JP2016503044A - オキシトシンアゴニストとしてのペプチド - Google Patents

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Abstract

本発明は、式(I)[式中、R1は、ヒドロキシ又はアミノであり;R2は、sec−ブチル又はイソブチルであり;R3は、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CH2)2C(O)−NH2、−(CH2)3−NH2又は−CH2−5員芳香族複素環基であり;R4は、水素又は低級アルキルであり;R5は、水素又は低級アルキルであるか;あるいはR4及びR5は、それらが結合しているN及びC原子と一緒になって、ヒドロキシ若しくはハロゲンで場合により置換されているピロリジン環、ピペリジン環、又はアゼチジン環を形成し得;R6は、水素、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CH2)2C(O)OH、−(CH2)2C(O)NH2、アミノ若しくはヒドロキシで場合により置換されているベンジル、−CH2−5員芳香族複素環基、インドリル、−CH2−シクロアルキル、シクロアルキル、−(CH2)2−S−低級アルキルであるか、又は−(CH2)1−4−NH2であり;R6’は、水素又は低級アルキルであるか;あるいはR6及びR6’は、一緒に、シクロアルキルであり;Xは、−C(O)−CHR−NR’−C(O)−であり;R/R’は、互いに独立に、水素又は低級アルキルであり;mは、2であり;oは、0又は1である]で示される化合物、あるいはその薬学的に許容し得る酸付加塩、ラセミ混合物若しくはその対応するエナンチオマー、及び/又は光学異性体に関する。本化合物が、自閉症、ストレス(外傷後ストレス障害を含む)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒の処置のための、ならびにプラダー・ウィリー症候群の処置のための、オキシトシン受容体アゴニストであることが見出された。

Description

本発明は、式I:
Figure 2016503044

[式中、
は、ヒドロキシ又はアミノであり;
は、sec−ブチル又はイソブチルであり;
は、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CHC(O)−NH、−(CH−NH又は−CH−5員芳香族複素環基であり;
は、水素又は低級アルキルであり;
は、水素又は低級アルキルであるか;あるいは
及びRは、それらが結合しているN及びC原子と一緒になって、ヒドロキシ若しくはハロゲンで場合により置換されているピロリジン環、ピペリジン環、又はアゼチジン環を形成し得;
は、水素、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CHC(O)OH、−(CHC(O)NH、アミノ若しくはヒドロキシで場合により置換されているベンジル、−CH−5員芳香族複素環基、インドリル、−CH−シクロアルキル、シクロアルキル、−(CH−S−低級アルキルであるか、又は−(CH1−4−NHであり;
6’は、水素又は低級アルキルであるか;あるいは
及びR6’は、一緒に、シクロアルキルであり;
Xは、−C(O)−CHR−NR’−C(O)−であり;
R/R’は、互いに独立に、水素又は低級アルキルであり;
mは、2であり;
oは、0又は1である]で示される化合物、あるいはその薬学的に許容し得る酸付加塩、ラセミ混合物若しくはその対応するエナンチオマー、及び/又は光学異性体に関する。
本発明の化合物はオキシトシン受容体アゴニストであることが見出され、該化合物は、オキシトシン生物活性を保持する類似体オキシトシンである。かかる類似体分子は、オキシトシン受容体に結合することを含め、内因性オキシトシンと同様の方法で作用することができる。オキシトシンの類似体は、完全に新しい分子構造を有している。
オキシトシンは、位置1と位置6との間のジスルフィド架橋を形成する2つのシステイン基を有する9個のアミノ酸からなる環状ペプチドホルモンである。ヒトオキシトシンは、配列Cys−Tyr−Ile−Gln−Asn−Cys−Pro−Leu−Glyを含む。
ペプチドは、従来の低分子医薬品よりも大きな特異性及び効力及び低毒性プロファイルの利点を提供する商業的関連クラスの薬として浮上してきた。ペプチドは、医師及び特許がペプチド系薬をより多く受け入れると同時に、糖尿病、HIV、肝炎、癌及び他のような多くの疾患のための有望な処置の選択肢を提供する。本発明は、また天然ホルモンオキシトシン及びカルベトシンも含む、ペプチド性オキシトシン受容体アゴニストに関する。
オキシトシンは、陣痛を誘発するために臨床的に使用される子宮弛緩及び過度の出血を制御するための強力な子宮収縮剤であり、かつ泌乳の開始及び維持を増強することが示されている(Gimpl et al., Physiol. Rev., 81, (2001), 629-683, Ruis et al.,BMJ, 283, (1981), 340-342)。カルベトシン(1−デアミノ−1−カルバ−2−チロシン(O−メチル)−オキシトシン)も子宮弛緩及び過度の出血の制御のために臨床的に使用される強力な子宮収縮剤である。
ペプチド性オキシトシンアゴニストは、25,000に一人の子供に影響を与える稀な遺伝性疾患であるプラダー・ウィリー(Prader-Willi)症候群の処置のために使用し得る。
更なる研究は、オキシトシンアゴニストが、腹痛及び背痛を含む炎症及び疼痛(Yang, Spine, 19, 1994, 867-71)、男性(Lidberg et al., Pharmakopsychiat., 10, 1977, 21-25)及び女性(Anderson-Hunt, et al., BMJ, 309, 1994, 929)の両方の性機能障害、過敏性腸症候群(IBS, Louvel et al., Gut, 39, 1996, 741-47)、便秘症及び胃腸管閉塞(Ohlsson et al., Neurogastroenterol. Motil., 17, 2005, 697-704)、自閉症(Hollander et al., Neuropsychopharm., 28, 2008, 193-98)、ストレス(外傷後ストレス障害(PTSD)を含む)(Pitman et al., Psychiatry Research, 48, 107-117)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)(Kirsch et al., J. Neurosci., 25, 49, 11489-93, Waldherr et al., PNAS, 104, 2007, 16681-84)、外科失血又は産後出血の制御(Fujimoto et al., Acta Obstet. Gynecol., 85, 2006, 1310-14)、陣痛誘発及び維持(Flamm et al., Obstet. Gynecol., 70, 1987, 70-12)、創傷治癒及び感染、乳腺炎及び胎盤娩出、ならびに骨粗鬆症の処置のために有用であることを示唆している。加えてオキシトシンアゴニストは、癌及び胎盤機能不全の両方の診断に有用であり得る。
更に、論文"Intranasal Oxytocin blocks alcohol withdrawal in human subjects"(Alcohol Clin Exp Res, Vol, No. 2012)及び"Breaking the loop: Oxytocin as a potential treatment for drug addiction"(Hormones and Behavior, 61, 2012 , 331-339)は、アルコール禁断及び薬物中毒をオキシトシンアゴニストで処置することを提唱している。
オキシトシン及びその受容体は、側坐核及び海馬のような統合失調症の症状に関与する脳の領域に存在する。オキシトシン受容体アゴニストは、自閉症、ストレス(外傷後ストレス障害を含む)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)、統合失調症、アルツハイマー病、精神障害、記憶喪失及び代謝疾患の処置に使用し得る(WO2012/016229)。
本発明の目的は、疾患が、自閉症、ストレス(外傷後ストレス障害を含む)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒であるオキシトシン受容体に関連するCNS疾患の処置のための、ならびにプラダー・ウィリー症候群の処置のための、式Iの新規な化合物ならびに式Iの化合物及びその薬学的に許容しうる塩の使用である。
更なる目的は、式Iの新規な化合物及びそれを含有する医薬の製造である。
本発明は、自閉症、ストレス(外傷後ストレス障害を含む)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒を含む特定のCNS疾患の処置における、ならびにプラダー・ウィリー症候群の処置のための、選択性及び/又は改善を与える、選択的で、有効な化合物を提供し得る。
本発明のペプチドは、表に示すように、バソプレッシン受容体のV1a及びV2に対して非常に良好な選択性を有することが示されている。このことは、副作用を回避するための医薬として使用するための大きな利点を有し得る。これらの生理学的効果は、中枢神経の疾患を処置することを目的とする薬の場合には望ましくない副作用であると考えられる場合がある。したがって、オキシトシン受容体対バソプレシン受容体に対する選択性を有する薬を得ることが望ましい。
本明細書で使用する、用語「低級アルキル」は、1〜7個の炭素原子を含有している飽和の直鎖又は分岐鎖基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n−ブチル、i−ブチル、2−ブチル、t−ブチルなどを表す。
用語「ヒドロキシで置換されている低級アルキル」は、少なくとも1個の水素原子がヒドロキシ基で置き換えられている、上記に定義されているとおりの低級アルキル基を表す。
用語「シクロアルキル」は、3〜6個の炭素原子を含有している環状アルキル鎖を表す。
本明細書で使用する、用語「5員芳香族複素環基」は、イミダゾリル、チオフェニル、フラニル、ピロリル、ピラゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル又はイソオキサゾリル基を表す。
用語「薬学的に許容し得る酸付加塩」は、例えば、塩酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタン−スルホン酸、p−トルエンスルホン酸などの無機酸及び有機酸との塩を包含する。
好ましい5員複素環は、イミダゾール環である。
好ましいのは、oが0であり、そしてmが2である、式Iの化合物である。
以下の具体的な化合物を調製し、オキシトシン受容体に対するそれらのアゴニスト活性について試験した:
Figure 2016503044

Figure 2016503044

Figure 2016503044

Figure 2016503044

Figure 2016503044

Figure 2016503044

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Figure 2016503044

Figure 2016503044

Figure 2016503044
本発明の式Iの化合物の調製は、逐次又は収束合成経路で実施し得る。本反応及び得られた生成物の精製を実施するのに必要な技能は、当業者に公知である。
本明細書において化合物は、Fmoc及びBocの両方の方法論を利用して固相ペプチド化学の標準的方法により合成した。手作業で行う反応は室温で実行し、一方で、マイクロ波利用ペプチド合成は上昇した温度で実施した。
一般的合成の説明:
直鎖状ペプチドは、手作業によるか、又は例えば:Kates and Albericio, Eds., "Solid Phase Synthesis: A practical guide", Marcel Decker, New York, Basel, 2000によって言及されているように最先端の固相合成プロトコル(Fmoc化学)を介するマイクロ波技術を用いるかのいずれかで合成した。固体支持体として、TentaGel-S-RAM 樹脂(0.24ミリ当量/g)を用いた。HOBT/HBTU 1:1(DMF中0.5mol/L)及び4当量のDIPEA(NMP中2mol/L)で活性化した後、全てのFmocアミノ酸を10倍過剰で添加した。Fmoc−切断は、DMF中の20%ピペリジンを用いて達成した。
アリル/Aloc切断及びラクタム環化:
樹脂をDCM中の20当量フェニルシラン及び0.05当量のテトラキストリフェニルホスフィンパラジウムの溶液で、手作業で室温にて30分間処理した。この手順を繰り返した。樹脂を、DMF中の0.5%ジチオカルバミン酸ナトリウムの溶液で洗浄した。ビーズ上ラクタム形成のために、再び活性化試薬を樹脂に添加し、室温で更に8時間振盪した。環化の完了は、ニンヒドリン(Ninhydrin)テストを介して確認した。粗ペプチドを、DMF中の標準的なペプチド活性化試薬で処理した。環化をHPLCによりモニタリングした。
切断:
トリフルオロ酢酸、トリイソプロピルシラン及び水(95/2.5/2.5)の切断−カクテルを、樹脂に加え、室温で1時間振盪した。切断されたペプチドを冷エーテル(−18℃)中で沈殿させた。ペプチドを遠心分離し、残留物を冷エーテルで2回洗浄した。残留物を水/アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥した。
精製:
ペプチドを、固定相としてReprospher 100 C18-Tカラム(100×4.6mm、粒径5u)及び溶離剤として水/アセトニトリル(勾配1〜50%MeCN、30分間かけて)を用いる逆相高速液体クロマトグラフィー(RP−HPLC)を使用して精製した。画分を回収し、LC/MSにより分析した。純粋な生成物試料を合わせ、凍結乾燥させた。全てのペプチドを純度>85%を有する白色の粉末として得た。生成物同定を、質量分析により得た。
全ての標準アミノ酸はCEMから購入した。Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Phe(4−NHBoc)−OH、Fmoc−DAP(Aloc)−OH、Fmoc−DAB(Aloc)−OH及びFmoc−SAR−OHをBachemから購入した。Fmoc−β−ホモプロリンをChem-Impaxから購入した。Fmoc−β−Ala−OH及びモノ−tBu−コハク酸をSigma-Aldrichから購入した。
実施例6の合成に関する詳細な説明が、合成条件をさらに説明するために提供される:
ペプチド合成:
ペプチドを、CEMマイクロ波技術を使用し、上昇した温度(78℃)にて及び0.25mmolのスケールで、アミノ酸あたり5分間のカップリング時間で合成した。合成は、固体支持体としてTentalGel-S RAM 樹脂(0.24ミリ当量/g)を用いて行われる。使用される全てのアミノ酸を、0.2mol濃度までDMFに溶解した。HOBT/HBTU 1:1(0.5mol/L)4当量とDIPEA 4当量との混合物を使用して、アミノ酸を活性化した。Fmoc−切断は、DMF中のピペリジン(20%)を3分間用いて達成した。Fmoc−切断を繰り返した。
Aloc−及びアリル−切断:
樹脂を、DCM(5mL)中のフェニルシラン20当量及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム0.05当量の溶液で室温にて30分間手作業で処理した。この手順を繰り返した。樹脂をDMF中の0.5%ジチオカルバミン酸ナトリウムの溶液で2回洗浄した。洗浄工程をDCMで繰り返した。
オン−ビーズ(on-bead)環化:
再び、DMF中のカップリング−試薬(HOBT/HBTU(1:1)の0.5mol/L溶液 4mL及びDIPEA(4当量)1mL)を樹脂に加えた。スラリーを室温で8時間振盪した。樹脂をDMF及びDCMで2回洗浄した。環化の完了をニンヒドリン試験で確証した。
樹脂からの切断:
切断−カクテル(TFA;TIS;水(95/2.5/2.5))10mLを樹脂に加え、室温で1時間振盪した。切断されたペプチドを冷エーテル(−18℃)中で沈殿させた。ペプチドを遠心分離し、沈殿物を冷エーテルで2回洗浄した。沈殿物をHO/アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥させて、白色の粉末210mgを生成した。
精製:
粗ペプチドを、Reprospher 100 C18-T カラム(100×4.6mm、粒径5um)の分取HPLCにより精製した。溶離液系として0.1%TFA/水/アセトニトリルの混合物を、0〜30分間以内に0〜50%のアセトニトリルの勾配で使用した。画分を回収し、分析用HPLCにより検査した。純粋な生成物を含有している画分を合わせ、凍結乾燥させた。白色の粉末7.2mgを得た。
以下に列記されている他の全てのペプチドを、適切に合成した。
略語:
Fmoc: 9−フルオレニルメトキシカルボニル
Gly: グリシン
His(Trt): トリチル−保護ヒスチジン
Sar: サルコシン
Glu: グルタミン酸
Asn(Trt): トリチル−保護アスパラギン
Gln(Trt): トリチル−保護グルタミン
Ile: イソロイシン
Tyr: チロシン
Leu: ロイシン
Pro: プロリン
Ala: アラニン
Orn: オルニチン
Thr: トレオニン
Val: バリン
Dab: ジアミノ酪酸
Dap: ジアミノプロピオン酸
D−Pro: D−プロリン
MeLeu: α−メチル−ロイシン
Cha: β−シクロヘキシル−アラニン
Nle: ノルロイシン
Chg: シクロヘキシルグリシン
HoLeu: ホモロイシン
Tle: tert.ブチル−グリシン
Hyp: trans−4−ヒドロキシ−L−プロリン
FluoroPro: trans−4−フルオロ−L−プロリン
Hpr: ホモプロリン
Aib: アミノイソ酪酸
Aze: (S)−N−アゼチジン−2−カルボン酸
Ser: セリン
2AOC−OH: L−アミノオクタン酸
2ADC−OH: L−アミノデカン酸
cyLeu: シクロロイシン
Aloc: アリルオキシカルボニル
HOBT: N−ヒドロキシベンゾトリアゾール
HBTU: O−ベンゾトリアゾール−N,N,N’,N’−テトラメチル−ウロニウム−へキサフルオロホスファート
DMF: N,N−ジメチルホルムアミド
NMP: N−メチルピロリドン
DIPEA: N,N−ジイソプロピルアミン
DCM: ジクロロメタン
MeCN: アセトニトリル
実施例1
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、FMOC−Phe(4−NHBoc)−OH、Fmoc−SAR−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値994.1;観測値994.9
実施例2
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−SAR−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、FMOC−Phe(4−NHBoc)−OH
MS(M+H):予測値944.1;観測値944.4
実施例3
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH、Fmoc−Ala−OH
MS(M+H):予測値985.1;観測値986.3
実施例4
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−β−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値984.5;観測値984.9
実施例5
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−SAR−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH、Fmoc−Gly−OH
MS(M+H):予測値984.5;観測値984.9
実施例6
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値931.0;観測値932.0
実施例7
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値914.9;観測値915.9
実施例8
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.5
実施例9
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−His(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値980.1;観測値981.5
実施例10
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、FMOC−Phe(4−NHBoc)−OH
MS(M+H):予測値970.1;観測値970.8
実施例11
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、FMOC−Phe(4−NHBoc)−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値1020.0;観測値1021.0
実施例12
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH、Fmoc−SAR−OH
MS(M+H):予測値985.1;観測値985.4
実施例13
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−SAR−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値945.1;観測値945.4
実施例14
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−D−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.5
実施例15
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−D−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.3
実施例16
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値902.9;観測値903.8
実施例17
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値944.5;観測値945.0
実施例18
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値928.9;観測値929.7
実施例19
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値957.1;観測値957.8
実施例20
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Orn(Boc)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値957.1;観測値957.9
実施例21
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Lys(Boc)−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値986.1;観測値986.9
実施例22
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−D−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.5
実施例23
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−D−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.5
実施例24
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.8
実施例25
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Thr(tBu)−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値932.9;観測値933.6
実施例26
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値931.0;観測値931.6.
実施例27
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Phe−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値979.0;観測値979.5
実施例28
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Ser(tBu)−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値918.9;観測値919.7
実施例29
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Glu(tBu)−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値960.9;観測値962.1
実施例30
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Dab(Boc)−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値932.0;観測値932.6
実施例31
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値960.0;観測値960.9
実施例32
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値995.0;観測値996.0
実施例33
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値945.0;観測値945.0
実施例34
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−His(Trt)−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値969.0;観測値969.7
実施例35
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Met−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値995.0;観測値996.0
実施例36
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−MeLeu−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値955.1;観測値985.1
実施例37
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値888.0;観測値888.6
実施例38
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Trp−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値1018.1;観測値1018.8
実施例39
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Cha−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値985.1;観測値985.6
実施例40
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Nle−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値945.0;観測値945.5
実施例41
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Chg−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値971.1;観測値971.9
実施例42
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Dap−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値918.0;観測値918.7
実施例43
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−HoLeu−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値959.1;観測値959.9
実施例44
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Tle−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値945.0;観測値944.7
実施例45
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Hyp−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値987.1;観測値988.0
実施例46
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−FluoroPro−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値989.1;観測値989.3
実施例47
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Hpr−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値985.1;観測値985.1
実施例48
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−cyLeu−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値943.0;観測値943.1
実施例49
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Aib−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値917.0;観測値917.8
実施例50
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Aze−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値957.0;観測値957.1
実施例51
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−MeLeu−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値959.1;観測値959.7
実施例52
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−MeLeu−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値903.0;観測値903.2
実施例53
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−2AOC−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値973.0;観測値973.5
実施例54
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−2ADC−OH、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値1001.1;観測値1000.5
実施例55
Figure 2016503044

以下のアミノ酸を使用した:Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu、Fmoc−Sar−OH、Fmoc−Glu(アリル)−OH、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Tyr(tBu)−OH
MS(M+H):予測値916.0;観測値917.2
材料及び方法
細胞培養及び安定なクローンの生産
ヒトV1a、ヒトオキシトシン(OTR)又はヒトV2受容体のいずれかをコードする発現プラスミドを用いて、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞をトランスフェクトし、後に、キメラGqs5 Gタンパク質と組み合わせて、シグナルをカルシウムフラックスにリダイレクト(redirect)した。安定な細胞を、ヒトV1a、ヒトV2+Gqs5又はヒトOTR受容体のいずれかを発現するモノクローナル細胞株を生成するために限界希釈によってクローニングし、受容体活性化後の細胞内カルシウムフラックスを検出する蛍光イメージングプレートリーダー(FLIPR)で検出された機能的反応に基づいて選択した。安定な細胞株を、37℃で、10%COインキュベーター中、95%湿度にて、10%ウシ胎仔血清(FBS)、1%ペニシリン−ストレプトマイシン、1%L−グルタメート、200ug/mLジェネテシン(Geneticin)を含有するF−12K栄養混合物(Kaighn改変培地)中で増殖させた。
蛍光イメージング(蛍光イメージングプレートリーダー、FLIPR)を用いるカルシウムフラックスアッセイ
アッセイ前の午後に、各ウェルの底から細胞検査及び蛍光測定を可能する透明な底を有する黒色の96ウェルプレートに、細胞を50,000細胞/ウェルの密度で播種した。細胞の密度は、次の日にコンフルエントな単層を生成するのに十分であった。20mM HEPES(pH7.3)及び2.5mM プロベネシド(アッセイ緩衝液)を含有し、フェノールレッド不含のハンクス(Hanks)平衡塩溶液を、各実験の度に新たに調製した。化合物希釈液を、Beckman Biomek 2000ラボラトリー・オートメーション・ワークステーションを用いて、1%DMSOを含むアッセイ緩衝液中で調製した。ダイ−ローディング(dye-loading)緩衝液は、アッセイ緩衝液中、最終濃度2μM Fluo−4−AM(DMSO及びプルロニック酸に溶解した)で構成された。既存の培養液をウェルから除去し、ダイ−ローディング緩衝液100μLを各ウェルに添加し、37℃で、5%CO インキュベーター中、95%湿度にて約60分間インキュベートした。ダイ−ローディングの時点で、細胞をEmbla細胞洗浄機でアッセイ緩衝液を用いて十分に洗浄して、幾分かの取り込まれていない色素を除去した。厳密にアッセイ緩衝液100μLを各ウェルに残した。
ダイ−ローディング済み細胞を含有する各96ウェルプレートを、FLIPR装置中に配置し、弱い基礎蛍光を検出するためにレーザ強度を適切なレベルに設定した。アゴニストとしての化合物を試験するために、希釈した化合物25μLを、蛍光測定中にプレートに10秒間加え、そして蛍光反応を5分間記録した。蛍光データは、最大応答を100%に及び最小応答を0%に設定して、内因性完全アゴニストの用量応答に対して正規化した。以下のように、各アゴニスト濃度−応答曲線を、Microsoft Excel XL Fitで4パラメーターロジスティック方程式を用いて構築した:Y=最小値+((最大値−最小値)/(1+10(LogEC50−X)nH))[式中、yは%正規化された蛍光であり、最小値は最小yであり、最大値は最大yであり、logEC50は最大誘起蛍光の50%を産生するlog10濃度であり、xはアゴニスト化合物濃度のlog10であり、Hは曲線の傾き(ヒル係数)である]。最大値はパーセント表示でアゴニスト試験化合物の有効性を示す。最大反応の半分をもたらしたアゴニストの濃度は、EC50値によって表され、その対数がpEC50値を与えた。
特定のペプチドについての以下のEC50(nM)及び有効性(%)は、hV1a及びHV2についての比較データと一緒に提供し得る:
Figure 2016503044

Figure 2016503044
式Iの化合物及び式Iの化合物の薬学的に許容し得る塩は、医薬として、例えば医薬製剤の剤形で使用することができる。医薬製剤は、好ましくは、経皮、鼻腔内、皮下又は静脈内(iv)に投与することができる。
経皮は、活性成分を全身的分布のために皮膚全体に送達する投与経路である。例には、薬送達のために使用される経皮パッチ、及び医療又は美的目的のために使用される経皮インプラントが含まれる。
経鼻投与は、局所的又は全身的効果のいずれかのために薬物を送達するために使用することができ、局所的効果のための鼻スプレーは非常に一般的である。ペプチド薬物は、経口投与後の薬物の分解を回避するために、鼻スプレーとして投与し得る。
皮下注射はまた、ペプチド薬物の投与のために一般的である。筋肉内注射は、筋肉への直接的な物質の注射である。これは、薬剤の投与のためのいくつかの代替方法の1つである。これは、多くの場合、少量で投与される薬剤の特定の形態のために使用される。注射は皮膚の下に与えられるべきである。
静脈内経路は、静脈内への直接的な液体物質の注入である。他の投与経路と比較して、静脈内経路は、体全体に流体及び薬剤を送達するための最速の方法である。
医薬製剤は、更に、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、着香剤、浸透圧を変化させる塩、緩衝剤、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。これらはまた、更に他の治療上有用な物質を含むことができる。
式Iの化合物又はその薬学的に許容し得る塩及び治療上不活性な担体を含有する医薬もまた、式Iの化合物及び/又は薬学的に許容し得る酸付加塩の1種以上と、所望により、他の治療上有用な物質の1種以上とを、治療上不活性な担体の1種以上と共に生薬投与形態にすることを含む製造プロセスと同様に、本発明の目的である。
本発明による最も好ましい適応症は、中枢神経系の障害を含むものであり、例えば、自閉症、ストレス(外傷後ストレス障害を含む)、不安症(不安障害及びうつ病を含む)、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒の治療又は予防であり、ならびにプラダー・ウィリー症候群の治療のためである。
用量は、広い範囲内で変えることができ、当然、それぞれの特定の症例における個別の要求に適合させなければならない。成人用の用量は、一般式Iの化合物の1日当たり約0.01mg〜約1000mg、又はその薬学的に許容し得る塩の対応する量で変えることができる。1日量を、1回量として又は分割量として投与してよく、加えて、必要性が示される場合、上限を超えることもできる。

Claims (11)

  1. 式I:
    Figure 2016503044

    [式中、
    は、ヒドロキシ又はアミノであり;
    は、sec−ブチル又はイソブチルであり;
    は、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CHC(O)−NH、−(CH−NH又は−CH−5員芳香族複素環基であり;
    は、水素又は低級アルキルであり;
    は、水素又は低級アルキルであるか;あるいは
    及びRは、それらが結合しているN及びC原子と一緒になって、ヒドロキシ若しくはハロゲンで場合により置換されているピロリジン環、ピペリジン環、又はアゼチジン環を形成し得;
    は、水素、低級アルキル、ヒドロキシで置換されている低級アルキル、−(CHC(O)OH、−(CHC(O)NH、アミノ若しくはヒドロキシで場合により置換されているベンジル、−CH−5員芳香族複素環基、インドリル、−CH−シクロアルキル、シクロアルキル、−(CH−S−低級アルキルであるか、又は−(CH1−4−NHであり;
    6’は、水素又は低級アルキルであるか;あるいは
    及びR6’は、一緒に、シクロアルキルであり;
    Xは、−C(O)−CHR−NR’−C(O)−であり;
    R/R’は、互いに独立に、水素又は低級アルキルであり;
    mは、2であり;
    oは、0又は1である]で示される化合物、あるいはその薬学的に許容し得る酸付加塩、ラセミ混合物若しくはその対応するエナンチオマー、及び/又は光学異性体。
  2. がsec−ブチルである、請求項1記載の式Iの化合物。
  3. 5員複素環がイミダゾール環である、請求項1記載の式Iの化合物。
  4. oが0である、請求項1記載の式Iの化合物。
  5. 化合物が、下記:
    Figure 2016503044

    Figure 2016503044

    Figure 2016503044

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    Figure 2016503044

    Figure 2016503044

    Figure 2016503044

    Figure 2016503044

    である、請求項1記載の式Iの化合物。
  6. 請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物ならびに薬学的に許容し得る担体及び/又は佐剤を含む、医薬組成物。
  7. 自閉症、外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及びうつ病を含む不安症、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒の処置における使用のための、ならびにプラダー・ウィリー(Prader-Willi)症候群の処置のための、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物ならびに薬学的に許容し得る担体及び/又は佐剤を含む、医薬組成物。
  8. 治療活性物質としての使用のための、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
  9. 自閉症、外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及びうつ病を含む不安症、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒の処置における、ならびにプラダー・ウィリー症候群の処置のための、治療活性物質としての使用のための、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
  10. 自閉症、外傷後ストレス障害を含むストレス、不安障害及びうつ病を含む不安症、統合失調症、精神障害及び記憶喪失、アルコール禁断、薬物中毒の治療的及び/又は予防的処置用の、ならびにプラダー・ウィリー症候群の処置用の、医薬の製造のための請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物の使用。
  11. 本明細書に上記のとおりの発明。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10039777B2 (en) 2012-03-20 2018-08-07 Neuro-Lm Sas Methods and pharmaceutical compositions of the treatment of autistic syndrome disorders
UA111305C2 (uk) 2012-12-21 2016-04-11 Пфайзер Інк. Конденсовані лактами арилу та гетероарилу
KR101819804B1 (ko) 2012-12-21 2018-01-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 옥시토신 작용제로서의 펩타이드
EP3421482A1 (en) 2012-12-21 2019-01-02 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
KR102116107B1 (ko) 2013-12-30 2020-05-28 삼성디스플레이 주식회사 표시 장치
WO2015106200A2 (en) 2014-01-10 2015-07-16 Cornell University Dipeptides as inhibitors of human immunoproteasomes
PE20161559A1 (es) 2014-06-03 2017-01-12 Hoffmann La Roche Peptidos como agonistas de la oxitocina
AP2016009605A0 (en) 2014-06-17 2016-12-31 Pfizer Substituted dihydroisoquinolinone compounds
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
TR201815872T4 (tr) * 2014-08-07 2018-11-21 Hoffmann La Roche Oksitosin analoglarının hazırlanması için prosesler.
WO2016028571A2 (en) * 2014-08-18 2016-02-25 Cornell University Dipeptidomimetics as inhibitors of human immunoproteasomes
US10441627B2 (en) 2014-09-19 2019-10-15 Ferring B.V. Method of treating prader-willi syndrome
EP3362754B1 (en) 2015-10-15 2021-12-22 Cornell University Proteasome inhibitors and uses thereof
EP3694605A4 (en) 2017-10-11 2021-10-27 Cornell University PEPTIDOMIMETIC PROTEASOME INHIBITORS
WO2020061414A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Levo Therapeutics, Inc. Stable intranasal formulations of carbetocin
TW202034899A (zh) 2018-09-20 2020-10-01 克里斯托弗 S 布萊恩特 卡貝縮宮素藥品及其製備方法
WO2021126990A1 (en) * 2019-12-16 2021-06-24 The Scripps Research Institute Oxytocin derivatives with improved properties

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8673841B2 (en) 2008-03-31 2014-03-18 Ferring B.V. Oxytocin analogues
TWI463990B (zh) * 2009-09-21 2014-12-11 Ferring Bv 催產素受體促進劑
ES2509270T3 (es) * 2009-10-01 2014-10-17 The University Of Sydney Terapia y prevención del alcoholismo
KR101819804B1 (ko) 2012-12-21 2018-01-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 옥시토신 작용제로서의 펩타이드

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6016018528; J. Med. Chem. vol.43, 2000, p.1448-1455 *
JPN6016018530; Organic Letters vol.5, no.1, 2003, p.47-49 *

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