JP2016517396A - 抗微生物抗バイオフィルム組成物及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2013年3月7日付けで出願され、「抗微生物組成物並びに創傷感染症を処置及び予防するためのその方法及び使用(ANTIMICROBIAL COMPOSITIONS AND METHODS AND USES THEREOF FOR TREATING AND PREVENTING WOUND INFECTIONS)」と名称を付けられた、米国仮特許出願第61/773,912号、2013年4月26日付けで出願され、「抗微生物抗バイオフィルム組成物及びその使用方法(ANTIMICROBIAL-ANTIBIOFILM COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF)」と名称を付けられた、国際特許出願第PCT/CA2013/050324号、及び2013年6月13日付けで出願され、「抗微生物抗バイオフィルム組成物及びその使用方法(ANTIMICROBIAL-ANTIBIOFILM COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF)」と名称を付けられた、米国仮特許出願第61/834,654号の利益及び優先権を主張する。上で特定された特許出願の内容は、ここで、参照により本明細書の詳細な説明に明確に組み込まれる。
本発明は、創傷感染症の予防及び処置のための抗微生物及び抗バイオフィルム組成物を使用する方法に関し得る。本発明は、創傷ケア、消毒薬、化粧品及び医療機器/装置において適用するための、キレート剤、亜鉛塩、抗微生物剤(antimicrobial)及び薬学的に許容し得る賦形剤を含む組成物を製剤化する方法に更に関し得る。より詳細には、本発明は、2つ以上のキレート剤及び亜鉛塩を含有する薬学的に許容し得る製剤を送達する有効な方法に関し得る。
用語「抗微生物薬(antimicrobial)」は、細菌及び酵母を含むが、これらに限定されない、微生物の成長を鎮める(kill)か、又は阻害するか、又は止める(stop)化合物又は組成物を指す。
1つの方法により、1つ又は2つのキレート剤及び金属イオン塩を含有する2つの成分の組成物が形成されるなら、これらの化合物が以下の方法で組み合わされ得る。十分に撹拌しながら、キレート剤は、水に溶解され、続いて金属イオン塩が溶解され得る。しかしながら、添加順序が逆になり得ることは注意されるべきである。
本発明は、少なくとも2つのキレート剤及び1つの金属イオン塩を含む、創傷感染症の予防及び処置のための、固有かつ増強された抗感染性組成物を含み得る。
本発明の組成物は、消毒溶液、ローション、クリーム、ジェル、スプレー、ジェルスプレー、絆創膏、包帯、ラップ、ガーゼ、テープ、接着剤及び創傷照射装置を含むが、これらに限定されない、組成物を創傷に適用する/送達するのに適した、様々な製剤に加えられてもよい。そのような製剤を提供するために、本発明の組成物は、1つ以上の薬学的に許容し得る賦形剤と組み合わされる。
本発明の別の態様は、創傷感染症を処置する方法を含み、創傷表面、並びに食物/食肉加工設備を除染する方法も含み得る。一般的に、創傷感染症は、対象の感染した創傷に、有効量の1つ以上のキレート剤及び金属イオン塩を、創傷感染症を低減するのに有効な1つ以上の抗微生物剤と組み合わせて適用することにより、処置され得る。
(i)クエン酸ナトリウム:(a)50,000mg/L〜100,000mg/L、(b)25,000mg/L〜50,000mg/L、(c)10,000mg/L〜25,000mg/L、(d)5,000mg/L〜10,000mg/L、及び(e)1,000mg/L〜5,000mg/L、
(ii)EDTA二ナトリウム:(a)10,000mg/L〜25,000mg/L、(b)5,000mg/L〜10,000mg/L、(c)1,000mg/L〜5,000mg/L、(d)500mg/L〜1,000mg/L、及び(e)100mg/L〜500mg/L、
(iii)塩化亜鉛:(a)1,000mg/L〜5,000mg/L、(b)500mg/L〜1,000mg/L、(c)100mg/L〜500mg/L、及び(d)10mg/L〜100mg/L
を含んでもよい。
クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛の単独及び組み合わせのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
黄色ブドウ球菌の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図1)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛の単独及び組み合わせのメチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウスの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図2)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛の単独及び組み合わせの緑膿菌成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
緑膿菌の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図3)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛の単独及び組み合わせのリステリア・モノサイトゲネス成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
リステリア・モノサイトゲネスの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA及び塩化亜鉛を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図4)。
クエン酸ナトリウム、EDTA、及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのメチシリン耐性黄色ブドウ球菌[MRSA]成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
黄色ブドウ球菌(MRSA)の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTA及びクエン酸ナトリウム+ZnCl2の組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図5)。
クエン酸ナトリウム、EDTA、及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのメチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)成長及びバイオフィルム形成に対する作用
MRSPの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図6)。
クエン酸ナトリウム、EDTA、及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの緑膿菌成長及びバイオフィルム形成に対する阻害作用
緑膿菌の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTA及びEDTA+ZnCl2の組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図7)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのサルモネラ・コレレスイスATCC10708に対する阻害作用
サルモネラ・コレレスイスATCC10708の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図8)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの大腸菌O157:H7に対する阻害作用
大腸菌O157:H7の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図9)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独及び組み合わせの大腸菌O157:H7に対する阻害作用
大腸菌O157:H7の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA、及びZnCl2を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図10)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの表皮ブドウ球菌に対する阻害作用
表皮ブドウ球菌の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートをTSBをそれぞれの化合物(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で含有する96ウェルマイクロタイタープレートを別々に、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図11)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのコアグラーゼ陰性ブドウ球菌(CoNS-42)に対する阻害作用
CoNS-42の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図12)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのストレプトコッカス・アガラクチアATCC12386に対する阻害作用
ストレプトコッカス・アガラクチアの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図13)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの肺炎桿菌に対する阻害作用
肺炎桿菌の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図14)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのアシネトバクター・バウマンニに対する阻害作用
アシネトバクター・バウマンニの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図15)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのステノトロホモナス・マルトフィリアに対する阻害作用
ステノトロホモナス・マルトフィリアの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図16)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのバンコマイシン耐性腸球菌(VRE)に対する阻害作用
バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)の一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図17)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのエンテロコッカス・フェカリスに対する阻害作用
エンテロコッカス・フェカリスの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図18)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのプロテウス・ミラビリスに対する阻害作用
プロテウス・ミラビリスの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図19)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのカンジダ・アルビカンスに対する阻害作用
カンジダ・アルビカンスの一晩肉汁培養物をTSBにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTAの組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTAの単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図20)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせのマラセチア・パチデルマティスに対する阻害作用
マラセチア・パチデルマティスの一晩肉汁培養物をサブローデキストロースブロスにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及びクエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせの非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム+EDTA、クエン酸ナトリウム+ZnCl2、及びEDTA+ZnCl2の組み合わせは、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図21)。
クエン酸ナトリウム、EDTA及びZnCl2の単独及び組み合わせのマラセチア・パチデルマティスに対する阻害作用
マラセチア・パチデルマティスの一晩肉汁培養物をサブローデキストロースブロスにて成長させ、接種源として用いた。それぞれの化合物単独(クエン酸ナトリウム又はEDTA又は塩化亜鉛)、及び一緒(塩化ナトリウム+EDTA+塩化亜鉛)の非存在下又は存在下で、TSBを含有する96ウェルマイクロプレートを接種し、37℃で24時間インキュベーションした。Labsystems Multiskan Ascentマイクロプレートリーダーを用いた600nmでの吸光度に基づき、浮遊細胞の成長を決定した。ウェル中の培地を捨て、ウェルを水で3回リンスし、次に結合した細胞をクリスタルバイオレットで染色することにより、バイオフィルムを測定した。次に、染料を33%酢酸で可溶化し、マイクロタイタープレートリーダーを用いて、630nmでの吸光度を決定した。クエン酸ナトリウム、EDTA、及びZnCl2を含む組成物は、クエン酸ナトリウム、又はEDTA、又は塩化亜鉛の単独と比較して、バイオフィルム形成に対して増強した阻害作用を示した(図22)。
Claims (39)
- (a)EDTA、EGTA、DTPA、EDDHA、IDA、CDTA、HEDTA、HEIDA、NTAの二ナトリウム又は四ナトリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、オボトランスフェリン、ラクトフェリン及びセロトランスフェリンからなる群より選択される1つ以上のキレート剤、及び場合により、
(b)塩化亜鉛、グルコン酸亜鉛、乳酸亜鉛、クエン酸亜鉛、硫酸亜鉛、及び酢酸亜鉛からなる群より選択される亜鉛塩
を含む群から選択される、創傷感染症と関連する細菌の成長又はバイオフィルム形成を阻害するための組成物。 - 前記キレート剤が、EDTA二ナトリウム及びクエン酸ナトリウムの1つ以上である、請求項1に記載の組成物。
- 前記亜鉛塩が塩化亜鉛である、請求項1に記載の組成物。
- a.EDTA二ナトリウム及びクエン酸ナトリウム、
b.EDTA二ナトリウム及び塩化亜鉛、
c.クエン酸ナトリウム及び塩化亜鉛、並びに
d.クエン酸ナトリウム、EDTA二ナトリウム及び塩化亜鉛
からなる群より選択される、請求項2に記載の組成物。 - 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約2500mg〜約10000mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約5000mg〜約10000mgの間であり、塩化亜鉛が、約500mg/L〜約5000mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約10000mg〜25000mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約50000mg〜100000mgの間であり、塩化亜鉛が、約1000mg/L〜5000mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約5000mg〜10000mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約25000mg〜50000mgの間であり、塩化亜鉛が、約500mg/L〜1000mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約1000mg〜5000mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約10000mg〜25000mgの間であり、塩化亜鉛が、約100mg/L〜500mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約500mg〜1000mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約5000mg〜10000mgの間であり、塩化亜鉛が、約10mg/L〜100mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 前記EDTA二ナトリウムが、組成物1L当たり約100mg〜500mgの間であり、クエン酸ナトリウムが、組成物1L当たり約1000mg〜5000mgの間であり、塩化亜鉛が、約10mg/L〜100mg/Lの間である、請求項1から4に記載の組成物。
- 創傷中の感染症、嚢胞性線維症感染症、乳腺炎、耳炎、食物に由来する疾患及び病院と関連する感染症の1つ以上と関連する細菌及び細菌のバイオフィルムに対して使用するための、請求項1から10に記載の組成物。
- メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)、表皮ブドウ球菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌(CoNS)、バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)、カルバペネム耐性肺炎桿菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)、マラセチア・パチデルマティス、サルモネラ・チフィリウム、大腸菌O157:H7、リステリア・モノサイトゲネス、カンピロバクター・ジェジュニ、バチルス属種、カンジダ・アルビカンス、ストレプトコッカス・アガラクチア、ストレプトコッカス・ウベリス、大腸菌、サルモネラ・コレレスイス、ステノトロホモナス・マルトフィリア、エンテロコッカス・フェカリス、プロテウス・ミラビリス、クレブシエラ属種、エンテロバクター属種、及びシトロバクター属種からなる群より選択される1つ以上の感染症関連細菌又は酵母に対して使用するための、請求項1から11に記載の組成物。
- EDTA二ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含み、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)、表皮ブドウ球菌、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌(CoNS)、バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)、肺炎桿菌、緑膿菌、アシネトバクター・バウマンニ、メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)、マラセチア・パチデルマティス、大腸菌O157:H7、ストレプトコッカス・アガラクチア、サルモネラ・コレレスイス、ステノトロホモナス・マルトフィリア、エンテロコッカス・フェカリス、プロテウス・ミラビリス、及びカンジダ・アルビカンスからなる群より選択される1つ以上の感染症関連細菌又は酵母に対して使用するための、請求項1から11に記載の組成物。
- EDTA二ナトリウム及び塩化亜鉛を含み、緑膿菌、メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)、マラセチア・パチデルマティス、及び大腸菌O157:H7からなる群より選択される、1つ以上の感染症関連細菌又は酵母に対して使用するための、請求項1から11に記載の組成物。
- クエン酸ナトリウム及び塩化亜鉛を含み、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)、メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)、マラセチア・パチデルマティス、及び大腸菌O157:H7からなる群より選択される、1つ以上の感染症関連細菌又は酵母に対して使用するための、請求項1から11に記載の組成物。
- クエン酸ナトリウム、EDTA二ナトリウム及び塩化亜鉛を含み、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)、緑膿菌、メチシリン耐性スタフィロコッカス・シュードインターメディウス(MRSP)、マラセチア・パチデルマティス、大腸菌O157:H7、及びリステリア・モノサイトゲネスからなる群より選択される1つ以上の感染症関連細菌又は酵母に対して使用するための、請求項1から11に記載の組成物。
- 水、緩衝液、安定化剤、ゲル化剤、界面活性剤、草木成分、ビタミン、ミネラル、細胞外基質、抗微生物薬、抗生物質、及びpH調節剤からなる群より選択される1つ以上の成分を更に含む、請求項1から16に記載の組成物。
- 消毒溶液、浸漬溶液、ローション、クリーム、軟膏、ジェル、スプレー、包帯、ガーゼ、絆創膏、熱可逆性ジェルスプレー、ラップ、接着剤、テープ、浸漬液及びバームの1つ以上として調製される、請求項1から17に記載の組成物。
- リポソーム若しくはナノ粒子、又は適当な装置送達システムを含む、請求項1から18に記載の組成物。
- DispersinB、アルギン酸リアーゼ、ナイシン、ラクトフェリシン、セロトランスフェリン、オボトランスフェリン、卵白アルブミン、オボムコイド、硫酸プロタミン、クロルヘキシジン、塩化セチルピリジニウム、トリクロサン、スルファジアジン銀、塩化ベンザルコニウム、過酸化水素、クエン酸、クエン酸カリウム、5-フルオロウラシル、cis-2-デセン酸、DNase I、プロテイナーゼK、銀、ガリウム、銀、バクテリオシン及び抗微生物性ペプチドからなる群より選択される抗感染性化合物を更に含む、請求項1から19に記載の組成物。
- 請求項1から20に記載の組成物の局所又は非局所使用を含む、創傷感染症を予防又は処置する方法。
- 前記創傷感染症が、切創、挫傷、手術部位、裂傷、擦過傷、穿刺、切開、銃撃傷、熱傷、膿皮、中耳炎、外耳炎/内耳炎、ウシの乳房(乳腺炎)、アトピー性皮膚炎、湿疹、褥瘡、静脈性及び動脈性下腿潰瘍、及び糖尿病性下肢潰瘍の感染症の1つ以上から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記組成物の複数の適用を更に含む、請求項21又は22に記載の方法。
- ヒト、家畜、農場動物、動物園の動物、運動競技の動物、及び愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ブタ、ヤギ及びヒツジの1つ以上を処置するために使用される、請求項21から23に記載の方法。
- ヒト、イヌ、ネコ又はウマを処置するために使用される、請求項24に記載の方法。
- ヒトを処置するために使用される、請求項25に記載の方法。
- イヌ、ネコ及びウマを処置するために使用される、請求項25に記載の方法。
- 切創、挫傷、手術部位、裂傷、擦過傷、穿刺、切開、銃撃傷、熱傷、膿皮、耳炎、ウシの乳房(乳腺炎)、アトピー性皮膚炎、湿疹、褥瘡、静脈性及び動脈性下腿潰瘍、糖尿病性下肢潰瘍及び嚢胞性線維症(CF)の1つ以上の感染症を予防又は処置するための、請求項1から20に記載の組成物の使用。
- 食物に由来する疾患と関連する細菌感染症又は病院又はコミュニティーから得た細菌感染症を予防又は処置することを更に含む、請求項1から20に記載の組成物の使用。
- 病院、医療機器、施設又は工場、畜舎、食品及び食肉加工設備、果物及び野菜の1つ以上における使用を更に含む、請求項28又は29に記載の使用。
- ヒト、家畜及び農場動物、及び動物園の動物、運動競技の動物、又は愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、ウシ、ブタ、ヤギ及びヒツジの1つ以上に対する、請求項28又は29に記載の使用。
- ヒトに対する、請求項31に記載の使用。
- イヌ、ネコ、ウマ、及びウシの1つ以上に対する、請求項32に記載の使用。
- 送水ライン又は食肉加工ラインをフラッシングし、食肉加工及びパッケージング設備中の機器を洗浄することを含む、請求項30に記載の方法。
- 請求項1から20に記載の組成物の食肉又は食肉製品への局所使用又は非局所使用を含む、食肉損傷を予防又は処置する方法。
- 請求項1から20に記載の組成物の食肉又は食肉製品への局所使用を含む、食肉を消毒する方法。
- 前記食肉又は食肉製品が、牛肉、豚肉、ラム肉、ヤギ肉、馬肉、鶏肉及び魚肉の1つ以上を含む、請求項35又は36に記載の方法。
- 前記食肉又は食肉製品が、ソーセージケーシングをブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ及びウマの腸又は腸の一部、並びに人工のソーセージケーシングを作製するために使用されるコラーゲン又はセルロースから作製することの1つ以上を含む、請求項35又は36に記載の方法。
- コーティング、吹き付け、噴霧、注入、浸漬、フラッシング、ディッピング、及びリンスの1つ以上を含む、請求項35から38に記載の方法。
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