JP2019512472A - Ａｎｇｐｔｌ３阻害剤と組み合わせてｐｃｓｋ９阻害剤を投与することにより高脂血症を有する患者を処置するための方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、高コレステロール血症に罹患している患者を処置するための方法であって、ここで、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である前記方法を提供する。本発明の方法は、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）に特異的に結合する抗体の治療有効量と組み合わせて、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を投与することによって、患者において少なくとも１つの脂質パラメータを低下させる。抗ＰＣＳＫ９抗体の抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体との組合せは、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）であるｈｅＦＨおよびｈｏＦＨの両方を含む高コレステロール血症、ならびに高トリグリセリド血症、カイロミクロン血症を含む高脂血症、高リポタンパク質血症および脂質異常症などの疾患を処置する際にも、心血管疾患などの異常な脂質代謝がリスク因子となる疾患または障害を予防または処置するのにも有用である。

Description

本発明は、脂質およびリポタンパク質レベル上昇に関連する疾患および障害の治療的処置の分野に関する。より具体的には、本発明は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である、高コレステロール血症および関連する状態を有する患者を処置するための、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤と組み合わせたプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤の使用に関する。

高脂血症は、血中の脂質および／もしくはリポタンパク質のレベルの上昇を特徴とするまたは血中の脂質および／もしくはリポタンパク質のレベルの上昇に関連する疾患および障害を包含する総称である。高脂血症は、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、混合性高脂血症およびリポタンパク質ａ（Ｌｐ（ａ））の上昇を含む。多くの集団でよく見られる特定の型の高脂血症が、高コレステロール血症である。

高コレステロール血症、詳細には低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの増加は、アテローム性動脈硬化症および冠動脈心疾患（ＣＨＤ）発症の大きなリスクとなる（非特許文献１）。低密度リポタンパク質コレステロールは、コレステロール低下治療の主要標的とされており、妥当な代替治療エンドポイントとして受け入れられている。ＬＤＬ−ＣレベルとＣＨＤ事象との強い直接的関係のため、ＬＤＬ−Ｃレベルを低減させることがＣＨＤリスクを低減させることは、非常に多くの研究によって立証されており；ＬＤＬ−Ｃが１ｍｍｏｌ／Ｌ（約４０ｍｇ／ｄＬ）低減するごとに、心血管疾患（ＣＶＤ）死亡率および罹病率は２２％低下される。ＬＤＬ−Ｃの低減が大きいほど事象の大きな低減が生じ、集中スタチン処置の標準スタチン処置に対する比較データは、心血管（ＣＶ）リスクが非常に高い患者ではＬＤＬ−Ｃレベルが低いほどその便益が大きいことを示唆している。

家族性高コレステロール血症（ＦＨ）は、脂質代謝の遺伝性障害であり、この障害を有する人においては、早発性の重度心血管疾患（ＣＶＤ）の素因になる（非特許文献２）。ＦＨは、常染色体優性疾患または常染色体劣性疾患のいずれかであり得、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）中またはＬＤＬ−Ｃの肝臓クリアランスに関与するタンパク質をコードする少なくとも３つの異なる遺伝子中の、ＦＨを引き起こすことができる突然変異によりもたらされる。そのような欠陥の例として、血行からＬＤＬ−Ｃを除去するＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）をコードする遺伝子中およびＬＤＬ粒子の主要なタンパク質であるアポリポタンパク質（Ａｐｏ）Ｂの遺伝子中の突然変異が挙げられる。ＦＨの特定の症例においては、ＬＤＬＲの分解に関与する酵素であるプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）をコードする遺伝子が突然変異している（機能獲得型突然変異）。いずれの場合も、ＦＨは、出生時からの血漿中のＬＤＬ−Ｃの蓄積、ならびにその後の、腱の黄色腫、黄色板腫、アテローム、およびＣＶＤの発症を特徴とする。個体が遺伝子の欠陥を、関与する遺伝子の一方のコピーに有する（ヘテロ接合性）または両方のコピーに有する（ホモ接合性）のいずれであるかに依存して、ＦＨは、ヘテロ接合性ＦＨ（ｈｅＦＨ）またはホモ接合性ＦＨ（ｈｏＦＨ）のいずれかに分類することができる。

現行のＬＤＬ−Ｃ低下薬としては、スタチン、コレステロール吸収阻害剤、フィブラート、ナイアシンおよび胆汁酸封鎖剤が挙げられる。スタチンは、ＬＤＬ−Ｃを低下させるために通常処方される処置である。しかし、そのような脂質低下治療を利用することが可能であるにもかかわらず、多くの高リスク患者において、そのような治療のガイドラインが標的とするＬＤＬ−Ｃレベルを達成することができない（非特許文献３）。利用可能な脂質修飾治療（ＬＭＴ）にもかかわらず、ＬＤＬ−Ｃについてガイドラインが標的とするレベルを得るのが依然として不可能である患者には、時には、ＬＤＬ−Ｃを、リポタンパク質アフェレーシス（例えば、ＬＤＬアフェレーシス）により機械的に除去することが処方される。

しかし、最適化されたＬＭＴレジメンを受けているにもかかわらず、ＬＤＬ−Ｃの目標値に至らない患者は、代替のＬＤＬ−Ｃ低下治療から、または本明細書に記載する薬剤およびレジメンなどの治療薬の組合せの使用により、大きな便益を得るであろう。

Ｓｈａｒｒｅｔｔら、２００１、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０４：１１０８〜１１１３頁 Ｋｏｌａｎｓｋｙら（２００８）、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ、１０２（１１）：１４３８〜１４４３頁 Ｇｉｔｔら、２０１０年、Ｃｌｉｎ Ｒｅｓ Ｃａｒｄｉｏｌ、９９（１１）：７２３〜７３３頁

本発明は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である患者において、高脂血症を処置するための方法、使用および組成物を提供する。本発明の方法により治療した結果、血清リポタンパク質レベルが正常なかつ許容される範囲まで低下し、したがって、本発明の方法の作用により、アテローム性動脈硬化症または冠動脈心疾患を発症するリスクを低減させることができる。

一態様において、本発明は、高コレステロール血症に罹患している患者を処置する方法であって、ここで、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性であり、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤とアンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤との組合せを用いて患者を処置することを含む前記方法を提供する。

１つの実施形態において、本発明は、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上を、標準的な脂質修飾治療で処置されているまたは処置されたことがあるが、そのような治療に応答するに至っていない患者に投与する。ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤を患者に投与することにより、患者の血清中の少なくとも１つのリポタンパク質のレベルの低下をもたらし、その結果、標準的な脂質低下治療での処置に対する患者の必要性を低減または消失させる。

関連する態様において、本発明の方法は、高コレステロール血症を有する患者であって、標準的な脂質低下療法で処置されているまたは処置されたことがあり、そのような治療に非応答性であるか、そのような治療による制御が不十分であるか、またはそのような治療に不耐性である該患者を選択すること、およびＡＮＧＰＴＬ３抗体の１用量またはそれ以上と組み合わせたＰＣＳＫ９抗体の１用量またはそれ以上を患者に投与することを含み、それによって、患者の血清中の少なくとも１つのリポタンパク質のレベルを低下させ、その結果、標準的な脂質修飾治療の使用を、ＡＮＧＰＴＬ３抗体を加えたＰＣＳＫ９抗体の組合せ治療で置き換えて、標的とするリポタンパク質レベルを得る。

本発明の方法により処置されるまたは処置可能である患者として、例えば、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）を有する患者を含む、高コレステロール血症を有する患者が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の方法により処置されるまたは処置可能である患者は、ホモ接合性ＦＨ（ｈｏＦＨ）もしくはヘテロ接合性ＦＨ（ｈｅＦＨ）を有すると診断されている（それとも、そうであることが分かっている）患者、またはホモ接合性ＦＨ（ｈｏＦＨ）もしくはヘテロ接合性ＦＨ（ｈｅＦＨ）に関連して、異常に高い脂質および／またはリポタンパク質のレベルが生じるリスクを有する患者である。

本発明は、スタチンなどの標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、スタチンなどの標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、またはスタチンなどの標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である患者を処置する場合に使用するための、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含む医薬組成物も提供する。スタチンは、アトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標））、ピタバスタチン（ＬＩＶＡＬＯ（登録商標））、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標））、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標））、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標））、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標））およびロスバスタチン（ＣＲＥＳＴＯＲ（登録商標））からなる群から選択することができる。高コレステロール血症に罹患している患者において使用することができる他の標準的な脂質低下剤として、フィブラート、ナイアシン、胆汁酸封鎖剤、エゼチミブ（ＺＥＴＩＡ（登録商標））、ロミタピド（ＪＵＺＴＡＰＩＤ（商標））、植物ステロール、オルリスタット（ＸＥＮＩＣＡＬ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。

本発明の方法に関連して使用することができる例示的なＰＣＳＫ９阻害剤またはＡＮＧＰＴＬ３阻害剤として、例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体または抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体、小分子阻害剤、および足場に基づく分子、すなわち、ＰＣＳＫ９に結合する分子またはＡＮＧＰＴＬ３に結合する分子が挙げられる。

特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせてＰＣＳＫ９阻害剤を使用することは、血清の脂質および／またはリポタンパク質のレベルを低下させるのに十分に有効であり得、したがって、標準的な脂質修飾治療の用量を低減させて、何らかの都合の悪い作用を消失させることができ、または完全に消失させることができることが想定される。

１つの実施形態において、方法は、それを必要としている患者を、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片と組み合わせた、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片で処置する。１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、約７５ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、約１４０ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、約１５０ｍｇの用量で２週間または４週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、約３００ｍｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、約４２０ｍｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ロデルシズマブ（ｌｏｄｅｌｃｉｚｕｍａｂ）およびラルパンシズマブ（ｒａｌｐａｎｃｉｚｕｍａｂ）からなる群から選択される。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体はアリロクマブである。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

１つの実施形態において、ＰＣＳＫ９抗体は、患者に皮下または静脈内投与される。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約１５０ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約３００ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約４５０ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約３００ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約４５０ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される。１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体はエビナクマブ（ｅｖｉｎａｃｕｍａｂ）である。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む。

１つの実施形態において、ＡＮＧＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号３のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、患者に皮下または静脈内投与される。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体と組み合わせたＰＣＳＫ９抗体の投与は、ＬＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃおよび総コレステロールの血中レベルの低下に対して相加効果をもたらすが、ＨＤＬ−Ｃの血中レベルに対しては作用を示さない。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体と組み合わせたＰＣＳＫ９抗体の投与は、ＬＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃおよび総コレステロールの血中レベルの低下に対して相乗効果をもたらすが、ＨＤＬ−Ｃの血中レベルに対しては作用を示さない。

１つの実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３抗体と組み合わせたＰＣＳＫ９抗体の投与により、次のパラメータのうちの１つまたはそれ以上を低下させること：
（ａ）血清総コレステロール（ＴＣ）レベルの低減；
（ｂ）血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの低減；または
（ｃ）血清非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）レベルの低減
をもたらし；
ここで、（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）の低減は、ＰＣＳＫ９阻害剤とＡＮＧＰＴＬ３阻害剤との組合せを用いる処置の前または開始時の患者の血清ＴＣレベル、血清ＬＤＬ−Ｃレベルおよび／または血清非ＨＤＬ−Ｃレベルと比較して判定される。

本発明の他の実施形態は、後に続く詳細な説明の再考から明らかになるであろう。

高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、ＬＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを固形飼料で飼育し、マウスから、実験開始の５日前に事前採血した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、総コレステロールレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを固形飼料で飼育し、マウスから、実験開始の５日前に事前採血した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、ＨＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを固形飼料で飼育し、マウスから、実験開始の５日前に事前採血した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、非ＨＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを固形飼料で飼育し、マウスから、実験開始の５日前に事前採血した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、ＬＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを、処置まで３週間にわたって高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育し、研究期間中、この飼料による飼育を維持した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、総コレステロールレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを、処置まで３週間にわたって高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育し、研究期間中、この飼料による飼育を維持した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、ＨＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを、処置まで３週間にわたって高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育し、研究期間中、この飼料による飼育を維持した。 高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、非ＨＤＬ−Ｃレベルに対する、Ｈ４Ｈ１２７６ＰおよびＨ１Ｈ３１６Ｐの単独でまたは組み合わせて使用した場合の効果を示す図である。マウスを、処置まで３週間にわたって高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育し、研究期間中、この飼料による飼育を維持した。

本発明を説明する前に、本発明は説明する特定の方法および実験条件に限定されないことを理解すべきである。そのような方法および条件は変わることがあるからである。本明細書において用いる専門用語は、特定の実施形態の説明を目的にしたものに過ぎず、限定的することを意図したものでないことも理解すべきである。本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。

別段の定義がない限り、本明細書において用いる全ての科学技術用語は、本発明が属する技術に関わる当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書において用いる場合、特定の列挙されている数値に関して用いる用語「約」は、その値が、列挙されている値から１％以下変動することがあることを意味する。例えば、本明細書において用いる場合、「約１００」という表現は、９９および１０１、ならびに間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。

本明細書に記載のものと同様または等価の任意の方法および材料を本発明の実施の際に使用することができるが、好ましい方法および材料を次に説明する。本明細書において言及する全ての出版物は、それら全体が説明のために参照によって本明細書に組み入れられている。

高脂血症を処置するための方法
本発明は一般に、高コレステロール血症に罹患している患者であって、標準的な脂質修飾治療（例えば、スタチン）に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性である該患者において、リポタンパク質レベルを低減させるための方法および組成物に関する。本発明の特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤での処置は、これらの患者のリポタンパク質レベルを許容される範囲まで低下させるように働き、それによって、アテローム性動脈硬化症、脳卒中および他の心血管疾患を発症するそうした患者のリスクを低下させることができる。特定の実施形態において、記載の方法を使用して、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）および／またはホモ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｏＦＨ）を含む、高コレステロール血症に罹患している患者を、これらの患者が、標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性である場合には処置することができる。

本明細書において用いる場合、用語「リポタンパク質」は、タンパク質および脂質の両方を含有する生体分子の粒子を意味する。リポタンパク質の例として、例えば、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）およびリポタンパク質（ａ）（Ｌｐ（ａ））が挙げられる。

特定の実施形態によると、本発明は、標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性である患者を処置するための方法を含む。本明細書において用いる場合、「標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性である」特定の患者は、標準的な脂質修飾剤での処置後に患者の血清中で測定したまたは別の方法により検出した１つまたはそれ以上のリポタンパク質（例えば、ＬＤＬ−Ｃおよび／または非ＨＤＬ−Ｃ）のレベルに基づいて、医師、フィジシャンアシスタント（ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ ａｓｓｉｓｔａｎｔ）、診断医または他の医療専門家により判定される。医師、フィジシャンアシスタント、診断医または他の医療専門家はまた、これらに限定されないが、筋肉の痛み、圧痛もしくは衰弱（筋痛症）、頭痛、皮膚潮紅、睡眠困難、腹部筋痙攣、腹部膨満、下痢、便秘、発疹、悪心または嘔吐を含む、患者が経験し得る標準的な脂質修飾治療の副作用プロファイルに基づいて、患者が標準的な脂質修飾治療に不耐性であるかどうかを判定することもできる。また、標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性である患者は、患者の家族歴、医学的背景、現行の治療処置状況、ならびに国の医学会および医師のグループにより採用されている一般に認められているまたは広く使われているリポタンパク質標的などの他の因子により判定することもでき、またはそうした因子の影響を受ける可能性もある。例えば、特定の状況では、患者が、標準的な脂質修飾剤を用いて治療を受けており、約７０ｍｇ／ｄＬ以上のＬＤＬ−Ｃレベルを示す場合には、このことから、患者は、「標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、または標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性であり」、本明細書に記載する治療を使用する処置により便益を得ることができることが示される。他の状況では、患者が、標準的な脂質修飾剤を用いて治療を受けており、約１００ｍｇ／ｄＬ以上のＬＤＬ−Ｃレベルを示す場合には、このことから、患者は、「標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性であり」、本明細書に記載する治療を使用する処置により便益を得ることができることが示される。特定の状況では、患者が、標準的な脂質修飾剤を用いて治療を受けており、約１５０ｍｇ／ｄＬ、２００ｍｇ／ｄＬ、２５０ｍｇ／ｄＬ、３００ｍｇ／ｄＬ、４００ｍｇ／ｄＬまたはそれより大きな値以上のＬＤＬ−Ｃレベルを示す場合には、このことから、患者は、「標準的な脂質修飾治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療に不耐性であり」、本明細書に記載する治療を使用する処置により便益を得ることができることが示される。さらなる他の状況では、特定の開始点における患者のＬＤＬ−Ｃまたは非ＨＤＬ−Ｃのレベル（「ベースライン」）と比較して、ＬＤＬ−Ｃまたは非ＨＤＬ−Ｃのレベルの、百分率で示す特定の低減が満たされているか否かを使用して、患者が、標準的な脂質修飾治療に応答しているかどうか、またはその患者が、本発明の方法および薬剤を使用するさらなる処置を必要としているかどうかを判定することができる。例えば、ベースラインからの５０％未満（例えば、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満など）のＬＤＬ−Ｃまたは非ＨＤＬ−Ｃの低減は、本発明の方法および薬剤を使用する治療の必要性を意味し得る。

したがって、本発明は、処置方法であって、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上を患者に投与することを含み、それによって、該患者の処置後の総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃおよび／または非ＨＤＬ−Ｃのレベルを数値として顕著に低減させる前記方法を含む。例えば、本発明は、治療方法であって、ＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上を、標準的な脂質修飾治療を受けているが、そのような治療に非応答性であるか、またはそのような治療に不耐性である患者に投与することを含み、ここで、該患者は、該ＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上および該ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上を受けた後に、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃまたは非ＬＤＬ−Ｃの正常レベルを得ることが可能になる前記方法を含む。特定の事例では、標的とする特定のリポタンパク質レベルを得るおよび／または維持するために、患者は、標準的な脂質修飾治療を止めてもよく、または標準的な脂質修飾治療を継続してもよいが、より低い用量で投与することができ、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせて使用することができる。あるいは、ＰＣＳＫ９阻害剤とＡＮＧＰＴＬ３阻害剤との組合せと併せて標準的な脂質修飾治療を投与しようとする場合には、標準的な脂質修飾治療は、通常処方される用量で患者に投与してもよいが、脂質修飾治療の投与頻度を低減させることができる。いくつかの事例では、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と併せてＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上を投与した後には、標的とする特定のリポタンパク質レベルを得るおよび／または維持するための、標準的な脂質修飾治療での処置に対する患者の必要性を完全に消失させることができる。

特定の実施形態によると、本発明は、標準的な脂質修飾治療に対する必要性を低減または消失させるための方法であって、過去１カ月、過去２カ月、過去３カ月、過去４カ月、過去５カ月、過去６カ月またはより長い期間にわたり脂質修飾治療で処置されている、高脂血症（例えば、高コレステロール血症）を有する患者を選択すること、およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上を患者に投与することを含む前記方法を含む。本発明のこの態様による方法は、患者の血清中の少なくとも１つのリポタンパク質のレベルの低下をもたらし、その結果、標準的な脂質修飾治療での処置に対する患者の必要性の低減または消失が可能になる。例えば、本発明の特定の実施形態において、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤の１用量またはそれ以上の投与後に、患者の血清ＬＤＬ−Ｃレベルは、定義されたレベル未満（例えば、１００ｍｇ／ｄＬ未満もしくは７０ｍｇ／ｄＬ未満）まで低減する、または総コレステロールは、定義されたレベル（例えば、２００ｍｇ／ｄＬ未満もしくは１５０ｍｇ／ｄＬ未満）まで低下する。

特定の実施形態によると、本発明の方法により処置可能である患者は、高コレステロール血症（例えば、７０ｍｇ／ｄＬ以上の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度または１００ｍｇ／ｄＬ以上の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度）を有する。特定の実施形態において、患者の高コレステロール血症は、標準的な脂質修飾治療、例えば、スタチン治療による制御が不十分である。例えば、本発明は、スタチンなどの標準的な脂質修飾治療での治療に非応答性である、スタチンなどの標準的な脂質修飾治療での治療による制御が不十分である、もしくはスタチンなどの標準的な脂質修飾治療での治療に不耐性である患者、またはアトルバスタチン（アトルバスタチン＋エゼチミブを含む）、ロスバスタチン、セリバスタチン、ピタバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン（シンバスタチン＋エゼチミブを含む）、プラバスタチン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるスタチンの１日用量による制御が不十分である、高コレステロール血症を有する患者を処置するための方法を含む。本発明は、高コレステロール血症を有する患者であって、スタチン不耐性を示す、またはスタチン不耐性ではないが、スタチン治療に対する有害なもしくは望ましくない反応（例えば、骨格筋痛、痛み、衰弱または筋痙攣［例えば、筋痛症、ミオパチー、横紋筋融解など］）を経験している該患者において、コレステロール、ＬＤＬ−Ｃまたは非ＬＤＬ−Ｃを低減させるための方法も含む。

患者選択
本発明は、高脂血症に罹患している患者であって、標準的な脂質修飾治療を用いる治療に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療を用いる治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療を用いる治療に不耐性である該患者を処置するのに有用な、方法および組成物を含む。本発明の方法により処置可能である患者はまた、追加の選択基準のうちの１つまたはそれ以上も示し得る。例えば、患者が、例えばヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｅＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ｈｏＦＨ）、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ、例えば、ＰＣＳＫ９遺伝子の１つまたはそれ以上の機能獲得型突然変異に関連するＡＤＨ）、常染色体劣性高コレステロール血症（ＡＲＨ、例えば、ＬＤＬＲＡＰ１の突然変異に関連するＡＲＨ）などの、高コレステロール血症状態と診断された、または高コレステロール血症状態を発症するリスクがあると識別された場合、および患者が、家族性高コレステロール血症とは異なる高コレステロール血症（非ＦＨ）を発症していると診断された、または非ＦＨを発症するリスクがあると識別された場合には、その患者を本発明の方法での処置に選択することができる。家族性高コレステロール血症（例えば、ｈｅＦＨまたはｈｏＦＨ）の診断は、遺伝子型判定および／または臨床基準により行うことができる。遺伝子型判定を受けない患者については、臨床診断は、ＦＨを確定する基準であるサイモン・ブルーム基準、または＞８点のスコアを用いるＷＨＯ／Ｄｕｔｃｈ Ｌｉｐｉｄ Ｎｅｔｗｏｒｋ基準のいずれかに基づくことができる。

特定の実施形態によると、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）歴を有することに基づいて患者を選択することができる。本明細書において用いる場合、「ＣＨＤ歴」（または「記録されたＣＨＤ歴」）は、（ｉ）急性心筋梗塞（ＭＩ）；（ｉｉ）無症候性ＭＩ；（ｉｉｉ）不安定狭心症；（ｉｖ）冠動脈血行再建術（例えば、経皮的冠動脈形成術［ＰＣＩ］もしくは冠動脈バイパス移植術［ＣＡＢＧ］）；および／または（ｖ）侵襲的もしくは非侵襲的検査（例えば、冠動脈造影法、トレッドミルを使用する負荷テスト、負荷心エコー検査または核イメージング）によって診断された臨床的に有意なＣＨＤのうちの１つまたはそれ以上を含む。

特定の実施形態によると、非冠動脈心疾患性心血管疾患（「非ＣＨＤ ＣＶＤ」）を有することに基づいて、患者を選択することができる。本明細書において用いる場合、「非ＣＨＤ ＣＶＤ」は、（ｉ）局所的な虚血性神経学的欠損を有し、２４時間超持続したことが記録されている過去の虚血性脳卒中であって、アテローム血栓を起源とするとみなされる該虚血性脳卒中；（ｉｉ）末梢動脈疾患；（ｉｉｉ）腹部大動脈瘤；（ｉｖ）アテローム硬化性腎動脈狭窄；および／または（ｖ）頚動脈疾患（一過性虚血性発作、もしくは頚動脈の＞５０％の閉塞）のうちの１つまたはそれ以上を含む。

特定の実施形態によると、例えば、（ｉ）３カ月以上にわたる、３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２≦ｅＧＦＲ＜６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２のｅＧＦＲにより定義される中等度の慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）が記録されていること；（ｉｉ）標的臓器障害（例えば、網膜症、腎障害、微量アルブミン尿症）の有無にかかわらず、１型または２型の糖尿病；（ｉｉｉ）≧５％の算定１０年致死性ＣＶＤリスクＳＣＯＲＥなどの、１つまたはそれ以上の追加のリスク因子を有することに基づいて、患者を選択することができる（ＥＳＣ／ＥＡＳ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ、Ｃｏｎｒｏｙら、２００３年、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．、２４：９８７〜１００３頁）。

特定の実施形態によると、年齢（例えば、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５または８０歳より高齢）、人種、出身国、性別（男性または女性）、運動習慣（例えば、運動する習慣のある人、運動しない人）、他の既存の病状（例えば、ＩＩ型糖尿病、高血圧など）および現在の投薬状態（例えば、現在摂取しているβ遮断薬、ナイアシン、エゼチミブ、フィブラート、オメガ３脂肪酸、胆汁酸樹脂など）からなる群から選択される１つまたはそれ以上の追加のリスク因子を有することに基づいて患者を選択することができる。

本発明の特定の実施形態によると、本発明の方法により処置可能である被験者は、１つまたはそれ以上の炎症マーカーのレベルの上昇を示す。本発明では、全身性炎症の任意のマーカーを利用することができる。好適な炎症マーカーとして、非限定的に、Ｃ反応性タンパク質、サイトカイン（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８および／またはＩＬ−１７）、ならびに細胞接着分子（例えば、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭおよびＰＥＣＡＭ）が挙げられる。

本発明によると、上述の選択基準または治療特性のうちの１つまたはそれ以上の組合せに基づいて、患者を選択することができる。例えば、特定の実施形態によると、ｈｅＦＨまたは非ＦＨを、（ｉ）ＣＨＤの病歴が記録されていること、（ｉｉ）非ＣＨＤ ＣＶＤ、および／または（ｉｉｉ）標的臓器障害を有する糖尿病と組み合わせて有することに基づいて、本発明の方法での処置に好適な患者をさらに選択することができる；そのような患者は、７０ｍｇ／ｄＬ以上の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度を有することに基づいて選択することもできる。

特定のその他の実施形態によると、本発明の方法での処置に好適な患者は、毎日の中等度の用量の治療スタチンレジメンによる制御が十分ではない高コレステロール血症を有することに加えて、ＣＨＤのないｈｅＦＨもしくは非ＦＨ、または非ＣＨＤ ＣＶＤのないｈｅＦＨもしくは非ＦＨを有するが、（ｉ）≧５％の算定１０年致死性ＣＶＤリスクＳＣＯＲＥ；または（ｉｉ）標的臓器障害を有しない糖尿病のいずれかを有することに基づいてさらに選択することができる；そのような患者は、１００ｍｇ／ｄＬ以上の血清ＬＤＬ−Ｃ濃度を有することに基づいて選択することもできる。

本発明の特定の実施形態によると、本発明の方法により処置可能である被験者は、家族性カイロミクロン血症症候群（ＦＣＳ；リポタンパク質リパーゼ欠損症としても公知である）を有する被験者である。

本発明の特定の実施形態によると、本発明の方法により処置可能である被験者は、リポタンパク質アフェレーシスを受けているまたは最近（例えば、過去６カ月以内、過去１２週以内、過去８週以内、過去６週以内、過去４週以内、過去２週以内などに）受けたことがある被験者である。

ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を加えたＰＣＳＫ９阻害剤のアドオン治療としての投与
本発明は、処置方法であって、標準的な脂質修飾治療（例えば、スタチン）を受けているまたは最近受けたことがある患者に、ＰＣＳＫ９阻害剤を、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を加えて、特定の投薬量および頻度に従って投与し、該ＰＣＳＫ９阻害剤および該ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を、（該当する場合には）該患者の既存の毎日の治療スタチンレジメンへのアドオンなどの該患者の既存の脂質修飾治療へのアドオンとして投与する前記方法を含む。

例えば、本発明の方法は、アドオン治療レジメンを含み、ここで、ＰＣＳＫ９およびＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤を与えるまで患者に投与していたのと同じ安定した毎日の治療スタチンレジメン（すなわち、同じ投薬量のスタチン）へのアドオン治療として、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を投与する。その他の実施形態において、ＰＣＳＫ９およびＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤を与えるまで患者に投与していたスタチンの用量を上回る量、またはＰＣＳＫ９およびＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤を与えるまで患者に投与していたスタチンの用量を下回る量のスタチンを含む治療スタチンレジメンへのアドオン治療として、ＰＣＳＫ９およびＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤を投与する。例えば、特定の投薬頻度および量で投与するＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含む治療レジメンの開始後、患者の治療必要性に依存して、患者に投与または処方するスタチンの１日用量は、ＰＣＳＫ９およびＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤による治療レジメンを開始する前に患者が服用していた毎日のスタチンの用量と比較して、（ａ）同じに留めても、（ｂ）増加させても、または（ｃ）減少させてもよい（例えば、アップタイトレーションしても、またはダウンタイトレーションしてもよい）。

治療効能
本発明の方法は、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ、アポＢ１００、ＶＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）およびレムナントコレステロールからなる群から選択される１つまたはそれ以上の脂質成分の血清レベルの低減をもたらすことができる。例えば、本発明の特定の実施形態によると、好適な被験者へのＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤の投与は、ベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％もしくはそれ以上の血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の平均低減率；ベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％もしくはそれ以上のアポＢ１００の平均低減率；ベースラインからの少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％もしくはそれ以上の非ＨＤＬ−Ｃの平均低減率；ベースラインからの少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％もしくはそれ以上の総コレステロールの平均低減率；ベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％もしくはそれ以上のＶＬＤＬ−Ｃの平均低減率；ベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％もしくはそれ以上のトリグリセリドの平均低減率；および／またはベースラインからの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％もしくはそれ以上のＬｐ（ａ）の平均低減率をもたらすことになる。

ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤
本発明の方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含む治療用組成物を患者に投与することを含む。

ＰＣＳＫ９阻害剤
本明細書において用いる場合、「ＰＣＳＫ９阻害剤」は、ヒトＰＣＳＫ９と結合し、またはヒトＰＣＳＫ９と相互作用し、かつインビボまたはインビトロでＰＣＳＫ９の正常な生物学的機能を阻害する、任意の薬剤である。ＰＣＳＫ９阻害剤のカテゴリーの非限定的な例として、小分子ＰＣＳＫ９アンタゴニスト、ＰＣＳＫ９の発現または活性の核酸ベースの阻害剤（例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）、ＰＣＳＫ９と特異的に相互作用するペプチドベースの分子（例えば、ペプチボディ）、ＰＣＳＫ９と特異的に相互作用する受容体分子、ＬＤＬ受容体のリガンド結合部分を含むタンパク質、ＰＣＳＫ９に結合する足場分子（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ＨＥＡＴリピートタンパク質、ＡＲＭリピートタンパク質、テトラトリコペプチドリピートタンパク質、フィブロネクチンベースの足場構築物、ならびに足場に基づく天然に存在する他のリピートタンパク質など［例えば、ＢｏｅｒｓｍａおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、２０１１年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２２：８４９〜８５７頁、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい］）、ならびに抗ＰＣＳＫ９アプタマーまたはそれらの部分が挙げられる。特定の実施形態によると、本発明に関連して使用することができるＰＣＳＫ９阻害剤は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗ＰＣＳＫ９抗体または抗体の抗原結合断片である。

用語「ヒトプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型」または「ヒトＰＣＳＫ９」または「ｈＰＣＳＫ９」は、本明細書において用いる場合、配列番号２２で示される核酸配列および配列番号２３のアミノ酸配列を有するＰＣＳＫ９、またはその生物活性断片を指す。

ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤
本明細書において用いる場合、「ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤」は、ヒトＡＮＧＰＴＬ３と結合し、またはヒトＡＮＧＰＴＬ３と相互作用し、かつインビトロまたはインビボでＡＮＧＰＴＬ３の正常な生物学的機能を阻害する任意の薬剤である。ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤のカテゴリーの非限定的な例として、小分子ＡＮＧＰＴＬ３アンタゴニスト、ＡＮＧＰＴＬ３の発現または活性の核酸ベースの阻害剤（例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）、ＡＮＧＰＴＬ３と特異的に相互作用するペプチドベースの分子（例えば、ペプチボディ）、ＡＮＧＰＴＬ３と特異的に相互作用する受容体分子、ＡＮＧＰＴＬ３に結合する足場分子、（例えば、ＤＡＲＰｉｎ、ＨＥＡＴリピートタンパク質、ＡＲＭリピートタンパク質、テトラトリコペプチドリピートタンパク質、フィブロネクチンベースの足場構築物、ならびに足場に基づく天然に存在する他のリピートタンパク質など［例えば、ＢｏｅｒｓｍａおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、２０１１年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２２：８４９〜８５７頁、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい］）、ならびに抗ＡＮＧＰＴＬ３アプタマーまたはそれらの部分が挙げられる。特定の実施形態によると、本発明に関連して使用することができるＡＮＧＰＴＬ３阻害剤は、ヒトＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体または抗体の抗原結合断片である。

用語「ヒトアンジオポエチン様タンパク質−３」または「ヒトＡＮＧＰＴＬ３」または「ｈＡＮＧＰＴＬ３」は、本明細書において用いる場合、配列番号１のアミノ酸配列を有するＡＮＧＰＴＬ３（ＮＣＢＩ受託ＮＰ＿０５５３１０も参照されたい）またはその生物活性断片を指す。

用語「抗体」は、本明細書において用いる場合、４本のポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互に連結されている２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖、を含む免疫グロブリン分子、およびその多量体（例えば、ＩｇＭ）を指すことを意図したものである。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶ_Ｈと略記する）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３、を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶ_Ｌと略記する）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（Ｃ_Ｌ１）を含む。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存される領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性の領域にさらに細分することができる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端へ次の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の種々の実施形態において、抗ＰＣＳＫ９抗体（またはその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であることもあり、または天然にもしくは人工的に修飾されていることもある。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれ以上のＣＤＲの並行分析に基づいて定義することができる。

用語「抗体」は、本明細書において用いる場合、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書において用いる場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する任意の天然に存在する、酵素的に得ることができる、合成の、または遺伝子改変ポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、タンパク質消化、または抗体可変および場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子改変法などの、任意の好適な標準的技法を用いて完全抗体分子から得ることができる。そのようなＤＮＡは、公知でありおよび／または例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に調達することができ、または合成することができる。ＤＮＡをシークエンシングし、化学的にまたは分子生物学技法の使用によって操作して、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常領域を好適な高次構造に配置すること、またはコドンを導入すること、システイン残基を生成すること、アミノ酸を修飾する、付加させるまたは欠失させることなどができる。

抗原結合断片の非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ３ペプチド）を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位、または拘束ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の改変分子、例えば、ドメイン特異的抗体、シングルドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメインも、本明細書において用いる場合の「抗原結合断片」という表現に包含される。

抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの可変ドメインを概して含むことになる。可変ドメインは、いずれのサイズまたはアミノ酸組成のものであり、一般的には、少なくとも１つのＣＤＲを含むことになり、それは１つもしくはそれ以上のフレームワーク配列に隣接しているまたは１つもしくはそれ以上のフレームワーク配列とインフレームである。Ｖ_Ｌドメインと会合しているＶ_Ｈドメインを有する抗原結合断片の場合、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌドメインは、互いに対してあらゆる好適な配置で位置することができる。例えば、可変領域は、二量体であり、Ｖ_Ｈ−Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｈ−Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ−Ｖ_Ｌ二量体を含有することがある。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌドメインを含有することもある。

特定の実施形態において、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結されている少なくとも１つの可変ドメインを含有することがある。本発明の抗体の抗原結合断片内で見つけることができる可変および定常ドメインの非限定的、例示的高次構造としては、（ｉ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１；（ｉｉ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ２；（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ３；（ｉｖ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１−Ｃ_Ｈ２；（ｖ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１−Ｃ_Ｈ２−Ｃ_Ｈ３；（ｖｉ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ２−Ｃ_Ｈ３；（ｖｉｉ）Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｌ；（ｖｉｉｉ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ１；（ｉｘ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ２；（ｘ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ３；（ｘｉ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ１−Ｃ_Ｈ２；（ｘｉｉ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ１−Ｃ_Ｈ２−Ｃ_Ｈ３；（ｘｉｉｉ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｈ２−Ｃ_Ｈ３；および（ｘｉｖ）Ｖ_Ｌ−Ｃ_Ｌが挙げられる。上に列挙した例示的高次構造のいずれかを含む、可変および定常ドメインのいずれの高次構造においても、可変および定常ドメインは、互いに直接連結されていることもあり、または完全もしくは部分ヒンジもしくはリンカー領域によって連結されていることもある。ヒンジ領域は、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなることがあり、その結果、単一ポリペプチド分子内の隣接した可変および／または定常ドメイン間の柔軟なまたはやや柔軟な連鎖となる。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いにおよび／または１つもしくはそれ以上の単量体Ｖ_ＨもしくはＶ_Ｌドメインと非共有結合で（例えば、ジスルフィド結合によって）会合している、上に列挙したいずれかの可変および定常ドメイン高次構造のホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含むことがある。

完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性であることもあり、または多重特異性（例えば、二重特異性）であることもある。抗体の多重特異性抗原結合断片は、各可変ドメインが別個の抗原にまたは同じ抗原上の異なるエピトープと特異的に結合できる、少なくとも２つの異なる可変ドメインを概して含むことになる。本明細書において開示する例示的二重特異性抗体形式を含む、いずれの多重特異性抗体形式も、当技術分野において利用可能な常例的技法を用いる本発明の抗体の抗原結合断片との関連での使用に適応させることができる。

抗体の定常領域は、補体を固定し、細胞依存性細胞傷害を媒介する抗体の能力に重要である。したがって、抗体が細胞傷害を媒介することが望ましいかどうかに基づいて抗体のアイソタイプを選択することができる。

用語「ヒト抗体」は、本明細書において用いる場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことを意図したものである。とはいえ、本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたはインビボでの体細胞突然変異によって誘導された突然変異）を、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３に含むことがある。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書において用いる場合、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことを意図したものではない。この用語は、非ヒト哺乳動物または非ヒト哺乳動物細胞において組換えにより生産された抗体を含む。この用語は、ヒト被験者から単離された抗体、およびヒト被験者において産生された抗体を含むことを意図したものではない。

用語「組換えヒト抗体」は、本明細書において用いる場合、組換え手段によって製造、発現、生成または単離される全てのヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現される抗体（さらに下で説明する）、組換え体から単離された抗体、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリー（下でさらに説明する）、ヒト免疫グロブリン遺伝子が遺伝子導入されている動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって製造、発現、生成もしくは単離された抗体を含むことを意図したものである。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。しかし、特定の実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列が遺伝子導入された動物を使用する場合にはインビボ体細胞突然変異）に付されるので、該組換え抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列に由来し、ヒト生殖細胞系Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列と類縁の配列だが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然に存在できない配列である。

ヒト抗体は、２つの形態で存在することができ、これらの形態がヒンジ異質性に関連する。一方の形態の場合、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合によって一緒に保持されている、おおよそ１５０〜１６０ｋＤａの安定した４鎖構築物を含む。第２の形態の場合、二量体は鎖間ジスルフィド結合によって連結されておらず、約７５〜８０ｋＤａの分子が、共有結合でカップリングされた軽鎖と重鎖で形成され、構成される（ハーフ抗体（half-antibody））。これらの形態は、アフィニティー精製後でさえ分離することが極めて難しかった。

様々なインタクトＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造の違いに、これに限定されるものではないが、起因する。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、第２の形態の出現を、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して概して観察されるレベルに、有意に低減させることができる（Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１０５）。本発明は、例えば生産の際、所望の抗体形態の収率を向上させるために望ましいことがある、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３領域に１つまたはそれ以上の突然変異を有する抗体を包含する。

「単離された抗体」は、本明細書において用いる場合、その天然環境の少なくとも１つの成分から同定および分離および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの成分から分離もしくは除去された抗体、またはその抗体が天然に存在するもしくは天然に生産される組織もしくは細胞から分離もしくは除去された抗体は、本発明では「単離された抗体」である。単離された抗体は、組換え細胞内の生体内原位置の抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１工程の精製または単離工程に付された抗体である。特定の実施形態によると、単離された抗体には、他の細胞物質および／または化学物質が実質的にないこともある。

用語「特異的に結合する」またはこれに類する用語は、抗体またはその抗原結合断片が、生理条件下で比較的安定している抗原との複合体を形成することを意味する。抗体が抗原と特異的に結合するかどうかを判定する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。例えば、ＰＣＳＫ９「に特異的に結合する」抗体、またはＡＮＧＰＴＬ３「に特異的に結合する」抗体は、本発明に関連して用いる場合、表面プラズモン共鳴アッセイで測定して、約１０００ｎＭ未満、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、または約０．５ｎＭ未満のＫ_Ｄで、ＰＣＳＫ９、またはＡＮＧＰＴＬ３、またはその一部に結合する抗体を含む。しかし、ヒトＰＣＳＫ９またはヒトＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する単離された抗体は、他の（非ヒト）種からのＰＣＳＫ９分子またはＡＮＧＰＴＬ３分子などの、他の抗原への交差反応性を有する。

本発明の方法に有用な抗ＰＣＳＫ９および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、該抗体が由来する対応する生殖細胞系配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことがある。そのような突然変異は、本明細書において開示するアミノ酸配列を例えば公開抗体配列データベースから入手できる生殖細胞系配列と比較することによって、容易に突き止めることができる。本発明は、本明細書において開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびそれらの抗原結合断片の使用を含む方法であって、１つまたはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸が、該抗体が由来する生殖細胞系配列の対応する残基に、または別のヒト生殖細胞系配列の対応する残基に、または対応する生殖細胞系残基の保存的アミノ酸置換に突然変異される（このような配列交換を本明細書ではまとめて「生殖細胞系突然変異」と呼ぶ）前記方法を含む。当業者は、本明細書において開示する重鎖および軽鎖可変領域配列で出発して、１つもしくはそれ以上の個々の生殖細胞系突然変異またはそれらの組合せを含む多数の抗体および抗原結合断片を容易に生産することができる。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈおよび／またＶ_Ｌドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、抗体が由来する元の生殖細胞系配列中で見つけられる残基に復帰突然変異される。他の実施形態では、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸中もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸中で見つけられる突然変異残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内で見つけられる突然変異残基のみが、元の生殖細胞系配列に復帰突然変異される。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つまたはそれ以上が、異なる生殖細胞系配列（すなわち、抗体が当初由来した生殖細胞系配列とは異なる生殖細胞系配列）の対応する残基に突然変異される。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に、２つまたはそれ以上の生殖細胞系突然変異の何らかの組合せ、例えば、特定の個々の残基は特定の生殖細胞系配列の対応する残基に突然変異されるが、元の生殖細胞系配列とは異なる特定の他の残基は維持されるか、または異なる生殖細胞系配列の対応する残基に突然変異される組合せを含有することもある。１つまたはそれ以上の生殖細胞系突然変異を含有する抗体および抗原結合断片は、ひとたび得てしまえば、１つまたはそれ以上の所望の特性、例えば、結合特異性改善、結合親和性増加、（場合によって）アンタゴニストまたはアゴニストとしての生物学的特性改善または向上、免疫原性低減などについて容易に試験することができる。この一般的手法で得られる抗体および抗原結合断片の使用は、本発明に包含される。

本発明は、１つまたはそれ以上の保存的置換を有する本明細書において開示するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかについての変異体を含む抗ＰＣＳＫ９および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の使用を含む方法も含む。例えば、本発明は、例えば、本明細書において開示するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して１０またはそれ以下、８またはそれ以下、６またはそれ以下、４またはそれ以下などの保存的アミノ酸置換を有する、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＰＣＳＫ９および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の使用を含む。

用語「表面プラズモン共鳴」は、本明細書において用いる場合、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）システム（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｄｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用してバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度変化の検出によりリアルタイム相互作用を分析することができる光学現象を指す。

用語「Ｋ_Ｄ」は、本明細書において用いる場合、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図したものである。

用語「エピトープ」は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域内の特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が１つより多くのエピトープを有することもある。それ故、抗体によって、結合する抗原領域が異なることもあり、有する生物学的効果が異なることもある。エピトープは、高次構造であることもあり、または線状であることもある。高次構造エピトープは、直鎖状ペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に隣り合って並ぶアミノ酸によって生成される。線状エピトープは、ポリペプチド鎖内の隣接したアミノ酸残基によって生成されるものである。特定の状況では、エピトープは、抗原上の糖類、ホスホリル基またはスルホニル基部分を含むことがある。

特定の実施形態によると、本発明の方法において使用される抗ＰＣＳＫ９抗体および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、ｐＨ依存性結合特性を有する抗体である。本明細書において用いる場合、「ｐＨ依存性結合」という表現は、抗体もしくはその抗原結合断片が、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＰＣＳＫ９との結合低減」を示す（本開示では、両方の表現を同義で用いることがある）こと、または抗体もしくはその抗原結合断片が、「中性ｐＨと比較して酸性ｐＨでＡＮＧＰＴＬ３との結合低減」を示す（本開示では、両方の表現を同義で用いることがある）ことを意味する。例えば、「ｐＨ依存性結合特性を有する」抗体は、酸性ｐＨでより中性ｐＨでのほうが高い親和性でＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３のいずれかに結合する抗体およびそれらの抗原結合断片を含む。特定の実施形態において、本発明の抗体およびそれらの抗原結合断片は、酸性ｐＨでより中性ｐＨでのほうが少なくとも３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００倍またはそれ以上高い親和性でＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３に結合する。

本発明のこの態様によると、ｐＨ依存性結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体またはＡＮＧＰＴＬ３抗体は、親抗ＰＣＳＫ９抗体または親抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体と比較して１つまたはそれ以上のアミノ酸変異を有することがある。例えば、ｐＨ依存性結合特性を有する抗ＰＣＳＫ９抗体または抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、例えば、親抗ＰＣＳＫ９抗体または親抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲ内に、１つまたはそれ以上のヒスチジン置換または挿入を有することがある。それ故、本発明の特定の実施形態に従って、親抗体の１つまたはそれ以上のＣＤＲの１つまたはそれ以上のアミノ酸のヒスチジン残基での置換を除いて親抗ＰＣＳＫ９抗体または親抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＣＤＲアミノ酸配列と同一であるＣＤＲアミノ酸配列（例えば、重鎖および軽鎖ＣＤＲ）を含む抗ＰＣＳＫ９抗体および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を投与することを含む方法を提供する。ｐＨ依存性結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体または抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、親抗ＰＣＳＫ９抗体の単一のＣＤＲ内に、または親抗ＰＣＳＫ９抗体または親抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の複数（例えば、２、３、４、５もしくは６）のＣＤＲ全体にわたって分布している、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれ以上のヒスチジン置換を有することがある。例えば、本発明は、親抗ＰＣＳＫ９抗体または親抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体のＨＣＤＲ１に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ２に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＨＣＤＲ３に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ１に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、ＬＣＤＲ２に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換、および／またはＬＣＤＲ３に１つもしくはそれ以上のヒスチジン置換を含む、ｐＨ依存性結合を有する抗ＰＣＳＫ９抗体および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の使用を含む。

本明細書において用いる場合、「酸性ｐＨ」という表現は、６．０またはそれ以下（例えば、約６．０未満、約５．５未満、約５．０未満など）のｐＨを意味する。「酸性ｐＨ」という表現は、約６．０、５．９５、５．９０、５．８５、５．８、５．７５、５．７、５．６５、５．６、５．５５、５．５、５．４５、５．４、５．３５、５．３、５．２５、５．２、５．１５、５．１、５．０５、５．０またはそれ以下のｐＨ値を含む。本明細書において用いる場合、「中性ｐＨ」という表現は、約７．０〜約７．４のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、約７．０、７．０５、７．１、７．１５、７．２、７．２５、７．３、７．３５および７．４のｐＨ値を含む。

本発明に関連して使用することができる抗ＰＣＳＫ９抗体の非限定的な例としては、アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ロデルシズマブ、ラルパンシズマブ、または上述の抗体のうちのいずれかの抗原結合部分が挙げられる。

本発明に関連して使用することができる抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の非限定的な例としては、エビナクマブが挙げられる。

ヒト抗体の製造
当技術分野で公知の抗体産生／単離の任意の方法に従って、抗ＰＣＳＫ９抗体および抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を作製することができる。例えば、本発明の方法において使用するための抗体は、ハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイなどにより作製することができる。本発明の方法において使用するための抗体は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体であり得る。

トランスジェニックマウスでヒト抗体を産生する方法は当技術分野において公知である。任意のそのような公知の方法を本発明に関連して使用して、ＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３と特異的に結合するヒト抗体を作製することができる。

例えば、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（商標）技術（例えば米国特許第６，５９６，５４１号、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓを参照されたい）、またはモノクローナル抗体の任意の他の公知産生方法を用いて、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、ＰＣＳＫ９またはＡＮＧＰＴＬ３に対する高親和性キメラ抗体を、最初に単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、マウスが抗原刺激に応答してヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を生産するように、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの産生を含む。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結させる。その後、完全ヒト抗体を発現することができる細胞においてそのＤＮＡを発現させる。

一般には、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに、対象とする抗原を感作させ、抗体を発現しているマウスからリンパ細胞（例えば、Ｂ細胞）を回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合させて不死ハイブリドーマ細胞株を製造することができ、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、対象とする抗原に特異的な抗体を生産するハイブリドーマ細胞株を同定する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、重鎖および軽鎖の望ましいアイソタイプ定常領域に連結させることができる。そのような抗体タンパク質を、ＣＨＯ細胞などの細胞において生産することができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体をコードするＤＮＡ、または重鎖および軽鎖の可変ドメインを、抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。

ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。当業者に公知の標準的手順を用いて、抗体を特性評価し、親和性、選択性、エピトープなどをはじめとする所望の特定について選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置換して、本発明の完全ヒト抗体、例えば野生型または修飾ＩｇＧ１またはＩｇＧ４、を産生させる。選択される定常領域は具体的な用途によって変わることがあるが、高親和性抗原結合特性および標的特異性が可変領域にある。

一般に、本発明の方法で使用することができる抗体は、固相に固定された抗原または溶液相中の抗原と結合させることによって測定したとき、上で説明したような高い親和性を有する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置換して、本発明の完全ヒト抗体を産生させる。選択される定常領域は具体的な用途によって変わることがあるが、高親和性抗原結合特性および標的特異性が可変領域にある。

本発明の方法に関連して使用することができる、ＰＣＳＫ９に特異的に結合するヒト抗体または抗体の抗原結合断片の具体的な例としては、配列番号１２／１７を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列の対に由来する６つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む抗体または抗原結合タンパク質が挙げられる。

本発明の特定の実施形態において、本発明の方法で使用することができる抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、１４、１５、１８、１９および２１のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域および軽鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む。

本発明の特定の実施形態において、本発明の方法で使用することができる抗ＰＣＳＫ９抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

本発明の方法に関連して使用することができる、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合するヒト抗体または抗体の抗原結合断片の具体的な例としては、配列番号２／３を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）のアミノ酸配列の対に由来する６つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む抗体または抗原結合タンパク質が挙げられる。

本発明の特定の実施形態において、本発明の方法で使用することができる抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４、５、６、７、８および９のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域および軽鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）を含む。

本発明の特定の実施形態において、本発明の方法で使用することができる抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号３のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。

医薬組成物および投与方法
本発明は、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせたＰＣＳＫ９阻害剤を患者に投与することを含む方法を含み、ここで、ＰＣＳＫ９阻害剤とＡＮＧＰＴＬ３阻害剤とは、同じ医薬組成物または異なる医薬組成物に含有されている。本発明の医薬組成物は、好適な担体、賦形剤、および好適な転移、送達、耐性などをもたらす他の薬剤を用いて製剤化される。多くの適切な製剤を全ての薬剤師に公知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡにおいて見つけることができる。これらの製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、（カチオン性またはアニオン性）脂質含有ビヒクル（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカルボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」、ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８〜３１１も参照されたい。

本発明に関連して使用することができる、抗ＰＣＳＫ９抗体および／またはＡＮＧＰＴＬ３抗体を含む例示的な医薬製剤としては、ＵＳ８，７９５，６６９（とりわけ、アリロクマブを含む例示的な製剤についての記載）、またはＷＯ２０１３／１６６４４８もしくはＷＯ２０１２／１６８４９１に記載の製剤のうちのいずれかが挙げられる。

様々な送達システム、例えば、リポソーム、微粒子、マイクロカプセルへの封入、突然変異型ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２を参照されたい）は公知であり、本発明の医薬組成物を投与するためにそれらを使用することができる。投与方法としては、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物を任意の適便な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮内層または粘膜皮膚内層（例えば、経口粘膜、直腸および腸粘膜など）による吸収によって投与することができ、他の生物活性薬剤と一緒に投与することができる。

本発明の医薬組成物は、標準的な針および注射器で皮下または静脈内送達することができる。加えて、皮下送達に関しては、ペン型送達デバイスを本発明の医薬組成物の送達に容易に利用される。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能であることもあり、または使い捨てであることもある。再使用可能なペン型送達デバイスには、医薬組成物を収容している交換可能カートリッジが一般に利用される。カートリッジ内の医薬組成物の全てを投与してしまい、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄することができ、医薬組成物を収容している新たなカートリッジと容易に交換することができる。その後、そのペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスには、交換可能カートリッジがない。もっと正確に言えば、使い捨てペン型送達デバイスには医薬組成物が予め充填されており、該医薬組成物は該デバイスの貯液部に保持されている。貯蔵部の医薬組成物が空になったら、デバイス全体を廃棄する。

非常に多くの再使用可能ペン型および自己注射器送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達に利用される。例としては、ほんの数例を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に利用される使い捨てペン型送達デバイスの例としては、ほんの数例を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）オートインジェクター（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ ＩＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。

特定の状況では、医薬組成物を制御放出システムで送達することができる。１つの実施形態では、ポンプを使用することがある（Ｌａｎｇｅｒ、上掲；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照されたい）。別の実施形態では、高分子材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編集）、１９７４、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照されたい。さらに別の実施形態では、制御放出システムを組成物の標的のすぐそばに配置することができ、したがって全身用量のほんの一部のみ要する（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上掲、第２巻、１１５〜１３８頁を参照されたい）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７〜１５３３による総説で論じされている。

注射用製剤としては、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴注入などのための剤形を挙げることができる。これらの注射用製剤を公知の方法によって製造することができる。例えば、注射用製剤は、例えば、注射剤に従来使用されている滅菌水性媒体または油性媒体に上で説明した抗体またはその塩を溶解する、懸濁させるまたは乳化させることによって、製造することができる。注射剤のための水性媒体としては、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張溶液などがあり、これらは、適切な可溶化剤、例えばアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］などと併用されることもある。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油が利用され、これらは、可溶化剤、例えば安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用されることもある。好ましくは、このようにして製造された注射剤は、適切なアンプルに充填される。

有利には、上で説明した経口または非経口使用用の医薬組成物は、活性成分の用量を合わせることに適している単位用量での剤形に製造される。単位用量でのそのような剤形としては、例えば、錠剤、ピル、カプセル、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。

投薬量
本発明の方法に従って被験者に投与されるＰＣＳＫ９阻害剤（例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体）またはＡＮＧＰＴＬ３阻害剤（例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体）の量は、一般に治療有効量である。本明細書において用いる場合、「ＰＣＳＫ９阻害剤の治療有効量」という句は、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせて投与する場合に、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、アポＢ１００、非ＨＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）およびレムナントコレステロールからなる群から選択される１つもしくはそれ以上のパラメータの（ベースラインから少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％もしくはそれ以上の）検出可能な低減をもたらすＰＣＳＫ９阻害剤の用量、またはリポタンパク質アフェレーシスなどの他の治療介入に対する患者の必要性を低減もしくは消失させる量、もしくは患者のアフェレーシスの標準化された度合いを低減させる量を意味する。

抗ＰＣＳＫ９抗体の場合、治療有効量は、抗ＰＣＳＫ９抗体約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇまたは約６００ｍｇであることができる。本発明の特定の例示的な実施形態によると、抗ＰＣＳＫ９抗体の治療有効量は、（例えば、アリロクマブの場合には）７５ｍｇ、１５０ｍｇもしくは３００ｍｇであり、または（例えば、エボロクマブの場合には）１４０ｍｇもしくは４２０ｍｇである。ＰＣＳＫ９阻害剤の他の投薬量は当業者には明らかであり、それらの量は本発明の範囲に属することが企図される。

個々の用量に含有される抗ＰＣＳＫ９抗体の量を、患者体重１キログラム当たりの抗体のミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）によって表すことができる。例えば、抗ＰＣＳＫ９抗体を患者に約０．０００１〜約１０ｍｇ／（患者体重のｋｇ）の用量で投与することができる。

本発明の方法に従って被験者に投与されるＡＮＧＰＴＬ３阻害剤（例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体）の量は、一般に治療有効量である。本明細書において用いる場合、「ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の治療有効量」という句は、ＰＣＳＫ９阻害剤と組み合わせる場合に、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、アポＢ１００、非ＨＤＬ−Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、Ｌｐ（ａ）およびレムナントコレステロールからなる群から選択される１つもしくはそれ以上のパラメータの（ベースラインから少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％もしくはそれ以上の）検出可能な低減をもたらすＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の用量、または被験者のアテローム性動脈硬化症を予防するもしくは減弱させる量（このことについては、本明細書の他の箇所に記載がある）を意味する。

抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の場合、治療有効量は、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体約０．０５ｍｇ〜約６００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇまたは約６００ｍｇであることができる。ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の他の投薬量は当業者には明らかであり、それらの量は本発明の範囲に属することが企図される。

個々の用量に含有される抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体の量を患者体重１キログラム当たりの抗体のミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）によって表すことができる。例えば、抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を患者に約０．０００１〜約１０ｍｇ／（患者体重のｋｇ）の用量で投与することができる。

併用治療
本明細書の他の箇所で記載したように、本発明の方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤を、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤と組み合わせて、標準的な脂質低下治療に非応答性であるか、標準的な脂質低下治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質低下治療に不耐性である患者に投与することを含むことができる。特定の実施形態においては、脂質低下治療のさらなる投与に対する必要性を完全に消失させることができる。特定の実施形態においては、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤とＰＣＳＫ９阻害剤とを組み合わせた使用は、患者の以前から処方されている脂質低下治療に組み合わせて（「足して」）使用することができる。例えば、高脂血症（例えば、高コレステロール血症）に罹患している患者であって、標準的な脂質低下治療に非応答性であるか、標準的な脂質低下治療による制御が不十分であるか、または標準的な脂質低下治療に不耐性である該患者における脂質／リポタンパク質の少なくとも１つのパラメータの低下に関連して、安定した毎日の治療スタチンレジメンと組み合わせて、ＰＣＳＫ９阻害剤のＡＮＧＰＴＬ３阻害剤との組合せを患者に投与することができる。本発明に関連してＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を加えたＰＣＳＫ９阻害剤と組み合わせて投与することができる例示的な毎日の治療スタチンレジメンとして、例えば、アトルバスタチン（１日当たり１０、２０、４０または８０ｍｇ）、（アトルバスタチン／エゼチミブ、１日当たり１０／１０または４０／１０ｍｇ）、ロスバスタチン（１日当たり５、１０または２０ｍｇ）、セリバスタチン（１日当たり０．４または０．８ｍｇ）、ピタバスタチン（１日当たり１、２または４ｍｇ）、フルバスタチン（１日当たり２０、４０または８０ｍｇ）、シンバスタチン（１日当たり５、１０、２０、４０または８０ｍｇ）、シンバスタチン／エゼチミブ（１日当たり１０／１０、２０／１０、４０／１０または８０／１０ｍｇ）、ロバスタチン（１日当たり１０、２０、４０または８０ｍｇ）、プラバスタチン（１日当たり１０、２０、４０または８０ｍｇ）、およびそれらの組合せが挙げられる。本発明に関連してＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を加えたＰＣＳＫ９阻害剤と組み合わせて投与することができる他の脂質修飾治療として、例えば、（１）コレステロールの取込みおよび／または胆汁酸の再吸収を阻害する薬剤（例えば、エゼチミブ）；（２）リポタンパク質の異化作用を増加させる薬剤（ナイアシンなど）；ならびに／または（３）２２−ヒドロキシコレステロールなどのコレステロールの排出に関与するＬＸＲ転写因子の活性化剤が挙げられる。

本発明に関連して使用することができる抗ＰＣＳＫ９抗体の非限定的な例としては、例えば、アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ロデルシズマブ、ラルパンシズマブ、または上述の抗体のうちのいずれかの抗原結合部分が挙げられる。

本発明に関連して使用すべきであるＡＮＧＰＴＬ３抗体の非限定的な例として、エビナクマブが挙げられる。

投与レジメン
本発明の特定の実施形態によると、ＰＣＳＫ９阻害剤（すなわち、ＰＣＳＫ９阻害剤を含む医薬組成物）およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤（すなわち、ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含む医薬組成物）の複数の用量を、被定義時間にわたって（例えば、毎日の治療スタチンレジメンまたは他のバックグラウンド脂質修飾治療に足して）被験者に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の複数の用量を患者に逐次的に投与することを含む。本明細書において用いる場合、「逐次的に投与すること」は、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の各用量を被験者に異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日、数週間または数カ月）隔てた異なる日に投与することを意味する。本発明は、患者のＰＣＳＫ阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の単一初回用量、その後、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上の第２の用量、場合によりその後、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の１用量またはそれ以上の第３の用量を逐次的に投与することを含む方法を含む。

用語「初回用量」、「第２の用量」および「第３の用量」は、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含む医薬組成物の個々の用量の投与についての時系列を指す。したがって、「初回用量」は、処置レジメンの開始時に投与される用量（「ベースライン用量」とも呼ばれ）であり；「第２の用量」は、初回用量後に投与される用量であり、「第３の用量」は、第２の用量後に投与される用量である。初回、第２および第３の用量は、全て同じ量のＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤を含有することもあるが、一般には投与頻度の点から互いに異なることがある。しかし、特定の実施形態において、初回、第２および／または第３の用量に含有されるＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の量は、処置の過程で互いに変動する（例えば、必要に応じて上方または下方調整される）。特定の実施形態では、２用量またはそれ以上の（例えば、２、３、４または５）用量が「負荷用量」として処置レジメンの開始時に投与され、その後、より低頻度で投与される後続の用量（例えば、「維持用量」）が投与される。

本発明の例示的実施形態によると、各第２および／または第３の用量は、直前の用量の１〜２６週間（例えば、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１５．５、１６、１６．５、１７、１７．５、１８、１８．５、１９、１９．５、２０、２０．５、２１、２１．５、２２、２２．５、２３、２３．５、２４、２４．５、２５、２５．５、２６、２６．５週間またはそれ以上）後に投与される。「直前の用量」という句は、本明細書において用いる場合、複数の投与の順序に関して、抗原結合分子の用量を意味し、介在する用量のない順序的にまさにその次の用量の投与の前に患者に投与される。

本発明のこの態様による方法は、ＰＣＳＫ９阻害剤およびＡＮＧＰＴＬ３阻害剤の任意の数の第２および／または第３の用量を患者に投与することを含む。例えば、特定の実施形態では、単一の第２の用量のみ患者に投与される。他の実施形態では、２またはそれ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）第２の用量が患者に投与される。同様に、特定の実施形態では、単一の第３の用量のみ患者に投与される。他の実施形態では、２またはそれ以上の（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）第３の用量が患者に投与される。

複数の第２の用量を含む実施形態において、各々の第２の用量は、他の第２の用量と同じ頻度で投与されることがある。例えば、各々の第２の用量は、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与されることがある。同様に、複数の第３の用量を含む実施形態において、各々の第３の用量は、他の第３の用量と同じ頻度で投与されることがある。例えば、各々の第３の用量は、直前の用量の１〜２、４、６、８週間またはそれ以上後に患者に投与されることがある。あるいは、第２および／または第３の用量が患者に投与される頻度は、処置レジメンの過程を通して様々であることができる。投与頻度は、臨床検査に従って個々の患者の必要に応じて医師によって処置の過程で調整されることもある。

以下の実施例は、本発明の方法および組成物の作製および使用方法の完全な開示および説明を当業者に与えるために提示するものであり、本発明者らが自分達の発明と考える範囲を限定することを意図したものではない。用いる数値（例えば、量、温度など）に関して正確を期すように努めたが、多少の実験的誤差および偏差を考慮すべきである。別段の指示がない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧またはほぼ大気圧である。

ヒトＰＣＳＫ９に対するヒト抗体の産生
ヒト抗ＰＣＳＫ９抗体を米国特許８，０６２，６４０号に記載されているように産生させた。以下の実施例で使用する例示的ＰＣＳＫ９阻害剤は、「アリロクマブ」または「プラルエント（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（登録商標））」としても公知の「Ｈ１Ｈ３１６Ｐ」と称するヒト抗ＰＣＳＫ９抗体である。Ｈ１Ｈ３１６Ｐは、次のアミノ酸配列特性を有する：配列番号１６を含む重鎖および配列番号２０を含む軽鎖；配列番号１２を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号１７を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；配列番号１３を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５を含むＨＣＤＲ３、配列番号１８を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２１を含むＬＣＤＲ３。

ヒトＡＮＧＰＴＬ３に対するヒト抗体の産生
ヒト抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体を、米国特許第９，０１８，３５６号に記載されているように産生させた。以下の実施例で使用する例示的ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤は、「エビナクマブ」としても公知の「Ｈ４Ｈ１２７６Ｓ」と称するヒト抗ＡＮＧＰＴＬ３抗体である。Ｈ４Ｈ１２７６Ｓは、次のアミノ酸配列特性を有する：配列番号１０を含む重鎖および配列番号１１を含む軽鎖；配列番号２を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号３を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）；配列番号４を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号６を含むＨＣＤＲ３、配列番号７を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号８を含むＬＣＤＲ２、および配列番号９を含むＬＣＤＲ３。

高脂血症Ｌｄｌｒ^−／＋マウスにおける、抗ｈＡＮＧＰＴＬ３抗体と抗ＰＣＳＫ９抗体との組合せを用いる処置の循環脂質レベルに対するインビボでの効果
ＬＤＬＲ^−／＋マウスにおいて、血清脂質レベルに対する、抗ｈＡＮＧＰＴＬ３抗体Ｈ４Ｈ１２７６（エビナクマブ）単独の効果、抗ＰＣＳＫ９抗体Ｈ１Ｈ３１６Ｐ（アリロクマブ）単独の効果、および組み合わせた両方の抗体の効果を判定した。これらのマウスは高脂血症であり、これらのマウスの循環コレステロールは大半が、ＬＤＬ−Ｃ取込みの主要な受容体であるＬＤＬＲが部分的に不足していることに起因して、ＬＤＬ型として見出された。

第１の研究では、固形飼料で飼育する雄ＬＤＬＲ^−／＋マウスから、実験の５日前に事前採血し、マウスを、各群５匹の群に分けた。研究の第０日に、Ｈ４Ｈ１２７６Ｐ抗体、Ｈ１Ｈ３１６Ｐ抗体、それらの組合せ、および関連性のある特異性を欠く、アイソタイプを一致させた（ｈＩｇＧ４）対照を、各１０ｍｇ／ｋｇの用量で皮下注射により投与した。抗体注射後は連続して毎日、マウスから４時間の絶食後に採血し、ＡＤＶＩＡ（登録商標）１８００ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｉｅｍｅｎｓ）により、血清脂質レベル（総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、非ＨＤＬ−ＣおよびＨＤＬ−Ｃ）を血清中で判定した。各群の平均を各時点で算定した。結果を、血清脂質濃度の平均±標準誤差として表し、図１、２、３および４に示す。

第２の研究では、雄ＬＤＬＲ^−／＋マウスを、抗体注射まで３週間にわたって高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育し、研究期間中、この飼料をマウスに給餌した。その後の研究は、第１の研究と同じプロトコールの下で実施した。結果を、血清脂質濃度の平均±標準誤差として表し、図５、６、７および８に示す。

両方の研究について、循環抗体（血清Ａｂ）のレベルを、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用して判定した。手短に述べると、血清Ａｂを捕捉するために、プレートを、ヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングした。次いで、血清をプレートに添加し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート化ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、捕捉した抗体を化学発光により検出した。結果を、平均±標準誤差として表し、表１Ａおよび１Ｂ（第１の研究）ならびに表２Ａおよび２Ｂ（第２の研究）に示す。対照：アイソタイプを一致させた対照のＡｂを与えたマウス。

結果の要約：
Ｈ１Ｈ３１６ＰとＨ４Ｈ１２７６Ｐとの組合せを単一皮下用量として、固形飼料および高脂肪Ｗｅｓｔｅｒｎ飼料で飼育するＬＤＬＲ^−／＋マウスに投与すると、各抗体の単回投与それぞれと比較して、総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃおよび非ＨＤＬ−Ｃの顕著な低減が得られ、血清脂質レベルに対する相加効果が示された。

Claims (30)

1. 高コレステロール血症に罹患している患者を処置する方法であって、ここで、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性であり、プロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤とアンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤との組合せを用いて患者を処置することを含む前記方法。
2. 高コレステロール血症は、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｅＦＨ）またはホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）である、請求項１に記載の方法。
3. ＰＳＣＫ９阻害剤は、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、請求項１に記載の方法。
4. ＰＣＳＫ９抗体は、約７５ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項３に記載の方法。
5. ＰＣＳＫ９抗体は、約１４０ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項３に記載の方法。
6. ＰＣＳＫ９抗体は、約１５０ｍｇの用量で２週間に１回または４週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項３に記載の方法。
7. ＰＣＳＫ９抗体は、約３００ｍｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項３に記載の方法。
8. ＰＣＳＫ９抗体は、約４２０ｍｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項３に記載の方法。
9. ＰＣＳＫ９抗体は、アリロクマブ、エボロクマブ、ボコシズマブ、ロデルシズマブおよびラルパンシズマブからなる群から選択される、請求項３〜８のいずれか１項に記載の方法。
10. 抗体はアリロクマブである、請求項３〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、請求項３〜１０のいずれか１項に記載の方法。
12. ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号２１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、請求項３〜１１のいずれか１項に記載の方法。
13. ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号１７のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項３〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. ＰＣＳＫ９抗体は、患者に皮下または静脈内投与される、請求項３に記載の方法。
15. ＡＮＧＰＴＬ３阻害剤は、ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、請求項１に記載の方法。
16. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約１５０ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
17. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約３００ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
18. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約４５０ｍｇの用量で１週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
19. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約３００ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
20. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約４５０ｍｇの用量で２週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
21. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、約２０ｍｇ／ｋｇの用量で４週間に１回の頻度で患者に投与される、請求項１５に記載の方法。
22. ＡＮＧＰＴＬ３抗体はエビナクマブである、請求項１５〜２１のいずれか１項に記載の方法。
23. ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の方法。
24. ＡＮＧＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号９のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１５〜２３のいずれか１項に記載の方法。
25. ＡＮＧＰＴＬ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号３のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１５〜２４のいずれか１項に記載の方法。
26. ＡＮＧＰＴＬ３抗体は、患者に皮下または静脈内投与される、請求項１５に記載の方法。
27. ＰＣＳＫ９阻害剤とＡＮＧＰＴＬ３の阻害剤との組合せを用いて処置することにより、患者において、次のパラメータのうちの１つまたはそれ以上を低下させること：
    （ａ）血清総コレステロール（ＴＣ）レベルの低減；
    （ｂ）血清低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）レベルの低減；および
    （ｃ）血清非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）レベルの低減
    をもたらし、ここで、（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）の低減は、ＰＣＳＫ９阻害剤とＡＮＧＰＴＬ３阻害剤との組合せを用いる処置の前または開始時の患者の血清ＴＣレベル、血清ＬＤＬ−Ｃレベルおよび／または血清非ＨＤＬ−Ｃレベルと比較して判定される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 高コレステロール血症に罹患している患者の処置における、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤と組み合わせたプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤の使用であって、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である前記使用。
29. 高コレステロール血症に罹患している患者を処置するための医薬の製造における、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤と組み合わせたプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤の使用であって、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性である前記使用。
30. 高コレステロール血症に罹患している患者を処置するための医薬組成物であって、ここで、該患者は、標準的な脂質修飾治療での処置に非応答性であるか、標準的な脂質修飾治療での処置による制御が不十分であるか、または標準的な脂質修飾治療での処置に不耐性であり、アンジオポエチン様タンパク質３（ＡＮＧＰＴＬ３）の阻害剤と組み合わせたプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）阻害剤を含む前記組成物。

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