JP2016522211A - Ｐｃｓｋ９機能獲得型変異に関連する常染色体優性高コレステロール血症を処置する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を処置する方法を提供する。特定の実施態様によれば、ＡＤＨは、ＰＣＳＫ９をコードする遺伝子の機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）によって、またはそれに関連して生じる。したがって、本発明は、ＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方対立遺伝子においてＧＯＦｍを担持する患者を選択することと、その患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与することとを含む方法を含む。特定の実施態様において、ＰＣＳＫ９阻害薬は、本明細書においてｍＡｂ３１６Ｐと呼ばれる関される例示的な抗体のような抗ＰＣＳＫ９抗体である。

Description

本発明は、高レベルの脂質およびリポタンパク質に関連する疾患および障害の治療的処置の分野に関する。より詳しくは、本発明は、ＰＣＳＫ９遺伝子における１つまたはそれ以上の機能獲得型変異を有する患者における常染色体優性高コレステロール血症を処置するためのＰＣＳＫ９阻害薬の投与に関する。

常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）は、遺伝性の血清ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）高値および早期発症型の心血管疾患を特徴とする。ＡＤＨの原因としては、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）およびそのリガンドアポリポタンパク質Ｂ（ａｐｏＢ）の変異、ならびに（患者の約１％では）肝細胞ＬＤＬＲの強力なモジュレーター、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）の機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）が含まれる。

ＰＣＳＫ９は、分泌性サブチラーゼファミリーのプロテイナーゼＫサブファミリーに属するプロタンパク質転換酵素である。血清総コレステロール、ＬＤＬコレステロールおよび血清トリグリセリドを低下させるためのＰＣＳＫ９阻害薬（抗ＰＣＳＫ９抗体）の使用は、特許文献１、特許文献２および特許文献３に記載されている。

米国特許第８，０６２，６４０号 米国特許第８，３５７，３７１号 米国特許出願公開第２０１３／００６４８３４号

本発明は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）、例えば、ＰＣＳＫ９機能獲得型変異によって、またはそれに関連して生じたＡＤＨを処置する方法を提供する。本発明の方法は、ＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方の対立遺伝子中に機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）を担持するＡＤＨの患者を選択することと、その患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与することとを含む。

本発明の方法に従って投与されうるＰＣＳＫ９阻害薬には、例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合性フラグメントが含まれる。本発明の方法の実施に用いてもよい具体例となる抗ＰＣＳＫ９抗体には、米国特許第８,３５７,３７１号に記載されたような、かつ／または本明細書に開示されたような任意の抗体または抗原結合性フラグメントが含まれる。

ＰＣＳＫ９阻害薬は、対象に皮下または静脈内投与してもよい。さらにまた、ＰＣＳＫ９阻害薬は、治療的介入時に治療的スタチンレジメン中の患者に投与してもよい。

本発明の他の実施態様は、以下の詳述の検討から明らかになるであろう。

解析した異なる国からのさまざまなＰＣＳＫ９変異を有する個体の数（ｎ）およびそれぞれ対応する国からの血統の数（Ｐ）を示す。「Ｍｉｎ」は、血統の最小数を示す（いくつかの個体は、示された血統を有しなかった）。 ＰＣＳＫ９における家族性機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）を有する患者の臨床データの概要を提供する。 ＬＤＬＲ変異なしでＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者についてのベースラインＬＤＬ−Ｃの分布を示す。ｐ値は、特定の変異に関するＬＤＬ−Ｃ平均値が、遺伝的変異体の集団よりも有意により高い（上向き矢印）またはより低い（下向き矢印）かどうかのことをいう。 ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍ（ＬＤＬＲ変異なし、Ｎ＝１３４）；ＦＨ（ＬＤＬＲ変異、Ｎ＝２１２６［オランダの登録機関からの年齢および性別に関して適合した対象］）；およびＦＤＢ（ＡｐｏＢ変異、Ｎ＝４７０［オランダの登録機関からの年齢および性別に関して適合した対象］）を有する対象に関する総コレステロール平均値、ＬＤＬ−Ｃ値、ＨＤＬＣ値およびトリグリセリド値を示す。（†）は、Ｐ＜０．０００１対ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを示す；（‡）は、Ｐ＜０．００１対ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを示す。 投薬の前および後に報告された脂質プロファイルに関して現在の脂質低下療法（ＬＬＴ）に対するＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ反応を示す。（＊）Ｐ＜０．０００１を示す；（†）Ｐ＜０．０００２を示す。ＬＬＴｓは、スタチン（アトロバスタチン１０〜８０ｍｇ、セリバスタチン０．３ｍｇ、フルバスタチン３０ｍｇ、ピタバスタチン１〜４ｍｇ、プラバスタチン１０〜２０ｍｇ、ロスバスタチン５〜４０ｍｇ、シンバスタチン２０〜８０ｍｇ）、エゼチミブ１０ｍｇ、またはフェノフィブラート１００〜２５０ｍｇであった。 ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ、ＬＤＬＲ変異なし、ベースラインおよび処置中のＬＤＬ−Ｃ（Ｎ＝６３）の患者について、ＬＤＬ−Ｃ目標の達成に関して、現在の脂質低下療法（ＬＬＴ）に対するＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ反応を示す。ＬＤＬ−Ｃ目標は、ＮＣＥＰ−ＡＴＰ ＩＩＩガイドライン（Grundy et al., Circulation 2004, 110:227-239）に基づく。 実施例３に記載された臨床試験の概略図である。Ａ群の患者は、−１４、５７、８５および９９日目にプラセボ（ＰＢＯ）、そして１、１５、２９、４３および７１日目にｍＡｂ３１６Ｐ（ｍＡｂ）を受けた。Ｂ群の患者は、−１４、１、７１および９９日目にプラセボ（ＰＢＯ）、そして１５、２９、４３、５７および８５日目にｍＡｂ３１６Ｐ（ｍＡｂ）を受けた。両群の単純盲検プラセボ導入期は、−１４日目から１日目までであった；両群の二重盲検処置期間は、１日目から９９日目までであった。フォローアップ期は、９９日目から１５５日目まであった。 実施例３に記載された臨床試験で、全１３名の患者について８週目でのＬＤＬ−Ｃ、ＡｐｏＢ、ＴＧ、ＨＤＬＣ、ＡｐｏＡ１およびＬｐ（ａ）におけるベースラインからのパーセント変化を示す。 ｘ軸に沿って灰色および白色矢印で示すように、処置の後、時間の経過に伴って、Ａ群およびＢ群患者において測定されたＬＤＬ−Ｃ（ｍｇ／ｄＬ）の変化を示す。 ｘ軸に沿って灰色および白色矢印で示すように、処置の後、時間の経過に伴う、Ａ群およびＢ群患者における遊離ＰＣＳＫ９（％）のベースラインからの変化を示す。 ｘ軸に沿った灰色および白色矢印で示すように、処置の後、時間の経過に伴う、さまざまなＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異（Ｄ３６４Ｙ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７ＲおよびＲ２１８Ｓ）を有する患者におけるＬＤＬ−Ｃ（％）のベースラインからの変化を示す。 ｘ軸に沿った灰色および白色矢印で示すように、処置の後、時間の経過に伴う、さまざまなＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異（Ｄ３６４Ｙ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７ＲおよびＲ２１８Ｓ）を有する患者における遊離ＰＣＳＫ９（％）のベースラインからの変化を示す。

詳細な説明
本発明を記載する前に、本発明は記載された特定の方法および実験条件に限定されず、このような方法および条件は変化してもよいことを理解すべきである。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書に用いる専門用語は、特定の実施態様のみを記載するためにあり、限定を意図するものではないことを理解すべきである。

特に明記しない限り、本明細書に用いられるすべての技術および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に用いるとき、「約」という用語は、特定の列挙された数値に関して用いるとき、その値が、列挙された値から１％を超えないだけ変化してもよいことを意味する。例えば、本明細書に用いるとき、「約１００」という表現には、９９および１０１ならびにそれらの間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、など）が含まれる。

本発明の実施の際、本明細書に記載されたものと類似または同等の任意の方法および物質を用いることができるが、ここでは、好ましい方法および物質を記載する。本明細書に記載されたすべての刊行物は、それらの全体が記載されたものとして、参照により本明細書に組み込まれる。

常染色体優性高コレステロール血症を処置する方法
本発明は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を処置する方法を提供する。特定の実施態様において、本発明は、ＰＣＳＫ９における１つまたはそれ以上の機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）によって生じた、またはそれに関連するＡＤＨを処置する方法を提供する。本明細書に用いるとき、「ＰＣＳＫ９のＧＯＦｍ」という表現は、ＬＤＬ受容体レベルを低下させるＰＣＳＫ９の能力を増強するか、またはヒト患者において高コレステロール血症とその他の点で関連する、もしくは相関関係があるアミノ酸変化を生じる、ＰＣＳＫ９タンパク質をコードする一方もしくは両方の対立遺伝子におけるなんらかの変異を意味する。ＰＣＳＫ９の例示的なＧＯＦ変異としては、Ｖ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬおよびＲ４９６Ｗが含まれる。

本発明の方法は、ＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方の対立遺伝子中にＧＯＦｍを担持する患者を選択することと、その患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与することとを含む。ＧＯＦｍは、任意のＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異であることができる。特定の実施態様によれば、ＧＯＦｍは、Ｖ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬおよびＲ４９６Ｗからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むＰＣＳＫ９変異体タンパク質をコードする。患者がＰＣＳＫ９ＧＯＦｍを担持するかどうかを決定する方法は、当分野で知られている。例えば、本発明に関して、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍをコードする対立遺伝子の１つまたはそれ以上のコピーを担持する患者を確認するために、ＰＣＳＫ９遺伝子のＤＮＡ配列解析を用いることができる。ＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異を確認するためのプロテオミクスベースのアプローチも、また本発明の方法の範囲内に含まれる。

特定の実施態様では、高コレステロール血症に関する１つまたはそれ以上のさらなる特性または危険因子を示すことに基づいて患者をさらに選択してもよい。
例えば、本発明は、約７０ｍｇ／ｄＬを超えるか、またはそれに等しい血漿ＬＤＬ−Ｃ値を有することに基づいて、処置のために（すなわち、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与する前に）ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを担持する患者をさらに選択する方法を含む。別の実施態様では、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与前に、約１８．０ｋｇ／ｍ２を超えるボディマス指数（ＢＭＩ）を有することに基づいてＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを担持する患者をさらに選択する。

本発明によれば、患者は、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与時に、または、その前にバックグラウンド脂質低下療法を受けていてもよい。バックグラウンド脂質低下療法の例には、スタチン［例えば、セリバスタチン、アトロバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、など］、エゼチミブ、フィブラート、ナイアシン、オメガ−３脂肪酸および胆汁酸樹脂が含まれる。

本発明の方法で処置されるべき患者は、年齢（例えば、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５または８０歳よりも高齢）、人種、出身国、性別（男性または女性）、運動習慣（例えば、定期的に運動する人、運動しない人）、他の既存の医学的状態（例えば、ＩＩ型糖尿病、高血圧、など）、および現在の投薬状態（例えば、現在摂取しているスタチン［例えば、セリバスタチン、アトロバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、など］、ベータ遮断薬、ナイアシン、など）からなる群から選択される１つまたはそれ以上の因子に基づいて選択してもよい。本発明の方法は、従来のスタチン療法に不耐性、非反応性、または反応不十分である患者のＡＤＨを処置するために用いることもできる。潜在的患者は、本発明の方法で処置する前に、前述の選択因子（例えば、アンケート、診断評価、などによって）の１つまたはそれ以上に基づいて選択／スクリーニングすることができる。

本発明の方法は、ＬＤＬ−Ｃ、ＡｐｏＢ１００、ｎｏｎ−ＨＤＬＣ、総コレステロール、ＶＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）および残りのコレステロールからなる群から選択される１つまたはそれ以上の脂質成分の血清レベルの低下を生じる。例えば、本発明の特定の実施態様によれば、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する対象に、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与すると、血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）におけるベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上の平均パーセント低下；ＡｐｏＢ１００におけるベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上の平均パーセント低下；ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃにおけるベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上の平均パーセント低下；総コレステロールにおけるベースラインから少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、またはそれ以上の平均パーセント低下；ＶＬＤＬ−Ｃにおけるベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、またはそれ以上の平均パーセント低下；トリグリセリドにおけるベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、またはそれ以上の平均パーセント低下；および／またはＬｐ（ａ）におけるベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、またはそれ以上の平均パーセント低下を生じる。

ＰＣＳＫ９阻害薬
本発明の方法は、患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む治療組成物を投与することを含む。本明細書に用いるとき、「ＰＣＳＫ９阻害薬」は、ヒトＰＣＳＫ９に結合するか、またはそれと相互作用し、そしてin vitroまたはin vivoでＰＣＳＫ９の正常な生物学的機能を阻害する任意の物質である。ＰＣＳＫ９阻害薬のカテゴリーの非限定的な例としては、小分子ＰＣＳＫ９アンタゴニスト、ペプチドベースのＰＣＳＫ９アンタゴニスト（例えば、「ペプチボディ」分子）、およびヒトＰＣＳＫ９を特異的に結合する抗体または抗体の抗原結合性フラグメントが含まれる。

「ヒトプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシンタイプ９」または「ヒトＰＣＳＫ９」または「ｈＰＣＳＫ９」という用語は、本明細書に用いるとき、配列番号：７５４で示される核酸配列および配列番号：７５５のアミノ酸配列を有するＰＣＳＫ９、またはその生物学的に活性なフラグメントのことをいう。

「抗体」という用語は、本明細書に用いるとき、４本のポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互に結合された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）のことをいうものとする。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶ_Hと略す）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、Ｃ_H１、Ｃ_H２およびＣ_H３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶ_Lと略す）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（Ｃ_L１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称するより保存性の高い領域にはさまれた相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と称する超可変性の領域にさらに細分することができる。各Ｖ_HおよびＶ_Lは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成されており、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置されている。本発明の異なる実施態様において、抗ＰＣＳＫ９抗体（または、その抗原結合性部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよいし、または自然にもしくは人工的に改変されてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれ以上のＣＤＲｓの比較解析に基づいて確定してもよい。

また、「抗体」という用語は、本明細書に用いるとき、完全抗体分子の抗原結合性フラグメントも含む。抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性フラグメント」、および同様の用語は、本明細書に用いるとき、抗原を特異的に結合して複合体を形成する、天然の、酵素によって入手可能な、合成の、または遺伝子組換えのポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合性フラグメントは、例えば、完全抗体分子からタンパク質分解、または抗体の可変ドメインおよび場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術のような任意の適した標準技術を用いて誘導してもよい。このようなＤＮＡは知られており、かつ／または、例えば、商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを適した配置に配列するため、またはコドンを導入する、システイン残基を生成する、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失させるなどのために、ＤＮＡを、化学的に、または分子生物学的手法を用いることにより配列決定および操作してもよい。

抗原結合性フラグメントの非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小限の認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドのような単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または限定されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが含まれる。他の改変分子、例えばドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特性抗体、ミニ抗体、ナノ抗体（例えば一価ナノ抗体、二価ナノ抗体、など）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰｓ）、およびサメ由来可変ＩｇＮＡＲドメインも、また本明細書に用いる「抗原結合性フラグメント」という表現に包含される。

抗体の抗原結合性フラグメントは、典型的に少なくとも１つの可変ドメインを含むことになる。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であってもよく、そして一般に１つまたはそれ以上のフレームワーク配列を有するフレームに隣接するか、またはその中にある少なくとも１つのＣＤＲを含む。Ｖ_Lドメインと関連するＶ_Hドメインを有する抗原結合性フラグメントでは、Ｖ_HおよびＶ_Lドメインは、任意の適した配置で互いに相対的に位置していてもよい。例えば、可変領域は、二量体であってもよく、そしてＶ_H−Ｖ_H、Ｖ_H−Ｖ_LまたはＶ_L−Ｖ_L二量体を含有してもよい。あるいは、抗体の抗原結合性フラグメントは、単量体Ｖ_HまたはＶ_Lドメインを含有してもよい。

特定の実施態様において、抗体の抗原結合性フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合的に連結された少なくとも１つの可変ドメインを含有してもよい。本発明の抗体の抗原結合性フラグメント内に見いだされうる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な配置としては、（ｉ）Ｖ_H−Ｃ_H１；（ｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_H２；（ｉｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_H３；（ｉｖ）Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｖ）Ｖ_H−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉ）Ｖ_H−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｖｉｉ）Ｖ_H−Ｃ_L；（ｖｉｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H１；（ｉｘ）Ｖ_L−Ｃ_H２；（ｘ）Ｖ_L−Ｃ_H３；（ｘｉ）Ｖ_L−Ｃ_H１−Ｃ_H２；（ｘｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H１−Ｃ_H２−Ｃ_H３；（ｘｉｉｉ）Ｖ_L−Ｃ_H２−Ｃ_H３；および（ｘｉｖ）Ｖ_L−Ｃ_Lが含まれる。上に記載された例示的な配置のいずれかを含む可変ドメインおよび定常ドメインの任意の配置において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接結合してもよく、または完全なもしくは部分的なヒンジもしくはリンカー領域によって結合してもよい。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子中の隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間に柔軟性または半柔軟性の結合を生じる少なくとも２つの（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれより多い）アミノ酸からなってもよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合性フラグメントは、互いに、かつ／または１つもしくはそれ以上の単量体Ｖ_HもしくはＶ_Lドメインと非共有結合で（例えば、ジスルフィド結合によって）上記の可変および定常ドメイン配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または、他の多量体）を含んでもよい。

完全抗体分子を用いるように、抗原結合性フラグメントは、単一特異性または多重特異性でもよい（例えば、二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合性フラグメントは、典型的に少なくとも２つの異なる可変ドメインを含むことになり、その際、それぞれの可変ドメインは、別々の抗原に、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することが可能である。本明細書に開示された例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、本発明の抗体の抗原結合性フラグメントに関して使用するにあたって当分野で入手可能な常用技術を用いて適合させてもよい。

抗体の定常領域は、補体を固定し、そして細胞依存性細胞傷害を仲介する抗体の能力において重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、抗体が細胞傷害を仲介することが望ましいかどうかに基づいて選択してもよい。

「ヒト抗体」という用語は、本明細書に用いるとき、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から誘導された可変領域および定常領域を有する抗体包含するものとする。それにもかかわらず、本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲおよび特にＣＤＲ３中でヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、in vitroでのランダムまたは部位特異的変異誘発によって、またはin vivoでの体細胞変異によって導入された変異）を含んでもよい。しかし、「ヒト抗体」という用語は、本明細書に用いるとき、マウスのような別の哺乳動物種の生殖系列から誘導されたＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上に移植されている抗体を含むものではない。

「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書に用いるとき、組換え手段によって調製、発現、生成または単離されたすべてのヒト抗体、例えば、宿主細胞に導入された組換え発現ベクターを用いて発現された抗体（さらに下に記載する）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（さらに下に記載する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295参照）またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他のいずれかの手段によって調製、発現、生成もしくは単離された抗体を包含するものとする。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から誘導された可変領域および定常領域を有する。しかし、特定の実施態様では、このような組換えヒト抗体をin vitro変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックな動物を用いるときは、in vivo体細胞性の変異誘発）にかけ、そのため、組換え抗体のＶ_HおよびＶ_L領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列から誘導され、それらと関連があるが、in vivoでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい配列である。

ヒト抗体は、ヒンジ不均一性に関連する２つの形態で存在することができる。１つの形態では、免疫グロブリン分子は、二量体が、鎖間の重鎖ジスルフィド結合によって一体となって保持されている、約１５０〜１６０ｋＤａの安定な４本の鎖構築物を含む。第２の形態では、二量体は、鎖間のジスルフィド結合を介して結合されておらず、そして約７５〜８０ｋＤａの分子が、共有結合された軽鎖および重鎖（半抗体）で構成され、形成されている。これらの形態は、アフィニティ精製の後でさえ、分離するのが極めて困難である。

さまざまな無傷のＩｇＧアイソタイプの第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的な違いによるが、それに限定されるわけではない。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域の単一アミノ酸置換は、第２の形態（Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105）の出現を、ヒトＩｇＧ１ヒンジを用いて典型的に観察されるレベルに有意に低減することができる。本発明は、例えば、製造において、所望の抗体形態の収率を改善するために望ましいといえる、ヒンジ、Ｃ_H２またはＣ_H３領域中の１つまたはそれ以上の変異を有する抗体を包含する。

「単離抗体」は、本明細書に用いるとき、確認されており、かつその天然環境の少なくとも１つの成分から分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から、または抗体が自然に存在する、もしくは自然に産生される組織もしくは細胞から分離または除去された抗体は、本発明の目的の「単離抗体」である。また、単離抗体には、組換え細胞内で原位置の抗体も含まれる。単離抗体は、少なくとも１つの精製または単離ステップにかけられた抗体である。特定の実施態様によれば、単離抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。

「特異的に結合する」または同様の用語は、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成する抗体またはその抗原結合性フラグメントを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当分野でよく知られており、例えば、平衡透折、表面プラスモン共鳴などが含まれる。例えば、ＰＣＳＫ９を「特異的に結合する」抗体は、本発明に関して用いるとき、表面プラスモン共鳴アッセイで測定して、約１０００ｎＭ未満、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＫＤでＰＣＳＫ９またはその部分を結合する抗体を含む。しかし、ヒトＰＣＳＫ９を特異的に結合する単離抗体は、他の抗原、例えば他（非ヒト）種からのＰＣＳＫ９分子と交差反応性を有する。

本発明の方法に有用な抗ＰＣＳＫ９抗体は、抗体が誘導された対応する生殖系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域中に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含んでもよい。このような変異は、本明細書に開示されたアミノ酸配列を、例えば、公開された抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示されたアミノ酸配列のいずれかから誘導される、抗体およびその抗原結合性フラグメントの使用を含む方法であって、１つまたはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸が、抗体が誘導された生殖系列配列の対応する残基、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異する（このような配列変化は、本明細書では、まとめて「生殖系列変異」と呼ぶ）方法を含む。当業者は、本明細書に開示された重鎖および軽鎖可変領域配列により出発して、１つまたはそれ以上の個々の生殖系列変異またはそれらの組合せを含む多くの抗体および抗原結合性フラグメントを容易に産生することができる。特定の実施態様において、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のすべては、抗体が誘導された最初の生殖系列配列に見いだされる残基に復帰変異される。別の実施態様では、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８つのアミノ酸内もしくはＦＲ４の最後の８つのアミノ酸内に見られる変異残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に見られる変異残基のみが最初の生殖系列配列に復帰変異される。別の実施態様では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つまたはそれ以上が、異なる生殖系列配列の対応する残基（すなわち、抗体が最初に誘導された生殖系列配列と異なる生殖系列配列）に変異される。さらにまた、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つまたはそれ以上の生殖系列変異の任意の組合せを含有してもよく、例えば、ここでは、特定の個々の残基が特定の生殖系列配列の対応する残基に変異されるが、最初の生殖系列配列と異なる特定の他の残基は、維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異される。一旦、得られたら、１つまたはそれ以上の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合性フラグメントは、１つまたはそれ以上の所望の性質、例えば、改善された結合特異性、増加された結合親和性、（場合によっては）改善または増強されたアンタゴニストまたはアゴニストの生物学的性質、低減された免疫原性、などに関して容易に試験することができる。この一般的なやり方で得られる抗体および抗原結合性フラグメントの使用は、本発明内に包含される。

また、本発明は、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する、本明細書に開示された、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む方法を含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書に開示されたＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して１０またはそれ未満、８またはそれ未満、６またはそれ未満、４またはそれ未満、などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む。

「表面プラスモン共鳴」という用語は、本明細書に用いるとき、例えばビアコア（商標）（BIAcore^TM）システム（ＧＥヘルスケア（GE Healthcare）のビアコアライフサイエンシズ（Biacore Life Sciences）事業部、ニュージャージー州、ピスカタウェイ）を用いてバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変性の検出によってリアルタイム相互作用の分析を可能にする光学的現象のことをいう。

「Ｋ_D」という用語は、本明細書に用いるとき、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数のことをいうものとする。

「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られている抗体分子の可変領域中の特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基のことをいう。１つの抗原は、複数のエピトープを有してもよい。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合してもよく、そして異なる生物学的効果を有してもよい。エピトープは立体構造的または線状であってもよい。立体構造エピトープは、線状ポリペプチド鎖の異なる部分から空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。線状エピトープは、ポリペプチド鎖の隣接するアミノ酸残基によって産生されたものである。特定の状況において、エピトープは、抗原上に糖類、ホスホリル基またはスルホニル基の部分を含んでもよい。

特定の実施態様によれば、本発明の方法で用いる抗ＰＣＳＫ９抗体は、ｐＨ依存性結合特性を有する抗体である。本明細書に用いるとき、「ｐＨ依存性結合」という表現は、抗体またはその抗原結合性フラグメントが中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＣＳＫ９に対する低下した結合を示すことを意味する（本開示の目的では、両方の表現を同じ意味で用いてもよい）。例えば、「ｐＨ依存性結合特性を有する」抗体は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＰＣＳＫ９を結合する抗体およびその抗原結合性フラグメントを含む。特定の実施態様において、本発明の抗体および抗原結合性フラグメントは、酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、少なくとも３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００倍、またはそれ以上のより高い親和性でＰＣＳＫ９を結合する。

本発明のこの態様によれば、ｐＨ依存性結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、親抗ＰＣＳＫ９抗体と比較して１つまたはそれ以上のアミノ酸変化を有してもよい。例えば、ｐＨ依存性結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、例えば、親抗ＰＣＳＫ９抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲ中に１つまたはそれ以上のヒスチジン置換または挿入を含有してもよい。したがって、本発明の特定の実施態様によれば、ヒスチジン残基を有する親抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲの１つまたはそれ以上のアミノ酸の置換を除いて、親抗ＰＣＳＫ９抗体のＣＤＲアミノ酸配列と同一である、ＣＤＲアミノ酸配列（例えば、重鎖および軽鎖ＣＤＲ）を含む抗ＰＣＳＫ９抗体を投与することを含む方法が提供される。ｐＨ依存性結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体は、親抗体の単一ＣＤＲ内、または親抗ＰＣＳＫ９抗体の複数の（例えば、２、３、４、５または６）ＣＤＲを通して分布する、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれ以上のヒスチジン置換を有してもよい。例えば、本発明は、親の抗ＰＣＳＫ９抗体の、ＨＣＤＲ１中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ２中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ３中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ１中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ２中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換、および／またはＬＣＤＲ３中の１つまたはそれ以上のヒスチジン置換を含むｐＨ依存性結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体の使用を含む。

本明細書に用いるとき、「酸性ｐＨ」という表現は、６．０またはそれ未満のｐＨ（例えば、約６．０未満、約５．５未満、約５．０未満、など）を意味する。
「酸性ｐＨ」という表現には、約６．０、５．９５、５．９０、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０、またはそれ未満のｐＨ値が含まれる。本明細書に用いるとき、「中性ｐＨ」という表現は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現には、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５、および７．４のｐＨ値が含まれる。

ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウス中でヒト抗体を生成する方法は、当分野で知られている。このような任意の知られている方法は、ヒトにＰＣＳＫ９を特異的に結合するヒト抗体を作るための本発明に関して用いることができる。

ベロシミューン（商標）（VELOCIMMUNE^TM）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１、リジェネロンファーマシューティカルズ（Regeneron Pharmaceuticals）参照）またはモノクローナル抗体を生成するための他のいずれかの知られている方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＰＣＳＫ９に対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。ベロシミューン（商標）（VELOCIMMUNE^TM）技術は、マウスが抗原刺激に反応してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生するように、内因性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を含む。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、そしてヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードしているＤＮＡに作動可能に連結する。次いで、そのＤＮＡを、完全ヒト抗体を発現することが可能な細胞中で発現させる。

一般に、ベロシミューン（商標）（VELOCIMMUNE^TM）マウスを興味の抗原に曝露させ、そして抗体を発現するマウスからリンパ細胞（例えばＢ細胞）を回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞系統と融合させて不死ハイブリドーマ細胞系統を調製し、そしてこのようなハイブリドーマ細胞系統をスクリーニングし、そして選択して興味の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞系統を確認する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、そして重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に連結してもよい。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞中で産生してもよい。別法として、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを、抗原特異的リンパ球から直接単離してもよい。

最初に、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体を単離する。当業者に知られている標準的な方法を用いて、親和性、選択性、エピトープ、などを含む望ましい特性に関して抗体を特徴づけし、そして選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて、本発明の完全ヒト抗体、例えば野生型または改変されたＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択された定常領域は、具体的な使用に応じて変化してもよいが、高親和性抗原結合性および標的特異性特性は、可変領域に存在する。

一般に、本発明の方法で用いることができる抗体は、上記のように、固相上に固定化された、または溶液相中の抗原への結合によって測定したときに高親和性を有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて本発明の完全ヒト抗体を生成する。選択された定常領域は具体的使用に応じて変化してもよいが、高親和性抗原結合性および標的特異性特性は、可変領域に存在する。

本発明の方法に関して用いることができるＰＣＳＫ９を特異的に結合する抗体のヒト抗体または抗原結合性フラグメントの具体例としては、配列番号：２、１８、２２、２６、４２、４６、５０、６６、７０、７４、９０、９４、９８、１１４、１１８、１２２、１３８、１４２、１４６、１６２、１６６、１７０、１８６、１９０、１９４、２１０、２１４、２１８、２３４、２３８、２４２、２５８、２６２、２６６、２８２、２８６、２９０、３０６、３１０、３１４、３３０、３３４、３３８、３５４、３５８、３６２、３７８、３８２、３８６、４０２、４０６、４１０、４２６、４３０、４３４、４５０、４５４、４５８、４７４、４７８、４８２、４９８、５０２、５０６、５２２、５２６、５３０、５４６、５５０、５５４、５７０、５７４、５７８、５９４、５９８、６０２、６１８、６２２、６２６、６４２、６４６、６５０、６６６、６７０、６７４、６９０、６９４、６９８、７１４、７１８、７２２、７３８および７４２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）内に含有された３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）を含む任意の抗体または抗原結合性フラグメントが含まれる。抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号：１０、２０、２４、３４、４４、４８、５８、６８、７２、８２、９２、９６、１０６、１１６、１２０、１３０、１４０、１４４、１５４、１６４、１６８、１７８、１８８、１９２、２０２、２１２、２１６、２２６、２３６、２４０、２５０、２６０、２６４、２７４、２８４、２８８、２９８、３０８、３１２、３２２、３３２、３３６、３４６、３５６、３６０、３７０、３８０、３８４、３９４、４０４、４０８、４１８、４２８、４３２、４４２、４５２、４５６、４６６、４７６、４８０、４９０、５００、５０４、５１４、５２４、５２８、５３８、５４８、５５２、５６２、５７２、５７６、５８６、５９６、６００、６１０、６２０、６２４、６３４、６４４、６４８、６５８、６６８、６７２、６８２、６９２、６９６、７０６、７１６、７２０、７３０、７４０および７４４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を有する、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）内に含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＶＲ１、ＬＣＶＲ２、ＬＣＶＲ３）を含んでもよい。

本発明の特定の実施態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号：２／１０、１８／２０、２２／２４、２６／３４、４２／４４、４６／４８、５０／５８、６６／６８、７０／７２、７４／８２、９０／９２、９４／９６、９８／１０６、１１４／１１６、１１８／１２０、１２２／１３０、１３８／１４０、１４２／１４４、１４６／１５４、１６２／１６４、１６６／１６８、１７０／１７８、１８６／１８８、１９０／１９２、１９４／２０２、２１０／２１２、２１４／２１６、２１８／２２６、２３４／２３６、２３８／２４０、２４２／２５０、２５８／２６０、２６２／２６４、２６６／２７４、２８２／２８４、２８６／２８８、２９０／２９８、３０６／３０８、３１０／３１２、３１４／３２２、３３０／３３２、３３４／３３６、３３８／３４６、３５４／３５６、３５８／３６０、３６２／３７０、３７８／３８０、３８２／３８４、３８６／３９４、４０２／４０４、４０６／４０８、４１０／４１８、４２６／４２８、４３０／４３２、４３４／４４２、４５０／４５２、４５４／４５６、４５８／４６６、４７４／４７６、４７８／４８０、４８２／４９０、４９８／５００、５０２／５０４、５０６／５１４、５２２／５２４、５２６／５２８、５３０／５３８、５４６／５４８、５５０／５５２、５５４／５６２、５７０／５７２、５７４／５７６、５７８／５８６、５９４／５９６、５９８／６００、６０２／６１０、６１８／６２０、６２２／６２４、６２６／６３４、６４２／６４４、６４６／６４８、６５０／６５８、６６６／６６８、６７０／６７２、６７４／６８２、６９０／６９２、６９４／６９６、６９８／７０６、７１４／７１６、７１８／７２０、７２２／７３０、７３８／７４０および７４２／７４４からなる群から選択される重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）からの６つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。

本発明の特定の実施態様において、本発明の方法で用いることができる抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号：７６／７８／８０／８４／８６／８８（ｍＡｂ３１６Ｐ）および２２０／２２２／２２４／２２８／２３０／２３２（ｍＡｂ３００Ｎ）から選択されるＨＣＤＲ１／ＨＣＤＲ２／ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１／ＬＣＤＲ２／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列を有する（米国特許出願公開第２０１０／０１６６７６８号参照）。

本発明の特定の実施態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、配列番号：２／１０、１８／２０、２２／２４、２６／３４、４２／４４、４６／４８、５０／５８、６６／６８、７０／７２、７４／８２、９０／９２、９４／９６、９８／１０６、１１４／１１６、１１８／１２０、１２２／１３０、１３８／１４０、１４２／１４４、１４６／１５４、１６２／１６４、１６６／１６８、１７０／１７８、１８６／１８８、１９０／１９２、１９４／２０２、２１０／２１２、２１４／２１６、２１８／２２６、２３４／２３６、２３８／２４０、２４２／２５０、２５８／２６０、２６２／２６４、２６６／２７４、２８２／２８４、２８６／２８８、２９０／２９８、３０６／３０８、３１０／３１２、３１４／３２２、３３０／３３２、３３４／３３６、３３８／３４６、３５４／３５６、３５８／３６０、３６２／３７０、３７８／３８０、３８２／３８４、３８６／３９４、４０２／４０４、４０６／４０８、４１０／４１８、４２６／４２８、４３０／４３２、４３４／４４２、４５０／４５２、４５４／４５６、４５８／４６６、４７４／４７６、４７８／４８０、４８２／４９０、４９８／５００、５０２／５０４、５０６／５１４、５２２／５２４、５２６／５２８、５３０／５３８、５４６／５４８、５５０／５５２、５５４／５６２、５７０／５７２、５７４／５７６、５７８／５８６、５９４／５９６、５９８／６００、６０２／６１０、６１８／６２０、６２２／６２４、６２６／６３４、６４２／６４４、６４６／６４８、６５０／６５８、６６６／６６８、６７０／６７２、６７４／６８２、６９０／６９２、６９４／６９６、６９８／７０６、７１４／７１６、７１８／７２０、７２２／７３０、７３８／７４０および７４２／７４４からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。

医薬組成物および投与方法
本発明は、患者にＰＣＳＫ９阻害薬を投与することを含む方法を含み、その際、ＰＣＳＫ９阻害薬は医薬組成物中に含有されている。本発明の医薬組成物は、適した担体、賦形剤、および適した導入、送達、耐性などをもたらす他の薬剤を用いて製剤化される。多くの適当な製剤は、すべて薬剤師に知られている処方集：レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、マック・パブリシング・カンパニー（Mack Publishing Company）、イーストン（Easton）、ＰＡに見いだすことができる。これらの製剤には、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー、ロウ、オイル、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（例えばリポフェクチン（商標）（LIPOFECTIN^TM））、ＤＮＡ複合体、無水吸収ペースト剤、水中油型および油中水型乳剤、乳剤カーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカーボワックスを含む半固体混合物が含まれる。また、Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311を参照のこと。

種々の送達システム、例えば、リポソーム中のカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、突然変異ウイルスを発現できる組換え細胞、受容体介在性エンドサイトーシスが知られており、本発明の医薬組成物を投与するために用いることができる（例えば、Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432を参照のこと）。投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が含まれるが、それらに限定されるわけではない。組成物は、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜、など）を通した吸収によっていずれかの都合のよい経路によって投与してもよく、他の生物活性剤と共に投与してもよい。

本発明の医薬組成物は、標準の針およびシリンジで皮下または静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達における用途を容易に有する。このようなペン型送達デバイスは再使用可能または使い捨てであることができる。再使用可能なペン型送達デバイスは、一般に医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを用いる。一旦、カートリッジ内のすべての医薬組成物を投与し、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄して、医薬組成物を含む新たなカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスには、交換可能なカートリッジがない。つまり、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバー中に保持された医薬組成物で予め充填されることになる。一旦、リザーバーから医薬組成物が空になったら、デバイス全体を廃棄する。

多くの再使用可能なペンおよび自己注射器送達デバイスは、本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する。ほんの少し例を挙げれば、例としては、オートペン（商標）（AUTOPEN^TM）（オーウェンマンフォード社（Owen Mumford, Inc.）、ウッドストック、
英国）、ディセトロニック（商標）ペン（DISETRONIC^TM pen）（ディセトロニックメディカルシステムズ（Disetronic Medical Systems）、ベルグドルフ、スイス）、ヒューマログミックス７５／２５（商標）ペン（HUMALOG MIX 75/25^TM pen）ヒューマログ（商標）ペン（HUMALOG^TM pen）ヒューマリン７０／３０（商標）ペン（HUMALIN 70/30^TM pen）（イーライリリー社（Eli Lilly and Co.）、インディアナポリス、ＩＮ）、ノボペン（商標）（NOVOPEN^TM）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（ノボノルディスク（Novo Nordisk）、コペンハーゲン、デンマーク）、ノボペンジュニア（商標）（NOVOPEN JUNIOR^TM）（ノボノルディスク（Novo Nordisk）、コペンハーゲン、デンマーク）、ＢＤ（商標）ペン（ベクトンディキンソン（Becton Dickinson）、フランクリンレイクス、ＮＪ）、オプティペン（商標）（OPTIPEN^TM）、オプティペンプロ（商標）（OPTIPEN PRO^TM）、オプティペンスターレット（商標）（OPTIPEN STARLET^TM）およびオプティクリック（商標）（OPTICLIK^TM）（サノフィ・アベンティス（sanofi-aventis）、フランクフルト、ドイツ）、が含まれるが、それらに限定されるわけではない。本発明の医薬組成物の皮下送達に用途を有する使い捨てのペン型送達デバイスの例としては、ほんの少し例を挙げれば、ソロスター（商標）ペン（SOLOSTAR^TM pen）（サノフィ・アヴェンティス（sanofi-aventis））、フレックスペン（商標）（FLEXPEN^TM）（ノボノルディスク（Novo Nordisk））、およびクイックペン（商標）（KWIKPEN^TM）（イーライリリー（Eli Lilly））、シュアクリック（商標）自己注射器（SURECLICK^TM Autoinjector）（アムジェン（Amgen）、サウザンドオークス、ＣＡ）、ペンレット（商標）（PENLET^TM）（商標）（ハーゼルマイヤー（Haselmeier）、シュツットガルト、ドイツ）、エピペン（EPIPEN）（デイ（Dey）、Ｌ．Ｐ．）、およびヒュミラ（商標）ペン（HUMIRA^TM Pen）（アボットラボラトリーズ（Abbott Labs）、アボットパークＩＬ）が含まれるが、それらに限定されるわけではない。

特定の状況において、医薬組成物は、放出制御システムで送達することができる。一実施態様において、ポンプを使用してもよい（Langer, 前出；Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201を参照のこと）。別の実施態様では、ポリマー物質を使用できる；Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (編), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Floridaを参照のこと。さらに別の実施態様において、放出制御システムは、組成物の標的の近くに配置することができ、そのため、全身用量の一部しか必要ではない（例えば、Goodson, 1984, Medical Applications of Controlled Release, 前出, 第2巻, 第115-138頁中を参照のこと）。他の放出制御システムは、Langer, 1990, Science 249:1527-1533による総説において議論される。

注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内および筋肉注射、点滴注入などのための剤形を含んでもよい。これらの注射用製剤は、知られている方法によって製造してもよい。例えば、注射用製剤は、例えば、上記の抗体またはその塩を、注射に慣用的に用いられる滅菌水性媒体または油性媒体中に溶解、懸濁または乳化することによって製造してもよい。注射用の水性媒体としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖および他の補助剤を含有する等張性溶液などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］などのような適当な可溶化剤と組み合わせて用いてもよい。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などがあり、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて用いてもよい。このように製造された注射剤は、適当なアンプル中に充填することが好ましい。

好都合なことに、上記の経口または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に合わせて適した単位用量の剤形に製造される。このような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが含まれる。

用量
本発明の方法に従って対象に投与されるＰＣＳＫ９阻害薬（例えば抗ＰＣＳＫ９抗体）の量は、一般に治療有効量である。本明細書に用いるとき、「治療有効量」という成句は、ＬＤＬ−Ｃ、ＡｐｏＢ１００、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ、総コレステロール、ＶＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）および残りのコレステロールからなる群から選択される１つまたはそれ以上のパラメータにおいて検出可能な低下（ベースラインから少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、またはそれより多い）を生じるＰＣＳＫ９阻害薬の用量を意味する。

抗ＰＣＳＫ９抗体の場合、治療有効量は、抗ＰＣＳＫ９抗体約０．０５ｍｇから約６００ｍｇまで、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇまたは約６００ｍｇであることができる。

個々の用量内に含まれる抗ＰＣＳＫ９抗体の量は、患者体重キログラム当たりの抗体ミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）によって表してもよい。例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体は、約０．０００１〜約１０ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で患者に投与してもよい。

併用療法
特定の実施態様による本発明の方法は、本発明の医薬組成物の投与時に、または直前に高コレステロール血症の処置の治療レジメンを受けている患者に抗ＰＣＳＫ９抗体を含む医薬組成物を投与することを含んでもよい。例えば、高コレステロール血症と以前に診断された患者は、抗ＰＣＳＫ９抗体を含む医薬組成物の投与の前、かつ／またはそれと同時に、別の薬物の安定な治療レジメンを処方されて、受けていてもよい。以前のまたは併用の治療レジメンは、例えば、（１）３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル（ＨＭＧ）−補酵素Ａ（ＣｏＡ）レダクターゼを阻害することによってコレステロール合成の細胞減少を誘導する物質、例えばスタチン（例えば、セリバスタチン、アトロバスタチン、シンバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、など）；（２）コレステロール取込みをおよびまたは胆汁酸再吸収阻害する物質；（３）リポタンパク質異化作用を高める物質（例えばナイアシン）；および／または（４）コレステロール除去の役割を果たすＬＸＲ転写因子の活性化物質、例えば２２−ヒドロキシコレステロールを含んでもよい。特定の実施態様において、患者は、抗ＰＣＳＫ９抗体の投与前に、またはそれと同時に、治療剤の配合剤、例えばエゼチミブおよびシンバスタチン；スタチンおよび胆汁樹脂（例えば、コレスチラミン、コレスチポール、コレセベラム）；ナイアシンおよびスタチン（例えば、ロバスタチンでナイアシン）；またはオメガ−３−脂肪酸エチルエステル（例えば、オマコール）のような脂質低下剤を受けている。

投与レジメン
本発明の特定の実施態様によれば、複数の用量の本発明のＰＣＳＫ９阻害薬（例えば、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物）を定められた時間経過にわたって対象に投与してもよい。本発明のこの態様による方法は、対象に複数の用量のＰＣＳＫ９阻害薬を順に投与すること含む。本明細書に用いるとき、「順に投与すること」は、それぞれの用量のＰＣＳＫ９阻害薬が、異なる時点で、例えば、予め定められた間隔（例えば、数時間、数日、数週間あるいは数ヶ月）を隔てた異なる日に対象に投与されることを意味する。本発明は、初回用量のＰＣＳＫ９阻害薬を１回、続いて第２の用量のＰＣＳＫ９阻害薬を１回またはそれ以上、そして場合により、続いて第３の用量のＰＣＳＫ９阻害薬を１回またはそれ以上、患者に順に投与することを含む方法を含む。

「初回用量」、「第２の用量」および「第３の用量」という用語は、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の個々の用量を投与する時間経過の順序のことをいう。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」ともいう）；「第２の用量」は、初回用量の後に投与される用量であり；そして「第３の用量」は、第２の用量の後に投与される用量である。初回、第２および第３の用量は、すべて同じ量のＰＣＳＫ９阻害薬を含んでもよいが、一般に投与の頻度に関して互いに異なってもよい。しかし、特定の実施態様において、初回、第２および／または第３の用量に含まれるＰＣＳＫ９阻害薬の量は、処置の経過中に互いに異なる（例えば、必要応じて上方または下方に調整する）。特定の実施態様において、２回またはそれ以上（例えば、２、３、４または５回）の用量が、処置レジメンの開始時に「負荷量」、続いてより少ない頻度で投与されるその後の用量（例えば、「維持量」）として投与される。

本発明の１つの例示的な実施態様において、それぞれ第２および／または第３の用量は、直前の用量の１〜２６（例えば、１、１ １／２、２、２ １／２、３、３ １／２、４、４ １／２、５、５ １／２、６、６ １／２、７、７ １／２、８、８ １／２、９、９ １／２、１０、１０ １／２、１１、１１ １／２、１２、１２ １／２、１３、１３ １／２、１４、１４ １／２、１５、１５ １／２、１６、１６ １／２、１７、１７ １／２、１８、１８ １／２、１９、１９ １／２、２０、２０ １／２、２１、２１ １／２、２２、２２ １／２、２３、２３ １／２、２４、２４ １／２、２５、２５ １／２、２６、２６ １／２またはそれ以上）週後に投与される。「直前の用量」という成句は、本明細書に用いるとき、一連の複数の投与において、順序として間に入る用量がなく、ちょうど次の用量を投与する前に、患者に投与される抗原結合分子の用量を意味する。

本発明のこの態様による方法は、患者に第２および／または第３の用量のＰＣＳＫ９阻害薬を任意の回数投与することを含んでもよい。例えば、特定の実施態様において、第２の用量は１回しか患者に投与されない。別の実施態様において、第２の用量は２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回またはそれ以上）患者に投与される。同様に、特定の実施態様において、第３の用量は１回しか患者に投与されない。別の実施態様において、第３の用量は２回またはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８回またはそれ以上）患者に投与される。

複数回の第２の用量を含む実施態様において、それぞれの第２の用量は、他の第２の用量と同じ頻度で投与してもよい。例えば、それぞれの第２の用量は、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与してもよい。同様に、複数回の第３の用量を含む実施態様において、それぞれの第３の用量は、他の第３の用量と同じ頻度で投与してもよい。例えば、それぞれの第３の用量は、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与してもよい。あるいは、第２および／または第３の用量を患者に投与する頻度は、処置レジメンの経過にわたって変化してもよい。また、投与頻度は、処置の経過中に、臨床検査による個々の患者の必要に応じて医師が調整してもよい。

本発明は、漸増（up-titration）の選択肢（本明細書では「用量修正」とも呼ぶ）を含む投与レジメンを含む。本明細書に用いるとき、「漸増の選択肢」は、特定の回数のＰＣＳＫ９阻害薬の用量を受けた後、患者が１つまたはそれ以上の定義された治療パラメータにおいて明記された低下を達成しなかった場合、その後、ＰＣＳＫ９阻害薬の用量を高めることを意味する。例えば、２週間毎に１回の頻度で患者に抗ＰＣＳＫ９抗体７５ｍｇ用量の投与を含む治療レジメンの場合、８週間（すなわち、０週目、２週目および４週目、６週目および８週目に投与された５用量）後、患者が７０ｍｇ／ｄＬ未満の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度を達成しなかった場合、抗ＰＣＳＫ９抗体の用量を、例えば、その後（例えば、１０週目または１２週目またはそれより後に開始して）、２週間ごとに１回１５０ｍｇの投与に高める。

カスケードスクリーニング法
また、本発明は、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を有する、またはそれを発症するリスクがある対象を特定するためのカスケードスクリーニング法を含む。「カスケードスクリーニング」は、本明細書に用いるとき、特定の遺伝的変異の系統的ファミリーを追跡する方法（Ned and Sijbrands, PLoS Curr. 2011, 3:RRN1238を参照のこと）によって遺伝的病態を有するか、またはそれを発症するリスクがある個体を特定することを意味する。本発明のこの態様による方法は、（ａ）特定のＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを担持するＡＤＨを有する最初の個体（別名「発端患者」）を特定すること；および（ｂ）ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍの存在に関して発端患者の生物学的に関連した親族をスクリーニングすることを含む。ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍは、ＡＤＨに関連するＰＣＳＫ９におけるなんらかの機能獲得型変異、例えば、Ｖ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬまたはＲ４９６Ｗであることができる。

本明細書に用いるとき、「生物学的に関連した親族」には、例えば、一等親、二等親、三等親、四等親などの血縁者を含む、最初の個体と共通祖先を共有する任意の人を含む。本発明の方法は、例えば、血清ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬＣ、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、Ａｐｏ Ｂ１００、Ａｐｏ Ａ１、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）のレベルおよびそれらの組合せを測定することを含む、ＡＤＨのリスクがある個体を特定する、さらなるスクリーニングステップを含んでもよい。ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍのスクリーニングには標準遺伝子検査およびＤＮＡシークエンシング方法論を用いることができる。

本発明のこの態様の方法によれば、親族が、発端患者において最初に特定されたＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを有する場合、その親族はＡＤＨを有するか、またはそれを発症するリスクがあると結論付けることができる。

以下の実施例は、本発明の方法を実施するやり方ならびに本発明の組成物を製造および使用するやり方の完全な開示および説明を当業者に提供するために記載するのであって、発明者らが本発明とみなすものの範囲を限定しようとするものではない。使用した数に関しては（例えば、量、温度、など）正確さを保つように努めているが、実験的な誤差および偏差がいくらか含まれているはずである。特に明記しない限り、部は質量による部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、そして圧力は大気圧またはその付近である。

〔実施例１〕
ヒトＰＣＳＫ９に対するヒト抗体の生成
米国特許第８,０６２,６４０号に記載されたようにヒト抗ＰＣＳＫ９抗体を生成した。
以下の実施例で用いた例示的なＰＣＳＫ９阻害薬は、「ｍＡｂ３１６Ｐ」（アリロクマブとしても知られている）で表わされるヒト抗ＰＣＳＫ９抗体である。ｍＡｂ３１６Ｐは、以下のアミノ酸配列特性：配列番号：９０を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）；配列番号：９２を含む軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）；配列番号：７６を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）；配列番号：７８を含むＨＣＤＲ２；配列番号：８０を含むＨＣＤＲ３；配列番号：８４を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）；配列番号：８６を含むＬＣＤＲ２；および配列番号：８８を含むＬＣＤＲ３を有する。

〔実施例２〕
プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）において機能獲得型変異によって生じる常染色体優性高コレステロール血症を有する患者の特定および特徴づけ、ならびに家族性高コレステロール血症（ＦＨ）および家族性欠陥アポリポタンパク質Ｂ血症（ＦＤＢ）を有する患者との比較
常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）は、血清ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）高値および早期発症の心血管疾患を特徴とする一般的な脂質代謝障害である（Robinson, J. Manag. Care Pharm. 2013, 19:139-149）。ＡＤＨが生じる最も高頻度の変異は、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ；家族性高コレステロール血症［ＦＨ］）またはそのリガンドアポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ；家族性欠陥ＡｐｏＢ［ＦＤＢ］）に見いだされる。また、ＡＤＨは、ＰＣＳＫ９における機能獲得型変異（「ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ）によって生じることもある（Seidah et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003, 100:928-933）。ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍは、ＡＤＨ患者の約１％に現れる。これまで、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する比較的少数の患者しか記載されておらず、それらの臨床的な症候群は、特徴づけが不十分である。

ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの地理学的および家族性分布、その臨床症状、ならびにＦＨおよびＦＤＢとのその比較をより良好に理解するため、後ろ向き横断的平行群観察的コホート研究を実施した。全２００カ所の施設と連絡をとり潜在的施設の世界的な調査を開始した；１８０カ所の施設から返答があり、１６カ所から前向きな返答があった。８カ国（フランス、日本、ノルウェー、ポルトガル、南アフリカ、オランダ、英国および米国）から１２カ所の施設が積極的に貢献した。集めたデータには、患者人口統計、遺伝子型（ＰＣＳＫ９、ＬＤＬＲ、ＡｐｏＢ、ａｐｏＥ）、ベースラインおよび処置中の脂質プロファイル、脂質低下療法（ＬＬＴ）、黄色腫、眼瞼黄色腫および角膜環の存在、ならびにＣＶＤの発症および発症年齢が含まれる。分子試験（ＤＮＡ塩基配列決定）によって確認されたＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの患者を、年齢および性別に関して、オランダの登録機関から分子的に証明されたＦＨ（Ｎ＝２１２６）およびＦＤＢ（Ｎ＝４７０）を有する患者と適合させた。ＬＤＬＲ変異は、「欠陥」、（ミスセンス、小さなインフレームインデル、付加されたスプライス部位と同義）または「欠損」（大きなまたはフレームシフトインデル、ナンセンス、スプライス部位、プロモーター変異）を特徴とし、そしてそれらの脂質プロファイルを比較した。

本研究では、世界中の２００カ所の脂質専門施設と連絡をとり、そしてフランス、日本、ノルウェー、ポルトガル、南アフリカ、オランダ、英国および米国の１２カ所の施設からＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異を有する１６４名の患者（男性８３名、女性８１名）を特定した。患者は、１６種の異なるミスセンス変異を担持しており、そのうちの６種は以前に記載されていなかった。以前に未報告の６種のＧＯＦｍは、Ｖ４Ｉ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｄ１２９ＮおよびＳ４６５Ｌである。個々のＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異は、一般に地理的分布が制限されており、少数の家系で見いだされた（図１Ａおよび１Ｂ）。実施例には２２名の患者が含まれ、ノルウェーでは、２つの血統でしかＲ２１５Ｈが見いだされず、そして日本では、Ｖ４Ｉを有する１２名の患者およびＥ３２Ｋを有する３０名の患者しか見出されなかった（図１）。プールしたＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍ患者に関して、平均未処置総コレステロールおよびＬＤＬコレステロールは、それぞれ３５９および２７２ｍｇ／ｄＬであった。１１名の患者は、ＰＣＳＫ９およびＬＤＬＲの変異に関する二重ヘテロ接合体（double heterozygote）であった；これらの患者は、以前に３名のＥ３２Ｋ二重ヘテロ接合体患者に関して報告されたように、同じＧＯＦ変異単独の患者と比較して、より高い未処置脂質を有する傾向があった。

ＧＯＦ変異は、すべての構造タンパク質ドメインおよび９つのコーディングエキソンのうちの５つで見いだされ（図２）、そして種々の程度の脂質異常と関連していた（図１Ｂ）。一般に、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの患者では、ＦＨおよびＦＤＢのものと比較して脂質異常がより重度であった；未処置平均ＬＤＬ−Ｃは、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの患者で最も高く、そしてＦＤＢで最も低かった（図３）。各変異と関連する未処置脂質値を、ＧＯＦｍの患者の全集団と比較した：Ｄ３７４ＹおよびＳ１２７Ｒキャリアは、重度の脂質異常を有したが、Ｅ３２Ｋ、Ｒ２１５ＨおよびＳ４６５Ｌキャリアは、同じ変異を担持する患者では実質的な変化が存在したにもかかわらず、比較的温和であった。

データが入手可能であったＰＣＳＫ９を有する患者のうち、５３％は黄色腫の証拠を有し、１５％は眼瞼黄色腫の証拠を有し、そして２２％は角膜環の証拠を有し；そして３３％は冠動脈疾患の既往歴を有し；平均発症は４９．４（１３．８）歳であった。ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者の臨床像およびＣＶＤ負荷を表１Ａにまとめる。

コレステロール上昇の身体的徴候は、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの患者で頻度が高く（図２）、以前に報告したように（表１Ａ）、有症率はＦＨおよびＦＤＢ（家族性欠陥アポリポタンパク質Ｂ血症）と類似していた。また、ＦＨおよびＦＤＢと同様に、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者の４４％は、心血管疾患の病歴を有した。冠動脈疾患（ＣＡＤ）は、最も一般的な症状（３３％）であり、平均発症年齢は４９．４±１３．８歳であった（図２および表１Ａ）。

オランダの高コレステロール血症登録機関から抽出されたＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者ならびにＦＨおよびＦＤＢ患者間の比較では、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍ患者が、最も高い平均未処置ＬＤＬコレステロール値を有し、そしてＦＤＢ患者が最も低かった（表１Ｂ）。ＦＨを有する患者の中では、欠損変異を有するものが、欠陥変異を有するものよりもより高い未処理ＬＤＬコレステロール値を有した（表１Ｂ）。脂質低下療法（主にスタチン）は、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者において脂質プロファイルを改善したが、実質的な割合としては、指標基準のＬＤＬコレステロール値の達成に失敗した。

ＦＨまたはＦＤＢのいずれかを有する発端患者は、親族よりも高いベースラインＬＤＬＣ値を有し、そして欠損ＬＤＬＲ変異を有する患者は、欠陥変異を有するものよりも高いベースラインＬＤＬＣを有した。

ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者では、既存のＬＴＴ（例えば、スタチン、エゼチミブ）を利用することによって脂質プロファイルが改善されうるが（図４）、７０％を超える患者は、＜１００ｍｇ／ｄＬのＬＤＬ−Ｃ目標を達成しておらず、２％より少ない患者しか＜７０ｍｇ／ｄＬを達成していない（図５）。

結論
ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍは、重症型のＡＤＨを生じ、そしてほとんどの患者は、現在の療法において目標ＬＤＬ−Ｃの達成に失敗している。本解析的研究から、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異体は、地理的分布がほとんど制限されており、限定された数の血統で見いだされ、そして関連する疾患重症度において有意な表現型変動性を示すことが立証された。ＧＯＦ変異がＰＣＳＫ９コード配列を通して見いだされるが、本研究は、Ｄ３７４ＹまたはＳ１２７Ｒ変異のキャリアが、すべての他のＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異キャリアの平均よりも有意により高い未処理ＬＤＬコレステロール値を有していたことを確認している。ＧＯＦ変異体の地理的隔離は、それが異なる集団における個人的な変異によるおそれがあることを示唆している。本研究では、オランダおよび日本でＡＤＨの遺伝的構造を特定するため多大な労力が払われたが、変異体の重複部分は見いだされず、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異の地理的隔離を支持している。

個々の変異の疾患重症度の変動性にもかかわらず、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者のプール解析は、ＦＨまたはＦＤＢを有する患者と比較して、有意により高いＬＤＬコレステロール値を示した。ＦＨ患者は世界的に見いだされ、そしてＦＨを生じるＬＤＬＲ変異体は、遺伝子を通して広がっており（１６００例以上報告された）、個々の変異に関連する疾患重症度はより大きい。対照的に、ＦＤＢも、また世界的に見いだされ、ＡｐｏＢ変異体Ｒ３５２７Ｑを通して、主に北欧で見いだされ、もっともよくみられる原因（＞９５％）である。本研究では、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する患者を、世界最大のこのような情報源であるオランダの家族性高コレステロール血症登録機関からＦＨおよびＦＤＢ患者と適合させた。本研究の結果に基づいて、ＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍ表現型の重症度は、これらの患者における積極的な脂質低下療法を是認すると結論付けられた。

最後に、本明細書に記載された結果からは、一旦、発端患者（すなわち、特定のＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを宿すＡＤＨの患者）が特定されたら、カスケードスクリーニングが、さらなる影響を受けた親族を特定する有効な方法となるであろうと示唆される。

〔実施例３〕
常染色体優性高コレステロール血症およびＰＣＳＫ９導入の機能獲得型変異を有する患者における抗ＰＣＳＫ９モノクローナル抗体の臨床試験
常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）およびＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方の対立遺伝子の機能獲得型変異（ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ）を有する患者において抗ＰＣＳＫ９抗体の薬力学および安全性を評価するため第２相臨床試験を実施した。本研究で用いた抗ＰＣＳＫ９抗体は、本明細書においてｍＡｂ３１６Ｐ（アリロクマブとも呼ばれる）と呼ばれる完全ヒトモノクローナル抗体である。本研究の主要目的は、ＡＤＨおよびＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを有する患者においてｍＡｂ３１６Ｐを皮下（ＳＣ）投与した１４週間中の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）におけるｍＡｂ３１６Ｐの効果を評価することであった。本研究の副次的目的は、ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍを有する患者において以下を評価することであった：（ａ）ＳＣ投与したｍＡｂ３１６Ｐの安全性および忍容性；（ｂ）総コレステロール、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬＣ）、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ−Ｃ）、トリグリセリド（ＴＧ）、ＡｐｏＢ１００、ＡｐｏＡ１およびリポタンパク質（ａ）（Ｌｐ［ａ］）を含む他の血清脂質／アポリポタンパク質（Ａｐｏ）におけるｍＡｂ３１６Ｐの薬力学的効果；（ｃ）ｍＡｂ３１６Ｐの複数のＳＣ用量の薬物動態（ＰＫ）プロファイル；および（ｄ）２週間ごとに（ｑ２ｗ）ｍＡｂ３１６Ｐを受けた後の患者の免疫原性プロファイル。

患者の選択
本研究の対象集団は、少なくとも２８日間安定な脂質低下治療レジメンにおけるスクリーニングで血清ＬＤＬ−Ｃ値≧７０ｍｇ／ｄＬ（×０．０２５９ｍｍｏｌ／Ｌ）を有し、そして研究者によって目標に達してないとみなされた、１８歳〜７０歳を含む、ＡＤＨおよびＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有する男性および女性であった。ＧＯＦ変異を有する患者は、以前のＤＮＡ解析によって、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ１２７Ｒ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ３５７ＨまたはＲ２１８Ｓ ＰＣＳＫ９タンパク質変異体をコードする変異体ＰＣＳＫ９遺伝子の１つまたはそれ以上のコピーを有することが示された患者と定義された。また、ＧＯＦ表現型を生じると考えられる他のＰＣＳＫ９対立遺伝子を有する患者も、本研究への組み入れを考えた。本研究では合計１３名の患者を登録し、そして投薬した。

本研究の組み入れ基準は、次の通りであった。（１）１８歳から７０歳の間を含む年齢の男性または女性；（２）分子的に確認されたＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍの病歴；（３）少なくとも２８日間の安定な脂質低下療法レジメンにおいてスクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時に血漿ＬＤＬ−Ｃ値≧７０ｍｇ／ｄＬ（×０．０２５９ｍｍｏｌ／Ｌ）；研究者によってＬＤＬ−Ｃが目標に達していないみなされる必要があった。可能な脂質低下療法レジメンとしては、（ｉ）スタチン、（ｉｉ）エゼチミブ、（ｉｉｉ）フィブラート、（ｉｖ）ナイアシン、（ｖ）オメガ−３脂肪酸および（ｖｉ）胆汁酸樹脂が含まれたが、それらに限定されたわけではない；（４）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時にボディマス指数≧１８．０かつ≦４０．０ｋｇ／ｍ²；（５）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時に収縮期血圧（ＢＰ）≦１５０ｍｍＨｇおよび拡張期血圧≦９５ｍｍＨｇ；（６）本研究の期間中、任意の２４時間の期間に標準アルコール性飲料の消費が２杯を超えないように控える意志がある。標準アルコール性飲料は、ビール１２オンス、ワイン５オンスまたは強い酒１．５オンスに相当するものとみなした；（７）各研究来院前の２４時間アルコールの消費を控える意志がある；（８）本研究を通して通常の安定な食事および運動レジメンを維持する意志がある；（９）診療所への来院および研究関連の手続きに応じる意志があり、かつ可能である；（１０）署名されたインフォームドコンセントを提出する。

本研究に関する除外基準は、次の通りであった。（１）８〜１２時間の絶食後に測定して、スクリーニング来院（来院１［−２８日目〜−１５日目］）時に血清トリグリセリド＞３５０ｍｇ／ｄＬ（×０．０１１２９ｍｍｏｌ／Ｌ）；（２）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）前の１２ヵ月以内に心不全の既往歴（ニューヨーク心臓協会（New York Heart Association）クラスＩＩ〜ＩＶ）；（３）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）前の６ヵ月以内に、心筋梗塞、急性冠症候群、不定狭心症、脳卒中、末梢血管疾患、一過性虚血発作、または心血管再生の既往歴；（４）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）の６カ月前のコントロール不良の臨床的に有意な不整脈またはＥＣＧにおける臨床的に有意な最近の変化の既往歴；（５）活動性視神経疾患の既往歴がわかっている；（６）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）前の３ヵ月以内にＬＤＬアフェレーシスを受けた既往歴；（７）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時にヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１ｃ）＞８．５％のコントロール不良の真性糖尿病；（８）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時に甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）＞１．５×正常上限（ＵＬＮ）；（９）完全スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時にアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）＞２×ＵＬＮ（１回の再検査が許された）；（１０）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時にクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）＞３×ＵＬＮ（１回の再検査が許された）；（１１）モノクローナル抗体療法に対するわかっている感受性；（１２）スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）前の３０日以内、または治験薬の少なくとも５半減期以内のいずれか長い方での、治験薬を評価する臨床調査研究への参加；（１３）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルスに関して陽性であることがわかっている；（１４）局所再発または転移の証拠があるかどうかにかかわらず、過去５年以内に処置された、または未処置の任意の器官系の悪性腫瘍（皮膚の限局性基底細胞癌とは異なる）の既往歴；（１５）妊娠中のまたは母乳養育の女性；（１６）本研究の間、適切な避妊をする意思がない、性的に活発な男性または妊娠−分娩の可能性がある女性（適切な避妊手段には、スクリーニング前の２またはそれ以上の月経周期の間、経口避妊薬または他の処方箋薬学的避妊薬の安定な使用；子宮内避妊器具；両側卵管結紮；精管切除；避妊用スポンジを加えたコンドーム、避妊用発泡剤もしくはゼリー、または避妊用スポンジ、避妊用発泡剤もしくはゼリーを加えたペッサリーが含まれる）；および（１７）研究者の見解において、患者を危険にさらす、本研究への患者の参加を妨げる、または研究結果の解釈を妨げるであろう任意の医学的または精神医学的状態。治験薬および投与

本研究で用いた治験薬は、ｍＡｂ３１６Ｐであり、それは、使い捨ての１ｍＬ充填済みガラスシリンジ中に、１０ｍＭヒスチジン中の１５０ｍｇ／ｍＬの濃度、ｐＨ６．０、０．２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、および１０％（ｗ／ｖ）スクロースで供給された。少なくとも１５０ｍｇのｍＡｂ３１６Ｐの用量をシリンジから確実に送達するため、充填済みシリンジは、目標の用量に加えて、平均して７％のオーバフィル（１＋０．０７ｍＬ）を含有した。参照処置は、ｍＡｂ３１６Ｐにマッチングさせたプラセボであった。それは、タンパク質を添加してないｍＡｂ３１６Ｐとして同じ製剤で調製した。

二重盲検処置期間中のすべての試験薬注射は、腹部にＳＣ投与した。非盲検処置期間（下記参照）中のすべての試験薬注射は、腹部、大腿部または上腕外側にＳＣ投与することになる。

研究デザイン
研究デザインの概略図を、図６に示す。本研究は、単純盲検プラセボ導入、二重盲検処置およびフォローアップ期間で設計した。単純盲検プラセボ導入期間（−１４日目〜１日目）は、患者が、試験薬を受ける前に、毎日の脂質低下療法において確実に安定化するのを助けるために含まれた。下により詳細に議論するように、本研究のすべての患者は、ｍＡｂ３１６Ｐ １５０ｍｇ ＳＣ ５用量およびマッチングプラセボ４用量を受けた（図６）。本研究のすべての患者は、ｍＡｂ３１６Ｐ隔週４用量、続いて、１ヵ月後に、別の用量のｍＡｂ３１６Ｐを受けた。二重盲検処置相を良好に完了した後、ＳＣ投与したｍＡｂ３１６ＰのＬＤＬ−Ｃ低下の長期安全性および持続性を評価するため、患者は非盲検処置期間に入ることを認められた。本研究の非盲検部分の患者は、さらなる３年間、２週毎に１回（ｑ２ｗ）、ｍＡｂ３１６Ｐ １５０ｍｇＳＣを受けることになる。

試験適格性については、スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時に患者を評価した。登録前に脂質低下療法にある患者は、スクリーニングより前の少なくとも２８日間安定なレジメンにあることを必要とし、そして来院１５（１５５日目）までこのレジメンにとどまる必要があった。来院１５（１５５日目）後、必要に応じて、研究者は患者の脂質低下療法を変えることを認めた。

−１４日目に、適格基準を満たしたすべての患者は、２週間の単純盲検プラセボ導入期に入り、そしてプラセボの用量のＳＣ投与を受けた。研究１日目（ベースライン）に、すべての患者を、Ａ群（６名の患者）またはＢ群（７名の患者）におよその１：１の比率で無作為化した。研究１日目に、すべての患者は、二重盲検処置期間に入り、そして試験薬（ｍＡｂ３１６Ｐまたはプラセボ）を受けた。その後、患者は、有効性、安全性および検査評価のため１５５日目まで、２２週間、ｑ２ｗ来診に戻った。

すべての患者は、１５、２９、４３、５７、７１、８５日目および９９日目に試験薬（ｍＡｂ３１６Ｐまたはプラセボ）を受けた。患者は、１１３、１２７、１４１および１５５日目にフォローアップ評価のため来診した。患者は、本研究期間、安定な運動レベルを維持し、かつそれぞれの研究来院の４８時間前には苛酷な運動を回避するように指示されていた。患者は、スクリーニング時に脂質低下療法期間および投与について、ならびに来院２／−１４日目に開始してそれぞれの来院時に脂質低下療法のコンプライアンスについて質問を受けた。

二重盲検処置期間中に、すべての患者は、以下のように合計でｍＡｂ３１６Ｐ １５０ｍｇ ＳＣ ５用量およびプラセボＳＣ ４用量を受けた（図１）：（ｉ）すべての患者は、−１４日目にプラセボのＳＣ注射を受けた；（ｉｉ）研究１日目（ベースライン）に、Ａ群の患者はｍＡｂ３１６Ｐの用量を受けたのに対して、Ｂ群の患者はプラセボの用量を受けた；（ｉｉｉ）１５、２９および４３日目に、両群（Ａ群およびＢ群）の患者はｍＡｂ３１６Ｐを受けた；（ｉｖ）５７日目に、Ａ群の患者はプラセボを受けたのに対して、Ｂ群の患者はｍＡｂ３１６Ｐを受けた；（ｖ）７１日目に、Ａ群の患者はｍＡｂ３１６Ｐを受けたのに対して、Ｂ群の患者はプラセボを受けた；（ｖｉ）８５日目に、Ａ群の患者はプラセボを受けたのに対して、Ｂ群の患者はｍＡｂ３１６Ｐを受けた；（ｖｉｉ）９９日目に、Ａ群およびＢ群の両方の患者は、プラセボを受けた；そして（ｖｉｉｉ）すべての患者は、１１３、１２７、１４１日目のフォローアップ来院、および１５５日目の来院に戻った。

ＰＫ分析のため、１日目（ベースライン）に、および１５日目に開始して来診ごとに血液サンプルを採取した。所定の時点で、抗麻薬抗体レベルの分析のため、血液サンプルも集めた。

非盲検延長
来院１５（１５５日目）評価を良好に完了したすべての患者は、来院１６（２１１日目）に開始して来院３７（研究終了）までの非盲検処置期間に入る資格があった。非盲検処置期間中、すべての患者は、来院１７（３２週目）に開始して来院３６（処置の終了）まで、ｍＡｂ３１６Ｐ １５０ｍｇ ｑ２ｗ（±３日）のＳＣ注射を受けることになる。患者は、来院１６（２１１日目）、来院１７（３２週目）、来院１８（３４週目）、来院１９（３６週目）、来院２０（４０週目）、来院２１（４４週目）、来院２２（４８週目）時に、次いで来院２３（５６週目）から来院３６（処置の終了）まで１２週毎に診療所で診察を受けることになる。患者は、研究終了の来院（来院３７）のため、本研究での最後の用量の７０日後に来院することになる。非盲検処置期間中、患者は、ｍＡｂ３１６Ｐ注射を自己投与するための訓練を受けることになる。

非盲検処置期間中、本研究中の２回連続した実験室評価において算出されたＬＤＬ−Ｃ値＜２５ｍｇ／ｄＬ（０．６５ｍｍｏｌ／Ｌ）を達成する患者は、予定されたプロトコールにより監視および管理されることになる。研究者は、２回連続して算出されたＬＤＬ−Ｃ＜２５ｍｇ／ｄＬ（０．６５ｍｍｏｌ／Ｌ）値を報告することになる。この集団におけるｍＡｂ３１６Ｐの有効性は、脂質値の臨床的な実験室評価によって評価される。この集団のｍＡｂ３１６Ｐの安全性は、処置救急期間中の有害事象（ＡＥ）の発生率を評価することによって、および詳細な身体検査、バイタルサイン、体重、心電図（ＥＣＧ）および臨床的な実験室試験による詳細な医学的既往歴によって評価されることになる。盲検化された安全性データは、安全性モニタリングチーム（ＳＭＴ）によって継続的に検討されることになる。併用薬は、患者がインフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名するときから来院３７（研究終了）まで集められることになる。

サンプル分析および患者処置
スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）で開始して、診療所来院ごとに空腹時血液サンプル（８〜１２時間の絶食後）を採取した。脂質パネルで実施した臨床検査には、ＨＤＬＣ、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃ（超遠心分離によって測定し、そしてFreidwald式によって推定した）、ＶＬＤＬ−Ｃ、総コレステロール、トリグリセリド、ＡｐｏＡ１、ＡｐｏＢ１００、ＡｐｏＢ１００／Ａ１比およびＬｐ（ａ）の測定値が含まれる。来院日に、臨床採血が得られたとき、採血後、試験薬を投与した。

さらに、十分な血液化学試験用の血清サンプルを、スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）、来院２（−１４日目）、１日目（ベースライン）、１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３日目、１５５日目、来院１６（２１１日目）、来院１７（３２週目）、来院１８（３４週目）、来院１９（３６週目）、来院２１（４４週目）時、来院２３（５６週目）から来院３５（２００週目）まで研究来院、来院３６（処置の終了）、来院３７（研究の終了）または早期中止時に採取した。血液化学試験には、ナトリウム、塩化カリウム、重炭酸カルシウム、グルコース、クレアチニン、アルブミン、総タンパク質、血液尿素窒素、ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、乳酸脱水素酵素、総ビリルビン、総コレステロール、尿酸、ＣＰＫ、およびガンマグルタミルトランスペプチダーゼが含まれる。

また、スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）時、１日目（ベースライン）、１５、２９、４３、５７、７１、８５、９９、１１３、１５５日目、来院１６（２１１日目）、来院１７（３２週目）、来院１８（３４週目）、来院１９（３６週目）、来院２１（４４週目）、来院２３（５６週目）から来院３６（処置の終了）までの研究来院時、および来院３７（研究終了）または早期中止時に、血液学試験のための血液サンプルを集めた。血液学試験には、ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球、白血球、赤血球指数、血小板数および微分（differential）：好中球、リンパ球、単球、好塩基球および好酸球が含まれる。

また、スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）から１５５日目まで、来院２（−１４日目）を除いて、すべての診療所来院で、トロポニンＩレベル評価用の血液サンプルを集めた。さらに、スクリーニング来院（来院１［−２８〜−１５日目］）、１５日目、１５５日目、そして来院２１（４４週目）から来院３６（処置の終了）までの研究来院ごとに、そして来院３７（研究終了）または早期中止来院時に尿検査用の尿試料を集めた。尿検査試験には、色、透明度、ｐＨ、比重、ケトン、タンパク質、グルコース、血液、ビリルビン、白血球エステラーゼ、ニトラート、白血球、赤血球、ヒアリンおよびその他、細菌、上皮細胞、結晶および酵母が含まれる。

本研究の過程で実施される他の臨床検査には、妊娠試験（妊娠−分娩可能性のあるすべての女性）、ｈｓ−ＣＲＰレベル（−１４、１、１５、４３、７１、９９、１２７、１５５日目、来院１６［２１１日目］、そして来院２２［週４８］から来院３６［処置の終了］までの他の来院ごとに、来院３７［研究終了］または早期中止来院に採取した）、およびＰＣＳＫ９レベル（スクリーニング来院［来院１｛−２８〜−１５日目｝］で開始して来院１５［１５５日目］まですべての診療所来院で採取する）が含まれる。

結果
合計１３名の患者が、本研究に参加した。６名の患者をＡ群（１、１５、２９、４３および７１日目にｍＡｂ３１６Ｐ、そして−１４、５７ ８５および９９日目にプラセボを受ける）に割り当て、そして７名の患者をＢ群（１５、２９、４３、５７および８５日目にｍＡｂ３１６Ｐ、そして−１４、１、７１および９９日目にプラセボを受ける）（図１参照）に割り当てた。すべての患者が、二重盲検処置期間（９９日目まで）を完了した。７名の患者、Ａ群の３名およびＢ群の４名がフォローアップ期間（１５５日目まで）を終了した。６名の患者、Ａ群の２名およびＢ群の４名が非盲検処置期間に参加することに同意した。参加した患者の人口統計およびベースライン特性を表２に示す。

ベースライン疾患特性の概要を表３に示す。

表４〜１７に本研究の経過にわたる２つの処置群のコレステロールレベルおよび他の実験パラメータにおける変化をまとめる。

前述の表（表３〜１４）において、［１］は、ｐ値が１サンプルｔ検定を通して得られたことを示す。^*、^**および^***ｐ値は、それぞれ０．０５、０．０１および、０．００１のレベルで有意である。

本研究の経過にわたるＬＤＬ−Ｃレベルの変化を表１６にまとめる。

全１３名の患者に関して８週目での脂質値（ＬＤＬ−Ｃ、ＡｐｏＢ、ＴＧ、ＨＤＬＣ、ＡｐｏＡ１およびＬｐ（ａ））のベースラインからのパーセント変化を図７にまとめる。異なる処置群およびさまざまなＧＯＦｍ集団に関するＬＤＬ−Ｃおよび遊離ＰＣＳＫ９値の変化を図８〜１１に示す。

概要／結論
本研究に登録された患者（平均年齢４４．６歳、ベースライン時の平均ＬＤＬ−Ｃ １２７．９ｍｇ／ｄＬ）は、４種の異なるＰＣＳＫ９ ＧＯＦ変異（Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｒ２１８ＳおよびＤ３７４Ｙ）を担持した。すべての患者は、本研究の二重盲検（１４週目まで）部分および安全性フォローアップ（２２週目まで）部分を完了した。

本研究では、登録したＰＣＳＫ９ ＧＯＦｍを有するすべての患者においてｍＡｂ３１６Ｐ投与によりＬＤＬコレステロールが有意に低下し、そしてこれは遊離ＰＣＳＫ９の低下と時間的に関連づけられた。新規な無作為化されたプラセボ期デザインを利用することによって、それぞれ患者は、安全性および有効性データに貢献すると同時に、さらにプラセボに対するｍＡｂ３１６Ｐ投与の比較が可能となった。試験の２週間のプラセボ対照部分では、ｍＡｂ３１６Ｐ投与によりアポリポタンパク質Ｂおよびトリグリセリドも有意に低下した。特に、２週目に、ベースラインからのＬＳ平均低下（ｍＡｂ３１６Ｐ対プラセボ）は、ＬＤＬ−Ｃ ５３．７％、ＡｐｏＢ ４９．６％、ｎｏｎ−ＨＤＬ−Ｃ ４９．４％、総コレステロール３０．７％およびＡｐｏＢ／ＡｐｏＡ１ ０．３０（すべてのｐ値
≦０．００２）であった。また、８週間のアリロクマブ処置後の全対象の事後プール解析は、Ｌｐ（ａ）および超低密度コレステロールの統計的に有意な低下も示した。さらに、処置は一般に十分に許容された。

すべての変異キャリアが処置に対して反応したが、本発明者らの結果は、異なるＧＯＦ変異を担持する患者においては、ＬＤＬコレステロールの低下率が異なりうることを示唆しており、そしてこれはアリロクマブ投与後の遊離ＰＣＳＫ９の低下率と関連づけることができる。

本研究により、ＰＣＳＫ９機能獲得型変異によって生じる常染色体優性高コレステロール血症を有する患者にとっては、ｍＡｂ３１６Ｐが有望な治療選択肢となることが確かめられる。

本発明は、本明細書に記載された具体的な実施態様によって範囲が限定されるものではない。実際に、さらに本明細書に記載されたもの加えて本発明のさまざまな改変は、前述の説明および添付の図面から当業者に明らかになるであろう。このような改変は添付の特許請求の範囲内にあるものとする。

Claims (48)

1. 常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を処置する方法であって、ＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方の対立遺伝子において機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）を担持する患者を選択することと、該患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物を投与することとを含む方法。
2. 前記ＧＯＦｍがＶ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬおよびＲ４９６Ｗからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、ＰＣＳＫ９変異体タンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＧＯＦｍがＳ１２７Ｒ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７ＨおよびＤ３７４Ｙからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むＰＣＳＫ９変異体タンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
4. 前記ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与前に、前記患者が、約７０ｍｇ／ｄＬを超えるかまたはそれに等しい血漿ＬＤＬ−Ｃ値を有することに基づいて選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与時、および／またはそれより前に前記患者がバックグラウンド脂質低下療法にある、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記バックグラウンド脂質低下療法がスタチン、エゼチミブ、フィブラート、ナイアシン、オメガ−３脂肪酸および胆汁酸樹脂からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与前に、前記患者が、約１８．０ｋｇ／ｍ２を超えるボディマス指数（ＢＭＩ）を有することに基づいてさらに選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記ＰＣＳＫ９阻害薬が、ＰＣＳＫ９を特異的に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬２０ｍｇ〜２００ｍｇを含む、請求項８に記載の方法。
10. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬５０ｍｇ〜１５０ｍｇを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬５０ｍｇを含む、請求項１０に記載の方法。
12. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬７５ｍｇを含む、請求項１０に記載の方法。
13. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬１００ｍｇを含む、請求項１０に記載の方法。
14. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬１５０ｍｇを含む、請求項１０に記載の方法。
15. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：９０／９２および２１８／２２６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む、請求項８〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の方法。
17. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号：２２６のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の方法。
19. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号：９２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２；または配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む抗体としてＰＣＳＫ９上の同じエピトープに結合する、請求項８に記載の方法。
21. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ＰＣＳＫ９への結合に関して、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２；または配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む抗体と競合する、請求項８に記載の方法。
22. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントがＰＣＳＫ９に対するｐＨ依存性結合特性を示す、請求項８に記載の方法。
23. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＰＣＳＫ９を結合する、請求項２２に記載の方法。
24. 常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を処置するための治療レジメンであって、該治療レジメンが、ＰＣＳＫ９遺伝子の一方または両方の対立遺伝子において機能獲得型変異（ＧＯＦｍ）を担持する患者を選択することと、該患者にＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の複数の用量を投与することとを含み、その際、該用量が、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、６週間毎に１回、８週間毎に１回、１０週間毎に１回および１２週間毎に１回からなる群から選択される投与頻度で該患者に投与される、治療レジメン。
25. 前記ＧＯＦｍがＶ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬおよびＲ４９６Ｗからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むＰＣＳＫ９変異体タンパク質をコードする、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ＧＯＦｍがＳ１２７Ｒ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７ＨおよびＤ３７４Ｙからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むＰＣＳＫ９変異体タンパク質をコードする、請求項２４に記載の方法。
27. 前記患者が、ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の投与前に約７０ｍｇ／ｄＬを超える、またはそれに等しい血漿ＬＤＬ−Ｃ値を有することに基づいてさらに選択される、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記患者が、前記ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の初回投与時に、かつ／またはその前にバックグラウンド脂質低下療法にある、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記バックグラウンド脂質低下療法がスタチン、エゼチミブ、フィブラート、ナイアシン、オメガ−３脂肪酸および胆汁酸樹脂からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
30. 前記患者が、前記ＰＣＳＫ９阻害薬を含む医薬組成物の初回投与前に約１８．０ｋｇ／ｍ²を超えるボディマス指数（ＢＭＩ）を有することに基づいてさらに選択される、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記ＰＣＳＫ９阻害薬が、ＰＣＳＫ９を特異的に結合する抗体または抗原結合性フラグメントである、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬２０ｍｇ〜２００ｍｇを含む、請求項３１に記載の方法。
33. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬５０ｍｇ〜１５０ｍｇを含む、請求項３２に記載の方法。
34. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬５０ｍｇを含む、請求項３３に記載の方法。
35. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬７５ｍｇを含む、請求項３３に記載の方法。
36. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬１００ｍｇを含む、請求項３３に記載の方法。
37. 前記医薬組成物が前記ＰＣＳＫ９阻害薬１５０ｍｇを含む、請求項３３に記載の方法。
38. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：９０／９２および２１８／２２６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対の重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む、請求項３１〜３７のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の方法。
40. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２１８のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号のアミノ酸配列：２２６を有するＬＣＶＲを含む、請求項３９に記載の方法。
41. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載の方法。
42. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：９０のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号：９２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項４１に記載の方法。
43. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２；または配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む抗体としてＰＣＳＫ９上の同じエピトープに結合する、請求項３１に記載の方法。
44. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ＰＣＳＫ９への結合に関して、配列番号：２２０、２２２、２２４、２２８、２３０および２３２；または配列番号：７６、７８、８０、８４、８６および８８を有する重鎖および軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列を含む抗体と競合する、請求項３１に記載の方法。
45. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントがＰＣＳＫ９に対するｐＨ依存性結合特性を示す、請求項３１に記載の方法。
46. 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＰＣＳＫ９を結合する、請求項４５に記載の方法。
47. 常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）を有する、または発症するリスクがある対象を特定するためのカスケードスクリーニング方法であって、（ａ）特定のＰＣＳＫ９機能獲得型変異（「ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍ」）を担持するＡＤＨを有する個体を最初に確認することと、（ｂ）ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍの存在に関して最初の個体の生物学的に関連する親族をスクリーニングすることとを含み、その際、１つまたはそれ以上の生物学的に関連した親族におけるＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍの存在により、このような親族を、ＡＤＨを有するか、または発症するリスクがある対象として特定する方法。
48. 前記ＰＣＳＫ９−ＧＯＦｍが、Ｖ４Ｉ、Ｅ３２Ｋ、Ｄ３５Ｙ、Ｅ４８Ｋ、Ｐ７１Ｌ、Ｒ９６Ｃ、Ｌ１０８Ｒ、Ｓ１２７Ｒ、Ｄ１２９Ｎ、Ｒ２１５Ｈ、Ｆ２１６Ｌ、Ｒ２１８Ｓ、Ｒ３５７Ｈ、Ｄ３７４Ｈ、Ｄ３７４Ｙ、Ｓ４６５ＬおよびＲ４９６Ｗからなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。