CN108351169B - 蛋白酶体抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明的化合物由具有式(I)的以下化合物表示：
Figure DDA0001653910480000011
其中取代基R、R1‑R5、k、m、n和q如本文所定义。这些化合物用于治疗癌症、免疫性病症、自身免疫性病症、神经变性病症或炎性病症、感染性疾病，或用于为移植器官或组织提供免疫抑制。

Description

蛋白酶体抑制剂及其用途
本申请要求2015年10月15日提交的美国临时专利申请序列号62/242,139的优先权权益，所述美国临时专利申请据此以引用方式整体并入。
技术领域
本发明涉及蛋白酶体抑制剂及其用途。
发明背景
蛋白酶体是在三个生命世界中发现的高度保守的自我分隔蛋白酶。蛋白酶体是存在于真核细胞的细胞质和细胞核中的大的ATP依赖性多亚基桶形N-端亲核水解酶，并且负责大多数细胞蛋白质的降解(Baumeister等人，“The Proteasome:Paradigm of a Self-Compartmentalizing Protease,”Cell 92(3):367–380(1998)；Goldberg AL.,“Functionsof the Proteasome:from Protein Degradation and Immune Surveillance to CancerTherapy,”Biochem.Soc.Trans.35(Pt1):12–17(2007))。通过调节降解，蛋白酶体调节蛋白质稳态、细胞周期、信号转导、蛋白质运输、免疫反应等，这些是重要的细胞功能。降解产物寡肽是用于MHC I类抗原呈递的抗原肽储库。
蛋白酶体抑制中断许多细胞途径，特别是NF-kB激活途径、未折叠蛋白反应的诱导和ER应激，同时强烈诱导细胞凋亡。由于这个原因，高度特异性蛋白酶体抑制剂已被批准用于治疗血液学癌症。蛋白酶体抑制剂还可显著限制MHC I类分子的总体肽供给，从而阻断抗原呈递(Rock等人，“Protein Degradation and the Generation of MHC Class I-Presented Peptides,”Adv.Immunol.80:1–70(2002))。因此，蛋白酶体抑制剂通过多种途径减少免疫反应。
恶性疟原虫(P.falciparum)，是人类疟疾最致命的一种，每年造成近50万人死亡，主要是儿童(Zhang等人，“Transcriptome Analysis Reveals Unique MetabolicFeatures in the Cryptosporidium Parvum Oocysts Associated with EnvironmentalSurvival and Stresses,”BMC Genomics 13:647(2012))。最重要的当前疗法是青蒿素(ART)的组合。ART抗性寄生虫的出现(Ariey等人，“A Molecular Marker of Artemisinin-Resistant Plasmodium Falciparum Malaria,”Nature505(7481):50-55(2014)；Straimer等人，“K13-Propeller Mutations Confer Artemisinin Resistance in PlasmodiumFalciparum Clinical Isolates,”Science 347(6220):428-431(2015)；Dogovski等人，“Targeting the Cell Stress Response of Plasmodium Falciparum to OvercomeArtemisinin Resistance,”PLoS Biol.13(4):e1002132(2015)；Mbengue等人，“AMolecular Mechanism of Artemisinin Resistance in Plasmodium FalciparumMalaria,”Nature 520(7549):683-687(2015))强调需要具有新靶标的新抗疟药(Wells TN等人，“Malaria Medicines:a Glass Half Full？”Nat.Rev.Drug Discov.14(6):424-442(2015))。泛素蛋白酶体系统(UPS)的上调对青蒿素抗性寄生虫的存活很重要，并且强调了UPS在寄生虫存活中的重要性及其作为药物靶标前行的重要性(Dogovski等人，“Targetingthe Cell Stress Response of Plasmodium Falciparum to Overcome ArtemisininResistance,”PLoS Biol.13(4):e1002132(2015)；Mok等人，“DrugResistance.Population Transcriptomics of Human Malaria Parasites Reveals theMechanism of Artemisinin Resistance,”Science 347(6220):431-435(2015))。
已知蛋白酶体抑制剂会杀伤体外疟疾寄生虫并且对多个寄生虫阶段有效；肽环氧酮抑制剂，肽乙烯砜抑制剂和环肽抑制剂，具有有效的抗疟活性(Dogovski等人，“Targeting the Cell Stress Response of Plasmodium Falciparum to OvercomeArtemisinin Resistance,”PLoS Biol.13(4):e1002132(2015)；Featherstone C.“Proteasome Inhibitors in Development for Malaria,”Mol.Med.Today 3(9):367(1997)；Gantt等人，“Proteasome Inhibitors Block Development of Plasmodium Spp,”Antimicrob.Agents Chemother.42(10):2731-2738(1948)；Aminake等人，“TheProteasome of Malaria Parasites:A Multi-Stage Drug Target forChemotherapeutic Intervention？”Int.J.Parasitol.Drugs Drug Resist.2:1-10(2012)；Li等人，“Validation of the Proteasome as a Therapeutic Target inPlasmodium Using an Epoxyketone Inhibitor with Parasite-Specific Toxicity,”Chem.Biol.19(12):1535-1545(2012)；Tschan等人，“Broad-Spectrum AntimalarialActivity of Peptido Sulfonyl Fluorides,a New Class of Proteasome Inhibitors,”Antimicrob.Agents Chemother.57(8):3576-8354(2013)；Li等人，“Assessing SubunitDependency of the Plasmodium Proteasome Using Small Molecule Inhibitors andActive Site Probes,”ACS Chem.Biol.9(8):1869-1876(2014)；Li等人，“Structure-andFunction-Based Design of Plasmodium-Selective Proteasome Inhibitors,”Nature530(7589):233-236(2016))。硼替佐米(BTZ，Bortezomib)和MLN-273对血液和肝脏阶段的疟原虫有效(Lindenthal等人，“The Proteasome Inhibitor MLN-273BlocksExoerythrocytic and Erythrocytic Development of Plasmodium Parasites,”Parasitology 131(Pt 1):37-44(2005)；Reynolds等人，“Antimalarial Activity of theAnticancer and Proteasome Inhibitor Bortezomib and its Analog ZL3B,”BMCClin.Pharmacol.7:13(2007))；MG-132对血液阶段和配子体有效(Lindenthal等人，“The Proteasome Inhibitor MLN-273Blocks Exoerythrocytic and ErythrocyticDevelopment of Plasmodium Parasites,”Parasitology 131(Pt 1):37-44(2005)；Prudhomme等人，“Marine Actinomycetes:a New Source of Compounds Against theHuman Malaria Parasite,”PLoS One 3(6):e2335(2008))；环氧酶素(epoxomicin)对血液和肝阶段以及配子体有效((Aminake等人，“Thiostrepton and Derivatives ExhibitAntimalarial And Gametocytocidal Activity by Dually Targeting ParasiteProteasome and Apicoplast,”Antimicrob.Agents Chemother.55(4):1338-1348(2011)；Czesny等人，“The Proteasome Inhibitor Epoxomicin Has Potent PlasmodiumFalciparum Gametocytocidal Activity,”Antimicrob.Agents Chemother.53(10):4080-4085(2009)；Kreidenweiss等人，“Comprehensive Study of Proteasome InhibitorsAgainst Plasmodium Falciparum Laboratory Strains and Field Isolates FromGabon,”Malar.J.7:187(2008)；Li等人，“Validation of the Proteasome as aTherapeutic Target in Plasmodium Using an Epoxyketone Inhibitor WithParasite-Specific Toxicity,”Chem.Biol.19(12):1535-1545(2012))。这些抑制剂通常无物种选择性。它们对宿主细胞具有细胞毒性，并且不适合治疗疟疾。迫切需要开发靶向人宿主蛋白酶体上的寄生虫蛋白酶体的疟原虫属种(Plasmodium spp.)蛋白酶体(Pf20S)选择性抑制剂。
大多数胞质蛋白的降解是由泛素-蛋白酶体系统(UPS)执行的受高度调节的、ATP依赖性细胞活性(Goldberg,A.L.“Functions of the Proteasome:From ProteinDegradation and Immune Surveillance to Cancer Therapy,”Biochem.Soc.Trans.,35:12–17(2007))。UPS在不同细胞活性中起着重要作用，包括细胞周期控制、信号转导、蛋白质稳态和免疫监督。26S蛋白酶体由水解20S核和调节因子，如19S或11S组成。在大多数细胞中组成型表达的20S核(c-20S)是由14个α和β亚基呈α1-7β1-7β1-7α1-7形式组织的4个环的堆叠，其中每种半胱天冬酶样β1、胰蛋白酶样β2和胰凝乳蛋白酶样β5活性亚基的2个拷贝位于内部β环中(Baumeister等人，“The Proteasome:Paradigm of a Self-CompartmentalizingProtease,”Cell 92:367–380(1998))。20S的胰凝乳蛋白酶样β5活性亚基已在临床上验证为治疗多发性骨髓瘤和某些淋巴瘤的靶标。硼替佐米(BTZ)和卡非佐米(CFZ，carfilzomib)是FDA批准药物，其分别代表两类共价蛋白酶体抑制剂：可逆肽硼酸酯和不可逆肽环氧酮(Borissenko等人，“20S Proteasome and its Inhibitors:Crystallographic Knowledgefor Drug Development,”Chem.Rev.107:687–717(2007)；Parlati等人，Haematol-Hematol.J.94:148-149(2009))。已经鉴定并优化了几个其它类别的蛋白酶体抑制剂，例如β-内酯和肽磺酰氟(Huber等人，“Inhibitors for the Immuno-and ConstitutiveProteasome:Current and Future Trends in Drug Development,”Angew.Chem.Int.Ed.Engl.51(35):8708–8720(2012))；然而，这些类别的反应性弹头构成了开发药物候选物要克服的巨大挑战。
研究人员一直致力于开发非共价蛋白酶体抑制剂，用于各种蛋白酶体同种型，例如结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)蛋白酶体(Bryk等人，“SelectiveKilling of Nonreplicating Mycobacteria,”Cell Host Microbe 3:137–145(2008)；Hu等人，“Structure of the Mycobacterium Tuberculosis Proteasome and Mechanism ofInhibition by a Peptidyl Boronate,”Mol.Microbiol.59:1417-1428(2006)；Li等人，“Structural Basis for the Assembly and Gate Closure Mechanisms of theMycobacterium Tuberculosis 20S Proteasome,”Embo J.29:2037-2047(2010)；Lin等人，“N,C-Capped Dipeptides With Selectivity for Mycobacterial Proteasome OverHuman Proteasomes:Role of S3and S1Binding Pockets,”J Am Chem Soc.135:9968-9971(2013)；Lin等人，“Mycobacterium Tuberculosis prcBA Genes Encode a GatedProteasome With Broad Oligopeptide Specificity,”Mol.Microbiol.59:1405-1416(2006)；Lin等人，“Fellutamide B is a Potent Inhibitor of the MycobacteriumTuberculosisProteasome,”Arch.Biochem.Biophys.501:214-220(2010)；Lin等人，“Inhibitors Selective for Mycobacterial Versus Human Proteasomes,”Nature 461(7264):621–626(2009)；Lin等人，“Distinct Specificities of MycobacteriumTuberculosis and Mammalian Proteasomes for N-Acetyl Tripeptide Substrates,”J.Biol.Chem.283:34423-31(2008))和人免疫蛋白酶体(i-20S)(Fan等人，“Oxathiazolones Selectively Inhibit the Human Immunoproteasome over theConstitutive Proteasome,”ACS Med.Chem.Lett.5:405–410(2014))。I-20S在免疫系统的细胞和暴露于在免疫反应期间升高的细胞因子的其它细胞中表达，其中c-20S中的活性亚基β1c、β2c和β5c分别被β1i、β2i和β5i置换(Tanaka K“Role of Proteasomes Modified byInterferon-γin Antigen Processing,”J.Leukoc.Biol.56:571–575(1994)；Heink等人，“IFN-γ-Induced Immune Adaptation of the Proteasome System is an Acceleratedand Transient Response,”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102:9241-9246(2005)；Kim等人，“A draft map of the human proteome,”Nature 509:575-581(2014))。i-20S在免疫系统中起多种功能，包括提供用于抗原呈递、T细胞分化和增殖的寡肽(Palombella等人，“Roleof the Proteasome and NF-kB in Streptococcal Cell Wall-InducedPolyarthritis,”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:15671-15676(1998)；Kalim等人，“Immunoproteasome Subunit LMP7 Deficiency and Inhibition Suppresses Th1 andTh17 but Enhances Regulatory T Cell Differentiation,”J.Immunol.189:4182–4193(2012))。分泌抗体的浆细胞对蛋白酶体抑制高度敏感，并且抑制c-20S和i-20S两者的BTZ已经用于肾移植受体中以防止抗体介导的移植排斥(Aull等人，Clin Transpl 495-498(2009)；Raghavan等人，“Bortezomib in Kidney Transplantation,”J.Transplant.2010:698594(2010)；Al-Homsi等人，“Effect of Novel Proteasome and ImmunoproteasomeInhibitors on Dendritic Cell Maturation,Function,and Expression of Iκb and Nfκb,”Transpl.Immunol.29:1-6(2013)；Pai等人，“Treatment of Chronic Graft-Versus-Host Disease with Bortezomib,”Blood 124:1677–1688(2014))。也有报道称BTZ对患有顽固性全身性红斑狼疮的患者有效(Alexander等人，“The Proteasome InhibitiorBortezomib Depletes Plasma Cells and Ameliorates Clinical Manifestations ofRefractory Systemic Lupus Erythematosus,”Ann Rheum Dis 74:1474–1478(2015))。然而，BTZ基于机制的实质性毒性需要在非恶性病状的治疗中使用大大减少的剂量。
本发明旨在克服本领域中的这些和其它不足。
发明概述
本发明的一个方面涉及式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000071
其中
R为H或C1-6烷基
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
本发明的第二方面涉及治疗受试者的癌症、免疫学病症、自身免疫性病症、神经变性病症或炎性病症或用于为受试者中的移植器官或组织提供免疫抑制的方法。该方法包括向有需要的受试者施用式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000081
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
本发明的第三方面涉及抑制细胞或组织中的胰凝乳蛋白酶β5i的方法。该方法包括提供式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000101
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；
p为1或2；并且
使细胞或组织与化合物在有效抑制胰凝乳蛋白酶β5i的条件下接触。
本发明的第四方面涉及治疗受试者中的感染性疾病的方法。该方法包括向有需要的受试者施用式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000121
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
本申请描述天冬酰胺-乙二胺(AsnDEA)可用作蛋白酶体抑制剂的通用支架。代表性化合物的动力学研究显示了非竞争性抑制形式。构效关系研究指导了对人免疫蛋白酶体具有超过组成型蛋白酶体的高选择性的有效、非共价、可逆性、细胞渗透性抑制剂的开发。选择性AsnDEA免疫蛋白酶体抑制剂对多发性骨髓瘤和淋巴瘤的肿瘤细胞系具有高于肝癌细胞系的选择性细胞毒性，说明此类化合物对多发性骨髓瘤或其它血液学癌症的潜力。
附图简述
图1A-1E是显示PKS21004对人蛋白酶体的抑制形式的图。从预孵育的c-20S和PKS21104中洗出c-20S以恢复β5c活性(图1A)。在PKS21004的存在下，在靠近各曲线旁标出的浓度下，对hu i-20S(图1B)和c-20S(图1D)的稳态速度的底物滴定。如同(图1B)中的数据在(图1C)中双倒数作图，而如同(图1D)中的数据在(图1E)中双倒数作图。通过拟合非竞争性抑制剂的方程确定PKS21004的Ki和α值：分别为0.077μM，0.28(对于i-20S)和0.55μM，0.98。
图2A-2B是显示PKS21221在细胞内的蛋白酶体抑制作用及其对转化细胞系的细胞毒性的图。在图2A中，Karpas 1106P细胞用PKS21221或HepG2在指定浓度下处理2小时，之后分别与底物(Ac-ANW)2R110(对于β5i而言)、suc-LLVY-荧光素(对于Karpas细胞中的β5而言)和suc-LLVY-荧光素(对于HepG2细胞中的β5c而言)一起孵育。经测定IC50为0.154μM和0.149μM。图2B是显示PKS21221对多发性骨髓瘤细胞系MM1.S和RPMI8226、Karpas和HepG2的细胞毒性的图。PKS21221对细胞内蛋白酶体抑制的IC50值和PKS21221细胞毒性的EC50值列于上文的表3中。数据是三次独立实验的平均值。
图3是显示化合物PKS21004、PKS21287和PKS21224对配子体阶段的恶性疟原虫的抗疟原虫活性的图。使用双氢青蒿素和亚甲蓝作为阳性对照。
图4A-4C显示PKS21004导致多聚泛素化蛋白质在恶性疟原虫细胞中的积聚(图4A)；PKS21004和PKS21287阻滞Pf20S的β5活性亚基由蛋白酶体活性探针MV151标记(图4B)；并且在孵育6小时(正方形和直线)和14小时(圆形和直线)后PKS21004抑制肝HepG2细胞中的伯氏疟原虫(P.berghei)生长，并且在2小时预处理后去除PKS21004后(三角形和直线)，PKS21004也防止伯氏疟原虫侵入肝细胞(图4C)。
图5是显示PKS21221非竞争性抑制免疫蛋白酶体β5i活性的图。
发明详述
本发明的一个方面涉及式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000151
其中
R为H或C1-6烷基
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
如以上和本文说明书通篇所用，除非另外指出，否则以下术语应理解为具有以下含义。如果本文未另外定义，则本文所使用的所有技术和科学术语均具有与本技术所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。如果本文的术语有多个定义，除非另有说明，否则以该部分中的那些为准。
术语“烷基”意指可以是直链或支链的在链中具有约1至约6个碳原子的脂族烃基。支链意指一个或多个低级烷基例如甲基、乙基或丙基连接到直链烷基链上。示例性烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和3-戊基。
术语“烯基”意指含碳-碳双键的脂族烃基，并且其可以是直链或支链，在链中具有约2至约6个碳原子。特定烯基在链中具有2至约4个碳原子。支链意指一个或多个低级烷基如甲基、乙基或丙基连接到直链烯基链。示例性烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基和异丁烯基。术语“烯基”也可以指具有2至6个碳，含至少一个双键和至少一个三键的烃链。
术语“环烷基”意指约3至约8个碳原子，优选约5至约7个碳原子的非芳族单环或多环环系。示例性单环环烷基包括环戊基、环己基、环庚基等。
术语“芳基”意指6至约14个碳原子，优选6至约10个碳原子的芳族单环或多环环系。代表性芳基包括苯基和萘基。
如本文所用，“联苯基”或“联-苯基”是指被另一个苯基取代的苯基。
术语“杂芳基”或“Het”意指约5至约14个环原子，优选约5至约10个环原子的芳族单环或多环环系，其中环系中的一个或多个原子是除碳以外的元素，例如氮、氧或硫。在多环环系的情况下，对于定义为“杂芳基”的环系而言，仅需其中一个环为芳族。优选的杂芳基含有约5至6个环原子。在杂芳基之前的前缀氮杂、氧杂、硫杂或硫代分别意指至少一个氮、氧或硫原子作为环原子存在。杂芳基的氮原子任选被氧化成相应的N-氧化物。代表性的杂芳基包括吡啶基、2-氧代-吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基，噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚啉基、2-氧代吲哚啉基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并三唑基、苯并[1,3]二氧戊环、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、喹喔啉基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、苯并[1,2,3]三嗪基、苯并[1,2,4]三嗪基、4H-色烯基、吲哚嗪基、喹嗪基、6aH-噻吩并[2,3-d]咪唑基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、噻吩并[2,3-b]吡啶基、噻吩并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[2,3-b]吡啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、呋喃并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-b]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪基、6,7-二氢-4H-吡唑并[5,1-c][1,4]噁嗪基、2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑基、3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、苯并[c][1,2,5]噁二唑基、苯并[c][1,2,5]噻二唑基、3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪基、5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪基、3-氧代-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-2(3H)-基等。
如本文所用，“双杂芳基”或“双-杂芳基”是指被另一个杂芳基取代的杂芳基。
如本文所用，“杂环基”或“杂环”是指由碳原子和一至五个选自由氮、氧和硫组成的组的杂原子组成的稳定的3至18元环(基团)。为了本申请的目的，杂环可以是单环或多环环系，其可以包括稠环、桥环或螺环环系；并且杂环中的氮、碳或硫原子可以任选被氧化；氮原子可以任选季铵化；并且环可以部分或完全饱和。此类杂环的实例包括但不限于氮杂卓基、氮杂环辛烷基(azocanyl)、吡喃基二噁烷基、二噻烷基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、二氢吡咯烷基、十氢异喹啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂卓基、噁唑烷基、环氧乙烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜和硫代吗啉基砜。另外的杂环和杂芳基在Katritzky等人编辑的Comprehensive Heterocyclic Chemistry:The Structure,Reactions,Synthesis andUse of Heterocyclic Compounds,Vol.1-8,Pergamon Press,N.Y.(1984)中有描述，其据此通过引用整体并入。
如本文所用，“双杂环基”或“双杂环基”是指被另一个杂环基或杂环基团取代的杂环基。
术语“非芳族杂环”是指含有3至10个原子，优选4至约7个碳原子的非芳族单环体系，其中环系中的一个或多个原子是除了碳以外的元素，例如氮、氧或硫。代表性的非芳族杂环基团包括吡咯烷基、2-氧代吡咯烷基、哌啶基、2-氧代哌啶基、氮杂环庚烷基、2-氧代氮杂环庚烷基、2-氧代噁唑烷基、吗啉基、3-氧代吗啉代，硫代吗啉基、1,1-二氧代硫代吗啉基、哌嗪基、四氢-2H-噁嗪基等。
本文使用的术语“单环”表示具有一个环的分子结构。
本文使用的术语“双环”表示具有两个环的分子结构。
本文使用的术语“聚环”或“多环”表示具有两个或更多个环的分子结构，包括但不限于稠环、桥环或螺环。
与“保护”、“去保护”和“受保护”官能度相关的术语贯穿于本申请中。此类术语对于本领域技术人员来说是很好理解的，并且在涉及用一系列试剂进行连续处理的过程中使用。在该情况下，保护基团是指在将以另外的方式反应，但不希望反应的过程步骤期间掩蔽官能度的基团。保护基团在该步骤防止反应，但随后可以去除以暴露原始官能度。去除或“去保护”发生在所述反应或官能度会干扰的反应完成之后。因此，当如同在本文描述的方法中一样指定试剂顺序时，普通技术人员可以容易地设想适合作为“保护基团”的那些基团。用于该目的的合适基团在化学领域的标准教科书中进行了讨论，例如Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York(1991)，其据此通过引用整体并入。
术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语原子“经取代”或“取代”意指用来自所示组的选择置换指定原子上的一个或多个氢，前提是不超过指定原子的正常化合价。
“未取代的”原子具有由其化合价指示的所有氢原子。当取代基是酮(即，＝0)时，原子上的两个氢被置换。取代基和/或变量的组合只有在此类组合产生稳定化合物时才是允许的；“稳定化合物”或“稳定结构”意指足够稳固，能够从反应混合物中分离至有用纯度并配制成有效治疗剂的化合物。
术语“任选取代的”用于表示基团在该基团的每个可取代原子上均可具有取代基(单个原子上包括多于一个取代基)，条件是不超过指定原子的正常化合价并且每个取代基的特性独立于其它。每个残基中多达三个H原子被烷基、卤素、卤代烷基、羟基、低级烷氧基、羧基、羰基烷氧基(也称为烷氧基羰基)、甲酰氨基(也称为烷基氨基羰基)、氰基、羰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、巯基、烷硫基、亚砜、砜、酰氨基、脒基、苯基、苄基、杂芳基、苯氧基、苄氧基或杂芳氧基置换。“未取代的”原子具有由其化合价指示的所有氢原子。当取代基是酮(即，＝0)时，原子上的两个氢被置换。取代基和/或变量的组合只有在此类组合产生稳定化合物时才是允许的；“稳定化合物”或“稳定结构”意指足够稳固，能够从反应混合物中分离至有用纯度并配制成有效治疗剂的化合物。
术语“治疗方法”意指改善或减轻与本文所述病症相关的症状和/或影响。如本文所用，提及患者的“治疗”旨在包括预防。
术语“本发明的化合物”及其等同表述意在包括如上文所述的通式(I)的化合物，在上下文允许时，该表达包括前药、药学上可接受的盐和溶剂合物，例如水合物。类似地，提及中间产物，无论它们本身是否被要求保护，在上下文允许时，都意在包括其盐和溶剂合物。为了清楚起见，有时会在文本中指出上下文允许这样时的特定情况，但这些情况仅为说明性，并非旨在排除上下文允许这样时的其它情况。
术语“药学上可接受的盐”意指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐和碱加成盐。这些盐可以在化合物最终分离和纯化过程中原位制备。具体而言，酸加成盐可以通过使呈其游离碱形式的纯化化合物与合适的有机或无机酸单独反应并分离由此形成的盐来制备。示例性的酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖醛酸盐、氨基磺酸盐、丙二酸盐、水杨酸盐、丙酸盐、亚甲基-双-b-羟基萘甲酸盐、龙胆酸盐、羟乙基磺酸盐、二-对甲苯酰基酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐和奎尼酸十二烷基磺酸盐(quinateslaurylsulphonate)等(参见例如Berge等人，"Pharmaceutical Salts,"J.Pharm.Sci.,66:1-9(1977)和Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985,，第1418页，其据此通过引用整体并入)。碱加成盐也可以通过使呈其酸化形式的纯化化合物与合适的有机或无机碱单独反应并分离由此形成的盐来制备。碱加成盐包括药学上可接受的金属盐和胺盐。合适的金属盐包括钠盐、钾盐、钙盐、钡盐、锌盐、镁盐和铝盐。优选钠盐和钾盐。合适的无机碱加成盐由金属碱制备，所述金属碱包括例如氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁和氢氧化锌。合适的胺碱加成盐由具有足够碱性以形成稳定盐的胺制备，并且优选包括由于其低毒性和供医学使用的可接受性而经常用于药物化学中的那些胺，例如氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、二乙醇胺、普鲁卡因(procaine)、N-苄基苯乙胺、二乙胺、哌嗪、三(羟甲基)-氨基甲烷、氢氧化四甲铵、三乙胺、二苄胺、二苯羟甲胺(ephenamine)、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苄胺、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、碱性氨基酸(例如赖氨酸和精氨酸)、二环己胺等。
如本文所用的术语“药学上可接受的前药”意指根据本发明有用的化合物的那些前药，其在合理的医学判断范围内适合用于与人和低等动物的组织接触，具有异常毒性、刺激性、过敏反应等，与合理的效益/风险比相称，并且对于其预期用途有效，以及在可能的情况下，本发明化合物的两性离子形式。术语“前药”意指在体内快速转化产生上式的母体化合物的化合物(例如通过在血液中水解)。可以通过在体内代谢裂解快速转化的官能团，形成一类可与本发明化合物的羧基反应的基团。它们包括但不限于诸如烷酰基(如乙酰基、丙酰基、丁酰基等)、未取代和经取代的芳酰基(如苯甲酰基和经取代的苯甲酰基)、烷氧基羰基(如乙氧基羰基)、三烷基甲硅烷基(如三甲基和三乙基甲硅烷基)、与二羧酸(如琥珀酰基)形成的单酯等基团。由于根据本发明有用的化合物的代谢可裂解基团易于体内裂解，所以带有这些基团的化合物起到前药的作用。带有代谢可裂解基团的化合物具有下述优点，即由于存在代谢可裂解基团而赋予母体化合物提高的溶解度和/或吸收速率，因此它们可以表现出改善的生物利用率。以下提高了对前药的透彻讨论：Design of Prodrugs,H.Bundgaard编辑，Elsevier(1985)；Methods in Enzymology,K.Widder等人编辑，Academic Press,42，第309-396页(1985)；A Textbook of Drug Design andDevelopment,Krogsgaard-Larsen and H.Bundgaard编辑，第5章；"Design andApplications of Prodrugs"第113-191页(1991)；Advanced Drug Delivery Reviews,H.Bundgard,8，第1-38页(1992)；J.Pharm.Sci.,77:285(1988)；Nakeya等人，Chem.Pharm.Bull.,32:692(1984)；Higuchi等人，“Pro-drugs as Novel DeliverySystems,”the A.C.S.Symposium Series第14卷以及Bioreversible Carriers in DrugDesign,Edward B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association and PergamonPress(1987)，其通过引用整体并入本文。前药的实例包括但不限于本发明化合物中醇和胺官能团的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物。
术语“溶剂合物”是指呈固态的式I化合物，其中合适溶剂的分子掺入晶格中。用于治疗性施用的合适溶剂在施用剂量下是生理上可耐受的。用于治疗性施用的合适溶剂的实例是乙醇和水。当水是溶剂时，溶剂合物称为水合物。通常，溶剂合物通过将化合物溶解在适当的溶剂中并通过冷却或使用抗溶剂分离溶剂合物来形成。溶剂合物通常在环境条件下干燥或共沸。
术语“治疗有效量”意在描述有效抑制蛋白酶体或免疫蛋白酶体并因此产生所需治疗效果的本发明化合物的量。考虑到本文为确定和说明而提供的描述，此类量通常根据许多正好在普通技术人员范围内的因素变化。这些包括但不限于：特定受试者及其年龄、体重、身高、总体健康状况和病史；所用的特定化合物，以及其配制的载体和为其选择的施用途径；以及所治疗病状的性质和严重程度。
术语“药物组合物”意指包含式(I)的化合物和至少一种下述组分的组合物，根据施用模式的性质和剂型，所述组分包括药学上可接受的载体、稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物，例如防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。悬浮剂的实例包括乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或这些物质的混合物。微生物作用的预防可通过各种抗菌剂和抗真菌剂来确保，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。也可能希望包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。可通过使用延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，使可注射药物形式的吸收延长。合适的载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇、其合适的混合物、植物油(如橄榄油)以及可注射有机酯(如油酸乙酯)。赋形剂的实例包括乳糖、奶糖、柠檬酸钠、碳酸钙和磷酸二钙。崩解剂的实例包括淀粉、海藻酸和某些复合硅酸盐。润滑剂的实例包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石以及高分子量聚乙二醇。
术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人和低等动物的组织接触而没有异常毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的剂型”意指本发明化合物的剂型，并且包括例如片剂、糖锭剂、粉剂、酏剂、糖浆剂、液体制剂，包括混悬剂、喷雾剂、吸入剂片剂、锭剂、乳剂、溶液、粒剂、胶囊剂和栓剂，以及用于注射的液体制剂，包括脂质体制剂。技术和配方通常可以在Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.最新版中找到。
本文所述的化合物可以含一个或多个不对称中心，并且因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式。就绝对立体化学而言，每个手性中心均可定义为(R)-或(S)-。这种技术意在包括所有此类可能的异构体及其混合物，包括外消旋和光学纯形式。光学活性(R)-和(S)-、(-)-和(+)-或(D)-和(L)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术解析。当本文描述的化合物含烯双键或其它几何不对称中心时，除非另有说明，否则意图是化合物包括E和Z几何异构体。同样，也意在包括所有互变异构形式
本技术还设想本文公开的化合物的任何碱性含氮基团的“季铵化”。碱性氮可以用本领域普通技术人员已知的任何试剂季铵化，包括例如低级烷基卤化物，例如甲基氯、乙基氯、丙基氯和丁基氯，溴化物和碘化物；二烷基硫酸盐，包括二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸盐；长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻酰基和硬脂酰氯化物、溴化物和碘化物；和芳烷基卤化物，包括苄基和苯乙基溴化物。可以通过此类季铵化获得水或油溶性或可分散性产物。
在表征一些取代基时，叙述某些取代基可以结合形成环。除非另有说明，否则意图是此类环可以表现出不同程度的不饱和度(从完全饱和到完全不饱和)，可以包括杂原子并且可以被低级烷基或烷氧基取代。
式(I)的化合物可以根据已知方法生成。例如，式(I)的化合物可以根据下面概述的方案1制备。
方案1
Figure BDA0001653910460000251
胺(1)与羧酸(2)的偶联导致形成化合物(3)。偶联反应可以在各种溶剂中进行，例如在亚甲基氯(CH2Cl2)、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)或其它此类溶剂或此类溶剂的混合物中进行。在偶联过程中，氨基酸或肽片段反应组上的非参与性羧酸或胺可以通过合适的保护基团保护，如果需要，稍后可以选择性去除保护基团。这些基团及其选择和化学性质的详细描述包含在Gross和Meinenhofer编辑的"The Peptides第3卷",Academic Press,New York,1981中，所述文献据此通过引用整体并入。因此，氨基的有用保护基团是苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(t-BOC)、2,2,2-三氯乙氧羰基(Troc)、叔戊氧羰基、4-甲氧苄氧羰基、2-(三氯甲硅烷基)乙氧羰基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、邻苯二甲酰基、乙酰基(Ac)、甲酰基、三氟乙酰基等。
胺(1)可根据下面概述的一般方案(方案2)制备。
方案2
Figure BDA0001653910460000252
胺(5)可以通过化合物(4)去保护而制备。胺(5)与羧酸(6)的偶联导致形成化合物(7)。偶联反应在溶剂如亚甲基氯(CH2Cl2)、四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)或其它此类溶剂中进行。在偶联过程中，氨基酸或肽片段反应组上的非参与性羧酸或胺可以通过合适的保护基团保护，如果需要，稍后可以选择性去除保护基团。这些基团及其选择和化学性质的详细描述包含在Gross和Meinenhofer编辑的"The Peptides第3卷",Academic Press,New York,1981中，所述文献据此通过引用整体并入。因此，氨基的有用保护基团是苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(t-BOC)、2,2,2-三氯乙氧羰基(Troc)、叔戊氧羰基、4-甲氧苄氧羰基、2-(三氯甲硅烷基)乙氧羰基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)、邻苯二甲酰基、乙酰基(Ac)、甲酰基、三氟乙酰基等。去保护反应后，化合物(8)与胺(9)偶联形成化合物(10)。胺(1)可以通过化合物(10)去保护而制备。
在一个实施方案中，化合物具有式(Ia)：
Figure BDA0001653910460000261
在另一个实施方案中，化合物具有式(Ib)：
Figure BDA0001653910460000262
在又一个实施方案中，化合物具有式(Ic)：
Figure BDA0001653910460000263
另一个实施方案涉及其中烷基为C1-6烷基的式(I)的化合物。
又一个实施方案涉及其中烯基为C2-6烯基的式(I)的化合物。
另一个实施方案涉及其中R1选自由
Figure BDA0001653910460000271
Figure BDA0001653910460000272
Figure BDA0001653910460000273
组成的组的式(I)的化合物。
另一个实施方案涉及其中R2选自由H、CH3、
Figure BDA0001653910460000274
组成的组的式(I)的化合物。
另一个实施方案涉及其中R3选自由H、
Figure BDA0001653910460000275
Figure BDA0001653910460000276
组成的组；并且R为C1-6烷基的式(I)的化合物。
另一个实施方案涉及式(I)的化合物，其中化合物具有选自由以下组成的组的结构：
Figure BDA0001653910460000277
Figure BDA0001653910460000281
Figure BDA0001653910460000291
Figure BDA0001653910460000301
本发明的第二方面涉及治疗受试者的癌症、免疫学病症、自身免疫性病症、神经变性病症或炎性病症或用于为受试者中的移植器官或组织提供免疫抑制的方法。该方法包括向有需要的受试者施用式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000302
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
上面讨论的式(I)的不同形式都适用于本发明的这个实施方案。
在一个实施方案中，治疗自身免疫性病症。自身免疫性病症选自由关节炎、结肠炎、多发性硬化、狼疮、系统性硬化和干燥综合征(
Figure BDA0001653910460000321
syndrome)组成的组。
在另一个实施方案中，为移植器官或组织提供免疫抑制。免疫抑制用于预防移植排斥和移植物抗宿主病。
在另一个实施方案中，治疗炎性病症。炎性病症为克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。
在又一个实施方案中，治疗癌症。癌症选自由多发性骨髓瘤、淋巴瘤和其它血液学癌症组成的组。
虽然式(I)的化合物可能作为原始化学品施用，但通常优选将其作为药物组合物的一部分呈现。因此，本发明的另一方面是含有治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物和药学上可接受的载体的药物组合物。载体必须在与制剂的其它成分相容且对受者无害的意义上是“可接受的”。
在实践本发明的这种方法时，可以使用本领域中的任何方法标准来施用适于治疗受试者的试剂。呈其适当递送形式的试剂可经口服、皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下或鼻内施用。本发明的组合物可以单独或与合适的药物载体一起施用，并且可以呈固体或液体形式，例如片剂、胶囊、粉剂、溶液、混悬剂或乳剂。
本发明的试剂可以，例如与惰性稀释剂或与可吸收的可食用载体一起口服施用，或者可以将其封装在硬壳或软壳胶囊中，或者可以将其压制成片剂，或者可以将其直接掺入饮食食物中。本发明的试剂还可以掺入诸如延时释放胶囊或纳米管等装置中以延时释放方式施用。此类装置提供了相对于时间和剂量的灵活性。对于口服治疗性施用，本发明的试剂可以与赋形剂掺混并且以片剂、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆剂等形式使用。尽管较低的浓度可能有效并且确实是最佳的，但此类组合物和制剂应含有至少0.1％的试剂。当然，这些组合物中试剂的百分比可以变化，并且可以方便地在单位重量的约2％至约60％之间。在此类治疗上有用的组合物中本发明试剂的量是会获得合适剂量的量。
还特别考虑了本发明试剂的口服剂型。试剂可以经化学修饰，使得口服递送衍生物有效。通常，所考虑的化学修饰是至少一个部分与组分分子本身的连接，其中所述部分允许(a)抑制蛋白水解；和(b)从胃或肠吸收到血流中。还期望的是一种或多种组分整体稳定性的增加以及体内循环时间的增加。此类部分的实例包括：聚乙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚脯氨酸。(Abuchowski和Davis,“Soluble Polymer-Enzyme Adducts,”In:Enzymes as Drugs,Hocenberg和Roberts编辑，Wiley-Interscience,New York,N.Y.，第367-383页(1981)，其据此通过引用整体并入)。其它可以使用的聚合物是聚-1,3-二氧戊环和聚-1,3,6-三氧杂环戊烷。如上所述，优选供药物使用的是聚乙二醇部分。
片剂、胶囊等还可含有粘合剂，如黄蓍树胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；以及甜味剂，如蔗糖、乳糖、三氯蔗糖或糖精。当剂量单位形式为胶囊时，其除以上类型的材料之外还可含有液体载体，如脂肪油。
各种其它材料可作为包衣存在或改变剂量单位的物理形式。例如，片剂可以包覆虫胶、糖或两者。除活性成分外，糖浆还可以含有作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和调味剂如樱桃或甜橙香精。
本发明的试剂也可以肠胃外施用。可以在与表面活性剂如羟丙基纤维素适当混合的水中制备该试剂的溶液或混悬液。也可以在甘油、液体聚乙二醇及其于油中的混合物中制备分散液。说明性的油是那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油或矿物油。通常，水、盐水、葡萄糖水溶液和相关糖溶液以及二元醇如丙二醇或聚乙二醇是优选的液体载体，特别是对于注射溶液而言。在普通储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。
适于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，所述形式必须无菌并且必须可流动，达到易于注射的程度。它在生产和储存条件下必须稳定，并且必须防止诸如细菌和真菌等微生物的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)、其适合的混合物和植物油。
当需要全身递送本发明的试剂时，可以将其配制成用于通过注射，例如通过快速浓注或连续输注进行肠胃外施用。用于注射的调配物可以呈单位剂型，例如在安瓿或多剂量容器中提供，并添加有防腐剂。组合物可采用诸如以下的形式，如在油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液，并且可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
本发明试剂的腹膜内或鞘内施用也可使用输注泵装置如Medtronic,Northridge,CA.描述的那些装置来实现。此类装置允许连续输注所需化合物，避免多次注射和多次操作。
除先前描述的调配物之外，所述试剂还可配制成贮库型制剂。此类长效调配物可用合适的聚合或疏水性物质(例如，作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂或作为难溶性衍生物，例如作为难溶性盐配制。
本发明的试剂也可以呈气溶胶的形式直接施用至气道。为了用作气溶胶，本发明的呈溶液或混悬液形式的试剂可以与合适的推进剂，例如丙烷、丁烷或异丁烷及常规助剂一起包装在加压气溶胶容器中。本发明的试剂还可以呈非加压形式例如在喷霉器或雾化器中施用。
用于治疗癌症或病原体感染的本发明组合物的有效剂量根据许多不同的因素变化，所述因素包括癌症的类型和阶段或病原体感染的类型、施用方式、靶位点、患者的生理状态、施用的其它药剂或疗法，以及患者相对于其它医疗并发症的身体状态。需要滴定治疗剂量以使安全性和功效最优化。
本发明组合物中活性成分的百分比可以变化，它必须构成一个比例，以便获得合适的剂量。显然，几种单位剂型可以几乎同时施用。所采用的剂量将由医师决定并取决于所需治疗效果、施用途径和治疗持续时间以及患者的状况。在成人中，剂量一般为约0.01至约100mg/kg体重，优选每天吸入约0.01至约10mg/kg体重，约0.01至约100mg/kg体重，优选0.1至70mg/kg体重，更具体地每天口服施用0.1至10mg/kg体重，及约0.01至约50mg/kg体重，优选每天静脉施用0.01至10mg/kg体重。在每种特定情况下，将根据与待治疗的受试者特有的因素(例如年龄、体重、总体健康状况以及可影响药用产品功效的其它特征)确定剂量。
为了获得所需的治疗效果，可以根据需要频繁施用根据本发明的产品。一些患者可能会对较高或较低剂量快速反应，并且可能会发现较弱的维持剂量就足够。对于其它患者，根据每个特定患者的生理需求，可能需要以每天1至4个剂量的速率进行长期治疗。通常，活性产品可以每天口服使施用1至4次。不言而喻，对于其它患者，每天需要给予不超过一次或两次剂量。
本发明的第三方面涉及抑制细胞或组织中的胰凝乳蛋白酶β5i的方法。该方法包括提供式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000361
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；
p为1或2；并且
使细胞或组织与化合物在有效抑制胰凝乳蛋白酶β5i的条件下接触。
上面讨论的式(I)的不同形式都适用于本发明的这个实施方案。
在一个实施方案中，胰凝乳蛋白酶β5i受选择性抑制超过β5c。
在另一个实施方案中，胰凝乳蛋白酶β5c受选择性抑制超过β5i。
本发明的第四方面涉及治疗受试者中的感染性疾病的方法。该方法包括向有需要的受试者施用式(I)的化合物：
Figure BDA0001653910460000371
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、单环和双环杂环基和双-杂环基，及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2在每次出现时独立地选自由以下组成的组：H、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基和—(CH2)mC(O)NHR4，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基、单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet、—C(O)C1-6烷基和—C(O)OC1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基、单环和双环杂芳基及单环和双环杂环基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其氧化物、其药学上可接受的盐、其溶剂合物或其前药。
上面讨论的式(I)的不同形式都适用于本发明的这个实施方案。
同样地，以上讨论的式(I)的化合物的配制和施用方式可用于实施本发明的这一方面。
在一个实施方案中，感染性疾病由细菌、病毒、寄生虫和真菌感染物引起。
在一个实施方案中，感染性疾病由选自由以下组成的组的细菌引起：大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、志贺氏菌(Shigella)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、假单胞菌(Pseudomonas)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、鸟分枝杆菌-胞内分枝杆菌(Mycobacterium avium-intracellulare)、耶尔森氏菌(Yersinia)、弗朗西斯菌(Francisella)、巴斯德菌(Pasteurella)、布鲁氏菌(Brucella)、梭状芽孢杆菌(Clostridia)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、拟杆菌(Bacteroides)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)、B-溶血性链球菌(B-Hemolytic strep.)、棒状杆菌(Corynebacteria)、军团菌(Legionella)、支原体(Mycoplasma)、脲原体(Ureaplasma)、衣原体(Chlamydia)、淋病奈瑟球菌(Neisseriagonorrhea)、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitides)、流感嗜血杆菌(Hemophilusinfluenza)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、普通变形菌(Proteus vulgaris)、奇异变形菌(Proteus mirabilis)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、梅毒螺旋体(Treponema palladium)、博氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、回归热疏螺旋体(Borrelia recurrentis)、立克次氏体病原体(Rickettsial pathogens)、诺卡氏菌(Nocardia)和放线菌(Actinomycetes)。
在另一个实施方案中，感染性疾病由选自由以下组成的组的真菌感染物引起：新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、巴西副球孢子菌(Paracoccicioides brasiliensis)、白色念珠菌(Candida albicans)、烟曲霉(Aspergillus fumigautus)、藻状菌(Phycomycetes)(根霉菌属)、申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、着色真菌(Chromomycosis)和足分支菌(Maduromycosis)。
在另一个实施方案中，感染性疾病由选自由以下组成的组的病毒感染物引起：人免疫缺陷病毒、人T细胞淋巴细胞病毒、肝炎病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-BarrVirus)、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、正粘病毒、副粘病毒、腺病毒、冠状病毒、棒状病毒、脊髓灰质炎病毒、披盖病毒、布尼亚病毒(bunya virus)、沙粒病毒、风疹病毒和呼肠孤病毒。
在又一个实施方案中，感染性疾病由选自由以下组成的组的寄生虫感染物引起：恶性疟原虫、三日疟原虫(Plasmodium malaria)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卵形疟原虫(Plasmodium ovale)、盘尾丝虫(Onchoverva volvulus)、利什曼原虫(Leishmania)、锥虫属种(Trypanosoma spp.)、血吸虫属种(Schistosoma spp.)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、隐孢子虫(Cryptosporidum)、贾第虫属种(Giardia spp.)、毛滴虫属种(Trichimonas spp.)、结肠小袋纤毛虫(Balatidium coli)、班氏丝虫(Wuchereria bancrofti)、弓形虫属种(Toxoplasma spp.)、蠕形住肠线虫(Enterobiusvermicularis)、蛔虫(Ascaris lumbricoides)、毛首鞭形线虫(Trichuris trichiura)、麦地那龙线虫(Dracunculus medinesis)、吸虫(trematodes)、阔节裂头绦虫(Diphyllobothrium latum)、绦虫属种(Taenia spp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii)和美洲钩虫(Necator americanis)。
在一个实施方案中，感染性疾病是疟疾。
实施例
提供以下实施例是为了说明本发明的实施方案，但决非旨在限制其范围。
实施例1-化学品和光谱学
除非另有说明，否则所有可商购的材料均购自Bachem、Aldrich、P3BioSystems或其它供应商并按原样使用。所有非水性反应均在烘箱干燥的玻璃器皿中在氩气下进行。使用Waters Acquity超高效液相色谱(UPLC)进行反应的常规监测。所有HPLC纯化均通过Varian PrepStar HPLC系统或Waters Autopure(质量定向纯化系统)使用Prep C18 5μmOBD(19X 150mm)柱进行。在Bruker DRX-500光谱仪上获得1H-和13C-NMR谱。化学位移δ以百万分率表示，以溶剂共振作为内标(氯仿-d，1H：7.26；13C：77.16ppm；DMSO-d6，1H：2.50ppm；13C：39.52ppm)。六氟苯用作19F NMR的内标。NMR数据报道如下：化学位移、多重性(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br＝宽)、偶联常数和积分。
实施例2-HATU介导的酰胺键形成的一般程序
在0℃下向羧酸(1个当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU，1.2个当量)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAt；0.6M于DMF中)于DMF中的溶液中滴加Hunig碱(3-5个当量)。在0℃下搅拌混合物5分钟并添加胺(1个当量)。在0℃下搅拌反应混合物直至原材料完全消耗(通过LCMS监测)。反应完成后，向反应混合物中添加水并搅拌30分钟。通过过滤或乙酸乙酯萃取分离产物。
实施例3-Boc-去保护的一般程序
将底物于二氯甲烷中的溶液冷却至0℃。在0℃下边连续搅拌边向溶液滴加三氟乙酸(相对于二氯甲烷20％v/v)。使混合物缓慢升温至室温(在1小时内)，并搅拌直至反应完成(通过LCMS监测)。蒸发过量三氟乙酸和二氯甲烷并在真空下干燥粗产物。
实施例4-O-脱苄基化的一般程序
将钯碳(10％)小心地添加到底物于甲醇中的溶液中。去除烧瓶的残留空气并用氢气吹扫。在室温下在氢气气氛下使用氢气球使混合物搅拌3-4小时。反应完成后，通过硅藻土过滤混合物。蒸发滤液并在真空下干燥以得到产物。
实施例5-胺类的N-磺酰胺合成的一般程序
在0℃下将三乙胺(2.0-3.0个当量)添加到底物(胺，通常为TFA盐)于二氯甲烷中的溶液中。将混合物升温至室温(25℃)并一次性添加磺酰氯(1.5个当量)。反应完成后(2-3小时)，蒸发二氯甲烷并通过乙酸乙酯萃取来分离粗产物。
实施例6-PKS3070的合成
Figure BDA0001653910460000421
按照HATU介导N-叔丁基-N2-(1-氧代-3-苯丙基)-L-天冬酰胺(778mg，2.43mmol)和N-Boc-乙二胺(428mg，2.67mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀并风干得到呈白色固体的产物(955mg，85％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.32–7.27(m,3H),7.24–7.18(m,3H),6.92(br,1H),5.72(br,1H),5.01(br,1H),4.65–4.56(m,1H),3.29–3.14(m,4H),3.05–2.92(m,2H),2.70(dd,J＝15.0,3.7Hz,1H),2.60(t,J＝7.6Hz,2H),2.31(dd,J＝15.0,6.1Hz,1H),1.44(s,9H),1.31(s,9H)。
实施例7-PKS3072的合成
Figure BDA0001653910460000431
按照PKS3070(953mg，2.06mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。干燥并用乙醚研磨粗产物得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体以得到产物(980mg，定量)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.08(d,J＝7.9Hz,1H),8.05(t,J＝5.6Hz,1H),7.80(br,3H),7.56(s,1H),7.30–7.23(m,2H),7.22–7.14(m,3H),4.50–4.42(m,1H),3.42–3.31(m,1H),3.29–3.19(m,1H),2.92–2.82(m,2H),2.80(t,J＝7.9Hz,2H),2.48–2.34(m,4H),1.22(s,9H)。
实施例8-PKS3080的合成
Figure BDA0001653910460000432
按照HATU介导1-萘甲酸(20.7mg，0.12mmol)和PKS3072(47.6mg，0.1mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(30.2mg，58％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.47(t,J＝5.6Hz,1H),8.25–8.18(m,1H),8.03–7.92(m,4H),7.66(dd,J＝7.1,1.3Hz,1H),7.60–7.48(m,3H),7.38(s,1H),7.28–7.22(m,2H),7.19–7.12(m,3H),4.57–4.46(m,1H),3.45–3.37(m,2H),3.32–3.21(m,2H),2.77(t,J＝8.0Hz,2H),2.46(dd,J＝14.6,6.0Hz,1H),2.43–2.37(m,2H),2.32(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),1.19(s,9H)。13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.9,168.7,141.3,134.7,133.1,129.8,129.7,128.3,128.1,128.1,126.7,126.2,125.8,125.5,125.3,124.9,50.2,50.0,38.9,38.7,38.7,36.9,30.9,28.4。C30H36N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：539.2634。实测值：539.2637。
实施例9-PKS21003的合成
Figure BDA0001653910460000441
通过HATU介导4-苯基苯基甲酸(104.0mg，524.7μmol)和PKS3072(250.0mg，524.7μmol)偶联合成标题化合物。反应完成后(1小时)，添加水。过滤获得的白色沉淀，用水洗涤并且风干得到284.0mg白色固体。用乙酸乙酯研磨白色固体并通过离心分离(4700rpm，10分钟)。分离的白色固体(235mg，82％)是纯产物(通过LCMS和NMR)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.51–8.44(m,1H),8.00(d,J＝7.9Hz,1H),7.99–7.89(m,3H),7.76–7.72(m,2H),7.72–7.67(m,2H),7.52–7.45(m,2H),7.43–7.36(m,2H),7.28–7.22(m,2H),7.20–7.12(m,3H),4.54–4.45(m,1H),3.36-3.33(m,2H),3.29–3.14(m,2H),2.78(t,J＝8.0Hz,2H),2.48–2.38(m,3H),2.32(dd,J＝15.0,8.0Hz,1H),1.21(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.9,166.1,142.7,141.3,139.2,133.3,129.0,128.3,128.1,128.0,127.9,126.8,126.4,125.9,50.2,50.1,38.9,38.7,38.6,36.9,31.0,28.4。C32H38N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：565.2791。实测值：565.2786。
实施例10-PKS21004的合成
Figure BDA0001653910460000451
通过HATU介导3-苯基苯基甲酸(396.8mg，2.00mol)和PKS3072(867.2mg，1.82mmol)偶联合成标题化合物。反应完成后(2小时)，向反应混合物中添加水。出现乳白色沉淀。过滤沉淀并使其从乙醇中再结晶以得到呈白色固体的纯产物(905mg，92％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.57(t,J＝5.5Hz,1H),8.13(s,1H),8.01–7.93(m,2H),7.87–7.79(m,2H),7.76–7.70(m,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,1H),7.51–7.46(m,2H),7.43–7.35(m,2H),7.28–7.22(m,2H),7.19–7.13(m,3H),4.54–4.46(m,1H),3.38–3.15(m,4H),2.77(t,J＝7.9Hz,2H),2.48–2.36(m,3H),2.32(dd,J＝14.7,7.9Hz,1H),1.20(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.9,166.3,141.3,140.1,139.6,135.1,129.3,129.0,129.0,128.3,128.1,127.7,126.8,126.4,125.8,125.4,50.2,50.0,38.9,38.7,38.6,36.9,30.9,28.4。C32H38N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：565.2791。实测值：565.2774。
实施例11-PKS21025的合成
Figure BDA0001653910460000461
按照HATU介导2-萘甲酸(5.2mg，30μmol)和PKS3072(11.9mg，25μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后(1小时)，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(11.5mg，89％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(t,J＝5.6Hz,1H),8.43(s,1H),8.03–7.95(m,5H),7.92(d,J＝8.6Hz,1H),7.65–7.53(m,2H),7.40(s,1H),7.29–7.20(m,2H),7.20–7.10(m,3H),4.55–4.46(m,1H),3.44–3.34(m,2H),3.32–3.18(m,2H),2.77(t,J＝8.0Hz,2H),2.49–2.37(m,3H),2.32(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),1.19(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.6,171.6,169.1,166.9,141.4,134.3,132.3,131.9,129.0,128.5,128.3,128.0,127.8,127.8,127.6,126.9,126.1,124.3,50.4,50.3,39.2,38.9,38.8,37.1,31.1,28.6。C30H36N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：539.2634。实测值：539.2617。
实施例12-PKS21026的合成
Figure BDA0001653910460000462
按照HATU介导3-(4-氟苯基)苯甲酸(6.49mg，30μmol)和PKS3072(11.9mg，25μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后(1小时)，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(11.0mg，78％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.57(t,J＝5.6Hz,1H),8.12–8.07(m,1H),7.99(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(t,J＝5.7Hz,1H),7.85–7.72(m,4H),7.57–7.50(m,1H),7.39(s,1H),7.35–7.26(m,2H),7.28–7.21(m,2H),7.19–7.13(m,3H),4.49(td,J＝7.9,5.9Hz,1H),3.37–3.14(m,4H),2.76(t,J＝8.0Hz,2H),2.49–2.35(m,3H),2.32(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),1.19(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.5,171.5,169.0,166.6,162.2(d,J＝244.8Hz),141.3,139.2,136.1,135.2,129.4,129.1,129.0(d,J＝9.6Hz),128.4,128.2,126.5,126.0,125.4,115.9(d,J＝21.5Hz),50.4,50.2,39.1,38.8,38.7,37.0,31.1,28.5；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.4(m)。C32H37FN4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：583.2697。实测值：583.2701。
实施例13-PKS21028的合成
Figure BDA0001653910460000471
按照HATU介导3-(4-氰基苯基)苯甲酸(6.7mg，30μmol)和PKS3072(11.9mg，25μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(11.0mg，78％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(t,J＝5.6Hz,1H),8.19(t,J＝1.9Hz,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.99–7.93(m,5H),7.91(d,J＝7.8Hz,2H),7.59(t,J＝7.8Hz,1H),7.39(s,1H),7.28–7.21(m,2H),7.19–7.13(m,3H),4.54–4.46(m,1H),3.45–3.15(m,4H),2.76(t,J＝8.0Hz,2H),2.45(dd,J＝14.5,5.9Hz,1H),2.42–2.38(m,2H),2.32(dd,J＝14.5,7.9Hz,1H),1.19(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.9,166.1,144.0,141.3,138.2,135.4,132.9,129.7,129.2,128.3,128.1,127.7,127.7,125.8,125.7,118.8,110.4,50.2,50.0,38.9,38.7,38.6,36.9,30.9,28.4。
实施例14-PKS21186的合成
Figure BDA0001653910460000481
按照HATU介导4-苯基吡啶甲酸(10.0mg，50μmol)和PKS3072(23.8mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(21.5mg，79％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.96(t,J＝6.0Hz,1H),8.69(d,J＝5.0Hz,1H),8.28(d,J＝1.8Hz,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.95–7.90(m,2H),7.83(d,J＝6.8Hz,2H),7.58–7.48(m,3H),7.34(s,1H),7.27–7.21(m,2H),7.19–7.13(m,3H),4.54–4.44(m,1H),3.43–3.38(m,2H),3.28–3.18(m,2H),2.77(t,J＝7.9Hz,2H),2.46–2.35(m,3H),2.29(dd,J＝14.6,8.1Hz,1H),1.20(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,171.1,168.8,164.2,150.8,149.1,148.6,141.3,136.7,129.6,129.3,128.3,128.1,126.9,125.8,123.7,119.0,50.1,50.0,38.9,38.7,38.7,36.9,31.0,28.4。C31H37N5O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：566.2743。实测值：566.2736。
实施例15-PKS21187的合成
Figure BDA0001653910460000482
按照HATU介导2-氟-5-(2-氟苯基)苯甲酸(11.7mg，50μmol)和PKS3072(23.8mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(24.8mg，86％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.38(t,J＝4.6Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(t,J＝5.7Hz,1H),7.82–7.78(m,1H),7.71–7.66(m,1H),7.58–7.53(m,1H),7.47–7.41(m,1H),7.41–7.28(m,4H),7.27–7.22(m,2H),7.19–7.13(m,3H),4.53–4.42(m,1H),3.38–3.29(m,2H),3.29–3.23(m,1H),3.22–3.15(m,1H),2.76(t,J＝7.9Hz,2H),2.46–2.36(m,3H),2.30(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.8,163.6,159.0(d,J＝247.4Hz),158.8(d,J＝251.0Hz),141.3,132.8–132.6(m),131.4–131.1(m),130.8,130.3,130.0(d,J＝7.9Hz),128.2,128.1,126.7,125.8,125.0(d,J＝2.9Hz),124.2(d,J＝14.5Hz),116.5(d,J＝22.1Hz),116.1(d,J＝23.1Hz),50.1,50.0,39.0,38.6,38.5,36.9,30.9,28.4；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),–120.8(m)。C32H36F2N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：601.2602。实测值：601.2601。
实施例16-PKS21195的合成
Figure BDA0001653910460000491
按照HATU介导2-氟-5-(3-氟苯基)苯甲酸(14.3mg，61μmol)和PKS3072(29.0mg，61μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(28.5mg，81％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.41(t,J＝5.6Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.97–7.89(m,2H),7.88–7.79(m,1H),7.59–7.53(m,2H),7.53–7.46(m,1H),7.41–7.32(m,2H),7.27–7.18(m,3H),7.17–7.12(m,3H),4.54–4.44(m,1H),3.40–3.15(m,4H),2.76(t,J＝8.0Hz,2H),2.45(dd,J＝14.5,6.0Hz,1H),2.42–2.36(m,2H),2.32(dd,J＝14.5,7.9Hz,1H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.8,163.7,162.7(d,J＝243.3Hz),159.1(d,J＝250.7Hz),141.3,141.0(d,J＝7.7Hz),135.0,130.9(d,J＝8.0Hz),130.5(d,J＝8.9Hz),128.3,128.2,128.1,125.8,124.5(d,J＝14.5Hz),122.8,116.8(d,J＝21.9Hz),114.4(d,J＝21.6Hz),113.4,50.2,50.0,38.9,38.6,38.6,36.9,30.9,28.4；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-114.7(m),-117.9(m)。C32H36F2N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：601.2602。实测值：601.2600。
实施例17-PKS21196的合成
Figure BDA0001653910460000501
按照HATU介导2-氟-5-苯基-苯甲酸(13.2mg，61μmol)和PKS3072(29.0mg，61μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(30.0mg，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(t,J＝5.6Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.94(t,J＝5.7Hz,1H),7.90(dd,J＝6.9,2.4Hz,1H),7.82–7.77(m,1H),7.69(d,J＝7.6Hz,2H),7.49–7.44(m,2H),7.40–7.33(m,3H),7.27–7.21(m,2H),7.18–7.13(m,3H),4.54–4.45(m,1H),3.39–3.15(m,4H),2.76(t,J＝8.0Hz,2H),2.45(dd,J＝14.5,5.9Hz,1H),2.42–2.37(m,2H),2.32(dd,J＝14.5,7.9Hz,1H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.2,168.8,163.8,158.8(d,J＝250.7Hz),141.3,138.5,136.4,130.3(d,J＝8.9Hz),129.0,128.3,128.1(d,J＝3.1Hz),128.1,127.7,126.7,125.8,124.4(d,J＝14.5Hz),116.7(d,J＝23.0Hz),50.2,50.0,38.9,38.6,38.6,36.9,30.9,28.4；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-119.2(m)。C32H37FN4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：583.2697。实测值：583.2697。
实施例18-PKS3086的合成
Figure BDA0001653910460000511
按照HATU介导N-叔丁基-N2-(1-氧代-3-苯丙基)-L-天冬酰胺(32.0mg，0.1mmol)和叔丁基(2-氨基丙基)氨基甲酸酯(17.4mg，0.1mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀并风干得到呈白色固体的产物(44.9mg，94％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6；非对映异构体混合物)δ7.91(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(d,J＝8.1Hz,1H),7.37(s,1H),7.30–7.23(m,2H),7.22–7.13(m,3H),6.70(t,J＝6.0Hz,1H),4.50–4.41(m,1H),3.81–3.70(m,1H),2.94(t,J＝6.1Hz,2H),2.79(t,J＝7.9Hz,2H),2.45–2.34(m,3H),2.30(dd,J＝14.7,7.5Hz,1H),1.37(s,9H),1.22(s,9H),0.96(d,J＝6.7Hz,3H)。
实施例19-PKS21006的合成
Figure BDA0001653910460000512
按照PKS3086(40.0mg，84μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。分离的粗产物在真空下干燥并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体得到呈白色固体的产物(40mg，97％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6；非对映异构体混合物)δ8.11(d,J＝7.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(s,1H),7.30–7.24(m,2H),7.22–7.15(m,3H),4.46–4.32(m,1H),4.09–3.93(m,1H),2.87(dd,J＝13.4,5.1Hz,1H),2.84–2.72(m,3H),2.47–2.39(m,4H),1.23(s,9H),1.11–1.03(m,3H)。
实施例20-合成PKS21018
Figure BDA0001653910460000521
按照HATU介导3-苯基-苯甲酸(4.8mg，24μmol)和PKS21006(9.8mg，20μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(6.2mg，56％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6；非对映异构体混合物)δ8.51(t,J＝5.9Hz,1H),8.12(t,J＝1.9Hz,1H),7.94(d,J＝7.8Hz,1H),7.86–7.79(m,2H),7.77(d,J＝7.9Hz,1H),7.74–7.69(m,2H),7.53(t,J＝7.7Hz,1H),7.51–7.44(m,2H),7.43–7.34(m,2H),7.27–7.21(m,2H),7.19–7.12(m,3H),4.52–4.44(m,1H),4.00–3.91(m,1H),3.44–3.36(m,1H),3.30–3.24(m,1H),2.75(t,J＝8.0Hz,2H),2.46–2.35(m,3H),2.32(dd,J＝14.7,7.6Hz,1H),1.20(s,9H),1.06(d,J＝6.6Hz,3H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.6,168.8,166.6,141.2,140.2,139.6,135.1,129.3,129.0,129.0,128.9,128.9,128.2,128.1,127.7,126.8,126.4,125.8,125.4,50.3,50.0,45.1,43.9,38.6,36.8,30.9,28.4,17.7。C33H40N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：579.2947。实测值：579.2958。
实施例21-PKS3087的合成
Figure BDA0001653910460000522
按照HATU介导N-叔丁基-N2-(1-氧代-3-苯丙基)-L-天冬酰胺(32.0mg，0.1mmol)和叔丁基-N-(3-氨基丙基)氨基甲酸酯(17.4mg，0.1mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀并风干得到呈白色固体的产物(44.3mg，93％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.99–7.94(m,1H),7.69(t,J＝5.9Hz,1H),7.34(s,1H),7.29–7.23(m,2H),7.21–7.14(m,3H),6.74(t,J＝5.9Hz,1H),4.52–4.42(m,1H),3.03–2.98(m,2H),2.92–2.86(m,2H),2.82–2.77(m,2H),2.46–2.36(m,3H),2.28(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),1.50–1.41(m,2H),1.37(s,9H),1.21(s,9H)。
实施例22-PKS21007的合成
Figure BDA0001653910460000531
按照PKS3087(44.3mg，93μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后(3小时)，蒸发过量三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体得到呈白色固体的产物(41.0mg，90％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝7.8Hz,1H),7.91(t,J＝6.0Hz,1H),7.73(br,3H),7.41(s,1H),7.33–7.22(m,2H),7.23–7.11(m,3H),4.52–4.40(m,1H),3.15–3.02(m,2H),2.84–2.68(m,4H),2.46–2.37(m,3H),2.32(dd,J＝14.7,8.0Hz,1H),1.72–1.59(m,2H),1.22(s,9H)。
实施例23-PKS21019的合成
Figure BDA0001653910460000541
按照HATU介导3-苯基-苯甲酸(4.8mg，24μmol)和PKS21007(9.8mg，20μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(11.1mg，72％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.57(t,J＝5.8Hz,1H),8.11(t,J＝1.9Hz,1H),8.00(d,J＝8.0Hz,1H),7.86–7.78(m,3H),7.75–7.69(m,2H),7.58–7.53(m,1H),7.53–7.47(m,2H),7.43–7.38(m,1H),7.35(s,1H),7.27–7.21(m,2H),7.21–7.12(m,3H),4.50(td,J＝8.0,5.8Hz,1H),3.31–3.26(m,2H),3.15–3.08(m,2H),2.84–2.77(m,2H),2.47–2.38(m,3H),2.31(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),1.67–1.61(m,2H),1.21(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,171.0,168.8,166.1,141.3,140.2,139.6,135.2,129.3,129.0,129.0,128.3,128.1,127.7,126.8,126.3,125.8,125.3,50.2,50.0,38.6,36.9,36.6,36.3,31.0,29.1,28.4。C33H40N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：579.2947。实测值：579.2953。
实施例24-PKS21017的合成
Figure BDA0001653910460000542
按照HATU介导N-叔丁基-N2-(1-氧代-3-苯丙基)-L-谷氨酰胺(100.3mg，0.30mmol)和N-boc-乙二胺(53.95mg，0.33mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀并风干得到呈白色固体的产物(105.0mg，73％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.85(t,J＝5.4Hz,1H),7.33(s,1H),7.30–7.23(m,2H),7.23–7.14(m,3H),6.77(t,J＝5.0Hz,1H),4.18–4.09(m,1H),3.13–3.00(m,2H),3.00–2.93(m,2H),2.80(t,J＝7.9Hz,2H),2.48–2.40(m,2H),1.97(t,J＝8.0Hz,2H),1.80(dt,J＝13.9,7.8,7.2Hz,1H),1.71–1.58(m,1H),1.37(s,9H),1.23(s,9H)。
实施例25-PKS21021的合成
Figure BDA0001653910460000551
按照PKS21017(98.0mg，0.206mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后(3小时)，蒸发过量三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体得到呈白色固体的产物(100.0mg，99％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.09–8.01(m,2H),7.76(s,3H),7.37(s,1H),7.30–7.24(m,2H),7.22–7.14(m,3H),4.16–4.08(m,1H),3.32–3.25(m,2H),2.89–2.77(m,4H),2.48–2.38(m,2H),2.01(t,J＝7.9Hz,2H),1.90–1.79(m,1H),1.73–1.62(m,1H),1.23(s,9H)。
实施例26-PKS21030的合成
Figure BDA0001653910460000561
按照HATU介导3-苯基-苯甲酸(7.1mg，36μmol)和PKS21021(11.3mg，30.0μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过HPLC纯化混合物得到呈白色固体的产物(10.0mg，60％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(t,J＝5.5Hz,1H),8.13(t,J＝1.8Hz,1H),8.05–7.98(m,2H),7.86–7.79(m,2H),7.76–7.70(m,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,1H),7.52–7.45(m,2H),7.42–7.37(m,1H),7.34(s,1H),7.29–7.22(m,2H),7.20–7.12(m,3H),4.16(td,J＝8.2,5.6Hz,1H),3.44–3.19(m,4H),2.78(t,J＝7.9Hz,2H),2.47–2.40(m,2H),1.99(t,J＝8.0Hz,2H),1.89–1.78(m,1H),1.74–1.63(m,1H),1.21(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.7,171.4,171.1,166.4,141.3,140.2,139.6,135.1,129.3,129.0,129.0,128.2,128.1,127.8,126.8,126.4,125.8,125.4,52.5,49.8,39.1,38.5,36.8,32.5,31.0,28.5,28.1。
实施例27-PKS21176的合成
Figure BDA0001653910460000562
按照HATU介导5-甲基异噁唑-3-羧酸(139.8mg，1.10mmol)和N-叔丁基-L-天冬酰胺苄基酯(TFA盐；431.0mg，1.10mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(395mg，93％)。产物是纯的(通过NMR)并且不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.00(d,J＝8.3Hz,1H),7.37–7.26(m,5H),6.40(d,J＝1.1Hz,1H),5.30(br,1H),5.25(d,J＝12.4Hz,1H),5.19(d,J＝12.4Hz,1H),4.97(dt,J＝8.7,4.5Hz,1H),2.89(dd,J＝15.6,4.6Hz,1H),2.71(dd,J＝15.6,4.5Hz,1H),2.47(s,3H),1.28(s,9H)。
实施例28-PKS21178的合成
Figure BDA0001653910460000571
按照PKS21176(195.0mg，0.503mmol)的O-去苄基化的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过硅藻土过滤混合物。将滤液蒸发并干燥得到呈无色胶状物的产物(146mg，98％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.04(d,J＝6.5Hz,1H),6.46(s,1H),6.37(s,1H),4.83–4.75(m,1H),2.93(dd,J＝15.6,3.6Hz,1H),2.78(dd,J＝15.6,8.1Hz,1H),2.45(s,3H),1.32(s,9H)。
实施例29-PKS21184的合成
Figure BDA0001653910460000572
按照HATU介导PKS21178(145.0mg，0.488mmol)和叔丁基N-(2-氨基乙基)氨基甲酸酯(78.1mg，0.488mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。混合物用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用NaHCO3水溶液、水、1N HCl、饱和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发得到呈乳白色固体的产物(210.0mg，98％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.44(br,1H),6.41(s,1H),6.05–5.82(m,1H),5.13(br,1H),4.90–4.80(m,1H),3.41–3.29(m,2H),3.28–3.18(m,2H),2.86–2.76(m,1H),2.65–2.56(m,1H),2.46(s,3H),1.39(s,9H),1.32(s,9H)。
实施例30-PKS21185的合成
Figure BDA0001653910460000581
按照PKS21184(210.0mg，0.478mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。分离的粗产物在真空下干燥并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体得到呈白色固体的产物(197.0mg，91％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.1Hz,1H),8.25–8.16(m,1H),7.78(br,3H),7.60(s,1H),6.56(d,J＝1.0Hz,1H),4.73–4.62(m,1H),3.35–3.23(m,2H),2.89–2.81(m,2H),2.59(dd,J＝13.3,5.9Hz,1H),2.55(dd,J＝13.3,4.8Hz,1H),2.47(s,3H),1.20(s,9H)。
实施例31-PKS21208的合成
Figure BDA0001653910460000582
按照HATU介导2-氟-5-(2-氟苯基)苯甲酸(11.7mg，50μmol)和PKS21185(22.7mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(21.0mg，76％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.38(d,J＝5.9Hz,1H),8.16(t,J＝5.6Hz,1H),7.78(d,J＝6.7Hz,1H),7.72–7.67(m,1H),7.60–7.54(m,1H),7.49(s,1H),7.47–7.42(m,1H),7.42–7.36(m,1H),7.36–7.28(m,2H),6.49(s,1H),4.69–4.61(m,1H),3.43–3.15(m,4H),2.56(dd,J＝14.4,8.2Hz,1H),2.52–2.46(m,1H),2.44(s,3H),1.17(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.4,168.9,163.5,159.0(d,J＝247.1Hz),158.8(d,J＝251.1Hz),158.6,158.3,132.8–132.5(m),131.3,130.8(d,J＝3.3Hz),130.4,130.0(d,J＝7.4Hz),126.6(d,J＝12.7Hz),125.0(d,J＝2.7Hz),124.1(d,J＝14.6Hz),116.5(d,J＝23.0Hz),116.1(d,J＝21.8Hz),101.3,50.5,50.1,39.0,38.5,38.1,28.3,11.8；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),–120.8(m)。C28H31F2N5O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：578.2191。实测值：578.2177。
实施例32-PKS21224的合成
Figure BDA0001653910460000591
按照HATU介导4-苯基吡啶-2-羧酸(10.0mg，50μmol)和PKS21185(22.7mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(18.2mg，70％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.95(t,J＝6.0Hz,1H),8.68(d,J＝5.0Hz,1H),8.53(d,J＝8.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.18(t,J＝5.6Hz,1H),7.94–7.90(m,1H),7.84(d,J＝7.3Hz,2H),7.59–7.46(m,4H),6.51(s,1H),4.70–4.62(m,1H),3.49–3.19(m,4H),2.55(dd,J＝14.5,8.3Hz,1H),2.50–2.45(m,1H),2.43(s,3H),1.17(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.1,170.4,168.9,164.2,158.6,158.2,150.7,149.1,148.6,136.7,129.6,129.3,126.9,123.7,119.0,101.3,50.4,50.1,38.9,38.7,38.1,28.3,11.8。C27H32N6O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：543.2332。实测值：543.2315。
实施例33-PKS21225的合成
Figure BDA0001653910460000601
按照HATU介导2-氟-5-(3-氟苯基)苯甲酸(11.7mg，50μmol)和PKS21185(22.7mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(24.4mg，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝8.0Hz,1H),8.41(t,J＝5.6Hz,1H),8.18(t,J＝5.6Hz,1H),7.93–7.89(m,1H),7.87–7.82(m,1H),7.59–7.47(m,4H),7.42–7.31(m,1H),7.24–7.18(m,1H),6.49(s,1H),4.71–4.62(m,1H),3.42–3.17(m,4H),2.57(dd,J＝14.4,8.2Hz,1H),2.53–2.46(m,1H),2.44(s,3H),1.17(s,9H)。C28H31F2N5O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：578.2191。实测值：578.2183。
实施例34-PKS21250的合成
Figure BDA0001653910460000602
按照HATU介导吡啶甲酸(6.2mg，50μmol)和PKS21185(22.7mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(20.4mg，92％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.88(t,J＝6.0Hz,1H),8.62(d,J＝4.7Hz,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),8.21–8.11(m,1H),8.04–7.93(m,2H),7.59(dd,J＝7.0,4.6Hz,1H),7.49(s,1H),6.52(s,1H),4.70–4.59(m,1H),3.43–3.29(m,2H),3.29–3.16(m,2H),2.54(dd,J＝14.3,8.3Hz,1H),2.49–2.43(m,4H),1.17(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.4,168.9,164.2,158.6,158.2,149.9,148.3,137.7,126.4,121.89,101.3,50.4,50.1,38.9,38.6,38.1,28.3,11.8。C21H28N6O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：467.2019。实测值：467.2003。
实施例35-PKS21251的合成
Figure BDA0001653910460000611
按照HATU介导2-氟苯甲酸(7.0mg，50μmol)和PKS21185(22.7mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(19.8mg，86％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝7.9Hz,1H),8.26(t,J＝5.8Hz,1H),8.14(t,J＝5.7Hz,1H),7.66–7.59(m,1H),7.56–7.46(m,2H),7.30–7.21(m,2H),6.52(s,1H),4.70–4.60(m,1H),3.39–3.14(m,4H),2.56(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),2.49–2.44(m,4H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.4,168.9,163.8,159.1(d,J＝250.8Hz),158.6,158.3,132.4(d,J＝7.8Hz),130.2,124.4,123.9(d,J＝14.4Hz),116.0(d,J＝23.4Hz),101.3,50.4,50.1,38.9,38.5,38.1,28.3,11.8；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–116.5(m)。C22H28FN5O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：484.1972。实测值：484.1969。
实施例36-PKS21212的合成
Figure BDA0001653910460000621
将N-叔丁基-N2-Boc-L-天冬酰胺苄基酯(1.60g，4.23mmol)溶于水:四氢呋喃(1:1，20mL)混合物中并添加5mL HCl(12N)。在室温下搅拌混合物4小时。蒸发四氢呋喃并将所得溶液用10mL水稀释并逐份添加固体碳酸氢钠(约12g)进行碱化。添加4-甲苯磺酰氯(1.61g，8.46mmol)和50mL乙酸乙酯。在室温下用力搅拌双相混合物2小时。分层并用乙酸乙酯洗涤水层。蒸发合并的乙酸乙酯层并通过组合闪式色谱法(combi-flash)纯化得到呈白色固体的产物(1.37g，75％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.75–7.68(m,2H),7.35–7.28(m,3H),7.22(d,J＝7.9Hz,5H),5.90(d,J＝7.8Hz,1H),5.31(s,1H),5.04(d,J＝12.2Hz,1H),5.00(d,J＝12.2Hz,1H),4.10(dt,J＝8.3,4.3Hz,1H),2.80(dd,J＝15.3,4.1Hz,1H),2.62(dd,J＝15.3,4.6Hz,1H),2.39(s,3H),1.29(s,9H)。
实施例37-PKS21241的合成
Figure BDA0001653910460000622
按照在四氢呋喃(15.00mL)中PKS21212(1.37g，3.17mmol)的O-脱苄基化的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过硅藻土过滤混合物。蒸发滤液并干燥得到呈白色固体的产物(1.06g，98％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.55(s,1H),7.86(d,J＝8.7Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,2H),7.41(s,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,2H),4.09–4.02(m,1H),2.42(dd,J＝15.1,6.8Hz,1H),2.36(s,3H),2.24(dd,J＝15.1,6.5Hz,1H),1.17(s,9H)。
实施例38-PKS21177的合成
Figure BDA0001653910460000631
按照HATU介导Ts-Asp(CONHtBu)-OH(342.4mg，1.00mmol)和N-Boc-乙二胺(176.2mg，1.10mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水并在室温下搅拌混合物30分钟。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(441.0mg，91％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.76(d,J＝8.4Hz,2H),7.34–7.30(m,3H),6.71(br,1H),5.51(br,1H),4.98(br,1H),3.93–3.84(m,1H),3.34–3.26(m,2H),3.23–3.15(m,2H),2.67(dd,J＝15.1,4.2Hz,1H),2.43(s,3H),2.16–2.04(m,1H),1.45(s,9H),1.27(s,9H)。
实施例39-PKS21183的合成
Figure BDA0001653910460000641
按照PKS21177(431.0mg，0.889mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后(3小时)，蒸发过量三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体，得到呈白色固体的产物(440.0mg，99％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07(t,J＝5.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(s,3H),7.66(d,J＝8.0Hz,2H),7.57(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),3.96–3.87(m,1H),3.21–3.11(m,1H),3.10–3.00(m,1H),2.80–2.64(m,2H),2.37(s,3H),2.34(dd,J＝14.8,7.9Hz,1H),2.27(dd,J＝14.8,6.1Hz,1H),1.18(s,9H)。
实施例40-PKS21221的合成
Figure BDA0001653910460000642
按照HATU介导2-氟-5-(2-氟苯基)苯甲酸(11.7mg，50μmol)和PKS21183(24.9mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(25.0mg，83％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.27(t,J＝5.7Hz,1H),7.95(t,J＝5.8Hz,1H),7.80–7.74(m,2H),7.72–7.67(m,1H),7.64(d,J＝7.5Hz,2H),7.59–7.53(m,1H),7.48–7.28(m,7H),4.02–3.91(m,1H),3.24–3.11(m,2H),3.09–2.93(m,2H),2.35(s,3H),2.31(dd,J＝14.7,7.0Hz,1H),2.20(dd,J＝14.7,6.9Hz,1H),1.14(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.1,168.1,163.4,159.0(d,J＝247.2Hz),158.8(d,J＝251.2Hz),142.5,138.1,132.8–132.6(m),131.3(d,J＝2.5Hz),130.8,130.3,130.0(d,J＝7.5Hz),129.2,126.6,126.6,125.0(d,J＝2.8Hz),124.1(d,J＝14.7Hz),116.5(d,J＝23.5Hz),116.2(d,J＝23.1Hz),53.7,50.1,39.4,38.8,38.2,28.3,20.9；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),–120.9(m)。C30H34F2N4O5SNa[M+Na]+的HRMS计算值：623.2116。实测值：623.2107。
实施例41-PKS21228的合成
Figure BDA0001653910460000651
按照HATU介导2-氟-5-(3-氟苯基)苯甲酸(11.7mg，50μmol)和PKS21183(24.9mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(24.5mg，82％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.31(t,J＝5.7Hz,1H),7.98(t,J＝5.9Hz,1H),7.91(dd,J＝6.7,2.3Hz,1H),7.87–7.82(m,1H),7.78(br,1H),7.65(d,J＝7.4Hz,2H),7.59–7.46(m,3H),7.41–7.35(m,2H),7.31(d,J＝7.9Hz,2H),7.25–7.18(m,1H),4.02–3.92(m,1H),3.26–3.12(m,2H),3.11–2.93(m,2H),2.35(s,3H),2.34–2.29(m,1H),2.20(dd,J＝14.7,6.8Hz,1H),1.14(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.2,168.1,163.5,162.7(d,J＝243.9Hz),159.1(d,J＝252.7Hz),142.5,140.9(d,J＝7.3Hz),138.1,135.0,130.9(d,J＝8.9Hz),130.6(d,J＝8.9Hz),129.2,128.3,126.6,124.5(d,J＝14.5Hz),122.8,116.8(d,J＝21.8Hz),114.4(d,J＝20.2Hz),113.5(d,J＝21.9Hz),53.7,50.1,39.3,38.7,38.3,28.3,20.9；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-114.9(m),-118.2(m)。C30H34F2N4O5SNa[M+Na]+的HRMS计算值：623.2116。实测值：623.2117。
实施例42-PKS21229的合成
Figure BDA0001653910460000661
按照HATU介导4-苯基吡啶-2-羧酸(10.0mg，50μmol)和PKS21183(24.9mg，50μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(16.0mg，57％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.91(t,J＝6.0Hz,1H),8.73(d,J＝5.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.03(t,J＝5.7Hz,1H),7.96(dd,J＝4.9,2.3Hz,1H),7.88(d,J＝7.4Hz,2H),7.79(br,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,2H),7.62–7.50(m,3H),7.38(s,1H),7.30(d,J＝7.8Hz,2H),4.06–3.95(m,1H),3.34–3.22(m,2H),3.14–2.99(m,2H),2.35(s,3H),2.34–2.30(m,1H),2.22(dd,J＝14.6,7.1Hz,1H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.1,168.0,164.0,150.8,149.1,148.6,142.4,138.1,136.7,129.7,129.4,129.2,126.9,126.6,123.7,119.0,53.7,50.1,39.5,38.6,38.4,28.4,20.9。C29H35N5O5SNa[M+Na]+的HRMS计算值：588.2257。实测值：588.2238。
实施例43-PKS21282的合成
Figure BDA0001653910460000671
按照HATU介导3-(1H-吡唑-3-基)苯甲酸(6.2mg，33μmol)和PKS21183(15.0mg，30μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(10.6mg，64％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40(t,J＝5.6Hz,1H),8.27–8.22(m,1H),8.00(t,J＝5.7Hz,1H),7.95(dt,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.77–7.75(m,1H),7.74(dt,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.49(t,J＝7.7Hz,1H),7.40(s,1H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),6.76(d,J＝2.2Hz,1H),4.04–3.96(m,1H),3.23–3.15(m,2H),3.11–2.95(m,2H),2.34(s,3H),2.33(dd,J＝14.6.7.23Hz,1H),2.21(dd,J＝14.6,6.8Hz,1H),1.16(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.2,168.1,166.2,148.0,142.5,138.1,134.9,133.0,131.9,129.3,128.7,127.7,126.6,126.1,124.0,102.2,53.7,50.1,39.5,38.8,38.4,28.4,21.0。
实施例44-PKS21291的合成
Figure BDA0001653910460000672
按照HATU介导2-氟-苯甲酸(4.6mg，33μmol)和PKS21183(15.0mg，30μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(13.9mg，91％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.22–8.13(m,1H),7.95(t,J＝5.7Hz,1H),7.78(br,1H),7.68–7.60(m,3H),7.57–7.47(m,1H),7.38(s,1H),7.35–7.23(m,4H),4.03–3.92(m,1H),3.24–3.08(m,2H),3.08–2.92(m,2H),2.35(s,3H),2.31(dd,J＝14.6,7.1Hz,1H),2.19(dd,J＝14.6,6.8Hz,1H),1.15(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.1,168.1,163.7,159.1(d,J＝249.0Hz),142.5,138.1,132.4(d,J＝8.8Hz),130.2,129.2,126.6,124.4(d,J＝2.5Hz),123.9(d,J＝14.5Hz),116.1(d,J＝21.8Hz),53.7,50.1,39.4,38.7,38.2,28.4,20.9；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–116.5(m)。
实施例45-PKS21295的合成
Figure BDA0001653910460000681
按照HATU介导3-(2-氧代咪唑烷-1-基)苯甲酸(6.80mg，33μmol)和PKS21183(15.0mg，30μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(14.1mg，82％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.29(t,J＝5.6Hz,1H),7.99(t,J＝5.7Hz,1H),7.86–7.80(m,2H),7.79(br,1H),7.64(d,J＝8.2Hz,2H),7.45–7.39(m,2H),7.37(t,J＝7.8Hz,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(s,1H),3.99(t,J＝6.9Hz,1H),3.91–3.84(m,2H),3.45–3.39(m,2H),3.20–3.12(m,2H),3.08–2.92(m,2H),2.38–2.28(m,1H),2.33(s,3H),2.20(dd,J＝14.5,6.9Hz,1H),1.16(s,9H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.2,168.1,166.4,158.9,142.5,140.8,138.1,135.0,129.2,128.4,126.6,120.0,119.7,115.6,53.7,50.1,44.5,39.5,38.8,38.4,36.5,28.4,20.9。
实施例46-PKS21315的合成
Figure BDA0001653910460000691
按照HATU介导1H-吲哚-2-羧酸(4.83mg，30.00μmol)和PKS21183(15.0mg，30μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(9.9mg，63％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.58(d,J＝2.2Hz,1H),8.36(t,J＝5.7Hz,1H),8.02(t,J＝5.8Hz,1H),7.81(br,1H),7.65(d,J＝8.0Hz,2H),7.59(d,J＝7.9Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),7.17(t,J＝7.6Hz,1H),7.08(d,J＝1.9Hz,1H),7.03(t,J＝7.4Hz,1H),4.04–3.96(m,1H),3.22–3.15(m,2H),3.09–2.93(m,2H),2.38–2.29(m,4H),2.22(dd,J＝14.5,6.8Hz,1H),1.18(s,9H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.2,168.1,161.1,142.5,138.1,136.4,131.7,129.2,127.1,126.6,123.2,121.4,119.7,112.3,102.4,53.8,50.1,39.5,38.5,38.2,28.4,21.0。
实施例47-PKS21242的合成
Figure BDA0001653910460000692
按照HATU介导3-(4-氟苯基)丙酸(223.7mg，1.33mmol)和N-叔丁基-L-天冬酰胺苄基酯(TFA盐；521.9mg，1.33mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(515.0mg，90％)。产物是纯的(通过NMR)并且不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ7.37–7.28(m,5H),7.18–7.09(m,2H),6.98–6.90(m,2H),6.88(d,J＝8.1Hz,1H),5.28(s,1H),5.20(d,J＝12.3Hz,1H),5.14(d,J＝12.3Hz,1H),4.84–4.76(m,1H),2.92(t,J＝7.9Hz,2H),2.80(dd,J＝15.8,3.8Hz,1H),2.56–2.44(m,3H),1.27(s,9H)。
实施例48-PKS21243的合成
Figure BDA0001653910460000701
按照PKS21242(515.0mg，1.20mmol)的O-脱苄基化的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过硅藻土过滤混合物。蒸发滤液并干燥，得到呈白色固体的产物(405.0mg，定量)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.50(s,1H),8.04(d,J＝7.8Hz,1H),7.42(s,1H),7.27–7.16(m,2H),7.10–7.01(m,2H),4.52–4.41(m,1H),2.78(t,J＝7.7Hz,2H),2.49–2.44(m,1H),2.42–2.34(m,3H),1.22(s,9H)。
实施例49-PKS21246的合成
Figure BDA0001653910460000702
按照HATU介导PKS21243(310.0mg，0.916mmol)和N-Boc-乙二胺(146.8mg，0.916mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，加入水。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物((393.0mg，89％)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(t,J＝5.9Hz,1H),7.35(s,1H),7.27–7.18(m,2H),7.11–7.02(m,2H),6.75(t,J＝5.7Hz,1H),4.51–4.39(m,1H),3.13–2.90(m,4H),2.78(t,J＝7.8Hz,2H),2.43–2.36(m,3H),2.29(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),1.37(s,9H),1.21(s,9H)。
实施例50-PKS21249的合成
Figure BDA0001653910460000711
按照PKS21246(390.0mg，0.812mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。在真空下干燥分离的粗产物并用乙醚研磨。倒出乙醚并干燥白色固体得到产物(400mg，定量)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.08–8.03(m,2H),7.76(br,3H),7.56(s,1H),7.26–7.17(m,2H),7.10–7.02(m,2H),4.50–4.38(m,1H),3.40–3.30(m,1H),3.28–3.16(m,1H),2.92–2.81(m,2H),2.78(t,J＝7.9Hz,2H),2.47–2.31(m,4H),1.22(s,9H)。
实施例51-PKS21254的合成
Figure BDA0001653910460000712
按照HATU介导吡啶甲酸(6.2mg，51μmol)和PKS21249(25.0mg，51μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈乳白色固体的产物(19.5mg，79％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.90(t,J＝6.1Hz,1H),8.62(d,J＝4.5Hz,1H),8.02(d,J＝7.8Hz,1H),8.00–7.90(m,3H),7.63–7.54(m,1H),7.34(s,1H),7.26–7.16(m,2H),7.13–7.01(m,2H),4.54–4.43(m,1H),3.41–3.34(m,2H),3.29–3.15(m,2H),2.76(t,J＝7.9Hz,2H),2.45–2.32(m,3H),2.28(dd,J＝14.5,8.0Hz,1H),1.19(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,171.0,168.8,164.2,160.6(d,J＝240.0Hz),149.9,148.3,137.7,137.4(d,J＝2.7Hz),129.9(d,J＝8.7Hz),126.5,121.9,114.9(d,J＝21.0Hz),50.1,50.0,38.8,38.7,38.6,36.9,30.1,28.4。C25H32FN5O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：508.2336。实测值：508.2324。
实施例52-PKS21255的合成
Figure BDA0001653910460000721
按照HATU介导2-氟苯甲酸(7.1mg，51μmol)和PKS21249(25.0mg，51μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(20.8mg，82％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.27(t,J＝5.8Hz,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.95–7.90(m,1H),7.65(t,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.46(m,1H),7.36(s,1H),7.30–7.23(m,2H),7.23–7.17(m,2H),7.10–7.03(m,2H),4.52–4.41(m,1H),3.32–3.28(m,2H),3.27–3.13(m,2H),2.76(t,J＝7.9Hz,2H),2.46–2.35(m,3H),2.29(dd,J＝14.8,7.8Hz,1H),1.22–1.13(m,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.1,168.8,163.9,160.6(d,J＝240.3Hz),159.1(d,J＝249.3Hz),137.4,132.4(d,J＝9.0Hz),130.2(d,J＝1.6Hz),129.9,124.4(d,J＝2.7Hz),123.9(d,J＝14.4Hz),116.1(d,J＝23.4Hz),114.9(d,J＝21.4Hz),50.1,50.0,38.9,38.6,38.5,36.9,30.1,28.4；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–116.5(m),–119.8(m)。C26H32F2N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：521.2289。实测值：521.2311。
实施例53-PKS21258的合成
Figure BDA0001653910460000731
按照HATU介导喹啉-8-羧酸(8.8mg，51μmol)和PKS21249(25.0mg，51μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(18.8mg，69％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.91(t,J＝5.7Hz,1H),9.07(dd,J＝4.3,2.1Hz,1H),8.59–8.50(m,2H),8.19(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),8.01(t,J＝6.0Hz,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.76–7.71(m,1H),7.69–7.65(m,1H),7.32(s,1H),7.22–7.14(m,2H),7.09–7.01(m,2H),4.59–4.45(m,1H),3.55–3.46(m,2H),3.33–3.23(m,2H),2.74(t,J＝8.0Hz,2H),2.42(dd,J＝14.4,5.2Hz,1H),2.37(t,J＝7.7Hz,2H),2.29(dd,J＝14.4,8.3Hz,1H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.0,168.8,165.4,160.6(d,J＝241.1Hz),150.4,144.7,137.9,137.4,132.4,132.1,129.9(d,J＝8.2Hz),129.2,128.2,126.3,121.5,114.9(d,J＝20.1Hz),50.1,50.0,38.9,38.8,38.7,36.9,30.1,28.4.19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–119.8(m)。C29H34FN5O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：558.2493。实测值：558.2484。
实施例54-PKS21259的合成
Figure BDA0001653910460000741
按照HATU介导4-氟萘-1-羧酸(9.6mg，51μmol)和PKS21249(25.0mg，51μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物得到呈白色固体的产物(22.4mg，80％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50(t,J＝5.7Hz,1H),8.34–8.27(m,1H),8.12–8.06(m,1H),8.04–7.97(m,2H),7.71–7.62(m,3H),7.41–7.31(m,2H),7.21–7.13(m,2H),7.09–7.00(m,2H),4.55–4.45(m,1H),3.44–3.36(m,2H),3.33–3.19(m,2H),2.74(t,J＝7.9Hz,2H),2.44(dd,J＝14.7,6.1Hz,1H),2.40–2.34(m,2H),2.31(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),1.17(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.3,171.1,168.9,168.0,160.6(d,J＝241.5Hz),158.6(d,J＝252.5Hz),137.4,131.5(d,J＝4.7Hz),131.2(d,J＝3.3Hz),129.9(d,J＝7.3Hz),127.9,127.0,126.0(d,J＝9.1Hz),125.8,122.8(d,J＝16.3Hz),120.0(d,J＝5.5Hz),114.9(d,J＝20.5Hz),108.7(d,J＝19.9Hz),50.2,50.0,38.9,38.7,38.6,36.9,30.1,28.4；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–119.8(m),–122.6(m)。C30H34F2N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：575.2446。实测值：575.2437。
实施例55-PKS21263的合成
Figure BDA0001653910460000742
按照HATU介导Boc-Asp-OBn(64.7mg，0.20mmol)和1-(三氟甲基)环丙胺(25.8mg，0.20mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后(2小时)，添加水并在室温下搅拌30分钟。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(75mg，87％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ7.40–7.28(m,5H),6.19–6.07(m,1H),5.79–5.61(m,1H),5.19(d,J＝12.3Hz,1H),5.15(d,J＝12.3Hz,1H),4.65–4.46(m,1H),2.91–2.81(m,1H),2.72(dd,J＝15.5,3.9Hz,1H),1.42(s,9H),1.32–1.25(m,2H),1.07–1.00(m,2H).
实施例56-PKS21264的合成
Figure BDA0001653910460000751
按照PKS21263(70.0mg，0.163mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用己烷研磨。倒出己烷并在真空下干燥无色胶状物得到产物(72mg，定量)。产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.00(s,1H),8.39(br,3H),7.42–7.32(m,5H),5.23–5.13(m,2H),4.45–4.30(m,1H),2.80–2.74(m,2H),1.29–1.17(m,2H),1.01–0.86(m,2H)。
实施例57-PKS21267的合成
Figure BDA0001653910460000752
按照HATU介导3-(4-氟苯基)丙酸(26.9mg，0.160mmol)和PKS21264(71.1mg，0.160mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水并在室温下搅拌混合物30分钟。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(70mg，91％)。1HNMR(500MHz,氯仿-d)δ7.41–7.27(m,5H),7.17–7.08(m,2H),6.99–6.87(m,2H),6.70(d,J＝7.8Hz,1H),6.12(s,1H),5.21–5.08(m,2H),4.96–4.75(m,1H),2.95–2.82(m,3H),2.69–2.60(m,1H),2.57–2.42(m,2H),1.33–1.21(m,2H),1.05–0.91(m,2H)。
实施例58-PKS21269的合成
Figure BDA0001653910460000761
按照PKS21267(65.0mg，0.135mmol)的O-脱苄基化的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过硅藻土过滤混合物。蒸发滤液并干燥，得到呈白色固体的产物(52.8mg，定量)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.60(br,1H),8.78–8.64(m,1H),8.14–8.02(m,1H),7.29–7.16(m,2H),7.11–6.99(m,2H),4.57–4.38(m,1H),2.77(t,J＝7.8Hz,2H),2.54(dd,J＝15.3,5.9Hz,1H),2.45–2.33(m,3H),1.25–1.12(m,2H),1.03–0.88(m,2H)。
实施例59-PKS21273的合成
Figure BDA0001653910460000762
按照HATU介导PKS21269(52.8mg，0.135mmol)和N-Boc-乙二胺(23.8mg，0.149mmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水并在室温下搅拌混合物30分钟。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(70mg，97％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.01(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(t,J＝5.6Hz,1H),7.29–7.20(m,2H),7.13–7.04(m,2H),6.78(t,1H),4.59–4.45(m,1H),3.15–2.90(m,4H),2.79(t,J＝7.8Hz,2H),2.56–2.48(m,1H),2.45–2.36(m,2H),2.32(dd,J＝15.2,7.7Hz,1H),1.39(s,9H),1.24–1.16(m,2H),1.02–0.93(m,2H)。
实施例60-PKS21275的合成
Figure BDA0001653910460000771
按照PKS21273(65.0mg，0.122mmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后(1.5小时)，蒸发过量三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体得到产物(62.3mg，93％)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.10(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(t,J＝6.0Hz,1H),7.70(br,3H),7.27–7.16(m,2H),7.14–7.01(m,2H),4.55–4.42(m,1H),3.36–3.27(m,1H),3.27–3.18(m,1H),2.88–2.80(m,2H),2.78(t,J＝8.0Hz,2H),2.57–2.51(m,1H),2.44–2.32(m,3H),1.24–1.14(m,2H),1.01–0.89(m,2H)。
实施例61-PKS21278的合成
Figure BDA0001653910460000781
按照HATU介导3-苯基苯甲酸(5.5mg，28μmol)和PKS21275(13.7mg，25μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。通过制备LCMS纯化混合物，得到呈白色固体的产物(12.3mg，80％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61(s,1H),8.58(t,J＝5.6Hz,1H),8.15–8.10(m,1H),8.04(d,J＝8.1Hz,1H),7.98(t,J＝5.7Hz,1H),7.86–7.79(m,2H),7.72(d,J＝7.6Hz,2H),7.54(t,J＝7.7Hz,1H),7.48(t,J＝7.6Hz,2H),7.39(t,J＝7.4Hz,1H),7.18(dd,J＝8.5,5.6Hz,2H),7.09–7.02(m,2H),4.57–4.50(m,1H),3.30–3.15(m,4H),2.74(t,J＝7.9Hz,2H),2.55–2.50(m,1H),2.43–2.34(m,2H),2.31(dd,J＝16.4,8.8Hz,1H),1.19–1.13(m,2H),0.94(d,J＝6.3Hz,2H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.9,170.4,166.4,160.6(d,J＝241.5Hz),140.2,139.5,137.4,135.1,129.9(d,J＝8.5Hz),129.3,129.0,129.0,127.8,126.8,126.4,125.4(q,J＝275.9Hz),125.4,114.9(d,J＝20.1Hz),49.8,38.9,38.7,37.8,36.9,31.8(q,J＝36.8Hz),30.0,11.0,10.9；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-74.3(s),–119.8(m)。C32H32F4N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：635.2257。实测值：635.2267。
实施例62-PKS21279的合成
Figure BDA0001653910460000782
按照HATU介导2-氟-5-(2-氟苯基)苯甲酸(6.4mg，28μmol)和PKS21275(13.7mg，25μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。通过制备LCMS纯化混合物，得到呈白色固体的产物(13.2mg，81％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),8.43–8.33(m,1H),8.02(d,J＝8.1Hz,1H),7.94(t,J＝5.7Hz,1H),7.79(dd,J＝6.8,2.4Hz,1H),7.72–7.66(m,1H),7.56(td,J＝7.9,1.9Hz,1H),7.48–7.36(m,2H),7.35–7.27(m,2H),7.18(dd,J＝8.5,5.6Hz,2H),7.08–7.01(m,2H),4.56–4.46(m,1H),3.47–3.26(m,2H),3.26–3.11(m,2H),2.73(t,J＝7.8Hz,2H),2.55–2.50(m,1H),2.41–2.25(m,3H),1.19–1.10(m,2H),0.96–0.88(m,2H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,170.9,170.3,163.6,160.6(d,J＝241.6Hz),159.8(d,J＝246.4Hz),158.8(d,J＝251.4Hz),137.4,132.7(d,J＝6.0Hz),131.3,130.8,130.4,130.0(d,J＝8.8Hz),129.9(d,J＝7.2Hz),126.6(d,J＝14.4Hz),125.4(q,J＝275.8Hz),125.3–124.9(m),124.2(d,J＝14.6Hz),116.5(d,J＝22.1Hz),116.2(d,J＝21.9Hz),114.9(d,J＝21.6Hz),49.8,38.9,38.5,37.7,36.8,31.7(q,J＝37.1Hz),30.0,11.0,10.9；19FNMR(471MHz,DMSO-d6)δ-74.4(s),–117.8(m),–119.8(m),–120.8(m)。C32H30F6N4O4Na[M+Na]+的HRMS计算值：671.2069。实测值：671.2053。
实施例63-PKS21270的合成
Figure BDA0001653910460000791
按照HATU介导2-氟-5-(2-氟苯基)苯甲酸(117.10mg，500μmol)和N-boc-乙二胺(88.12mg，550μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，添加水并在室温下搅拌混合物30分钟。过滤形成的白色沉淀，用水洗涤并风干得到呈白色固体的产物(160.0mg，85％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.22(d,J＝7.3Hz,1H),7.69–7.62(m,1H),7.48–7.40(m,1H),7.36–7.29(m,1H),7.25–7.10(m,4H),4.96(br,1H),3.64–3.58(m,2H),3.43–3.37(m,2H),1.42(s,9H)。
实施例64-PKS21274的合成
Figure BDA0001653910460000801
按照PKS21270(150.0mg，399μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨，得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体以得到产物(155mg，定量)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.61–8.50(m,1H),8.04–7.76(m,4H),7.76–7.67(m,1H),7.61–7.51(m,1H),7.49–7.39(m,2H),7.38–7.30(m,2H),3.59–3.46(m,2H),3.07–2.93(m,2H)。
实施例65-PKS21277的合成
Figure BDA0001653910460000802
按照HATU介导(2S)-2-(叔丁氧羰基)-4-(-叔丁氨基)-4-氧代-丁酸(28.8mg，100μmol)和PKS21274(39.0mg，100μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物，得到呈白色固体的产物(43.0mg，79％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.44–8.33(m,1H),7.98(t,J＝5.6Hz,1H),7.83–7.75(m,1H),7.74–7.67(m,1H),7.60–7.52(m,1H),7.48–7.42(m,1H),7.42–7.29(m,4H),6.74(d,J＝8.2Hz,1H),4.24–4.13(m,1H),3.40–3.24(m,3H),3.24–3.15(m,1H),2.38(dd,J＝14.3,5.4Hz,1H),2.30(dd,J＝14.3,8.4Hz,1H),1.34(s,9H),1.19(s,9H)。C28H36F2N4O5Na[M+Na]+的HRMS计算值：569.2551。实测值：569.2564。
实施例66-PKS21284的合成
Figure BDA0001653910460000811
按照PKS21277(21.0mg，38μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。通过制备LCMS纯化混合粗产物，得到呈无色胶状物的产物(19.0mg，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.49(t,J＝5.2Hz,1H),8.46–8.41(m,1H),8.10(d,J＝4.8Hz,3H),7.82–7.78(m,2H),7.73–7.69(m,1H),7.59–7.54(m,1H),7.49–7.39(m,2H),7.36–7.30(m,2H),4.00–3.94(m,1H),3.43–3.29(m,3H),3.29–3.19(m,1H),2.65(dd,J＝16.5,5.1Hz,1H),2.55(dd,J＝16.5,7.8Hz,1H),1.22(s,9H)。
实施例67-PKS21293的合成
Figure BDA0001653910460000812
在0℃下向PKS21284(10.7mg，19μmol)于二氯甲烷(1.00mL)中的溶液，添加三乙胺(5.77mg，57.00μmol，7.90μL)。将溶液升温至室温(15分钟内)，并一次性添加环丙烷磺酰氯(5.3mg，38μmol)。在室温下搅拌混合物过夜。反应完成后，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(9.2mg，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.40–8.35(m,1H),8.12(t,J＝5.6Hz,1H),7.80–7.76(m,1H),7.72–7.67(m,1H),7.57(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.49–7.37(m,3H),7.36–7.29(m,3H),4.14–4.03(m,1H),3.42–3.25(m,3H),3.25–3.16(m,1H),2.49–2.42(m,2H),2.37(dd,J＝14.8,7.4Hz,1H),1.19(s,9H),0.89–0.78(m,4H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.2,168.4,163.5,159.0(d,J＝247.3Hz),158.8(d,J＝251.1Hz),132.9–132.5(m),131.3(d,J＝2.6Hz),130.8,130.3,130.0(d,J＝7.4Hz),126.6(d,J＝12.8Hz),125.1(d,J＝2.9Hz),124.2(d,J＝14.6Hz),116.5(d,J＝22.9Hz),116.2(d,J＝22.1Hz),53.8,50.1,39.8,39.0,38.4,30.2,28.4,5.0,4.8.19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),–120.8(m).
实施例68-PKS21294的合成
Figure BDA0001653910460000821
在0℃下将Hunig碱(8.7mg，67μmol，11.7μL)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(1.4mg，11μmol)添加到PKS21284(12.5mg，22μmol)于二氯甲烷(1.00mL)中的溶液中。搅拌溶液5分钟，并添加乙酸酐(2.7mg，26.8μmol，2.5μL)。在0℃下搅拌反应混合物1小时。反应完成后，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(7.1mg，65％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.43–8.33(m,1H),7.98(t,J＝5.7Hz,1H),7.95(d,J＝8.1Hz,1H),7.81–7.77(m,1H),7.72–7.67(m,1H),7.57(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.48–7.42(m,1H),7.39(dd,J＝10.2,8.6Hz,1H),7.36–7.30(m,3H),4.50–4.39(m,1H),3.41–3.28(m,2H),3.28–3.12(m,2H),2.42(dd,J＝14.5,5.8Hz,1H),2.29(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),1.80(s,3H),1.18(s,9H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.4,169.0,168.9,163.6,159.0(d,J＝246.9Hz),158.8(d,J＝252.6Hz),132.8–132.5(m),131.4–131.2(m),130.8,130.3,130.0(d,J＝7.5Hz),126.6(d,J＝12.8Hz),125.0(d,J＝2.5Hz),124.2(d,J＝14.5Hz),116.5(d,J＝22.1Hz),116.2(d,J＝21.9Hz),50.2,50.0,39.0,38.7,38.5,28.4,22.6；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.9(m),–120.8(m)。
实施例69-PKS21276的合成
Figure BDA0001653910460000831
按照HATU介导Boc-甘氨酸(19.3mg，110μmol)和PKS21274(39.0mg，100μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物，得到呈无色固体的产物(38.0mg，88％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.23–8.16(m,1H),7.69–7.62(m,1H),7.47–7.40(m,1H),7.37–7.31(m,1H),7.26–7.11(m,4H),6.89(t,J＝5.7Hz,1H),5.16(br,1H),3.80(d,J＝4.2Hz,2H),3.67–3.61(m,2H),3.57–3.51(m,2H),1.41(s,9H)。
实施例70-PKS21285的合成
Figure BDA0001653910460000832
按照PKS21276(32.0mg，74μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物得到产物(33mg，定量)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.52–8.43(m,2H),8.09–7.98(m,3H),7.82–7.77(m,1H),7.74–7.68(m,1H),7.57(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),7.37–7.30(m,2H),3.56–3.49(m,2H),3.41–3.34(m,2H),3.34–3.28(m,2H)。
实施例71-PKS21289的合成
Figure BDA0001653910460000841
按照PKS21285(16.00mg，35.77μmol)与4-甲基苯磺酰氯(13.6mg，72μmol)制备磺酰胺的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(14.8mg，85％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.43–8.34(m,1H),8.02(t,J＝5.8Hz,1H),7.86(s,1H),7.80–7.74(m,1H),7.73–7.69(m,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.57(td,J＝7.9,1.9Hz,1H),7.49–7.41(m,1H),7.44–7.28(m,5H),3.43–3.31(m,2H),3.31–3.23(m,2H),3.23–3.15(m,2H),2.37(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ167.8,163.5,159.0(d,J＝246.9Hz),158.8(d,J＝251.2Hz),142.8,137.1,132.7(d,J＝8.7Hz),131.3,130.8,130.3,130.0(d,J＝8.5Hz),129.5,126.7,126.6–126.5(m),125.1,124.2(d,J＝14.6Hz),116.5(d,J＝22.4Hz),116.2(d,J＝22.1Hz),45.3,39.0,38.2,21.0；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.9(m),–120.9(m)。
实施例72-PKS21280的合成
Figure BDA0001653910460000842
在0℃下将三乙胺(75.8mg，749μmol，104μL)添加到PKS21274(39.0mg，100μmol)于二氯甲烷(3.00mL)中的溶液中。搅拌混合物10分钟并添加Boc-Ala-OSu(31.5mg，110μmol)。使反应混合物缓慢升温至室温。反应完成后(2小时)，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(36.3mg，81％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(t,J＝5.5Hz,1H),7.92(t,J＝5.5Hz,1H),7.78(dd,J＝7.2,2.4Hz,1H),7.73–7.66(m,1H),7.59–7.53(m,1H),7.48–7.42(m,1H),7.40(dd,J＝10.3,8.5Hz,1H),7.36–7.30(m,2H),6.84(d,J＝7.4Hz,1H),3.96–3.74(m,1H),3.46–3.13(m,4H),1.34(s,9H),1.15(d,J＝7.2Hz,3H)。
实施例73-PKS21286的合成
Figure BDA0001653910460000851
按照PKS21280(30.0mg，67μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物得到产物(31.0mg，定量)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.50(t,J＝5.9Hz,1H),8.45(t,J＝5.1Hz,1H),8.20–7.99(m,3H),7.78(dd,J＝6.8,2.3Hz,1H),7.74–7.67(m,1H),7.60–7.52(m,1H),7.49–7.38(m,2H),7.37–7.29(m,2H),3.84–3.71(m,1H),3.46–3.30(m,3H),3.30–3.14(m,1H),1.34(d,J＝7.0Hz,3H)。
实施例74-PKS21290的合成
Figure BDA0001653910460000852
按照PKS21286(16.0mg，35μmol)与4-甲基苯磺酰氯(9.9mg，52μmol)制备磺酰胺的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(12.4mg，71％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36–8.30(m,1H),7.99(t,J＝5.7Hz,1H),7.89(br,1H),7.78–7.75(m,1H),7.72–7.68(m,1H),7.65(d,J＝8.3Hz,2H),7.56(td,J＝7.9,1.9Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),7.37–7.29(m,4H),3.70–3.60(m,1H),3.27–3.01(m,4H),2.36(s,3H),1.03(d,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ171.5,163.4,159.0(d,J＝245.7Hz),158.8(d,J＝252.8Hz),142.6,138.1,132.7(d,J＝7.8Hz),131.3,130.8,130.3,130.0(d,J＝8.7Hz),129.4,126.6,126.6(d,J＝12.1Hz),125.1(d,J＝2.9Hz),124.2(d,J＝14.6Hz),116.5(d,J＝22.0Hz),116.2(d,J＝23.5Hz),52.0,38.9,38.1,21.0,18.8.19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),-120.9(m)。
实施例75-PKS21281的合成
Figure BDA0001653910460000861
按照HATU介导Boc-Asn-OH(23.2mg，100μmol)和PKS21274(39.0mg，100μmol)偶联的一般程序合成标题化合物。反应完成后，通过制备LCMS纯化混合物，得到呈白色固体的产物(43.6mg，89％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.36(t,J＝5.6Hz,1H),7.95(t,J＝5.6Hz,1H),7.79(dd,J＝7.1,2.5Hz,1H),7.70(ddt,J＝8.7,4.4,2.0Hz,1H),7.57(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.49–7.41(m,1H),7.40(dd,J＝10.3,8.6Hz,1H),7.38–7.28(m,2H),7.28–7.21(m,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),4.18(td,J＝8.0,5.3Hz,1H),3.37–3.22(m,3H),3.19(dq,J＝12.6,6.3Hz,1H),2.43(dd,J＝15.0,5.3Hz,1H),2.35(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),1.34(s,9H)。
实施例76-PKS21283的合成
Figure BDA0001653910460000871
按照PKS21281(30.0mg，61μmol)的Boc-去保护的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发过量的三氟乙酸和二氯甲烷。在真空下干燥粗产物并用乙醚研磨，得到白色固体。倒出乙醚并在真空下干燥白色固体以得到产物(30.8mg，定量)。该产物不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.54(t,J＝5.3Hz,1H),8.49–8.41(m,1H),8.11(d,J＝5.2Hz,3H),7.84–7.76(m,1H),7.74–7.69(m,1H),7.65(br,1H),7.57(td,J＝7.9,1.7Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),7.37–7.28(m,2H),7.23(br,1H),4.05–3.95(m,1H),3.43–3.29(m,3H),3.29–3.20(m,1H),2.70(dd,J＝16.8,4.6Hz,1H),2.58(dd,J＝16.8,8.3Hz,1H)。
实施例77-PKS21288的合成
Figure BDA0001653910460000872
按照PKS21283(15.1mg，30μmol)与4-甲基苯磺酰氯(11.4mg，60μmol)制备磺酰胺的一般程序合成标题化合物。反应完成后，蒸发二氯甲烷并通过制备LCMS纯化粗产物，得到呈白色固体的产物(13.6mg，83％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.33–8.24(m,1H),7.97(t,J＝5.8Hz,1H),7.85(br,1H),7.78(dd,J＝7.1,2.4Hz,1H),7.74–7.68(m,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,2H),7.57(td,J＝7.9,1.9Hz,1H),7.48–7.38(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.27(d,J＝2.3Hz,1H),6.84(d,J＝2.3Hz,1H),4.04–3.95(m,1H),3.25–3.09(m,2H),3.09–2.92(m,2H),2.39–2.30(m,4H),2.21(dd,J＝15.1,6.8Hz,1H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ170.7,170.1,163.4,159.0(d,J＝246.9Hz),158.8(d,J＝251.2Hz),142.5,138.1,132.7(d,J＝8.3Hz),131.3,130.8,130.3,130.0(d,J＝7.8Hz),129.2,126.7,126.6,125.3–124.9(m),124.1(d,J＝14.1Hz),116.6(d,J＝23.4Hz),116.2(d,J＝22.1Hz),53.4,38.8,38.2,38.2,21.0；19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ–117.8(m),–120.9(m)。
实施例78-针对人组成型和免疫蛋白酶体的IC50值的测定
使用96孔板测定法测定针对蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶β5活性的IC50。人组成型蛋白酶体和免疫蛋白酶体均购自Boston Biochem Inc.。将1μL于指定浓度的DMSO中的100x化合物点在孔的底部。使用DMSO作为对照。抑制剂的终浓度为100μM至0.098μM。在360nm激发波长、460nm发射波长下监测随时间推移每个孔中底物的水解90分钟。通过使用PRISM针对化合物浓度对水解速度进行拟合来估计IC50。对人蛋白酶体的IC50，浓度对于c-20S而言为0.25nM，对于i-20S而言为0.4nM。Suc-LLVY-AMC用于最终浓度为25μM的β5c，并且Ac-ANW-AMC用于最终浓度为15μM的b5i。SDS(0.02％)用作活化剂，并且0.01％BSA用于反应缓冲液中。
实施例79-针对恶性疟原虫的EC50值的测定
在含HEPES和次黄嘌呤以及0.5％Albumax II(Invitrogen)、0.25％碳酸氢钠和0.1mg/ml庆大霉素的RPMI 1640培养基中，在稀释至5％血细胞比容的人红血细胞(RBC)中保持恶性疟原虫的连续体外培养。将寄生虫在37℃下于5％氧气、5％二氧化碳和90％氮气的气体混合物中孵育。
使用SYBR Green(Invitrogen S1046)药物测定方案测定寄生虫对新型化合物的敏感性。在透明、无菌96孔板中将恶性疟原虫的各种临床株与在一系列稀释浓度下的化合物一起培养72小时。随后，将150μl培养物转移到黑色96孔板中并放入冰箱内进行红血细胞裂解。将板解冻并悬浮在Sybr Green裂解缓冲液中。使用GraphPad Prism分析通过实验室后面的超旧酶标仪收集的原始数据。将药物浓度转化为对数，经标准化，然后通过非线性回归进行曲线拟合以得到EC50值。结果示于表1和2中。
表1.所选化合物针对红血细胞中恶性疟原虫生长的EC50
Figure BDA0001653910460000891
1：P.f.：3D7，根据报告测定IC50(Heinberg等人，“Direct Evidence for theAdaptive Role of Copy Number Variation on Antifolate Susceptibility inPlasmodium Falciparum,”Mol.Microbiol.88:702-712(2013)，其据此通过引用整体并入)。
表2.PKS21004和PKS21003针对恶性疟原虫菌株的EC50
Figure BDA0001653910460000901
实施例80-细胞活力测定
使用多个骨髓瘤细胞系MM.1S(200,000个细胞/mL)和RPMI8226(200,000个细胞/mL)、B淋巴瘤细胞系Karpas1106P(800,000个细胞/mL)和肝癌细胞系HepG2(12,000个细胞/mL)测定化合物的细胞毒性。在37℃下在加湿空气/5％CO2气氛中在补充了10％胎牛血清(除用于Karpas-1106P细胞的培养基含20％胎牛血清外)和于RPMI 1640培养基中100单位/ml青霉素/100μg/ml链霉素的培养基中培养细胞。12,000个细胞/孔。将96孔板中涂铺的细胞在37℃下于具有5％CO2的组织培养箱中用指定浓度的化合物处理72小时。使用Cell-titer/gloTM测定试剂盒对活细胞计数。使用PRISM(Graphpad)计算EC50。结果示于表3中。
表3.PKS21221对细胞内蛋白酶体活性和细胞毒性的抑制
Figure BDA0001653910460000911
实施例81-抗疟测定的方案
在人红细胞中培养恶性疟原虫寄生虫。在96孔板中进行药物测定，总体积为200μl。测定设置在0.5％的起始寄生虫血症下(受感染红细胞的百分比)。按2778nM至0.4nM的浓度涂铺试验化合物。使试验板在37℃的标准低氧条件下生长72小时。此时将板准备进行生长测定，首先将板冷冻并解冻以裂解红血细胞，将150μl经裂解解冻的培养物转移到黑色96孔板中，并混入含SYBR green DNA染料的裂解缓冲液中。在激发波长490nm和发射波长530nm的酶标仪中记录每个孔的荧光值并相对于DMSO对照进行标准化。使用Prism软件测定EC50。
通过用50mM GlcNAc和20U/mL肝素处理3天来消除NF54peg4-tdTomato寄生虫的无性繁殖。然后使用标准培养技术保持NF54peg4-tdTomato寄生虫。同时根据Fivelman等人，“Improved Synchronous Production of Plasmodium Falciparum Gametocytes inVitro,”Mol.Biochem.Parasitol.154(1):119-123(2007)诱导配子体，所述文献据此通过引用整体并入。通过用50mM GlcNAc处理3天来消除无性繁殖。配子体杀伤测定设置在第5天和第10天以一式三份96孔形式，在1％血细胞比容和2％配子体血症下进行。化合物设置成一式三份且连续稀释3倍。另外，6份溶剂对照(DMSO)均匀分布在板上。孵育72小时后，在37C下用16nM Hoechst 33342和50nM DilC1(5)将III-IV期(第5-7天)和IV-V期(第10-12天)培养物(在第5天和第10天下午开始孵育，在第8天和第13天下午将板取出进行测定)染色30分钟。使用Cytek DxP12流式细胞仪，通过对DNA+、高疟原虫色素细胞的门控来测定配子体血症，并且基于2000-3000个配子体的DilC1(5)的线粒体膜电位依赖性积聚来推断配子体活力(Tanaka等人，“Potent Plasmodium Falciparum Gametocytocidal Activity ofDiaminonaphthoquinones,Lead Antimalarial Chemotypes Identified in anAntimalarial Compound Screen,”Antimicrob.Agents Chemother.2015,59:1389(2015)，所述文献据此通过引用整体并入)。将平均DilC1(5)信号标准化为溶剂对照和总体最小值并用于计算EC50(图3和表4)。
表4.化合物针对恶性疟原虫配子体的EC50
化合物ID EC<sub>50</sub>
PKS21004 50nM
PKS21224 162nM
PKS21287 206nM
图4A显示用指定浓度的抑制剂(BTZ：硼替佐米)处理4小时后恶性疟原虫裂殖体中的多聚泛素化蛋白积聚。图4B显示AsnEDA特异性抑制Pf20S的β5活性亚基。将Pf裂解物与指定浓度的抑制剂孵育1小时，然后再与MV151(2μM)一起孵育1小时。在Typhoon荧光扫描仪上扫描SDS page。上部：PKS21004抑制Pf20Sβ5的标记，而PKS21003不抑制。BTZ用作阳性对照。中部和底部：PKS21004和PKS21287剂量依赖性地抑制Pf20Sβ5的标记。图4C显示PKS21004对孢子期伯氏疟原虫的剂量依赖性杀伤(P/T：用PKS21004在冰上预处理孢子体30分钟，并且以10x培养基体积添加到HepG2细胞中并在4小时后更换培养基(三角形)。在6小时(正方形)和14小时(圆形)之后更换与HepG2和培养基一起孵育的PKS21004和孢子体。EC50分别为157nM、41nM和21nM。
实施例82-结果和讨论
为了通过蛋白酶体抑制来调节免疫反应，对免疫细胞具有较小的基于机制的毒性而对其它细胞具有很小或没有毒性，选择性地抑制i-20S，保留c-20S将会是有用的。与这一观点一致，而与破坏编码c-20S亚基的基因不同，破坏编码β1i、β2i和β5i的基因产生健康、可育和有免疫活性的小鼠(Kincaid等人，“Mice Completely Lacking ImmunoproteasomesShow Major Changes in Antigen Presentation,”Nat.Immunol.13:129–135(2012)，其据此通过引用整体并入)。的确，化合物ONX-0914对β5i超过β5c的相对选择性抑制在几种自身免疫性疾病的小鼠模型中已经有效(Kalim等人，“Immunoproteasome SubunitLMP7Deficiency and Inhibition Suppresses Th1and Th17but Enhances Regulatory TCell Differentiation,”J.Immunol.189:4182–4193(2012)；Basler等人，“Inhibition ofthe Immunoproteasome Ameliorates Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,”EMBO Mol Med 6:226-238(2014)；Basler等人，“Prevention of Experimental Colitisby a Selective Inhibitor of the Immunoproteasome,”J.Immunol.185:634-641(2010)；Muchamuel等人，“A Selective Inhibitor of the Immunoproteasome SubunitLMP7Blocks Cytokine Production and Attenuates Progression of ExperimentalArthritis,”Nat.Med.15:781-787(2009)；Ichikawa等人，“Beneficial Effect of NovelProteasome Inhibitors in Murine Lupus via Dual Inhibition of Type IInterferon and Autoantibody-Secreting Cells,”Arthritis Rheum,64:493–503(2012)，所述文献据此通过引用整体并入)。然而，ONX-0914属于肽环氧酮类抑制剂，其不可逆性机制涉及募集活性位点Thr1N的羟基和氨基与环氧酮弹头形成吗啉加合物(Groll等人，“Crystal Structure of Epoxomicin:20S Proteasome Reveals a Molecular Basis forSelectivity of α‘,β‘-Epoxyketone Proteasome Inhibitors,”J.Am.Chem.Soc.122:1237–1238(2000)，所述文献据此通过引用整体并入)。长期使用不可逆性抑制剂呈现出来自c-20S和未知靶点的逐渐、累积性抑制的毒性风险。因此，希望开发对i-20S具有更高选择性并且可逆的抑制剂。非竞争性作用模式可能会产生额外益处，使得基质的逐渐积聚不会降低抑制程度。本申请报道了非竞争性和选择性抑制胰凝乳蛋白酶β5i超过β5c的一类新型非共价化合物的偶然发现。
最近报道了选择性抑制结核分枝杆菌蛋白酶体超过人c-20S的一类新型的N,C封端的二肽(Lin等人，“Inhibitors Selective for Mycobacterial Versus HumanProteasomes,”Nature 461(7264):621–626(2009)，所述文献据此通过引用整体并入)。后来发现，这类抑制剂也选择性抑制i-20S超过c-20S(Fan等人，“OxathiazolonesSelectively Inhibit the Human Immunoproteasome over the ConstitutiveProteasome,”ACS Med.Chem.Lett.5:405–410(2014)，所述文献据此通过引用整体并入)，反映了分枝杆菌和人c-20S蛋白酶体共享扩大的S1口袋和优选的寡肽底物(Lin等人，“Distinct Specificities of Mycobacterium Tuberculosis and MammalianProteasomes for N-Acetyl Tripeptide Substrates,”J.Biol.Chem.283:34423-34431(2008)；Blackburn等人，“Characterization of a New Series of Non-CovalentProteasome Inhibitors with Exquisite Potency and Selectivity for the 20S β5-Subunit,”Biochem.J.430:461–476(2010)，所述文献据此通过引用整体并入)。通过向对i-20S具有超过c-20S的显著选择性的N,C-封端二肽中并入β-氨基酸开发了一类新型的N,C-封端二肽模拟物(Singh等人，“Immunoproteasomeβ5i-Selective DipeptidomimeticInhibitors,”Chem.Med.Chem.11(19):2127-2131(2016)，所述文献据此通过引用整体并入)。因此，在分枝杆菌20S抑制剂中发现的一些特征被用于合理设计i-20S选择性抑制剂。选择的N,C封端二肽中的酰胺键被生物电子等排体系统性替换。倒转C-帽上的酰胺键并用芳族羧酸置换氨基酸产生新的化学型：Asn-乙二胺(AsnEDA)。这一类的第一种化合物PKS3080对人β5i和β5c产生分别为0.37和1.22μM的适度IC50。用2-萘甲酰基置换1-萘甲酰基(生成PKS21025)使得对β5i的效力提高3倍，选择性增加到26倍。
接下来，改变N-帽、C-帽、乙烯和Asn侧链取代。用[1,1'-联苯基]-4-羧酰胺(PKS21003)和[1,1'-联苯基]-3-羧酰胺(PKS21004)置换N-帽极大地影响活性。PKS21003对β5i或β5c都没有可测活性(两者的IC50>100μM)，而PKS21004是β5i和β5c两者的有效抑制剂，其IC50分别为0.058和0.326μM。对β5亚基的抑制是特异性的，因为在i-20S或c-20S中没有观察到抑制β1或β2活性(表5)。
表5.化合物对人免疫蛋白酶体β5i和组成型蛋白酶体β5c亚基的IC50
Figure BDA0001653910460000951
Figure BDA0001653910460000961
Figure BDA0001653910460000971
Figure BDA0001653910460000981
Figure BDA0001653910460000991
Figure BDA0001653910460001001
Figure BDA0001653910460001011
使用冲洗实验(washout experiment)来确认这类蛋白酶体抑制剂的可逆性，如其非共价化学所预期的那样。透析预先孵育的c-20S和PKS21004混合物，使β5c活性完全恢复(图1A)。动力学分析表明PKS21004是β5i和β5c(分别就其底物而言)的非竞争性抑制剂。随着PKS21004浓度的增加，在β5c抑制的情况下Vmax减小而KM保持不变，并且在β5i抑制的情况下Vmax和KM均减小(图1B-E)，表明PKS21004对β5i和β5c的抑制是非竞争性混合型的，αc-20S≈0.57并且αi-20S≈0.28，表明PKS21004与β5c和β5i结合分别在有底物结合时比无底物更紧密。Vmax/KM随PKS21004浓度增加而减小也表明，PKS21004不是任一20S的非竞争性抑制剂(Copeland R.A.,Evaluation of Enzyme Inhibitors in Drug Discovery:A Guide forMedicinal Chemists and Pharmacologists,2nd Ed.,John Wiley&Sons,Inc.,Hoboken,N.J.,pp.1-538(2013)，所述文献据此通过引用整体并入)。
这些AsnEDA的上述特征促进了基于在PKS21004基础上改变乙二胺上的羧酸、Asn上的N-帽和Asn侧链的另一轮的SAR研究(表5)。表5中列出的所有化合物如实施例6-77中所述合成。所有最终化合物均通过NMR和HRMS确认。按照报道的方法测定所有化合物对β5i和β5c(表5)、β1i、β2i、β1c和β2c的IC50(Lin等人，“N,C-Capped Dipeptides WithSelectivity for Mycobacterial Proteasome Over Human Proteasomes:Role of S3andS1Binding Pockets,”J Am Chem Soc.135:9968-9971(2013)，其据此通过引用整体并入)。所有化合物对β5亚基均有特异性；未观察到β1i、β1c、β2i或β2c的抑制，<33μM无抑制。将乙二胺与甲基-乙二胺(PKS21018)和1,3-丙二胺(PKS21019)进行比较表明乙二胺对β5i产生最强效力和高于β5c的选择性。然后用以下取代基修饰PKS21004的[1,1'-联苯基]-3-羧酰胺：4'-氟(PKS21026)、4'-氰基(PKS21028)、4-氟(PKS21196)、4,3'-二氟(PKS21195)和4,2'-二氟(PKS21187)。4'-取代降低效力，而4-和4,3’-取代不会。最佳的，4,2'-二氟-(PKS21187)使得对β5i的效力提高至IC500.015μM并且使选择性提高至高于对β5c的抑制的约20倍。
接下来，研究PKS21187合成的中间产物PKS21277上的Asp-tBu取代。PKS21277对β5i适度有效，选择性高于β5c 36倍。用Gly(PKS21276)、Ala(PKS21280)或Asn(PKS21281)替换Asp-tBu消除了针对β5i和β5c两者的抑制活性，表明Asp-tBu对于β5最佳结合至关重要。然后将苯丙酸酯替换为PKS21187的Asn的N-帽上的甲苯磺酰基，产生PKS21221。经测定IC50针对β5i为2.4nM且针对β5c为70nM，代表30倍选择性。同样，用Gly(PKS21289)、Ala(PKS21290)或Asn(PKS21288)替换PKS21221的Asp-tBu消除了针对β5i和β5c两者的抑制活性。
为了证实在这类化合物中共享非竞争性抑制形式，针对β5i测试了PKS21221并确认了非竞争性机制并且α经测定为0.26(图5)，与PKS21004一致。
为了确定这类抑制剂是否是细胞可穿透的，将B细胞淋巴瘤细胞系Karpas 1106P(Singh等人，“Immunoproteasomeβ5i-Selective Dipeptidomimetic Inhibitors,”Chem.Med.Chem.11(19):2127-2131(2016)，其据此通过引用整体并入)(表达比例高于c-20S的i-20S)用PKS21221处理，之后与(Ac-ANW)2-R110(β5i的特异性底物)或suc-LLVY-荧光素(β5的底物)一起孵育。两种底物的IC50值是相同的并且表明细胞穿透能力。类似地，PKS21221抑制HepG2肝癌细胞中的β5c活性，其中IC50为2.0μM。使用(Ac-ANW)2-R110作为底物，在HepG2细胞中未检测到β5i活性(图2A)。与免疫和常规细胞系中不同PKS21221的细胞内蛋白酶体抑制相关，PKS21221针对多发性骨髓瘤细胞系MM1.S和8226的细胞毒性(图2B和表3)。
总的来说，鉴定了非共价和非竞争性抑制蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶β5亚基的蛋白酶体抑制剂的新型化学型。开发了作为β5i超过β5c的选择性抑制剂的AsnEDA类似物。这是第一个报道的有效、非共价、非竞争性和选择性β5i抑制剂的实例。与底物累积时其细胞内活性常常随时间推移而减弱的竞争性抑制剂不同，相反，非竞争性抑制剂保持抑制活性，并且在这种β5i抑制的情况下，底物的累积实际上增强了抑制剂的结合，这可能拓宽治疗自身免疫性和炎性病症的治疗窗口。蛋白酶体抑制剂的AsnEDA化学型的通用性将在描述恶性疟原虫蛋白酶体超过人类宿主蛋白酶体的选择性抑制剂的开发的相关论文中进一步论证。
尽管为了说明的目的已经详细描述了本发明，但是应该理解的是，这样的细节是为了该目的，并且本领域技术人员在不脱离以下权利要求所定义的本发明的精神和范围的前提下可以在其中做出变型。

Claims (47)

1.一种式(I)的化合物：
Figure FDA0003263658790000011
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环，其中C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2为—(CH2)mC(O)NHR4；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet和—C(O)C1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(Ia)：
Figure FDA0003263658790000021
3.根据权利要求2所述的化合物，其具有式(Ib)：
Figure FDA0003263658790000022
4.根据权利要求2所述的化合物，其具有式(Ic)：
Figure FDA0003263658790000023
5.根据权利要求1所述的化合物，其中烷基为C1-6烷基。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中烯基为C2-6烯基。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为
Figure FDA0003263658790000031
8.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000032
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R2为
Figure FDA0003263658790000033
10.根据权利要求1所述的化合物，其中R3选自由以下组成的组：H、
Figure FDA0003263658790000034
并且
R为C1-6烷基。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物为
Figure FDA0003263658790000041
12.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000042
Figure FDA0003263658790000043
Figure FDA0003263658790000051
13.式(I)的化合物在制备用于治疗受试者的癌症或自身免疫性病症或用于为受试者中的移植器官或组织提供免疫抑制的药物中的用途：
Figure FDA0003263658790000052
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环，其中C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2为—(CH2)mC(O)NHR4；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet和—C(O)C1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其药学上可接受的盐，
其中所述自身免疫性病症选自由关节炎、结肠炎、狼疮和系统性硬化组成的组；
所述癌症选自由多发性骨髓瘤、淋巴瘤和其它血液学癌症组成的组；并且
为移植器官或组织提供免疫抑制，或所述免疫抑制用于预防移植排斥和移植物抗宿主疾病。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ia)：
Figure FDA0003263658790000071
15.如权利要求14所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ib)：
Figure FDA0003263658790000072
16.如权利要求14所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ic)：
Figure FDA0003263658790000073
17.如权利要求13所述的用途，其中R1为
Figure FDA0003263658790000081
18.如权利要求13所述的用途，其中R1选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000082
19.如权利要求13所述的用途，其中R2为
Figure FDA0003263658790000083
20.如权利要求13所述的用途，其中R3选自由以下组成的组：H、
Figure FDA0003263658790000084
并且
R为C1-6烷基。
21.如权利要求13所述的用途，其中所述式(I)的化合物为
Figure FDA0003263658790000085
22.如权利要求13所述的用途，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000091
Figure FDA0003263658790000092
Figure FDA0003263658790000101
23.根据权利要求13所述的用途，其中所述施用经口服、局部、透皮、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内滴注、腔内或膀胱内滴注、眼内、动脉内、病灶内或通过施加至粘膜来实施。
24.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。
25.式(I)的化合物在制备用于抑制细胞或组织中的胰凝乳蛋白酶β5i的药物中的用途：
Figure FDA0003263658790000102
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环，其中C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2为—(CH2)mC(O)NHR4；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet和—C(O)C1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；
p为1或2；并且
使细胞或组织与所述化合物在有效抑制胰凝乳蛋白酶β5i的条件下接触。
26.如权利要求25所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ia)：
Figure FDA0003263658790000121
27.如权利要求26所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ib)：
Figure FDA0003263658790000122
28.如权利要求26所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ic)：
Figure FDA0003263658790000123
29.如权利要求25所述的用途，其中R1为
Figure FDA0003263658790000124
30.如权利要求25所述的用途，其中R1选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000131
31.如权利要求25所述的用途，其中R2为
Figure FDA0003263658790000132
32.如权利要求25所述的用途，其中R3选自由以下组成的组：H、
Figure FDA0003263658790000133
并且
R为C1-6烷基。
33.如权利要求25所述的用途，其中所述式(I)的化合物为
Figure FDA0003263658790000134
34.如权利要求25所述的用途，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000135
Figure FDA0003263658790000141
Figure FDA0003263658790000151
35.式(I)的化合物在制备用于治疗受试者的感染性疾病的药物中的用途：
Figure FDA0003263658790000152
其中
R为H或C1-6烷基；
R1选自由以下组成的组：C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环，其中C2-6烷基、烯基、单环和双环芳基、联苯基、单环和双环杂芳基和双-杂芳基、及单环和双环非芳族杂环可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、芳基、杂芳基、非芳族杂环和经＝O取代的非芳族杂环；
R2为—(CH2)mC(O)NHR4；
R3选自由以下组成的组：H、—SOpR5、—C(O)R5、—C(O)(CH2)kAr、—SO2Ar、—SO2C3-8环烷基、—C(O)(CH2)kHet和—C(O)C1-6烷基，其中芳基(Ar)和杂芳基(Het)可任选地经每次出现时独立选自卤素或C1-6烷基的取代基取代1至3次；
R4选自由以下组成的组：H、C1-6烷基和C3-8环烷基，其中C3-8环烷基可任选地经—CF3取代；
R5选自由以下组成的组：烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基，其中烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基可任选地经每次出现时独立选自由以下组成的组的取代基取代1至3次：卤素、氰基、—OH、—NO2、—CF3、—OC1-6烷基、烷基、烯基、单环和双环芳基及单环和双环杂芳基；
k为0或2；
m为1或2；
n为1、2或3；并且
p为1或2；
或其药学上可接受的盐。
36.如权利要求35所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ia)：
Figure FDA0003263658790000161
37.如权利要求36所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ib)：
Figure FDA0003263658790000171
38.如权利要求36所述的用途，其中所述式(I)的化合物具有式(Ic)：
Figure FDA0003263658790000172
39.如权利要求35所述的用途，其中R1选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000173
40.如权利要求35所述的用途，其中R2为
Figure FDA0003263658790000174
41.如权利要求35所述的用途，其中R3选自由以下组成的组：H、
Figure FDA0003263658790000175
并且
R为C1-6烷基。
42.如权利要求35所述的用途，其中所述式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure FDA0003263658790000181
Figure FDA0003263658790000182
Figure FDA0003263658790000191
43.根据权利要求35所述的用途，其中所述施用经口服、局部、透皮、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、鼻内滴注、腔内或膀胱内滴注、眼内、动脉内、病灶内和通过施加至粘膜来实施。
44.根据权利要求35所述的用途，其中所述感染性疾病由细菌和病毒感染物引起。
45.根据权利要求35所述的用途，其中所述感染性疾病由选自由以下组成的组的细菌引起：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、克雷伯氏菌、假单胞菌、单核细胞增多性李斯特菌、结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌-胞内分枝杆菌、耶尔森氏菌、弗朗西斯菌、巴斯德菌、布鲁氏菌、梭状芽孢杆菌，百日咳博德特氏菌、拟杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、B-溶血性链球菌、棒状杆菌、军团菌、支原体、脲原体、衣原体、淋病奈瑟球菌、脑膜炎奈瑟球菌、流感嗜血杆菌、粪肠球菌、普通变形菌、奇异变形菌、幽门螺杆菌、梅毒螺旋体、博氏疏螺旋体、回归热疏螺旋体、立克次氏体病原体、诺卡氏菌和放线菌。
46.根据权利要求35所述的用途，其中所述感染性疾病由选自由以下组成的组的病毒感染物引起：人免疫缺陷病毒、人T细胞淋巴细胞病毒、肝炎病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、巨细胞病毒、人乳头瘤病毒、正粘病毒、副粘病毒、腺病毒、冠状病毒、棒状病毒、脊髓灰质炎病毒、披盖病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、风疹病毒和呼肠孤病毒。
47.根据权利要求35所述的用途，其中所述感染性疾病是疟疾。
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