JP2016521700A - 医薬製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、少なくとも1種のα線放射性核種錯体の精製溶液を作製する方法を提供する。本方法は、α線放射性核種錯体および少なくとも1種の娘核種の溶液を娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップと、その後、溶液を選択的結合剤から分離するステップとを含む。本発明はまた、少なくとも1種のα線放射性核種錯体を含む溶液から少なくとも1種の娘放射性核種を除去する方法も提供する。本方法は、溶液を娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む。

Description

本発明は、内部放射性核種療法（endoradionuclide therapy）の分野、特にα線内部放射性核種療法に関する。より具体的には、本発明は、内部放射性核種療法に使用するための製剤の安全性および有効性、前記製剤、ならびにその調製、治療および安全な保存の方法に関する。

内部放射性核種療法の基本原理は、例えば、がん治療のための望ましくない種類の細胞の選択的破壊である。放射性崩壊により、高エネルギー粒子および／または電磁放射が有する有意な量のエネルギーが放出される。放出されたエネルギーは、細胞に細胞傷害性損傷を引き起こし、直接または間接細胞死をもたらす。明らかに、疾患の治療に有効となるためには、このエネルギーおよび細胞損傷が望ましくない腫瘍細胞または腫瘍増殖を支持する細胞を主に排除するように、放射線が疾患組織を優先的に標的としなければならない。

あるβ粒子放射体が、がんの治療に有効であると長い間考えられてきた。最近では、α線放射体が、抗腫瘍剤に使用するための標的となっている。α線放射体は、いくつかの点でβ線放射体とは異なり、例えば、α線放射体は組織中で高いエネルギーおよび短い放射範囲を有する。生理学的環境中の典型的なα線放射体の放射範囲は、一般的に100μm未満であり、わずかに数個の細胞の直径と同等である。α線放射体は有効に標的化され、制御されると、標的細胞を超えて通過していく放射エネルギーが比較的少なく、従って、周囲の健康な組織への損傷が最小になるため、この比較的短い範囲が、α線放射体を微小転移巣を含む腫瘍の治療に特に適したものにしている。対照的に、β粒子は水中で1mm以上の範囲を有する。

α粒子放射線のエネルギーは、β粒子、γ線およびX線のエネルギーと比べて高く、典型的には5〜8MeVであり、すなわちβ粒子放射線のエネルギーより5〜10倍高く、γ放射線のエネルギーより少なくとも20倍高い。極めて短距離にわたる極めて大量のエネルギーの供給は、βまたはγ線と比べて、α線に、例外的に高い線エネルギー付与（LET）を与える。このことが、α線放射性核種の例外的な細胞傷害性の理由であり、また健康な組織への照射による許容できない副作用を回避するために必要な放射性核種分布の制御および研究のレベルに対して厳しい要求を課している。

したがって、α線放射性核種は極めて強力であるが、これを、非疾患組織での取り込みがほとんどまたは全くなく腫瘍に送達することが重要である。これは、担体としてキレート化分子DTPAと結合したモノクローナル抗体、すなわち臨床的に使用されている放射性医薬品ゼヴァリン（登録商標）（Goldsmith、S.J, Semin. Nucl. Med. 40：122〜35．Radioimmunotherapy of lymphoma：Bexxar and Zevalin）を使用して、β線放射性核種イットリウム90（Y−90）を送達する場合に示されているものと同様に行うことができる。したがって、放射性核種および担体−キレート剤結合体の複合体が投与される。異なる起源の全長抗体に加えて、抗体フラグメント（Adamsら、A single treatment of yttrium-90-labeled CHX-A"-C6.5 diabody inhibits the growth of established human tumor xenografts in immunodeficient mice. Cancer Res. 64：6200〜8、2004）、ドメイン抗体（Tijinkら、Improved tumor targeting of anti-epidermal growth factor receptor Nanobodies through albumin binding：taking advantage of modular Nanobody technology. Mol. Cancer Ther. 7：2288〜97、2008）、リポカリン（Kimら、High-affinity recognition of lanthanide(III) chelate complexes by a reprogrammed human lipocalin 2. J. Am. Chem. Soc. 131：3565〜76、2009）、アフィボディ（affibody）分子（Tolmachevら、Radionuclide therapy of HER2-positive microxenografts using a ¹⁷⁷Lu-labeled HER2-specific Affibody m
olecule. Cancer Res. 15：2772〜83、2007）およびペプチド（Miedererら、Preclinical evaluation of the alpha-particle generator nuclide ²²⁵Ac for somatostatin receptor radiotherapy of neuroendocrine tumors. Clin. Cancer Res. 14：3555〜61、2008）を含む他の種類のタンパク質性担体が記載されている。

多くの薬学的に関連するα線放射体の分解または「崩壊」により、「娘」核種の形成がもたらされ、この娘核種もα線の放射を伴って崩壊し得る。娘核種の崩壊により、同様にα線放射体であり得る第3の核種の形成がもたらされ、一連の放射性崩壊、「崩壊系列」につながることもある。そのため、薬学的に関連するα放射体の医薬製剤は通常、それ自体がα線放射体である崩壊生成物も含む。このような状況では、製剤は、その組成が調製後の時間と崩壊系列中の異なる放射性核種の半減期の両方に依存する放射性核種の混合物を含む。

α粒子の極めて高いエネルギーは、その有意な質量と合わせて、核崩壊で放出された粒子に、有意な運動量を付与する。結果として、α粒子が放出されると、等しいが反対の運動量が残りの娘核に付与され、「核反跳」をもたらす。この反跳は、ほとんどの化学結合を破壊し、分解時に親核種が存在するキレート錯体から、新たに形成された娘核種を追い出すのに十分強力である。これは、娘核種自体がα線放射体であるまたは一連の放射性崩壊の一部である場合に極めて重要である。

上記反跳作用のため、および放射性崩壊での化学的性質の変化のために、最初に組み込まれた放射性核種の放射性崩壊からこうして形成された娘核種は、キレート剤と錯体形成しないことがある。そのため、親核種と対照的に、娘核種および崩壊系列の後の生成物は、担体に結合していない場合がある。したがって、α線放射性医薬製剤の保存は、典型的にはもはや有効に結合もキレート化もしていない遊離娘核種および崩壊系列中の後の放射性核種の蓄積「内部増加（ingrowth）」をもたらす。非結合放射性同位体は、所望の製剤に組み込まれた標的化機構によって制御されないので、患者に用量投与する前に、遊離娘核種を除去することが望ましい。

放射性同位体トリウム227は専用の製造施設で作製および精製されるので、用量の形成、輸送、錯体形成および投与の間に一定の保存期間が不可避であり、医薬製剤が実行可能な限り娘核種を含まないことが望ましい。過去の方法の重要な課題は、標的となる量に対して変化する量の非標的化α線放射性核種（例えば、遊離娘核種）を含まない、標的化α線放射性核種の再現性のある組成物を投与することであった。結合／標的部分および／または配位子などの有機成分の電離α線への暴露を減らすことがさらに望ましい。溶液から遊離放射性同位体を除去することは、このような成分の放射線分解を減らすことに寄与するので、医薬製剤または前駆体溶液の品質を保つのに役立つ。

保存および輸送期間中の望ましい核種の崩壊は計算および補正することができるが、これは、組成物をより毒性にしおよび／または安全な保存期間を短くしおよび／または望ましくない方法で治療域を変化させ得る非標的娘生成物の蓄積を回避しない。したがって、さらに、組成物が可能な限り娘核種を含まないことおよび注射用量が許容できるくらい安全であると保証され得る組成を有することを保証する製剤用量製造方法が確立されることが有益であろう。

トリウム227の分解後の事象は、挑戦の例とみなされ得る。

半減期が約18.7日であるトリウム227は、α粒子を放出してラジウム223に分解する。同様に、ラジウム223は半減期が約11.4日であり、ラドン219に分解し、ポロニウム215を生じ、これが鉛211を生じる。これらの工程の各々がα線を生じ、ラドン219およびポロニウム215の半減期は、それぞれ4秒未満および2ミリ秒未満である。最終的な結果は、例えば、キレート化トリウム227の新たに調製された溶液中の放射能が最初の19日間は上昇し、次いで低下し始めるというものである。明らかに、腫瘍を標的化するのに利用可能なトリウム227の量が絶えず減少するので、平衡状態に達すると、トリウム227から得られる全放射能の割合はこの19日間に低下している。娘核種を単純な手順で特異的に除去することができるなら、（例えば、生体分子担体と錯体形成した）トリウム227の量のみを考慮すればよく、治療域−治療効果と有害効果との間の関係は、娘同位体を除去する前の保存期間に無関係となるだろう。この除去は生成物の保存中連続的であってもよいし、または製剤をもたらす配合および錯体形成の時などの投与の少し前であってもよい。

したがって、（特に、α線放射性核種について）改善した放射線治療用組成物、および放射性崩壊系列中に形成される内部で増加した（ingrown）放射性核種を考慮する必要なく、その生物学的効果を再現性よく評価することができる注射可能溶液を作成する手順が大いに継続して必要とされている。さらに、患者に投与する直前に、無菌条件下で、最終的な放射性配合物の容易な調製を可能にする放射線治療方法およびキットが必要とされている。さらに、cGMP原則の厳格な基準を満たす高品質な商品を製造するために、製造方法が用量調製中に最小限の人手しか介さない自動化に従うことができることが望ましい。

本発明は、溶液中にあり得るまたは配位子および標的部分を含む物質に安定にキレート化され得る親放射性核種（すなわち、親放射性核種は、標的部分（抗体など）と結合している配位子と錯体形成しているまたは錯体形成可能である）を含有する放射性医薬製剤から、陽イオン性娘核種を除去するための組成物、方法および手順に関する。特に、本発明者らは、驚くべきことに、娘核種が放射性同位体の保存中連続的におよび／または放射性医薬品の形態で放射性同位体を投与する少し前に種々の選択的結合剤上に安全にかつ確実に捕捉され得ることを立証した。選択的結合剤によって捕捉される放射性核種は、特にα線放射性核種あるいは典型的には親α線放射性核種の崩壊中および／または結果として生じた娘核種のさらなる崩壊によって形成されるα線放射性核種発生物質である。²²⁷Thに典型的な崩壊系列は本明細書に記載され、同位体は系列が本発明の種々の態様で除去および／または捕捉され得る好ましい娘同位体を形成するという点で示されている。本発明を適用することによって得られる最終的な治療用配合物は、がんと非がん性疾患の両方の治療に使用するのに適している。

換言すると、本発明は、内部で増加した放射性崩壊生成物を除去する保存中および／または投与（例えば、注射）直前の放射性娘核種の除去を可能にする組成物を提供する。これにより、娘核種の同時投与が最小となるので、正常な非標的組織への放射線量および放射線損傷が最小化される。

それによって、患者が得る放射線量を計算する場合、親放射性核種およびインビボで形成される娘核種の濃度および半減期のみを考慮すればよい。最も重要なことに、これによって、有効性と有害効果との間の関係に関して再現性のある状態がもたらされる。したがって、利用可能な治療域が、医薬製剤の保存期間で変化しない。

換言すると、本発明を適用することによって、所望の抗腫瘍効果と有害効果との間の関係が、初期の核種の測定濃度に直接関連し得るので、医薬製剤の保存期間から独立する。初期のα線放射性核種の濃度が、娘核種の放出から十分離れた、娘核種の放出からのγ線であるγ線の1つまたは複数の並行な放射を測定することにより決定され得る状況において、この測定は放射性医薬品取扱い所での標準的装置を用いて行うことができる。実際、製剤が親核種に関して純粋な場合、医薬製剤の当該用量は製造後の時間にのみ依存し、作表することができる。原則として、診療所でのさらなる測定は必要とされず、対応する放射性医薬品は他の毒性医薬品と同様に扱うことができるであろう（このような手順は、放射能を容易に測定することができるという事実に基づき現在の慣行に逆行するが）。標的にされるα線放射線療法の臨床的な取り扱いのためのこの新しく単純化された手順の実施可能要件は、本発明の重要な側面である。

さらなる実施形態では、本発明は、医薬製剤のためのキットの提供に関する。キットは、典型的には病院薬局または中央放射性医薬品薬局に供給され、投与の少し前（例えば、6時間未満）または直前（例えば、1時間未満）に調製することができる。所望のα線放射性核種の精製を投与するための医薬製剤の準備の時に行うことができればかなり好都合となるだろう。放射性物質の全ての取り扱いを望ましく最小化することができるので、過度の負担なしにかつ複雑な取り扱いなしに精製を行うことができればさらに好都合となるだろう。

本発明によるキットは、器具、例えば、種々の試薬を含むチューブまたはバイアルが取り付けられたカセット実験室、ならびに注射可能な医薬製剤の最終剤形を含むシリンジの形態であり得る。器具はさもなければ手動で行われる操作を行う。

特に固体もしくはゲルの形態のまたはこれらに固定化されたある選択的結合材料が、親核種の崩壊後に陽イオン性娘核種を高度に保持することが本発明者らによって立証された。これらの材料の選択性によって、娘核種の保持が可能になるが、娘核種が保持されている一方で錯体形成した親放射性同位体（例えば、場合により生体分子に結合している配位子によって錯体形成された²²⁷Thなどのトリウム同位体）がフィルタを妨げられずに通過するまたは溶液のままであることが可能になる。これにより、投与の直前または少し前に調製することができるが、錯体形成していない娘放射性核種からの汚染が比較的低レベルで送達することができる高品質の放射性医薬品の調製および送達における大きな利点が提供される。

Goldsmith、S.J, Semin. Nucl. Med. 40：122〜35．Radioimmunotherapy of lymphoma：Bexxar and Zevalin Adamsら、A single treatment of yttrium-90-labeled CHX-A"-C6.5 diabody inhibits the growth of established human tumor xenografts in immunodeficient mice. Cancer Res. 64：6200〜8、2004 Tijinkら、Improved tumor targeting of anti-epidermal growth factor receptor Nanobodies through albumin binding：taking advantage of modular Nanobody technology. Mol. Cancer Ther. 7：2288〜97、2008 Kimら、High-affinity recognition of lanthanide(III) chelate complexes by a reprogrammed human lipocalin 2. J. Am. Chem. Soc. 131：3565〜76、2009 Tolmachevら、Radionuclide therapy of HER2-positive microxenografts using a 177Lu-labeled HER2-specific Affibody molecule. Cancer Res. 15：2772〜83、2007 Miedererら、Preclinical evaluation of the alpha-particle generator nuclide 225Ac for somatostatin receptor radiotherapy of neuroendocrine tumors. Clin. Cancer Res. 14：3555〜61、2008

したがって、（特に、α線放射性核種について）改善した放射線治療用組成物、および放射性崩壊系列中に形成される内部で増加した（ingrown）放射性核種を考慮する必要なく、その生物学的効果を再現性よく評価することができる注射可能溶液を作成する手順が大いに継続して必要とされている。さらに、患者に投与する直前に、無菌条件下で、最終的な放射性配合物の容易な調製を可能にする放射線治療方法およびキットが必要とされている。さらに、cGMP原則の厳格な基準を満たす高品質な商品を製造するために、製造方法が用量調製中に最小限の人手しか介さない自動化に従うことができることが望ましい。

そのため、第1の態様では、本発明は、（場合により、生体分子結合体の形態の）錯体形成したα線放射性核種を製造することができる製剤工程を提供する。好ましくは、前記工程は、重要な成分として、トリウム227の崩壊中に形成する錯体形成していない娘核種を溶液から選択的に吸収、結合、錯体形成または除去することができる選択的結合剤（固相樹脂フィルタなど）を含む。これらは直接の娘核種であっても、放射性崩壊系列のさらに下流の娘核種であってもよい。特に、²²³Raおよびその周知の崩壊生成物（²¹⁹Rn、²¹⁵At、²¹⁵Po、²¹¹Po、²¹¹Bi、²¹¹Pb、²⁰⁷Pbおよび²⁰⁷Tlを含む）が、本明細書に示されるトリウム崩壊系列に示されるように、望ましくは除去される典型的な娘同位体である。

したがって、本発明の主要な態様は、少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種の精製溶液を作製する方法であって、前記少なくとも1種のα線放射性核種錯体および少なくとも1種の娘核種を含む溶液を前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップと、その後、前記少なくとも1種のα線放射性核種錯体の溶液を前記少なくとも1種の選択的結合剤から分離するステップとを含む方法である。

本発明の全ての態様において、娘核種は一般的に錯体形成していない。これは、α崩壊で生成される動的反跳(kinetic recoil)の結果および／または親核種と娘核種との間の異なる錯体形成特性の結果であり得る。本発明で使用される全ての放射性核種は、典型的には例えば、150amu（例えば、210〜230）超の原子質量を有する「重金属」放射性核種である。典型的なα線重金属放射性核種には、²¹¹At、²¹²Bi、²²³Ra、²²⁴Ra、²²⁵Acおよび²²⁷Thが含まれる。好ましいα線（親）放射性核種には、最も好まれる²²⁷Thなどのα線トリウム放射性核種が含まれる。

本発明者らは、驚くべきことに、適当な選択的結合材料（本明細書に記載される、例えば、固相樹脂材料）が、場合により標的部分（生体分子など）と結合した錯体形成したトリウムに優先して、不要な錯体形成していない娘イオンを吸収するのに極めて有効であることを立証した。結果として、第2の態様で、本発明は、娘核種を実質的に含まない少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種を含む注射可能な溶液を作製する方法であって、試料を適当な選択的結合剤と接触させるステップを含む方法を提供する。好ましくは、この接触は、高濃度の（場合により標的部分と結合した）所望のα線放射（例えば、トリウム）錯体を含む高度に放射化学的に純粋な医薬製剤をもたらす単純な精製／濾過ステップによる。典型的には、標識トリウム錯体（および場合により結合体）の分離のすぐ後に無菌濾過が続く。これは、投与前の最終工程として特に適している。

したがって、本発明は、少なくとも1種のα線放射性核種錯体を含む溶液から、少なくとも1種の娘放射性核種を除去する方法であって、前記溶液を前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む方法を提供する。

本発明では、投与するのに望ましいα線放射性核種（「親」放射性核種）は本明細書に記載される通りであり、これは「錯体形成している」または「錯体の形態である」。これらの用語は、α線放射性核種が重金属放射性核種の陽イオンとこれに結合した少なくとも1個の配位子とを含む配位錯体の形態であるという点で共通の意味をとる。本明細書に記載されるものを含む適当な配位子は、当技術分野で周知である。

医薬製剤を本発明の溶液から作製することができるので、本発明はこのような医薬製剤を提供する。これらは、α線放射性核種の溶液を含み、本明細書に示される娘核種を実質的に含まない。本発明の医薬製剤では、α線放射性核種は、少なくとも1個の配位子によって錯体形成され、配位子は本明細書に記載される標的（特異的結合）部分と結合している。本発明の溶液は、投与の準備が整った投与器具（シリンジ、カートリッジまたはシリンジバレルなど）で直接提供してもよく、本発明は投与時におよび投与行為によってさえ（例えば、シリンジフィルタの形態の適当な特異的結合剤を通した投与によって）溶液の医薬製剤への精製を可能にする。したがって、本発明の器具はシリンジなどの投与器具であり得る。したがって、本発明は、別の態様で、本明細書に記載される溶液を含む投与器具を提供する。このような器具は、例えば、無菌フィルタなどのフィルタをさらに含んでもよい。シリンジ−フィルタが、シリンジおよび同様の器具に適している。

したがって、本発明は、少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種および少なくとも1種の娘核種の溶液を含む投与器具であって、前記娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤を含むフィルタをさらに含む器具を提供する。α線放射性核種の溶液、配位子、標的部分および選択的結合剤も含む本発明の他の器具は、手動工程によりおよび／または自動化装置での自動化手順により、本発明の方法に使用され得る、（好ましくは、使い捨ての）カートリッジ、カセット、ローター、バイアル、アンプル等の形態である。

本発明のさらなる主要な態様は、医薬製剤を作製することができるキットである。そのため、さらなる態様では、本発明は、少なくとも1種のα線放射性同位体の医薬製剤を形成するためのキットであって、
i）前記少なくとも1種のα線放射性同位体および少なくとも1種の娘同位体の溶液と；
ii）少なくとも1個の配位子と；
ii）特異的結合部分と；
iii）前記少なくとも1種の娘同位体のための少なくとも1種の選択的結合剤と
を含むキットを提供する。

前記α線放射性同位体は、前記特異的結合部分と結合しているまたは結合可能な前記配位子によって錯体形成しているまたは錯体形成可能である。

一実施形態では、α線放射性核種が、配位子によって錯体形成されているが、特異的結合（標的）部分と結合していなくてもよい。あるいは、配位子が標的部分と安定的に結合し、放射性同位体と別の容器中に存在していてもよい。錯体の有機分子（配位子および／または標的部分）をα線放射体と別にすることで、保存中のα線照射への暴露による有機材料の放射線損傷（例えば、酸化）が減少する。

一実施形態では、キットが2つのバイアルとして提供され得る。このようなキットは、放射性同位体（例えば、トリウム227）バイアルと、トリウム227を錯体形成する配位子（キレート）と適切に結合した生体分子結合体の緩衝溶液を含む第2のバイアルとを含む。製剤調製の直前に、トリウム227バイアルを生体分子結合体溶液と混合する。

少なくとも1種の錯体形成したα線放射性同位体（親放射性同位体など）および少なくとも1種の有機成分（錯化剤および／または標的剤など）を含む溶液から、遊離（錯体形成していない）放射性核種、特に遊離娘放射性核種を捕捉することは、有機成分の、遊離放射性核種（例えば、娘核種）のさらなる崩壊からの電離放射線への暴露を減少させるのに役立つ。対応して、さらなる態様では、本発明は、少なくとも1種のα線放射性核種錯体、少なくとも1種の娘放射性核種および少なくとも1種の有機成分（錯化剤および／または標的剤など）を含む溶液中の少なくとも1種の有機成分の放射線分解を減らす方法であって、前記溶液を、前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む方法も提供する。この方法は、溶液中のH₂O₂濃度の低下によって説明され得る。

本発明の全ての適当な態様において、「娘」放射性核種（同等に、放射性同位体）は、典型的には溶液中で「遊離」である。このことは、放射性核種が溶存イオンの形態であり、溶液中で配位子によって錯体形成も結合もされていない（または有意な程度でされていない）ことを示している。娘放射性核種は、明らかに特異的結合剤と結合し得るが、一般的にはこれは（本明細書に記載される）溶液中ではない。本明細書で使用される場合、「娘」放射性核種という用語は、前記核種が別の放射性同位体の崩壊から直接または間接的に生成されるという点で、当技術分野での共通の意味をとる。この場合、本発明のいずれかのおよび全ての態様で本明細書において言及される溶液中に存在する少なくとも1種の「娘」放射性核種は、α線放射性核種錯体中に存在する放射性核種の直接（第一世代）または間接（第二、第三もしくはその後の世代）崩壊生成物である。α線放射性核種錯体中に含まれる放射性核種の少なくとも第一世代崩壊生成物がこのような溶液中に存在し、選択的結合剤によって結合されていることが好ましい。

ここで、本発明を以下の非限定的な実施例および以下の図面を参照して説明する。

選択的結合剤の存在または非存在下での水の放射線分解による過酸化水素の生成を示す図である。

前記のように、どれくらい多くのの娘放射性核種の内部増加が錯体形成時にトリウムバイアル中に存在するかは、保存および輸送の時間に依存する。しかしながら、所望の放射性核種（例えば、トリウム）が娘核種と比べてキレートに対する親和性が有意に高くなるようにキレートが選択されるので、娘核種はα線放射性核種（トリウム227）と生体分子結合体の錯体形成に影響を及ぼさない。第2のバッチ式工程では、娘核種が特異的結合剤を通した濾過によって、ここでのトリウム標識生体分子から分離される。これは、固相フィルタカートリッジの形態となり得る。

この有機配位子および／または標的部分からのα線放射材料の分離工程は、放射性医薬品の（例えば、生体分子担体および／またはキレート化部分の）放射線分解速度を低下させるという追加の利点を有し、本発明の全ての態様に適用することができる。放射性生成物は現在使用されている他の戦略よりも「臨床（ベッドサイド）の近くで」製造されるので、物質がより高い放射化学的純度および／または高い有機材料（配位子および／または標的部分成分）の純度を有するべきである。これは、貯蔵寿命要件を維持するという点で有益である。

本発明の方法および使用により形成されるまたは形成可能な注射溶液は、治療への使用、特に過形成性疾患または腫瘍性疾患の治療への使用に極めて適している。本発明の種々の方法によって形成されるまたは形成可能な医薬製剤は、本発明のさらなる態様を形成する。

本明細書で使用される場合、「医薬製剤」という用語は、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤を含む放射性核種の調製物を示す。しかしながら、医薬製剤は最終的に投与される形態でなくてもよい。例えば、医薬製剤は、投与前に少なくとも1種のさらなる成分の添加を必要としてもよい、および／または無菌濾過などの最終調製工程を必要としてもよい。さらなる成分は、例えば、最終溶液をインビボでの注射に適したものにするために使用される緩衝液でもよい。本発明の文脈において、医薬製剤は、所望の放射性核種錯体の放射性崩壊系列から生じる有意なレベルの錯体形成していない放射性核種を含み得る。これは、好ましくは投与前に本発明による方法によって有意な程度除去される。このような方法は、製剤の保存期間の大部分にわたるこのような錯体形成していない娘放射性核種のバッチ式除去（例えば、選択的結合、キレート化、錯体形成もしくは吸収）を伴ってもよく、または投与直前の最終段階に行われてもよい。

医薬製剤と対照的に、本明細書で使用される「注射溶液（または、「注射可能な溶液」）」または「最終配合物」は、投与の準備ができた医薬品を示す。このような配合物はまた、薬学的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤を含む錯体形成した放射性核種の製剤を含み、さらに、無菌で、適当な浸透圧を有し、許容されないレベルの錯体形成していない放射性崩壊生成物を含まない。このようなレベルは、本明細書でさらに詳細に議論する。本明細書で議論されるように、好ましくはバイオポリマーが溶液の調製に使用されるが、注射溶液がバイオポリマー成分を含まないことは明らかである。

本発明の方法のいずれかによって形成されるまたは形成可能な注射溶液は、本発明のさらなる態様を形成する。

本発明は、不要な放射性崩壊生成物を捕捉するために吸収材料および／またはフィルタの形態の特異的結合剤を使用して、保存中および／または患者に投与する直前に不要な核種を迅速に分離する、すぐ投与できる放射性製剤の無菌最終配合物の精製および調製のための単純な方法または工程を提供する。分離に、後に患者への投与に使用するために最終配合物をシリンジ内に引く際に行われる無菌濾過が続いてもよいし、または分離が投与行為の一部として行われてもよい。

記載の通り実施されると、本発明は、治療に使用するための放射性医薬品の精製および最終配合のための（本明細書に記載される）単純なキットを提供する。本発明のキットは、例えば、放射性トリウム塩（例えば、²²⁷Th塩）の溶液を含むトリウム容器（バイアル、シリンジまたはシリンジバレルなど）、医薬品溶液（例えば、抗体または受容体などの標的部分と結合した配位子）を含む容器（例えば、バイアル）、娘核種のための少なくとも1種の特異的結合剤を含むフィルタ、場合により無菌フィルタおよびシリンジを含んでもよい。キットの成分は、分かれていても、閉鎖系を形成する1個の装置またはフローセルにまとめられていてもよいので、製造中に不要な副産物を導入する可能性が低下する。放射化学汚染が引き起こされ得る工程の回避が、材料が可能な限り多くのプロセス工程についてキット内に保持されるように成分を完全にまたは部分的に一緒に密閉したキットの明らかな利点である。

本発明は、例えば、キットとして提供される成分を用いる、注射用の最終配合物の調製手順の使用を提供する。本発明の方法および／または使用のいずれの手順もインキュベーション工程を含んでよく、ここでは、溶液または医薬製剤が、例えば、トリウムと生体分子−キレート結合体の最適な錯体形成を可能にするために穏やかな振盪により混合され、引き続いて濾過されて不要な娘核種が除去される。

α線放射性核種の注射溶液を形成するための1つの例の手順は、
a）α線放射性核種の溶解塩および少なくとも1種の娘核種を含む第1の溶液を、少なくとも1つの標的部分と結合した少なくとも1個の配位子を含む第2の溶液と組み合わせるステップと；
b）合わせた溶液を適当な温度（例えば、0℃〜50℃、好ましくは20℃〜40℃）で前記配位子と前記放射性同位体との間の錯体形成を可能にする期間インキュベートしてそれによって少なくとも1種の錯体形成したα線放射性同位体の溶液を形成するステップと；
c）少なくとも1種の錯体形成したα線放射性同位体の前記溶液を前記娘核種の少なくとも1種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップと；
d）少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種の前記溶液を前記少なくとも1種の選択的結合剤から分離するステップと
を含む。

注射溶液を形成する方法では、ステップc）およびd）が、本明細書に記載される本発明の適当な実施形態のいずれにしたがってもよい精製方法を構成する。この実施形態では、核種、結合剤、配位子および全ての適当な態様が本明細書に示される通りとなる。

本発明の医薬製剤は、本発明の方法により作製される精製溶液および本発明の方法により形成される注射溶液と共に、望ましくは錯体形成していない娘金属イオンが低濃度である。典型的には、例えば、娘核種の溶液濃度は、好ましくは、（溶液からの）単位時間当たりの放射性崩壊の総数の10％以下となるべきであり、残りは錯体形成した（例えば、トリウム）α線放射性核種の崩壊により生じるものである。これは、好ましくは、総数の5％以下、より好ましくは、3％以下である。

好ましくは、本発明のα線放射性核種結合体はトリウム227を含み、工程が好ましくは²²³Raを除去するのに最も有効である。本明細書で示される他の娘同位体も除去され得る。本発明の医薬製剤および対応して得られる注射溶液、ならびに本発明の全ての態様において、放射性核種は、適切な錯化／キレート化体（一般的に、本明細書では配位子と呼ばれる）を用いて錯体形成されるまたは錯体形成可能である。種々の適当なα線放射性核種について、多くの適当な配位子が知られており、例えば、DOTA（1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1，4，7，10−四酢酸）に基づくものおよび他の大環状キレート剤、例えばキレート基を含むヒドロキシフタル酸またはヒドロキシイソフタル酸、ならびにDTPA（ジエチレントリアミン五酢酸）の種々の変形または8配位ヒドロキシピリジノン含有キレート剤がある。好ましい例は、1，2−ヒドロキシピリジノン部分および／または3，2−ヒドロキシピリジノン部分などのヒドロキシピリジノン部分を含むキレート剤である。これらは、²²⁷Thと組み合せて使用するのに十分適している。本発明の一実施形態では、α線放射性核種錯体が²²⁷Thイオンの8配位3，2−HOPO錯体である。

本発明の医薬製剤および対応して得られる注射溶液、ならびに本発明の他の全ての態様において、少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種は、好ましくは、少なくとも1つの標的部分（本明細書において特異的結合部分とも記載される）と結合しているまたは結合可能である。多くのこのような部分が当技術分野で周知であり、任意の適当な標的部分を単独でまたは組み合せて使用することができる。適当な標的部分には、ポリペプチドおよびオリゴペプチド、タンパク質、DNAおよびRNAフラグメント、アプタマー等が含まれる。好ましい部分には、ペプチドおよびタンパク質結合剤、例えば、アビジン、ストレプトアビジン、ポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体（IgG型およびIgM型抗体を含む）、またはタンパク質もしくはフラグメントの混合物、またはタンパク質の構築物が含まれる。抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント（例えば、Fabフラグメント、単一ドメイン抗体、単鎖可変領域フラグメント（scFv）等）、抗体フラグメントを含む構築物、またはこれらの混合物が特に好ましい。

抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント（例えば、Fabフラグメントまたは少なくとも1つの抗原結合領域を含む任意のフラグメント）、フラグメント（例えば、単鎖抗体）の構築物、またはこれらの混合物が特に好ましい。適当なフラグメントには、特にFab、F（ab’）2、Fab’および／またはscFvが含まれる。抗体構築物は、本明細書に示されるいずれの抗体またはフラグメントのものであってもよい。

本明細書に示される種々の成分に加えて、医薬製剤は任意の適当な薬学的に適合性の成分を含んでもよい。放射性医薬品の場合、これらは典型的には少なくとも1種の安定剤を含む。アスコルビン酸、p−ABAおよび／またはクエン酸などのラジカル捕捉剤が極めて適している。BSAなどの血清アルブミンも、特に抗体および／またはこれらのフラグメントなどのタンパク質および／またはペプチド成分を保護するのに適した添加剤である。

本発明の方法および使用において、医薬製剤の溶液部分と選択的結合剤（例えば、固相樹脂フィルタ）との間の接触は、長期間（例えば、少なくとも30分、例えば、少なくとも1時間または少なくとも1日の少なくとも一方）にわたって行ってもよい。この実施形態では、選択的結合剤が保存中にα線放射性核種の溶液と存在し得る。しかしながら、代替実施形態では、前記接触が迅速に（例えば、30分未満、10分未満または5分未満、例えば、1分未満または30秒以下）行われる。このような実施形態では、選択的結合剤が、典型的には（本明細書に記載される）固体材料の形態であるか、または固体材料に結合しており、溶液を通過させることができる分離カラム、パッドまたはフィルタに形成され得る。このような通過は重力下であっても遠心力によってもよく、吸引により駆動されてもよく、最も好ましくはシリンジバレルに圧力を印加するなどにより陽圧によって駆動される。このような場合、溶液をフィルタ／パッド／カラムに押し通すと接触が起こる。迅速な分離が最も好ましい方法であるが、代わりに、接触および濾過工程を長期間（例えば、3〜20分）にわたって行って最大放射化学的純度を確保してもよい。

代替実施形態では、前記接触／濾過が、30秒以下、好ましくは1分以下行われ、引き続いて無菌濾過が行われるので、注射に適した無菌溶液が作製される。対応して、本発明のキットは場合によりおよび好ましくはフィルタ（例えば、孔径0.45μmまたは孔径約0.22μm）をさらに含む。全ての場合で、孔径が0.45μm以下、好ましくは0.22μm以下のフィルタを通した濾過が好ましい。このようなフィルタは、本発明の種々の態様に使用される選択的結合剤を保持するのに役立ち得る。

本発明の種々の態様において、配位子部分は、一般的に少なくとも1種の特異的結合（標的）部分と結合しているまたは結合可能である。このような結合は、共有結合（炭素−炭素、アミド、エステル、エーテルもしくはアミン結合など）によってもよいし、強力な非共有結合相互作用、例えば、特異的結合部分の対（ビオチンとアビジン／ストレプトアビジンなど）の結合によってもよい。最も好ましくは、配位子が共有結合によって、場合によりリンカー（アルコール、酸、アミン、アミド、エステルまたはエーテル基によって各末端で独立に置換されたC1〜C10アルキル基など）によって標的部分と結合している。

本発明の全ての態様において、選択的結合剤は、典型的には固体もしくはゲルである、または固体もしくはゲルマトリックス（多孔質マトリックスもしくは膜など）上に固定化されている。これにより、取り扱いおよび分離が容易になり、選択的結合剤をα線放射性同位体錯体と接触させることおよびその後の分離も容易になる。「固体」材料は、シリンジの手動使用によって提供される圧力または自動化装置で提供される圧力を含む穏やかな機械圧力下でその形状を保持するものとみなすことができる。典型的には、選択的結合剤は、溶液が材料の細孔を通過することができるように多孔質材料の形態であるか、または多孔質材料に固定化されている。選択的結合剤を支持するのに適したマトリックスは本明細書で議論され、当業者に周知である。これらには、金属酸化物（例えば、シリカ、アルミナ、チタニア）、ガラス、金属、プラスチック等が含まれる。選択的結合剤が、このようなマトリックスの表面上に固定化されても、それ自体が多孔質マトリックスを形成してもよい。示される材料のいずれも、必要に応じて、膜（メンブレン）、樹脂ビーズ、ゲルビーズ、自己組織化脂質構造（例えば、リポソーム）、微粒子、ナノ粒子、粉末、結晶およびポリマー構造を形成することができる。2種以上のこのような構造を使用することができることが明らかである。

選択的結合材料として、α線放射性核種錯体よりも溶液中で娘放射性核種に対する親和性が高い少なくとも1種の材料を選択する。選択的結合剤に適したこのような材料には、陽イオン交換樹脂、サイズ排除樹脂、ゼオライト、モレキュラーシーブ、アルギネート、リポソーム、ホスホネート、ポリホスホネート、リン脂質、糖脂質、リポタンパク質、オリゴ糖、フェリチン、トランスフェリン、フィチン酸および共沈剤の少なくとも1つが含まれる。極めて好ましい選択的結合剤には、陽イオン交換樹脂、ヒドロキシアパタイトおよびゼオライトが含まれる。

一実施形態では、本発明の選択的結合剤が多糖を含まない。一実施形態では、選択的結合剤がアルギネートを含まない。さらなる実施形態では、結合剤が少なくとも1種のセラミックス材料などの少なくとも1種の無機材料を含む、から本質的になるまたはからなる。無機樹脂（例えば、無機イオン交換樹脂）、金属酸化物（特にメソポーラスなどの多孔質の場合、シリカ、アルミナ、チタニアなど）、ヒドロキシアパタイト（置換ヒドロキシアパタイトを含む）、モレキュラーシーブおよびゼオライトが、極めて好ましい無機結合材料を形成する。

選択的結合剤として使用するのに適したある材料の詳細を以下表1に示す。説明の列に示す実施例は、本発明に選択的結合剤として使用するための材料の好ましい選択肢を形成する。

一態様では、選択的結合剤がカラムまたはフィルタの形態である。このおよび他の適当な実施形態では、接触の手段が、選択的結合剤の中を通るまたは選択的結合剤を通り過ぎる溶液の流れとなる。あるいは、選択的結合剤が支持体に固定化されている場合、流れはこのような支持体の中を通ってもよいし、支持体を通り過ぎてもよい。（本明細書に記載される）無菌濾過膜中を通るその後の流れが好ましい。

本発明の組成物または医薬配合物から得られる注射溶液は、一定範囲の疾患の治療に適しており、特に、過形成性疾患および腫瘍性疾患などの望ましくない細胞増殖に関する疾患の治療に適している。例えば、小細胞および非小細胞肺がん、悪性黒色腫、卵巣がん、乳がん、骨がん、結腸直腸がん、膵がん、膀胱がん、子宮頸がん、肉腫、リンパ腫、白血病、前立腺の腫瘍および肝臓腫瘍などの転移性および非転移性の癌性疾患は全て適当な標的である。治療の「対象」は、ヒトまたは動物、特に哺乳動物、さらに特に霊長類、イヌ、ネコまたはげっ歯類哺乳動物であり得る。

本発明の他の態様は、本発明による組成物の提供、または治療に使用するための医薬品の製造への本発明による組成物の使用である。このような治療は、特に、本明細書の上で指定したものを含む疾患の治療である。本明細書で使用される「治療」には、反応的および予防的治療、原因的および対症的な治療および緩和が含まれる。

本発明から得られる医薬品の治療への使用は、このような治療を必要とする対象への本発明による注射溶液の投与および1つまたは複数の追加の治療の投与を含む併用療法の一部としてでもよい。適当な追加の治療には、外科手術、化学療法および放射線療法（特に、外部ビーム放射線療法）が含まれる。

さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載される装置、キットを包含する。このようなキットは、α線放射性同位体、配位子、標的部分および娘核種を結合するための選択的結合材料を含む。典型的には、使用中、α線放射性核種は、α線放射性核種錯体として存在する、または前記キットの第1の溶液（α線放射性核種および任意の娘核種を含む）と前記キットの第2の溶液（標的部分と結合した配位子を含む）との間の接触によってこのような錯体に形成される。結合後、α線放射性核種錯体を選択的結合剤と接触させる。接触は、本明細書に記載されるいずれの方法であってもよいが、好ましくはα線放射性核種錯体溶液を、選択的結合材料のカラム、パッド、フィルタ、膜またはプラグに通過させることによる。

本発明のキットは、一般的にフィルタまたはカラムの形態の選択的結合材料を含む。α線放射性核種溶液は第1の容器中に存在するが、この容器および本明細書で言及される全ての容器はバイアル、シリンジ、シリンジバレル、カートリッジ、カセット、ウェル、アンプルまたは他の任意の適当な容器ならびにこのような容器の一部、例えば、プレート内の1つのウェルまたは多試薬カートリッジもしくはカセット内の1つのボイドであり得る。第1の容器および第2の容器（存在する場合）は、同じ器具の一部を形成してもよく（例えば、多成分プレートまたはカセット中の別々のウェルまたはボイドであってもよく）、場合によりシール、プラグを除去するまたはタップを開くまたは絞り、クランプ等を除去して溶液の混合を可能にすることによって、互いに流体連通してもよい。このような混合は、手動で開始しても、自動化装置内の操作の結果であってもよい。

本発明のキットの一実施形態は、自動化装置、例えば、自動化合成装置のためのカートリッジの形態である。このような自動化装置により、cGMP原則によるコンプライアンスを遵守するために最小限の手動介入で本発明の方法を実施することが可能になる。したがって、典型的な装置は、本発明のキットもしくは器具を含む、または本発明のキットもしくは器具を用いて充填される自動化合成装置（GEHC FastLabまたはTracerLabなど）を含む。したがって、本発明のキットまたは器具を含む自動化装置は、本発明のさらなる態様を形成する。本発明のキットは、これらのまたは任意の類似の装置のいずれかのための器具、カートリッジ、ローター、試薬パック等の形態であり得る。自動化装置は、放射性核種（例えば、トリウム227）と配位子／生体分子結合体の錯体形成、選択的結合剤（例えば、固相樹脂）上での濾過による娘核種の除去、無菌濾過および製剤バイアルへの分注を含む完全自動化工程に使用され得る。したがって、本発明の種々の方法は、本明細書に記載されるキットまたは器具を含む装置などの自動化装置を用いて行うことができる。

関連する実施形態では、本発明は、投与器具を提供する。このような器具は、α線放射性核種錯体および娘核種の溶液を含んでよく、前記娘核種のための選択的結合剤を含む。使用中、このような投与器具は、選択的結合剤を通るまたは通り過ぎる溶液の通過によって娘核種を同時に除去し、結果として生じる精製溶液を対象に送達することもできる。

本発明の医薬組成物から形成されるおよび形成可能な注射溶液ならびに本発明のキットを使用して形成される注射溶液が本発明のさらなる態様を形成することは明らかである。このような溶液は、例えば、少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種および少なくとも1種の薬学的に許容される担体または希釈剤の溶液を含む注射溶液であって、前記少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種の放射性崩壊系列から生じるいずれの錯体形成していないイオンの溶液濃度も、前記少なくとも1種の錯体形成しているα線放射性核種の溶液濃度の10％以下である注射溶液であり得る。

本発明の一態様は、溶液中の少なくとも1種の有機成分の放射線分解を減らす方法に関する。一般的に、これは、いずれかの実施形態に関して本明細書に記載される溶液であり、少なくとも1種のα線放射性核種錯体、少なくとも1種の娘放射性核種および少なくとも1種の有機成分を含み得る。典型的には、この実施形態および全ての実施形態において、娘核種は、対応する錯体中または錯体からの少なくとも1種のα線放射性核種の放射性崩壊によって形成される娘同位体である。有機材料は、任意の薬学的に許容される担体、希釈剤、緩衝剤等（そのいずれも、有機物であってもなくても、本発明に関して記載される溶液に組み込まれ得る）を含む任意の有機成分であり得る。最も一般的には、有機成分は錯化剤および／または標的剤を含み、これは典型的には本明細書に記載される前記錯体の錯化剤である。標的剤は、任意の適当な標的部分（抗体、抗体フラグメント（Fab、F（ab’）₂、scFv等）、抗体またはフラグメント結合体等など）であり得る。標的剤は、典型的には共有または非共有結合によって錯体と結合している。このような溶液を少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤（特に、本明細書のいずれかの実施形態に記載される少なくとも1種の選択的結合剤であるが、最も特にはヒドロキシアパタイトなどの無機結合剤）と接触させることによって、娘放射性核種を溶液から捕捉し、有機材料と他の材料（水を含む）の両方から分離することができ、これをラジカル型に容易に電離または変換することができる。直接放射線分解が減ることからの直接の利益のみならず、放射線分解のこの減少は明らかに、低濃度のラジカルおよび酸化種が錯体または標的部分の有機材料との望ましくない反応を減らすという点で間接的な利益にもなる。この方法の実施形態として、本発明は、少なくとも1種のα線放射性核種錯体、少なくとも1種の娘放射性核種および場合により少なくとも1種の有機成分（錯化剤および／または標的剤など）を含む溶液中のH₂O₂濃度を低下させる方法であって、前記溶液を、前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む方法も提供する。

全ての態様において、放射線分解または成分の濃度を「低下させること」は、特異的結合剤を除く溶液中の全ての対応する成分を含む対照溶液と比べた低下に関する。同様に、「除去すること」は、ゲルまたは固体（セラミックス、多孔質固体等など）などの分離可能な材料中の放射性核種を捕捉することなどによって、遊離溶液から放射性核種を除去することに関する。

実施例１
セラミックスヒドロキシアパタイトを用いた自然落下式カラムへのラジウム223の取り込み
セラミックスヒドロキシアパタイト100mgを秤量し、カラムに移した。HEPES緩衝液（5mM、pH8）を用いてカラムを平衡化した（3×1ml）。次いで、HEPES緩衝液1mlをカラムに添加し、これを、1mL中140kBqラジウム223をロードする前に一晩静置した。取り込みは即時であった。次いで、カラムをHEPES緩衝液（3×1ml）で洗浄し、HPGe検出装置（Ortec、Oak Ridge、TN）を用いてカラム材料へのラジウム223の取り込みを測定した。

カラム材料は、ラジウム223および娘核種の98.9％を除去した（表2）。

実施例２
プロピルスルホン酸シリカ系陽イオン交換樹脂を用いたスピンカラムでのリン酸緩衝液中の標的トリウム結合体の精製
前記のように（国際公開第2011／098611号パンフレット）調製したトラスツズマブキレート剤結合体を、精製後HCl中で5日間保存し、したがって、内部増加ラジウム223およびラジウム223崩壊の子孫を含むトリウム227を用いる、トリウム227（標的化トリウム結合体、TTCを形成している）で標識した。各試料は、300μl食塩水リン酸緩衝液pH7.4（Biochrome PBS Dulbecco、カタログ番号L1825）中トリウム227 520kBqおよびラジウム223 160kBq 0.21mgを含有していた。試料を、15mgプロピルスルホン酸シリカ系陽イオン交換樹脂を含むカラムに添加した。カラムを遠心分離し（10000rcf、1分）、溶離液を回収した。HPGe検出装置（Ortec、Oak Ridge、TN）を用いて、カラムと溶離液との間のトリウム227（TTC）およびラジウム223の分布を決定した。

カラム上のTTC（トリウム227によって表される）およびラジウム223の保持はそれぞれ、5.5％および99.1％であった（表3）。

実施例３
プロピルスルホン酸シリカ系陽イオン交換樹脂を用いたスピンカラムでのクエン酸緩衝液およびリン酸緩衝液中のラジウム223の除去
0.9％塩化ナトリウムを含む50mMクエン酸緩衝液pH5.5または食塩水リン酸緩衝液pH7.4（Biochrome PBS Dulbecco、カタログ番号L1825）300μl中160kBqラジウム223を、プロピルスルホン酸シリカ系陽イオン交換樹脂60mgを含むカラムに添加した。次いで、カラムを遠心分離し（10000rcf、1分）、溶離液を回収した。HPGe検出装置（Ortec、Oak Ridge、TN）を用いて、カラムと溶離液との間のラジウム223の分布を決定した。

カラム上のラジウム223の保持はそれぞれ、クエン酸緩衝液については96.5％であり、リン酸緩衝液については99.6％であった（表3）。

実施例４
選択的結合剤材料のさらなる比較
アルギン酸ストロンチウムおよびアルギン酸カルシウムゲルビーズ、DSPGリポソーム、セラミックスヒドロキシアパタイト、ゼオライトUOP 4A型、ならびに2種の陽イオン交換樹脂（AG50WX8およびSOURCE 30S）を、ラジウム223の取り込みについて試験する材料として選択した。材料を製剤中に懸濁液として存在させることによって、核種の受動拡散取り込みを試験した。振盪しながら、25℃で1時間の平衡後にゲルマニウム検出器を用いて測定値をとった。自然落下式カラムへの遊離核種の除去も試験した。

ラジウム223の取り込み
全ての材料が、選択した実験条件で、30.8±5.8〜95.4±2.5％取り込みに及ぶ受動拡散取り込みによってラジウム223および娘核種をある程度除去した。試験した全ての物質が、ほぼ完全な取り込みで自然落下式カラム装置でラジウム223および娘核種を除去した。結果は、アルギン酸ゲルビーズを除く全ての試験材料で、ラジウム223の受動拡散取り込みと比べて有意に高く（約100％）、変動が最小（＜1％）であった（表4参照）。

ラジウム223娘同位体を捕捉するのに適した種々の材料が同定されている。アルギン酸ストロンチウムおよびアルギン酸カルシウムゲルビーズ、DSPGリポソーム、セラミックスヒドロキシアパタイト、ゼオライトUOP 4A型、ならびに2種の陽イオン交換樹脂（AG50WX8およびSOURCE 30S）を試験すると、全ての材料がラジウム223および娘同位体を除去することが分かった。

受動拡散取り込みを試験するとDSPGリポソームが優れており、懸濁液として使用すると受動拡散による取り込みについて他の材料が最適以下であった。しかしながら、自然落下式カラムで使用すると、陽イオン交換樹脂およびセラミックスヒドロキシアパタイトが優れていた。

実施例５
放射線分解の減少
要約
配合物の水相中での過酸化水素（H₂O₂）の形成を、溶液からの放射性核種に有効に結合することが示されている材料の1つであるセラミックスヒドロキシアパタイトの存在下および非存在下での放射線分解の尺度として試験した。放射線分解および水相中の遊離ラジカルの形成により、放射性核種錯体が分解されるので、存在するH₂O₂の発生および量の最小化が望ましい。3日後、セラミックスヒドロキシアパタイトを含む試料中のH₂O₂濃度は対照よりも有意に低く、溶液からの²²³Raおよび²²⁷Thの取り込みはほぼ完全であった。

方法
Shimadzo（京都、日本）製のUVmini-1240単一ビーム分光光度計（190〜1100nm）を使用し、光線透過率を730nmで記録してH₂O₂濃度を分析した。試料の吸光度を固定波長で測定する（n＝3）測光モードを使用した。使用するキュベットは、ポリスチレン製のPlastibrand使い捨て1.5mlセミミクロ（12.5×12.5×45mm）キュベットとした。

0.5mg／ml西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液および2mg／mlペルオキシダーゼ基質（2，2’−アジノ−ビス（3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸）ジアンモニウム塩）溶液を無金属水に溶解することによって作製した。ペルオキシダーゼ酵素は、基質としてのH₂O₂によりペルオキシダーゼ基質を無色から緑色に変える。1.765、0.882、0.441、0.221および0.110mmol／L H₂O₂のH₂O₂標準を、30％（w／w）H₂O₂を無金属水に希釈することによって作製した（n＝3）。標準曲線の直線性はR²＝0.9995であった。

試料は、9mg／ml塩化ナトリウム250μl中100mg／mlセラミックスヒドロキシアパタイトからなり、これに新たに調製した²²⁷Th溶液を充填して0.5kBq／μlの濃度とした（n＝3）。

²²⁷Thのみを含み結合材料を含まない1つの陰性対照と結合材料を含むが放射線源を含まない1つの陽性対照の2種の対照試料を分析した（n＝3）。陰性対照を分析して塩化ナトリウム溶液中の放射性核種の均一性および結合材料の非存在下で生成されたH₂O₂の量を確認する一方で、陽性対照を分析して有意なレベルのH₂O₂が放射能の存在なしに発達したかどうかを調べた。

陰性対照におけるセラミックスヒドロキシアパタイト試料への放射性核種の取り込み割合および放射性核種の均一性を計算するために、上清60μlを除去する前にHPGe検出器で各試料または対照を測定した。試料、対照および標準をさらに調製して、9mg／ml塩化ナトリウム900μlをペルオキシダーゼ基質溶液50μl、西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液25μlおよび試料、対照または標準からのそれぞれの上清25μlと混合することによってH₂O₂を分析した。試料、対照または標準を慎重に混合し、直ちにUV-vis分光光度測定によって測定した。放射性試料および対照については、残りの試料体積をHPGe検出器で最後に測定した。セラミックスヒドロキシアパタイトへの放射性核種の取り込みまたは塩化ナトリウム溶液中の放射能の均一性をHPGeスペクトルの助けを借りて計算した。

試料、標準および対照中のH₂O₂濃度を、0、3、7、10および14日の時点で、730nmでUV-vis分光光度測定によって分析した。

結果
懸濁したセラミックスヒドロキシアパタイトおよび新たに調製した²²⁷Thの試料中で14日の保存中に形成したH₂O₂の測定されたレベルは、セラミックスヒドロキシアパタイトを含まない陰性対照と比べて有意に低下していた（図1）。放射能を含まないセラミックスヒドロキシアパタイトを含む陽性対照は、本方法の統計誤差の外側にH₂O₂形成を示さなかった（図1）。セラミックスヒドロキシアパタイトの懸濁液への新たに調製した²²⁷Thの受動拡散取り込みは90分の反応時間で81±3％であった。セラミックスヒドロキシアパタイトによる²²⁷Thおよび生成された²²³Raの連続的取り込みは、14日のインキュベーション後に測定すると、それぞれ99±5％および102±12％であった。

測定されたH₂O₂の減少は、含有溶液の放射線分解によるラジカルおよび酸化剤の生成の減少を証明している。

Claims (34)

1. 少なくとも1種のα線放射性核種の精製溶液を作製する方法であって、
   前記少なくとも1種のα線放射性核種の錯体および少なくとも1種の娘核種を含む溶液を前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップと、
   その後、前記少なくとも1種のα線放射性核種錯体の溶液を前記少なくとも1種の選択的結合剤から分離するステップと
   を含む、方法。
2. 少なくとも1種のα線放射性核種錯体、少なくとも1種の娘放射性核種および少なくとも1種の有機成分を含む溶液中の少なくとも1種の有機成分の放射線分解を減らす方法であって、前記溶液を、前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む、方法。
3. 少なくとも1種のα線放射性核種錯体を含む溶液から、少なくとも1種の娘放射性核種を除去する方法であって、前記溶液を前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップを含む、方法。
4. 前記溶液が医薬製剤である、請求項2または3に記載の方法。
5. 前記溶液を前記選択的結合剤から分離するステップをさらに含む、請求項2から4のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記α線放射性核種が配位子を有する錯体の形態であり、前記配位子が特異的結合部分（抗体など）と結合している、請求項1から5のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記選択的結合剤が固体支持体もしくはゲル支持体の形態であるか、または固体支持体もしくはゲル支持体に付加している、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記固体またはゲル支持体が膜、樹脂ビーズ、ゲルビーズ、自己組織化脂質構造（例えば、リポソーム）、微粒子、ナノ粒子、粉末、結晶、セラミックスおよびポリマー構造から選択される少なくとも1つの形態であるか、または選択される少なくとも1つの形態に付加している、請求項7に記載の方法。
9. 前記選択的結合剤が陽イオン交換樹脂、サイズ排除樹脂、ゼオライト、モレキュラーシーブ、ヒドロキシアパタイト、アルギネート、リポソーム、ホスホネート、ポリホスホネート、リン脂質、糖脂質、リポタンパク質、オリゴ糖、フェリチン、トランスフェリン、フィチン酸および共沈剤から選択される少なくとも1つを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記溶液が、前記選択的結合剤を貫通するもしくは通り過ぎる、または前記選択的結合剤が固定化されている支持体を貫通するもしくは通り過ぎる前記溶液の流れによって前記選択的結合剤と接触する、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記接触が、前記溶液が前記選択的結合剤を貫通してもしくは通り過ぎて、または前記選択的結合剤が固定化されている支持体を貫通してもしくは通り過ぎて流れる濾過による、請求項10に記載の方法。
12. 前記濾過が前記溶液を無菌濾過膜中に流すことをさらに含む、請求項11に記載の方法。
13. 前記接触が30分未満、例えば、10分未満、例えば、5分未満または1分未満（例えば、30秒以下）の間で行われる、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記溶液が、前記選択的結合剤および前記溶液を容器（例えば、密閉または部分密閉容器）に加えることによって前記選択的結合剤と接触される、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記接触が30分以上（例えば、1時間以上、例えば、1日以上）行われる、請求項14に記載の方法。
16. 前記α線放射性同位体が²²⁷Thなどの少なくとも1種のα線放射トリウム同位体を含む、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記少なくとも1種の娘核種が²²³Raなどの少なくとも1種のラジウム同位体を含む、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。
18. 少なくとも1種のα線放射性同位体錯体の医薬製剤を形成するためのキットであって、
    i）前記少なくとも1種のα線放射性同位体および少なくとも1種の娘同位体の溶液と；
    ii）少なくとも1個の配位子と；
    ii）特異的結合部分と；
    iii）前記少なくとも1種の娘同位体のための少なくとも1種の選択的結合剤と
    を含み、前記α線放射性同位体は、前記特異的結合部分と結合しているまたは結合可能な前記配位子によって錯体形成しているまたは錯体形成可能である、キット。
19. 前記少なくとも1種のα線放射性同位体および少なくとも1種の娘同位体の溶液が第1の容器（例えば、バイアル、シリンジ等）中に存在し、前記特異的結合部分と結合した前記配位子が第2の容器中に存在する、請求項18に記載のキット。
20. 前記選択的結合剤が、前記配位子による錯体形成後、および場合により前記特異的結合部分との結合後に前記α線放射性同位体の溶液を通過させることができるシリンジフィルタなどの少なくとも1つのフィルタの形態で存在する、請求項18または19に記載のキット。
21. 前記選択的結合剤が少なくとも1つの固体もしくはゲル支持体の形態で存在しているか、または少なくとも1つの固体もしくはゲル支持体に付加している、請求項18または19に記載のキット。
22. 前記選択的結合剤が前記第1の容器中に存在する、請求項21に記載のキット。
23. 前記選択的結合剤が、前記溶液の投与工程によって前記溶液から分離されて配置されている、請求項18から22のいずれか一項に記載のキット。
24. 前記固体またはゲル支持体が、膜、樹脂ビーズ、ゲルビーズ、自己組織化脂質構造（例えば、リポソーム）、微粒子、ナノ粒子、粉末、結晶およびポリマー構造から選択される少なくとも1つである、請求項23に記載のキット。
25. 前記選択的結合剤が、陽イオン交換樹脂、サイズ排除樹脂、ゼオライト、モレキュラーシーブ、ヒドロキシアパタイト、アルギネート、リポソーム、ホスホネート、ポリホスホネート、リン脂質、糖脂質、リポタンパク質、オリゴ糖、フェリチン、トランスフェリン、フィチン酸および共沈剤から選択される少なくとも1つを含む、請求項18から24のいずれか一項に記載のキット。
26. 前記α線放射性同位体が²²⁷Thなどの少なくとも1種のトリウム放射性同位体である、請求項18から25のいずれか一項に記載のキット。
27. 前記娘同位体が²²³Raなどの少なくとも1種のラジウム同位体である、請求項18から26のいずれか一項に記載のキット。
28. フィルタおよび／または投与器具をさらに含む、請求項18から27のいずれか一項に記載のキット。
29. 孔径が0.22μm以下のフィルタを含む、請求項18から28のいずれか一項に記載のキット。
30. 少なくとも1種のα線放射性核種錯体および少なくとも1種の娘核種の溶液を含む投与器具であって、前記娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤を含むフィルタをさらに含む、投与器具。
31. 使い捨てシリンジおよびシリンジフィルタの形態である、請求項30に記載の投与器具。
32. 少なくとも1種の錯体形成したα線放射性核種および少なくとも1種の娘核種の溶液を含む投与器具を含む請求項18から29のいずれか一項に記載のキットであって、フィルタの形態の、前記娘核種のための選択的結合剤をさらに含むキット。
33. α線放射性核種錯体の注射溶液を形成する方法であって、
    a）α線放射性核種の溶解塩および少なくとも1種の娘核種を含む第1の溶液を、少なくとも1つの標的部分と結合した少なくとも1個の配位子を含む第2の溶液と組み合わせるステップと；
    b）前記合わせた溶液を適当な温度（例えば、0℃〜50℃、好ましくは20℃〜40℃）で前記配位子と前記α線放射性同位体との間の錯体形成を可能にする期間インキュベートしてそれによって少なくとも1種のα線放射性同位体錯体の溶液を形成するステップと；
    c）前記少なくとも1種のα線放射性同位体錯体の溶液を前記少なくとも1種の娘核種のための少なくとも1種の選択的結合剤と接触させるステップと；
    d）前記少なくとも1種のα線放射性核種錯体の溶液を前記少なくとも1種の選択的結合剤から分離するステップと
    を含む方法。
34. ステップc）およびd）が請求項1から17のいずれか一項に規定の精製溶液を作製する方法を含む、請求項33に記載の注射溶液を形成する方法。

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