, 예를 들어, 지방산 폴리글리콜 에스테르, 알킬아릴폴리글리콜 에테르, 지방 알콜 폴리글리콜 에테르, 프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 축합물, 알킬 폴리에테르, 예를 들어, 소르비탄 지방산 에스테르와 같은 소르비탄 에스테르, 또는 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르와 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르.
더스트는 활성 물질을 예를 들어, 탈크, 카올린, 벤토나이트 및 프로필라이트와 같은 천연 점토, 또는 규조토와 같은 미분된 고체 물질과 함께 분쇄함으로써 수득된다.
현탁 농축물은 수성 또는 유성일 수 있다. 이들은 예를 들어, 적절한 경우에는 예를 들어, 다른 제제 타입의 경우에서 상기에 이미 열거한 바와 같은 계면활성제를 첨가하여, 상업적으로 이용할 수 있는 비드 밀 (bead mills)을 사용하여 습식-분쇄함으로써 제조될 수 있다.
에멀전, 예를 들어, 수중유 에멀전 (EW)은 예를 들어, 교반기, 콜로이드 밀 및/또는 정지상 믹서 (static mixers)를 이용하여, 수성 유기 용매, 및 적절한 경우에 다른 제제 타입에 대해 예를 들어, 상기에 이미 언급된 것과 같은 계면활성제를 사용하여 제조될 수 있다.
과립제는 활성 물질을 흡착성 과립화 불활성 물질 상에 스프레이하거나, 또는 활성 물질 농축물을 스티커 (sticker), 예를 들어, 폴리비닐 알콜, 나트륨 폴리아크릴레이트, 또는 그렇지 않으면 광유의 도움을 받아 모래, 카올리나이트 또는 과립화 불활성 물질과 같은 담체의 표면에 적용함으로써 제조될 수 있다. 적합한 활성 물질은 또한, 필요한 경우에 비료와의 혼합물로서, 비료 과립제의 생산에 통상적인 방식으로 과립화될 수도 있다.
수분산성 과립제는 일반적으로, 고체 불활성 물질이 없이 스프레이 건조, 유동화-상 과립화, 디스크 과립화, 고속 교반기에 의한 혼합, 및 압출과 같은 통상적인 방법에 의해서 제조될 수 있다.
디스크 과립제, 유동화-상 과립제, 압출기 과립제 및 스프레이 과립제를 제조하기 위해서는 예를 들어, 문헌 ["Spray-Drying Handbook" 3rd ed. 1979, G.　Goodwin Ltd., London; J.E. Browning, "Agglomeration", Chemical 및 Engineering 1967, pages　147 et seq.; "Perry's Chemical Engineer's Handbook", 5th Ed., McGraw-Hill, New York 1973, p.　8-57]에서의 방법을 참조한다.
작물 보호제품의 제제화에 대한 더 상세한 내용에 대해서는 예를 들어, 문헌 [G.C.　Klingman, "Weed Control as a Science", John Wiley 및 Sons, Inc., New York, 1961, pages　81-96 및 J.D.　Freyer, S.A.　Evans, "Weed Control Handbook", 5th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1968, pages　101-103]을 참고로 한다.
일반적으로, 농약 제제는 0.1 내지 99 중량%, 특히 0.1 내지 95 중량%의 본 발명에 따르는 화합물을 포함한다. 수화제에서, 활성 물질 농도는 예를 들어, 약 10 내지 90 중량%이고, 100 중량%까지의 나머지는 통상적인 제제화 구성성분으로 구성된다. 유화성 농축물의 경우에, 활성 물질 농도는 약 1 내지 90 중량%, 바람직하게는 5 내지 80 중량%에 달 할 수 있다. 더스트의 형태인 제제는 1 내지 30 중량%의 활성 물질, 바람직하게는 대부분의 경우에 5 내지 20 중량%의 활성 물질을 포함하고, 스프레이 가능한 용액은 약 0.05 내지 80, 바람직하게는 2 내지 50 중량%의 활성 물질을 포함한다. 수-분산성 과립제의 경우에, 활성 물질 함량은 부분적으로, 활성 화합물이 액체 형태인지 또는 고체 형태인지에 따라서, 및 사용되는 과립화 보조제, 충진제 등에 따라 좌우된다. 수-분산성 과립제의 경우에, 예를 들어, 활성 물질 함량은 1 내지 95 중량%, 바람직하게는 10 내지 80 중량%이다.
또한, 언급된 활성 물질 제제는 적절한 경우에, 스티커, 습윤제, 분산제, 유화제, 침투제, 보존제, 부동제, 용매, 충진제, 담체, 착색제, 소포제, 증발 억제제, 및 pH 및 점도 조절제와 같은 각각의 경우에 총상적인 보조제를 포함한다.
이들 제제를 기초로 하여, 템보트리온, 술코트리온 및 메소트리온과 같은 트리케톤의 부류, 또는 피라설포톨 및 토프라메존과 같은 피라졸리네이트의 부류의, 특히 템보트리온, 술코트리온, 토프라메존, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온 및 메소트리온으로부터 선택된 HPPD 억제 제초제, 더욱 특히는 템보트리온과, 예를 들어 살충제, 살비제, 제초제, 살진균제와 같은 그 밖의 다른 살충적 활성 물질, 및 완화제, 비료 및/또는 성장 조절제와의 조합물을 예를 들어, 본 발명에 따라 HPPD 내성 식물에 적용될 레디 믹스 또는 탱크 믹스의 형태로 제조할 수도 있다.
제제화 예
a) 더스트는 10 중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염 및 불활성 물질로서 90 중량부의 탈크를 혼합시키고, 혼합물을 햄머 밀로 세분함으로써 수득된다.
b) 물에 쉽게 분산될 수 있는 수화제는 25 중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염, 불활성 물질로서 64 중량부의 카올린-함유 석영, 습윤제로서 10 중량부의 칼륨 리그노설포네이트 및 1 중량부의 나트륨 올레오일메틸타우리네이트, 및 분산제를 혼합시키고, 혼합물을 핀-디스크 밀 (pinned-disk mill)에서 분쇄함으로써 수득된다.
c) 용이한 수-분산성인 분산 농축물은 20중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염을 6 중량부의 알킬페놀 글리콜 에테르 (®Triton X 207), 3 중량부의 이소트리데칸올 폴리글리콜 에테르 (8 EO) 및 71 중량부의 파라핀 광유 (비점 범위, 예를 들어 약 255 내지 277℃ 이상)와 혼합시키고, 혼합물을 볼 밀 (ball mill)에서 5 미크론 이하의 분말도 (fineness)로 분쇄함으로써 수득된다.
d) 유화성 농축물은 15 중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염, 용매로서 75 중량부의 사이클로헥사논, 및 유화제로서 10 중량부의 옥시에틸화 노닐페놀로부터 수득된다.
e) 수-분산성 과립제는 75 중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염, 10 중량부의 칼슘 리그노설포네이트, 5 중량부의 나트륨 라우릴 설페이트, 3 중량부의 폴리비닐 알콜, 및 7 중량부의 카올린을 혼합시키고, 혼합물을 핀-디스크 밀에서 분쇄하고, 분말을 과립화 액체로서 물 상에 스프레이함으로서 유동화 상에서 과립화시킴으로써 수득된다.
f) 수-분산성 과립제는 또한, 콜로이드 밀에서
25 중량부의 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 염,
5 중량부의 나트륨 2,2'-디나프틸메탄-6,6'-디설포네이트,
2 중량부의 나트륨 올레오일메틸타우리네이트,
1 중량부의 폴리비닐 알콜,
17 중량부의 칼슘 카보네이트 및 50 중량부의 물을 균질화 및 전세분하고, 이어서 혼합물을 비드 밀에서 분쇄하고, 생성된 현탁액을 단일-물질 노즐을 사용하여 스프레이 타워 (spray tower)에서 분무 및 건조시킴으로써 수득된다.
본 발명의 다른 측면은, (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스, 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 HPPD 내성 식물에 대한, 혼합 제제에서, 또는 탱크 믹스에서 템보트리온, 술코트리온 및 메소트리온과 같은 트리케톤의 부류, 또는 피라설포톨 및 토프라메존과 같은 피라졸리네이트의 부류에 속하며, 특히 템보트리온, 술코트리온, 토프라메존, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온 및 메소트리온으로부터 선택된 추가의 HPPD 저해제 제초제, 더욱 특히는 템보트리온과, 및/또는 예를 들어, 문헌 [Weed Research 26 (1986) 441-445 또는 "The Pesticide Manual", 14th edition, The British Crop Protection Council 및 the Royal Soc. of Chemistry, 2003, 및 여기에 인용된 문헌]에 기술된 바와 같은, 예를 들어 아세토락테이트 신타제, 아세틸-CoA 카복실라제, 셀룰로즈 신타제, 에놀피루빌시키메이트-3-포스페이트 신타제, 글루타민 신테타제, p-하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제, 파이토엔 데새투라제 (desaturase), 포토시스템 I, 포토시스템 II, 프로토포르피리노겐 옥시다제의 억제에 기초한 추가의 공지된 활성 물질과 조합한, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도이다. 본 발명에 따르는 화합물과 조합될 수 있는 공지의 제초제 또는 식물 성장 조절제는 예를 들어, 다음의 활성 물질이며 (화합물은 International Organization for Standardization (ISO)에 따르는 일반명(common name)으로, 또는 적절한 경우에 코드 번호와 함께 화학명으로 표시하였다), 항상 산, 염, 에스테르, 및 입체이성체 및 광학 이성체와 같은 이성체와 같은 모든 사용 형태를 포함한다. 이와 관련하여, 하나 및 일부의 경우에서의 몇 가지 사용 형태를 또한 예를 들어 언급한다:
아세토클로르, 아시벤조랄, 아시벤조랄-S-메틸, 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-나트륨, 아클로니펜, 알라클로르, 알리도클로르, 알록시딤, 알록시딤-나트륨, 아메트린, 아미카바존, 아미도클로르, 아미도설푸론, 아미노사이클로피라클로르, 아미노피랄리드, 아미트롤, 암모늄 설파메이트, 안시미돌, 아닐로포스, 아술람, 아트라진, 아자페니딘, 아짐설푸론, 아지프로트린, BAH-043, BAS-140H, BAS-693H, BAS-714H, BAS-762H, BAS-776H, BAS-800H, 베플루부타미드, 베나졸린, 베나졸린-에틸, 벤카바존, 벤플루랄린, 벤푸레세이트, 벤술리드, 벤설푸론-메틸, 벤타존, 벤즈펜디존, 벤조비사이클론, 벤조페납, 벤조플루오르, 벤조일프롭, 비페녹스, 빌라나포스, 빌라나포스-나트륨, 비스피리박, 비스피리박-나트륨, 브로마실, 브로모부티드, 브로모페녹심, 브로목시닐, 브로뮤론, 부미나포스, 부속시논, 부타클로르, 부타펜아실, 부타미포스, 부테나클로르, 부트랄린, 부트록시딤, 부틸레이트, 카펜스트롤, 카베타미드, 카펜트라존, 카펜트라존-에틸, 클로메톡시펜, 클로람벤, 클로라지폽, 클로라지폽-부틸, 클로르브로뮤론, 클로르부팜, 클로르페낙, 클로르페낙-나트륨, 클로르펜프롭, 클로르플루레놀, 클로르플루레놀-메틸, 클로리다존, 클로리뮤론, 클로리뮤론-에틸, 클로르메콰트-클로라이드, 클로르니트로펜, 클로로프탈림, 클로르탈-디메틸, 클로로톨루론, 클로르설푸론, 시니돈, 시니돈-에틸, 신메틸린, 시노설푸론, 클레토딤, 클로디나폽, 클로디나폽-프로파길, 클로펜세트, 클로마존, 클로메프롭, 클로프롭, 클로피랄리드, 클로란술람, 클로란술람-메틸, 쿠밀루론, 사이아나미드, 사이아나진, 사이클라닐리드, 사이클로에이트, 사이클로설파무론, 사이클록시딤, 사이클루론, 사이할로폽, 사이할로폽-부틸, 사이퍼콰트, 사이프라진, 사이프라졸, 2,4-D, 2,4-DB, 다이뮤론/다임론, 달라폰, 다미노지드, 다조메트, n-데카놀, 데스메디팜, 데스메트린, 데토실-피라졸레이트 (DTP), 디-알레이트, 디캄바, 디클로베닐, 디클로르프롭, 디클로르프롭-P, 디클로폽, 디클로폽-메틸, 디클로폽-P-메틸, 디클로술람, 디에타틸, 디에타틸-에틸, 디페녹수론, 디펜조콰트, 디플루페니칸, 디플루펜조피르, 디플루펜조피르-나트륨, 디메푸론, 디케굴락-나트륨, 디메푸론, 디메피페레이트, 디메타클로르, 디메타메트린, 디메테나미드, 디메테나미드-P, 디메티핀, 디메트라설푸론, 디니트라민, 디노셉, 디노텁, 디펜아미드, 디프로페트린, 디콰트, 디콰트-디브로마이드, 디티오피르, 디우론, DNOC, 에글리나진-에틸, 엔도탈, EPTC, 에스프로캅, 에탈플루랄린, 에타메트설푸론-메틸, 에테폰, 에티디무론, 에티오진, 에토푸메세이트, 에톡시펜, 에톡시펜-에틸, 에톡시설푸론, 에토벤자니드, F-5331, 즉 N-[2-클로로-4-플루오로-5-[4-(3-플루오로-프로필)-4,5-디하이드로-5-옥소-1H-테트라졸-1-일]-페닐]에탄설폰아미드, 페노프롭, 페녹사프롭, 페녹사프롭-P, 페녹사프롭-에틸, 페녹사프롭-P-에틸, 펜트라자미드, 페누론, 플람프롭, 플람프롭-M-이소프로필, 플람프롭-M-메틸, 플라자설푸론, 플로라술람, 플루아지폽, 플루아지폽-P, 플루아지폽-부틸, 플루아지폽-P-부틸, 플루아졸레이트, 플루카바존, 플루카바존-나트륨, 플루세토설푸론, 플루클로랄린, 플루페나세트 (티아플루아미드), 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루메트랄린, 플루메트술람, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루미프로핀, 플루오메투론, 플루오로디펜, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 플루폭삼, 플루프로파실, 플루프로파네이트, 플루피르설푸론, 플루피르설푸론-메틸-나트륨, 플루레놀, 플루레놀-부틸, 플루리돈, 플루로클로리돈, 플루록시피르, 플루록시피르-멥틸, 플루르피리미돌, 플루르타몬, 플루티아세트, 플루티아세트-메틸, 플루티아미드, 포메사펜, 포람설푸론, 포클로르페누론, 포사민, 푸릴옥시펜, 지베렐산, 글루포시네이트, L-글루포시네이트, L-글루포시네이트-암모늄, 글루포시네이트-암모늄, 글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필암모늄, H-9201, 할로사펜, 할로설푸론, 할로설푸론-메틸, 할록시폽, 할록시폽-P, 할록시폽-에톡시에틸, 할록시폽-P-에톡시에틸, 할록시폽-메틸, 할록시폽-P-메틸, 헥사지논, HNPC-9908, HOK-201, HW-02, 이마자메타벤즈, 이마자메타벤즈-메틸, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 이마조설푸론, 이나벤피드, 인다노판, 인돌아세트산 (IAA), 4-인돌-3-일부티르산 (IBA), 요오도설푸론, 요오도설푸론-메틸-나트륨, 아이옥시닐, 이소카바미드, 이소프로팔린, 이소프로투론, 이소우론, 이속사벤, 이속사클로르톨, 이속사플루톨, 이속사피리폽, KUH-043, KUH-071, 카르부틸레이트, 케토스피라독스, 락토펜, 레나실, 리누론, 말레익 하이드라지드, MCPA, MCPB, MCPB-메틸, -에틸 및 -나트륨, 메코프롭, 메코프롭-나트륨, 메코프롭-부토틸, 메코프롭-P-부토틸, 메토프롭-P-디메틸암모늄, 메코프롭-P-2-에틸헥실, 메코프롭-P-칼륨, 메페나세트, 메플루이다이드, 메피콰트-클로라이드, 메소설푸론, 메소설푸론-메틸, 메타벤즈티아주론, 메탐, 메타미폽, 메타미투론, 메타자클로르, 메타졸, 메톡시페논, 메틸딤론, 1-메틸사이클로프로펜, 메틸 이소티오시아네이트, 메토벤주론, 메토벤주론, 메토브로루론, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 메토술람, 메톡수론, 메트리부진, 메트설푸론, 메트설푸론-메틸, 몰리네이트, 모날리드, 모노카바미드, 모노카바미드 디하이드로겐 설페이트, 모노리누론, 모노설푸론, 모누론, MT 128, MT-5950, 즉 N-[3-클로로-4-(1-메틸에틸)-페닐]-2-메틸펜탄아미드, NGGC-011, 나프로아닐리드, 나프로파미드, 납탈람, NC-310, 즉 4-(2,4-디클로로벤조일)-1-메틸-5-벤질옥시피라졸, 네부론, 니코설푸론, 니피라클로펜, 니트랄린, 니트로펜, 니트로페놀라트-나트륨 (이성체 혼합물), 니트로플루오르펜, 노나노산, 노르플루라존, 오르벤카브, 오르토설파무론, 오리잘린, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥사설푸론, 옥사지클로메폰, 옥시플루오르펜, 파클로부트라졸, 파라콰트, 파라콰트 디클로라이드, 펠라르곤산 (노나노산), 펜디메탈린, 펜드랄린, 페녹술람, 펜타노클로르, 펜톡사존, 퍼플루이돈, 페톡사미드, 페니소팜, 펜메디팜, 펜메디팜-에틸, 피클로람, 피콜리나펜, 피녹사덴, 피페로포스, 피리페놉, 피리페놉-부틸, 프레틸라클로르, 프리미설푸론, 프리미설푸론-메틸, 프로벤아졸, 프로플루아졸, 프로시아진, 프로디아민, 프리플루랄린, 프로폭시딤, 프로헥사디온, 프로헥사디온-칼슘, 프로하이드로자스몬, 프로메톤, 프로메트린, 프로파클로르, 프로파닐, 프로파퀴자폽, 프로파진, 프로팜, 프로피소클로르, 프로폭시카바존, 프로폭시카바존-나트륨, 프로피자미드, 프로설파린, 프로설포카브, 프로설푸론, 프리나클로르, 피라클로닐, 피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 피라졸리네이트 (피라졸레이트), 피라조설푸론-에틸, 피라족시펜, 피리밤벤즈, 피리밤벤즈-이소프로필, 피리벤족심, 피리부티카브, 피리다폴, 피리데이트, 피리프탈리드, 피리미노박, 피리미노박-메틸, 피리미설판, 피리티오박, 피리티오박-나트륨, 피록사설폰, 피록술람, 퀸클로락, 퀸메락, 퀴노클라민, 퀴잘로폽, 퀴잘로폽-에틸, 퀴잘로폽-P, 퀴잘로폽-P-에틸, 퀴잘로폽-P-테푸릴, 림설푸론, 사플루펜아실, 세크부메톤, 세톡시딤, 시두론, 시마진, 시메트린, SN-106279, 설프-알레이트 (CDEC), 설펜트라존, 설포메투론, 설포메투론-메틸, 설포세이트 (글리포세이트-트리메슘), 설포설푸론, SYN-523, SYP-249, SYP-298, SYP-300, 테부탐, 테부티우론, 테크나젠, 테프랄옥시딤, 터바실, 터부카브, 터부클로르, 터부메톤, 터부틸라진, 터부트린, TH-547, 테닐클로르, 티아플루아미드, 티아자플루론, 티아조피르, 티디아지민, 티디아주론, 티엔카바존, 티엔카바존-메틸, 티펜설푸론, 티펜설푸론-메틸, 티오벤카브, 티오카바질, 트랄콕시딤, 트리-알레이트, 트리아설푸론, 트리아지플람, 트리아조펜아미드, 트리베누론, 트리베누론-메틸, 트리클로로아세트산 (TCA), 트리클로피르, 트리디페인, 트리에타진, 트리플옥시설푸론, 트리플옥시설푸론-나트륨, 트리플루랄린, 트리플루설푸론, 트리플루설푸론-메틸, 트리메투론, 트리넥사팍, 트리넥사팍-에틸, 트리토설푸론, 트시토데프, 유니코나졸, 유니코타졸-P, 베르놀레이트, ZJ-0166, ZJ-0270, ZJ-0543, ZJ-0862 및 하기의 화합물
Figure pct00002
Figure pct00003
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염과 상기한 화합물 하나 이상의 조성물은 아직 당 분야에 알려지지 않았다.
따라서, 본 발명의 다른 요지는 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염(성분 (A))과, 이하의 서브그룹 B1 내지 B11에서 선택된 하나 이상, 바람직하게 하나의 성분(들) (B)를 포함하는 조성물이다:
B1 - 다음을 포함하는 1,3-디케토 화합물:
프로헥사디온, 프로헥사디온-칼슘, 트리넥사팍-에티(ethy),
알록시딤, 알록시딤-소듐, 부트록시딤, 클레토딤, 사이클록시딤, 케토스피라독스, 프로폭시딤, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤,
메소트리온, 설코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 바이사이클로피론, 펜퀴노트리온, SL-261,
피녹사덴,
B2 - 다음을 포함하는 (설폰)아미드:
베플루부타미드, 브로모부타이드, 디메텐아미드, 디메텐아미드-P, 디펜아미드, 나프로파미드, 페톡사미드, N-[3-클로로-4-(1-메틸에틸)-페닐]-2-메틸펜탄아미드,
나프탈람, 프로피자미드,
디플루페니칸, 에토벤자니드, 플루페나셋, 메페나셋, 메플루이디드, 펜타노클로르, 피콜리나펜, 프로파닐, N-페닐프탈람산,
아세토클로르, 알라클로르, 아미도클로르, 부타클로르, 부테나클로르, 디메타클로르, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 프레틸라클로르, 프로파클로르, 프로피소클로르, (2-클로로-6'-에틸-N-이소프로폭시메틸아세토-o-톨루이디드), 테닐클로르,
아술람, 카바릴, 카베타미드, 클로르프로팜, 데스메디팜, 펜메디팜, 프로팜,
부틸레이트, 사이클로에이트, 디메피페레이트, EPTC, 에스프로카브, 메타설포카브, 몰리네이트, 오르벤카브, 페불레이트, 프로설포카브, 피리부티카브, 티오벤카브, 트리-알레이트, 베르놀레이트,
아미도설푸론, 아짐설푸론, 벤설푸론, 벤설푸론-메틸, 클로리무론, 클로리무론-에틸, 클로르설푸론, 시노설푸론, 사이클로설파무론, 에타메트설푸론, 에타메트설푸론-메틸, 에톡시설푸론, 플라자설푸론, 플루세토설푸론, 플루피르설푸론-메틸-소듐, 포람설푸론, 할로설푸론-메틸, 이마조설푸론, 요오도설푸론, 요오도설푸론-메틸-소듐, 메소설푸론, 메소설푸론-메틸, 메타조설푸론, 메티오피르설푸론, 메트설푸론, 메트설푸론-메틸, 모노설푸론, 모노설푸론-에스테르, 니코설푸론, 오르토설파무론, 옥사설푸론, 프리미설푸론-메틸, 프로피리설푸론, 프로설푸론, 피라설푸론, 피라조설푸론-에틸, 림설푸론, 설포메투론, 설포메투론-메틸, 설포설푸론, 티펜설푸론, 티펜설푸론-메틸, 트리아설푸론, 트리베누론, 트리베누론-메틸, 트리플록시설푸론, 트리플록시설푸론 (소듐), 트리플루설푸론, 트리플루설푸론-메틸, 트리토설푸론, (벤조산, 2-[[[[[4-메톡시-6-(메틸티오)-2-피리미디닐]아미노]카보닐]아미노]설포닐]메틸 에스테르),
플루카바존, 플루카바존-소듐, 이프펜카바존, 프로폭시카바존, 프로폭시카바존-소듐, 티엔카바존, 티엔카바존-메틸,
클로란술람, 클로란술람-메틸, 디클로술람, 플로라술람, 플루메트술람, 메토술람, 페녹스술람, 피록스술람,
3-클로로-N-[(4,6-디메톡시피리미딘-2-일)카바모일]-1-메틸-4-(5-메틸-5,6-디하이드로-1,4,2-디옥사진-3-일)-1H-피라졸-5-설폰아미드,
B3 - 다음을 포함하는 아릴니트릴:
브로목시닐, 브로목시닐-부티레이트, 브로목시닐-포타슘, 브로목시닐-헵타노에이트, 브로목시닐-옥타노에이트, 데토실-피라졸레이트(DTP), 디클로베닐, 이옥시닐, 이옥시닐-옥타노에이트, 이옥시닐-포타슘, 이옥시닐-소듐, 피라클로닐,
B4 - 다음을 포함하는 아졸:
벤조페납, 피라졸리네이트(피라졸레이트), 피라족시펜, 피록사설폰, 토프라메존, 피라설포톨, 톨피랄레이트, 3-(3-클로로-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸, 3-(3-요오도-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸, 1-에틸-3-(3-플루오로-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸,
피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 페녹사설폰, 플루아졸레이트,
이소우론, 이속사벤, 이속사플루톨,
이마자메타벤즈, 이마자메타벤즈-메틸, 이마자픽, 이마자픽-암모늄, 이마자피르, 이마자피르-이소프로필-암모늄, 이마자퀸, 이마자퀸-암모늄, 이마제타피르, 이마제타피르-암모늄,
아자페니딘, 메타졸, 옥사디아르길, 옥사디아존,
아미카바존, 벤카바존, 카펜트라존, 카펜트라존-에틸, 설펜트라존,
아미트롤, 파클로부트라졸, 유니코나졸, 유니코나졸-P, 카펜스트롤,
펜트라자미드,
B5 - 다음을 포함하는 기타 제초제:
알리도클로르, 아미노사이클로피라클로르, 아미노사이클로피라클로르-포타슘, 아미노사이클로피라클로르-메틸, N-아세틸티아졸리딘-4-카복실산, 아크롤레인, 아미노피랄리드, 암모늄 펠라르고네이트, 암모늄 설파메이트, 아비글리신, 베나졸린, 베나졸린-에틸, 벤플루랄린, 벤푸레세이트, 벤타존, 벤조바이사이클론, 6-벤질아미노퓨린, 보랙스, 브라시놀리드, 브로모페녹심, 부트랄린, 카르본, 카테킨, 클로르페낙, 클로르페낙-소듐, 클로르펜프로프, 클로르플루레놀, 클로르플루레놀-메틸, 클로리다존, 클로르메쿠아트 클로라이드, 클로로아세트산, 클로르프탈림, 클로르탈-디메틸, 시니돈, 시니돈-에틸, 신메틸린, 클로펜셋, 클로마존, 클록시포낙, 시아나미드, 사이클라닐리드, 사이클로피리모레이트, 6-이소펜틸아미노-퓨린, 키네틴, 제아틴, 달라폰, 다미노지드, 다조멧, n-데칸올, 디펜조쿠아트 메틸설페이트, 2,6-디이소프로필나프탈렌, 디케굴락, 디케굴락-소듐, 디메티핀, 디메틸비산 (dimethylarsenic acid), 디니트라민, 디노터브, 디쿠아트 디브로마이드, 디티오피르, DNOC, 엔도탈, 엔도탈-디포타슘, 엔도탈-디소듐, 엔도탈-모노(N,N-디메틸알킬암모늄), 에타플루랄린, 에토푸메세이트, 에틸클로제이트, 황산제일철, 플람프로프, 플람프로프-M-이소프로필, 플람프로프-M-메틸, 플루클로랄린, 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루메트랄린, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루프로파네이트, 플루레놀, 플루레놀-부틸, 플루레놀-디메틸암모늄-메틸, 플루리돈, 플루로클로리돈, 플루르타몬, 플루티아셋, 플루티아셋-메틸, 지베렐린산, 할라욱시펜, 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염, 인다노판, 이소프로팔린, 이소프로티올란, 말레산 히드라지드, 메피쿠아트 클로라이드, 메탐, 메티오졸린, 메틸아르손산, 1-메틸사이클로프로펜, 메틸 이소티오시아네이트, 니트로페놀레이트 혼합물, 노난산(nonanoic acid), 노르플루라존, 올레산, 오리잘린, 옥사지클로메폰, 파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 펜타클로로페놀, 펜톡사존, 석유, 프로디아민, n-프로필 디하이드로자스모네이트, 피리다폴, 피리데이트, 퀴노클라민, 신토펜, 소듐 클로레이트, 황산, 타르 오일, TCA, TCA 소듐, 테크나젠, 티아조피르, 트리아콘타놀, 트리아파몬, 트리플루랄린 및 우레아 설페이트,
B6 - 다음을 포함하는 (헤트)아릴카복실산:
클로람벤, 디캄바, 디캄바염, 2,3,6-TBA,
클로피랄리드, 플루록시피르, 플루록시피르-메틸, 이나벤피드, 피클로람, 트리클로피르,
퀸클로락, 퀸메락,
인돌-3-일아세트산, 4-인돌-3-일부티르산,
2-(1-나프틸)아세트아미드, 1-나프틸아세트산, 2-나프틸옥시아세트산,
B7 - 다음을 포함하는 유기 인 화합물:
아닐로포스, 벤술리드, 빌라나포스, 빌라나포스-소듐, 부티마포스, 클라시포스, 포사민, 글루포시네이트, 글루포시네이트 염, 글루포시네이트-암모늄, 글루포시네이트-소듐, 글루포시네이트-P, L-글루포시네이트-암모늄, L-글루포시네이트-소듐, 글리포세이트, 글리포세이트 염, 글리포세이트-이소프로필-암모늄, 글리포세이트-암모늄, 글리포세이트-디메틸암모늄, 글리포세이트-트리메슘 (=설포세이트), 글리포세이트-디암모늄, 글리포세이트-포타슘, 글리포세이트-소듐, 피페로포스, 에테폰 및 트리부포스,
B8 - 다음을 포함하는 페닐 에테르:
아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아클로니펜, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 포메사펜, 포메사펜-소듐, 할로사펜, 락토펜, 옥시플루오르펜,
비페녹스, 에톡시펜-에틸,
클로메프로프,
클로프로프, 디클로르프로프, 디클로르프로프-P, 메코프로프, 메코프로프-소듐, 메코프로프-부토틸, 메코프로프-P, 메코프로프-P-부토틸, 메코프로프-P-디메틸암모늄, 메코프로프-P-2-에틸헥실, 메코프로프-P-포타슘,
4-CPA, 2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올라민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤라민, MCPA, MCPA-부토틸, MCPA-디메틸암모늄, MCPA-2-에틸헥실, MCPA-이소프로필암모늄, MCPA-포타슘, MCPA-소듐, MCPA-티오에틸,
2,4-DB, MCPB, MCPB-메틸, MCPB-에틸-소듐,
클로디나폽-에틸, 클로디나폽-프로파길, 시할로폽, 시할로폽-부틸, 디클로폽, 디클로폽-메틸, 디클로폽-P, 디클로폽-P-메틸, 페녹사프로프, 페녹사프로프-P, 페녹사프로프-P-에틸, 플루아지폽, 플루아지폽-부틸, 플루아지폽-P, 플루아지폽-P-부틸, 할록시폽, 할록시폽-P, 메타미폽, 프로파퀴자폽, 퀴잘라폽, 퀴잘라폽-에틸, 퀴잘라폽-P, 퀴잘라폽-P-에틸, 퀴잘라폽-P-테푸릴,
B9 - 다음을 포함하는 피리미딘:
안시미돌, 플루르프리미돌, 피리미설판,
비스피리박, 비스피리박-소듐, 피리벤족심, 피리미노박, 피리미노박-메틸, 피리밤벤즈, 피리밤벤즈-이소프로필, 피리밤벤즈-프로필,
피리프탈리드, 피리티오박, 피리티오박-소듐,
벤즈펜디존, 브로마실, 부타페나실, 레나실, 사플루페나실, 테르바실, 티아페나실,
2-클로로-4-플루오로-5-[3-메틸-2,6-디옥소-4-(트리플루오로메틸)-3,6-디하이드로피리미딘-1(2H)-일]-N-[메틸(1-메틸에틸)-설파모일]벤즈아미드,
에틸[(2-{2-클로로-5-[2,6-디옥소-4-(트리플루오로메틸)-3,6-디하이드로피리미딘-1(2H)-일]-4-플루오로페녹시}피리딘-2-일)옥시]아세테이트
B10 - 다음을 포함하는 (티오)우레아
쿠밀루론,
클로르브로무론, 클로로톨루론, 클로록수론, 다이무론, 디플루펜조피르, 디플루펜조피르-소듐, 디메푸론, 디우론, 플루오메투론, 포르클로르페누론, 이소프로투론, 카르부틸레이트, 리누론, 메틸딤론, 메토브로무론, 메톡수론, 모노리누론, 네부론, 시두론, 터부카브, 티디아주론,
메티우론,
테부티우론,
메타벤즈티아주론,
B11 - 다음을 포함하는 트리아진:
트리아지플람, 인다지플람,
아트라진, 시아나진, 시프라진, 프로파진, 시마진, 테르부메톤, 테르부틸라진, 트리에타진,
프로메톤,
아메트린, 디메타메트린, 프로메트린, 시메트린, 테르부트린,
에토진, 헥사지논, 메타미트론, 메트리부진,
트리플루디목사진.
추가 구체예에서, 이들 제초 조성물은 다음으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 완화제(성분 C)를 포함한다: 베녹사코르 (C1), 클로퀸토셋-멕실 (C2), 시프로설파미드 (C3), 디클로르미드 (C4), 펜클로림 (C5), 펜클로라졸 (C6), 푸릴라졸 (C7), 이속사디펜-에틸 (C8), 메펜피르-디에틸 (C9), CAS 71526-07-3의 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (C10), CAS 52836-31-4의 2,2,5-트리메틸-3-(데클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (C11). CAS 129531-12-0의 2-메톡시-N-({4-[(메틸카바모일)아미노]페닐}설포닐)벤즈아미드 (C12).
성분 (B)와 (C)는, 예를 들어 ["The Pesticide Manual", 15th edition, British Crop Protection Council 및 Royal Soc. of Chemistry], 및 [웹사이트 http://www.alanwood.net/pesticides/]로부터 공지되어 있다.
본 발명 조성물은 추가의 다른 성분, 예를 들어 다른 종류의 활성 작물 보호 성분 및/또는 작물 보호에 통상적인 첨가제 및/또는 제제 보조제를 포함하거나, 이들과 함께 사용될 수 있다.
성분 (A), 성분(들) (B) 및 임의로 완화제(들)(성분 (C))는, 예를 들어 식물, 식물 부위, 식물 종자 또는 식물이 자라는 영역에 통상적인 방식으로, 예를 들어 함께(예를 들어, 공동 제제 또는 탱크 믹스로서) 또는 상이한 시기에 단기 연속(분할)으로 적용될 수 있다. 예를 들어 개별 활성 화합물 또는 제초제-완화제 조합물을 여러 부분으로 적용(순차적 적용)하는 것, 예를 들어 발아전 적용에 이은 발아후 적용, 또는 조기 발아후 적용에 이어서 중기 또는 후기의 발아후 적용하는 것이 가능하다. 개별 조합물의 활성 화합물을 함께 또는 즉각적으로 연속 적용하는 것이 바람직하다. 개별 활성 화합물 또는 제초제-완화제 조합물을 종자 처리용으로 사용하는 것도 가능하다.
성분 (A)로서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드를 포함하는 본 발명에 따른 조성물이 바람직하다.
서브그룹 B1에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 클레토딤, 메소트리온, 설코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온 및 바이사이클로피론이다.
서브그룹 B1에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 클레토딤, 메소트리온, 바이사이클로피론 및 템보트리온이다.
서브그룹 B1에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 바이사이클로피론 및 템보트리온이다.
서브그룹 B2에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 아세토클로르, 디클로술람, 디플루페니칸, 플루메트술람, 포람설푸론, 니코설푸론, S-메톨라클로르, 티엔카바존-메틸, 디메텐아미드-P, 림설푸론, 알라클로르, 클로리무론-에틸, 플로라술람, 플루카바존-소듐, 플루페나셋, 요오도설푸론-메틸-소듐, 에톡시설푸론, 이프펜카바존, 메트설푸론-메틸, 프로폭시카바존-소듐 및 트리베누론-메틸이다.
서브그룹 B2에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 아세토클로르, 디클로술람, 디플루페니칸, 포람설푸론, 니코설푸론, S-메톨라클로르, 티엔카바존-메틸, 디메텐아미드-P, 림설푸론, 알라클로르, 클로리무론-에틸, 플로라술람, 플루카바존-소듐, 플루페나셋 및 요오도설푸론-메틸-소듐이다.
서브그룹 B2에서 선택된 가장 바람직한 성분 (B)는 아세토클로르, 디클로술람, 디플루페니칸, 포람설푸론, 니코설푸론, S-메톨라클로르 및 티엔카바존-메틸이다.
서브그룹 B3에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 브로목시닐 및 이속시닐이다.
그룹 B3의 특히 바람직한 제초제는 브로목시닐이다.
서브그룹 B4에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 아미카바존, 카펜트라존-에틸, 이마자피르, 이마제타피르, 이속사플루톨, 옥사디아길, 옥사디아존, 피라술포톨, 피록사술폰 및 토프라메존이다.
그룹 B4의 특히 바람직한 제초제는 카펜트라존-에틸, 이마자피르, 이마제타피르, 이속사플루톨, 옥사디아길, 옥사디아존 및 피라술폰이다.
그룹 B4의 특별히 바람직한 제초제는 이마자피르, 이속사플루톨 및 피록사술폰이다.
서브그룹 B5에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 아미노피랄리드, 플루미옥사진, 플루르타몬, 할라욱시펜(halauxifen), 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염, 피리데이트, 벤타존, 시니돈-에틸, 클로마존 및 트리플루랄린이다.
그룹 B4의 특히 바람직한 제초제는 파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 아미노피랄리드, 플루미옥사진, 플루르타몬, 할라욱시펜, 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염 및 피리데이트이다.
서브그룹 B5에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 파라쿠아트 디클로라이드 및 펜디메탈린이다.
서브그룹 B6에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 디캄바, 디캄바염 및 플루록시피르이다.
서브그룹 B6에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 디캄바 및 디캄바염이다.
서브그룹 B6에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 디캄바이다.
서브그룹 B7에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 글루포시네이트, 글루포시네이트-암모늄, L-글루포시네이트-암모늄, 글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필-암모늄이다.
서브그룹 B7에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 글루포시네이트-암모늄 및 글리포세이트이다.
서브그룹 B7에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 글루포시네이트-암모늄 및 글리포세이트이다.
서브그룹 B8에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올아민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤아민, 페녹사프로프-P-에틸, 락토펜, 플루아지포프-P-부틸, 아클로니펜 및 할록시포프-P이다.
서브그룹 B8에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올아민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤아민, 페녹사프로프-P-에틸, 락토펜 및 플루아지포프-P-부틸이다.
서브그룹 B8에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올아민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤아민, 페녹사프로프-P-에틸 및 락토펜이다.
서브그룹 B9에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 사플루페나실이다.
서브그룹 B10에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 디우론, 디플루펜조피르 및 플루오메투론이다.
서브그룹 B10에서 선택된 특히 바람직한 성분 (B)는 디우론 및 디플루펜조피르이다.
서브그룹 B10에서 선택된 특별히 바람직한 성분 (B)는 디우론이다.
서브그룹 B11에서 선택된 바람직한 성분 (B)는 아트라진, 인다지플람, 테르부틸라진 및 메트리부진이다.
본 발명에 따른 제초제 조성물에 있어서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 성분 (A) 또는 그의 염을 적용하는 비율은 일반적으로 헥타아르 당 활성 성분(a.i.) 1 내지 500 g, 바람직하게 2 내지 300 g의 a.i./ha, 특히 바람직하게 3 내지 200 g의 a.i./ha이다. 성분 (B)의 적용 비율은 일반적으로 헥타아르 당 활성 성분(a.i.) 1 내지 5000 g, 바람직하게 2 내지 3000 g의 a.i./ha, 특히 바람직하게 3 내지 2000 g의 a.i./ha이다. 완화제(성분 (C))의 적용 비율은 일반적으로 헥타아르 당 활성 성분(a.i.) 1 내지 500 g, 바람직하게 2 내지 400 g의 a.i./ha, 특히 바람직하게 3 내지 300 g의 a.i./ha이다. (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 HPPD 내성 식물이 성장하고 있는 영역에 적용될 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 필요한 적용율은 온도, 습도, 사용된 제초제의 성질 등과 같은 외부 조건의 작용에 따라 변화한다. 이것은 넓은 제한 내에서, 예를 들어 0.001 내지 1.0 ㎏/ha 및 그 이상의 활성 물질 사이에서 변화할 수 있지만, 이것은 바람직하게 0.005 내지 750g/ha이다.
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염과, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염과 상이한 제초제를, (I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 HPPD 내성 식물에 조합 적용하는 경우에, 이들 혼합물은 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염과는 상이한 제초제의 존재로 인하여 작물 손상을 야기할 수 있다. 이러한 작물 손상을 감소/제거시키기 위해서, 적절한 완화제가 첨가될 수 있다. 해독제로서의 활성량으로 사용되는 이들 완화제는, 예를 들어 곡물류(밀, 보리, 호밀, 옥수수, 쌀, 기장), 알팔파, 사탕무, 사탕수수, 평지, 목화 및 대두 종, 바람직하게는 옥수수, 목화, 사탕무 또는 대두 종과 같은 경제적으로 중요한 작물에서, 사용된 제초제/살충제의 식물독소 부작용을 감소시킨다.
A) 하기 화학식 (S-I)의 화합물
[화학식 S-I]
Figure pct00004
여기에서 기호 (symbols) 및 인덱스 (indices)는 다음의 의미를 갖는다:
nA는 0 내지 5, 바람직하게는 0 내지 3의 자연수이고;
RA 1는 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, 니트로 또는 (C1-C4)-할로알킬이며;
WA는 타입 N 또는 O의 1 내지 3 개의 헤테로 환 원자를 가지며, 여기에서 적어도 하나의 질소 원자 및 최대 1 개의 산소 원자가 환 내에 존재하는 부분적으로 불포화되거나 방향족인 5-원 헤테로사이클로 구성된 그룹으로부터의 비치환되거나 치환된 2가 헤테로사이클릭 래디칼, 바람직하게는 (WA 1) 내지 (WA 4)로 구성된 그룹으로부터의 래디칼이고,
Figure pct00005
mA는 0 또는 1이며;
RA 2는 ORA 3, SRA 3 또는 NRA 3RA 4, 또는 질소 원자를 통해서 (S-I)에서의 카보닐 그룹에 부착되고, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 및 임의로 치환된 페닐로 구성된 그룹으로부터의 래디칼에 의해서 비치환되거나 치환되며, 적어도 하나의 질소 원자 및 바람직하게는 O 및 S로 구성된 그룹으로부터의 3 개까지의 헤테로 원자를 갖는 포화되거나 불포화된 3- 내지 7-원 헤테로사이클, 바람직하게는 화학식 ORA 3, NHRA 4 또는 N(CH3)2, 특히 ORA 3의 래디칼이고;
RA 3은 수소, 또는 바람직하게는 총 1 내지 18 개의 탄소 원자를 갖는 비치환되거나 치환된 지방족 탄화수소 래디칼이며;
RA 4는 수소, (C1-C6)-알킬, (C1-C6)-알콕시 또는 치환되거나 비치환된 페닐이고;
RA 5는 H, (C1-C8)-알킬, (C1-C8)-할로알킬, (C1-C4)-알콕시-(C1-C8)-알킬, 시아노 또는 COORA 9이며, 여기에서 RA 9는 수소, (C1-C8)-알킬, (C1-C8)-할로알킬, (C1-C4)-알콕시-(C1-C4)-알킬, (C1-C6)-하이드록시알킬, (C3-C12)-사이클로알킬 또는 트리-(C1-C4)-알킬실릴이고;
RA 6, RA 7, RA 8은 동일하거나 상이하며, 수소, (C1-C8)-알킬, (C1-C8)-할로알킬, (C3-C12)-사이클로알킬 또는 치환되거나 비치환된 페닐이고;
바람직하게는
a) 디클로로페닐피라졸린-3-카복실산의 타입의 화합물, 바람직하게는 WO 91/07874에 기술된 바와 같은 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-(에톡시카보닐)-5-메틸-2-피라졸린-3-카복실레이트 (S1-1) ("메펜피르-디에틸", 참조: Pestic. Man.), 및 관련된 화합물;
b) 디클로로페닐피라졸카복실산의 유도체, 바람직하게는 EP-A-333　131 및 EP-A-269　806에 기술된 바와 같은 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-메틸피라졸-3-카복실레이트 (S1-2), 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-이소프로필피라졸-3-카복실레이트 (S1-3), 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-(1,1-디메틸에틸)피라졸-3-카복실레이트 (S1-4), 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-페닐피라졸-3-카복실레이트 (S1-5) 및 관련된 화합물과 같은 화합물;
c) 트리아졸카복실산의 타입의 화합물, 바람직하게는 EP-A-174　562 및 EP-A-346　620에 기술된 바와 같은 펜클로라졸(-에틸 에스테르), 즉 에틸 1-(2,4-디클로로페닐)-5-트리클로로-메틸-(1H)-1,2,4-트리아졸-3-카복실레이트 (S1-6), 및 관련된 화합물과 같은 화합물;
d) 5-벤질- 또는 5-페닐-2-이속사졸린-3-카복실산 또는 5,5-디페닐-2-이속사졸린-3-카복실산 타입의 화합물, 바람직하게는 WO　91/08202에 기술된 바와 같은 에틸 5-(2,4-디클로로벤질)-2-이속사졸린-3-카복실레이트 (S1-7) 또는 에틸 5-페닐-2-이속사졸린-3-카복실레이트 (S1-8) 및 관련된 화합물, 또는 국제특허출원 WO-A-95/07897에 기술된 바와 같은 에틸 5,5-디페닐-2-이속사졸린 카복실레이트 (S1-9) ("이속사디펜-에틸") 또는 n-프로필 5,5-디페닐-2-이속사졸린 카복실레이트 (S1-10) 또는 에틸 5-(4-플루오로페닐)-5-페닐-2-이속사졸린-3-카복실레이트 (S1-11).
B) 화학식 (S-II)의 퀴놀린 유도체
[화학식 S-II]
Figure pct00006
여기에서 기호 및 인덱스는 다음의 의미를 갖는다:
RB 1은 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, 니트로 또는 (C1-C4)-할로알킬이며;
nB는 0 내지 5, 바람직하게는 0 내지 3의 자연수이고;
RB 2는 ORB 3, SRB 3 또는 NRB 3RB 4, 또는 질소 원자를 통해서 (S-II)에서의 카보닐 그룹에 부착되고, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 또는 임의로 치환된 페닐로 구성된 그룹으로부터의 래디칼에 의해서 비치환되거나 치환되며, 적어도 하나의 질소 원자 및 바람직하게는 O 및 S로 구성된 그룹으로부터의 3 개까지의 헤테로 원자를 갖는 포화되거나 불포화된 3- 내지 7-원 헤테로사이클, 바람직하게는 화학식 ORB 3, NHRB 4 또는 N(CH3)2, 특히 화학식 ORB 3의 래디칼이며;
RB 3은 수소, 또는 바람직하게는 총 1 내지 18 개의 탄소 원자를 갖는 비치환되거나 치환된 지방족 탄화수소 래디칼이고;
RB 4는 수소, (C1-C6)-알킬, (C1-C6)-알콕시 또는 치환되거나 비치환된 페닐이며;
TB는 하나 또는 두 개의 (C1-C4)-알킬 래디칼에 의해서, 또는 [(C1-C3)-알콕시]카보닐에 의해서 비치환되거나 치환된 (C1- 또는 C2)-알칸디일 쇄이고;
바람직하게는
a) 8-퀴놀린옥시아세트산 (S2)의 타입의 화합물, 바람직하게는 EP-A-86　750, EP-A-94　349 및 EP-A-191　736 또는 EP-A-0 492 366에 기술된 바와 같은 1-메틸헥실 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (통칭 "클로퀸토세트-멕실" (S2-1)) (참조: Pestic. Man.), 1,3-디메틸부트-1-일 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-2), 4-알릴옥시부틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-3), 1-알릴옥시프로프-2-일 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-4), 에틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-5), 메틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-6), 알릴 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-7), 2-(2-프로필리덴이미녹시)-1-에틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-8), 2-옥소프로프-1-일 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)아세테이트 (S2-9) 및 관련된 화합물, 및 WO-A-2002/034048에 기술된 바와 같은 이들의 수화물 및 염.
b) (5-클로로-8-퀴놀린옥시)말론산의 타입의 화합물, 바람직하게는 EP-A-0 582 198에 기술된 바와 같은 디에틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)말로네이트, 디알릴 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)말로네이트, 메틸 에틸 (5-클로로-8-퀴놀린옥시)말로네이트 및 관련된 화합물.
C) 화학식 (S-III)의 화합물
[화학식 S-III]
Figure pct00007
여기에서 기호 및 인덱스는 다음 의미를 갖는다:
RC 1은 (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-할로알킬, (C2-C4)-알케닐, (C2-C4)-할로알케닐, (C3-C7)-사이클로알킬, 바람직하게는 디클로로메틸이며;
RC 2, RC 3은 동일하거나 상이하고, 수소, (C1-C4)-알킬, (C2-C4)-알케닐, (C2-C4)-알키닐, (C1-C4)-할로알킬, (C2-C4)-할로알케닐, (C1-C4)-알킬카바모일-(C1-C4)-알킬, (C2-C4)-알케닐카바모일-(C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시-(C1-C4)-알킬, 디옥솔라닐-(C1-C4)-알킬, 티아졸릴, 푸릴, 푸릴알킬, 티에닐, 피페리딜, 치환되거나 비치환된 페닐이거나, RC 2 및 RC 3은 함께 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릭 환, 바람직하게는 옥사졸리딘, 티아졸리딘, 피페리딘, 모르폴린, 헥사하이드로피리미딘 또는 벤즈옥사진 환을 형성하고;
바람직하게는,
예를 들어, "디클로르미드" (참조: Pestic.Man.) (= N,N-디알릴-2,2-디클로로아세트아미드), "R-29148" (= 3-디클로로아세틸-2,2,5-트리메틸-1,3-옥사졸리딘; Stauffer), "R-28725" (= 3-디클로로아세틸-2,2,-디메틸-1,3-옥사졸리딘; Stauffer), "베녹사코르" (참조: Pestic. Man.) (= 4-디클로로아세틸-3,4-디하이드로-3-메틸-2H-1,4-벤즈옥사진), "PPG-1292" (= N-알릴-N-[(1,3-디옥솔란-2-일)메틸]디클로로아세트아미드; PPG Industries), "DKA-24" (= N-알릴-N-[(알릴아미노카보닐)메틸]디클로로아세트아미드; Sagro-Chem), "AD-67" 또는 "MON 4660" (= 3-디클로로아세틸-1-옥사-3-아자-스피로[4,5]데칸; Nitrokemia 또는 Monsanto), "TI-35" (= 1-디클로로아세틸아제판; TRI-Chemical RT), "디클로논" (디사이클로논) 또는 "BAS145138" 또는 "LAB145138" (= 3-디클로로아세틸-2,5,5-트리메틸-1,3-디아자비사이클로[4.3.0]노난; BASF), 및 "푸릴라졸" 또는 "MON 13900" (참조: Pestic. Man.) (= (RS)-3-디클로로아세틸-5-(2-푸릴-2,2-디메틸옥사졸리딘)과 같은, 발아-전 완화제 (토양-작용 완화제)로 빈번하게 사용되는 디클로로아세트아미드 타입의 활성 화합물.
D) 하기 화학식 (S-IV)의 N-아실설폰아미드 및 이들의 염
[화학식 S-IV]
Figure pct00008
여기에서,
XD는 CH 또는 N이며;
RD 1은 CO-NRD 5RD 6 또는 NHCO-RD 7이고;
RD 2는 할로겐, (C1-C4)-할로알킬, (C1-C4)-할로알콕시, 니트로, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, (C1-C4)-알킬설포닐, (C1-C4)-알콕시카보닐 또는 (C1-C4)-알킬카보닐이며;
RD 3은 수소, (C1-C4)-알킬, (C2-C4)-알케닐 또는 (C2-C4)-알키닐이고;
RD 4는 할로겐, 니트로, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-할로알킬, (C1-C4)-할로알콕시, (C3-C6)-사이클로알킬, 페닐, (C1-C4)-알콕시, 시아노, (C1-C4)-알킬티오, (C1-C4)-알킬설피닐, (C1-C4)-알킬설포닐, (C1-C4)-알콕시카보닐 또는 (C1-C4)-알킬카보닐이며;
RD 5는 수소, (C1-C6)-알킬, (C3-C6)-사이클로알킬, (C2-C6)-알케닐, (C2-C6)-알키닐, (C5-C6)-사이클로알케닐, 페닐, 또는 질소, 산소 및 황으로 구성된 그룹으로부터의 vD 헤테로 원자를 함유하는 3- 내지 6-원 헤테로사이클릴이고, 여기에서 마지막으로 언급된 7 개의 래디칼은 할로겐, (C1-C6)-알콕시, (C1-C6)-할로알콕시, (C1-C2)-알킬설피닐, (C1-C2)-알킬설포닐, (C3-C6)-사이클로알킬, (C1-C4)-알콕시카보닐, (C1-C4)-알킬카보닐 및 페닐, 및 사이클릭 래디칼의 경우에는 또한 (C1-C4)-알킬 및 (C1-C4)-할로알킬로 구성된 그룹으로부터의 vD 치환체에 의해서 치환되며;
RD 6은 수소, (C1-C6)-알킬, (C2-C6)-알케닐 또는 (C2-C6)-알키닐이고, 여기에서 마지막으로 언급된 3 개의 래디칼은 할로겐, 하이드록시, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시 및 (C1-C4)-알킬티오로 구성된 그룹으로부터의 vD 래디칼에 의해서 치환되거나,
RD 5 및 RD 6는 이들을 갖는 질소 원자와 함께 피롤리디닐 또는 피페리디닐 래디칼을 형성하며;
RD 7는 수소, (C1-C4)-알킬아미노, 디-(C1-C4)-알킬아미노, (C1-C6)-알킬, (C3-C6)-사이클로알킬이고, 여기에서 마지막으로 언급된 2 개의 래디칼은 할로겐, (C1-C4)-알콕시, 할로겐-(C1-C6)-알콕시 및 (C1-C4)-알킬티오, 및 사이클릭 래디칼의 경우에는 또한 (C1-C4)-알킬 및 (C1-C4)-할로알킬로 구성된 그룹으로부터의 vD 치환체에 의해서 치환되며;
nD는 0, 1 또는 2이고;
mD는 1 또는 2이며;
vD는 0, 1, 2 또는 3이고;
이들 중에서 바람직한 것은 다음의 화합물들이다:
예를 들어, WO 97/45016으로부터 공지된 것으로, 예를 들어, 하기 화학식 (S-V)의 N-아실설폰아미드 타입의 화합물:
[화학식 S-V]
Figure pct00009
여기에서,
RD 7는 (C1-C6)-알킬, (C3-C6)-사이클로알킬이며, 여기에서 마지막으로 언급된 2 개의 래디칼은 할로겐, (C1-C4)-알콕시, 할로겐-(C1-C6)-알콕시 및 (C1-C4)-알킬티오, 및 사이클릭 래디칼의 경우에는 또한 (C1-C4)-알킬 및 (C1-C4)-할로알킬로 구성된 그룹으로부터의 vD 치환체에 의해서 치환되고;
RD 4는 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, CF3이며;
mD는 1 또는 2이고;
vD는 0, 1, 2 또는 3이다; 및
또한, 예를 들어, WO 99/16744로부터 공지된 것으로서, 예를 들어, 이하의 화학식 (S-VI)의 아실설파모일벤즈아미드:
[화학식 S-VI]
Figure pct00010
예를 들어,
RD 5 = 사이클로프로필이고, (RD 4) = 2-OMe ("사이프로설파미드", S3-1),
RD 5 = 사이클로프로필이고, (RD 4) = 5-Cl-2-OMe (S3-2),
RD 5 = 에틸이고, (RD 4) = 2-OMe (S3-3),
RD 5 = 이소프로필이고, (RD 4) = 5-Cl-2-OMe (S3-4), 및
RD 5 = 이소프로필이고, (RD 4) = 2-OMe (S3-5)인 화합물; 및
또한, 예를 들어 EP-A-365484로부터 공지된 것으로서, 하기 화학식 (S-VII)의 N-아실설파모일페닐우레아 타입의 화합물:
[화학식 S-VII]
Figure pct00011
여기에서
RD 8 및 RD 9는 서로에 대해 독립적으로 수소, (C1-C8)-알킬, (C3-C8)-사이클로알킬, (C3-C6)-알케닐, (C3-C6)-알키닐이며,
RD 4는 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, CF3이고,
mD는 1 또는 2이며;
이들 중에서 특히
1-[4-(N-2-메톡시벤조일설파모일)페닐]-3-메틸우레아,
1-[4-(N-2-메톡시벤조일설파모일)페닐]-3,3-디메틸우레아,
1-[4-(N-4,5-디메틸벤조일설파모일)페닐]-3-메틸우레아,
1-[4-(N-나프토일설파모일)페닐]-3,3-디메틸우레아.
G) 하이드록시방향족 및 방향족-지방족 카복실산 유도체의 부류로부터의 활성 화합물, 예를 들어, WO　2004084631, WO　2005015994, WO　2006007981, WO　2005016001에 기술된 바와 같은 에틸 3,4,5-트리아세톡시벤조에이트, 3,5-디메톡시-4-하이드록시벤조산, 3,5-디하이드록시벤조산, 4-하이드록시살리실산, 4-플루오로살리실산, 1,2-디하이드로-2-옥소-6-트리플루오로메틸피리딘-3-카복사미드, 2-하이드록시신남산, 2,4-디클로로신남산.
H) 1,2-디하이드로퀴녹살린-2-온의 부류로부터의 활성 화합물, 예를 들어, WO　2005112630에 기술된 바와 같은 1-메틸-3-(2-티에닐)-1,2-디하이드로퀴녹살린-2-온, 1-메틸-3-(2-티에닐)-1,2-디하이드로퀴녹살린-2-티온, 1-(2-아미노에틸)-3-(2-티에닐)-1,2-디하이드로퀴녹살린-2-온 하이드로클로라이드, 1-(2-메틸설포닐아미노에틸)-3-(2-티에닐)-1,2-디하이드로-퀴녹살린-2-온.
I) 예를 들어, 제초제 몰리네이트에 의한 손상에 대한 쌀의 완화제로 공지되어 있는 "디메피페레이트" 또는 "MY-93" (참조: Pestic. Man.) (= S-1-메틸-1-페닐에틸 피페리딘-1-티오카복실레이트), 제초제 이마조설푸론에 의한 손상에 대한 쌀의 완화제로 공지되어 있는 "다이무론" 또는 "SK 23" (참조: Pestic. Man.) (= 1-(1-메틸-1-페닐에틸)-3-p-톨릴-우레아), 다수의 제초제에 의한 손상에 대한 쌀의 완화제로 공지되어 있는 "쿠밀루론" = "JC-940" (= 3-(2-클로로페닐메틸)-1-(1-메틸-1-페닐-에틸)우레아 (참조: JP-A-60087254), 다수의 제초제에 의한 손상에 대한 쌀의 완화제로 공지되어 있는 "메톡시페논" 또는 "NK 049" (= 3,3'-디메틸-4-메톡시벤조페논), 쌀에서 다수의 제초제에 의한 손상에 대한 완화제로 공지되어 있는 "CSB" (= 1-브로모-4-(클로로메틸설포닐)벤젠) (CAS Reg. No. 54091-06-4; Kumiai)와 같은, 유해한 식물에 대한 제초 작용 이외에도 쌀과 같은 작물에 대한 완화제 작용을 갖는 활성 화합물.
K) WO-A-1998/38856에 기술된 바와 같은 하기 화학식 (S-IX)의 화합물
[화학식 S-IX]
Figure pct00012
여기에서 기호 및 인덱스는 다음의 의미를 갖는다:
RK 1, RK 2는 서로 독립적으로 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-알콕시, (C1-C4)-할로알킬, (C1-C4)-알킬아미노, 디-(C1-C4)-알킬아미노, 니트로이고,
AK는 COORK 3 또는 COORK 4이며,
RK 3, RK 4는 서로 독립적으로 수소, (C1-C4)-알킬, (C2-C6)-알케닐, (C2-C4)-알키닐, 시아노알킬, (C1-C4)-할로알킬, 페닐, 니트로페닐, 벤질, 할로벤질, 피리디닐알킬 또는 알킬암모늄이고,
nK 1은 0 또는 1이며,
nK 2, nK 3은 서로 독립적으로 0, 1 또는 2이고,
바람직하게는, 메틸 (디페닐메톡시)아세테이트 (CAS Reg. No.: 41858-19-9)이다.
L) WO A-98/27049에 기술된 바와 같은 화학식 (S-X)의 화합물, 또는 그의 염
[화학식 S-X]
Figure pct00013
여기에서 기호 및 인덱스는 다음의 의미를 갖는다:
XL은 CH 또는 N이고,
nL은 X= N인 경우에는 0 내지 4의 정수이며, X= CH인 경우에는 0 내지 5의 정수이고,
RL 1은 할로겐, (C1-C4)-알킬, (C1-C4)-할로알킬, (C1-C4)-알콕시, (C1-C4)-할로알콕시, 니트로, (C1-C4)-알킬티오, (C1-C4)-알킬설포닐, (C1-C4)-알콕시카보닐, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 페녹시이며,
RL 2는 수소 또는 (C1-C4)-알킬이고,
RL 3은 수소, (C1-C8)-알킬, (C2-C4)-알케닐, (C2-C4)-알키닐 또는 아릴이며, 여기에서 상기 언급된 탄소-함유 래디칼의 각각은 할로겐 및 알콕시로 구성된 그룹으로부터의 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 3 개까지의 동일하거나 상이한 래디칼에 의해서 비치환되거나 치환된다.
M) 3-(5-테트라졸릴카보닐)-2-퀴놀론의 부류로부터의 활성 화합물, 예를 들어, WO-A-1999000020에 기술된 바와 같은 1,2-디하이드로-4-하이드록시-1-에틸-3-(5-테트라졸릴카보닐)-2-퀴놀론 (CAS Reg. No.: 219479-18-2), 1,2-디하이드로-4-하이드록시-1-메틸-3-(5-테트라졸릴카보닐)-2-퀴놀론 (CAS Reg. No.: 95855-00-8).
N) WO-A-2007023719 및 WO-A-2007023764에 기술된 바와 같은 화학식 (S-XI) 또는 (S-XII)의 화합물
[화학식 S-XI]
Figure pct00014
[화학식 S-XII]
Figure pct00015
여기에서
RN 1은 할로겐, (C1-C4)-알킬, 메톡시, 니트로, 시아노, CF3, OCF3이며,
Y, Z는 서로 독립적으로 O 또는 S이고,
nN은 0 내지 4의 정수이며,
RN 2는 (C1-C16)-알킬, (C2-C6)-알케닐, (C3-C6)-사이클로알킬, 아릴, 벤질, 할로벤질이고,
RN 3은 수소, (C1-C6)알킬이다.
O) 입체이성체를 포함하는
1,8-나프탈릭 안하이드라이드,
O,O-디에틸 S-2-에틸티오에틸 포스포로디티오에이트 (디설포톤),
4-클로로페닐 메틸카바메이트 (메페네이트),
O,O-디에틸 O-페닐 포스포로티오에이트 (디에톨레이트),
4-카복시-3,4-디하이드로-2H-1-벤조피란-4-아세트산 (CL-304415, CAS Reg. No.: 31541-57-8),
2-프로페닐 1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸-4-카보디티오에이트 (MG-838, CAS Reg. No.: 133993-74-5),
메틸 [(3-옥소-1H-2-벤조티오피란-4(3H)-일리덴)메톡시]아세테이트 (WO-A-98/13361; CAS Reg. No.: 205121-04-6),
시아노메톡시이미노(페닐)아세토니트릴 (시오메트리닐),
1,3-디옥솔란-2-일메톡시이미노(페닐)아세토니트릴 (옥사벤트리닐),
4'-클로로-2,2,2-트리플루오로아세토페논 O-1,3-디옥솔란-2-일메틸옥심 (플룩소페님),
4,6-디클로로-2-페닐피리미딘 (펜클로림),
벤질 2-클로로-4-트리플루오로메틸-1,3-티아졸-5-카복실레이트 (플루라졸),
2-디클로로메틸-2-메틸-1,3-디옥솔란 (MG-191)으로 구성된 그룹으로부터의 하나 또는 그 이상의 화합물, 및 농업에서 통상적인 염.
(I) (a) 아베나(Avena), 바람직하게 아베나 사티바(Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/ 043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 형질전환 식물에 대해서 살진균제, 살충제, 살비제, 살선충제, 조류 기피제, 식물 영양제 및 토양 구조 개선제와 같은 다른 공지의 활성 화합물과 관련하여 적용될 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 혼합물도 마찬가지로 가능하다.
완화제의 일부는 이미 제초제로서 공지되어 있으며, 따라서 유해한 식물에 대한 제초 작용 이외에, 또한 농작물을 보호함으로써 작용한다. 완화제에 대한 제초제 (혼합물)의 중량비는 일반적으로, 제초제 적용율 및 문제의 완화제의 유효성에 따라 좌우되며, 넓은 제한 내에서, 예를 들어 200:1 내지 1:200, 바람직하게는 100:1 내지 1:100, 특히 20:1 내지 1:20의 범위에서 변화할 수 있다. 완화제는 화학식 (I)의 화합물 또는 다른 제초제/살충제와 이들의 혼합물과 유사하게 제제화될 수 있으며, 가공된 제제로서 또는 제초제와의 탱크 믹스로서 제공되고 사용될 수 있다.
(I) (a) 아베나 (Avena), 바람직하게 아베나 사티바 (Avena sativa), 더욱 바람직하게 서열번호 2에 의해 정의된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제 (HPPD)를 코딩하는 서열번호 1과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (b) 슈도모나스 (Pseudomonas), 바람직하게 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 더욱 바람직하게 서열번호 4에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 3과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (c) 시네코코코이데아에 (Synechococcoideae), 바람직하게 시네코코커스 종 (Synechococcus sp.), 더욱 바람직하게 서열번호 7에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 6과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (d) 블레파리스미다에 (Blepharismidae), 바람직하게 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum), 더욱 바람직하게 서열번호 9에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 8과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (e) 로도코커스 (Rhodococcus), 바람직하게 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro03041, 더욱 바람직하게 서열번호 11에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 10과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, 또는 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040, 더욱 바람직하게 서열번호 13에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 12와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (f) 피크로필라세아에 (Picrophilaceae), 바람직하게 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus), 더욱 바람직하게 서열번호 15에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 14와 동일한 DNA 서열을 포함하는 것, (g) 코르디아 (Kordia), 바람직하게 코르디아 알기시다 (Kordia algicida), 더욱 바람직하게 서열번호 17에 의해 정의된 HPPD를 코딩하는 서열번호 16과 동일한 DNA 서열을 포함하는 것으로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 HPPD를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 바람직하게 WO 2010/085705, US6,245,968, WO 2009/144079, WO2011/076877, WO2011/076882, WO2011/076892, WO2011/076885, WO2011/076889, WO 2012/021785에 기술된 돌연변이체, 후자에 따라 보다 특이적으로 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max)로부터 얻어진 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환 및 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환(PfHPPDEvo33으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 6으로 기재, 본 원에서 서열번호 254로 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(PfHPPDEvo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 8로 기재, 본 원에서 서열번호 275로 기재), 또는 (iii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 296으로 기재)을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (IV) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 356의 A (Ala) -> E (Glu) 치환 (Axmi428H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 55로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 32로 기재), (ii) 위치 351의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재)을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (V) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 위치 342의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi305H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 51로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 40에 기재), (ii) 위치 337의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 338의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 341의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 342의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi305H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 52로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로 서열번호 41로 기재)을 포함하는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 균주 ATX22717 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열, 또는 (VI) PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 기술된 돌연변이된 DNA 서열, 보다 특이적으로 (i) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> S (Ser) 치환, 및 위치 340의 A (Ala) -> E (Glu) 치환(Axmi309H-Evo40으로 명명, PCT/US2013/59598(WO2014/043435)에서 서열번호 53으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 36에 기재), (ii) 위치 335의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하는 형질전환 식물이 성장하고 있는 영역에 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 필요한 적용율은, 특히 온도, 습도 등과 같은 외부 조건에 따라 변화한다. 이것은 넓은 제한 내에서, 예를 들어 0.001 내지 10 000 g/ha 이상의 활성 물질 사이에서 변화할 수 있지만, 이것은 바람직하게 0.5 내지 5000 g/ha, 특히 바람직하게 0.5 내지 1000g/ha, 매우 특히 바람직하게 0.5 내지 500g/ha이다.
서열 목록
서열번호 1: 이. 콜라이 세포에서의 발현을 위해 최적화된 아베나 사티바 (Avena sativa) HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 2: 서열번호 1에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 3: 위치 336에서 돌연변이된 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) HPPD를 코딩하는 핵산 서열; 돌연변이 Gly => Trp (Pfw336)
서열번호 4: 서열번호 3에 의해서 코딩된 단백질(PfHPPD336W)
서열번호 5: 위치 336에서 돌연변이된 슈도모나스 플루오레센스 HPPD를 코딩하는 핵산 서열; 돌연변이 Gly => Trp; 대두 및 목화에서의 발현을 위해서 최적화됨
서열번호 6: 시네코코커스 종 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 7: 서열번호 6에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 8: 블레파리스마 자포니쿰(Blepharisma japonicum) HPPD를 코딩하는 핵산 서열 (FMP37)
서열번호 9: 서열번호 8에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 10: 로도코커스 종 (Rhodococcus sp.) (균주 RHA1), 단리물 ro03041 HPPD를 코딩하는 핵산 서열 (FMP22)
서열번호 11: 서열번호 10에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 12: 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro02040 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 13: 서열번호 12에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 14: 피크로필루스 토리두스 (Picrophilus torridus) HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 15: 서열번호 14에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 16: 코르디아 알기시다 (Kordia algicida) HPPD를 코딩하는 핵산 서열 (FMP27)
서열번호 17: 서열번호 16에 의해서 코딩된 단백질
서열번호 18: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 시네코코커스 종 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 19: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 블레파리스마 자포니쿰 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 20: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro0341 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 21: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 로도코커스 종 (균주 RHA1), 단리물 ro0240 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 22: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 피크로필루스 토리두스 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 23: 대두 및 목화에서의 발현을 위해 최적화된 코르디아 알기시다 HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 24: 슈도모나스 플루오레센스 HPPD를 코딩하는 핵산 서열, 위치 335에서 돌연변이, 돌연변이 Glu => Pro; 위치 336에서 돌연변이, 돌연변이 Gly => Trp (PfHPPD-Evo33)
서열번호 25: 서열번호 24에 의해 코딩된 단백질
서열번호 26: 슈도모나스 플루오레센스 HPPD를 코딩하는 핵산 서열, 위치 335에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 336에서 돌연변이, 돌연변이 Gly->Ser, 및 위치 340에서 돌연변이, 돌연변이 Ala->Glu (PfHPPD-Evo40)
서열번호 27: 서열번호 26에 의해 코딩된 단백질
서열번호 28: 슈도모나스 플루오레센스 HPPD를 코딩하는 핵산 서열, 위치 335에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 336에서 돌연변이, 돌연변이 Gly->Trp; 위치 339에서 돌연변이, 돌연변이 Lys->Ala; 및 위치 340에서 돌연변이, 돌연변이 Ala->Gln (PfHPPD-Evo41)
서열번호 29: 서열번호 28에 의해 코딩된 단백질
서열번호 30: 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니(testosterone) Axmi 428H HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 31: 서열번호 30에 의해 코딩된 단백질
서열번호 32: 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니(testosteroni) Axmi 428H HPPD의 단백질 서열 (Axmi428-Evo40)
위치 351에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 352에서 돌연변이, 돌연변이 Gly-> Ser; 및 위치 356에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Glu
서열번호 33: 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 Axmi428H HPPD의 단백질 서열 (Axmi 428-Evo41)
위치 351에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 352에서 돌연변이, 돌연변이 Gly~> Trp; 위치 355에서 돌연변이, 돌연변이 Lys->Ala; 및 위치 356에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Gln
서열번호 34: 슈도모나스 아가리시(agarici) Axmi309H HPPD를 코딩하는 핵산 서열
서열번호 35: 서열번호 34에 의해 코딩된 단백질
서열번호 36: 슈도모나스 아가리시 Axmi309H HPPD의 단백질 서열 (Axmi309-Evo40)
위치 335에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 336에서 돌연변이, 돌연변이 Gly-> Ser; 및 위치 340에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Glu
서열번호 37: 슈도모나스 아가리시 Axmi309H HPPD의 단백질 서열 (Axmi309-Evo41)
위치 335에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 336에서 돌연변이, 돌연변이 Gly-> Trp; 위치 339에서 돌연변이, 돌연변이 Lys->Ala; 및 위치 340에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Gln
서열번호 38: 슈도모나스 아에루기노사(aeruginosa) Axmi305H HPPD의 핵산 인코딩
서열번호 39: 서열번호 38에 의해 코딩된 단백질
서열번호 40: 슈도모나스 아에루기노사 Axmi305H의 단백질 서열 (Axmi305-Evo40)
위치 337에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 338에서 돌연변이, 돌연변이 Gly-> Ser; 및 위치 342에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Glu
서열번호 41: 슈도모나스 아에루기노사 Axmi305H의 단백질 서열 (Axmi305-Evo41)
위치 337에서 돌연변이, 돌연변이 Glu->Pro; 위치 338에서 돌연변이, 돌연변이 Gly-> Trp; 위치 341에서 돌연변이, 돌연변이 Lys->Ala; 및 위치 342에서 돌연변이, 돌연변이 Ala ->Gln
서열번호 42: 아베나 사티바(Avena sativa)에 의해 코딩된 HPPD 단백질
서열번호 43: 위치 109에 결실을 갖는 서열번호 42의 HPPD 단백질 (아베나 사티바 Δ A109)
서열번호 44: 제아 메이즈(Zea mays)로 코딩된 HPPD 단백질
서열번호 45: 슈도모나스 플루오레센스 HPPD (PfHPPD)의 핵산 인코딩
서열번호 46: 서열번호 45에 의해 코딩된 단백질
실시예
A. 아베나 HPPD의 클로닝 (WO02/46387에 따름)
A1- 이. 콜라이 세포에서의 발현을 위한 클로닝
아베나 사티바 (Avena sativa) HPPD에 대해 코드화한 cDNA (AvHPPD; 서열번호 1)는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 세포에서의 유전자의 발현을 위해서 최적화된 코돈 용법을 사용하여 GeneArt (Regensburg, Germany)에서 주문되었다. 출발 코돈 ATG에 대한 상류에서 제한효소 BamHI의 인식 부위에 상응하는 서열을 부가하였으며, 정지 코돈에 대한 하류에는 효소 HindIII의 인식 부위에 상응하는 서열 스트레치 (stretch)를 부가하였다. 합성된 단편은 AvHPPD 단백질 (서열번호 2)로부터의 N-말단 극한에서 벡터 내에 존재하는 HisTag와의 융합물을 수득하기 위해서, 미리 개방된 벡터 pET32a (Novagen, Darmstadt, Germany) 내에 제한효소 BamHI 및 HindIII를 사용하여 클로닝하였다. 생성된 벡터는 pET32a-AvHPPDe로 칭하였다.
단백질은 이. 콜라이 내에서 생산되고, 표준 프로토콜(예를 들어, WO2009/ 144097에 기술된 바와 같음)에 따라 분리하였다.
A2- 식물에서의 발현을 위한 pBin19 바이너리 벡터(binary vector)에서의 AvHPPD 유전자의 클로닝
AvHPPD 단백질에 대해 코드화한 유전자에 상응하는 cDNA를 제한효소 NcoI 및 NotI을 사용하여 플라스미드 pET32a-AvHPPDe로부터 절단하였다. NotI 제한으로부터 생성된 돌출(overhang) 서열을 채운 다음에, 생성된 단편을 효소 NcoI 및 SmaI로 미리 제한된 벡터 pRT100-OTPc [참조: 예를 들어, Topfer (1987), Nucleic Acids Res. 15: 5890, 및 PCT/EP2010/070561] 내에 클로닝하였다. 얻어진 플라스미드를 pBin19-CaMV35S-OTPc-AvHPPDe-35S로 명명하고, 아그로박테리움 투메파시엔스 (Agrobacterium tumefaciens) 균주 ATHV (참조: 예를 들어, PCT/EP2010/070561)를 형질전환시키기 위해서 사용하였다.
B. PfHPPD-G336W의 클로닝
B1- 이. 콜라이 세포에서의 발현을 위한 PfHPPD-G336W의 클로닝
플라스미드 pKK233-2 (Clontech) (US 6245968) 내의 슈도모나스 플루오레센스로부터의 돌연변이체 HPPD G336W (서열번호 3) (US 6,245,968)를 코딩하는 유전자를 PCR을 위한 주형으로 사용하여 그의 5' 극단에 효소 NcoI의 인식 부위에 상응하는 서열을 부가하고, 그의 3' 극단에 효소 XbaI의 인식 부위에 상응하는 서열을 부가하였다 [참조: WO 2009/144079]. 클로닝은 "pSE420(RI)NX-PfG336W"로 불리는 슈도모나스 HPPD G336W (서열번호 4)의 N-말단 극단에서의 His tag 융합 단백질을 수득하기 위해서 이루어졌다.
B2- 식물에서의 발현을 위한 PfHPPD-G336W의 클로닝
담배 또는 대두 형질전환을 위한 바이너리 벡터는 예를 들어, 쌍자엽 식물에서의 발현을 위해서 최적화된 코돈 용법에 의해 유전자 PfHPPD-G336W (서열번호 5)의 발현을 구동시키는 CaMV35 프로모터를 사용하여 제작하였으며, 그의 5' 말단에서 OTP에 대해 코딩한 서열, 및 추가로 식물에서 mRNA의 안정성을 개선시키기 위한 서열 TEV (담배 식각 바이러스)에 이어서 CaMV35S 종결인자를 부가하였다. 추가로, 형질전환 벡터는 또한 PAT 유전자 카세트 (여기에서, 유전자는 CaVM35S 프로모터에 의해서 구동되며, 형질전환 과정 중에 글루포시네이트 기본 선택을 위해서 CaMV35S 종결인자로 이어진다) 및 2mEPSPS 유전자 카세트 (여기에서, 유전자는 아라비돕시스 (Arabidopsis)로부터의 히스톤 프로모터에 의해서 구동되어 형질전환된 식물에 제초제 글리포세이트에 대한 내성을 부여한다)를 함유한다. 바이너리 벡터는 pFCO117이라 칭하였다.
다른 모든 돌연변이된 슈도모나스 유전자와 본 발명에 따라 다른 유기체로부터 얻어진 유전자들은 상기한 바와 같이 클로닝할 수 있다.
B3 - 식물 발현 카세트에 HPPD 유전자를 클로닝하기 위한 대안적 방법
본 원에 기술된 HPPD 유전자 각각에 대해, 오픈리딩프레임(ORF)을 PCR에 의해 전장 DNA 플레이트로부터 증폭하였다. Hind III 제한부위를 ORF의 각 말단에 PCR 중에 부가하였다. 추가적으로, 뉴클레오티드 서열 ACC를 번역 효율을 증가시키기 위해 유전자의 개시 코돈에 대해 5'에 바로 부가하였다(Kozak (1987) Nucleic Acids Research 15:8125-8148; Joshi (1987) Nucleic Acids Research 15:6643-6653). PCR 생성물을 클론하고 PCR 동안 돌연변이가 삽입되지 않도록 하는 당분야에서 공지된 기술을 사용하여 서열화하였다.
PCR 생성물을 함유하는 플라스미드를 Hind III로 분해하고 온전한 ORF를 함유하는 단편을 단리하였다. 이 단편을 쌀 액틴 프로모터(McElroy et al. (1991) Molec. Gen. Genet. 231:150-160)와 PinII 종결인자(An et al. (1989) The Plant Cell 1:115-122)를 함유하는 식물 발현벡터인 pAX200 같은 플라스미드의 Hind III 부위에 클로닝하였다. 중간체 플라스미드로부터의 프로모터 - 유전자 - 종결인자 단편을 이후 플라스미드 pSB11 (Japan Tobacco, Inc.)에 서브클로닝하여 최종 pSB11 기반 플라스미드를 형성하였다. 이러한 pSB11 기반 플라스미드는 전형적으로 프로모터 - 유전자 - 종결인자 구조물을 함유하는 DNA 단편이 제한효소, 예컨대 Kpn I 및 Pme I에 의한 이중 분해로 절단되어, 식물 내로의 형질전환에 에어로졸 빔 주입에 의해 사용될 수 있도록 구성된다. 생성된 pSB11 기반 클론의 구조는 제한 분해 및 겔 전기영동과, 다양한 클로닝 정션을 교차한 서열화에 의해 확인된다.
이 플라스미드를 플라스미드 pSB1 (Japan Tobacco, Inc.)도 포함하는 아그로박테리움 투메파시엔스 균주 LBA4404 내로 당분야에서 공지된 삼조(triparental) 연결 방법을 사용하고 스펙티노마이신을 함유하는 배지에 플레이팅하여 이동하였다. pSB11 기반 플라스미드 클론은 스펙티노마이신 저항성을 갖지만 좁은 숙주 범위 플라스미드이고 아그로박테리움에서 복제할 수 없다. pSB11 기반 플라스미드가 상동성 재조합에 의해 광폭 숙주 범위 플라스미드 pSB1 내에 통합되면 스펙티노마이신 저항성 콜로니들이 발생한다. pSB1과 pSB11 기반 플라스미드의 동시통합 생성물은 써던 혼성화에 의해 확인한다. 동시통합물을 포함하는 아그로박테리윰 균주는 당분야에 공지된 방법, 예컨대 예를 들어 Purelntro 방법(Japan Tobacco)으로 옥수수를 형질전환하는데 사용된다.
C 다양한 HPPD 효소의 돌연변이
C1 - 제1 세대 포인트 돌연변이체 라이브러리 (PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 상세히 기술)
Pfw336 돌연변이체를 여러 위치에서 추가로 돌연변이하였다. 이 위치들의 랜덤화는 QUIKCHANGE® 라이트닝(lightning) 키트를 사용하여 수행하였다. 라이브러리의 이론적 다양성은 약 300이었다. 돌연변이체를 모으고 DH5α 이. 콜라이 세포 내로 형질전환하였다. 600개의 개별 클론을 HPPD 저해제 템보트리온(TBT)에 대한 내성에 대해 선별하였다. 클론을 카나마이신이 첨가된 LB 배지에서 37℃, 교반기로 OD600 nm가 0.3에 이를 때까지 배양하였다. 이후, 배양물을 30℃로 전환하여 추가로 17시간 동안 인큐베이션하였다. 배양물을 원심분리하여 세포 펠릿을 10 mM Hepes/KOH pH 7.6, 4 mM MgCl2, 1 mM DTT에 재현탁하였다. 세포를 비드(bead) 비팅에 의해 용균하여 원심분리 한 후, 가용 세포 추출물을 얻었다.
돌연변이체를 갈색 어세이를 사용하여 분석하였다. 구체적으로, HPPD 추출물을 96 웰 포맷에서 HPPD 저해제 내성에 대해 LB-아가, 카나마이신, 5 mM 타이로신, 42 mM 숙시네이트 및 HPPD 저해제를 함유하는 고형 배지에 점적하여 어세이하였다. 1차 선별에서, 20 μl의 추출물을 250 μM의 템보트리온을 함유하는 플레이트에 3번 점적하였다. 플레이트를 기공이 있는 테이프로 덮어서 37℃에서 인큐베이션하였다. 24시간 후에, 갈색 안료 형성을 PfHPPD336W를 함유하는 샘플과 육안으로 비교하였다. TBT 존재하에서 증가된 안료 형성을 나타내는 변이체들을 이속사플루톨(IFT)의 250 μM 디케토니트릴(DKN) 및 250 μM TBT 활성 화합물에서 다시 어세이하였다. 개선된 저해제 내성을 다시 나타내는 이러한 변이체들을 다시 발현하고, 추출물을 250 μM TBT 및 250 μM DKN에 대해 적정하여 개선의 정도를 측정하였다. 또한, 추출 샘플을 SDS-PAGE로 분석하여 추출물이 동량의 HPPD 단백질을 함유하는 것을 확인하였다.
C2 - 제2 세대 순열(permutational) 라이브러리 선별(PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에 상세히 기술)
최상위 수행 제1 세대 변이체의 서열을 분석하여, 위치 335, 336, 339, 340을 조합한 영역의 제2 세대 순열 라이브러리를 생성하였다. 위의 C1에서 기술한 바와 같이 선별하였다. 이하의 적정 데이터는 변이체 PfHPPDEvo40이 PfHPPD336W와 비교하여 TBT와 DKN에 대한 내성이 향상된 것을 나타낸다. SDS-PAGE 분석을 수행하였으며, 변이체들 간의 HPPD 발현 농도의 차이는 보이지 않았다.
또한, 변이체들을 다양한 HPPD 저해제를 함유하는 배지에 HPPD를 발현하는 전체 이. 콜라이 세포를 플레이팅하여 시험하였다. 이 실험에 있어서, HPPD를 발현하는 플라스미드를 함유하는 DH5α 세포를 카나마이신이 첨가된 LB 배지에서 OD600 nm가 0.5에 이를 때까지 배양하였다. 세포의 연속 희석물을 LB 배지 + 카나마이신으로 제조하였으며, OD600값이 0.016, 0.008, 0.004, 및 0.002에 해당하였다. 10 마이크로리터의 각 희석물을 HPPD 저해제가 없고, 250 μM TBT, 250 μM DKN 및 250 μM 메소트리온(MST)을 함유하는 플레이트에 3회 도말하였다. 플레이트를 18시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. SDS-PAGE 분석을 수행하였으며, 변이체들 간의 HPPD 발현 농도 차이는 보이지 않았다.
C3 - 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 돌연변이체 G336W (Pfw336)의 제조 및 HPPD 효소의 키네틱 특성화
원래의 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 뉴클레오티드 서열(PfHPPD, 1077 bp, WO2009144079에 기술)은 본 원에서 서열번호 45로 기재된 아미노산 서열을 코딩하며, WO2009144079, WO 96/38567, 및 Ruetschi et al. (Eur . J. Biochem., 205, 459-466, 1992)에 기술된 바와 같이, 개시 코돈을 제공하는 발현벡터 pKK233-2 (Pharmacia)의 고유한 NcoI 부위에 초기에 클론되었다.
5' 말단에서 ATG에 대해 바로 하류쪽에 알라닌 아미노산을 코딩하는 핵산 서열과 N-터미널 HIS6-Tag를 코딩하는 핵산 서열을 삽입하였다. ATG에 대해 상류쪽에, 2개의 추가 시스테인 염기쌍을 첨가하여 제한효소 NcoI의 인식 부위에 해당하는 서열을 얻었고, 종료 코돈에 대해 하류쪽으로 제한효소 XbaI의 인식 부위에 해당하는 서열을 부가하였다. HIS-TAG를 코딩하는 서열을 포함하는 유전자에 해당하는 DNA 서열을 제한효소 NcoI과 XbaI으로 절단한 다음, 변성된 발현벡터 pSE420(RI)NX (5261 bp)에 클로닝하였다.
클로닝 및 발현벡터 pSE420(RI)NX (5261 bp)는 Invitrogen (Karlsruhe, Germany)의 플라스미드 pSE420에 기초하였다. 이 벡터의 변성은 항생제 카나마이신에 대한 내성을 제공하고 대부분의 슈퍼링커 영역(다중 클로닝 부위)을 누락한 nptII 유전자(네오마이신 포스포트랜스퍼라제; Sambrook and Russell, 2001, Molecular Cloning: a laboratory manual (3판))의 부가를 포함한다.
이 플라스미드는 모든 이. 콜라이 숙주 균주에서 lac 리프레서를 제공하는 lacIq 유전자와 trp-lac (trc) 프로모터를 갖는다. lac 리프레서는 lac 작동인자(lacO)에 결합하여 표적 유전자의 발현을 제한하며; 이러한 저해는 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 사용한 유도로 경감될 수 있다.
얻어진 벡터를 pSE420(RI)NX-PfHPPD라 지칭하였으며, 이것은 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) BL21 세포(Merck, Darmstadt, Germany)를 형질전환하기 위해 사용하였다.
플라스미드 pSE420(RI)NX-PfHPPD에 대해 PCR 매개 부위지정 돌연변이를 수행하여 PfHPPD 유전자의 해당 부위에서 규정된 코돈을 변성하였다. 위치 336에서 글리신 (G)를 코딩하는 코돈을 트립토판 (W)를 코딩하는 코돈으로 치환하였다. 얻어진 돌연변이체를 Pfw336이라 지칭하였으며, 벡터 pSE420(RI)NX-Pfw336을 얻었다.
HPPD의 발현을 pSE420(RI)NX-PfHPPD 또는 pSE420(RI)NX-Pfw336을 함유하는 이. 콜라이 K-12 BL21에서 수행하였다. 세포를 OD가 0.5에 이를 때까지 배양한 다음, lac 리프레서에 결합하여 lac 오페론으로부터의 해리를 유발하는 1 mM IPTG를 사용한 유도에 의해 trp-lac (trc) 프로모터로부터 발현을 개시하였다. 발현은 15h 동안 28℃에서 수행하였다.
사전-스타터 배양물을 제조하기 위해 2 mL의 TB 배지(100 μg*mL-1 카베니실린)를 50 μL의 이. 콜라이 K-12 BL21 글리세롤 원액으로 접종하였다. 사전-스타터 배양물을 15 시간 동안 140 rpm으로 교반하면서 37℃에서 인큐베이션하였다. 200 μl의 사전-스타터 배양물을 사용하여 스타터 배양(5mL TB 보충, 100 μg*mL- 1)을 개시하였으며, 이를 3 h 동안 37℃에서 인큐베이션하였다.
주 배양물(main culture)을 제조하기 위해 400 mL의 TB 배지(100 μg*mL-1 카베니실린)를 4 mL의 스타터 배양물로 접종하였다. 스타터 배양물을 37℃에서 140 rpm으로 교반하면서 OD600이 0.5에 이를 때까지 인큐베이션하였다. 이후, 재조합 단백질 발현을 400 μl의 1 M IPTG 용액으로 유도하였다. 세포를 추가 1시간 동안 이 조건하에서 배양한 다음, 온도를 28℃로 낮추고 배양물을 140 rpm으로 15 h 동안 교반하였다. 세포를 4℃에서 15분 동안 6000 x g의 원심분리로 모았다. 이후, 세포 펠릿을 -80℃에서 보관하였다.
D. 이. 콜라이에서 HPPD 단백질의 생산, His-Tag를 통한 정제
아라비돕시스 탈리아나 (Arabidopsis thaliana) AtHPPD 코딩 서열 (1335 bp; Genebank AF047834; WO　96/38567)을 먼저 발현벡터 pQE-30 (QIAGEN, Hilden, Germany) 내로 BamHI와 HindIII의 제한부위 사이에 클로닝하였다. 얻어진 벡터를 "pQE30-AtHPPD"라 지칭하였다(참조: WO 2009/144079).
플라스미드는 trp-lac (trc) 프로모터, 및 모든 이. 콜라이 숙주 균주에서 lac 리프레서 (repressor)를 제공하는 lacIq 유전자를 갖는다. lac 리프레서는 lac 오퍼레이터 (lacO)에 결합하고, 표적 유전자의 발현을 제한하며; 이 억제는 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노사이드 (IPTG)에 의한 유도에 의해서 완화될 수 있다.
상기에 정의된 모든 이. 콜라이 발현벡터를 사용하여 에스케리키아 콜라이 BL21 세포 (Merck, Darmstadt, Germany)를 형질전환시켰다.
참조로 사용된 AtHPPD (아라비돕시스 탈리아나 (Arabidopsis thaliana) HPPD)의 경우에는 WO 2009/144079를 참고로 한다.
HPPD의 발현은 pQE30-AtHPPD, pET32a-AvHPPDe, pSE420(RI)NX-Pfw336, pSE420(RI)NX-FMP27 또는 pSE420(RI)NX-FMP37을 함유하는 이. 콜라이 K-12 BL21에서 수행하였다. 세포를 OD가 0.5에 도달할 때까지 배양한 다음, 발현은 lac 리프레서에 결합하고, lac 오페론으로부터 그의 해리를 야기하는 1 mM IPTG로 유도함으로써 trp-lac (trc) 프로모터로부터 개시시켰다. 발현은 28℃에서 15 시간 동안 수행하였다.
사전-스타터 (pre-starter) 배양물을 제조하기 위해서, 2 mL의 TB 배지 (100 μg*mL-1 카베니실린)를 50 μL의 이. 콜라이 K-12 BL21 글리세롤 원액 (stock)으로 접종하였다. 사전-스타터 배양물을 15 시간 동안 140 rpm으로 교반하면서 37℃에서 배양하였다. 200 μl의 사전-스타터 배양물을 사용하여 스타터 배양(5 mL TB 보충, 100 μg*mL-1)을 개시하였으며, 이를 37℃에서 3 시간 동안 인큐베이션하였다.
메인 배양물을 제조하기 위해서, 400 mL의 TB 배지(100 μg*mL-1 카베니실린)를 4 mL의 스타터 배양물로 접종하였다. 이 스타터 배양물은 OD600 0.5에 이를 때까지 140 rpm으로 교반하면서 37℃에서 인큐베이션하였다. 이후, 400 μl의 1 M IPTG 용액으로 재조합 단백질 발현을 유도하였다. 세포를 이 조건하에 추가 1시간 동안 배양한 다음, 온도를 28℃로 낮추고, 배양물을 15시간 동안 140 rpm으로 교반하였다. 세포를 4℃에서 6000 x g으로 15분 동안 원심분리하여 모았다. 이후, 세포 펠릿을 -80℃에서 보관하였다.
D1 - 자연 형태의 His6-태그 HPPD의 단리 및 정제, 세포 용균
세포를, 박테리아 세포벽을 형성하는 펩티도글리칸 내의 N-아세틸뮤라민산과 N-아세틸-D-글루코사민 잔기 사이의 1,4-β-결합을 분해하는 효소인 리소자임을 사용하여 용균하였다. 이후, 세포막을 박테리아 세포의 내부 압력에 의해서 붕괴시켰다. 또한, 용균 완충액은 단백질을 손상시키지 않으면서 DNA 및 RNA의 모든 형태를 가수분해시킴으로써 세포 용균물의 점도를 크게 감소시키는 엔도뉴클레아제인 벤조나제 (Benzonase®) 뉴클레아제를 함유하였다. 자연적 조건 하에서의 용균은 얼음 상에서 수행하였다.
His6-태그 단백질의 정제를 위해, QIAexpress ® Ni-NTA 패스트 스타트 키트 (Fast Start Kit)를 사용자 취급 설명서에 따라 사용하였다.
D2 - 고정화된 금속 이온 친화성 크로마토그래피 (IMAC)에 의한 His6-태그 단백질의 정제
용균 반응액의 원심분리 후 얻어진 맑은 세포 용균액(10 mL)을 QIAexpress ® Ni-NTA 패스트 스타트 키트 (Qiagen, Hilden, Germany)의 Ni-NTA 패스트 스타트 컬럼 상에 로딩하고, 취급 설명서에 따라 정제를 수행하였다. His6-태그 단백질을 2.5 mL의 용출 완충액으로 용출하였다.
D3 - 겔 여과에 의한 HPPD 용액의 탈염 (desalting)
2.5 mL의 용출 완충액에 의해서 Ni-NTA 패스트 스타트 컬럼으로부터 용출된 HPPD 용액을 사용자 취급 설명서에 따라 세파덱스 (Sephadex) G-25 PD-10 컬럼 (GE Healthcare, Freiburg, Germany)에 적용하였다. 전체 샘플이 겔 베드에 들어간 후에, 3.5 mL의 저장 완충액을 사용하여 용출을 수행하였다.
탈염 컬럼으로부터 용출된 HPPD 용액을 1 mL의 분취액으로 -80℃에서 동결시켰다.
D4 - 브래드포드(Bradford) 단백질 어세이를 사용한 HPPD 단백질 농도의 결정
단백질 농도는 표준 브래드포드 어세이(Bradford, (1976), Anal Biochem 72: 248-254)를 사용하여 결정하였다.
D5 - SDS-PAGE를 사용한 HPPD 용액의 순도 결정
용출된 단백질의 온전성(integrity)은 약 10 μg의 단백질을 로딩하여 겔 NuPAGE® Novex 4-12% 비스-트리스 겔 (Invitrogen, Karlsruhe, Germany)을 사용하는 SDS-PAGE 단백질 겔 전기영동에 의해 확인하였다. 10 μL의 램리 샘플 완충액 (Laemmli Sample Buffer)을 1-10 μL의 단백질 용액에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 단기 원심분리 단계 후에, 전체 혼합물을 NuPAGE® MOPS SDS 주행 완충액 (Running Buffer) (20 x-용액으로부터 ddH2O로 희석됨)으로 충전된 XCell SureLock™ Novex 미니-셀 (Mini-Cell) 겔 챔버 내에 미리 고정시킨 SDS 겔의 슬롯 (slot) 내에 로딩하였다. 이후, 150의 전압을 1시간 동안 겔 챔버에 적용하였다. 단백질 밴드의 염색을 위해, 겔을 쿠마시 브릴리언트 블루 (Coomassie Brilliant Blue) R-250 염색 용액에 침지시켰다. 폴리아크릴아미드 겔의 탈염색(destaining)을 위해서, 이것을 단백질 밴드가 백색 겔 상에서 청색으로 나타날 때까지 쿠마시 브릴리언트 블루 R-250 탈염색 용액에 침지시켰다.
E - 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 존재 하에서 HPPD 활성의 측정
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드의 pI50값(몰 농도로 50%의 효소 활성을 저해하는데 필요한 저해제 농도의 로그값, 표 1의 3번째 컬럼 참조)은 이른 바 HGD 어세이와 ID Business Solutions Ltd. XLfit 소프트 웨어 제품의 시그모이달(Sigmoidal) 용량-반응 모델 또는 4 파라미터 로지스틱 모델을 사용하여 HPPD 활성 대 저해제 농도의 용량-반응 플롯으로부터 측정하였다. HGD 어세이를 사용한 HPPD 활성은 실온에서 적절한 양의 HPPD를 200 mM Tris-HCl pH 7.6, 10 mM 아스코르베이트, 20 μM FeSO4, 650 단위의 카탈라제(catalase), 8 μg HGA 디옥시게나제(HGA:호모겐티세이트(homogentisate)) 및 600 μM HPP의 전체 부피 1 ml 용액에 첨가하여 측정하였다. 초기 반응속도는 말레일아세토아세테이트의 형성으로 인한 318 nm에서의 흡광도 증가로부터 측정하였다(ε318 = 11,900 M-1 cm-1).
여기에서, 기호 ">"는 값이 표시된 것보다 훨씬 더 높았지만 시험된 저해제의 농도 범위 내에서 정확하게 계산할 수 없는 것을 의미하는 것으로 사용되었다.
표 1의 제1 컬럼에는 어세이에 사용된 HPPD를 나열하였고, 표 1의 제2 컬럼에는 본 발명의 상응하는 서열번호를 기재하였다. 표 1의 제4 컬럼에는 0.2 μM 농도의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드에서 개별 효소의 효소 활성 저해를 기재하였다.
전체 결과를 표 1에 나타내었다.
표 1
Figure pct00016
이러한 데이터는 다양한 유기체로부터 유도된 HPPD가 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드에 대한 허용가능한 내성을 보이고(PfHPPD, Axmi309H, FMP22, FMP27, FMP37 참조), 이전 것들 중 일부의 특정 돌연변이체(PfHPPD336W, PfHPPD-Evo33, PfHPPD-Evo40, PfHPPD-Evo41, Axmi428H-Evo40, Axmi428H-Evo41, Axmi309H-Evo41 참조)는 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드에 대해 훨씬 덜 민감한 것을 나타낸다.
F - 대두 형질전환
대두 형질전환은 당 분야에서 공지된 방법, 예컨대 Paz et al. (2006), Plant cell Rep. 25:206에 기술된 방법을 필수적으로 사용하는 아그로박테리움 투메파시엔스 매개 형질전환 대두 반립 종자 외식편을 사용하는 기술된 방법에 의해 달성되었다. 형질전환체를 다양한 HPPD 저해제를 선택 마커로 사용하여 동정하였다. 새싹(green shoot)의 출현을 관찰할 수 있으며, 이것은 개별 제초제에 대한 내성의 지표로서 뒷받침될 수 있다. 내성이 있는 형질전환 싹은 개별 HPPD 저해제로 처리되지 않은 야생형 대두 싹과 비교할 수 있는 정상적 녹화를 나타내지만, 같은 양의 개별 HPPD 저해제로 처리된 야생형 대두 싹은 완전히 백화된다. 이는 HPPD 단백질의 존재가 HPPD 저해제 제초제에 대한 내성을 가능하게 하는 것을 시사한다.
내성이 있는 새싹을 뿌리활착 배지에 옮기거나 이식하였다. 뿌리활착 묘목은 순화 기간 후에 온실로 옮겼다. 이후, 전이유전자를 함유하는 식물은 HPPD 저해제 제초제로, 예를 들어 템보트리온으로 100g AI/ha의 비율로 분무하였다. 적용한 10일 후에 제초제 적용으로 인한 증상을 평가하고 동일 조건하의 야생형 식물에서 관찰된 증상과 비교하였다.
상기한 바에 따라 얻어진 대두 식물은 현장 시험 데이터를 수집하는데 사용되었다.
G - 코튼 TO 식물 구축 및 선택
코튼 형질전환은 당 분야에 공지된 방법, 특히 PCT 특허출원 공개 WO 00/71733에 기술된 방법 중 바람직한 방법을 사용하여 달성되었다. 재발아된(Regenerated) 식물을 온실로 옮겼다. 순화 기간 후에, 충분하게 자란 식물에 HPPD 저해제 제초제, 예를 들어 암모늄 설페이트와 메틸 에스테를 유채유가 보충된 100 gAI/ha에 해당하는 템보트리온을 분무하였다. 분무 적용한 7일 후에 제초제 처리로 인한 증상을 평가하고 동일 조건하에서 동일하게 처리된 야생형 코튼 식물에서 관찰된 증상과 비교하였다.
H - 아그로박테리움 매개 형질전환에 의한 옥수수 식물 세포의 형질전환
옥수수 식물에서의 안정한 발현을 위한 식물 발현 카세트 구성과 옥수수 형질전환은 당 분야에 잘 알려져 있으며, 이러한 특별한 예에서 그 방법은 PCT 특허출원 공개 W02014/043435 및 WO2008/100353에서 기술 및 사용되었다. HPPD 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열(PCT/US2013/59598 (WO2014/043435))은 제초제에 내성을 부여하는 EPSPS 단백질을 코딩하는 DNA 서열로 스태킹(stacking)되어 있으며, 이것은 EPSPS를 표적으로 한다. EPSPS 유전자를 아트로박터 글로비포르미스(Arthrobacter globiformis) (WO2008/100353)로부터 단리하여 수송 펩타이드 서열에 인프레임(in-frame) 결합하여 번역된 단백질의 엽록체로의 전좌를 유도하였다. 안정한 발현은 유비쿼터스(ubiquitous) 프로모터(사탕수수의 Ubiquitin 4 프로모터, 미국 특허 제6,638,766호)와, 콜리플라워 모자이크 바이러스의 35S 종결인자 서열로 달성되었으며, 이것은 EPSPS 유전자의 상류쪽과 하류쪽에 각각 클로닝되었다.
상응하는 HPPD 변이체를 동일 프로모터, 엽록체 수송 펩타이드, 및 종결인자 서열로 EPSPS 유전자 발현 카세트에 대해 기술된 바와 같이 클로닝하였다. 두 유전자의 코딩 서열은 옥수수 발현에 코돈 최적화되었다.
옥수수 형질전환에 있어서, 수분한 8-12일 후에 옥수수 알을 최적 수확하였다.
낟알로부터 배아를 단리하였고, 0.8-1.5 mm 크기의 배아가 형질전환에서 사용하는데 바람직하였다. 배아를 적합한 인큐베이션 배지에 배반쪽을 위로 하여 도말하여 밤새 25℃로 암실에서 인큐베이션하였다. 그러나, 배아를 밤새 인큐베이션하는 것은 그 자체가 필수는 아니다. 배아를 본 발명의 뉴클레오티드 서열을 갖는 적절한 벡터를 함유하는 아그로박테리움 균주와 Ti 플라스미드 매개 전이를 위해 약 5-10 분 동안 접촉시킨 다음, 동시배양 배지에 약 3일 동안(25℃, 암실) 도말하였다. 동시 배양한 후, 외식편을 회복 기간 배지에 약 5일 동안(25℃, 암실) 전이시켰다. 외식편을 사용된 구체적인 선택의 성질과 특성에 따라 최대 8주 동안 선택 배지에서 글리포세이트와 인큐베이션하였다. 선택 기간 후에, 얻어진 캘러스(callus)를 성숙한 체세포 배아의 형성이 관찰될 때까지 배아 성숙 배지에 전이시켰다. 이후, 얻어진 성숙한 체세포 배아를 저조도(low light) 하에 배치하였고, 재발아의 과정이 당 분야에서 알려진 바와 같이 개시되었다. 생성된 순이 뿌리활착 배지에서 뿌리를 내리도록 하였고, 자라난 식물을 육묘 포트에 옮겨서 형질전환 식물로서 번식시켰다. 식물을 전이유전자의 발현 및 존재에 대해 ELISA 단백질 검출방법을 사용하여 일반적으로 분석하였다. 선택 배지에서 회수한, 검출가능한 HPPD 전이유전자 단백질 발현이 있는 식물만을 제초제 내성 분석에서 사용하였다.
I - 돌연변이된 HPPD 단백질 변이체를 발현하는 형질전환 식물의 제초제 내성 평가
I1 - 형질전환 옥수수 T0 식물의 온실 시험
조직배양으로부터 재발아된 TO를 인공토양(Fafard® Mix)과 지효성 비료 (Haifa Multicote™; 폴리머 코팅된 지효성 비료, NPK Pro 18-6-12 + 미량영양소)로 채워진 2 제곱인치의 포트에 옮겨서 보조 고압 나트륨 광 하에서 12일 동안 낮에는 최대 30℃와 밤에는 최소 22℃로 하여 온실(GH) 재배하였다. 충분히 회수된 식물을 동일 환경 조건하의 인공토양과 지효성비료로 채워진 5 제곱인치의 포트에 옮겼다. 7일 후, T0 식물에 에스테르화 식물성 오일 혼합물(Hasten™ 분무 보조제, 0.578% v/v)과 황산암모늄(AMS, 0.97% w/v)이 보충된 WP20 (수화제(wettable powder) 20%)로부터 제조된 25g AI/ha (여기서 "g AI/ha"는 "헥타르 당 활성성분 g"을 의미함), 50g AI/ha, 또는 100g AI/ha의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드를 분무하였다. 모든 제초제 처리는 DeVries Tracker Sprayer 시스템으로 당분야에서 공지된 표준 적용 방법을 사용하여 수행하였다. 분무 대조군으로, T0에 제초제가 없는 보조 혼합물을 분무하였다. 이 혼합물을 분무한 모든 TO에서 백화된 잎은 나타나지 않았다. 달리 언급되지 않았다면, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 처리 6일 후(DAT)에 형질전환 TO 식물의 손상을 평가하였다.
EPSPS 선택 마커 유전자를 발현하고 HPPD 변이체 유형을 포함하지 않는 TO 식물을 대조용 옥수수 식물로 사용하였으며 25 g AI/ha의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드로 이미 100%의 잎 손상을 나타냈다.
형질전환되지 않은 옥수수 식물 또한 25 g AI/ha의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드로 이미 100%의 잎 손상을 나타냈다.
표 2는 위치 335에서의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336에서의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339에서의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340에서의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환을 포함하는 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 돌연변이체(PfHPPDEvo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 16으로 기재, 본 원에서 서열번호 29로 기재), 또는 위치 351에서의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 352에서의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 355에서의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 356에서의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환을 포함하는 슈도모나스(=Comamonas) 테스토스테로니 HPPD 단백질의 돌연변이된 서열(Axmi428H-Evo41로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 56으로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 33으로 기재) 또는 위치 335에서의 E (Glu) -> P (Pro) 치환, 위치 336에서의 G (Gly) -> W (Trp) 치환, 위치 339에서의 K (Lys) -> A (Ala) 치환 및 위치 340에서의 A (Ala) -> Q (Gln) 치환을 포함하는 슈도모나스 아가리시(Pseudomonas agarici) HPPD 단백질의 돌연변이된 서열(Axmi309H-EVO41으로 명명, PCT/US2013/59598 (WO2014/043435)에서 서열번호 54로 기재, 본 원에서 HPPD 단백질 서열로서 서열번호 37에 기재)을 발현하는 형질전환 옥수수 식물의 결과를 요약하였다.
대조용 옥수수 식물은 EPSPS 선택 마커 유전자를 발현하고 HPPD 단백질 변이체를 함유하지 않는다. "0" 등급으로 분류된 식물은 전체 잎 면적 중 41% 내지 100% 손상의 범위로 잎의 심각한 백화를 나타냈다. 전체 잎 면적의 16% 내지 40% 손상으로 중등도의 내성을 갖는 식물을 "1" 등급으로 분류하였다. 전체 잎 면적의 6% 내지 15% 손상의 범위 내로 양호한 내성을 갖는 식물을 "2" 등급으로 분류하였다. "3" 등급의 식물은 백화가 거의 나타나지 않았으며, 5% 이하의 잎 면적이 제초제 처리로 손상되었다.
표 2의 결과는 형질전환 HPPD 단백질을 발현하는 시험된 옥수수 식물이 대조용 식물과 비교하여 작물학적 관련 용량에서 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드에 대해 더 내성이 있는 것을 나타내고 있다.
모든 대조군은 25g AI/ha의 제초제 농도에서 이미 심각한 백화증상을 나타내었다. 이에 비해 PfHPPDEvo41 (n=21)과 Axmi428H-Evo41 (n=29)을 발현하는 시험군의 ~70%는 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드의 100g AI/ha 제초제 농도를 사용한 처리 후에 5% 이하의 백화된 잎 면적으로 높은 내성을 나타냈다. 또한, 60%의 시험된 HPPD 변이체 Axmi309H-Evo41은 100g AI/ha를 사용한 동일 처리 후에 15% 이하의 백화된 잎 면적으로 허용가능한 저항성을 제공하였다.
표 2
25 - 100 g AI/ha 비율의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드를 적용한 6일 후 옥수수 대조용 식물과 옥수수 형질전환 T0 식물의 잎 면적 손상의 평가. 제초제 내성에 따라 분류를 정의하였다: "0"= 한계 내성(marginal tolerance); 41% - 100% 손상된 잎 면적; "1"= 중간 정도의 내성; 16% - 40% 손상된 잎 면적; "2"= 양호한 내성; 6% - 15% 손상된 잎 면적; "3"= 높은 내성; 0% - 5% 손상된 잎 면적. 제초제는 PfHPPDEvo41, Axmi428H-Evo41, 및 Axmi309H-Evo41 각각에 대해 9, 12, 및 1 독립적 형질전환 발생물에서 유래된 식물에 적용되었다.
Figure pct00017
I1 - 형질전환 대두 T1 식물의 온실 시험
슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 변이체 PfHPPD-G336W (WO99/24585), 또는 PfHPPD-Evo33, 또는 PfHPPD-Evo40, 또는 PfHPPD-Evo41 (PCT/US2013/59598 (WO2014/043435))을 발현하는 형질전환 대두 T1 식물과 야생형 대두(Merlin과 Thorne)에 대두 발생 V2-V3 단계에 황산암모늄과 메틸화 유채씨유(Actirob)가 보충된 WP20 제제 타입의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드를 분무하였다(6.25g AI/ha - 75g AI/ha의 농도 범위). 분무 대조군으로서, 야생형 대두(Merlin과 Thorne)와 형질전환 대두 T1 식물에 제초제가 없는 보조제 혼합물을 분무하였다. 제초제 내성을 분무한 21일 후에 평가하였다. 이하의 제초제 내성 분류는 점수로 정의하였다: "0"= 한계 내성(marginal tolerance); 41% - 100% 손상된 잎 면적; "1"= 중간 정도의 내성; 16% - 40% 손상된 잎 면적; "2"= 양호한 내성; 6% - 15% 손상된 잎 면적; "3"= 높은 내성; 0% - 5% 손상된 잎 면적.
표 3은 식물체 내에서의 HPPD 저해제 내성 분석의 결과를 요약한 것이다. 제초제가 없는 대조용 보조제 혼합물로 처리된 모든 식물(야생형 대두 식물 포함)은 백화된 잎 면적을 발생하지 않았다. 야생형 대두 식물(Merlin과 Thorne)은 이미 6.25 g AI/ha 농도의 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드로 전체 잎 면적 45%-50%의 심각한 백화와, 이어서 25 g AI/ha의 고농도에서 90-100%의 손상된 잎 면적을 나타냈다. 슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 변이체 PfHPPD-G336W, 또는 PfHPPD-Evo33, 또는 PfHPPD-Evo40, 또는 PfHPPD-Evo41을 발현하는 형질전환 대두 T1 식물 대부분은 25 g AI/ha의 농도에서 높은 내성을 제공한다.
슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 변이체 PfHPPD-Evo41을 발현하는 형질전환 대두 T1 식물 일부는 또한 50 g AI/ha에 대해 5% 미만의 손상된 잎 면적으로 높은 내성을 나타냈다. 그러므로, PfHPPD-Evo41 발생물이 PfHPPD-G336W을 발현하는 것보다 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드에 대해 내성이 더 높았다.
표 3
슈도모나스 플루오레센스 HPPD 단백질의 변이체 PfHPPD-G336W (WO99/24585), 또는 PfHPPD-Evo33, 또는 PfHPPD-Evo40, 또는 PfHPPD-Evo41 (PCT/US2013/59598 (WO2014/043435))을 발현하는 T1 대두 형질전환 발생물 및 야생형 (wt) 대두 식물(Merlin과 Thorne)로부터 HPPD 저해제 내성의 평가. 식물은 6.25, 25, 50, 또는 75 g AI/ha의 최종 농도로 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드를 사용하여 처리하였다. 제초제 내성은 처리한 21일 후에 분류하였다. 대조군으로서 아생형 대두와 형질전환 대두 T1 식물을 제초제 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드가 없는 분무 믹스로 처리하였다. 이러한 대조용 식물은 모두 백화된 잎 면적을 나타내지 않았다. 잎 면적 손상에 따라 분류를 제초제 내성 점수로 정의하였다: "0"= 한계 내성(marginal tolerance); 41% - 100% 손상된 잎 면적; "1"= 중간 정도의 내성; 16% - 40% 손상된 잎 면적; "2"= 양호한 내성; 6% - 15% 손상된 잎 면적; "3"= 높은 내성; 0% - 5% 손상된 잎 면적.
Figure pct00018
J 포장 시험
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(성분 (A))와 다른 제초제 활성 화합물(성분 (B))의 다양한 조합의 잡초 효능과 관련한 포장 시험
J A) 시험 방법
실험은 헥타아르 당 200리터 물의 적용부피와 2회 반복으로 후적용 포장 시험으로서 수행하였다.
적용한 14일 후의 평가는 육안으로 측정되었다.
처리된 식물을 미처리 식물과 비교하였다(0-100% 스케일).
결과(2회 반복의 평균)를 이하의 표에 기재하였다.
단독으로 또는 조합하여 사용된 제초제 활성성분의 적용률을 이하의 표에 기재하였다.
보조제 시스템 Stefes Mero®를 표준물로 사용하였다.
J B) 표 4 내지 7에서 사용된 약자
용량 g ai/ha = 적용 비율(헥타아르 당 활성성분의 그람)
EC = 콜비(Colby)에 따른 기댓값 (Ec = A+B)
Δ = 측정값 -% 대 기댓값 -%의 차이 (%) (측정값 - 기댓값)
측정 = 측정값(각 (A) + (B)) (%)
평가: 측정값 (%) > Ec > 상승작용 (+ Δ)
측정값 (%)은 Ec와 동등 또는 > 부가적 효과 (Δ ± 0 )
J C) 다른 제초제 화합물과 조합한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드의 포장 데이터 결과를 이하의 표 4 내지 7에 기재하였다.
이러한 데이터는 모두 이 조합들의 다양한 잡초에 대한 상승적 효과를 입증하는 것이다.
표 4
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 + 아트라진(Atrazine)
Figure pct00019
표 5
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 + 글루포시네이트-암모늄
Figure pct00020
표 6
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 + 글리포세이트(Glyphosate)
Figure pct00021
표 7
2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 + 메트리부진(Metribuzin)
Figure pct00022
본 발명에 따른 다른 조합물을 적용하여 비슷한 결과를 얻었다.
본 명세서에서 언급된 모든 간행물과 특허출원은 본 발명이 속하는 분야의 숙련된 기술자들의 기술수준을 나타낸다. 각각의 개별 간행물 또는 특허출원이 구체적 및 개별적으로 참조로 포함된 것을 표시하더라도 모든 간행물과 특허출원은 동일 범위로 본 원에 참조로 포함되었다.
이전 발명을 이해를 분명히 하는 목적을 위해 설명과 예시의 방법으로 다소 상세히 기술하였으나, 특정한 변경 및 변형이 첨부된 청구범위의 범위에서 실시될 수 있는 것은 자명하다.
SEQUENCE LISTING <110> Bayer CropScience AG <120> Use of 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-N-(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-4-(trif luoromethyl)benzamide or its salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to HPPD inhibitor herbicides <130> BCS13-1021 <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding Avena sativa HPPD optimized for the expression in Escherichia coli cells <400> 1 atgcctccga caccggcaac agcaaccggt gcagcagcag cagccgttac accggaacat 60 gcagcacgta gctttccgcg tgttgttcgt gttaatccgc gtagcgatcg ttttccggtt 120 ctgagctttc atcatgttga actgtggtgt gcagatgcag caagcgcagc aggtcgtttt 180 agctttgcac tgggtgcacc tctggcagca cgttctgatc tgagcaccgg taatagcgca 240 catgcaagcc tgctgctgcg tagcggtgca ctggcatttc tgtttaccgc tccgtatgca 300 cctcctccgc aggaagcagc aaccgcagcc gcaaccgcaa gcattccgag ctttagcgca 360 gatgcagccc gtacctttgc agcagcacat ggcctggcag ttcgtagcgt tggtgttcgt 420 gttgcagatg ccgcagaagc atttcgcgtt agcgttgcgg gaggtgcacg tcctgcattt 480 gcaccggcag atctgggtca tggttttggt ctggcagaag ttgaactgta cggcgatgtt 540 gttctgcgtt ttgttagcta tccggatgaa accgatctgc cgtttctgcc tggttttgaa 600 cgtgttagct ctccgggtgc agttgattat ggtctgaccc gttttgatca tgttgttggc 660 aatgttccgg aaatggcacc ggttattgat tatatgaaag gctttctggg ctttcatgaa 720 tttgcagaat ttaccgcaga agatgttggc accaccgaaa gcggtctgaa tagcgttgtt 780 ctggccaata atagcgaagc agttctgctg ccgctgaatg aaccggtgca tggcaccaaa 840 cgtcgtagcc agattcagac ctatctggaa tatcatggtg gtccgggtgt tcagcatatt 900 gcactggcaa gcaatgatgt tctgcgtacc ctgcgtgaaa tgcgtgcacg taccccgatg 960 ggtggttttg aatttatggc acctccgcag gcaaaatatt atgaaggtgt gcgtcgtatt 1020 gccggtgatg ttctgagcga agagcagatt aaagaatgcc aggaactggg cgttctggtt 1080 gatcgtgatg atcagggtgt tctgctgcag atttttacca aaccggttgg tgatcgtccg 1140 accttttttc tggaaatgat tcagcgtatt ggctgcatgg aaaaagatga agtgggtcag 1200 gaatatcaga aaggcggttg tggtggtttt ggtaaaggca attttagcga actgtttaaa 1260 agcattgaag attatgaaaa aagcctggaa gttaaacaga gcgttgttgc ccagaaaagc 1320 taa 1323 <210> 2 <211> 440 <212> PRT <213> Avena sativa <400> 2 Met Pro Pro Thr Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 Thr Pro Glu His Ala Ala Arg Ser Phe Pro Arg Val Val Arg Val Asn 20 25 30 Pro Arg Ser Asp Arg Phe Pro Val Leu Ser Phe His His Val Glu Leu 35 40 45 Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu 50 55 60 Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala 65 70 75 80 His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu Ala Phe Leu Phe Thr 85 90 95 Ala Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Gln Glu Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr 100 105 110 Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Thr Phe Ala Ala 115 120 125 Ala His Gly Leu Ala Val Arg Ser Val Gly Val Arg Val Ala Asp Ala 130 135 140 Ala Glu Ala Phe Arg Val Ser Val Ala Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe 145 150 155 160 Ala Pro Ala Asp Leu Gly His Gly Phe Gly Leu Ala Glu Val Glu Leu 165 170 175 Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Pro Asp Glu Thr Asp 180 185 190 Leu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Ser Pro Gly Ala Val 195 200 205 Asp Tyr Gly Leu Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu 210 215 220 Met Ala Pro Val Ile Asp Tyr Met Lys Gly Phe Leu Gly Phe His Glu 225 230 235 240 Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu 245 250 255 Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Ala Val Leu Leu Pro Leu 260 265 270 Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr 275 280 285 Leu Glu Tyr His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser 290 295 300 Asn Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Thr Pro Met 305 310 315 320 Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Gln Ala Lys Tyr Tyr Glu Gly 325 330 335 Val Arg Arg Ile Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Ile Lys Glu 340 345 350 Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu 355 360 365 Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Phe Phe Leu 370 375 380 Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Val Gly Gln 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aaattgttca acttccgtga agcgcgttac ttcgatatca agggcgagta caccggcctg 600 acttccaagg ccatgagtgc gccggacggc atgatccgca tcccgctgaa cgaagagtcg 660 tccaagggcg cggggcagat cgaagagttc ctgatgcagt tcaacggcga aggcatccag 720 cacgtggcgt tcctcaccga cgacctggtc aagacctggg acgcgttgaa gaaaatcggc 780 atgcgcttca tgaccgcgcc gccagacact tattacgaaa tgctcgaagg ccgcctgcct 840 gaccacggcg agccggtgga tcaactgcag gcacgcggta tcctgctgga cggatcttcc 900 gtggaaggcg acaaacgcct gctgctgcag atcttctcgg aaaccctgat gggcccggtg 960 ttcttcgaat tcatccagcg caagggcgac gatgggtttg gcgagtggaa cttcaaggcg 1020 ctgttcgagt ccatcgaacg tgaccaggtg cgtcgtggtg tattgaccgc cgattaa 1077 <210> 4 <211> 358 <212> PRT <213> Pseudomonas fluorescens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (336)..(336) <223> Gly replaced by Trp <400> 4 Met Ala Asp Leu Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe 1 5 10 15 Ile Glu Phe Ala Ser Pro Thr Pro Gly Thr Leu Glu Pro Ile Phe Glu 20 25 30 Ile Met Gly Phe Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His 35 40 45 Leu Tyr Arg Gln 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actccattgc ttcttatttc gctgctgagc atggtccatc tgtttgcggt 240 atggctttca gagttaagga ttctcagaag gcttacaaca gggctcttga acttggtgct 300 cagcctattc atattgatac cggacctatg gaactcaacc ttcctgctat taagggtatt 360 ggtggtgctc ctctttacct tattgataga ttcggtgagg gctcctccat ctacgatatt 420 gatttcgttt accttgaggg cgttgagaga aaccctgttg gtgctggtct taaggttatc 480 gatcacctta cccacaacgt ttacagaggt aggatggttt actgggctaa cttctacgag 540 aagttgttca acttcagaga ggctcgttac ttcgatatta agggcgagta cactggtctt 600 acctctaagg ctatgtctgc tcctgatggt atgatcagga ttcctcttaa cgaagagtcc 660 tctaagggtg ctggtcaaat tgaagagttc ctcatgcaat tcaacggtga gggtattcag 720 catgttgctt tcttgaccga tgaccttgtt aagacttggg acgctcttaa gaaaatcggc 780 atgcgtttca tgactgctcc tccagatact tactacgaaa tgcttgaggg taggcttcct 840 gatcatggtg aacctgttga tcaacttcag gctaggggta ttcttcttga tggttcttct 900 gttgagggcg ataagaggct tttgcttcag attttctccg agactcttat gggtcctgtg 960 ttcttcgagt tcattcagag aaagggtgat gatggtttcg gtgaatggaa cttcaaggct 1020 cttttcgagt ccattgagag ggatcaagtt agaaggggtg ttcttaccgc tgattaa 1077 <210> 6 <211> 1053 <212> DNA <213> Synechococcus sp. <400> 6 atgaacccgt ccattcgaat tgtccaaggg atccaccacc tgcacttcta cctttgggat 60 ctgccccgtt ggcgggaaca cttttgtcgg gtttggggct tccgggtggc aagcgacgcc 120 ggcaacaccc tggagctgga gcagggatcc ctgcgcttgc gcctgtctca gccggcacgg 180 gcgggggacg aggtggaccg ccatttgcag cggcatgggc cgggggtggt ggatgtggcc 240 ttggcggtgg gagagcagga gctaccggcc ttggcggagc tgttgcgggg ccgaggcgcc 300 caactggcgt ggatcccggc agcagcggcg ctctgcctcc acacccccta cgggatccgg 360 cattctctga tccctggccc cttggatgcc gcccctgccg aagcgggcct gttttcccac 420 tgggatcacg tggtgttgaa cgtggagcag ggatccctgc aggcggcagc cgactggtat 480 gggcgggtgc tgggctggcg gcggctgtac cgctacagca tcggcaccgc cacctccggc 540 ctggaaagcg tggtggtggg ggatccggaa gcggggatcc aatgggccat caacgagccc 600 acctgtgccg cttcccagat tcaggagttt ttgcatgccc atggcggccc gggcattcag 660 cacgcggcgc tgcacagctc agacattgtt gccagcctgc gccggttgcg gcagggggga 720 gtggactttt tgcaagtggc gccgcagtac tacaccagcc tggaaaggga gctggggttg 780 gcgctccgtt ctgcccttgg gcaggccatc tcctggcaag acctggtgga gcagcagatc 840 cttctggatg ctaccctgcc cgcttctgat ggccaggatc gcccccttct gctgcagacc 900 tttacccagc ccctctttgg tcggcccacc tttttctttg aagtcattca acggctaggc 960 ggggccacgg gctttggcga ggccaatttt caggctttgt tcgaggccct ggaacggcaa 1020 cagcgacagc gacaccaggc gctgacccct tag 1053 <210> 7 <211> 350 <212> PRT <213> Synechococcus sp. <400> 7 Met Asn Pro Ser Ile Arg Ile Val Gln Gly Ile His His Leu His Phe 1 5 10 15 Tyr Leu Trp Asp Leu Pro Arg Trp Arg Glu His Phe Cys Arg Val Trp 20 25 30 Gly Phe Arg Val Ala Ser Asp Ala Gly Asn Thr Leu Glu Leu Glu Gln 35 40 45 Gly Ser Leu Arg Leu Arg Leu Ser Gln Pro Ala Arg Ala Gly Asp Glu 50 55 60 Val Asp Arg His Leu Gln Arg His Gly Pro Gly Val Val Asp Val Ala 65 70 75 80 Leu Ala Val Gly Glu Gln Glu Leu Pro Ala Leu Ala Glu Leu Leu Arg 85 90 95 Gly Arg Gly Ala Gln Leu Ala Trp Ile Pro Ala Ala Ala Ala Leu Cys 100 105 110 Leu His Thr Pro Tyr Gly Ile Arg His Ser Leu Ile Pro Gly Pro Leu 115 120 125 Asp Ala Ala Pro Ala Glu Ala Gly Leu Phe Ser His Trp Asp His Val 130 135 140 Val Leu Asn Val Glu Gln Gly Ser Leu Gln Ala Ala Ala Asp Trp Tyr 145 150 155 160 Gly Arg Val Leu Gly Trp Arg Arg Leu Tyr Arg Tyr Ser Ile Gly Thr 165 170 175 Ala Thr Ser Gly Leu Glu Ser Val Val Val Gly Asp Pro Glu Ala Gly 180 185 190 Ile Gln Trp Ala Ile Asn Glu Pro Thr Cys Ala Ala Ser Gln Ile Gln 195 200 205 Glu Phe Leu His Ala His Gly Gly Pro Gly Ile Gln His Ala Ala Leu 210 215 220 His Ser Ser Asp Ile Val Ala Ser Leu Arg Arg Leu Arg Gln Gly Gly 225 230 235 240 Val Asp Phe Leu Gln Val Ala Pro Gln Tyr Tyr Thr Ser Leu Glu Arg 245 250 255 Glu Leu Gly Leu Ala Leu Arg Ser Ala Leu Gly Gln Ala Ile Ser Trp 260 265 270 Gln Asp Leu Val Glu Gln Gln Ile Leu Leu Asp Ala Thr Leu Pro Ala 275 280 285 Ser Asp Gly Gln Asp Arg Pro Leu Leu Leu Gln Thr Phe Thr Gln Pro 290 295 300 Leu Phe Gly Arg Pro Thr Phe Phe Phe Glu Val Ile Gln Arg Leu Gly 305 310 315 320 Gly Ala Thr Gly Phe Gly Glu Ala Asn Phe Gln Ala Leu Phe Glu Ala 325 330 335 Leu Glu 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caaatccaag aatatgtcga atattatggt 780 ggagcaggcg tacaacatat tgccttaaaa gtcaatgata ttatttcagt aataagcacc 840 ttaagggcta gaggtgtgga attcttagaa gttcctccta aatattatga tagcttaaga 900 aaaagacttg cgcattctgc ggtacaaatt gaagaagact taaaaagaat tgaagacctt 960 catattttgg ttgactttga cgaccgtggg tatttacttc agattttcac aaaaccagta 1020 gaagacagac ctactctgtt ttatgaaatt attcaaagac ataataacaa tggattcgga 1080 attggaaatt ttaaagccct atttgaatca ttggaacaag agcaagaaag aagaggtaat 1140 ttgatctaa 1149 <210> 9 <211> 382 <212> PRT <213> Blepharisma japonicum <400> 9 Met Thr Tyr Tyr Asp Lys Gln Glu Thr Arg Pro Asp Leu Gly Glu Phe 1 5 10 15 Tyr Gly Phe His His Val Arg Phe Tyr Val Ser Asn Ser Glu Gln Ala 20 25 30 Ala Ser Phe Tyr Thr Ser Arg Phe Gly Phe Ser Pro Val Ala Tyr Glu 35 40 45 Gly Leu Glu Thr Gly Asn Gln Lys Phe Cys Thr Asn Val Val Arg Ser 50 55 60 Asn His Val Val Ile Ala Phe Thr Ser Ala Leu Thr Pro Glu Asp Asn 65 70 75 80 Glu Val Asn Arg His Val Gly Lys His Ser Asp Gly Val Gln Asp Ile 85 90 95 Ala Phe Ser Val Ser Asp Ala Arg Gly Met Tyr Glu Lys Ala Ile Ala 100 105 110 Lys Gly Cys Lys Ser Phe Arg Glu Pro Gln Val Leu Gln Asp Gln Phe 115 120 125 Gly Ser Val Ile Ile Ala Ser Leu Gln Thr Tyr Gly Asp Thr Val His 130 135 140 Thr Leu Val Gln Asn Val Asp Tyr Thr Gly Pro Phe Leu Pro Gly Phe 145 150 155 160 Arg Ala Ile Thr Lys Asp Asp Pro Leu Asn Ser Ala Phe Pro Gln Val 165 170 175 Asn Tyr Asp Ile Ile Asp His Val Val Gly Asn Gln Pro Gly Gly Asp 180 185 190 Met Thr Pro Thr Val Glu Trp Tyr Glu Lys Tyr Leu Glu Phe His Arg 195 200 205 Tyr Trp Ser Ala Asp Glu Ser Val Ile His Thr Asp Tyr Ser Ala Leu 210 215 220 Arg Ser Val Val Val Ala Asp Trp Asp Glu Val Ile Lys Met Pro Ile 225 230 235 240 Asn Glu Pro Ala Asp Gly Leu Arg Lys Ser Gln Ile Gln Glu Tyr Val 245 250 255 Glu Tyr Tyr Gly Gly Ala Gly Val Gln His Ile Ala Leu Lys Val Asn 260 265 270 Asp Ile Ile Ser Val Ile Ser Thr Leu Arg Ala Arg Gly Val Glu Phe 275 280 285 Leu Glu Val Pro Pro Lys Tyr Tyr Asp Ser Leu Arg Lys Arg Leu Ala 290 295 300 His Ser Ala Val Gln Ile 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cctcgtcgac cgcagccact acaccggccc ctacctgccc 540 ggctacaccg cccgcacctc cggccacacc aaacgggacg gggcacccaa gcgcctgttc 600 caggccctcg accacgtcgt cggcaacgtc gaactcggca agatggacca ctgggtcgac 660 ttctacaacc gggtcatggg ctttacgaac atggccgagt tcgtcggcga ggacatcgcc 720 accgactact ccgcgctgat gagcaaggtc gtctccaacg gcaaccaccg ggtcaagttc 780 cccctcaacg aacccgccct cgccaagaaa cgctcgcaga tcgacgaata cctcgacttc 840 taccgcggcc ccggcgccca gcacctggcc ctggccacca atgacatcct caccgccgtc 900 gaccagctga ccgccgaggg cgtcgagttc ctggccaccc ccgactccta ctacgaggac 960 cccgaactgc gggcccggat cggcaacgtc cgcgccccca tcgccgaact gcagaaacgc 1020 ggcatcctcg tcgaccgcga cgaagacggc tacctgctgc agatcttcac caaacccctc 1080 gtcgaccggc ccaccgtgtt cttcgaactc atcgaacgcc acggctccct cggcttcggc 1140 atcggcaact tcaaagccct cttcgaggcc atcgaacgcg aacaagccgc ccgcggaaac 1200 ttctga 1206 <210> 11 <211> 401 <212> PRT <213> Rhodococcus sp. <400> 11 Met Thr Ile Glu Gln Thr Leu Thr Asp Lys Glu Arg Leu Ala Gly Leu 1 5 10 15 Asp Leu Gly Gln Leu Glu Gln Leu 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gtcgcgatgg atgccgtggt gttcgtgtgc ggcaacgcga cgcagagcac gcagtacttc 180 gtctccacgt ggggcatgac cctcgtcgcc tacgccgggc cggagaccgg tcagcgctcg 240 cacaagtcct tcgtcctcga gtcggggtcg gcacggttcg tgctgcacgg cgccgtcgat 300 ccgaagagcc cgctcgcgga ccatcaccgg gcgcacggcg acggcgtggt ggacctggcg 360 atggaagttc tcgacgtcga ccgctgcatc gcgcatgcac gctcgcaggg ggccaccatt 420 ctcgaggagc cgcgcgacgt cacggatcag ttcggcaccg tgcggctcgc ggcgatcgcc 480 acgtacggca gcacccggca caccatcgtc gaccgaagcc gatacgacgg cccctacctc 540 cccggattcg tcgcgcgctc cagcggtttc gcggcgcgac cgggtaaacc cccgcgattg 600 ttccaggcgc tcgaccacgc cgtcggcaac gtcgagatgg gccggatgga tcactgggtc 660 cggttctaca accgcgtcat gggcttcacg aacatggccg aattcgtcgg cgacgacatc 720 gccacggagt actcggcgct gatgtcgaag gtcgtggcga acggcaatca ccgggtgaag 780 ttcccgctca acgaacccgc ggtgggaaag aagaagtcgc agatcgacga atatctcgag 840 ttctacggtg agccgggctg ccagcatctg gccctcgcga ccggagacat cctcgcgacg 900 gtggacgcgt tgcgggccga gggtgtcgaa ttcctgaaca cacccgacgc gtactacgag 960 gacccacagc tgcgcgcccg gatcggcagg gtgcgggtgc cggtggagga actgcagaag 1020 cgcggaatcc tcgtcgaccg cgacgaggac ggatacctcc tgcagatctt caccaaaccg 1080 ctcggcgacc ggccgaccgt gttcttcgag gtgatcgaac ggcacggttc gctcgggttc 1140 ggggcgggta acttccaggc cctgttcgaa tccatcgagc gtgagcaggc ggcgcgcggc 1200 aatctgtga 1209 <210> 13 <211> 402 <212> PRT <213> Rhodococcus sp. <400> 13 Met Thr Thr Ala Asp Ile Arg Leu Thr Pro Arg Glu Val Ala Ala His 1 5 10 15 Leu Glu Thr Asp Glu Leu Arg Gln Leu Val Gly Leu Val Glu His Asp 20 25 30 Asp Ala Ser Asp Pro Phe Pro Val Val Ala Met Asp Ala Val Val Phe 35 40 45 Val Cys Gly Asn Ala Thr Gln Ser Thr Gln Tyr Phe Val Ser Thr Trp 50 55 60 Gly Met Thr Leu Val Ala Tyr Ala Gly Pro Glu Thr Gly Gln Arg Ser 65 70 75 80 His Lys Ser Phe Val Leu Glu Ser Gly Ser Ala Arg Phe Val Leu His 85 90 95 Gly Ala Val Asp Pro Lys Ser Pro Leu Ala Asp His His Arg Ala His 100 105 110 Gly Asp Gly Val Val Asp Leu Ala Met Glu Val Leu Asp Val Asp Arg 115 120 125 Cys Ile Ala His Ala Arg Ser Gln Gly Ala Thr Ile Leu Glu 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aaaaacttgg ctttgagcat 600 ttaataacct ttgatgataa agatataaga actgattaca gcgcattaag atcaaaggtt 660 gtaaaataca atgacgatat cgtatttcca ataaatgagc ctgcaaaggg cttaagaaaa 720 tcacagatag aggaatatct tgactattac aggtctgagg gcgttcagca catagcactg 780 ttaactgatg atataataaa aactgtatcc atgatggagg aaaacggcat agaattttta 840 aaaacaccag gatcatacta tgaatcccta tcatcaagga taggctcaat agacgaggat 900 ttaaatgaaa tagagaaaca taacatactt gtggatcgtg atgagaacgg atacctatta 960 cagatcttca caaagcctgt tactgacagg ccaacgttct tctttgaggt catacagaga 1020 aagggtgcaa ggtcattcgg caacggtaac tttaaggcac tttttgaggc gatagaaagg 1080 gagcaggcaa agagaggaaa cctatga 1107 <210> 15 <211> 368 <212> PRT <213> Picrophilus torridus <400> 15 Met Tyr Gly Lys Asn Leu Ile Ser Glu Leu Arg Glu Lys Glu Ile Phe 1 5 10 15 Lys Arg Leu His His Val Glu Phe Tyr Val Ser Ser Ala Lys Thr Trp 20 25 30 Ser Tyr Phe Met Asn Arg Gly Leu Gly Phe Lys Thr Val Ala Tyr Ala 35 40 45 Gly Pro Glu Thr Gly Ile Arg Asp Lys Ile Ser Tyr Val Met Ser Gln 50 55 60 Gly Thr Ala Arg Ile 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atgtaattcg ctcaggaatc tatacgtacg gagaaacggt tcatgttttt 480 gtagaacgta aaaactataa cggagtcttt ttaccaggat atcaaagatg ggaatctcac 540 tacaatccgg agccagttgg cttaaaattc atcgatcaca tggtaggaaa tgtaggttgg 600 ggagaaatga aagaatggtg tgaattctac gcgaaagtaa tgggatttgc gcaaattatc 660 tcctttacag atgatgatat ttctaccgat tttactgcgt tgatgagtaa agtaatgagt 720 aatggaaatg gtagaatcaa atttccaatc aatgaacccg cagaaggaaa aaagaaatcg 780 caaattgaag aatatctaga cttttacaat ggttcaggag tacaacatat tgcggttgct 840 acagacaata ttattgatac ggtttcgcaa atgcgcgaac gtggagtaga attcttatac 900 gttccagata catattatga tgacttgtta gaacgtgttg gcgacatcga tgaagatgta 960 gaagaactca aaaaacacgg aatcttaatt gatcgtgatg aagaaggata cttattgcag 1020 ttatttacca aaaccattgt agacagacca acaatgttct ttgaagtcat tcagcgtaaa 1080 ggcgcacaat catttggagt aggaaacttt aaagctttat ttgaagcgat agaaagagaa 1140 caagctgctc gcggaacatt gtaa 1164 <210> 17 <211> 387 <212> PRT <213> Kordia algicida <400> 17 Met Ala Ala Glu Ile Lys Asn Leu Lys Asp Leu Gln Asn Thr Glu Tyr 1 5 10 15 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Asp Phe Thr Ala Leu Met Ser Lys Val Met Ser 225 230 235 240 Asn Gly Asn Gly Arg Ile Lys Phe Pro Ile Asn Glu Pro Ala Glu Gly 245 250 255 Lys Lys Lys Ser Gln Ile Glu Glu Tyr Leu Asp Phe Tyr Asn Gly Ser 260 265 270 Gly Val Gln His Ile Ala Val Ala Thr Asp Asn Ile Ile Asp Thr Val 275 280 285 Ser Gln Met Arg Glu Arg Gly Val Glu Phe Leu Tyr Val Pro Asp Thr 290 295 300 Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Glu Arg Val Gly Asp Ile Asp Glu Asp Val 305 310 315 320 Glu Glu Leu Lys Lys His Gly Ile Leu Ile Asp Arg Asp Glu Glu Gly 325 330 335 Tyr Leu Leu Gln Leu Phe Thr Lys Thr Ile Val Asp Arg Pro Thr Met 340 345 350 Phe Phe Glu Val Ile Gln Arg Lys Gly Ala Gln Ser Phe Gly Val Gly 355 360 365 Asn Phe Lys Ala Leu Phe Glu Ala Ile Glu Arg Glu Gln Ala Ala Arg 370 375 380 Gly Thr Leu 385 <210> 18 <211> 1056 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding Synechococcus sp. 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(strain RHA1), isolate ro03041 HPPD optimized for the expression in soybean and cotton <400> 20 atggctacta ttgagcagac tctcactgat aaggaaaggc ttgctggact tgatcttgga 60 caacttgagc agcttgttgg acttgttgag tacgatggaa ctagggaccc atttccagtt 120 tctggatggg atgctgttgt ttgggttgtg ggaaatgcta ctcaaactgc tcactacttc 180 caatctgctt tcggaatgac tcttgtggct tactctggac caactactgg aaatagggat 240 caccactctt tcgttcttga atctggtgct gtgagattcg ttattaaggg tgctgtgaac 300 ccagattctc cacttattga tcaccatagg actcatggtg atggtgttgt ggatattgct 360 cttgctgttc cagatgtgga taagtgcatt gctcatgcta gggctcaagg tgctactgtt 420 cttgatgagc cacacgatgt tactgatgat cacggaactg ttaggcttgc tgctattgct 480 acttacggtg atacaaggca cactcttgtt gataggtcac actacactgg accatatctt 540 ccaggataca ctgctagaac ttccggacac actaagaggg atggtgctcc aaagagactt 600 ttccaggctc ttgatcacgt tgttggaaac gttgagcttg gaaagatgga tcactgggtg 660 gacttctaca atagggtgat gggattcact aatatggctg agtttgtggg agaagatatc 720 gctactgatt actctgctct catgtctaag gttgtgtcta atggaaacca cagggtgaag 780 ttcccactta atgaaccagc tctcgctaaa aaaaggtcac agatcgatga gtacctcgat 840 ttttatcgtg gaccaggtgc tcaacatctt gctctcgcta ctaacgatat tctcactgct 900 gtggatcaac ttactgctga gggtgttgag tttcttgcta ctccagattc ctattacgag 960 gacccagaac ttagagctag gatcggaaat gttagggctc caatcgctga acttcagaag 1020 aggggaatac tcgttgatag agatgaggat ggataccttc tccagatctt cactaagcca 1080 ttggttgata ggccaactgt tttcttcgag cttattgaga ggcatggatc tcttggattc 1140 ggaatcggaa acttcaaggc tcttttcgag gctattgaga gagaacaagc tgctagggga 1200 aatttctga 1209 <210> 21 <211> 1212 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding Rhodococcus sp. (strain RHA1), isolate ro02040 HPPD optimized optimized for the expression in soybean and cotton <400> 21 atggctacta ctgctgatat taggcttact ccaagggaag ttgctgctca tcttgagact 60 gatgagctta ggcaacttgt tggacttgtt gagcacgatg atgcttcaga tccattccca 120 gttgttgcta tggatgctgt tgtttttgtt tgcggaaacg ctactcaatc tactcagtac 180 ttcgtgtcta cttggggaat gactcttgtt gcttatgctg gaccagaaac tggacagaga 240 tctcacaagt ctttcgtgct tgaatctgga tctgctagat tcgttcttca cggtgctgtt 300 gatccaaagt ctccacttgc tgatcatcat agggctcatg gtgatggtgt tgtggatctt 360 gctatggaag tgcttgatgt ggatagatgc attgctcatg ctagatctca gggtgctact 420 attcttgaag aacctcgtga tgtgactgat cagtttggaa ctgttaggct tgctgctatt 480 gctacttacg gctccactag gcacactatt gtggataggt ccagatatga tggaccatac 540 cttccaggat ttgttgctag gtcatctgga tttgctgcta gaccaggaaa gccaccaaga 600 cttttccaag ctcttgatca cgctgttgga aatgttgaaa tgggaaggat ggatcattgg 660 gtgaggttct acaatagggt gatgggattc actaatatgg ctgagttcgt gggtgatgat 720 attgctactg agtactctgc tcttatgtct aaggttgtgg ctaatggaaa tcacagggtg 780 aagttcccac ttaatgaacc agctgtggga aagaagaagt cccagatcga cgagtacctt 840 gagttttacg gtgaaccagg atgtcaacat cttgctctcg ctactggtga tattcttgct 900 actgtggatg ctcttagagc tgaaggtgtt gagttcctca atactccaga tgcttactac 960 gaggacccac aacttagagc taggattgga agagttaggg ttccagttga ggaacttcag 1020 aagaggggaa tactcgttga tagagatgag gatggatacc ttctccagat cttcactaag 1080 ccacttggag ataggccaac tgttttcttc gaagtgattg agaggcatgg atctcttgga 1140 tttggagcag gaaacttcca ggcacttttc gagtctattg agagagaaca agctgctagg 1200 ggaaatcttt ga 1212 <210> 22 <211> 1110 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding Picrophilus torridus HPPD optimized for the expression in soybean and cotton <400> 22 atggcttacg gaaagaacct tatttctgag cttagagaga aagagatctt caagaggctt 60 catcacgttg agttctacgt ttcttccgct aagacttggt cctacttcat gaatagggga 120 ctcggattca agactgttgc ttatgctgga ccagaaactg gaatcaggga taagatctcc 180 tacgttatgt ctcaaggtac tgctaggatt tctttcactt cctccatgaa cgatgattcc 240 tacatttcca accacgttaa gaaacacggt gatggtgtta aggatatcgc tctcgaagtg 300 gatgatcttg atgaggctaa gtctctcatt gagaagtacg gaactaaggt gtccaagatc 360 aacgagatca aggatggaaa cggaaagatt aggactgctg agatcaagac ttacggtgaa 420 actgtgcaca ctcttatcga gactggtgat tacaacggtg ttttcatgcc aggatacgaa 480 gagtctgaga tcaactccaa gaacactggt atcaaaaaaa tcgatcacat tgtgggaaat 540 gtttacgagg gtgaaatgga ttcttgggtg aacttctaca ttgagaagtt gggattcgag 600 caccttatca ctttcgatga taaggatatc aggactgatt actctgctct taggtctaag 660 gtggtgaagt acaacgatga tatcgtgttc cctattaacg aaccagctaa gggacttagg 720 aagtcccaaa tcgaagagta cctcgattat taccgttctg agggtgttca acacattgct 780 ttgctcacag acgatatcat caagactgtg tccatgatgg aagagaacgg aattgagttc 840 cttaagactc caggatctta ctacgagtct ttgtcctcta ggattggatc tatcgatgag 900 gatctcaacg aaatcgagaa gcacaacatt cttgtggata gggatgagaa cggatacctt 960 ctccagattt tcactaagcc agtgactgat aggccaacat tcttcttcga agtgatccaa 1020 agaaagggtg ctagatcttt cggaaacgga aacttcaagg ctcttttcga ggctattgag 1080 agagaacaag ctaagagggg aaacctttga 1110 <210> 23 <211> 1167 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence encoding Kordia algicida HPPD optimized for the expression in soybean and cotton <400> 23 atggctgctg ctgagattaa gaacctcaag gatctccaga atactgagta cggactcaag 60 aaactttttg atgaggctga ggatttcctt ccacttctcg gaactgatta cgttgagctt 120 tatgtgggaa acgcaaagca atctgctcac ttctacaaga ctgctttcgg atttcaatct 180 gaggcttacg ctggacttga aactggactt actgataggg tttcctacgt gcttaagcag 240 gataagatta ggcttgtgct cactactcca cttggaaagg gtggagagat taacgagcac 300 attgatcttc atggtgatgg tgttaaggtt gtggctcttt gggttgaaga tgctactaag 360 gctttcgaag agactactaa gagaggtgca aagccttata tggaacctac aaaagaagag 420 gacgagaacg gatacgtgat tagatccgga atctacactt acggtgagac tgttcacgtt 480 ttcgtggaga ggaagaacta caacggagtc tttcttcctg gataccaacg atgggagtct 540 cattacaatc cagagccagt gggacttaag ttcatcgatc acatggtggg taatgttgga 600 tggggagaga tgaaggaatg gtgcgagttt tacgctaagg ttatgggatt cgctcagatc 660 atttccttca ctgatgatga 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Val Gly Ser 100 105 110 His Ala Asn Phe Gly Glu Leu Asn Ile Pro Ser Leu Glu Gly Ile Gly 115 120 125 Gly Ser Leu Leu Tyr Leu Val Asp Arg Tyr Gly Asp Arg Ser Ile Tyr 130 135 140 Asp Val Asp Phe Glu Phe Ile Glu Gly Arg Ser Ala Asn Asp Asn Ser 145 150 155 160 Val Gly Leu Thr Tyr Ile Asp His Leu Thr His Asn Val Lys Arg Gly 165 170 175 Gln Met Asp Val Trp Ser Gly Phe Tyr Glu Arg Ile Ala Asn Phe Arg 180 185 190 Glu Ile Arg Tyr Phe Asp Ile Glu Gly Lys Leu Thr Gly Leu Phe Ser 195 200 205 Arg Ala Met Thr Ala Pro Cys Gly Lys Ile Arg Ile Pro Ile Asn Glu 210 215 220 Ser Ala Asp Asp Thr Ser Gln Ile Glu Glu Phe Ile Arg Glu Tyr His 225 230 235 240 Gly Glu Gly Ile Gln His Ile Ala Leu Thr Thr Asp Asp Ile Tyr Ala 245 250 255 Thr Val Arg Lys Leu Arg Asp Asn Gly Val Lys Phe Met Ser Thr Pro 260 265 270 Asp Thr Tyr Tyr Glu Lys Val Asp Thr Arg Val Ala Gly His Gly Glu 275 280 285 Pro Leu Glu Gln Leu Arg Glu Leu Asn Leu Leu Ile Asp Gly Ala Pro 290 295 300 Gly Asp Asp Gly Ile Leu Leu Gln Ile Phe Thr Asp Thr Val Ile Gly 305 310 315 320 Pro Ile Phe Phe Glu Ile Ile Gln Arg Lys Gly Asn Gln Gly Phe Gly 325 330 335 Pro Trp Asn Phe Ala Gln Leu Phe Glu Ser Ile Glu Glu Asp Gln Ile 340 345 350 Arg Arg Gly Val Ile 355 <210> 42 <211> 440 <212> PRT <213> Avena sativa <400> 42 Met Pro Pro Thr Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 Thr Pro Glu His Ala Ala Arg Ser Phe Pro Arg Val Val Arg Val Asn 20 25 30 Pro Arg Ser Asp Arg Phe Pro Val Leu Ser Phe His His Val Glu Leu 35 40 45 Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu 50 55 60 Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala 65 70 75 80 His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu Ala Phe Leu Phe Thr 85 90 95 Ala Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Gln Glu Ala Ala Thr Ala Ala Ala Thr 100 105 110 Ala Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Thr Phe Ala Ala 115 120 125 Ala His Gly Leu Ala Val Arg Ser Val Gly Val Arg Val Ala Asp Ala 130 135 140 Ala Glu Ala Phe Arg Val Ser Val Ala Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe 145 150 155 160 Ala Pro Ala Asp Leu Gly His Gly Phe Gly Leu Ala Glu Val Glu Leu 165 170 175 Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Pro Asp Glu Thr Asp 180 185 190 Leu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Ser Pro Gly Ala Val 195 200 205 Asp Tyr Gly Leu Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu 210 215 220 Met Ala Pro Val Ile Asp Tyr Met Lys Gly Phe Leu Gly Phe His Glu 225 230 235 240 Phe Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu 245 250 255 Asn Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Ala Val Leu Leu Pro Leu 260 265 270 Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr 275 280 285 Leu Glu Tyr His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser 290 295 300 Asn Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Thr Pro Met 305 310 315 320 Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Gln Ala Lys Tyr Tyr Glu Gly 325 330 335 Val Arg Arg Ile Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Ile Lys Glu 340 345 350 Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu 355 360 365 Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Phe Phe Leu 370 375 380 Glu Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Val Gly Gln 385 390 395 400 Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser 405 410 415 Glu Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Val Lys 420 425 430 Gln Ser Val Val Ala Gln Lys Ser 435 440 <210> 43 <211> 439 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> same HPPD protein as SEQ ID 42 containing a deletion at postion 109. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (109)..(109) <223> Deletion Ala <400> 43 Met Pro Pro Thr Pro Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Val 1 5 10 15 Thr Pro Glu His Ala Ala Arg Ser Phe Pro Arg Val Val Arg Val Asn 20 25 30 Pro Arg Ser Asp Arg Phe Pro Val Leu Ser Phe His His Val Glu Leu 35 40 45 Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg Phe Ser Phe Ala Leu 50 55 60 Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser Thr Gly Asn Ser Ala 65 70 75 80 His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ala Leu Ala Phe Leu Phe Thr 85 90 95 Ala Pro Tyr Ala Pro Pro Pro Gln Glu Ala Ala Thr Ala Ala Thr Ala 100 105 110 Ser Ile Pro Ser Phe Ser Ala Asp Ala Ala Arg Thr Phe Ala Ala Ala 115 120 125 His Gly Leu Ala Val Arg Ser Val Gly Val Arg Val Ala Asp Ala Ala 130 135 140 Glu Ala Phe Arg Val Ser Val Ala Gly Gly Ala Arg Pro Ala Phe Ala 145 150 155 160 Pro Ala Asp Leu Gly His Gly Phe Gly Leu Ala Glu Val Glu Leu Tyr 165 170 175 Gly Asp Val Val Leu Arg Phe Val Ser Tyr Pro Asp Glu Thr Asp Leu 180 185 190 Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Arg Val Ser Ser Pro Gly Ala Val Asp 195 200 205 Tyr Gly Leu Thr Arg Phe Asp His Val Val Gly Asn Val Pro Glu Met 210 215 220 Ala Pro Val Ile Asp Tyr Met Lys Gly Phe Leu Gly Phe His Glu Phe 225 230 235 240 Ala Glu Phe Thr Ala Glu Asp Val Gly Thr Thr Glu Ser Gly Leu Asn 245 250 255 Ser Val Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Ala Val Leu Leu Pro Leu Asn 260 265 270 Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr Tyr Leu 275 280 285 Glu Tyr His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Ile Ala Leu Ala Ser Asn 290 295 300 Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Arg Ala Arg Thr Pro Met Gly 305 310 315 320 Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Gln Ala Lys Tyr Tyr Glu Gly Val 325 330 335 Arg Arg Ile Ala Gly Asp Val Leu Ser Glu Glu Gln Ile Lys Glu Cys 340 345 350 Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val Leu Leu 355 360 365 Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Phe Phe Leu Glu 370 375 380 Met Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Val Gly Gln Glu 385 390 395 400 Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe Ser Glu 405 410 415 Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Val Lys Gln 420 425 430 Ser Val Val Ala Gln Lys Ser 435 <210> 44 <211> 444 <212> PRT <213> Zea mays <400> 44 Met Gly Pro Thr Pro Thr Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Val Ala Ala 1 5 10 15 Ala Ser Ala Ala Glu Gln Ala Ala Phe Arg Leu Val Gly His Arg Asn 20 25 30 Phe Val Arg Phe Asn Pro Arg Ser Asp Arg Phe His Thr Leu Ala Phe 35 40 45 His His Val Glu Leu Trp Cys Ala Asp Ala Ala Ser Ala Ala Gly Arg 50 55 60 Phe Ser Phe Gly Leu Gly Ala Pro Leu Ala Ala Arg Ser Asp Leu Ser 65 70 75 80 Thr Gly Asn Ser Ala His Ala Ser Leu Leu Leu Arg Ser Gly Ser Leu 85 90 95 Ser Phe Leu Phe Thr Ala Pro Tyr Ala His Gly Ala Asp Ala Ala Thr 100 105 110 Ala Ala Leu Pro Ser Phe Ser Ala Ala Ala Ala Arg Arg Phe Ala Ala 115 120 125 Asp His Gly Leu Ala Val Arg Ala Val Ala Leu Arg Val Ala Asp Ala 130 135 140 Glu Asp Ala Phe Arg Ala Ser Val Ala Ala Gly Ala Arg Pro Ala Phe 145 150 155 160 Gly Pro Val Asp Leu Gly Arg Gly Phe Arg Leu Ala Glu Val Glu Leu 165 170 175 Tyr Gly Asp Val Val Leu Arg Tyr Val Ser Tyr Pro Asp Gly Ala Ala 180 185 190 Gly Glu Pro Phe Leu Pro Gly Phe Glu Gly Val Ala Ser Pro Gly Ala 195 200 205 Ala Asp Tyr Gly Leu Ser Arg Phe Asp His Ile Val Gly Asn Val Pro 210 215 220 Glu Leu Ala Pro Ala Ala Ala Tyr Phe Ala Gly Phe Thr Gly Phe His 225 230 235 240 Glu Phe Ala Glu Phe Thr Thr Glu Asp Val Gly Thr Ala Glu Ser Gly 245 250 255 Leu Asn Ser Met Val Leu Ala Asn Asn Ser Glu Asn Val Leu Leu Pro 260 265 270 Leu Asn Glu Pro Val His Gly Thr Lys Arg Arg Ser Gln Ile Gln Thr 275 280 285 Phe Leu Asp His His Gly Gly Pro Gly Val Gln His Met Ala Leu Ala 290 295 300 Ser Asp Asp Val Leu Arg Thr Leu Arg Glu Met Gln Ala Arg Ser Ala 305 310 315 320 Met Gly Gly Phe Glu Phe Met Ala Pro Pro Thr Ser Asp Tyr Tyr Asp 325 330 335 Gly Val Arg Arg Arg Ala Gly Asp Val Leu Thr Glu Ala Gln Ile Lys 340 345 350 Glu Cys Gln Glu Leu Gly Val Leu Val Asp Arg Asp Asp Gln Gly Val 355 360 365 Leu Leu Gln Ile Phe Thr Lys Pro Val Gly Asp Arg Pro Thr Leu Phe 370 375 380 Leu Glu Ile Ile Gln Arg Ile Gly Cys Met Glu Lys Asp Glu Lys Gly 385 390 395 400 Gln Glu Tyr Gln Lys Gly Gly Cys Gly Gly Phe Gly Lys Gly Asn Phe 405 410 415 Ser Gln Leu Phe Lys Ser Ile Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Leu Glu Ala 420 425 430 Lys Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Gly Ser 435 440 <210> 45 <211> 1077 <212> DNA <213> Pseudomonas fluorescens <400> 45 atggcagatc tatacgaaaa cccaatgggc ctgatgggct ttgaattcat cgaattcgcg 60 tcgccgacgc cgggtaccct ggagccgatc ttcgagatca tgggcttcac caaagtcgcg 120 acccaccgtt ccaagaacgt gcacctgtac cgccagggcg agatcaacct gatcctcaac 180 aacgagccca acagcatcgc ctcctacttt gcggccgaac acggcccgtc ggtgtgcggc 240 atggcgttcc gcgtgaagga ctcgcaaaag gcctacaacc gcgccctgga actcggcgcc 300 cagccgatcc atattgacac cgggccgatg gaattgaacc tgccggcgat caagggcatc 360 ggcggcgcgc cgttgtacct gatcgaccgt ttcggcgaag gcagctcgat ctacgacatc 420 gacttcgtgt acctcgaagg tgtggagcgc aatccggtcg gtgcaggtct caaagtcatc 480 gaccacctga cccacaacgt ctatcgcggc cgcatggtct actgggccaa cttctacgag 540 aaattgttca acttccgtga agcgcgttac ttcgatatca agggcgagta caccggcctg 600 acttccaagg ccatgagtgc gccggacggc atgatccgca tcccgctgaa cgaagagtcg 660 tccaagggcg cggggcagat cgaagagttc ctgatgcagt tcaacggcga aggcatccag 720 cacgtggcgt tcctcaccga cgacctggtc aagacctggg acgcgttgaa gaaaatcggc 780 atgcgcttca tgaccgcgcc gccagacact tattacgaaa tgctcgaagg ccgcctgcct 840 gaccacggcg agccggtgga tcaactgcag gcacgcggta tcctgctgga cggatcttcc 900 gtggaaggcg acaaacgcct gctgctgcag atcttctcgg aaaccctgat gggcccggtg 960 ttcttcgaat tcatccagcg caagggcgac gatgggtttg gcgagggcaa cttcaaggcg 1020 ctgttcgagt ccatcgaacg tgaccaggtg cgtcgtggtg tattgaccgc cgattaa 1077 <210> 46 <211> 358 <212> PRT <213> Pseudomonas fluorescens <400> 46 Met Ala Asp Leu Tyr Glu Asn Pro Met Gly Leu Met Gly Phe Glu Phe 1 5 10 15 Ile Glu Phe Ala Ser Pro Thr Pro Gly Thr Leu Glu Pro Ile Phe Glu 20 25 30 Ile Met Gly Phe Thr Lys Val Ala Thr His Arg Ser Lys Asn Val His 35 40 45 Leu Tyr Arg Gln Gly Glu Ile Asn Leu Ile Leu Asn Asn Glu Pro Asn 50 55 60 Ser Ile Ala Ser Tyr Phe Ala Ala Glu His Gly Pro Ser Val Cys Gly 65 70 75 80 Met Ala Phe Arg Val Lys Asp Ser Gln Lys Ala Tyr Asn Arg Ala Leu 85 90 95 Glu Leu Gly Ala Gln Pro Ile His Ile Asp Thr Gly Pro Met Glu Leu 100 105 110 Asn Leu Pro Ala Ile Lys Gly Ile Gly Gly Ala Pro Leu Tyr Leu Ile 115 120 125 Asp Arg Phe Gly Glu Gly Ser Ser Ile Tyr Asp Ile Asp Phe Val Tyr 130 135 140 Leu Glu Gly Val Glu Arg Asn Pro Val Gly Ala Gly Leu Lys Val Ile 145 150 155 160 Asp His Leu Thr His Asn Val Tyr Arg Gly Arg Met Val Tyr Trp Ala 165 170 175 Asn Phe Tyr Glu Lys Leu Phe Asn Phe Arg Glu Ala Arg Tyr Phe Asp 180 185 190 Ile Lys Gly Glu Tyr Thr Gly Leu Thr Ser Lys Ala Met Ser Ala Pro 195 200 205 Asp Gly Met Ile Arg Ile Pro Leu Asn Glu Glu Ser Ser Lys Gly Ala 210 215 220 Gly Gln Ile Glu Glu Phe Leu Met Gln Phe Asn Gly Glu Gly Ile Gln 225 230 235 240 His Val Ala Phe Leu Thr Asp Asp Leu Val Lys Thr Trp Asp Ala Leu 245 250 255 Lys Lys Ile Gly Met Arg Phe Met Thr Ala Pro Pro Asp Thr Tyr Tyr 260 265 270 Glu Met Leu Glu Gly Arg Leu Pro Asp His Gly Glu Pro Val Asp Gln 275 280 285 Leu Gln Ala Arg Gly Ile Leu Leu Asp Gly Ser Ser Val Glu Gly Asp 290 295 300 Lys Arg Leu Leu Leu Gln Ile Phe Ser Glu Thr Leu Met Gly Pro Val 305 310 315 320 Phe Phe Glu Phe Ile Gln Arg Lys Gly Asp Asp Gly Phe Gly Glu Gly 325 330 335 Asn Phe Lys Ala Leu Phe Glu Ser Ile Glu Arg Asp Gln Val Arg Arg 340 345 350 Gly Val Leu Thr Ala Asp 355

Claims (11)

  1. (I) (a) 아베나(Avena), (b) 슈도모나스(Pseudomonas), (c) 시네코코코이데아에(Synechococcoideae), (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), (e) 로도코커스(Rhodococcus), (f) 피크로필라세아에(Picrophilaceae), (g) 코르디아(Kordia)로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 DNA 서열, 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) WO 2012/021785에 기술된 바와 같이 각각 돌연변이되는 돌연변이 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max) HPPD를 코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하므로써 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 작물의 영역에서 원하지 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도.
  2. 제1항에 있어서, 형질전환 작물에 함유된 적어도 하나의 키메릭 유전자가 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호, 25, 및 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 46으로 이루어진 군에서 선택된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것인 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도.
  3. (I) (a) 아베나(Avena), (b) 슈도모나스(Pseudomonas), (c) 시네코코코이데아에(Synechococcoideae), (d) 블레파리스미다에(Blepharismidae), (e) 로도코커스(Rhodococcus), (f) 피크로필라세아에(Picrophilaceae), (g) 코르디아(Kordia)로 이루어진 유기체군의 구성원으로부터 유도된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 DNA 서열 또는 (II) 앞서 정의된 유기체의 HPPD 코딩 유전자의 하나 이상의 돌연변이된 DNA 서열, 또는 (III) 또는 (III) WO 2012/021785에 기술된 바와 같이 각각 돌연변이되는 돌연변이 옥수수(Zea mays) 또는 대두(Glycine max) HPPD를 코딩하는 하나 이상의 DNA 서열을 포함하는 하나 이상의 키메릭 유전자(들)를 함유하므로써 HPPD 저해제 제초제에 대해 내성인 형질전환 작물의 영역에서 제1항에 따른 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염을, (a) 원하지 않는 식물, (b) 원하지 않는 식물의 종자, 및/또는 (c) 식물이 자라는 영역에 적용하는 것을 포함하는 원하지 않는 식물의 방제방법.
  4. 제3항에 있어서, 형질전환 작물에 함유된 적어도 하나의 키메릭 유전자가 서열번호 2, 서열번호 4. 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 25, 및 서열번호 27, 서열번호 29, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 43, 서열번호 46으로 이루어진 군에서 선택된 하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제(HPPD)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것인 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 형질전환 작물이 아라키스 (Arachis), 베타 (Beta), 브라시카 (Brassica), 쿠쿠미스 (Cucumis), 쿠쿠르비타 (Cucurbita), 헬리안투스 (Helianthus), 다우쿠스 (Daucus), 글리신(Glycine), 고시퓸(Gossypium), 이포모에아(Ipomoea), 락투카 (Lactuca), 리눔(Linum), 라이코페르시콘 (Lycopersicon), 니코티아나 (Nicotiana), 파세올루스 (Phaseolus), 피숨 (Pisum), 솔라눔 (Solanum), 및 비시아 (Vicia) 속으로 이루어진 쌍자엽 작물의 군, 또는 알륨 (Allium), 아나나스 (Ananas), 아스파라거스 (Asparagus), 아베나, 호르데움(Hordeum), 오리자(Oryza), 파니쿰(Panicum), 사카룸(Saccharum), 세케일(Secale), 소르검(Sorghum), 트리티케일(Triticale), 트리티쿰(Triticum), 제아(Zea) 속으로 이루어진 단자엽 작물의 군에 속하는 것인 방법.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염이 트리케톤 또는 피라졸리네이트 제초제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 HPPD 저해제 제초제의 혼합 제제 또는 탱크 믹스(tank mix), 및/또는 아세토락테이트 신타제, 아세틸-CoA 카복실라제, 셀룰로즈 신타제, 에놀피루빌시키메이트-3-포스페이트 신타제, 글루타민 신테타제, p-하이드록시페닐피루베이트 디옥시게나제, 파이토엔 데새투라제 (desaturase), 포토시스템 I, 포토시스템 II, 프로토포르피리노겐 옥시다제의 억제에 기초하거나 성장조절제로서 작용하는 추가의 공지된 활성 물질과 조합하여 적용되는 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염이 템보트리온, 메소트리온, 바이사이클로피론, 테푸릴트리온, 피라설포톨, 피라졸레이트, 디케토니트릴, 벤조페납, 또는 설코트리온으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 다른 HPPD 저해제 제초제와 조합하여 적용되는 것인 방법.
  8. 2-클로로-3-(메틸설파닐)-N-(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염(성분 (A))과, 이하의 서브그룹 B1 내지 B11에서 선택된 하나 이상, 바람직하게 하나의 성분(들) (B)를 포함하는 조성물:
    B1 - 다음을 포함하는 1,3-디케토 화합물:
    프로헥사디온, 프로헥사디온-칼슘, 트리넥사팍-에틸,
    알록시딤, 알록시딤-소듐, 부트록시딤, 클레토딤, 사이클록시딤, 케토스피라독스, 프로폭시딤, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤,
    메소트리온, 설코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 바이사이클로피론, 펜퀴노트리온, SL-261, 피녹사덴,
    B2 - 다음을 포함하는 (설폰)아미드:
    베플루부타미드, 브로모부타이드, 디메텐아미드, 디메텐아미드-P, 디펜아미드, 나프로파미드, 페톡사미드, N-[3-클로로-4-(1-메틸에틸)-페닐]-2-메틸펜탄아미드, 나프탈람, 프로피자미드,
    디플루페니칸, 에토벤자니드, 플루페나셋, 메페나셋, 메플루이디드, 펜타노클로르, 피콜리나펜, 프로파닐, N-페닐프탈람산,
    아세토클로르, 알라클로르, 아미도클로르, 부타클로르, 부테나클로르, 디메타클로르, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 프레틸라클로르, 프로파클로르, 프로피소클로르, (2-클로로-6'-에틸-N-이소프로폭시메틸아세토-o-톨루이디드), 테닐클로르,
    아술람, 카바릴, 카베타미드, 클로르프로팜, 데스메디팜, 펜메디팜, 프로팜,
    부틸레이트, 사이클로에이트, 디메피페레이트, EPTC, 에스프로카브, 메타설포카브, 몰리네이트, 오르벤카브, 페불레이트, 프로설포카브, 피리부티카브, 티오벤카브, 트리-알레이트, 베르놀레이트,
    아미도설푸론, 아짐설푸론, 벤설푸론, 벤설푸론-메틸, 클로리무론, 클로리무론-에틸, 클로르설푸론, 시노설푸론, 사이클로설파무론, 에타메트설푸론, 에타메트설푸론-메틸, 에톡시설푸론, 플라자설푸론, 플루세토설푸론, 플루피르설푸론-메틸-소듐, 포람설푸론, 할로설푸론-메틸, 이마조설푸론, 요오도설푸론, 요오도설푸론-메틸-소듐, 메소설푸론, 메소설푸론-메틸, 메타조설푸론, 메티오피르설푸론, 메트설푸론, 메트설푸론-메틸, 모노설푸론, 모노설푸론-에스테르, 니코설푸론, 오르토설파무론, 옥사설푸론, 프리미설푸론-메틸, 프로피리설푸론, 프로설푸론, 피라설푸론, 피라조설푸론-에틸, 림설푸론, 설포메투론, 설포메투론-메틸, 설포설푸론, 티펜설푸론, 티펜설푸론-메틸, 트리아설푸론, 트리베누론, 트리베누론-메틸, 트리플록시설푸론, 트리플록시설푸론 (소듐), 트리플루설푸론, 트리플루설푸론-메틸, 트리토설푸론, (벤조산, 2-[[[[[4-메톡시-6-(메틸티오)-2-피리미디닐]아미노]카보닐]아미노]설포닐]메틸 에스테르),
    플루카바존, 플루카바존-소듐, 이프펜카바존, 프로폭시카바존, 프로폭시카바존-소듐, 티엔카바존, 티엔카바존-메틸,
    클로란술람, 클로란술람-메틸, 디클로술람, 플로라술람, 플루메트술람, 메토술람, 페녹스술람, 피록스술람,
    3-클로로-N-[(4,6-디메톡시피리미딘-2-일)카바모일]-1-메틸-4-(5-메틸-5,6-디하이드로-1,4,2-디옥사진-3-일)-1H-피라졸-5-설폰아미드,
    B3 - 다음을 포함하는 아릴니트릴:
    브로목시닐, 브로목시닐-부티레이트, 브로목시닐-포타슘, 브로목시닐-헵타노에이트, 브로목시닐-옥타노에이트, 데토실-피라졸레이트(DTP), 디클로베닐, 이옥시닐, 이옥시닐-옥타노에이트, 이옥시닐-포타슘, 이옥시닐-소듐, 피라클로닐,
    B4 - 다음을 포함하는 아졸:
    벤조페납, 피라졸리네이트(피라졸레이트), 피라족시펜, 피록사설폰, 토프라메존, 피라설포톨, 톨피랄레이트, 3-(3-클로로-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸, 3-(3-요오도-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸, 1-에틸-3-(3-플루오로-5-{[1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일]옥시}페녹시)-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸,
    피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 페녹사설폰, 플루아졸레이트,
    이소우론, 이속사벤, 이속사플루톨,
    이마자메타벤즈, 이마자메타벤즈-메틸, 이마자픽, 이마자픽-암모늄, 이마자피르, 이마자피르-이소프로필-암모늄, 이마자퀸, 이마자퀸-암모늄, 이마제타피르, 이마제타피르-암모늄,
    아자페니딘, 메타졸, 옥사디아르길, 옥사디아존,
    아미카바존, 벤카바존, 카펜트라존, 카펜트라존-에틸, 설펜트라존,
    아미트롤, 파클로부트라졸, 유니코나졸, 유니코나졸-P, 카펜스트롤,
    펜트라자미드,
    B5 - 다음을 포함하는 기타 제초제:
    알리도클로르, 아미노사이클로피라클로르, 아미노사이클로피라클로르-포타슘, 아미노사이클로피라클로르-메틸, N-아세틸티아졸리딘-4-카복실산, 아크롤레인, 아미노피랄리드, 암모늄 펠라르고네이트, 암모늄 설파메이트, 아비글리신, 베나졸린, 베나졸린-에틸, 벤플루랄린, 벤푸레세이트, 벤타존, 벤조바이사이클론, 6-벤질아미노퓨린, 보랙스, 브라시놀리드, 브로모페녹심, 부트랄린, 카르본, 카테킨, 클로르페낙, 클로르페낙-소듐, 클로르펜프로프, 클로르플루레놀, 클로르플루레놀-메틸, 클로리다존, 클로르메쿠아트 클로라이드, 클로로아세트산, 클로르프탈림, 클로르탈-디메틸, 시니돈, 시니돈-에틸, 신메틸린, 클로펜셋, 클로마존, 클록시포낙, 시아나미드, 사이클라닐리드, 사이클로피리모레이트, 6-이소펜틸아미노-퓨린, 키네틴, 제아틴, 달라폰, 다미노지드, 다조멧, n-데칸올, 디펜조쿠아트 메틸설페이트, 2,6-디이소프로필나프탈렌, 디케굴락, 디케굴락-소듐, 디메티핀, 디메틸비산 (dimethylarsenic acid), 디니트라민, 디노터브, 디쿠아트 디브로마이드, 디티오피르, DNOC, 엔도탈, 엔도탈-디포타슘, 엔도탈-디소듐, 엔도탈-모노(N,N-디메틸알킬암모늄), 에타플루랄린, 에토푸메세이트, 에틸클로제이트, 황산제일철, 플람프로프, 플람프로프-M-이소프로필, 플람프로프-M-메틸, 플루클로랄린, 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루메트랄린, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루프로파네이트, 플루레놀, 플루레놀-부틸, 플루레놀-디메틸암모늄-메틸, 플루리돈, 플루로클로리돈, 플루르타몬, 플루티아셋, 플루티아셋-메틸, 지베렐린산, 할라욱시펜, 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염, 인다노판, 이소프로팔린, 이소프로티올란, 말레산 히드라지드, 메피쿠아트 클로라이드, 메탐, 메티오졸린, 메틸아르손산, 1-메틸사이클로프로펜, 메틸 이소티오시아네이트, 니트로페놀레이트 혼합물, 노난산(nonanoic acid), 노르플루라존, 올레산, 오리잘린, 옥사지클로메폰, 파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 펜타클로로페놀, 펜톡사존, 석유, 프로디아민, n-프로필 디하이드로자스모네이트, 피리다폴, 피리데이트, 퀴노클라민, 신토펜, 소듐 클로레이트, 황산, 타르 오일, TCA, TCA 소듐, 테크나젠, 티아조피르, 트리아콘타놀, 트리아파몬, 트리플루랄린 및 우레아 설페이트,
    B6 - 다음을 포함하는 (헤트)아릴카복실산:
    클로람벤, 디캄바, 디캄바염, 2,3,6-TBA,
    클로피랄리드, 플루록시피르, 플루록시피르-메틸, 이나벤피드, 피클로람, 트리클로피르, 퀸클로락, 퀸메락,
    인돌-3-일아세트산, 4-인돌-3-일부티르산,
    2-(1-나프틸)아세트아미드, 1-나프틸아세트산, 2-나프틸옥시아세트산,
    B7 - 다음을 포함하는 유기 인 화합물:
    아닐로포스, 벤술리드, 빌라나포스, 빌라나포스-소듐, 부티마포스, 클라시포스, 포사민, 글루포시네이트, 글루포시네이트 염, 글루포시네이트-암모늄, 글루포시네이트-소듐, 글루포시네이트-P, L-글루포시네이트-암모늄, L-글루포시네이트-소듐, 글리포세이트, 글리포세이트 염, 글리포세이트-이소프로필-암모늄, 글리포세이트-암모늄, 글리포세이트-디메틸암모늄, 글리포세이트-트리메슘 (=설포세이트), 글리포세이트-디암모늄, 글리포세이트-포타슘, 글리포세이트-소듐, 피페로포스, 에테폰 및 트리부포스,
    B8 - 다음을 포함하는 페닐 에테르:
    아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아클로니펜, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 포메사펜, 포메사펜-소듐, 할로사펜, 락토펜, 옥시플루오르펜,
    비페녹스, 에톡시펜-에틸,
    클로메프로프,
    클로프로프, 디클로르프로프, 디클로르프로프-P, 메코프로프, 메코프로프-소듐, 메코프로프-부토틸, 메코프로프-P, 메코프로프-P-부토틸, 메코프로프-P-디메틸암모늄, 메코프로프-P-2-에틸헥실, 메코프로프-P-포타슘,
    4-CPA, 2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올라민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤라민, MCPA, MCPA-부토틸, MCPA-디메틸암모늄, MCPA-2-에틸헥실, MCPA-이소프로필암모늄, MCPA-포타슘, MCPA-소듐, MCPA-티오에틸,
    2,4-DB, MCPB, MCPB-메틸, MCPB-에틸-소듐,
    클로디나폽-에틸, 클로디나폽-프로파길, 시할로폽, 시할로폽-부틸, 디클로폽, 디클로폽-메틸, 디클로폽-P, 디클로폽-P-메틸, 페녹사프로프, 페녹사프로프-P, 페녹사프로프-P-에틸, 플루아지폽, 플루아지폽-부틸, 플루아지폽-P, 플루아지폽-P-부틸, 할록시폽, 할록시폽-P, 메타미폽, 프로파퀴자폽, 퀴잘라폽, 퀴잘라폽-에틸, 퀴잘라폽-P, 퀴잘라폽-P-에틸, 퀴잘라폽-P-테푸릴,
    B9 - 다음을 포함하는 피리미딘:
    안시미돌, 플루르프리미돌, 피리미설판,
    비스피리박, 비스피리박-소듐, 피리벤족심, 피리미노박, 피리미노박-메틸, 피리밤벤즈, 피리밤벤즈-이소프로필, 피리밤벤즈-프로필,
    피리프탈리드, 피리티오박, 피리티오박-소듐,
    벤즈펜디존, 브로마실, 부타페나실, 레나실, 사플루페나실, 테르바실, 티아페나실,
    2-클로로-4-플루오로-5-[3-메틸-2,6-디옥소-4-(트리플루오로메틸)-3,6-디하이드로피리미딘-1(2H)-일]-N-[메틸(1-메틸에틸)-설파모일]벤즈아미드,
    에틸[(2-{2-클로로-5-[2,6-디옥소-4-(트리플루오로메틸)-3,6-디하이드로피리미딘-1(2H)-일]-4-플루오로페녹시}피리딘-2-일)옥시]아세테이트
    B10 - 다음을 포함하는 (티오)우레아
    쿠밀루론,
    클로르브로무론, 클로로톨루론, 클로록수론, 다이무론, 디플루펜조피르, 디플루펜조피르-소듐, 디메푸론, 디우론, 플루오메투론, 포르클로르페누론, 이소프로투론, 카르부틸레이트, 리누론, 메틸딤론, 메토브로무론, 메톡수론, 모노리누론, 네부론, 시두론, 터부카브, 티디아주론,
    메티우론,
    테부티우론,
    메타벤즈티아주론,
    B11 - 다음을 포함하는 트리아진:
    트리아지플람, 인다지플람,
    아트라진, 시아나진, 시프라진, 프로파진, 시마진, 테르부메톤, 테르부틸라진, 트리에타진,
    프로메톤,
    아메트린, 디메타메트린, 프로메트린, 시메트린, 테르부트린,
    에토진, 헥사지논, 메타미트론, 메트리부진,
    트리플루디목사진.
  9. 제8항에 있어서, 다음으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 완화제(성분 (C))를 추가로 포함하는 것인 조성물:
    베녹사코르 (C1), 클로퀸토셋-멕실 (C2), 시프로설파미드 (C3), 디클로르미드 (C4), 펜클로림 (C5), 펜클로라졸 (C6), 푸릴라졸 (C7), 이속사디펜-에틸 (C8), 메펜피르-디에틸 (C9), CAS 71526-07-3의 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (C10), CAS 52836-31-4의 2,2,5-트리메틸-3-(데클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (C11). CAS 129531-12-0의 2-메톡시-N-({4-[(메틸카바모일)아미노]페닐}설포닐)벤즈아미드 (C12).
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 하나 이상, 바람직하게 하나의 성분(들) (B)가 이하의 서브그룹 B1 내지 B11에서 선택되는 것인 조성물:
    클레토딤, 메소트리온, 설코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온 및 바이사이클로피론으로 이루어진 B1,
    아세토클로르, 디클로술람, 디플루페니칸, 플루메트술람, 포람설푸론, 니코설푸론, S-메톨라클로르, 티엔카바존-메틸, 디메텐아미드-P, 림설푸론, 알라클로르, 클로리무론-에틸, 플로라술람, 플루카바존-소듐, 플루페나셋, 요오도설푸론-메틸-소듐, 에톡시설푸론, 이프펜카바존, 메트설푸론-메틸, 프로폭시카바존-소듐 및 트리베누론-메틸로 이루어진 B2,
    브로목시닐 및 이속시닐로 이루어진 B3,
    아미카바존, 카펜트라존-에틸, 이마자피르, 이마제타피르, 이속사플루톨, 옥사디아길, 옥사디아존, 피라술포톨, 피록사술폰 및 토프라메존으로 이루어진 B4,
    파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 아미노피랄리드, 플루미옥사진, 플루르타몬, 할라욱시펜, 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염, 피리데이트, 벤타존, 시니돈-에틸, 클로마존 및 트리플루랄린으로 이루어진 B5,
    디캄바, 디캄바염 및 플루록시피르로 이루어진 B6,
    글루포시네이트, 글루포시네이트-암모늄, L-글루포시네이트-암모늄, 글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필-암모늄으로 이루어진 B7,
    2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올아민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤아민, 페녹사프로프-P-에틸, 락토펜, 플루아지포프-P-부틸, 아클로니펜 및 할록시포프-P로 이루어진 B8,
    사플루페나실로 이루어진 B9,
    디우론, 디플루펜조피르 및 플루오메투론으로 이루어진 B10, 및
    아트라진, 인다지플람, 테르부틸라진 및 메트리부진으로 이루어진 B11.
  11. 제7항 또는 제8항에 있어서, 하나 이상, 바람직하게 하나의 성분(들) (B)가 이하의 서브그룹 B1 내지 B11에서 선택되는 것인 조성물:
    클레토딤, 메소트리온, 바이사이클로피론 및 템보트리온으로 이루어진 B1,
    아세토클로르, 디클로술람, 디플루페니칸, 포람설푸론, 니코설푸론, S-메톨라클로르, 티엔카바존-메틸, 디메텐아미드-P, 림설푸론, 알라클로르, 클로리무론-에틸, 플로라술람, 플루카바존-소듐, 플루페나셋 및 요오도설푸론-메틸-소듐으로 이루어진 B2,
    브로목시닐로 이루어진 B3,
    카펜트라존-에틸, 이마자피르, 이마제타피르, 이속사플루톨, 옥사디아길, 옥사디아존 및 피록사술폰으로 이루어진 B4,
    파라쿠아트 디클로라이드, 펜디메탈린, 아미노피랄리드, 플루미옥사진, 플루르타몬, 할라욱시펜, 할라욱시펜-메틸, 할라욱시펜염 및 피리데이트로 이루어진 B5,
    디캄바 및 디캄바염으로 이루어진 B6,
    글루포시네이트-암모늄 및 글리포세이트로 이루어진 B7,
    2,4-D, 2,4-D-부토틸, 2,4-D-부틸, 2,4-D-콜린, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디올아민, 2,4-D-에틸, 2,4-D-2-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소-프로필-암모늄, 2,4-D-포타슘, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-트롤아민, 페녹사프로프-P-에틸, 락토펜 및 플루아지포프-P-부틸로 이루어진 B8,
    사플루페나실로 이루어진 B9,
    디우론 및 디플루펜조피르로 이루어진 B10, 및
    아트라진, 인다지플람, 테르부틸라진 및 메트리부진으로 이루어진 B11.
KR1020167014137A 2013-11-28 2014-11-25 Hppd 저해제 제초제에 대해서 내성인 형질전환 농작물 영역에서 원치 않는 식물을 방제하기 위한 2-클로로-3-(메틸설파닐)-n-(1-메틸-1h-테트라졸-5-일)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그의 염의 용도 KR20160090823A (ko)

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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA117816C2 (uk) * 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
AU2016307232B2 (en) * 2015-08-07 2021-04-29 Fmc Corporation New uses of 2-(2,4-dichlorophenyl)methyl-4,4-dimethyl-3-isoxazolidone as foliar herbicide
KR20180043838A (ko) * 2015-09-11 2018-04-30 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 Ｈｐｐｄ 변이체 및 사용 방법
CN105420172B (zh) * 2016-01-08 2018-12-14 南京农业大学 一种嗪草酮农药残留降解菌及其生产的菌剂和应用
SG11201807557XA (en) 2016-03-07 2018-10-30 Bayer Cropscience Ag Herbicidal compositions containing 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-n-(1-methyl-1h-tetrazole-5-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide
BR112019018056A2 (pt) * 2017-03-07 2020-08-11 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, métodos para conferir tolerância e para controlar ervas daninhas, produto de utilidade e uso da sequência de nucleotídeos
WO2018162329A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Hppd variants and methods of use
WO2018162330A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Hppd variants and methods of use
BR112019018059A2 (pt) 2017-03-07 2020-08-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, célula hospedeira, plantas, sementes transgênicas, polipeptídeo recombinante, método para produzir um polipeptídeo, método de controle de ervas daninhas, uso do ácido nucleico e produto de utilidade
CA3055389A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
CN107410320A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含嘧啶肟草醚的除草组合物
CN107410345A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含氯吡嘧磺隆的除草组合物
CN107410344A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含五氟磺草胺和嘧苯胺磺隆的除草组合物
CN107410313A (zh) * 2017-06-09 2017-12-01 北京科发伟业农药技术中心 一种含氰氟草酯的除草组合物
CN107279170A (zh) * 2017-06-23 2017-10-24 北京科发伟业农药技术中心 氟噻草胺、氟唑磺隆和氨唑草酮的除草组合物
CN107372565A (zh) * 2017-08-04 2017-11-24 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和唑啉草酯的除草组合物
CN107455382A (zh) * 2017-08-11 2017-12-12 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和pyroxasulfone的除草组合物
CN107455381A (zh) * 2017-08-11 2017-12-12 北京科发伟业农药技术中心 一种含噻酮磺隆和trifludimoxazin的除草组合物
KR102668688B1 (ko) 2018-07-23 2024-05-24 삼성디스플레이 주식회사 유기 발광 소자
WO2020166477A1 (ja) * 2019-02-13 2020-08-20 住友化学株式会社 除草剤組成物および雑草防除方法
KR102661468B1 (ko) 2019-02-15 2024-04-30 삼성디스플레이 주식회사 유기 발광 소자 및 이를 포함한 전자 장치
WO2020172305A1 (en) 2019-02-19 2020-08-27 Gowan Company, L.L.C. Stable liquid compositions and methods of using the same
CN110786325B (zh) * 2019-05-18 2021-06-22 陆琳 一种缓解氟磺胺草醚对部分落叶乔木药害的方法
KR20210059153A (ko) 2019-11-14 2021-05-25 삼성디스플레이 주식회사 유기 발광 소자 및 이를 포함한 장치
CN114431249A (zh) * 2022-02-15 2022-05-06 华丰作物科技(黑龙江)有限公司 一种有机无机复合型玉米田用除草剂及其制备方法
WO2023173103A1 (en) * 2022-03-11 2023-09-14 United Industries Corporation Composition and method for weed and grass control
WO2024068473A1 (de) * 2022-09-27 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft Herbizid/safener-kombinationen basierend auf safenern aus der klasse der substituierten [(1,5-diphenyl1h-1,2,4-triazol-3-yl)oxy]essigsäuren sowie deren salze

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4885025A (en) * 1986-12-23 1989-12-05 Fmc Corporation Herbicidal tetrazolinones and use thereof
AU2002214158B2 (en) 2000-12-07 2007-01-18 Syngenta Limited Plant derived hydroxy phenyl pyruvate dioxygenases (HPPD) resistant against triketone herbicides and transgenic plants containing these dioxygenases
CA2724670C (en) 2008-04-14 2017-01-31 Bayer Bioscience N.V. New mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, dna sequence and isolation of plants which are tolerant to hppd inhibitor herbicides
WO2010085705A2 (en) * 2009-01-22 2010-07-29 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
BR112012015690A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
AU2010334808B2 (en) 2009-12-23 2015-07-09 Bayer Intellectual Property Gmbh Plants tolerant to HPPD inhibitor herbicides
CN102869769A (zh) 2009-12-23 2013-01-09 拜尔知识产权有限公司 耐受hppd抑制剂型除草剂的植物
ES2659086T3 (es) 2009-12-23 2018-03-13 Bayer Intellectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de HPPD
BR112012015692A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicida inibidor de hppds.
WO2012021785A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods comprising sequences having hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (hppd) activity
UA109150C2 (xx) * 2010-09-01 2015-07-27 Аміди n-(тетразол-5-іл)- або n-(триазол-5-іл)арилкарбонової кислоти та їх застосування як гербіцидів
UA111193C2 (uk) * 2011-03-25 2016-04-11 Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх Застосування n-(тетразол-4-іл)- або n-(триазол-3-іл)арилкарбоксамідів або їх солей для контролю небажаних рослин на площах трансгенних культур, що толерантні до гербіцидів, що є інгібіторами hppd
UA113545C2 (xx) 2012-05-03 2017-02-10 Солі n-(тетразол-5-іл)арилкарбоксаміду і їх застосування як гербіцидів
EP2921052A1 (de) 2012-05-24 2015-09-23 Bayer CropScience AG Herbizide zusammensetzungen enthaltend n-(tetrazol-5-yl)- und n-(triazol-5-yl)arylcarbonsäureamide
AR092564A1 (es) 2012-09-14 2015-04-22 Bayer Cropscience Lp Variantes de la enzima 4-hidroxifenil piruvato deoxigenasa (hppd) y metodos de uso para conferir tolerancia a herbicidas en plantas
UA117816C2 (uk) 2012-11-06 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Гербіцидна комбінація для толерантних соєвих культур
MX360999B (es) * 2014-03-11 2018-11-23 Bayer Cropscience Ag Variantes de hppd y métodos de uso.
BR112016020889B1 (pt) * 2014-03-11 2022-10-04 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Molécula de ácido nucleico recombinante, célula hospedeira bacteriana, proteína hppd recombinante, uso do ácido nucleico recombinante e produto de base

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