JP2016222700A - 血液学的な悪性疾患のための併用療法 - Google Patents
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Abstract
【課題】血液学的な悪性疾患及び炎症性疾患の処置のための新規な治療ストラテジーに関する方法の提供。
【解決手段】式Aで表される化合物、又はその薬学的に許容され得る塩、薬学的に許容され得る賦形剤、ベンダムスチン及びリツキシマブ等の1つ以上の追加の治療剤を用いる、血液学的な悪性疾患及び炎症性疾患を処置するための方法。
(RはH、ハロ又はC1−C6アルキル;R’はC1−C6アルキル)
【選択図】なし
【解決手段】式Aで表される化合物、又はその薬学的に許容され得る塩、薬学的に許容され得る賦形剤、ベンダムスチン及びリツキシマブ等の1つ以上の追加の治療剤を用いる、血液学的な悪性疾患及び炎症性疾患を処置するための方法。
(RはH、ハロ又はC1−C6アルキル;R’はC1−C6アルキル)
【選択図】なし
Description
関連出願への相互参照
この出願は、2011年3月11日に出願された米国仮特許出願第61/452,034号および2011年6月3日に出願されたれた同第61/493,317号からの優先権を主張し、これらの両方はその全体が参照として援用される。
この出願は、2011年3月11日に出願された米国仮特許出願第61/452,034号および2011年6月3日に出願されたれた同第61/493,317号からの優先権を主張し、これらの両方はその全体が参照として援用される。
技術分野
本出願は、治療薬および医薬品化学の分野におけるものである。特に、本出願は、血液学的な悪性疾患および特定の他の状態を処置するための他の治療処置と組み合わせた特定のキナゾリン誘導体の使用に関する。
本出願は、治療薬および医薬品化学の分野におけるものである。特に、本出願は、血液学的な悪性疾患および特定の他の状態を処置するための他の治療処置と組み合わせた特定のキナゾリン誘導体の使用に関する。
3’−リン酸化ホスホイノシチドを介する細胞シグナル伝達は、種々の細胞プロセス、例えば、悪性形質転換、成長因子シグナル伝達、炎症および免疫に関係している。これらのリン酸化シグナル伝達産物を生成することを担う酵素であるホスファチジルイノシトール3−キナーゼ(PI3−キナーゼ;PI3K)は、もともと、ウイルス腫瘍性タンパク質および成長因子レセプターチロシンキナーゼ(ホスファチジルイノシトール(PI)およびそのリン酸化誘導体をイノシトール環の3’−ヒドロキシルでリン酸化する)に関連する活性として同定された。
PI3−キナーゼ活性化は、細胞増殖、分化およびアポトーシスを含めて、ある範囲の細胞応答に関与すると考えられている。
PI 3−キナーゼの最初の精製および分子クローニングによって、これがp85およびp110サブユニットからなるヘテロ二量体であることが明らかになった。4つの異なるクラスのI PI3Kが特定されている(PI3Kα、β、δ、およびγと命名され、各々が別個の110kDaの触媒性サブユニットおよび調節性サブユニットからなる)。さらに詳細には、3つの触媒性サブユニット(すなわち、p110α、p110βおよびp110δ)は、各々が同じ調節性サブユニット、p85と相互作用し;一方、p110γは、別個の調節性サブユニット、p101と相互作用する。ヒト細胞および組織におけるこれらのPIK3の各々の発現のパターンもまた別個である。
PI3キナーゼのp110δの同定は、非特許文献1に記載されている。ヒトp110δイソ型は、組織限定的な様式で発現されることが観察された。これはリンパ球およびリンパ組織で高レベルで発現され、これによって、このタンパク質は、免疫系でのPI 3−キナーゼ媒介性のシグナル伝達にある役割を果たし得ることが示唆される。PI3Kのp110βイソ型はまた、特定の癌においてPI3K媒介性のシグナル伝達にある役割を果たし得る。
Chantryら、J Biol Chem,(1997)272:19236〜41
癌、炎症性疾患および自己免疫疾患に関連しているPI3K媒介性障害に関する処置の
必要性が存在している。具体的には、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫の処置の必要性が存在している。
必要性が存在している。具体的には、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫の処置の必要性が存在している。
慢性リンパ性白血病(CLL)に対する既存の化学免疫療法アプローチは、悪性リンパ球の増殖を低減させ、そのアポトーシスを増強することができる。しかしながら、このような有益な効果はリンパ節において限定的であり得る、というのは、既存の薬物は当該部位に有効に浸透し得ないため、および非悪性間質細胞が悪性リンパ球に対して支持をもたらすためである。
CLLに対する既存の化学療法薬または免疫療法薬としては、シクロホスファミド、クロラムブシル、フルダラビン、リツキシマブ、アレムツズマブ、およびオファツムマブが挙げられる。これらの治療薬は循環悪性リンパ球の死滅に特に有効であるが、悪性リンパ節腫脹の低減には有効性が低い場合があり得る。さらに、これらの治療薬ではリンパ球再分布は誘導されない、またはリンパ球増加症を引き起す。
CLLを有する患者を処置するために当該分野で必要とされているものは、リンパ球と間質細胞間の化学走性シグナル伝達を調節することができる処置である。さらに、必要とされているものは、リンパ節から循環系内への悪性リンパ球を再分布させるこのようなシグナル伝達結果を低減させることができる処置である。このような再分布により、化学療法剤または免疫療法剤による該細胞のより良好な死滅が可能となることになる。
要旨
本出願は、これらの化合物を、癌、炎症性および自己免疫性疾患を処置するための他の化学療法薬または免疫療法薬と組み合わせて使用する方法を提供することにより、当該分野における必要性を満たすものである。特に、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫が本明細書に記載の方法によって処置される。
本出願は、これらの化合物を、癌、炎症性および自己免疫性疾患を処置するための他の化学療法薬または免疫療法薬と組み合わせて使用する方法を提供することにより、当該分野における必要性を満たすものである。特に、血液学的な悪性疾患である癌、例えば、白血病およびリンパ腫が本明細書に記載の方法によって処置される。
一局面では、癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式A
その薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中RはH、ハロまたはC1−C6アルキルであり;R’はC1−C6アルキルである
方法を提供する。
一実施形態では、上記化合物は
別の実施形態では、上記化合物は
前述の実施形態のいくつかでは、上記癌は血液学的な悪性疾患である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記血液学的な悪性疾患はB細胞悪性疾患である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記血液学的な悪性疾患は白血病またはリンパ腫である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記癌は慢性リンパ性白血病(CLL)または非ホジキンリンパ腫(NHL)である。
いくつかの実施形態では、上記癌は低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)である。
他の実施形態では、上記化合物および上記1つ以上の治療剤は各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与され、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが7〜42日間である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に少なくとも1サイクルの間に毎週投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、50mg〜200mgの上記化合物が上記被験体に1日あたり2回投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、50〜1,500mg/m2の上記1つ以上の治療剤が上記被験体に投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は、上記化合物および少なくとも1つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する。
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、標準の化学療法の処置に対して抵抗性である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、少なくとも1つの肥大リンパ節を有する。
前述の実施形態のいくつかでは、上記被験体は、i)少なくとも1つの化学療法の処置に不応性であるか、またはii)化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである。
別の局面では、癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式A
その薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中RはH、ハロまたはC1−C6アルキルであり;R’はC1−C6アルキルである
方法を提供する。
さらに別の局面では、ある状態を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”または式II”
またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
上記状態が慢性リンパ性白血病(CLL)または低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)である
方法を提供する。
一実施形態では、上記被験体は、i)少なくとも1つの化学療法の処置に不応性であるか、またはii)化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物および上記1つ以上の治療剤は各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与され、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが7〜42日間である。
前述の実施形態のいくつかでは、50mg〜200mgの上記化合物が上記被験体に1日あたり2回投与される。
一実施形態では、上記1つ以上の治療剤がベンダムスチンである。
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは上記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは少なくとも6サイクルの間投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンの各々の用量は50mg/m2〜150mg/m2である。
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに上記被験体にリツキシマブを投与するステップを含む。
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブは、少なくとも6サイクルの間、各々のサイクルの初日に投与される。
別の実施形態では、上記1つ以上の治療剤がリツキシマブである。
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブは上記被験体に少なくとも1サイクルの間に毎週投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記リツキシマブの各々の用量は300mg/m2〜400mg/m2である。
さらに別の実施形態では、上記1つ以上の治療剤がオファツムマブである。
前述の実施形態のいくつかでは、少なくとも12用量のオファツムマブが6サイクルにわたって投与される。
さらに別の局面では、ある状態を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”または式II”
またはその薬学的に許容され得る塩、ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含む方法を提供する。
一実施形態では、上記1つ以上の治療剤がレナリドマイドである。
さらに別の局面では、B細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オ
キサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オ
キサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法を提供する。
一実施形態では、上記被験体は、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである。
前述の実施形態のいくつかでは、50mg〜200mgの上記化合物が上記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に1日あたり2回投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、50mg/m2〜1,500mg/m2の上記1つ以上の追加の治療剤が上記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に少なくとも1回投与され、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
さらに別の局面では、B細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エ
ンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、上記被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エ
ンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または上記処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法を提供する。
別の局面では、本開示により、慢性リンパ性白血病(CLL)または低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
ベンダムスチン
を投与するステップを含む
方法を提供する。
一実施形態では、上記化合物およびベンダムスチンは各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与され、上記ベンダムスチンは上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが7〜42日間である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は上記被験体に少なくとも1サイクルの間に1日あたり2回投与され、上記ベンダムスチンは上記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記ベンダムスチンは少なくとも6サイクルの間投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は50mg〜200mgであり、ベンダムスチンの用量は50mg/m2〜150mg/m2である。
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、リツキシマブ、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病(CLL)または低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
リツキシマブ
を投与するステップを含む方法を提供する。
一実施形態では、上記化合物およびリツキシマブは各々が1サイクル中に少なくとも1回投与され、上記リツキシマブは上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、サイクルが7〜42日間である。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物は上記被験体に少なくとも1サイクルの間に1日あたり2回投与され、上記リツキシマブは上記被験体に少なくとも1サイクルの間に毎週投与される。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は50mg〜200mgであり、上記リツキシマブの用量は300mg/m2〜400mg/m2である。
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、ベンダムスチンおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
前述の実施形態のいくつかでは、該方法が、さらに、ベンダムスチン、オファツムマブおよびレナリドマイドからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤を投与するステップを含む。
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病(CLL)または低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
レナリドマイド
を投与するステップを含む方法を提供する。
一実施形態では、上記化合物およびレナリドマイドは各々が1サイクル中に少なくとも1回投与され、上記レナリドマイドが上記被験体に、上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される。
さらに別の局面では、慢性リンパ性白血病(CLL)または低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)を処置する方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式I”
またはその薬学的に許容され得る塩;
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
オファツムマブ
を投与するステップを含む方法を提供する。
前述の実施形態のいくつかでは、上記化合物の用量は50mg〜200mgであり、オファツムマブの用量は200mg〜1500mgである。前述の実施形態のいくつかでは、その後のオファツムマブ用量と異なる初期用量のオファツムマブが投与される。
図34Eは、化合物Iまたはコントロールの培地とともに48時間培養されたBMSC由
来の培養上清中のIL−6のイムノブロットを示す。図34Fは、BMSCの有無で培養した、化合物Iで処理したINA−6細胞におけるAKTおよびERKの発現プロフィールのイムノブロットを示す。図34Gは、化合物Iで48時間培養した後の2例の異なる患者でのBMSC細胞の増殖%を示す。
図35Aは、0、1および10μMの化合物Iで8時間培養し、そして微小管形成が評価されたHuVEC(ヒト臍静脈内皮細胞)の顕微鏡画像を示す。図35Bは、化合物Iで処理したHuVEC細胞での内皮細胞管形成をまとめた棒グラフを示す。図35Cは、HuVECの細胞増殖の%を漸増する培養濃度の化合物Iの関数としてあらわしているグラフを示す。図35Dは、化合物Iと8時間培養した後のHuVEC細胞溶解液のAktおよびERK発現の低下を示す。
図36Aは、化合物IIの0、10mg/kgまたは30mg/kgで処理したヒトMM異種移植片を有するSCIDマウスにおける腫瘍容積を、時間の関数として図に記しており、ここではヒト異種移植片腫瘍に対する強力なインビボの活性が示される。図36Bは、コントロールのマウスに対して、12日間化合物IIを用いて処置したマウスでのヒトMM異種移植片由来の腫瘍を比較する写真を示す。図36Cは、0、10mg/kgおよび30mg/kgの化合物IIで処理したヒトMM異種移植片を有するSCIDマウスの生存率を経時的に示す。
図36Dは、コントロールと比較して化合物IIで処置したマウスから回収した腫瘍の免疫−組織化学的分析からの画像を示しており;ここでCD31およびP−AKT陽性細胞は濃褐色である。図36Eは、コントロールと比較して化合物IIで処置したマウスから回収した腫瘍組織由来のPDK−1およびAKTレベルを検出するイムノブロットを示す。図36Fは、ELISAによって決定した、0、10mg/kgまたは30mg/kgの化合物IIで4週の処置期間にまたがって処置したマウスで測定したsIL6Rレベルのチャートを示す。
図37Aは、化合物Iと種々の量のボルテゾミブ(B)とを用いた処理後の生存しているLBまたはINA−6 MM細胞の%を示す;凡例:
来の培養上清中のIL−6のイムノブロットを示す。図34Fは、BMSCの有無で培養した、化合物Iで処理したINA−6細胞におけるAKTおよびERKの発現プロフィールのイムノブロットを示す。図34Gは、化合物Iで48時間培養した後の2例の異なる患者でのBMSC細胞の増殖%を示す。
図37Bは、化合物Iおよび/またはボルテゾミブで6時間処理したINA−6細胞中のAKTのリン酸化のレベルを比較するイムノブロットを示す。
図38は、(A)濾胞性リンパ腫細胞株のパネルにおけるPI3Kイソ型発現;(B)化合物Iに対して曝した後のpAkt、Akt、pS6およびS6の発現の減少;ならびに(C)化合物Iに対して曝した後のPARPおよびカスパーゼ−3切断における用量依存性の様式での増大を示す。
図39は、(A)化合物Iの種々の量における初代MCL細胞での構成的PI3Kシグナル伝達の量;(B)生存因子および種々の量の化合物Iを含むMCL細胞株でのpAkt産生の減少を示す。
図39は、(A)化合物Iの種々の量における初代MCL細胞での構成的PI3Kシグナル伝達の量;(B)生存因子および種々の量の化合物Iを含むMCL細胞株でのpAkt産生の減少を示す。
図40は、(A)化合物Iでの処置前、および(B)化合物Iでの1サイクルの処置後のCLLを有する患者における巨大リンパ節腫脹のコンピューター断層撮影腋窩画像を示す。
図41は、PI3Kδ経路の構成的活性化によりiNHLおよびCLLにおいて悪性B細胞の増殖、生存および異常な輸送が駆動されることを示す。
図42は、低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)および慢性リンパ性白血病(CLL)を有する20名の患者に関する研究における患者の特徴および処置の状況(treatment disposition)をまとめた表を示す。
図43は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてiNHLまたはCLLを有する患者に投与した研究での安全性プロフィールをまとめた表を示す。
図44は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてiNHLまたはCLLを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
図45は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせて投与したときのiNHLまたはCLLを有する患者における反応率をまとめた表を示す。
図46は、式Iの化合物のみを単独薬剤としてCLLを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
図47は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてCLLを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
図48Aは、式Iの化合物、ベンダムスチンまたは組み合わせたこの2つの薬物での処理後のCLL細胞生存度を示すコンタープロットを示す。図48Bは、式Iの化合物(5μM)、ベンダムスチン(10μM)、またはこれらの薬物の組み合わせで処理したCLL細胞の平均相対生存度を示すグラフを示す(平均値±SEM,n=4)。
図49Aは、レナリドマイドおよび種々の量の式Iの化合物への曝露の関数としての細胞におけるPI3K−δ酵素活性のグラフによるまとめを示す。
図49Bおよび49Cは、CD19+細胞におけるリン酸化に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
図49Bおよび49Cは、CD19+細胞におけるリン酸化に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
図49Dおよび49Eは、CD19+細胞におけるタンパク質発現に対するトランスフェクトsiRNAまたはナンセンスsiRNAの効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
図49Dおよび49Eは、CD19+細胞におけるタンパク質発現に対するトランスフェクトsiRNAまたはナンセンスsiRNAの効果を示すイムノブロットアッセイの画像を示す。
図50Aは、CLL患者のCD19+細胞におけるCD40、CD86の表面発現に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Bは、CLL患者のCD19+細胞におけるCD40、CD86およびCD154のmRNA発現に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Bは、CLL患者のCD19+細胞におけるCD40、CD86およびCD154のmRNA発現に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Cは、CLL患者のCD19+細胞におけるCD20に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Dは、CLL患者のCD19+細胞におけるIgM濃度に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Eおよび50Fは、CLL患者のCD19+細胞におけるサイトカインmRNA発現に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図50Eおよび50Fは、CLL患者のCD19+細胞におけるサイトカインmRNA発現に対するレナリドマイドおよび/または式Iの化合物の効果のグラフによるまとめを示す。
図51は、低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)および慢性リンパ性白血病(CLL)を有する49名の患者に関する研究における患者の特徴および処置の状況をまとめた表を示す。
図52は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてiNHLまたはCLLを有する患者に投与した研究での安全性プロフィールをまとめた表を示す。
図53Aは、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてiNHLを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
図53Bは、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてCLLを有する患者に投与することの有効性のグラフによるまとめを示す。
図54は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせて投与したときのiNHLまたはCLLを有する患者における反応率をまとめた表を示す。
図55は、式Iの化合物のみを単独薬剤としてCLLを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
図56は、式Iの化合物をベンダムスチン(B)またはリツキシマブ(R)と組み合わせてCLLを有する患者に投与した研究でのリンパ球数のグラフによるまとめを示す。
図57Aは、式Iの化合物、ベンダムスチン、フルダラビン、デキサメタゾンまたは組み合わせたこれらの薬物で処理した後の、48時間後のCLL細胞生存度を示すコンタープロットを示す。
図57Bは、式Iの化合物(5μM)、ベンダムスチン(10μM)、フルダラビン(10μM)、デキサメタゾン(10μM)または組み合わせたこれらの薬物で処理したCLL細胞の平均相対生存度を示す棒グラフを示す(平均値±SEM,n=9)。
図58Aは、FACSによってBH3プロファイリングした末梢血CLL細胞において0.03μMの最終濃度のBIM BH3ペプチドによって誘導されたミトコンドリア脱分極を定量化したグラフを示す(n=30)。
図58Bは、BCL2、Mcl−1およびBcl−XLに主に依存性のパターンを示す3名の個々の患者からのBH3プロフィールを示す。
図58Cは、フロントラインCLL治療完結の6ヶ月間または該期間以内に進行性疾患(PD)を有する患者と比較した、2008 IW−CLL診断基準による部分奏効(PR)または完全奏効(CR)が得られた処置未経験患者におけるBIM脱分極を示すグラフである(p=0.024)。
図58Dは、変異IGHV状態を有する患者(n=18)と比較した、非変異IGHV状態を有する患者(n=7)におけるBIM脱分極を示すグラフである(p=0.0026)。
図58Eは、生殖細胞系統とのVH相同性の割合とプライミングレベルとの間の相関を示すグラフである(p=0.0043)。
図59Aおよび59Bは、それぞれ、24時間および1時間での全ウェル蛍光定量法によって定量化したCLL細胞接着を示すグラフを示す(それぞれ、片側p=0.045および0.032)。
図59Aおよび59Bは、それぞれ、24時間および1時間での全ウェル蛍光定量法によって定量化したCLL細胞接着を示すグラフを示す(それぞれ、片側p=0.045および0.032)。
図59Cは、グラフに示したとおりの薬物処理を伴って、StromaNKTertの存在下または非存在下で24時間共培養したPB由来CLL細胞をAnnexinV/PIによって評価したCLL細胞生存度を示すグラフを示す。
図59Dは、StromaNKTertとともにまたはなしおよび化合物IありまたはなしでABT−737の存在下で24時間培養したCLL細胞についての用量反応曲線を示す。
図59Eは、StromaNKTertとともにまたはなしおよび化合物IありまたはなしでABT−263の存在下で培養したCLL細胞についての用量反応曲線を示す。
図60Aは、4つのすべての患者サンプルについてのAnnexinV/PIによって測定した凝集CLL細胞のアポトーシス割合を示す。
図60Bは、コントロールと比較したときの、化合物Iで処理した間質曝露CLL細胞におけるミトコンドリア脱分極を示すグラフを示す(片側p=0.0749)。
図60Cは、コントロールと比較したときの、BAD BH3ペプチドおよびABT−737で化合物Iとともに処理した間質曝露CLL細胞におけるミトコンドリア脱分極を示すグラフを示す(それぞれ、片側p=0.0462および0.0468)。
他に規定しない限り、本明細書に用いられる全ての技術用語、表記および他の科学的用語または専門用語は、本発明が属する当該分野の当業者によって通常理解される意味を有するものとする。いくつかの場合、一般に理解される意味を有する用語は、明確化のため、および/または参照を容易にするために本明細書に定義されており、本明細書におけるこのような定義の包含は必ずしも、当該分野で一般に理解されるものを上回る実質的な相違を示すと解釈されるべきではない。本明細書に記載または言及される多くの技術および手順は、十分理解されており、かつ当業者による従来の方法論を用いて通常使用される。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を含む手順は一般には、別段の注記がない限り、製造業者の既定のプロトコールおよび/またはパラメーターに従って行われる。
本明細書に示される一般的な方法の考察は、例示の目的のみを意図する。他の代替的な方法および実施形態は、本開示を概観すれば当業者に明白となるであろう。
接続詞「または(もしくは、あるいは)」と組み合わされる一群の用語は、その群のうち相互排他性である必要があるとは読み取られるべきではなく、別段明記しない限り、「および/または」としても読み取られるべきである。本発明の用語、成分または構成要素は単数で記載されてもよいし、または請求されてもよいが、単数形を明確に言及するという限定でない限り、複数形は、単数形の範囲内であると想定される。
本発明は、癌の処置のための新規な治療ストラテジーに関する方法を提供する。一局面では、本発明は、被験体における癌または自己免疫疾患を
処置する方法を提供し、この方法は、式Aの化合物
処置する方法を提供し、この方法は、式Aの化合物
であって、
式中Rは、H、ハロもしくはC1−C6アルキルであり;R’は、C1−C6アルキルである化合物;またはその薬学的に許容され得る塩;および必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤をこの被験体に投与する工程を包含する。
式中Rは、H、ハロもしくはC1−C6アルキルであり;R’は、C1−C6アルキルである化合物;またはその薬学的に許容され得る塩;および必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤をこの被験体に投与する工程を包含する。
特定の実施形態では、ハロはFであり;かつR’はメチル、エチル、またはプロピルである。
特定の実施形態では、Rは、構造
を有するキナゾリニル環の5位に結合される。
特定の実施形態では、Rは、構造
を有するキナゾリニル環の6位に結合される。
本明細書において用いる「化合物」という用語は、別段特定しない限り、式Aの化合物、例えば、化合物I、化合物II、または鏡像異性体、例えば、I”もしくはII”または鏡像異性混合物を指す。
「式Iの化合物」または「化合物I」とは、式Iの構造:
の化合物5−フルオロ−3−フェニル−2−[1−(9H−プリン−6−イルアミノ)−プロピル]−3H−キナゾリン−4−オンを指す。
化合物IのS−鏡像異性体は、ここで、I”:
と指定して示される。
「式II”の化合物」または「化合物II”」とは、式IIの構造:
の化合物2−(1−(9H−プリン−6−イルアミノ)エチル)−6−フルオロ−3−フェニルキナゾリン−4(3H)−オンを指す。
化合物IIのS−鏡像異性体は、ここでII”:
と指定して示される。
一実施形態では、式Aの化合物は、式Iの化合物である。別の実施形態では、式Aの化合物は式IIの化合物である。特定の実施形態では、この化合物は、R−鏡像異性体およびS−鏡像異性体のラセミ混合物である。特定の実施形態では、この化合物は、鏡像異性体の混合物として用いられ、かつしばしばS−鏡像異性体が富化されている。いくつかの実施形態では、この化合物は、主にS−鏡像異性体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法で用いられる式Aの化合物は、少なくとも80%S−鏡像異性体である。特定の実施形態では、この化合物は、主にS−鏡像異性体から構成され、ここでこの化合物は、少なくとも66〜95%、または85〜99%のS−鏡像異性体を含む。いくつかの実施形態では、この化合物は、少なくとも90%または少なくとも95%のS−鏡像異性体という鏡像異性体過剰(enantiomeric excess)(e.e.)を有する。いくつかの実施形態では、この化合物は、少なくとも98%または少なくとも99%というS−鏡像異性体過剰(e.e.)を有する。特定の実施形態では、この化合物は、少なくとも95%のS−鏡像異性体を含む。実施例のセクションで示される細胞および患者の実験では、用いられる化合物Iのサンプルは、95%超のS−鏡像異性体であった。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法で用いられる、式Iまたは式IIの化合物は、少なくとも80%がS−鏡像異性体である。特定の実施形態では、式Iまたは式IIの化合物は主に、S−鏡像異性体から構成され、ここでこの化合物は、少なくとも66〜95%、または85〜99%のS−鏡像異性体を含む。いくつかの実施形態では、式Iまたは式IIの化合物は、少なくとも90%または少なくとも95%のS−鏡像異性体という鏡像異性体過剰(e.e.)を有する。いくつかの実施形態では、式Iまたは式IIの化合物は、少なくとも98%または少なくとも99%というS−鏡像異性体過剰(e.e.)を有する。特定の実施形態では、式Iまたは式IIの化合物は、少なくとも95%のS−鏡像異性体を有する。実施例のセクションに示される細胞および患者の実験では、用いられる化合物Iのサンプルは、95%超がS−鏡像異性体であった。
特定の実施形態では、この化合物は、他のPI3Kイソ型に比較してPI3K p110δを選択的に阻害する。
特定の実施形態では、癌とは、血液学的な悪性疾患および/または固形腫瘍である。別の特定の実施形態では、血液学的な悪性疾患は、白血病またはリンパ腫である。
いくつかの実施形態では、リンパ腫は、成熟(末梢)B細胞腫瘍である。特定の実施形態では、成熟B細胞腫瘍は、B細胞慢性リンパ性白血病/小リンパ球性リンパ腫;B細胞前リンパ球性白血病;リンパ形質細胞性リンパ腫;辺縁帯リンパ腫、例えば、脾性辺縁帯B細胞リンパ腫(+/−絨毛リンパ球)、節性辺縁帯リンパ腫(+/−単球様B細胞)、および粘膜関連リンパ組織(MALT)型の節外性辺縁帯B細胞リンパ腫;ヘアリー細胞
白血病;形質細胞性骨髄腫/形質細胞腫;濾胞性リンパ腫、濾胞中心;マントル細胞リンパ腫;びまん性大細胞B細胞リンパ腫(縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、および原発性滲出性リンパ腫);およびバーキットリンパ腫/バーキット細胞白血病からなる群より選択される。
白血病;形質細胞性骨髄腫/形質細胞腫;濾胞性リンパ腫、濾胞中心;マントル細胞リンパ腫;びまん性大細胞B細胞リンパ腫(縦隔大細胞型B細胞リンパ腫、血管内大細胞型B細胞リンパ腫、および原発性滲出性リンパ腫);およびバーキットリンパ腫/バーキット細胞白血病からなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、リンパ腫は、多発性骨髄腫(MM)および非ホジキンリンパ腫(NHL)、マントル細胞リンパ腫(MCL)、濾胞性リンパ腫、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症(WM)またはB細胞リンパ腫およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)からなる群より選択される。
さらなる特定の実施形態では、白血病は、急性リンパ性白血病(ALL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ性白血病(CLL)、および小リンパ球性リンパ腫(SLL)からなる群より選択される。急性リンパ性白血病はまた、急性リンパ芽球性白血病としても公知であり、本明細書において交換可能に用いられ得る。両方の用語は、白血球、リンパ球から、骨髄で開始する種類の癌を記述する。
いくつかの実施形態では、非ホジキンリンパ腫(NHL)は、2つのカテゴリー、高悪性度(aggressive)NHLまたは低悪性度(indolent)NHLのうちの1つにおさまる。高悪性度NHLは急速に増殖し、患者の死を比較的早くもたらし得る。未処置の生存は、数ヶ月または数週間でさえ測定され得る。高悪性度NHLの例としては、B細胞腫瘍、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、T/NK細胞腫瘍、未分化大細胞リンパ腫、末梢T細胞リンパ腫、前駆Bリンパ芽球性白血病/リンパ腫、前駆T−リンパ芽球性白血病/リンパ腫、バーキットリンパ腫、成人T細胞リンパ腫/白血病(HTLV1+)、原発性CNSリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、移植後多形リンパ増殖性疾患(PTLD)、AIDS関連リンパ腫、真性組織球性リンパ腫、および芽球性NK細胞リンパ腫が挙げられる。高悪性度NHLの最も一般的な種類は、びまん性大細胞型リンパ腫である。
低悪性度NHLは、増殖が遅く、かつほとんどの患者では、その疾患が進行段階に進行するまで明白な症状を示さない。低悪性度NHLを有する患者の無処置の生存は、数年で測定され得る。非限定的な例としては、濾胞性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫(例えば、節外性辺縁帯リンパ腫(粘膜関連リンパ組織−MALTリンパ腫とも呼ばれる)、節性辺縁帯B細胞リンパ腫(単球様B細胞リンパ腫)、脾性辺縁帯リンパ腫)、およびリンパ形質細胞性リンパ腫(ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症)が挙げられる。
いくつかの場合には、組織学的形質転換は、例えば、患者の低悪性度NHLを、高悪性度NHLに変換し得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、高悪性度NHLまたは低悪性度NHLを有する患者の処置方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、マントル細胞リンパ腫(MCL)、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、濾胞性リンパ腫(FL)、急性リンパ性白血病(ALL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ性白血病(CLL)、および小リンパ球性リンパ腫(SLL)、多発性骨髄腫(MM)、および辺縁帯リンパ腫からなる群より選択される状態を有する患者を処置する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、再発性のまたは不応性の状態を有する患者に施される。
別の実施形態では、この癌は、乳癌、肺癌、結腸癌または前立腺癌である。
特定の実施形態では、この癌は、癌のない被験体におけるPI3K活性に比較して、異常なPI3K活性に関連する。
特定の実施形態では、好ましい被験体は、化学療法の処置に対して不応性であるか、または化学療法での処置後に再発している。別の実施形態では、この被験体は、新規の患者である。
特定の実施形態では、この方法は、この患者においてPI3Kδ活性のレベルを低下させる工程を包含する。
特定の実施形態では、この被験体は、ヒト被験体である。
公知の治療剤での処置を受ける被験体は、処置に対する抵抗を経験し得る。例えば、ボルテゾミブは、再発性/不応性の、再発性の、および新たに診断されたMMについてFDAに承認されたが、幾例かの患者は応答せず、他の例では、ボルテゾミブに対して抵抗性を獲得している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のキナゾリノン化合物は、公知の治療剤の有効性を相乗的に増強する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載の任意の治療剤を増強し得る。さらに特異的な実施形態では、本明細書に記載の化合物は、プロテアソームインヒビターを相乗的に増強する。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、化学療法剤の処置に抵抗性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、プロテアソームインヒビターに抵抗性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブに抵抗性である。一例では、本明細書に記載の化合物は、ボルテゾミブ誘導性のMM細胞毒性を相乗的に増強する。理論で束縛されるものではないが、いくつかの実施形態では、本明細書に考察される化合物は、AKTのボルテゾミブ誘導性のリン酸化を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、プロテアソームインヒビター処置に対する抵抗性を克服するために用いられる。いくつかの実施形態では、本発明は、治療剤に対して抵抗性であるか、または治療剤に対する抵抗性を発症した被験体を処置する方法を提供する。
理論によって束縛されるものではないが、式Aの化合物と従来の治療薬との間の相乗効果は、本発明の化合物が腫瘍細胞動員を末梢循環に誘導する能力に起因し得る。腫瘍細胞の末梢循環を誘導することで、従来の治療薬が腫瘍に対して作用し、かつ腫瘍をさらに効果的に中和する能力が増大される。この相乗効果は、CLL患者で実証されている。
従って、本発明の方法は、患者に対して式Aの化合物に加えて、治療上有効な量の少なくとも1つの追加の治療剤および/または治療手順(この患者でこの癌を処置するために選択される)を施す工程を包含する。「治療剤」とは、本明細書において用いる場合、1つ以上の化合物を指してもよい。この治療剤は、標準的な化学療法薬物であっても、または実験的な化学療法薬物であってもよい。この治療剤は、2つ以上の化学療法薬物の組み合わせを含んでもよい。代表的な化学療法薬物の組み合わせは、本明細書においてa〜qに列挙される。特定の治療剤は、処置されている疾患の種類に応じて選択され得る。特定の血液病のための従来の化学療法処置の非限定的な例は、後ろのセクションに記載される。特定の実施形態では、本発明は、造血系の癌の患者、例えば、CLL患者を、ボルテゾミブおよび式Aの化合物(例えば、式I、II、I”、またはII”)を用いて処置する方法を提供し、ここでこの組み合わせは、相乗効果を提供する。
特定の実施形態では、この治療剤は、以下からなる群より選択される:ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、Campath−1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストン(antineoplaston)A10、アンチネオプラストンAS2−1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY 90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン(tanespimycin)、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド(fenretinide)、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、およびオファツムマブ(Ofatumumab)、またはそれらの組み合わせ。上記でa〜qで列挙した組み合わせなどの現行のおよび実験的な治療で、治療剤の組み合わせが用いられている。
いくつかの実施形態では、治療剤は好ましくは、プロテアソームインヒビターである。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ある化合物をプロテアソームインヒビターとともに投与する工程を包含する。プロテアソームインヒビターは、天然および合成の化合物を含む。プロテアソームインヒビターの非限定的な例としては、ボルテゾミブ、([(1R)−3−メチル−1−({(2S)−3−フェニル−2−[(ピラジン−2−イルカルボニル)アミノ]プロパノイル}アミノ)ブチル]ボロン酸)、これは、Millennium pharmaceuticalsから「Velcade(登録商標)」として市販されている;カルフィルゾミブ(PR−171)および経口アナログPR−047(両方ともProteolix,Inc.が開発)が挙げられる。プロテアソームインヒビターの他の例としては、ジスルフィラム;ラクタシスチン;合成化合物、例えば、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、およびアクラシノマイシン;カルパインインヒビター、例えば、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341;ビニルスルホントリペプチドインヒビター;リトナビル;PI−083;(+/−
)−7−メチルオムラリド;ならびに(−)−7−メチルオムラリドが挙げられる。特定の実施形態では、式Aの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Iの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式IIの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。特定の実施形態では、式Aの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Iの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式IIの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。
)−7−メチルオムラリド;ならびに(−)−7−メチルオムラリドが挙げられる。特定の実施形態では、式Aの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Iの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式IIの化合物は、ボルテゾミブまたはカルフィルゾミブと組み合わせて投与される。特定の実施形態では、式Aの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。さらに特定の実施形態では、式Iの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。他の特定の実施形態では、式IIの化合物がリツキシマブまたはオファツムマブと組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、上記治療剤はアルキル化剤である。アルキル化剤の非限定的な例としては、例えば、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド(clyclophosphamide)、メクロレタミン、ウラムスチン、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、チオテパ、および白金ベース化学療法薬物、例えば、シスプラチン(such acisplatin)、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、トリプラチンテトラニトレートが挙げられる。
他の実施形態では、本発明の任意の化合物は1つ以上の他の活性治療剤と、患者への同時または逐次投与のための単位投薬形態にて組み合わされ得る。併用療法は同時または逐次レジメンとして投与され得る。逐次投与する場合、上記組み合わせは2回以上の投与で投与され得る。
一実施形態では、本発明の化合物と1つ以上の他の活性治療剤との共投与は、一般的に、治療有効量の本発明の化合物および1つ以上の他の活性治療剤がどちらも患者の体内に存在するような、本発明の化合物および1つ以上の他の活性治療剤の同時または逐次投与を指す。別の実施形態では、必ずしも上記化合物および治療剤(1つまたは複数)がどちらも患者の体内に存在しているとは限らないが、特定の投与スケジュールにより上記化合物および治療剤が相乗効果をもたらす。
共投与としては、単位投薬量の1つ以上の他の活性治療剤の投与の前または後での単位投薬量の本発明の化合物の投与;例えば、1つ以上の他の活性治療剤の投与の数秒、数分、数時間または数日以内での本発明の化合物の投与が挙げられる。例えば、単位用量の本発明の化合物がまず投与され、続いて、数秒、数分、数時間または数日以内に単位用量の1つ以上の他の活性治療剤が投与され得る。あるいは、単位用量の1つ以上の他の治療剤がまず投与され、続いて、単位用量の本発明の化合物が数秒、数分、数時間または数日以内に投与され得る。いくつかの場合には、単位用量の本発明の化合物をまず投与し、続いて、ある時間(例えば、1〜12時間)後に単位用量の1つ以上の他の活性治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。他の場合には、単位用量の1つ以上の他の活性治療剤をまず投与し、続いて、ある時間(例えば、1〜12時間)後に、単位用量の本発明の化合物を投与することが望ましい場合があり得る。いくつかの場合には、単位用量の本発明の化合物をまず投与し、続いて、ある日数(例えば、1〜12日間)後に、単位用量の1つ以上の他の活性治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。他の場合には、単位用量の1つ以上の他の活性治療剤をまず投与し、続いて、ある日数(例えば、1〜12日間)後に、単位用量の本発明の化合物を投与することが望ましい場合があり得る。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、数日間、数週間または数ヶ月間にわたる化合物と治療剤の交互投与を伴うものであり得る。
併用療法により「相乗性」および「相乗効果」がもたらされ得る、すなわち、活性成分を一緒に使用した場合に得られる効果が上記化合物を別々に使用することでもたらされる
効果の和より大きくなる。相乗効果は、活性成分を(1)共処方して、組み合わせた処方物で同時に投与もしくは送達する場合に;(2)別々の処方物として、交互にもしくは並行して送達する場合に;または(3)いくつかの他のレジメンによって得られ得る。交互療法で送達する場合、相乗効果は、上記化合物を、例えば、別々の錠剤、丸剤もしくはカプセル剤で、または別々のシリンジでの異なる注射によって逐次投与または送達する場合に得られ得る。一般に、交互療法の間には、有効投薬量の各々の活性成分が逐次、すなわち連続的に投与される。
効果の和より大きくなる。相乗効果は、活性成分を(1)共処方して、組み合わせた処方物で同時に投与もしくは送達する場合に;(2)別々の処方物として、交互にもしくは並行して送達する場合に;または(3)いくつかの他のレジメンによって得られ得る。交互療法で送達する場合、相乗効果は、上記化合物を、例えば、別々の錠剤、丸剤もしくはカプセル剤で、または別々のシリンジでの異なる注射によって逐次投与または送達する場合に得られ得る。一般に、交互療法の間には、有効投薬量の各々の活性成分が逐次、すなわち連続的に投与される。
一局面では、本発明は、式Iの化合物:
またはその薬学的に許容され得る塩;および少なくとも1つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、この組成物は、S−鏡像異性体が富化されている。
別の局面では、本発明は、式IIの化合物:
またはその薬学的に許容され得る塩;および少なくとも1つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。一実施形態では、この組成物は、S−鏡像異性体が富化されている。
一局面では、本発明は、患者において、多発性骨髄腫(MM)を処置する方法を提供し、この方法は、式Aの化合物および追加の治療剤の組み合わせを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態では、式Aは、化合物IまたはIIである。特定の実施形態では、式Aは、化合物I”である。他の実施形態では、式Aは、化合物II”である。前述の実施形態のいくつかでは、追加の治療剤は、プロテアソームインヒビターである。特定の実施形態では、この追加の治療剤は、ボルテゾミブである。特定の実施形態では、患者において多発性骨髄腫を処置する方法は、化合物I”をボルテゾミブとともに投与する工程を包含する。特定の実施形態では、患者において多発性骨髄腫を処置する方法は、化合物II”をボルテゾミブとともに投与する工程を包含する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は、少なくとも60%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実
施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも70%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は、少なくとも80%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも90%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも95%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも98%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも99%という鏡像異性体過剰を有する。
施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも70%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は、少なくとも80%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも90%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも95%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも98%という鏡像異性体過剰を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”は少なくとも99%という鏡像異性体過剰を有する。
特定の実施形態では、治療剤の組み合わせは式Aの化合物とともに投与され、
ここで、上記組み合わせは
a)ベンダムスチン;
b)リツキシマブ;
c)ベンダムスチンおよびリツキシマブ;
d)オファツムマブ;ならびに
e)レナリドマイド
からなる群より選択される。
ここで、上記組み合わせは
a)ベンダムスチン;
b)リツキシマブ;
c)ベンダムスチンおよびリツキシマブ;
d)オファツムマブ;ならびに
e)レナリドマイド
からなる群より選択される。
別の実施形態では、この化合物は、治療手順と組み合わせて用いられる。特定の実施形態では、この治療手順は、末梢血幹細胞移植、自家造血幹細胞移植、自家骨髄移植、抗体療法、生物学的療法、酵素インヒビター療法、全身照射、幹細胞の注入、幹細胞支持による骨髄アブレーション、インビトロ処理した末梢血幹細胞移植、臍帯血移植、免疫酵素技術、免疫組織化学染色法、薬理学的研究、低−LETコバルト−60ガンマ線療法、ブレオマイシン、従来の手術、放射線療法、高用量化学療法および骨髄非破壊的同種異系造血幹細胞移植からなる群より選択される。
特定の実施形態では、この方法はさらに、この患者から生物学的サンプルを得る工程;およびこの生物学的サンプルを、血液化学分析、染色体転座分析、針生検、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション、実験室バイオマーカー分析、免疫組織化学染色法、フローサイトメトリーまたはそれらの組み合わせからなる群より選択される分析手順によって分析する工程を包含する。
命名の目的のために、この化合物のキナゾリニルおよびプリニル成分は以下:
のように番号付けされる。
本明細書において用いる場合、「アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖、および環状の一価のヒドロカルビル基、およびそれらの組み合わせを包含し、これは、それらが置換されない場合、CおよびHのみを含む。例としては、メチル、エチル、イソブチル、シクロヘキシル、シクロペンチルエチルなどが挙げられる。各々のこのような基における炭素原子の総数は、時に本明細書においては、例えば、基が最大10個の炭素原子を含み得る場合、これは、1−10Cとして、またはC1−C10もしくはC1−10として示され得る。
「ハロ」、とは本明細書において用いる場合、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを包含する。フルオロおよびクロロがしばしば好ましい。
「選択的PI3Kδインヒビター」または「選択的PI3Kβインヒビター」などの用語は、本明細書において用いる場合、PI3Kファミリーの少なくとも1つの他のアイソザイムよりも効果的に、それぞれ、PI3KδまたはPI3Kβアイソザイムを阻害する化合物を指す。選択的インヒビターはまた、PI3Kの他のアイソザイムに対して活性である場合もあるが、他のアイソザイムの阻害を同程度達成するにはさらに高濃度を要する。「選択的」とはまた、匹敵する化合物が阻害するよりも特定のPI3−キナーゼを阻害する化合物を記述するのに用いられ得る。「選択的PI3Kδインヒビター」化合物とは、慣習的にかつ一般的に命名されるPI3Kインヒビター化合物、例えば、ワートマニンまたはLY294002よりもPIK3δについてさらに選択的であることが理解される。同時に、ワートマニンおよびLY294002は、「非選択的PI3Kインヒビター」とみなされる。特定の実施形態では、PI3Kδの発現または活性を選択的に負に調節する任意の種類の化合物は、本発明の方法において選択的PI3Kδインヒビターとして用いられ得る。さらに、PI3Kδの発現または活性を選択的に負に調節し、かつ許容され得る薬理学的特性を保有する任意の種類の化合物は、本発明の治療方法において選択的PI3Kδインヒビターとして用いられ得る。理論で束縛されるものではないが、本発明の化合物でp110δ阻害を標的することによって、血液学的な悪性疾患の処置のための新規なアプローチが得られる。なぜならこの方法は、構成的なシグナル伝達を阻害し、腫瘍細胞の直接破壊が生じるからである。さらに、理論によって束縛されるものではないが、p110δ阻害は、腫瘍細胞ホーミング、生存および増殖に重要である微小環境シグナルを抑制する。
別の実施形態では、PI3Kβの発現または活性を選択的に負に調節する任意の種類の化合物は、本発明の方法における選択的PI3Kβインヒビターとして用いられ得る。さらに、PI3Kβの発現または活性を選択的に負に調節し、かつ許容され得る薬理学的特性を保有する任意の種類の化合物は、本発明の治療方法において、選択的PI3Kβインヒビターとして用いられ得る。
本明細書において用いる場合、「処置する、治療する」という用語は、障害を阻害すること、すなわち、その発症を停止すること;その障害を救済すること、すなわち、その退行を生じること;またはその障害を緩和すること、すなわち、その障害に関連する症状の少なくとも1つの重篤度を軽減することを指す。いくつかの実施形態では、「処置する」とは、障害の素因があり得るが、まだその障害を有するとは診断されていない動物でその障害が生じることを妨げることを指す。「障害」とは、限定するものではないが、医学的な障害、疾患、状態、症状などを包含するものとする。
別の局面では、本発明は、好塩基球および/または肥満細胞の機能を抑制し、これによって過剰なまたは所望されない好塩基球および/または肥満細胞の活性によって特徴付けられる疾患または障害の処置を可能にするための方法を包含する。この方法によれば、好塩基球および/または肥満細胞においてホスファチジルイノシトール3−キナーゼδ(PI3Kδ)の発現または活性を選択的に阻害する本発明の化合物が用いられ得る。好ましくは、この方法は、好塩基球および/または肥満細胞によって刺激されるヒスタミン放出を阻害するのに十分な量でPI3Kδインヒビターを使用する。従って、このような化合物および他のPI3Kδ選択的インヒビターの使用は、ヒスタミン放出によって特徴付けられる疾患、すなわち、アレルギー障害、例としては、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、喘息、ARDS、肺気腫、および関連の障害などの障害を処置するのに有用であり得る。
本発明は、再灌流傷害、すなわち、組織または器官が虚血期間後の再灌流を経験する状況から生じる傷害にあるかまたはその傷害に課せられ得る被験体を処置することにおいて有用性を有し得る。「虚血」という用語は、動脈血の流入の閉塞に起因する局所の組織貧血を指す。一過性の虚血後の再灌流は特徴的に、好中球の活性化および血管内皮を通じた罹患領域への遊出を生じる。活性化好中球の蓄積が次に、反応性酸素代謝物の生成を生じ、これが関与する組織または器官の構成要素を損傷する。この「再灌流傷害」という現象は通常、血管の発作(広範囲の虚血および局所の虚血を含む)、出血性ショック、心筋虚血または心筋梗塞、臓器移植および脳血管けいれんなどの状態に関連する。例えば、再灌流傷害は、心臓バイパス手順の終わりに、または心停止の間に生じ、この時心臓は、一旦血液を受け取ることを妨げられ、再灌流を開始する。PI3Kδ活性の阻害は、このような状況で再灌流傷害の量の低減を生じると期待される。
特定の実施形態では、本発明は、固形腫瘍を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、癌は、乳癌、結腸癌、または前立腺癌である。特定の実施形態では、本発明は、PI3Kβによって媒介される異常または望ましくない細胞のシグナル伝達活性に関連する固形腫瘍を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓癌;膀胱癌;結腸直腸癌;乳癌、例としては、転移性乳癌;前立腺癌、例としては、アンドロゲン依存性およびアンドロゲン非依存性前立腺癌;腎臓癌、例としては、例えば、転移性腎細胞癌腫;肝細胞癌;肺癌、例としては、例えば、小細胞肺癌(NSCLC)、細気管支肺胞癌腫(BAC)、および肺の腺癌;卵巣癌、例としては、例えば、進行性上皮または原発性腹膜癌;子宮頸癌;胃癌;食道癌;頭頸部癌、例としては、例えば、頭頸部の扁平上皮細胞癌腫;黒色腫;神経内分泌癌、例としては、転移性神経内分泌腫瘍;脳腫瘍、例としては、例えば、神経膠腫、未分化希突起グリオーマ、成人多形成グリア芽細胞腫、および成人未分化星細胞腫;骨癌;および軟部組織肉腫からなる群より選択される。
p110δの遺伝子除去(ablation)は、免疫系に限定された軽度の表現型を生じることが見出されている。一般的な観察としては、肉眼的な解剖学的異常も行動的な異常もない繁殖性の生物体が挙げられる。組織学的検査によって、主要な器官は正常に見えることが明らかになった。全クラスのI PI3K活性は、B細胞およびT細胞で30〜50%に低下された。さらに、感染に対する感受性の増大は観察されなかった。さらに、造血系に対する影響としては、正常な末梢血球数、リンパ形成不全の出現、ならびに脾臓およびリンパ節での胚中心の欠損、骨髄でのB220+IgM+B細胞前駆体の数の減少、血清免疫グロブリンのレベルの減少、ならびに胸腺での正常T細胞発達が挙げられる。
p110δの遺伝子除去は、発癌に重要である骨髄性細胞およびB細胞のシグナル伝達に影響する。詳細には、チロシンキナーゼのシグナル伝達、発達、増殖および生存は、骨髄性細胞で影響される。B細胞機能が最も影響され、これには増殖、分化、アポトーシス、およびB細胞生存因子(BCR、CD40、IL−4、ケモカイン)に対する応答が挙げられる。従って、本発明は、これらの骨髄性細胞およびB細胞の機能のうちの1つ以上が異常であるかまたは望ましくない疾患状態を処置する方法を包含する。
分子レベルp110α、p110β、p110δ、p110γ、(hvPS34、mTOR、DNA−PKなど)に対して標的する汎(pan)PI3Kインヒビターは、次には、全ての組織を標的する。可能性のある臨床指標としては、癌が挙げられるが、臨床の有害事象としては、癌患者での高インスリン血症が挙げられる。潜在的な臨床指標が癌、関節リウマチ、喘息、アレルギーおよびCOPDを含む、炎症を媒介する細胞および癌細胞を標的するp110δ選択的インヒビターの利点は、その処置が十分耐容性であり、かつ高インスリン血症のような副作用が回避されるということである。従って、一局面では、本発明は、インスリン耐性、もしくは2型糖尿病、癌について、関節リウマチ、喘息、
アレルギー、COPD、または本発明の化合物で処置可能である他の状態を有する患者を処置する方法を提供する。過剰なインスリン状態または傾向を有するこのような処置の必要な患者については、本発明の化合物は特に汎−PI3Kインヒビターを上回る利点を有する。特定の実施形態では、式IまたはI”の化合物が好ましい。なぜなら、それは、インスリンシグナル伝達に有害に影響することなく血液学的な悪性疾患を処置する治療上の利点を提供するからである。
アレルギー、COPD、または本発明の化合物で処置可能である他の状態を有する患者を処置する方法を提供する。過剰なインスリン状態または傾向を有するこのような処置の必要な患者については、本発明の化合物は特に汎−PI3Kインヒビターを上回る利点を有する。特定の実施形態では、式IまたはI”の化合物が好ましい。なぜなら、それは、インスリンシグナル伝達に有害に影響することなく血液学的な悪性疾患を処置する治療上の利点を提供するからである。
一実施形態では、本発明は、PI3K p110δを阻害する方法に関する。別の実施形態では、本発明は、PI3K p110βまたはp110γを阻害する方法に関する。
特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、オフターゲット活性をほとんど有さないか、または全く有さない。詳細には、本発明で用いられる式Iの化合物は、実施例16の表3にまとめたものを含む300を超えるプロテインキナーゼに対して活性をほとんど示さない。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、汎−PI3Kインヒビターの投与を含む方法に比較して癌患者で高インスリン血症作用を全く有さないか、または最小限しか有さない。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、Aktリン酸化を媒介する細胞を標的するのに有用である。なぜなら式Aの化合物は、Aktリン酸化を阻害するからである。このように、本発明の化合物での処置のために適切な患者は、一実施形態では、リンパ腫、白血病または多発性骨髄腫のような造血系の癌に関連するAktリン酸化の上昇を呈する患者を選択することによって選択され得る。
本明細書の方法は、オフターゲットの傾向を回避し、かつレセプターのグラムスクリーニングにおける負の結果(hERG阻害および有意なP450阻害を有さない)によって特徴付けられる。
本発明の方法の別の利点は、安全性薬理学研究で示されるように、有害な心血管系、呼吸器系または中枢神経系の効果がないことである。さらに、ラットおよびイヌにおける28日の毒性試験は、高い治療指数、例えば、NOAEL(観察可能な有害効果レベルなし(no observable adverse effect level))>>10μMを示した。これは、暴露群とその適切なコントロールとの間の毒性学的効果の頻度または重篤度において統計学的に有意な増大も生物学的に有意な増大もない、化合物の最高の実験用量である。有害効果とは、生物体丸ごとの能力に影響し得るか、または追加のチャレンジに対して生物体が応答する能力を低減する、機能障害および/または病理学的病変を生じる任意の効果として規定される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法によりリンパ節腫脹が著しく低減され、リンパ球が循環系内に強いられる。このリンパ球再分布は、悪性CLL細胞がリンパ節外の低保護環境内に置かれるという潜在的有益性を有する。特定の実施形態では、化学療法および/または免疫療法と式Aの化合物などの薬剤との共投与によりCLL細胞の死滅が増強されると同時にリンパ球増加症が低減される。
別の実施形態では、本発明の方法は、試験の標準的な集団では非遺伝毒性的である。
本発明の別の利点は、1つまたは2つのPI3Kイソ型についての化合物選択性によって、汎−PI3K阻害を有する化合物よりも改善された安全性プロフィールを生じるということである。さらに別の利点では、化合物Iは、良好な標的カバーを伴う好ましい薬物動態学的プロフィールを有し、かつグルコースまたはインスリンのレベルに対して有害な効果を有さず、かつ正常な健常ボランティアによる通常用いられる治療用量を上回る用量で十分に耐容性である。本発明の別の利点としては、本明細書の実施例に記載されるような広範な血液学的な悪性疾患を処置する能力が挙げられる。
特定の実施形態では、本発明の方法は、癌を処置することに関する。特定の実施形態では、癌とは、血液学的な悪性疾患である。特定の実施形態では、この血液学的な悪性疾患は、急性リンパ性白血病(ALL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性リンパ性白血病(CLL)、多発性骨髄腫(MM)、および非ホジキンリンパ腫(NHL)からなる群より選択される。特定の実施形態では、この非ホジキンリンパ腫は、大型びまん性B細胞リンパ腫(LDBCL)、マントル細胞リンパ腫(MCL)、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症(WM)およびリンパ形質細胞性リンパ腫からなる群より選択される。
PI3Kは、多くの血液学的な悪性疾患に関与しており、化合物Iでの処置に関する概念の前臨床的立証が確立されている。下の表は、特定の血液学的な悪性疾患および初代の患者細胞または疾患細胞株に対する作用の方法をまとめている。
適応症(効能) 式Aの化合物の効果
慢性リンパ性白血病(CLL) 初代患者細胞
アポトーシスを誘導し
生存因子をブロックする
急性骨髄性白血病(AML) 初代患者細胞
PI3Kシグナル伝達をブロックし
増殖を阻害する
急性リンパ性白血病(ALL) 細胞株
PI3Kシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
非ホジキンリンパ腫(NHL) 細胞株
(MCL、DLBCL、FL) PI3Kシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
多発性骨髄腫(MM) 初代患者細胞
24/24サンプル中でP110δが過剰発現される
アポトーシスを誘導する。
慢性リンパ性白血病(CLL) 初代患者細胞
アポトーシスを誘導し
生存因子をブロックする
急性骨髄性白血病(AML) 初代患者細胞
PI3Kシグナル伝達をブロックし
増殖を阻害する
急性リンパ性白血病(ALL) 細胞株
PI3Kシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
非ホジキンリンパ腫(NHL) 細胞株
(MCL、DLBCL、FL) PI3Kシグナル伝達をブロックし
アポトーシスを誘導する
多発性骨髄腫(MM) 初代患者細胞
24/24サンプル中でP110δが過剰発現される
アポトーシスを誘導する。
本明細書に提供されるデータによって、本発明の化合物は、リンパ腫および白血病を処置するのに有用であることが示される。リンパ腫および白血病は一般に、p110のδイソ型を選択的に発現し、例えば、図15では、p110δは、ほとんどのリンパ腫細胞株で優勢であるが、p110αは一般には観察されないことが示される。さらに、図16Aで示されるデータによって、6つの異なる白血病細胞株由来の細胞培養物が化合物Iに感受性であり、この化合物の5〜10μMの濃度で強力に影響されたことが示される。図8および9は、化合物Iがいくつかの細胞株ではAkt(Ser473)産生を減少させることを支持する。
CLLは、例えば、シグナル伝達目的のために主にp110δを産生し、かつ少ない程度でp110γを産生し、従って、p110δおよび/またはp110γを阻害する化合物は、これらの細胞に向かう選択的細胞毒性を示すことが期待される。実施例3は、用量依存性の細胞毒性を、化合物Iについて(図3)、予後の劣る患者から収集した細胞(図19)、および他のCLL処置に抵抗性であることが示された患者由来の細胞(図20)を含む、CLL細胞において示す。さらに、実施例13および図13では、28日のサイクルにわたって50mgのBIDの率でCLL患者に投与された化合物Iが有意な治療効果をもたらすことが示される。リンパ球でのALC濃度パーセントの低下が観察される。従って、一局面では、本発明では、式Aの化合物を用いる薬物耐性CLLを有するCLL患者を処置するための方法が提供される。他方では、実施例17によって、シグナル伝達についてp110αに主に依拠する線維芽細胞の細胞株は、化合物Iに感受性ではなかっ
たことが示唆される。従って、一局面では、患者の選択は、シグナル伝達についてp110αに主に依拠する癌を有する患者を排除する工程を包含し得る。
たことが示唆される。従って、一局面では、患者の選択は、シグナル伝達についてp110αに主に依拠する癌を有する患者を排除する工程を包含し得る。
式Aの化合物はまた、B細胞リンパ腫およびT細胞リンパ腫の両方を含むリンパ腫を処置するために有用である。図4のデータによって、6つの異なるALL細胞株が、化合物Iに対して感受性であって、6つの細胞株の全てで細胞生存度の有意な減少を生じたことが示される。図12および実施例12によって、28日間、50mgのBIDの化合物Iで処置したマントル細胞リンパ腫患者が、腫瘍負荷において平均44%の低下を経験したことが示される。さらに、図14では、28日のサイクルの終わりにMCL患者が50mgの用量を投与された後、正常な健常ボランティア(NHV)で観察されるレベルに対して同様の血漿レベルの化合物Iを経験した;従って、この化合物は、処置のサイクルの経過にわたって過剰に増加することもなく、患者が処置サイクルの経過にわたって代謝の増大によって耐容になることもないことが示される。
さらに、式Aまたは式Iの化合物は、Aktリン酸化活性を構成的に発現する造血系の癌を処置するために有用である。実施例8、および図8および9は、構成的Aktリン酸化を示す癌細胞株を列挙しており、この細胞株には、B細胞リンパ腫、T細胞リンパ腫、ALL、悪性組織球増殖症、DLBCLおよびAMLが挙げられる。化合物Iに対して細胞を曝すことによって、Aktリン酸化の減少が生じる。また実施例19も参照のこと、ここでは、構成的なAktリン酸化が化合物Iによって13個の細胞株のうち13個で阻害されたことが示される。
特定の実施形態では、癌は固形腫瘍である。特定の実施形態では、癌は乳癌、卵巣癌、肺癌、結腸癌または前立腺癌である。図6は、例えば、化合物Iが2つの乳癌細胞株の細胞増殖を低減することを示しており、かつ図10は、3つの異なる乳癌細胞株に対する細胞毒性を示す。同様に、図7は、化合物Iが2つの卵巣癌細胞株に対して細胞毒性であることを示す。
固形腫瘍の処置に関しては、p110βに対して良好な活性(例えば、約1μM未満、好ましくは約250nMのIC50−実施例15を参照のこと)を呈する式Aの化合物を使用することが有利である。なぜなら固形腫瘍はしばしば、p110δ以外のまたはp110δより多く、このアイソザイムを利用するからである。従って、約250nM未満というIC50を有する式Aの化合物は、固形腫瘍の処置に好ましく;化合物I、I”、II、またはII”は、本明細書に示されるように、この使用に適切である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される処置のための被験体であって、本明細書に記載される状態のうちの少なくとも1つを有すると診断された被験体は、式Aの化合物の使用によって処置可能である。いくつかの実施形態では、この被験体は、本明細書で指定された癌を有すると診断されており、かつ従来の化学療法剤の少なくとも1つでの処置に対して難治性であることが証明されている。例えば、プロテアソームインヒビター、自家幹細胞移植、CHOPレジメン、リツキシマブ、フルダラビン、アレムツズマブ、従来の抗癌ヌクレオシドアナログ、およびアルキル化剤などの処置に対する応答に失敗した患者は、本明細書に記載される処置の方法に応答することが多い。従って、一実施形態では、本発明の処置は、このような処置の1つもしくは2つ以上を受けている患者に関する。
特定の実施形態では、本発明の方法は、B細胞、またはBリンパ球、関連の疾患に関する。B細胞は、自己免疫疾患の病因においてある役割を果たす。
式Aの化合物(特に、式I、I”、IIおよびII”)は、本明細書に記載される状態
、特にヒトの血液学的な癌を有する種々の被験体を処置するのに適切である。いくつかの実施形態では、この被験体は、血液学的な悪性疾患の処置について選択された被験体であって、他の処置後に再発を経験しているか、または他の処置に不応性である被験体である。いくつかの実施形態では、この被験体は、他の癌薬物に対して抵抗性である血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、高レベルのp110δ活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、比較的低レベルのp110α活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、Aktリン酸化活性を構成的に発現する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。
、特にヒトの血液学的な癌を有する種々の被験体を処置するのに適切である。いくつかの実施形態では、この被験体は、血液学的な悪性疾患の処置について選択された被験体であって、他の処置後に再発を経験しているか、または他の処置に不応性である被験体である。いくつかの実施形態では、この被験体は、他の癌薬物に対して抵抗性である血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、高レベルのp110δ活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、比較的低レベルのp110α活性を呈する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。いくつかの実施形態では、この被験体は、Aktリン酸化活性を構成的に発現する血液学的な悪性疾患の処置について選択される。
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の式Aの化合物を被験体に対して、癌を処置するために用いられる治療と組み合わせて施す工程を包含する。「治療、療法(therapy)」または「処置」とは、本明細書において用いる場合、式Aの化合物の使用を包含しない、癌を処置するために用いられる任意の周知の従来のまたは実験的な処置形態による癌の処置である。特定の実施形態では、式Aの化合物と癌または自己免疫疾患を処置するために用いられる従来のまたは実験的な治療との組み合わせによって、この併用なしでの処置によって得られる結果を上回る有益および/または所望の処置結果が得られる。特定の実施形態では、癌を処置するために用いられる治療は、当業者に周知であって、文献中に記載されている。治療(療法)としては、限定するものではないが、化学療法、化学療法の組み合わせ、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ならびにモノクローナル抗体およびワクチンの使用が挙げられる。
前述の実施形態のいくつかでは、併用方法は、式Aの化合物を治療の投与期間と同時にまたはその間に与える。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、他の化学療法処置と同時に投与される。特定の実施形態では、この併用方法は、式Aの化合物を、治療を施す前後に投与する。
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも1つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも2つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも3つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、少なくとも4つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のa〜qに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも1つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のa〜qに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも2つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のa〜qに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも3つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
前述の実施形態のいくつかでは、この被験体は、フルダラビン、リツキシマブ、アルキル化剤、アレムツズマブおよび上記のa〜qに列挙された化学療法の処置からなる群より選択される少なくとも4つの標準的または実験的な化学療法に対して不応性である。
この併用投与に関する正確な詳細は、実験的に決定され得る。式Aの化合物と選択された療法との投与の順序およびタイミングの洗練は、個々の被験体、その被験体で処置される状態の性質、および一般には、担当する医師の判定に対して調整する。
実験的または標準的な治療の非限定的な例は、下に記載される。さらに、特定のリンパ腫の処置は、Cheson,B.D.,Leonard,J.P.,「Monoclonal Antibody Therapy for B−Cell Non−Hodgkin’s Lymphoma」The New England Journal of
Medicine 2008,359(6),第613〜626頁;ならびにWierda,W.G.,「Current and Investigational Therapies for Patients with CLL」Hematology 2006,第285〜294頁に概説されている。米国でのリンパ腫の頻度のパターンは、Morton,L.M.,ら、「Lymphoma Incidence Patterns by WHO Subtype in the United States,1992〜2001」Blood 2006,107(1),第265〜276頁に概説されている。
Medicine 2008,359(6),第613〜626頁;ならびにWierda,W.G.,「Current and Investigational Therapies for Patients with CLL」Hematology 2006,第285〜294頁に概説されている。米国でのリンパ腫の頻度のパターンは、Morton,L.M.,ら、「Lymphoma Incidence Patterns by WHO Subtype in the United States,1992〜2001」Blood 2006,107(1),第265〜276頁に概説されている。
非ホジキンリンパ腫、特にB細胞由来のリンパ腫の処置としては限定するものではないが、モノクローナル抗体の使用、標準的な化学療法アプローチ(例えば、CHOP、CVP、FCM、MCPなど)、放射免疫療法、およびそれらの組み合わせ、特に化学療法を組み込んだ抗体療法が挙げられる。
非ホジキンリンパ腫/B細胞癌のための結合体化されていないモノクローナル抗体の非限定的な例としては、リツキシマブ、アレムツズマブ、ヒトまたはヒト化抗CD20抗体、ルミリキシマブ、抗TRAIL、ベバシヅマブ、ガリキシマブ、エプラツズマブ、SGN−40、および抗CD74が挙げられる。非ホジキンリンパ腫/B細胞癌の処置に用いられる実験的な抗体剤の非限定的な例としては、オファツムマブ(ofatumumab)、ha20、PRO131921、アレムツズマブ、ガリキシマブ、SGN−40、CHIR−12.12、エプラツズマブ、ルミリキシマブ、アポリズマブ、ミラツズマブおよびベバシズマブが挙げられる。任意のモノクローナル抗体を、リツキシマブ、フルダラビン、または化学療法剤/レジメンと組み合わせてもよい。
非ホジキンリンパ腫/B細胞癌のための化学療法の標準的なレジメンの非限定的な例としては、CHOP(シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン)、FCM(フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン)、CVP(シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン)、MCP(ミトキサントロン、クロラムブシル、およびプレドニゾロン)、R−CHOP(リツキシマブに加えてCHOP)、R−FCM(リツキシマブに加えてFCM)、R−CVP(リツキシマブに加えてCVP)、およびR−MCP(R−MCP)が挙げられる。
非ホジキンリンパ腫/B細胞癌の放射免疫療法の非限定的な例としては、イットリウム−90−標識イブリツモマブチウキセタン、およびヨウ素−131−標識トシツモマブが挙げられる。これらの治療剤は、再発または不応性の濾胞性または低悪性度リンパ腫の被験体での使用について承認されている。
マントル細胞リンパ腫の治療的な処置としては、併用化学療法、例えば、CHOP(シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン)、ハイパーCVAD(多分割シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメタゾン、メトトレキサート、シタラビン)、およびFCM(フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン)が挙げられる。さらにこれらのレジメンは、併用療法R−CHOP、ハ
イパーCVAD−R、およびR−FCMを形成するためにモノクローナル抗体リツキシマブ(Rituxan)を用いて補充されてもよい。他のアプローチとしては、任意の上述の治療と幹細胞移植と、またはICE(イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド)での処置とを組み合わせることが挙げられる。
イパーCVAD−R、およびR−FCMを形成するためにモノクローナル抗体リツキシマブ(Rituxan)を用いて補充されてもよい。他のアプローチとしては、任意の上述の治療と幹細胞移植と、またはICE(イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド)での処置とを組み合わせることが挙げられる。
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、Rituximab(Rituxan)のようなモノクローナル抗体を用いる免疫療法が挙げられる。リツキシマブはまた、他の低悪性度B細胞癌、例としては、辺縁帯リンパ腫、WM、CLLおよび小リンパ球性リンパ腫に対しても有効である。リツキシマブおよび化学療法剤の併用は、特に、有効である。改変されたアプローチは、放射免疫療法であって、ここではモノクローナル抗体が、放射性同位体粒子、例えば、ヨウ素−131トシツモマブ(Bexxar(登録商標))およびイットリウム−90イブリツモマブチウキセタン(Zevalin(登録商標))と組み合わされる。別の例では、Bexxar(登録商標)が、CHOPでの逐次的処置に用いられる。別の免疫療法の例としては、個々の患者の腫瘍の遺伝的体質に基づく癌ワクチンの使用が挙げられる。リンパ腫ワクチンの例は、GTOP−99(MyVax(登録商標))である。
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、高用量化学療法と組み合わせた自家幹細胞移植が挙げられる。
マントル細胞リンパ腫を処置する別のアプローチとしては、プロテアソームインヒビター、例えば、Velcade(登録商標)(ボルテゾミブまたはPS−341)、または抗血管形成剤、例えば、サリドマイドを、特にリツキサンと組み合わせて投与することが挙げられる。別の処置アプローチは、Bcl−2タンパク質の分解をもたらし、かつ他の化学療法剤と組み合わせた化学療法、例えば、オブリメルセン(Genasense)に対する癌細胞の感受性を増大する薬物の投与である。別の処置アプローチとしては、細胞増殖の阻害およびさらに細胞死さえもたらし得るmTORインヒビターの投与が挙げられる;非限定的な例は、テムシロリムス(Temsirolimus)(CCI−779)、およびテムシロリムスとRituxan(登録商標)、Velcade(登録商標)または他の化学療法剤との組み合わせである。
MCLの他の近年の療法が開示されている(Nature Reviews;Jares,P.2007)。非限定的な例としては、フラボピリドール(Flavopiridol)、PD0332991、R−ロスコビチン(roscovitine)(Selicilib,CYC202)、スチリル・スルホン(Styryl sulphones)、オバトクラックス(Obatoclax)(GX15−070)、TRAIL、抗TRAIL DR4およびDR5抗体、テムシロリムス(Temsirolimus)(CCl−779)、エベロリムス(Everolimus)(RAD001)、BMS−345541、クルクミン(Curcumin)、ボリノスタット(Vorinostat)(SAHA)、サリドマイド(Thalidomide)、レナリドマイド(lenalidomide)(Revlimid(登録商標)、CC−5013)、およびゲルダナマイシン(Geldanamycin)(17−AAG)が挙げられる。
ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を処置するために用いられる、他の治療剤の非限定的な例としては、ペリホシン、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、キャンパス(campath)−1H、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2−1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、プレド
ニゾン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン(tanespimycin)、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド(fenretinide)、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I−131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、およびPEG化リポソームドキソルビシンヒドロクロリド、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
ニゾン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン(tanespimycin)、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド(fenretinide)、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I−131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、およびPEG化リポソームドキソルビシンヒドロクロリド、ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)薬物療法を処置するために用いられる他の治療剤の非限定的な例(Blood 2005 Abramson,J.)としては、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、抗CD20モノクローナル抗体、エトポシド、ブレオマイシン、ワルデンシュトレームのため列挙される多くの剤、およびそれらの任意の組み合わせ、例えば、ICEおよびR−ICEが挙げられる。
ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を処置するために用いられる治療手順の非限定的な例としては、末梢血幹細胞移植、自家造血幹細胞移植、自家骨髄移植、抗体療法、生物学的療法、酵素インヒビター療法、全身照射、幹細胞の注入、幹細胞支持による骨髄アブレーション、インビトロ処理した末梢血幹細胞移植、臍帯血移植、免疫酵素技術、薬理学的研究、低−LETコバルト−60ガンマ線療法、ブレオマイシン、従来の手術、放射線療法、および骨髄非破壊的同種異系造血幹細胞移植が挙げられる。
慢性リンパ性白血病を処置するために用いられる他の治療剤の非限定的な例(Spectrum,2006,Fernandes,D.)としては、クロラムブシル(Leukeran)、シクロホスファミド(Cyloxan,Endoxan,Endoxana,Cyclostin)、フルダラビン(Fludara)、ペントスタチン(Nipent)、クラドリビン(Leustarin)、ドキソルビシン(Adriamycin(アドリアマイシン)(登録商標)、アドリブラスチン(Adriblastine))、ビンクリスチン(Oncovin)、プレドニゾン、プレドニゾロン、アレムツズマブ(Campath,MabCampath)、ワルデンシュトレームのために列挙される多くの剤、ならびに化学療法および化学免疫療法の組み合わせ、例としては、共通の併用レジメン:CVP(シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン);R−CVP(リツキシマブ−CVP);ICE(イホスファミド、カルボプラチン、エトポシド);R−ICE(リツキシマブ−ICE);FCR(フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ);ならびにFR(フルダラビン、リツキシマブ)が挙げられる。
特定の実施形態では、上記方法は、上記患者に対してIまたはIIの化合物に加えて、治療有効量の少なくとも1つの治療剤および/または上記患者の上記癌を処置するために選択される治療手順を投与するステップを含む。特定の実施形態では、上記方法は、上記患者に対してIまたはIIの化合物に加えて、a)ベンダムスチン;b)リツキシマブ;c)ベンダムスチンおよびリツキシマブ;d)オファツムマブ;ならびにe)レナリドマイドからなる群より選択される治療剤の治療有効量の組み合わせを投与するステップを含む。
本発明の化合物は、当該分野で周知の一般に理解される処方技術を用いて動物被験体への投与のために処方され得る。特定の投与方式に、かつ式Aの化合物に適切な処方物は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,最終版,Mack Publishing Company,Easton,PAに見出され得る。
本発明の化合物は、プロドラッグ型、すなわち、被験体に対する投与後、本発明の化合物を放出する保護型で調製され得る。代表的には、保護基は、血流中のような体液中で加水分解され、それによって活性な化合物を放出するか、またはインビボで酸化もしくは還元されて、活性化合物を放出する。プロドラッグの考察は、Smith and Williams Introduction to the Principles of
Drug Design,Smith,H.J.;Wright,第2版、London(1988)に見出される。
Drug Design,Smith,H.J.;Wright,第2版、London(1988)に見出される。
本発明の化合物は、ニートな化合物として投与され得るが、代表的には、薬学的組成物または処方物の形態でこの化合物を投与することが好ましい。従って、本発明はまた、式Aの化合物と、生体適合性の薬学的なキャリア、アジュバント、またはビヒクルを含む薬学的組成物を提供する。この組成物は、式Aの化合物を、唯一の活性部分として、または他の因子、例えば、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド、オリゴペプチドまたはポリペプチド、薬物またはホルモンとの組み合わせで、賦形剤(単数または複数)もしくは他の薬学的に許容され得るキャリアと混合して含んでもよい。キャリアおよび他の成分は、それらがその処方物の他の成分と適合性であり、かつそのレシピエントに有害でない限り、薬学的に許容され得るとみなしてもよい。
薬学的組成物は、適切な薬学的に許容され得るキャリアを含むように処方され、かつ必要に応じて、薬学的に用いられ得る調製物中に活性化合物を処理することを容易にする賦形剤および補助剤を含んでもよい。投与方式が一般には、キャリアの性質を決定する。例えば、非経口投与のための処方物は、水溶性型の活性化合物の水溶液を含んでもよい。非経口投与に適切なキャリアは、なかでも、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水および他の生理学的に適合性の溶液から選択され得る。非経口投与のための好ましいキャリアは、生理学的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンゲル液、または生理学的緩衝化生理食塩水である。組織または細胞投与のために、特定の障壁を浸透するために適切な浸透剤が処方物中で用いられる。このような浸透剤は一般には、当該分野で公知である。タンパク質を含む調製物に関しては、処方は、ポリオール(例えば、スクロース)および/またはサーファクタント(例えば、非イオン性サーファクタント)などのような安定化材料を包含し得る。
あるいは、非経口用途のための処方物は、適切な油状の注射懸濁剤として調製される活性化合物の分散または懸濁物を含んでもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えば、ゴマ油、および合成の脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。水性の注射懸濁剤は、この懸濁剤の粘度を増大する物質、例えば、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソル
ビトールまたはデキストランを含んでもよい。必要に応じて、この懸濁剤はまた、適切な安定化剤、またはその化合物の溶解度を増大して、高濃縮溶液の調製を可能にする因子を含んでもよい。活性剤のpH感受性の溶解および/または徐放性の放出をもたらす水性ポリマーはまた、コーティングまたはマトリックス構造物、例えば、メタクリル酸ポリマー、例えば、Eudragit(登録商標)シリーズ(Rohm America Inc.(Piscataway,N.J.)から入手可能)として用いられ得る。エマルジョン、例えば、水中油型分散、および油中水型分散もまた用いられてもよく、必要に応じて、乳化剤また分散剤(界面活性剤;サーファクタント)によって安定化されてもよい。懸濁剤は、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、ガム・トラガカントならびにそれらの混合物を含んでもよい。
ビトールまたはデキストランを含んでもよい。必要に応じて、この懸濁剤はまた、適切な安定化剤、またはその化合物の溶解度を増大して、高濃縮溶液の調製を可能にする因子を含んでもよい。活性剤のpH感受性の溶解および/または徐放性の放出をもたらす水性ポリマーはまた、コーティングまたはマトリックス構造物、例えば、メタクリル酸ポリマー、例えば、Eudragit(登録商標)シリーズ(Rohm America Inc.(Piscataway,N.J.)から入手可能)として用いられ得る。エマルジョン、例えば、水中油型分散、および油中水型分散もまた用いられてもよく、必要に応じて、乳化剤また分散剤(界面活性剤;サーファクタント)によって安定化されてもよい。懸濁剤は、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、ガム・トラガカントならびにそれらの混合物を含んでもよい。
式Aの活性化合物を含むリポソームがまた、非経口投与のために使用され得る。リポソームは一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソーム型の組成物はまた、他の成分、例えば、安定化剤、防腐剤、賦形剤などを含んでもよい。好ましい脂質としては、リン脂質およびホスファチジルコリン(レシチン)(天然および合成の両方)が挙げられる。リポソームを形成する方法は、当該分野で公知である。例えば、Prescott(編集),Methods in Cell Biology,Vol.XIV,33頁,Academic Press,New York(1976)を参照のこと。
経口投与に適切な投薬量中に式Aの化合物を含む薬学的組成物は、当該分野で周知の薬学的に許容され得るキャリアを用いて処方され得る。経口投与のために処方される調製物は、錠剤、丸剤、カプセル(capsules)、カシェ剤(cachets)、糖衣錠(dragees)、トローチ剤(lozenges)、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、エリキシル剤、懸濁剤または粉剤(散剤)の形態であり得る。例えば、経口用途のための薬学的調製物は、活性化合物と固体賦形剤とを合わせること、必要に応じて、得られた混合物を破砕すること、および必要に応じて適切な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理することによって得て、錠剤または糖衣錠コアを得てもよい。経口処方物は、非経口使用のために記載されたもの、例えば、緩衝化水溶液、懸濁液などに対して同様の種類の液体キャリアを使用してもよい。
好ましい経口処方物としては、錠剤、糖衣錠およびゼラチンカプセルが挙げられる。これらの調製物は、1つ以上の賦形剤を含み、賦形剤としては限定するものではないが、以下が挙げられる:
a)希釈剤、例えば、糖、例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール;
b)結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモ由来のデンプンなど;
c)セルロース材料、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ゴム、例えば、アラビアゴム、およびトラガカント・ゴム、ならびにタンパク質、例えば、ゼラチンおよびコラーゲン;
d)崩壊剤または可溶化剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、デンプン、寒天、アルギン酸、またはそれらの塩、例えば、アルギン酸ナトリウムまたは発泡性組成物;
e)滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸またはそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、およびポリエチレングリコール;
f)香味料および甘味料;
g)着色料または色素(例えば、活性化合物の産物を特定するか、またはその量(投薬量)を特徴付ける);ならびに
h)他の成分、例えば、防腐剤、安定化剤、膨張剤、乳化剤、溶液促進剤、浸透圧調節のための塩、および緩衝剤。
a)希釈剤、例えば、糖、例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール;
b)結合剤、例えば、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、トウモロコシ、コムギ、イネ、ジャガイモ由来のデンプンなど;
c)セルロース材料、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ポリビニルピロリドン、ゴム、例えば、アラビアゴム、およびトラガカント・ゴム、ならびにタンパク質、例えば、ゼラチンおよびコラーゲン;
d)崩壊剤または可溶化剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、デンプン、寒天、アルギン酸、またはそれらの塩、例えば、アルギン酸ナトリウムまたは発泡性組成物;
e)滑沢剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸またはそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、およびポリエチレングリコール;
f)香味料および甘味料;
g)着色料または色素(例えば、活性化合物の産物を特定するか、またはその量(投薬量)を特徴付ける);ならびに
h)他の成分、例えば、防腐剤、安定化剤、膨張剤、乳化剤、溶液促進剤、浸透圧調節のための塩、および緩衝剤。
いくつかの好ましい経口処方物では、薬学的組成物は、上記の(a)群由来の少なくとも1つの物質、または上記の(b)群由来のなくとも1つの物質、または上記の(c)群由来の少なくとも1つの物質、または上記の(d)群由来のなくとも1つの物質、または上記の(e)群由来の少なくとも1つの物質を含む。好ましくはこの組成物は、上記の(a)〜(e)の群から選択される2つの群の各々に由来する少なくとも1つの物質を含む。
ゼラチンカプセルとしては、ゼラチン製の押し込み式(push−fit)カプセル、ならびにゼラチンおよびコーティング、例えば、グリセロールまたはソルビトール製の軟性、密閉カプセルが挙げられる。押し込み式カプセルは、充填剤、結合剤、滑沢剤および/または安定化剤などと混合された活性成分を含んでもよい。軟性カプセルでは、活性化合物は、適切な液体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール(安定化剤は有無)中に溶解されてもまたは懸濁されてもよい。
糖衣錠コアは、適切なコーティング、例えば、濃縮糖溶液で提供されてもよく、この溶液はまた、アラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。
薬学的組成物は、活性化合物の塩として提供され得る。塩は、水性または他のプロトン性溶媒中で、対応する遊離の酸または塩基型よりも可溶性である傾向である。薬学的に許容され得る塩は当該分野で周知である。酸性部分を含む化合物は、適切な陽イオンと薬学的に許容され得る塩を形成し得る。適切な薬学的に許容され得る陽イオンとしては、例えば、アルカリ金属(例えば、ナトリウムまたはカリウム)、およびアルカリ土類(例えば、カルシウムまたはマグネシウム)陽イオンが挙げられる。
塩基部分を含む構造式(A)の化合物は、適切な酸と薬学的に許容され得る酸付加塩を形成し得る。例えば、Bergeらは、J Pharm Sci,66:1(1977)に詳細に薬学的に許容され得る塩を記載する。この塩は、本発明の化合物の最終の単離および精製の間インサイチュで調製されてもよく、適切な酸と遊離塩基官能基との反応によって別々に調製されてもよい。
代表的な酸付加塩としては限定するものではないが、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩(hemisulfate)、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2−ヒドロキシエタンスルホン酸塩(イソチオネート)、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩または硫酸塩、ニコチン酸塩、2−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチニン酸塩、過硫酸塩、3−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、リン酸塩、またはリン酸水素塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、p−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩が挙げられる。薬学的に許容され得る酸付加塩を形成するために使用され得る酸の例としては、限定するものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸のような無機酸、ならびにシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸のような有機酸が挙げられる。
塩基性の窒素含有基は、低級アルキルハロゲン化物、例えば、メチル、エチル、プロピ
ル、およびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物;硫酸ジアルキル、例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルの硫酸塩;長鎖アルキルハロゲン化物、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物;アリールアルキルハロゲン化物、例えば、ベンジルおよびフェネチルの臭化物;などのような因子で四級化され得る。溶解度または分散性が改変されている産物がそれによって得られる。
ル、およびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物;硫酸ジアルキル、例えば、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルの硫酸塩;長鎖アルキルハロゲン化物、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルの塩化物、臭化物およびヨウ化物;アリールアルキルハロゲン化物、例えば、ベンジルおよびフェネチルの臭化物;などのような因子で四級化され得る。溶解度または分散性が改変されている産物がそれによって得られる。
薬学的に許容され得るキャリア中で処方される本発明の化合物を含む組成物は、調製され、適切な容器に入れられ、そして示された状態の処置について表示され得る。従って、ある剤形の本発明の化合物およびその化合物の使用のための説明を含む表示を備える容器などの製品も想定される。キットもまた本発明のもとで想定される。例えば、キットは、ある剤形の薬学的組成物と、医学的状態の処置における組成物の使用のための指示を含む添付文書とを備えてもよい。いずれかの場合、この表示に示される状態としては、炎症性障害、癌などの処置を挙げることができる。
投与の方法
式Aの化合物を含む薬学的組成物は、非経口技術および腸内技術を含む、任意の従来の方法によって被験体に投与され得る。非経口の投与方式としては、胃腸管以外の経路、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、筋肉内、関節内、くも膜下腔内、および脳室内の注射を通じて組成物が投与される投与方式が挙げられる。腸内投与方式としては、例えば、経口(口腔内および舌下を含む)および直腸投与が挙げられる。経上皮投与方式としては、例えば、経粘膜投与および経皮投与が挙げられる。経粘膜投与としては、例えば、腸内投与、ならびに経鼻投与、吸入および深部肺投与;膣投与;ならびに直腸投与が挙げられる。経皮投与としては、受動的または能動的な経皮性(transdermal)または経皮的(transcutaneous)方式が挙げられ、これには、例えば、パッチおよびイオン導入デバイス、ならびにペースト、軟膏(salves)または軟膏(ointments)の局所塗布が挙げられる。非経口投与はまた、高圧技術、例えば、POWDERJECT(商標)を用いて達成されてもよい。
式Aの化合物を含む薬学的組成物は、非経口技術および腸内技術を含む、任意の従来の方法によって被験体に投与され得る。非経口の投与方式としては、胃腸管以外の経路、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、髄内、筋肉内、関節内、くも膜下腔内、および脳室内の注射を通じて組成物が投与される投与方式が挙げられる。腸内投与方式としては、例えば、経口(口腔内および舌下を含む)および直腸投与が挙げられる。経上皮投与方式としては、例えば、経粘膜投与および経皮投与が挙げられる。経粘膜投与としては、例えば、腸内投与、ならびに経鼻投与、吸入および深部肺投与;膣投与;ならびに直腸投与が挙げられる。経皮投与としては、受動的または能動的な経皮性(transdermal)または経皮的(transcutaneous)方式が挙げられ、これには、例えば、パッチおよびイオン導入デバイス、ならびにペースト、軟膏(salves)または軟膏(ointments)の局所塗布が挙げられる。非経口投与はまた、高圧技術、例えば、POWDERJECT(商標)を用いて達成されてもよい。
外科的技術としては、デポ(リザーバー)組成物の移植、浸透圧ポンプなどが挙げられる。炎症の処置のための好ましい投与経路は、局所化障害、例えば、関節炎のための局所もしくは局部の送達、または分布した障害のための全身送達、例えば、再灌流傷害のためもしくは敗血症のような全身性の状態のための静脈内送達であってもよい。呼吸器に関与する疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患、喘息および肺気腫を含む他の疾患に関しては、投与は、スプレー、エアロゾル、粉末などの吸入または深部肺投与によって達成され得る。
前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、化学療法、放射線療法、および/または手術の前、間または後に投与される。選択される処方物および投与の経路は、個々の被験体、その被験体で処置されるべき状態の性質、および一般には担当医の判定に対して調整する。
式Aの化合物の治療指数は、細胞をそのようなものとして特定するマーカーを発現する癌細胞に対する標的化送達のために化合物を修飾または誘導体化することによって増強され得る。例えば、化合物は、癌細胞に対して選択的であるかまたは特異的であるマーカーを認識する抗体に連結されてもよく、その結果この化合物は、前に記載されたように、細胞の近傍にもたらされてその効果を局所的に発揮する(例えば、Pietersz,ら、Immunol Rev,129:57(1992);Trail,ら、Science,261:212(1993);およびRowlinson−Busza,ら、Curr
Opin Oncol,4:1142(1992)を参照のこと)。これらの化合物の腫瘍指向性の送達は、とりわけ、放射線療法または化学療法から生じ得る、潜在的な非特
異的毒性を最小化することによって治療利益を増強する。別の局面では、式Aの化合物および放射性同位体または化学療法剤は、同じ抗腫瘍抗体に結合体化されてもよい。
Opin Oncol,4:1142(1992)を参照のこと)。これらの化合物の腫瘍指向性の送達は、とりわけ、放射線療法または化学療法から生じ得る、潜在的な非特
異的毒性を最小化することによって治療利益を増強する。別の局面では、式Aの化合物および放射性同位体または化学療法剤は、同じ抗腫瘍抗体に結合体化されてもよい。
この因子自体およびこの因子の処方物の特徴は、投与される因子の物理的状態、安定性、インビトロ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響し得る。このような薬物動態学的および薬理学的情報は、前臨床のインビトロおよびインビボの研究を通じて収集され得、その後、臨床試験の経過の間にヒトで確認される。従って、本発明の方法で用いられる任意の化合物について、治療有効用量は、生化学的および/または細胞ベースのアッセイから最初に見積もられ得る。次に、投薬量は、特定のPI3Kイソ型またはイソ型の組み合わせの発現または活性を調節する所望の循環濃度範囲を達成するように動物モデルで処方され得る。ヒトの研究を行う場合、種々の疾患および状態についての適切な投薬レベルおよび処置の期間に関してさらなる情報が出現する。
本発明の化合物は十分耐容されるが、処置用量の限界の例は、肝機能試験(LFT)の上昇である。LFTは、患者の肝臓の状態に関する情報を得るための、患者の血清または血漿に対する標準的な臨床生化学的試験を含む。アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、ビリルビンおよびγグルタミルトランスペプチダーゼのようなレベルが正常範囲外であれば、潜在的な肝毒性が警告され得る。治療化合物の投薬は、肝機能試験値の上昇および肝毒性についての引き続く可能性を回避するかまたは低減するように調節され得る。例えば、被験体は、漸増用量の化合物を投与され得る。特定の投与量では、被験体は、正常範囲外のLFTレベルの上昇を始め、これがその投薬量での潜在的な肝毒性を警告する。応答において、この投薬量は、処置医が判定して許容できる範囲までLFTレベルが減少される(例えば、処置されている被験体について正常な範囲内、または正常の約25%〜50%の範囲内であるレベル)ような量まで減少され得る。従って、肝機能試験を用いて、化合物の投薬量を滴定してもよい。
このような化合物の毒性および治療有効性は、例えば、LD50(集団の50%致死用量)およびED50(集団の50%の治療有効用量)を決定するための細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性効果と治療効果との間の用量比は、「治療指数」であって、これは代表的には、LD50/ED50の比として表現される。大きい治療指数を呈する(すなわち毒性用量が実質的に有効用量より高い)化合物が好ましい。このような細胞培養アッセイおよび追加の動物試験から得られるデータが、ヒトでの使用のためにある範囲の投薬量を処方するのに用いられ得る。このような化合物の投薬量は好ましくは、毒性がほとんどないか全くないED50を含む、ある範囲の循環濃度内である。
投薬量は、処置関連の毒性症状によって制限され得る。肝機能試験の上昇以外のこのような症状としては、貧血、かすみ目、下痢、嘔吐、疲労、粘膜炎、末梢浮腫、発熱(pyrexia)、末梢神経障害、胸膜滲出、寝汗および起座呼吸、またはそれらの組み合わせが挙げられる。特定の用量では、被験体がこのような症状のうち耐容できないレベルを生じる場合、この投薬量は、処置医が判断して、有害事象が排除され、もう有害事象がないか、または許容できるレベルまで低下されるように低下され得る。
患者にとって化合物の適切な用量を決定するのにおける別の考慮は、血漿中で所望の濃度が循環することである。特定の実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLである。別の特定の実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって75〜2,000ng/mLである。別の特定の実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって500〜2,000ng/mLである。好ましい実施形態では、血中のこの化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLであり、
ここでこの化合物は、I、I”、IIまたはII”の式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLであり、ここでこの化合物は、Iの式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLであり、ここでこの化合物は、IIの式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。前述の実施形態のいくつかでは、血漿中の最大濃度は、投与の2時間内に達成される。
ここでこの化合物は、I、I”、IIまたはII”の式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLであり、ここでこの化合物は、Iの式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。好ましい実施形態では、血中の化合物の濃度は、投与の時点から12時間にわたって40〜3,000ng/mLであり、ここでこの化合物は、IIの式であり、かつ約50mg、100mg、150mgまたは200mgの量で経口投与される。前述の実施形態のいくつかでは、血漿中の最大濃度は、投与の2時間内に達成される。
特定の実施形態では、式IまたはIIの化合物の投薬量は、平均で、8〜12時間の期間にわたって、約10nM以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約500nM以上、好ましくは約1000nM以上というピーク血漿濃度を得るように選択される。特定の実施形態では、式IまたはIIの化合物の投薬量は、平均で、8〜12時間の期間にわたって、約100nM以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約500nM以上、好ましくは約1000nM以上というピーク血漿濃度を得るように選択される。特定の実施形態では、式IまたはIIの化合物の投薬量は、平均で、8〜12時間にわたって、約200nM以上という薬物の血漿濃度を生じるように、および約500nM以上、好ましくは約1000nM以上のピーク血漿濃度を得るように選択される。
特定の実施形態では、式Iまたは式IIの化合物の投薬量は、この化合物のトラフ濃度が癌細胞のアポトーシスのような治療効果が観察される範囲である血漿濃度を生じるように選択される。特定の実施形態では、式Iまたは式IIの化合物の投薬量は、血漿中のPI3Kδイソ型活性化のEC50以上のトラフ血漿濃度を生じるように選択される。特定の実施形態では、式Iまたは式IIの化合物の投薬量は、化合物投与から少なくとも12時間の間、細胞中でPI3Kδ活性化のEC50レベルを超え、かつPI3Kγ活性化のEC50を下回るトラフ血液濃度を生じるように選択される。例えば、全血漿中で、PI3Kδ好塩基球活性化のEC50値が65nMであり、かつPI3Kγ好塩基球活性化のEC50値が1100nMであるならば、選択される化合物の投薬量は、化合物投与から8〜12時間の間、60nM〜1100nMという化合物のトラフ血漿濃度をもたらす。同様に、投薬量は、PI3Kδ好塩基球活性化のEC50レベルを超え、PI3K−α、−βまたは−γ好塩基球活性化のEC50レベルを下回るトラフ血液濃度を生じるように選択され得る。インビボにおけるPI3Kイソ型活性化または阻害のためのEC50値は、当業者によって決定され得る。別の実施形態では、薬物のトラフ濃度の上限は突破し得、血漿中のPI3K−γ、−α、または−βイソ型のEC50値によっては限定されない。さらに、薬物の血液濃度範囲は、望ましくない副作用を最小化しながら、血液学的な悪性疾患を処置するのに治療上有益であるレベルである。
例えば、δ−選択的であるが、この化合物は、p110γに十分な活性を示して臨床的に有用であり得、すなわち、シグナル伝達についてp110γに依拠する癌に対して有効であり得る。なぜなら、p110γの阻害について有効用量を超える血漿レベルは、他のイソ型、特にαイソ型に対して選択的であるままで達成され得るからである。従って、いくつかの実施形態では、この化合物の投薬量は、p110δおよびp110γを選択的に阻害するために有効な血液濃度を生じるように選択される。
いくつかの実施形態では、この化合物の投薬量は、化合物投与から8〜12時間の期間の間、65nM〜1100nMというトラフ血漿濃度をもたらす。前述の実施形態のいくつかでは、この期間とは、化合物投与から少なくとも12時間である。
特定の実施形態では、この化合物は、治療上有効な量で投与される。
特定の実施形態では、この化合物は、20〜500mg/日の用量で投与される。特定の実施形態では、この化合物は、50〜250mg/日の用量で投与される。
特定の実施形態では、この化合物は、1用量あたり25〜150mgの用量で投与され、2つの用量は、1日あたりで投与される(例えば、25〜150mgの用量でのBID投薬)。好ましい実施形態では、被験体は、1日あたり2回50mg〜100mgという式Aの化合物で処置される。他の好ましい実施形態では、被験体は、1日あたり2回150mgの式Aの化合物で処置される。
特定の実施形態では、この方法は、この患者に対して、20〜500mgというこの化合物の初回1日用量を投与する工程と、臨床的な有効性が達成されるまでこの用量を一定量ずつ漸増する工程とを包含する。約25、50、100、または150mgという増分が用量を増大するために用いられ得る。この投薬量は、毎日、1日おき、週に2回、または週に1回増大され得る。
特定の実施形態では、この方法は、臨床有効性が達成される、この化合物の同じ用量を投与することによってこの患者を処置し続ける工程、または有効性が維持され得るレベルまで一定量ずつこの用量を減少させる工程を包含する。
特定の実施形態では、この方法は、この患者に対して、20〜500mgというこの化合物の初回1日用量を投与する工程と、少なくとも6日間にわたってこの用量を1日あたり50〜400mgの総投薬量まで漸増することを包含する。必要に応じて、この投薬量は、約750mg/日までさらに増大され得る。
特定の実施形態では、この化合物は、毎日少なくとも2回投与される。
特定の実施形態では、この化合物は、経口的に、静脈内にまたは吸入によって投与される。好ましくは、この化合物は、経口的に投与される。いくつかの実施形態では、これは、約50mgという投薬量で経口的にBID、約100mgという投薬量で経口的にBID、または約150mgという投薬量で経口的にBID投与される。
本発明の方法に関しては、用量のタイミングおよび順序を調節する任意の有効なレジメンを用いてもよい。この因子の投与量は好ましくは、この因子の有効量を含む薬学的な投与量の単位を含む。本明細書において用いる場合、「有効量」とは、PI3Kδの発現もしくは活性を調節するか、および/または1つ以上の薬学的な投薬単位の投与を通じて被験体の生理学的パラメーターにおける測定可能な変化を誘導するのに十分な量を指す。「有効量」とはまた、被験体における疾患または障害を緩和するのに必要な量を指す場合もある。
式Aの化合物の適切な投薬範囲は、これらの考慮によって変化するが、一般には、この化合物は、体重あたり10.0μg/kg〜15mg/kg;体重あたり1.0μg/kg〜10mg/kg、または体重あたり0.5mg/kg〜5mg/kgという範囲で投与される。代表的な70kgヒト被験体に関しては、従って、投薬範囲は1用量あたり700μg〜1050mg;70μg〜700mg;または35mg〜350mgであり、および2用量以上が1日あたりに投与されてもよい。投薬量は、この化合物が、経口的にまたは経皮的に投与される場合、例えば、i.v.投与に比較して高くてもよい。式Aの化合物の毒性の低下によって、比較的高用量という治療投与が可能になる。前述の実施形態のいくつかでは、本発明の化合物の最大750mg/日までの経口投与が適切である。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、50mgという用量でBID投与され
る。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、100mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、150mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、200mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、350mgという用量でBID投与される。特定の実施形態では、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の処置のため、1用量あたり約50〜350mgという投薬量(1日あたり経口的に1回または好ましくは2回投与される)が適切である場合が多い。
る。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、100mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、150mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、200mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式Aの化合物は、350mgという用量でBID投与される。特定の実施形態では、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の処置のため、1用量あたり約50〜350mgという投薬量(1日あたり経口的に1回または好ましくは2回投与される)が適切である場合が多い。
前述の実施形態のいくつかでは、化合物I”またはII”の最大750mg/日までの経口投与が好適である。前述の実施形態のいくつかでは、式I”またはII”の化合物は、50mg BIDという用量で投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式I”またはII”の化合物は、100mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式I”またはII”の化合物は150mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式I”またはII”の化合物は200mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、式I”またはII”の化合物は、350mgという用量でBID投与される。前述の実施形態のいくつかでは、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫の処置のため、式I”またはII”の化合物の1用量あたり約50〜350mgという投薬量(1日あたり経口的に1回または好ましくは2回投与される)が適切である場合が多い。
この化合物は、単回ボーラス用量として、経時的な用量で、i.v.投与または経皮投与として、または複数の投薬で投与されてもよい。
投薬は、少なくとも1サイクル継続される。いくつかの実施形態では、上記サイクルは、少なくとも7日間継続され得る。いくつかの実施形態では、上記サイクルは、約28日である。いくつかの実施形態では、投薬は、約28日間継続され、次いで少なくとも7日間中断される。いくつかの実施形態では、完全なサイクルは、連続毎日28日間の投与である。患者における臨床応答の評価は、各々のサイクル後に測定され得る。この臨床結果を用いて、投薬を増大、減少、中断または維持するための決定を行ってもよい。
投与経路に依存して、適切な用量を体重、体表面積、または臓器の大きさに従って算出し得る。最終の投薬計画は、薬物の作用、例えば、その因子に特異的な活性を改変する種々の要因、疾患状態の同定および重篤度、患者の応答性、患者の年齢、状態、体重、性別および食餌、ならびに任意の感染の重篤度を考慮して、優良医薬品基準(good medical practice)の観点で担当医によって決定される。考慮され得る追加の要因としては、投与の時間および頻度、併用薬物、反応感度、ならびに治療に対する耐性/応答が挙げられる。本明細書に言及される任意の処方物を含む処置に適切な投薬量のさらなる洗練は、特に開示される投薬情報およびアッセイ、ならびにヒト臨床試験で観察される薬物動態学的データに照らして、過度の実験なしに当業者によって慣用的に行われる。適切な投薬量は、用量反応データとともに、体液または他のサンプル中のその因子の濃度を決定するために確立されたアッセイの使用を通じて確認され得る。
投薬の頻度は、式Aの化合物の薬物動態学的パラメーターおよび投与経路に依存する。投薬量および投与は、十分なレベルの活性部分を提供するため、または所望の効果を維持するために調節される。従って、薬学的組成物は、その化合物の所望の最小レベルを維持するために必要な場合、単回用量、複数分割用量、連続注入、徐放性デポまたはそれらの組み合わせで投与されてもよい。短時間作用性(すなわち、短い半減期)の薬学的組成物は、1日に1回、または1日に2回以上(例えば、1日に、2、3、または4回)投与され得る。長時間作用性の薬学的組成物は、3〜4日ごとに、毎週、または2週ごとに1回投与され得る。ポンプ、例えば、皮下ポンプ、腹腔内ポンプまたは硬膜下ポンプが、連続
注入に好ましい場合がある。
注入に好ましい場合がある。
本発明の方法に好適に応答する被験体としては、一般にヒト患者を含む、医学的被験体および獣医学的被験体が挙げられる。とりわけ、本発明の方法が有用である他の被験体は、ネコ、イヌ、大型の動物、鳥類、例えば、ニワトリなどである。一般には、式Aの化合物から利益を得る任意の被験体は、本発明の方法の投与に適切である。前述の実施形態のいくつかでは、患者は、del(17p)またはdel(11q)の細胞遺伝学的特徴を有する。前述の実施形態のいくつかでは、患者は、リンパ節腫脹を有する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用によって、患者におけるリンパ節腫脹の大きさは低下する。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも10%まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも25%まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも30%まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも40%まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも50%まで小さくする。前述の実施形態のいくつかでは、化合物I、I”、II、またはII”の使用は、1サイクルの処置後、リンパ節腫脹の大きさを少なくとも75%まで小さくする。
一局面では、本発明は、ある状態を処置する方法であって、式I、IIの化合物またはその薬学的に許容され得る塩および1つ以上の治療剤を、そのような処置の必要な被験体に投与するステップを含み、上記状態が癌である方法を提供する。一実施形態では、上記1つ以上の治療剤はプロテアソームインヒビターである。上記1つ以上の治療剤としては、ベンダムスチン、リツキシマブ、オファツムマブおよび/またはレナリドマイドが挙げられ得る。別の実施形態では、上記1つ以上の治療剤としては、ベンダムスチン、リツキシマブ、またはこれらの2つの治療剤の組み合わせが挙げられる。さらに別の実施形態では、上記1つ以上の治療剤としてはオファツムマブが挙げられる。さらに別の実施形態では、上記1つ以上の治療剤としてはレナリドマイドが挙げられる。
上記1つ以上の治療剤の好適な投薬量範囲は異なり得るが、一般に、上記1つ以上の治療剤は50mg/m2〜1,500mg/m2の範囲で投与される。一実施形態では、ベンダムスチンが50mg/m2〜150mg/m2の範囲で投与される。別の実施形態では、リツキシマブが300mg/m2〜400mg/m2の範囲で投与される。別の実施形態では、オファツムマブが300mg/m2〜1,500mg/m2の範囲で投与される。
式Aの化合物と組み合わせた上記1つ以上の治療剤の投薬は、少なくとも1サイクル継続され得る。いくつかの実施形態では、式Aの化合物と組み合わせた上記1つ以上の治療剤の投薬は、少なくとも7日間継続され得る。他の実施形態では、式Aの化合物と組み合わせた上記1つ以上の治療剤の投薬は、約28日間継続され得る。いくつかの実施形態では、式Aの化合物および1つ以上の治療剤は各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与される。上記1つ以上の治療剤は上記被験体に上記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与され得る。いくつかの実施形態では、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される。他の実施形態では、上記1つ以上の治療剤は上記被験体に毎週投与される。患者における臨床応答の
評価は各々のサイクルの後に測定され得る。この臨床結果を用いて、投薬の増大、減少、中止または維持の決定が行なわれ得る。
評価は各々のサイクルの後に測定され得る。この臨床結果を用いて、投薬の増大、減少、中止または維持の決定が行なわれ得る。
前述の実施形態のいくつかでは、この状態は、血液学的な悪性疾患である。好ましい実施形態では、この状態は、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、B細胞ALL、T細胞ALLおよびホジキンリンパ腫からなる群より選択される。
好ましい実施形態では、この化合物は、実質的にS−鏡像異性体から構成される。特定の実施形態では、この化合物は、少なくとも95%のS−鏡像異性体を含む。前述の実施形態のいくつかでは、この化合物および治療剤の投与によって、この化合物および治療剤の組み合わせなしで得られる結果を上回る相乗的な利益が得られる。
以下の実施例は、本発明を例示するが限定するものではない。下の実施例では、「式Iの化合物」または「化合物I」という言及は、本明細書で示されるS−鏡像異性体を指し、そしてこれらの実施例で用いられるサンプルは、キラルHPLC方法によって測定する場合98.2%eeを示す。
さらに、この化合物の分析によって以下の物質の特徴が明らかになる:
(実施例1)
MM細胞における細胞増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が、多発性骨髄腫(MM)細胞でサイトカイン(IGF−1およびIL−6)の細胞増殖刺激性効果を阻害することを示す。LB細胞(骨髄単球性骨髄腫細胞株)を、コントロール培地と;式Iの化合物とを用いて、IL−6またはIGF−1のいずれかの有無において、48時間培養した。MM細胞増殖に対する式Iの化合物の阻害性効果を、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル四ナトリウム臭化物(MTT;Chemicon International)色素吸光度を測定することによって評価した。細胞を、48時間の培養の最後に4時間、各々のウェルに対して、10μLの5mg/mLのMTTを用いて、続いて0.04N HClを含む100μLのイソプロパノールでパルスした。吸光度は、分光光度計(Molecular Devices)を用いて570/630nmで測定した。結果のまとめは、図1に示す。0.625μM〜2.5μMの化合物Iに曝すことによって、細胞増殖刺激性サイトカインの存在下でさえMM細胞の増殖は阻害される。
MM細胞における細胞増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が、多発性骨髄腫(MM)細胞でサイトカイン(IGF−1およびIL−6)の細胞増殖刺激性効果を阻害することを示す。LB細胞(骨髄単球性骨髄腫細胞株)を、コントロール培地と;式Iの化合物とを用いて、IL−6またはIGF−1のいずれかの有無において、48時間培養した。MM細胞増殖に対する式Iの化合物の阻害性効果を、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル四ナトリウム臭化物(MTT;Chemicon International)色素吸光度を測定することによって評価した。細胞を、48時間の培養の最後に4時間、各々のウェルに対して、10μLの5mg/mLのMTTを用いて、続いて0.04N HClを含む100μLのイソプロパノールでパルスした。吸光度は、分光光度計(Molecular Devices)を用いて570/630nmで測定した。結果のまとめは、図1に示す。0.625μM〜2.5μMの化合物Iに曝すことによって、細胞増殖刺激性サイトカインの存在下でさえMM細胞の増殖は阻害される。
(実施例2)
細胞毒性に対するBMSCの効果
本実施例は、骨髄間質細胞(BMSC)が、化合物I誘導性のLB細胞の細胞毒性に対して防御しないことを示す。LB細胞をコントロールの培地とともに、および式Iの化合
物とともに、48時間、BMSCの有無において培養した。細胞増殖は、[3H]−チミジンの取り込みアッセイを用いて評価した。全てのデータとも、三連の実験の平均(±SD)を示す。結果のまとめを図2に示す。LB細胞増殖は、0.625μM〜10μMの化合物Iに対して曝した後は、BMSCの存在下でさえ低下する。
細胞毒性に対するBMSCの効果
本実施例は、骨髄間質細胞(BMSC)が、化合物I誘導性のLB細胞の細胞毒性に対して防御しないことを示す。LB細胞をコントロールの培地とともに、および式Iの化合
物とともに、48時間、BMSCの有無において培養した。細胞増殖は、[3H]−チミジンの取り込みアッセイを用いて評価した。全てのデータとも、三連の実験の平均(±SD)を示す。結果のまとめを図2に示す。LB細胞増殖は、0.625μM〜10μMの化合物Iに対して曝した後は、BMSCの存在下でさえ低下する。
(実施例3)
CLL細胞のアポトーシスに対する化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物が、慢性リンパ性白血病(CLL)患者の細胞でアポトーシスを誘導することを示す。末梢血は、オハイオ州立大学(Ohio State University)のCLL研究共同体(CLL Research Consortium)を通してB−CLLを有する患者から得た。初代のCD19陽性細胞を、Rosette−Sep(StemCell Technologies)を用いて単離した。細胞を、10%の熱不活性化ウシ胎仔血清、2mmol/LのL−グルタミン、およびペニシリン(100単位/mL)/ストレプトマイシン(100μg/mL;Invitrogen)を補充したRPMI 1640(Invitrogen)中で、37℃、5%CO2、および高湿度で維持した。式Iの化合物または培地との96時間のインキュベーション後、5×105個の細胞を、PBSで洗浄し、次いで、2μLのAnnexin V−FITCストック(BioWhittaker,Inc)および10μLの20μg/mL PI(Sigma)を含有する結合緩衝液(10mmol/L HEPES/NaOH、pH7.4、150mmol/L NaCl 5mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、1.8mmol/LCaCl2)中で再懸濁した。遮光した領域で室温で10分間インキュベーションした後、試料を、FACScan(商標)(Becton Dickinson)でのフローサイトメトリーによって定量化した。
CLL細胞のアポトーシスに対する化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物が、慢性リンパ性白血病(CLL)患者の細胞でアポトーシスを誘導することを示す。末梢血は、オハイオ州立大学(Ohio State University)のCLL研究共同体(CLL Research Consortium)を通してB−CLLを有する患者から得た。初代のCD19陽性細胞を、Rosette−Sep(StemCell Technologies)を用いて単離した。細胞を、10%の熱不活性化ウシ胎仔血清、2mmol/LのL−グルタミン、およびペニシリン(100単位/mL)/ストレプトマイシン(100μg/mL;Invitrogen)を補充したRPMI 1640(Invitrogen)中で、37℃、5%CO2、および高湿度で維持した。式Iの化合物または培地との96時間のインキュベーション後、5×105個の細胞を、PBSで洗浄し、次いで、2μLのAnnexin V−FITCストック(BioWhittaker,Inc)および10μLの20μg/mL PI(Sigma)を含有する結合緩衝液(10mmol/L HEPES/NaOH、pH7.4、150mmol/L NaCl 5mmol/L KCl、1mmol/L MgCl2、1.8mmol/LCaCl2)中で再懸濁した。遮光した領域で室温で10分間インキュベーションした後、試料を、FACScan(商標)(Becton Dickinson)でのフローサイトメトリーによって定量化した。
化合物Iを用いるCLL患者細胞の処理によって、アポトーシスが生じ、その結果は、図3に示されるように用量依存性であると考えられる。
化合物I誘導性のアポトーシスは、図19に示すデータのように、予後の劣る患者由来のCLL細胞で見られた。
化合物I誘導性のアポトーシスはまた、図20に示されるように、不応性の/再発性の患者由来のCLL細胞で有効であることが示された。
(実施例4)
ALL細胞株における化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物が、Aktリン酸化の低減、ならびにT−ALLおよびB−ALL(急性リンパ芽球性白血病)の両方の白血病細胞株で細胞死を伴う細胞増殖の低下を生じることを示す。細胞株の生存度アッセイは、AlamarBlueアッセイ(Invitrogen)を用いて行った。100μLの容積中の細胞(1ウェルあたり1×106個)を、96ウェルの平底プレートに入れ、式Iの化合物(2×最終濃度で1ウェルあたり100μL)または培地単独をこのプレートに添加した。全てを四連で行った。細胞を固定時間(48時間)インキュベートした。インキュベーション後、10μLのAlamarBlue(登録商標)を、各々のウェルに添加した。細胞を4時間インキュベートし、530〜560nmでの光学密度を、SpectraMax(登録商標)M5プレートリーダー2001を用いて得た。細胞生存度は、処理された細胞/コントロールのサンプルの間の吸収の割合として表現された。これらの結果を図4に示される表にまとめる。化合物Iに曝すことによって、種々のALL細胞株で細胞生存度の実質的な減少、およびAktリン酸化の低下が生じる。
ALL細胞株における化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物が、Aktリン酸化の低減、ならびにT−ALLおよびB−ALL(急性リンパ芽球性白血病)の両方の白血病細胞株で細胞死を伴う細胞増殖の低下を生じることを示す。細胞株の生存度アッセイは、AlamarBlueアッセイ(Invitrogen)を用いて行った。100μLの容積中の細胞(1ウェルあたり1×106個)を、96ウェルの平底プレートに入れ、式Iの化合物(2×最終濃度で1ウェルあたり100μL)または培地単独をこのプレートに添加した。全てを四連で行った。細胞を固定時間(48時間)インキュベートした。インキュベーション後、10μLのAlamarBlue(登録商標)を、各々のウェルに添加した。細胞を4時間インキュベートし、530〜560nmでの光学密度を、SpectraMax(登録商標)M5プレートリーダー2001を用いて得た。細胞生存度は、処理された細胞/コントロールのサンプルの間の吸収の割合として表現された。これらの結果を図4に示される表にまとめる。化合物Iに曝すことによって、種々のALL細胞株で細胞生存度の実質的な減少、およびAktリン酸化の低下が生じる。
(実施例5)
ALLの細胞周期に対する化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物での急性リンパ芽球性白血病(ALL)細胞株CCRF−SBの処理が、G0/G1細胞周期停止を生じることを示す。正常な増殖条件下でのヨウ化プロピジウム染色したCCRF−SB細胞の代表的な蛍光活性化細胞選別(FACS)分析、および式Iの化合物の存在下の増殖。G0−G1、S、およびG2−M期の細胞の平均割合は、ヒストグラフの下の表で計算される。結果を図5に示す。
ALLの細胞周期に対する化合物の効果
本実施例は、式Iの化合物での急性リンパ芽球性白血病(ALL)細胞株CCRF−SBの処理が、G0/G1細胞周期停止を生じることを示す。正常な増殖条件下でのヨウ化プロピジウム染色したCCRF−SB細胞の代表的な蛍光活性化細胞選別(FACS)分析、および式Iの化合物の存在下の増殖。G0−G1、S、およびG2−M期の細胞の平均割合は、ヒストグラフの下の表で計算される。結果を図5に示す。
(実施例6)
乳癌細胞の増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が乳癌細胞株の増殖を阻害することを示す。T47DおよびHS−578T細胞株を、血清に加えて、示した濃度の式Iの化合物の存在下で増殖させた。増殖は、AlamarBlue(登録商標)アッセイ(Invitrogen)96ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図6に示す。
乳癌細胞の増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が乳癌細胞株の増殖を阻害することを示す。T47DおよびHS−578T細胞株を、血清に加えて、示した濃度の式Iの化合物の存在下で増殖させた。増殖は、AlamarBlue(登録商標)アッセイ(Invitrogen)96ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図6に示す。
(実施例7)
卵巣癌細胞株の増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が卵巣癌細胞株の増殖を阻害することを示す。IGROV−1およびOVCAR−3細胞株を、血清に加えて示した濃度の式Iの化合物も存在する下で増殖させた。増殖は、AlamarBlueアッセイ(Invitrogen)96ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図7に示す。
卵巣癌細胞株の増殖の阻害
本実施例は、式Iの化合物が卵巣癌細胞株の増殖を阻害することを示す。IGROV−1およびOVCAR−3細胞株を、血清に加えて示した濃度の式Iの化合物も存在する下で増殖させた。増殖は、AlamarBlueアッセイ(Invitrogen)96ウェルプレートによって三連のウェル中で測定した。増殖アッセイの結果は、平均細胞割合の値として表し、図7に示す。
(実施例8)
Aktリン酸化の低減
本実施例によって、式Iの化合物は、構成的Aktリン酸化を示す造血系腫瘍細胞株における構成的Aktリン酸化を軽減することが示される。白血病およびリンパ腫細胞株の大きいパネルを、構成的Aktリン酸化について評価した。これらの細胞株は、B−リンパ腫、T−リンパ腫、ALL、悪性組織球増殖症、DLBCLおよびAMLに相当する。血清非依存性Aktリン酸化を示す細胞株を、式Iの化合物で2時間処理した。その後、細胞を溶解し、サイズ分画し、ホスホ−Akt(Ser473)に対する抗体で免疫ブロットした。結果を図8に示す。Akt(Ser473)の減少は、化合物Iに対して曝した後、全ての細胞株で達成された。
Aktリン酸化の低減
本実施例によって、式Iの化合物は、構成的Aktリン酸化を示す造血系腫瘍細胞株における構成的Aktリン酸化を軽減することが示される。白血病およびリンパ腫細胞株の大きいパネルを、構成的Aktリン酸化について評価した。これらの細胞株は、B−リンパ腫、T−リンパ腫、ALL、悪性組織球増殖症、DLBCLおよびAMLに相当する。血清非依存性Aktリン酸化を示す細胞株を、式Iの化合物で2時間処理した。その後、細胞を溶解し、サイズ分画し、ホスホ−Akt(Ser473)に対する抗体で免疫ブロットした。結果を図8に示す。Akt(Ser473)の減少は、化合物Iに対して曝した後、全ての細胞株で達成された。
(実施例9)
DLBCLに有効な化合物I
本実施例によって、化合物IがPI3Kシグナル伝達をブロックし、かつびまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞においてアポトーシスを誘導するという証拠が得られる。P110δは、図26Aで示されるようにDLBCL細胞株で発現される。図26Bによって、化合物Iに対して曝すことで、いくつかのDLBCL細胞株でpAKTレベルが低下することが示される。
DLBCLに有効な化合物I
本実施例によって、化合物IがPI3Kシグナル伝達をブロックし、かつびまん性大細胞型B細胞リンパ腫細胞においてアポトーシスを誘導するという証拠が得られる。P110δは、図26Aで示されるようにDLBCL細胞株で発現される。図26Bによって、化合物Iに対して曝すことで、いくつかのDLBCL細胞株でpAKTレベルが低下することが示される。
(実施例10)
乳癌細胞におけるアポトーシスの誘導
本実施例は、式Iの化合物が乳癌細胞株においてアポトーシスを誘導することを示す。HS−578T、T47D、およびMCF7の細胞を、式Iの化合物または対応するDMSO濃度を用いて24時間処理した。アポトーシス細胞の割合は、Annexin V−FITC/7AAD染色によって決定した。下の左側の生存細胞(Annexin V−FITC/PI陰性);下の右側、初期アポトーシス細胞(Annexin V−FITC陽性のみ);上の右側、中後期のアポトーシス細胞(Annexin V−FITC/
7AAD二重陽性);および上の左側、後期アポトーシス/壊死(7AAD陽性のみ)。各象限の細胞の割合は、下の左側の象限(生きた細胞)以外に示される。同様の結果をもたらす3つの異なる実験のうち1つの代表的な実験を図10に示す。
乳癌細胞におけるアポトーシスの誘導
本実施例は、式Iの化合物が乳癌細胞株においてアポトーシスを誘導することを示す。HS−578T、T47D、およびMCF7の細胞を、式Iの化合物または対応するDMSO濃度を用いて24時間処理した。アポトーシス細胞の割合は、Annexin V−FITC/7AAD染色によって決定した。下の左側の生存細胞(Annexin V−FITC/PI陰性);下の右側、初期アポトーシス細胞(Annexin V−FITC陽性のみ);上の右側、中後期のアポトーシス細胞(Annexin V−FITC/
7AAD二重陽性);および上の左側、後期アポトーシス/壊死(7AAD陽性のみ)。各象限の細胞の割合は、下の左側の象限(生きた細胞)以外に示される。同様の結果をもたらす3つの異なる実験のうち1つの代表的な実験を図10に示す。
(実施例11)
健常なボランティアにおける7日目の定常状態血液レベル
本実施例は、7日目の健常ヒト被験体の血液における式Iの化合物の濃度に関するデータを示す。この濃度は、この研究の7日目に式Iの化合物の50、100または200mgのBIDの経口投与後、12時間の期間にわたってモニターした。図11では、投与から12時間の期間にわたる薬物の血漿濃度を追跡している。薬物の最大濃度は、全ての用量について2時間内で達成される。この化合物の50、100、または200mgのBIDの投与によって、少なくとも12時間、好塩基球中でPI3KδのEC50濃度を超える濃度レベルが生じる。
健常なボランティアにおける7日目の定常状態血液レベル
本実施例は、7日目の健常ヒト被験体の血液における式Iの化合物の濃度に関するデータを示す。この濃度は、この研究の7日目に式Iの化合物の50、100または200mgのBIDの経口投与後、12時間の期間にわたってモニターした。図11では、投与から12時間の期間にわたる薬物の血漿濃度を追跡している。薬物の最大濃度は、全ての用量について2時間内で達成される。この化合物の50、100、または200mgのBIDの投与によって、少なくとも12時間、好塩基球中でPI3KδのEC50濃度を超える濃度レベルが生じる。
さらに、17〜400mgの式Iの化合物を健常ボランティアに投与した単回用量研究を行った。血液中の化合物の濃度を、投与から24時間を超えて測定し、その結果を図24Aに示す。約6時間では、全ての投与用量について血中の化合物Iの濃度は、少なくとも約100nMである。約12時間では、50mg以上の用量について血中の化合物Iの濃度は50nMを超える。血中の化合物Iの最大濃度は投与の2時間内に達成される。
別の実験では、平均の化合物Iの濃度を、健常ボランティア(N=6)における50mgのBID投薬の第7日に測定した。平均のトラフ濃度は、PI3KδのEC50よりも高く、平均のピーク濃度は、PI3KγのEC50よりも低かった(図24B、全血好塩基球活性化アッセイで測定した場合)。本実施例は、50mgBIDで投与された化合物Iの濃度範囲が、少なくとも12時間、全血中で、PI3Kδ好塩基球活性化のED50レベルを上回るが、PI3Kγ好塩基球レベル活性化の最小ED50レベルよりも低いことを示す。
下の表1によって、この研究における被験体の概要が得られ、ここでは式Iの化合物の単回用量(SD)または複数用量(MD)のいずれかが被験体に対して種々の量で投与される。「n」値は、各々の群における被験体の数を指す。
(実施例12)
マントル細胞リンパ腫を有する患者での病変に対する効果
本実施例は、式Iの化合物での1サイクルの処置(28日間)後のマントル細胞リンパ腫を有する患者の病変の面積に関するデータを示す。6つの病変の面積を処置の前、およ
び処置のサイクルの後に測定した。式Iの化合物の50mg BIDの28日間の経口投与に対する応答によって、処置前の面積に比較した病変面積の減少が生じ、腫瘍負荷における44%の減少が示される。その結果を図12にみられる棒グラフにまとめる。
マントル細胞リンパ腫を有する患者での病変に対する効果
本実施例は、式Iの化合物での1サイクルの処置(28日間)後のマントル細胞リンパ腫を有する患者の病変の面積に関するデータを示す。6つの病変の面積を処置の前、およ
び処置のサイクルの後に測定した。式Iの化合物の50mg BIDの28日間の経口投与に対する応答によって、処置前の面積に比較した病変面積の減少が生じ、腫瘍負荷における44%の減少が示される。その結果を図12にみられる棒グラフにまとめる。
(実施例13)
処置に対するCLLを有する患者の応答
本実施例は、式Iの化合物の経口投与での1サイクル(28日)の処置後のCLLを有する患者の血中のリンパ球絶対数(ALC)の濃度に関するデータを提供する。血液ALC濃度は、1サイクルの処置の完了後4週間の期間にわたって測定した。処置の結果としてリンパ球増加症における55%の減少およびリンパ節腫脹の38%の減少が観察された。ALC濃度の顕著な減少が、第1週〜第2週の間に観察される(図13)。
処置に対するCLLを有する患者の応答
本実施例は、式Iの化合物の経口投与での1サイクル(28日)の処置後のCLLを有する患者の血中のリンパ球絶対数(ALC)の濃度に関するデータを提供する。血液ALC濃度は、1サイクルの処置の完了後4週間の期間にわたって測定した。処置の結果としてリンパ球増加症における55%の減少およびリンパ節腫脹の38%の減少が観察された。ALC濃度の顕著な減少が、第1週〜第2週の間に観察される(図13)。
(実施例14)
健常ボランティアに対するリンパ腫患者の比較
本実施例は、リンパ腫患者における式Iの化合物の濃度を、正常な健常ボランティアに対して比較するデータを提供する。マントル細胞リンパ腫を有する患者における化合物の50mg BIDの経口投与の28日目、血中の化合物の濃度を、投与後、6時間にわたって測定した。投与の第7日での正常な健常ボランティアにおける50および100mgの経口投与の濃度も観察した。その結果を図14にまとめる。従って、この化合物は、1サイクルの処置の経過にまたがって過剰に増大することもなく、患者が該処置サイクルの経過にまたがって代謝の増大によって耐性になることもない。
健常ボランティアに対するリンパ腫患者の比較
本実施例は、リンパ腫患者における式Iの化合物の濃度を、正常な健常ボランティアに対して比較するデータを提供する。マントル細胞リンパ腫を有する患者における化合物の50mg BIDの経口投与の28日目、血中の化合物の濃度を、投与後、6時間にわたって測定した。投与の第7日での正常な健常ボランティアにおける50および100mgの経口投与の濃度も観察した。その結果を図14にまとめる。従って、この化合物は、1サイクルの処置の経過にまたがって過剰に増大することもなく、患者が該処置サイクルの経過にまたがって代謝の増大によって耐性になることもない。
(実施例15)
種々のキナーゼにおける化合物Iの活性
本実施例は、表2にまとめるようなキナーゼのクラスにまたがる化合物IのIC50プロフィールを示す。p110δに対して特に活性であるが、化合物Iはまた、p110γに対しても活性であり、かつその化合物の示す高いNOAELレベルに起因して、p110βに対して非毒性用量で治療上有用であるのに十分な活性でさえあった;一方で、II−Vクラスのホスホイノシチドキナーゼに対して示す活性は小さかった。このようにδ選択性ではあるが、この化合物は、p110γに対して臨床的に有用であるために、すなわち、シグナル伝達についてp110γに依拠するガンに対して有効であるために十分な活性を示し得る。なぜなら、他のイソ型、特にαイソ型に対して選択性であるままで、p110γの阻害のための有効投薬量を上回る血漿レベルが達成され得るからである。
種々のキナーゼにおける化合物Iの活性
本実施例は、表2にまとめるようなキナーゼのクラスにまたがる化合物IのIC50プロフィールを示す。p110δに対して特に活性であるが、化合物Iはまた、p110γに対しても活性であり、かつその化合物の示す高いNOAELレベルに起因して、p110βに対して非毒性用量で治療上有用であるのに十分な活性でさえあった;一方で、II−Vクラスのホスホイノシチドキナーゼに対して示す活性は小さかった。このようにδ選択性ではあるが、この化合物は、p110γに対して臨床的に有用であるために、すなわち、シグナル伝達についてp110γに依拠するガンに対して有効であるために十分な活性を示し得る。なぜなら、他のイソ型、特にαイソ型に対して選択性であるままで、p110γの阻害のための有効投薬量を上回る血漿レベルが達成され得るからである。
(実施例16)
キノーム・ワイド(kinome−wide)タンパク質キナーゼスクリーニングにおける化合物Iのオフターゲット活性がないこと
本実施例は、化合物Iがキノーム・ワイド・タンパク質キナーゼスクリーニングにおいてオフターゲット活性をほとんど有さないかまたは全く有さないことを示す。Ambit
KINOMEscan(商標)を用いて、350個を超えるタンパク質キナーゼのゲノム・ワイド・スクリーニングで、なんら活性を10μMで検出できなかった。このスクリーニングにおけるいくつかのキナーゼの例は、下の表3に示される。
キノーム・ワイド(kinome−wide)タンパク質キナーゼスクリーニングにおける化合物Iのオフターゲット活性がないこと
本実施例は、化合物Iがキノーム・ワイド・タンパク質キナーゼスクリーニングにおいてオフターゲット活性をほとんど有さないかまたは全く有さないことを示す。Ambit
KINOMEscan(商標)を用いて、350個を超えるタンパク質キナーゼのゲノム・ワイド・スクリーニングで、なんら活性を10μMで検出できなかった。このスクリーニングにおけるいくつかのキナーゼの例は、下の表3に示される。
(実施例17)
p110δに対する化合物Iの選択性
本実施例は、化合物Iがイソ型特異的細胞ベースアッセイで測定した場合、p110δに選択的であることを示す。
p110δに対する化合物Iの選択性
本実施例は、化合物Iがイソ型特異的細胞ベースアッセイで測定した場合、p110δに選択的であることを示す。
Swiss−3T3線維芽細胞およびRAW−264を96ウェル組織培養プレートに播種して、少なくとも90%コンフルエンシーに到達させた。細胞を飢餓させてビヒクルまたは化合物Iの連続希釈液のいずれかを用いて2時間処理し、それぞれPDGFまたはC5aを用いて刺激した。Aktリン酸化および総AKTをELISAによって検出した。精製されたB細胞をビヒクルまたは化合物Iの連続希釈液のいずれかを用いて30分間室温で処理し、その後、精製されたヤギ抗ヒトIgMを添加した。結果を、IgM架橋によって誘導される相対的な[3H]チミジン取り込みとして表す。
(実施例18)
白血病およびリンパ腫細胞株におけるp110δの発現
本実施例は、PI3K p110δが広範な白血病およびリンパ腫細胞株で高度に発現されることを示す。
白血病およびリンパ腫細胞株におけるp110δの発現
本実施例は、PI3K p110δが広範な白血病およびリンパ腫細胞株で高度に発現されることを示す。
PI3K p110δは、広範な白血病およびリンパ腫細胞株で増殖および生存を促進する。とりわけ検討された細胞型は、MCL、DLBCL、AML、ALLおよびCMLである。
リンパ腫および白血病細胞株のパネルにおけるPI3K p110α、β、γおよびδの発現は、図15に示す。106個の細胞由来のタンパク質を、SDS−PAGEによって分けて、α、β、γおよびδイソ型に特異的な抗体を用いるウエスタンブロットによって分析した。精製された組み換えp110タンパク質をコントロールとして用いた。抗アクチン抗体を用いて、サンプルの等しいローディングを評価した。p110δは、構成的に高レベルで発現されたが、他のp110イソ型は極めて可変性であった。PIK3p110δは、Sujobert,ら、Blood 2005 106(3),1063〜1066に考察されるとおり、患者AML細胞で均一に発現されることが公知である。
(実施例19)
p110δに対する化合物Iの阻害性効果
実施例19では、p110δの化合物Iによる阻害が、構成的な経路の活性化を有する、白血病およびリンパ腫の細胞株でPI3Kシグナル伝達をブロックすることを示す。
p110δに対する化合物Iの阻害性効果
実施例19では、p110δの化合物Iによる阻害が、構成的な経路の活性化を有する、白血病およびリンパ腫の細胞株でPI3Kシグナル伝達をブロックすることを示す。
PI3K経路は、白血病およびリンパ腫細胞株で調節不全である場合が多い。細胞株のうち48%、すなわち27のうち13が、構成的なp−AKTを有することが見出された。さらに、PI3K経路活性化は、p110δに依存性である。化合物Iは、13個の細胞株のうち13個で構成的なAKTリン酸化を阻害することが見出された。
図9のPAGEの結果によって、構成的AKTリン酸化は、B細胞およびT細胞リンパ腫を含む11個の細胞株の各々において化合物Iの存在によって阻害されたことが示される。細胞を10μMの化合物Iとともに2時間インキュベートした。細胞溶解液をSDS−PAGEで泳動して、PDVF膜に移し、適切な抗体でプローブした。化合物Iは、11個の細胞株のうち11個で構成的AKTリン酸化を阻害することが見出された。T−ALLおよびB−ALL細胞株についての追加の細胞株データを図27に示す。ある範囲の濃度の化合物I(0.1μM〜10μM)に曝された後のAktおよびS6リン酸化の低下は、デンシトメトリーによって定量し、パーセントの変化として表わした(図28)。
(実施例20)
化合物Iは、白血病細胞株において増殖およびアポトーシスを阻害する。
化合物Iは、白血病細胞株において増殖およびアポトーシスを阻害する。
実施例20は、化合物Iが白血病細胞株における増殖を阻害し、かつアポトーシスを誘導することを示す。図16A〜図16Bは、24時間にわたる化合物Iでの処理が、用量依存性の方式で細胞生存度を低下させることを示す。
ALL細胞株での増殖アッセイ(AlamarBlue(登録商標))は10%のFBS血清の存在下で増殖させ、測定値は、24時間でとった。増殖は、96ウェルプレート中で三連のウェルで測定した。化合物IによるPI3Kシグナル伝達の阻害で、細胞周期進行のブロック、および/または細胞死が生じた。6つの白血病細胞株の各々では、生存度は、10μMの濃度の化合物Iで40〜50%まで低下した(図16A)。
化合物Iによるアポトーシスの誘導。細胞を、DMSO(ビヒクル)、1μMまたは10μMの化合物Iを用いて24時間処理した。アポトーシス細胞の割合は、Annexin V−FITC/7AAD染色によって決定した。同様の結果を生じる異なる実験のうち代表的な1つの実験を図16Bに示す。
(実施例21)
CLL細胞におけるp110δの発現
本実施例は、患者のCLL細胞におけるPI3Kのp110δおよびp110 δのイソ型発現を示す。
CLL細胞におけるp110δの発現
本実施例は、患者のCLL細胞におけるPI3Kのp110δおよびp110 δのイソ型発現を示す。
PI3K媒介性のシグナル伝達経路は、CLLに関係している。これらの経路は、細胞増殖、アポトーシスの防止および細胞遊走においてある役割を有する。患者のCLL細胞においてPI3Kイソ型発現を決定するために労力を払った。
CLL患者のデモグラフィックスを下の表5にまとめる。
図17A〜図17DのPAGE画像は、患者A〜EのCLL細胞におけるp110α、p110δ、p110β、およびp110γの発現を比較する。p110δおよびp110γは、他のPI3Kイソ型に比較して各々の患者で発現される。
(実施例22)
化合物Iはカスパーゼ3およびPARPの切断を誘導する
本実施例は、化合物Iがカスパーゼ3およびPARPの切断を誘導したことを示す。図18A〜図18Bは、1、10μMの化合物Iまたは25μMのLY294002の存在下におけるカスパーゼ3およびPARP(ポリ(ADP)リボースポリメラーゼ)切断の結果を示す。
化合物Iはカスパーゼ3およびPARPの切断を誘導する
本実施例は、化合物Iがカスパーゼ3およびPARPの切断を誘導したことを示す。図18A〜図18Bは、1、10μMの化合物Iまたは25μMのLY294002の存在下におけるカスパーゼ3およびPARP(ポリ(ADP)リボースポリメラーゼ)切断の結果を示す。
さらなる実験によって、化合物Iがカスパーゼ2およびPARP切断を誘導するという証拠が得られる。細胞を、化合物Iまたはビヒクル単独を用いて24時間培養した。その後、細胞を溶解して、サイズ分画し、FLIPに対する抗体を用いてイムノブロットした(図29)。さらに、丸ごとの細胞溶解液を、MDS(Meso Scale Diagnostics)マルチスポット96ウェル 4スポットプレート(総カスパーゼ−3、切断カスパーゼ3、切断PARP、およびBSAでコーティング)に添加した。タンパク質を、SULFO−TAG試薬で標識した抗体で検出して、定量化した。化合物Iの5または10μMに対して曝した際、カスパーゼ3およびPARPの切断において用量依存性の応答が達成された。
(実施例23)
化合物IはPI3Kシグナル伝達をブロックする
本実施例は、化合物Iが患者のAML細胞におけるPI3Kシグナル伝達をブロックすることを示す。PI3Kδは、AML患者細胞におけるシグナル伝達に関与する。図21では、0.1、1.0、10μMの化合物Iの有無におけるホスホ−Akt産生の結果が示される。これによって、化合物Iが患者のAML細胞においてホスホ−Akt産生を低下させるという証拠が得られる。
化合物IはPI3Kシグナル伝達をブロックする
本実施例は、化合物Iが患者のAML細胞におけるPI3Kシグナル伝達をブロックすることを示す。PI3Kδは、AML患者細胞におけるシグナル伝達に関与する。図21では、0.1、1.0、10μMの化合物Iの有無におけるホスホ−Akt産生の結果が示される。これによって、化合物Iが患者のAML細胞においてホスホ−Akt産生を低下させるという証拠が得られる。
(実施例24)
好塩基球に基礎をおく全血中でのPI3Kシグナル伝達の測定
本実施例は、CD63表面発現の誘導によるフローサイトメトリーを用いる好塩基球中でのPI3Kシグナル伝達の測定のための全血アッセイを示す。
好塩基球に基礎をおく全血中でのPI3Kシグナル伝達の測定
本実施例は、CD63表面発現の誘導によるフローサイトメトリーを用いる好塩基球中でのPI3Kシグナル伝達の測定のための全血アッセイを示す。
好塩基球でのPI3Kシグナル伝達の阻害によって、化合物Iが有用な薬力学マーカーであることが可能になる。PI3Kシグナル伝達は、CD63表面発現によってモニターされる。詳細には、p110δは、FCεR1シグナル伝達を媒介し、かつp110γがfMLPレセプターシグナル伝達を媒介する。好塩基球でのPI3K媒介性のCD63発現のフローサイトメトリー分析は、以下の逐次工程を包含する:
1.末梢血を収集する
2.好塩基球刺激(fMLPまたは抗−FCεR1 Mab)
3.好塩基球を標識する(抗CCR3−FITCおよび抗CD63−PE)
4.細胞を溶解しかつ固定する
5.フローサイトメトリーによる分析
図22A〜図22Cは、A)刺激なし、B)抗FCεR1での刺激、またはC)fMLPでの刺激の結果を比較する。
1.末梢血を収集する
2.好塩基球刺激(fMLPまたは抗−FCεR1 Mab)
3.好塩基球を標識する(抗CCR3−FITCおよび抗CD63−PE)
4.細胞を溶解しかつ固定する
5.フローサイトメトリーによる分析
図22A〜図22Cは、A)刺激なし、B)抗FCεR1での刺激、またはC)fMLPでの刺激の結果を比較する。
図23は、化合物Iは、p110δ媒介性のシグナル伝達が最も重要である場合、特に活性であるが、p110γが利用される場合も比較的活性であることを示す:これによって、SD63発現における50%低下が、p110δ試験について<<1μM、およびp110γ試験について約10μMで達成された。好塩基球活性化を、Flow2CAST(登録商標)キットを用いてヒト全血で測定した。全血サンプルを、抗FcεRIのmAbまたはfMLPのいずれかでの好塩基球の活性化の前に、ビヒクルまたは化合物Iの連続希釈液のいずれかで処理した。細胞を、抗ヒトCD63−FITCおよび抗ヒトCCR3−PEのmAbの組み合わせで染色した。ゲートした好塩基球集団内のCD63陽性細胞のパーセントは、異なる処理群で決定し、ビヒクルコントロールに対して正規化した。
(実施例25)
化合物IはCLL患者におけるリンパ節腫脹を軽減する。
化合物IはCLL患者におけるリンパ節腫脹を軽減する。
本実施例によって、del[17p]を有するCLL患者での大きいリンパ節腫脹のサイズの減少の証拠が得られる。del(17p)を有する患者は、腋窩のリンパ節腫脹があり、これをコンピューター断層撮影(CT)によって画像化して、5.9cm×4.1cmというベースラインの測定値を得た(図40A)。化合物Iでの処置の1サイクル後、リンパ節腫脹は、3.8×1.8cmの寸法まで軽減した(図40B)。1サイクルの処置は、化合物Iの200mg BIDまたは350mg BIDのいずれかの連続経口投与で28日間であった。
(実施例26)
被験体のグルコースおよびインスリンレベルに対する化合物Iの限られた効果
本実施例は、化合物Iでの処置が、グルコースおよびインスリンのレベルに対して影響がほとんどないかまたは全くないことを示す。化合物Iは、最大10日間までの期間にわたって被験体に対して50〜200mg量をBIDで投与した。血液のグルコースおよびインスリンの濃度を経時的に測定し、図25A〜図25Bに示されるようにプラシーボの結果と比較した。
被験体のグルコースおよびインスリンレベルに対する化合物Iの限られた効果
本実施例は、化合物Iでの処置が、グルコースおよびインスリンのレベルに対して影響がほとんどないかまたは全くないことを示す。化合物Iは、最大10日間までの期間にわたって被験体に対して50〜200mg量をBIDで投与した。血液のグルコースおよびインスリンの濃度を経時的に測定し、図25A〜図25Bに示されるようにプラシーボの結果と比較した。
血中グルコース濃度は、さらに最高用量の化合物Iでの10日間の処置の後に定常のままであった。インスリンレベルは、化合物Iでの7日間の処置後、正常範囲内のままであった。これによって、化合物Iがグルコースおよびインスリンのレベルに対して効果をほとんどまたは全く有さないという証拠が得られる。
(実施例27)
材料および方法
本実施例は、多発性骨髄腫の処置における化合物Iの使用に関連する、実施例28〜35に記載の実験を行う材料および方法についての情報を提供する。
材料および方法
本実施例は、多発性骨髄腫の処置における化合物Iの使用に関連する、実施例28〜35に記載の実験を行う材料および方法についての情報を提供する。
材料
p110δインヒビター化合物Iおよび化合物IIは、Calistoga Pharmaceuticals,(Seattle,WA)から提供された。用いられる化合物IおよびIIのサンプルは、95%超がS鏡像異性体であった。化合物Iを、ジメチルスルホキシド中に10mMで溶解し、インビトロ研究のために−20℃で保管した。化合物IIは、1%のカルボキシメチルセルロース(CMC)/0.5% Tween 80中に溶解して、インビボの研究のために4℃で保管した。組み換えヒトP110α、β、γおよびδは、0.1%BSAを含有する無菌のリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で再構成した。ボルテゾミブは、Millennium Pharmaceuticals(Cambridge,MA)から提供された。3−メチルアデニンは、Sigma−Aldrich(St.Louis,MO)から購入した。
p110δインヒビター化合物Iおよび化合物IIは、Calistoga Pharmaceuticals,(Seattle,WA)から提供された。用いられる化合物IおよびIIのサンプルは、95%超がS鏡像異性体であった。化合物Iを、ジメチルスルホキシド中に10mMで溶解し、インビトロ研究のために−20℃で保管した。化合物IIは、1%のカルボキシメチルセルロース(CMC)/0.5% Tween 80中に溶解して、インビボの研究のために4℃で保管した。組み換えヒトP110α、β、γおよびδは、0.1%BSAを含有する無菌のリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で再構成した。ボルテゾミブは、Millennium Pharmaceuticals(Cambridge,MA)から提供された。3−メチルアデニンは、Sigma−Aldrich(St.Louis,MO)から購入した。
細胞培養
Dex−感受性(MM.1S)および抵抗性(MM.1R)のヒトMM細胞株は、Steven Rosen博士(Northwestern University,Chicago,IL)から贈呈された。H929、RPMI8226、およびU266ヒトMM細胞株は、American Type Culture Collection(Manassas,VA)から入手した。メルファラン抵抗性RPMI−LR5およびドキソルビシン(Dox)−抵抗性のRPMI−Dox40細胞株は、William Dalton博士(Lee Moffitt Cancer Center,Tampa,FL)から贈呈された。OPM1形質細胞白血病細胞は、Edward Thompson博士(University of Texas Medical Branch,Galveston)から贈呈された。IL−6依存性のヒトMM細胞株INA−6は、Renate Burger博士から提供された(University of Kiel,Kiel,Germany)。LBヒトMM細胞株は、研究室で樹立された。表現型分析では、細胞遺伝学的異常は示されなかった。表現型分析を表6に示す。フローサイトメトリー分析によって規定された、LB細胞株のCD発現プロフィール。
Dex−感受性(MM.1S)および抵抗性(MM.1R)のヒトMM細胞株は、Steven Rosen博士(Northwestern University,Chicago,IL)から贈呈された。H929、RPMI8226、およびU266ヒトMM細胞株は、American Type Culture Collection(Manassas,VA)から入手した。メルファラン抵抗性RPMI−LR5およびドキソルビシン(Dox)−抵抗性のRPMI−Dox40細胞株は、William Dalton博士(Lee Moffitt Cancer Center,Tampa,FL)から贈呈された。OPM1形質細胞白血病細胞は、Edward Thompson博士(University of Texas Medical Branch,Galveston)から贈呈された。IL−6依存性のヒトMM細胞株INA−6は、Renate Burger博士から提供された(University of Kiel,Kiel,Germany)。LBヒトMM細胞株は、研究室で樹立された。表現型分析では、細胞遺伝学的異常は示されなかった。表現型分析を表6に示す。フローサイトメトリー分析によって規定された、LB細胞株のCD発現プロフィール。
全てのMM細胞株を、RPMI1640培地中で培養した。骨髄間質細胞(BMSC)は、15%ウシ胎仔血清,2mMのL−グルタミン(Life Technologies)、100U/mLのペニシリン、および100μg/mLのストレプトマイシン(Life Technologies)を含有するダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)(Sigma)中で培養した。健常ボランティアから収集した血液サンプルを、Ficoll−Paque(商標)勾配によって処理して、末梢血単核球(PBMNC)を得た。患者のMMおよびBM細胞は、インフォームド・コンセントをヘルシンキ宣言およびDana−Farber Cancer Institute(Boston,MA)の治験審査委員会(Institutional Review Board)による承認を通じて得た後に、BMサンプルから入手した。BM単核球は、Ficoll−Paque(商標)密度沈降を用いて分離し、形質細胞を、抗CD138磁気活性化細胞分離マイクロビーズ(Miltenyi Biotec,Auburn,CA)での陽性選択によって精製した(>95%CD138+)。腫瘍細胞はまた、RosetteSep陰性選択システム(StemCell Technologies,Vancouver,BC,Canada)を用いてMM患者のBMからも精製した。
増殖阻害アッセイ
MM細胞株、PBMC、およびBMSCの増殖に対する化合物Iの増殖阻害性効果を、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル四ナトリウム臭化物(MTT;Chemicon International,Temecula,CA)色素吸光度を測定することによって評価した。
MM細胞株、PBMC、およびBMSCの増殖に対する化合物Iの増殖阻害性効果を、3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル四ナトリウム臭化物(MTT;Chemicon International,Temecula,CA)色素吸光度を測定することによって評価した。
BMにおけるパラクリンMM細胞増殖に対する化合物Iの効果
MM細胞(2×104細胞/ウェル)を、薬物の有無において、BMSCコーティングした96ウェルプレート(Costar,Cambridge,MA)中で48時間培養した。DNA合成は、[3H]−チミジン(Perkin−Elmer,Boston,MA)取り込みによって、48時間の培養の最後の8時間の間に[3H]−チミジン(0.5μCi/ウェル)を添加することによって測定した。全ての実験は、四連で行った。
MM細胞(2×104細胞/ウェル)を、薬物の有無において、BMSCコーティングした96ウェルプレート(Costar,Cambridge,MA)中で48時間培養した。DNA合成は、[3H]−チミジン(Perkin−Elmer,Boston,MA)取り込みによって、48時間の培養の最後の8時間の間に[3H]−チミジン(0.5μCi/ウェル)を添加することによって測定した。全ての実験は、四連で行った。
P110δ発現の一時的なノックダウン
INA−6細胞およびLB細胞を、Cell Line Nucleofector Kit V(Amaxa BIosystems Gaitherburg,MD)を用いてsiRNA ON−TARGETプラスSMARTプールP110δまたは非特異的なコントロール二重鎖(Dharmacon Lafayette,Co)を用いて一時
的にトランスフェクトした。
INA−6細胞およびLB細胞を、Cell Line Nucleofector Kit V(Amaxa BIosystems Gaitherburg,MD)を用いてsiRNA ON−TARGETプラスSMARTプールP110δまたは非特異的なコントロール二重鎖(Dharmacon Lafayette,Co)を用いて一時
的にトランスフェクトした。
免疫蛍光
生きているMM細胞(2.5×104)を、サイトスピンシステム(Thermo Shandon,Pittsburgh,PA)を用いて5分間500rpmで遠心分離によってガラススライド上にペレットにした。細胞を冷無水アセトンおよびメタノール中で10分間固定した。固定後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中で洗浄し、次いでPBS中の5%FBSを用いて60分間ブロックした。次いで、スライドを抗CD138抗体(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)とともに4℃で24時間インキュベートし、PBS中で洗浄して、ヤギ抗マウスIgGとともに4℃で1時間インキュベートし、Nikon E800蛍光顕微鏡検査を用いて分析した。
生きているMM細胞(2.5×104)を、サイトスピンシステム(Thermo Shandon,Pittsburgh,PA)を用いて5分間500rpmで遠心分離によってガラススライド上にペレットにした。細胞を冷無水アセトンおよびメタノール中で10分間固定した。固定後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中で洗浄し、次いでPBS中の5%FBSを用いて60分間ブロックした。次いで、スライドを抗CD138抗体(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)とともに4℃で24時間インキュベートし、PBS中で洗浄して、ヤギ抗マウスIgGとともに4℃で1時間インキュベートし、Nikon E800蛍光顕微鏡検査を用いて分析した。
アクリジンオレンジ染色による酸性小胞性オルガネラ(Acidic Vesicular Organelles)(AVO)の検出および定量化
自食作用は、細胞質タンパク質の隔離およびAVOの発達によって特徴付けられる。化合物Iまたは3MAで処理した細胞においてAVOを検出および定量化するために、生体染色を、アクリジン・オレンジを1μg/mlの最終濃度で用いて15分間行った。サンプルを蛍光顕微鏡下で試験した。
自食作用は、細胞質タンパク質の隔離およびAVOの発達によって特徴付けられる。化合物Iまたは3MAで処理した細胞においてAVOを検出および定量化するために、生体染色を、アクリジン・オレンジを1μg/mlの最終濃度で用いて15分間行った。サンプルを蛍光顕微鏡下で試験した。
血管形成アッセイ
化合物Iの抗血管形成活性は、インビトロでAngiogenesis Assay Kit(Chemicon,Temecula,CA)を用いて決定した。HUVECおよび内皮増殖培地は、Lonza(Walkersville,MD,USA)から入手した。HUVECは、重合したマトリクスゲル上で37℃で化合物Iとともに培養した。8時間後、管形成は、Leika DM IL顕微鏡検査(Leica Microsystems,Wetzlar,Germany)を用いて評価し、IM50ソフトウェア(Leica Microsystems Imaging Solutions,Cambridge,UK)で分析した。HUVEC細胞遊走および再配置を可視化して、分岐ポイントの数をカウントした。
化合物Iの抗血管形成活性は、インビトロでAngiogenesis Assay Kit(Chemicon,Temecula,CA)を用いて決定した。HUVECおよび内皮増殖培地は、Lonza(Walkersville,MD,USA)から入手した。HUVECは、重合したマトリクスゲル上で37℃で化合物Iとともに培養した。8時間後、管形成は、Leika DM IL顕微鏡検査(Leica Microsystems,Wetzlar,Germany)を用いて評価し、IM50ソフトウェア(Leica Microsystems Imaging Solutions,Cambridge,UK)で分析した。HUVEC細胞遊走および再配置を可視化して、分岐ポイントの数をカウントした。
ウエスタンブロッティング
MM細胞を、化合物Iの有無において培養し;収集し;洗浄し;ラジオイムノ沈殿アッセイ(radioimmuno precipitation assay)(RIPA)緩衝液、2mM Na3VO4、5m M NaF、1mM フェニルメチルスルホニルフルオライド(5mg/ml)を用いて溶解した。全細胞溶解液を、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)分離に供し、Pure Nitrocellulose膜(Bio−Rad Laboratories,Hercules,CA)に転写して、抗AKT、ホスホ(p)−AKT(Ser473,Thr 308)、ERK1/2、P−ERK1/2、P−PDK1、STAT、P−STAT、P−FKRHL、P−70S6K、LC3、およびPI3K/p110 α Abs(Cell Signaling Danvers,MA);抗p110β,PI3K/p110δ、グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)、α−チューブリンおよびアクチンAbs(Santa Cruz Biotechnology,CA);ならびに抗p110γ Ab(Alexis,San Diego,CA):ならびに抗LC3 Ab(Abgent,San Diego,CA)でイムノブロットした。
MM細胞を、化合物Iの有無において培養し;収集し;洗浄し;ラジオイムノ沈殿アッセイ(radioimmuno precipitation assay)(RIPA)緩衝液、2mM Na3VO4、5m M NaF、1mM フェニルメチルスルホニルフルオライド(5mg/ml)を用いて溶解した。全細胞溶解液を、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)分離に供し、Pure Nitrocellulose膜(Bio−Rad Laboratories,Hercules,CA)に転写して、抗AKT、ホスホ(p)−AKT(Ser473,Thr 308)、ERK1/2、P−ERK1/2、P−PDK1、STAT、P−STAT、P−FKRHL、P−70S6K、LC3、およびPI3K/p110 α Abs(Cell Signaling Danvers,MA);抗p110β,PI3K/p110δ、グリセルアルデヒド3−リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)、α−チューブリンおよびアクチンAbs(Santa Cruz Biotechnology,CA);ならびに抗p110γ Ab(Alexis,San Diego,CA):ならびに抗LC3 Ab(Abgent,San Diego,CA)でイムノブロットした。
ELISA
MM細胞と共培養したヒトBMSCによるサイトカイン分泌を、ELISAによって評
価した。BMSCは、種々の濃度の化合物Iとともに、INA−6細胞の有無において、96ウェルプレート中で培養した。48時間後、上清を回収して、−80℃で保管し、サイトカインを、DuoセットELISA Development Kits(R&D Systems,Minneapolis,MN)を用いて測定した。全ての測定は、三連で行った。
MM細胞と共培養したヒトBMSCによるサイトカイン分泌を、ELISAによって評
価した。BMSCは、種々の濃度の化合物Iとともに、INA−6細胞の有無において、96ウェルプレート中で培養した。48時間後、上清を回収して、−80℃で保管し、サイトカインを、DuoセットELISA Development Kits(R&D Systems,Minneapolis,MN)を用いて測定した。全ての測定は、三連で行った。
ヒトサイトカインアレイ
培養上清中のサイトカインレベルは、Proteome Profiler Antibody Arrays Panel A(R&D Systems,Minneapolis,MN)を用いて評価し、BMSCとの共培養物由来の上清を、製造業者の指示に従って、37のサイトカインに対するAbを整列させた膜とともに4時間インキュベートした。
培養上清中のサイトカインレベルは、Proteome Profiler Antibody Arrays Panel A(R&D Systems,Minneapolis,MN)を用いて評価し、BMSCとの共培養物由来の上清を、製造業者の指示に従って、37のサイトカインに対するAbを整列させた膜とともに4時間インキュベートした。
ヒトMMのマウス異種移植片モデル
CB17 SCIDマウス(48〜54日齢)を、Charles River Laboratories(Wilmington,MA)から購入した。全ての動物研究は、Dana−Farber Cancer InstituteのAnimal Ethics Committeeによって承認されたプロトコールによって行った。マウスには、右脇腹に、100μL RPMI−1640中の3×106 LB細胞を皮下注射した。腫瘍が明白であった場合、マウスを毎日2回10mg/kgまたは30mg/kgを胃管投与される処置群;およびビヒクル単独を投与されるコントロール群では7匹のマウスに割り当てた。最長の直交腫瘍直径のキャリパー測定を、1日おきに行って、楕円の3D容積を示す以下の式:4/3×(幅/2)2×(長さ/2)を用いて腫瘍容積を推定する。動物は、腫瘍が2cmに達するかまたはマウスが瀕死とみられた場合に屠殺した。生存は、処置の初日から死亡まで評価した。腫瘍増殖は、処置の初日から最初の屠殺の日(これは、コントロール群では12日、および処置群では17日および19日)までキャリパー測定を用いて評価した。この画像は、キャノンIXYデジタル700カメラで撮影した。腫瘍画像のエキソビボ分析は、LEICA DM IL顕微鏡およびLEICA DFC300 FXカメラを40u/0.60(Leica,Heidelberg,Germany)で用いて得た。
CB17 SCIDマウス(48〜54日齢)を、Charles River Laboratories(Wilmington,MA)から購入した。全ての動物研究は、Dana−Farber Cancer InstituteのAnimal Ethics Committeeによって承認されたプロトコールによって行った。マウスには、右脇腹に、100μL RPMI−1640中の3×106 LB細胞を皮下注射した。腫瘍が明白であった場合、マウスを毎日2回10mg/kgまたは30mg/kgを胃管投与される処置群;およびビヒクル単独を投与されるコントロール群では7匹のマウスに割り当てた。最長の直交腫瘍直径のキャリパー測定を、1日おきに行って、楕円の3D容積を示す以下の式:4/3×(幅/2)2×(長さ/2)を用いて腫瘍容積を推定する。動物は、腫瘍が2cmに達するかまたはマウスが瀕死とみられた場合に屠殺した。生存は、処置の初日から死亡まで評価した。腫瘍増殖は、処置の初日から最初の屠殺の日(これは、コントロール群では12日、および処置群では17日および19日)までキャリパー測定を用いて評価した。この画像は、キャノンIXYデジタル700カメラで撮影した。腫瘍画像のエキソビボ分析は、LEICA DM IL顕微鏡およびLEICA DFC300 FXカメラを40u/0.60(Leica,Heidelberg,Germany)で用いて得た。
ヒト胎児の骨移植片を、CB17 SCIDマウス(SCID−hu)に移植した。骨移植4週後、2.5×106個のINA−6細胞を、100μlの最終容積のRPMI−1640培地中で移植片のヒトBM腔に直接注射した。INA−6細胞由来の可溶性ヒトIL−6レセプター(shuIL−6R)のレベルの増大を、SCID−huマウスにおけるMM細胞増殖および疾患の負荷の指標として用いた。マウスは、INA−6細胞注射の約4週後測定可能な血清shuIL−6Rを生じ、次いで10もしくは30mg/kgの薬物またはビヒクル単独のいずれかを7週間毎日与えられた。血液サンプルを収集し、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA,R&D Systems.Minneapolis MN)を用いてshuIL−6Rレベルについて評価した。
統計学的分析
統計学的有意性は、ダン多重比較試験によって決定した。最小レベルの有意性はp<0.05であった。生存は、カプラン・マイヤー曲線およびログ・ランク分析を用いて評価した。化合物Iおよびボルテゾミブの併用効果は、CalcuSynソフトウェアプログラム(Biosoft,Ferguson,MO)を用いるアイソボログラム分析によって分析した;併用指数(combination index)(CI)<0.7は、相乗効果を示す。
統計学的有意性は、ダン多重比較試験によって決定した。最小レベルの有意性はp<0.05であった。生存は、カプラン・マイヤー曲線およびログ・ランク分析を用いて評価した。化合物Iおよびボルテゾミブの併用効果は、CalcuSynソフトウェアプログラム(Biosoft,Ferguson,MO)を用いるアイソボログラム分析によって分析した;併用指数(combination index)(CI)<0.7は、相乗効果を示す。
(実施例28)
MM細胞におけるp110δの発現
本実施例によって、p110δが患者MM細胞で高度に発現されることが示される。PI3K/p110発現を評価するために、Abを、これらのイソ型に対して特異的な免疫反応性を有する組み換えヒトPI3K/p110α、β、γ、およびδのタンパク質に対して用いた。11MM細胞株(MM.1S、OPM1、OPM2、RPMI8226、DOX40、LR5、MM.1R、U266、INA−6、H929、およびLB)におけるp110δの発現、および24例の患者MMサンプルを評価して、イムノブロットを図30Aおよび30Bに示す。図30Aは、特定の抗体を用いるイムノブロットによって検出したMM細胞株におけるp110−α、−β、−γ、および−δの発現を示す。抗−α−チューブリンMAbは、ローディングコントロールとして働いた。患者MM細胞中のp110δは、抗P110δ Abを用いるイムノブロットによって検出した(図30B)。
MM細胞におけるp110δの発現
本実施例によって、p110δが患者MM細胞で高度に発現されることが示される。PI3K/p110発現を評価するために、Abを、これらのイソ型に対して特異的な免疫反応性を有する組み換えヒトPI3K/p110α、β、γ、およびδのタンパク質に対して用いた。11MM細胞株(MM.1S、OPM1、OPM2、RPMI8226、DOX40、LR5、MM.1R、U266、INA−6、H929、およびLB)におけるp110δの発現、および24例の患者MMサンプルを評価して、イムノブロットを図30Aおよび30Bに示す。図30Aは、特定の抗体を用いるイムノブロットによって検出したMM細胞株におけるp110−α、−β、−γ、および−δの発現を示す。抗−α−チューブリンMAbは、ローディングコントロールとして働いた。患者MM細胞中のp110δは、抗P110δ Abを用いるイムノブロットによって検出した(図30B)。
抗−GAPDH MAbは、ローディングコントロールとして働いた。INA−6およびLB細胞は強力にp110δを発現したが、MM.1S、OPM1、MM.1R、Dox40、U266またはH929は、p110δ発現を欠乏した(図30A)。
MM.1SおよびLB細胞におけるp110δ発現は、免疫蛍光分析によって確認した(図30C)。SDSサンプル緩衝液中のヒト組み換えP110−α、−β、−γ、−δのタンパク質は、ゲル上でのローディングの前に3分間加熱した。(1レーンあたり10〜20μg)。組み換えヒトP110−α、−β、−γ、−δのタンパク質は、イムノブロット分析によって検出した。P110δのレベルは、P110 δ特異的なFITC結合体化二次抗体を用いてMM1SおよびLB細胞で測定した。P110δは緑に染色し、核酸(DAPI)は青く染色した。
ウエスタンブロットは、p110δ発現と他のイソ型(α、βおよびγ)の発現との間の相関は明らかにならなかった。重要なことに、全ての患者MM細胞はまた、p110δを発現した(図30B)。
(実施例29)
MM細胞における化合物Iの細胞毒性
本実施例は、化合物Iが、p110δを有する細胞に対する選択的細胞毒性を有することを示す。詳細には、化合物Iは強力に、p110δ陽性MM細胞ならびに初代患者MM細胞において細胞毒性を誘導し、健常ドナー由来の末梢血単核球において細胞毒性なしであって、このことは好ましい治療指数を示唆する。
MM細胞における化合物Iの細胞毒性
本実施例は、化合物Iが、p110δを有する細胞に対する選択的細胞毒性を有することを示す。詳細には、化合物Iは強力に、p110δ陽性MM細胞ならびに初代患者MM細胞において細胞毒性を誘導し、健常ドナー由来の末梢血単核球において細胞毒性なしであって、このことは好ましい治療指数を示唆する。
MM細胞におけるp110δノックダウンの増殖阻害効果を評価した。LBおよびINA−6細胞を、P110δ siRNA(Si)またはコントロールのsiRNA(Mock(モック))を用いてトランスフェクトした。24時間後、P110 δの発現は、ウエスタンブロット分析によって決定した(図31Aを参照のこと)。INA−6細胞を、p110δ siRNAまたはコントロールのsiRNAでトランスフェクトし、次いで72時間培養した。細胞増殖をMTTアッセイによって評価した(図31Bを参照のこと)。データは、コントロールの倍数として表現される、三連の培養の平均値±SDを示す。p110δ siRNAでのトランスフェクションは、p110δを下方制御し、MM細胞増殖を72時間で阻害したが、ただしモックsiRNAでのトランスフェクションではそうではなかった(図31Aおよび31B)。MM細胞株、PBMCおよび患者のMM細胞においてp110δ特異的低分子インヒビター化合物Iの増殖阻害性効果を評価した。
化合物Iは、用量依存性および時間依存性の方式で、LBおよびINA−6 MM細胞
(p110δ陽性)に対する細胞毒性を誘導した;対照的にp110δ陰性の細胞株では細胞毒性は最小であったことに注意(図31C)。図31Cについての凡例:LB(□)、INA−6(△)、RPMI 8226(○)、OPM2(◇)、H929(●)、U266(◆)、RPMI−LR5(▲)およびOPM1(■)MM細胞を、化合物Iの有無において48時間培養した。
(p110δ陽性)に対する細胞毒性を誘導した;対照的にp110δ陰性の細胞株では細胞毒性は最小であったことに注意(図31C)。図31Cについての凡例:LB(□)、INA−6(△)、RPMI 8226(○)、OPM2(◇)、H929(●)、U266(◆)、RPMI−LR5(▲)およびOPM1(■)MM細胞を、化合物Iの有無において48時間培養した。
重要なことに、化合物Iはまた、最大20μMまでの濃度で4例の健常ボランティア由来のPBMC中で細胞毒性なしに(図31E)、患者MM細胞に対する細胞毒性を誘導した(図31D)。陰性選択によってBMから単離された患者のMM細胞を、化合物Iで48時間培養した。健常ドナーから単離された末梢血単核球を化合物Iとともに72時間培養した。データは、未処置のコントロールに対する割合として表す、三連の培養物のMTTアッセイによって評価した、平均値±SD生存度を示す。これらの結果、化合物Iに対する感受性は、P110δ発現に関連していることが強力に示唆され、好ましい治療ウインドウが示唆される。
化合物Iによって誘導される細胞毒性がアポトーシスを介するか否かを決定するために、ウエスタンブロット分析によってカスパーゼおよびPARPの切断を検査した。INA−6細胞を化合物I(0〜5μM)とともに120時間培養した。全細胞溶解液を、抗カスパーゼ−3、−8、−9、PARP、およびα−チューブリンAbを用いるイムノブロットに供した。FLは、全長タンパク質を示し、CLは切断タンパク質を示す。化合物Iで120時間処理したINA−6 MM細胞では、カスパーゼ−8、カスパーゼ−9、カスパーゼ−3およびPARPの切断の有意な増大が観察された(図31F)。これらの結果、化合物Iによって誘導される細胞毒性は、少なくとも一部は、カスパーゼ依存性(内因性および外因性の両方)のアポトーシスを介して媒介されることが示される。
(実施例30)
化合物IによるAKTおよびERKリン酸化の阻害
本実施例は、化合物IによるAKTおよびERKリン酸化の阻害を示す。
化合物IによるAKTおよびERKリン酸化の阻害
本実施例は、化合物IによるAKTおよびERKリン酸化の阻害を示す。
PI3Kの重要な下流エフェクターは、セリン/トレオニンタンパク質キナーゼAKTであり、これは、キナーゼドメインの活性化ループにおけるThr308およびC末端テールにおけるSer473のリン酸化によって活性化される。両方の部位のリン酸化には、AKTのN末端プレクストリン相同性ドメインとPI3Kによって生成された膜ホスホイノシチドとの間の相互作用が必要である。化合物Iが両方のドメインを阻害することが示され、これによってP110δはMM細胞株におけるPI3Kシグナル伝達を担う主要なイソ型であることが示唆される。
化合物IによるINA−6細胞中のAKTおよびERK経路の阻害を調べた。INA−6細胞を、化合物IまたはLY294002を用いて12時間培養した(図32A)。アクチンAbをローディングコントロールとして用いた。INA−6およびMM.1S細胞を、化合物I(0、0.25、1.0、5.0μM)とともに6時間培養した(図32B)。LBおよびINA−6細胞を、化合物Iとともに0〜6時間培養した(図32C)。細胞丸ごとの溶解液を、AKT、P−AKT(Ser473およびThr308)、ERK1/2、P−ERK1/2、P−PDK1、およびP−FKRHL 抗体を用いてイムノブロットに供した。α−チューブリンをローディングコントロールとして用いる。
化合物Iは、p110δ陽性のINA−6細胞におけるAKTおよびERK1/2のリン酸化を有意にブロックしたが(図32A)、P110δの発現が低いMM.1S細胞中のAKTまたはERKのリン酸化には影響しなかった(図32B)。化合物Iはまた、時間依存性および用量依存性の様式でINA−6およびLB MM細胞において上流PDK
−1および下流FKHRLのリン酸化を有意に阻害し(図32C)、さらに、これらの細胞においてPI3K/AKTおよびERK経路の両方の阻害が確認された。
−1および下流FKHRLのリン酸化を有意に阻害し(図32C)、さらに、これらの細胞においてPI3K/AKTおよびERK経路の両方の阻害が確認された。
(実施例31)
化合物IはAVO発達および自食作用を誘導する
本実施例は、化合物Iがアポトーシスおよび自食作用の両方を誘導する能力を示す。
化合物IはAVO発達および自食作用を誘導する
本実施例は、化合物Iがアポトーシスおよび自食作用の両方を誘導する能力を示す。
AKTは、自食作用を調節し、これによってLBおよびINA−6 MM細胞において自食作用を誘導することにおける化合物Iの調査を行った。
INA−6およびLB MM細胞を、5μMの化合物Iで6時間処理した。化合物Iの処理は、蛍光顕微鏡検査または透過電子顕微鏡検査によって証明される、LBおよびINA−6細胞におけるLC3蓄積を誘導した。オートファゴソーム形成は、LC3の蓄積によって規定され;矢印はオートファゴソームを示す(図33A)。
INA−6細胞を、5μMの化合物Iまたは血清飢餓を用いて6時間処理し、1μg/mLのアクリジン・オレンジで15分間染色し、蛍光顕微鏡検査によって分析した(図33B)。
LC3およびベクリン−1タンパク質レベルは、化合物Iを用い、3−MAの有無において処理したINA−6細胞由来の溶解液のLC3およびベクリン−1抗体を用いてウエスタンブロットによって決定した(図33C)。GAPDHは、ローディングコントロールとして機能した。
免疫蛍光分析は、化合物I(5μM、6時間)処理によって誘導されたINA−6およびLB細胞において顕著に増大したLC3染色を示した(図33A)。電子顕微鏡分析によってまた、化合物Iで処理されたMM細胞における自己貪食空胞(矢印)の増大が示された。自食作用は酸性小胞オルガネラ(acidic vesicular organelle)(AVO)の発達として特徴付けられるので、アクリジン・オレンジ染色を行った。図33Bに示されるとおり、アクリジン・オレンジでの生体染色によって、化合物Iで処理したLBおよびINA−6細胞におけるAVOの発達が明らかになった。さらに、化合物Iでの6時間の処理後、INA−6MM細胞中で、顕著に増大したLC3−IIおよびベクリン1タンパク質が検出され、これは3−MA自食作用インヒビターによってブロックされた(図33C)。
INA−6およびLB細胞における細胞毒性は、最大100μMまでの濃度の3−MAで誘導されなかった(図33D)。p110δ陽性LB細胞(◆)を3−MA(0〜100μM)を用いて24時間処理した。データは三連の培養の平均(±SD)である。
これらの結果、化合物Iは、カスパーゼ/PARP切断の誘導よりも早期の時点でAVOおよび自食作用の発達を誘導することが示される。
自食作用は、細胞成分を分解し、細胞の構成要素を再循環し、種々の細胞ストレスに応答する。本実施例では、自食作用の特質であるLC3−IIが、p110δ陽性MM細胞株における化合物Iの処理によって誘導される。重要なことに、化合物Iでの処理は、自食作用の顕著な増大(細胞質における自己貪食空胞の存在によって証明される)、AVOの形成、オートファゴソームを有するLC3の微小管関連タンパク質Iの膜会合、およびLC3−IIタンパク質の顕著な誘導を生じた。電子顕微鏡分析によって、化合物Iがオートファゴソームを誘導したことが確認された。LC3−IIは、LC3−I変換を通して表された。反対に、化合物Iによって誘導される自食作用は、自食作用の特異的なイン
ヒビターである3−MAによって抑制された。これらの研究によって、化合物Iの早期細胞毒性効果は、自食作用と関連していることが示唆される。
ヒビターである3−MAによって抑制された。これらの研究によって、化合物Iの早期細胞毒性効果は、自食作用と関連していることが示唆される。
(実施例32)
化合物Iは、BMSCの存在下で細胞増殖を阻害する。
化合物Iは、BMSCの存在下で細胞増殖を阻害する。
本実施例は、化合物IがBMSCの存在によるパラクリンMM細胞増殖を阻害する能力を示す。
IL−6およびIGF−1は、MM細胞において増殖および抗アポトーシスを誘導するので、化合物Iを、INA−6およびLB MM細胞においてこれらのサイトカインの効果を克服することに関して試験した。LBおよびINA−6細胞を、48時間、
IL−6(1および10ng/ml)(図34A)またはIGF−1(10および100ng/mL)(図34B)の有無において培養した。DNA合成は、72時間の培養のうち最後の8時間の間[3H]−チミジン組み込みを測定することによって決定した。データは三連の培養の平均(±SD)を示す。IL−6もIGF−1も化合物Iによって誘導される増殖阻害に対して防御しなかった(図34Aおよび34B)。
BM微小環境によって、MMにおける増殖および薬物耐性がもたらされ、これによってBMSCの存在下での化合物IのMM細胞増殖阻害性効果が調査された。
LBおよびINA−6MM細胞を、48時間、
BMSCの有無において培養した(図34C)。DNA合成は、[3H]−チミジン組み込みによって決定された。データは三連の培養の平均(±SD)を示す。
化合物I(0〜2.5μM)で処理したBMSC由来の培養上清中のIL−6を、ELISAによって測定した(図34D)。エラーバーはSD(±)を示す。
BMSCを、1.0μMの化合物Iまたはコントロール培地とともに48時間培養した;培養上清中のサイトカインは、サイトカンアレイを用いて検出した(図34E)。
INA−6細胞(BMSCの有無において培養)を化合物を用いて48時間処理した。総細胞溶解液を、示した抗体を用いてイムノブロッティングに供した(図34F)。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
2例の異なる患者由来のBMSC(□、◇)を、化合物I(0〜20μM)とともに48時間培養した。細胞生存度をMTTアッセイによって評価した(図34G)。値は、三連の培養の平均値±SDである。
重要なことに、化合物Iは、増殖およびサイトカイン分泌(図34C〜図34E)、ならびにBMSCによって誘導されるAKTおよびERKのリン酸化(図34F)を阻害した。対照的に、BMSCにおける有意な増殖阻害は注目されなかった(図34G)。これらの結果によって、化合物Iは、BMの微小環境の状況でパラクリンMM細胞増殖をブロックすることが示される。
(実施例33)
化合物Iは、血管形成性HuVEC管形成を阻害する
本実施例は、化合物IがHuVEC管形成を阻害する能力を示す。PI3K、特にp110イソ型の血管形成における役割を調査した。内皮細胞は、腫瘍増殖のための血管形成の必須の調節因子である。AktおよびERK経路の両方とも、内皮細胞増殖および血管形成の調節に関連する;そして重要なことに、内皮細胞はp110δを発現する。本実施例はまた、化合物IがAktリン酸化の下方制御に関連するインビトロでの毛細管様管形成をブロックすることも示す。
化合物Iは、血管形成性HuVEC管形成を阻害する
本実施例は、化合物IがHuVEC管形成を阻害する能力を示す。PI3K、特にp110イソ型の血管形成における役割を調査した。内皮細胞は、腫瘍増殖のための血管形成の必須の調節因子である。AktおよびERK経路の両方とも、内皮細胞増殖および血管形成の調節に関連する;そして重要なことに、内皮細胞はp110δを発現する。本実施例はまた、化合物IがAktリン酸化の下方制御に関連するインビトロでの毛細管様管形成をブロックすることも示す。
血管形成に対するP110 δ阻害の効果を調査した。HuVECを、0、1.0、または10μMの化合物Iを用いて8時間処理し、内皮細胞による管形成を評価した(図35A)。HuVEC細胞を、マトリゲル・コーティング表面にプレートして、化合物Iの有無において細管を8時間形成させた、内皮細胞管形成は、顕微鏡分析によって測定した(図35B)。*P<0.005。
HuVECを化合物I(0〜20μM)を用いて48時間培養し、生存度をMTTアッセイによって評価した(図35C)。示されるデータは、代表的な実験からの三連のウェルの平均値±SEである。従って、化合物Iは、細胞毒性に関連することなく(図35C)、用量依存性の様式で毛細管様管形成を阻害した(p<0.05)(図35B)。
AKTおよびERK1/2のリン酸化および発現は、化合物I処理によってHuVEC細胞で顕著に下方制御された。HuVECは、化合物I(0〜200μM)を用いて8時間培養され、細胞溶解液は、示した抗体を用いるイムノブロットによって分析された(図35D)。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
これらの知見によって、化合物Iは、AKTおよびERK活性の下方制御に関連して、血管形成を阻害し得ることが示唆される。
(実施例34)
化合物IIは、インビボでMM細胞増殖を阻害する。
化合物IIは、インビボでMM細胞増殖を阻害する。
本実施例は、化合物IIがインビボでヒトMM細胞増殖を阻害する能力を示す。
P110δインヒビターのインビボ有効性は、SCIDマウスがヒトMM細胞を皮下注射される異種移植片モデルで評価した。
5×106個のLB細胞を注射されたマウスを、コントロールのビヒクル(●)、および化合物II 10mg/kg(□)または30mg/kg(○)を用いて1日2回経口的に処置した。平均の腫瘍容積は、材料および方法にあるように算出した(図36A)。エラーバーはSD(±)を示す。
コントロールビヒクル(上のパネル)または化合物II(30mg/kg)(下のパネル)を用いて12日間処置したマウス由来の代表的な全身の画像(図36B)。
化合物II(30mg/kg)で処置したマウス(右側のパネル)およびコントロールのマウス(左側のパネル)から回収した腫瘍をCD31 AbおよびP−AKT Abを用いて免疫組織化学分析に供した。CD31およびP−AKT陽性細胞は濃褐色である(図36D)
マウスを
マウスを
で処置した。生存は、処置の初日から屠殺までカプラン・メイヤー曲線を用いて評価した(図36C)。
腫瘍組織は、コントロールビヒクルまたは化合物II(30mg/kg)で処置したマウスから収集した。PDK−1およびAKT(Ser473)のリン酸化されたタンパク質レベルを、細胞溶解液のウエスタンブロットによって決定した(図36E)。アクチンをローディングコントロールとして用いた。
SCIDマウスにおけるヒト骨チップに移植されたINA−6細胞の増殖を、shuIL−6Rの連続血清測定によってモニターした。マウスを、化合物II 10mg/kg(□)、30mg/kg(△)またはコントロールのビヒクル(●)で処置して、shuIL−6RレベルをELISAによって毎週決定した(図36F)。エラーバーは、SD(±)を示す。
化合物II(p110δインヒビター)は、コントロールのマウス(n=7)に比較して処置群(n=7)ではMM腫瘍増殖を有意に減少させた。腫瘍容積の比較によって、コントロール群対処置群の間の統計学的に有意差が示された(対10mg/kg、P<0.05;対30mg/kg、P<0.01)(図36A)。処置マウス対コントロールマウスにおいて12日で腫瘍増殖に顕著な低下が観察された(図36B)。カプラン・メイヤー曲線およびログ・ランク分析によって、それぞれ、コントロールマウスにおける15日間(95%信頼区間、12〜17日間)対、10mg/kgおよび30mg/kgの化合物II処置群における23日間(95%CI、15〜34日間)および32日間(95%CI、27〜49日間)の平均全生存期間(OS)を示した。コントロールのマウスに比較した平均OSにおける統計学的に有意な延長はまた、処置群でも観察された(対10mg/kg、P=0.086;対30mg/kg,P=0.056)(図36C)。重要なことに、ビヒクル単独または化合物IIのいずれかでの処置は、体重に影響しなかった。さらに、免疫組織化学(図36D)およびイムノブロット(図36E)分析によって、化合物II処置(30mg/kg)がp−Aktおよびp−PDK−1を有意に阻害し、同様に、CD31陽性の細胞および微小血管密度を有意に減少させた(p<0.01)ことが確認された(図36D)。これによって、化合物IIがAkt経路の抑制を介してインビボで血管形成を阻害し得ることが示唆される。
インビボでのヒトBM微小環境の状況においてMM細胞増殖に対する化合物IIの活性を調査するため、SCID−huモデル(ここではIL−6依存性のINA−6細胞がSCIDマウスに皮下移植されたヒト骨チップに直接注射される)を用いた。このモデルは、INA−6ヒトMM細胞のヒトIL−6/BMSC依存性の増殖を伴うヒトBM微小環境を再利用する。これらのSCID−huマウスを化合物IIまたはビヒクル単独を用いて毎日4週間処置して、血清のshuIL−6Rを、腫瘍負荷のマーカーとしてモニター
した。図36Fに示されるとおり、化合物II処置は、ビヒクルコントロールに比較して腫瘍増殖を有意に阻害した。このモデルにおける有意な腫瘍増殖阻害が、観察され(INA−6細胞によって放出される減少した血清shuIL−6Rレベルで証明される)、これによってp110δ阻害がインビボでのBM微小環境のMM増殖促進活性をブロックすることが確認された。まとめると、これらのデータによって、化合物IIによるp110δの阻害は、MM増殖をインビボで有意に阻害し、生存を延長することが示される。
した。図36Fに示されるとおり、化合物II処置は、ビヒクルコントロールに比較して腫瘍増殖を有意に阻害した。このモデルにおける有意な腫瘍増殖阻害が、観察され(INA−6細胞によって放出される減少した血清shuIL−6Rレベルで証明される)、これによってp110δ阻害がインビボでのBM微小環境のMM増殖促進活性をブロックすることが確認された。まとめると、これらのデータによって、化合物IIによるp110δの阻害は、MM増殖をインビボで有意に阻害し、生存を延長することが示される。
(実施例35)
化合物Iはボルテゾミブと組み合わせて、相乗作用性の細胞毒性を示す。
化合物Iはボルテゾミブと組み合わせて、相乗作用性の細胞毒性を示す。
本実施例は、化合物Iとボルテゾミブを組み合わせて相乗作用性のMM細胞毒性を媒介する効果を示す。
化合物Iとボルテゾミブを組み合わせて相乗作用性のMM細胞毒性を誘導する効果を調査した。LBおよびINA−6MM細胞を
ボルテゾミブ(0〜5nM)の有無において培養した。細胞毒性は、MTTアッセイで評価し;データは四連の培養の平均値±SDである(図37A)。
INA−6細胞を、化合物I(5μM)および/またはボルテゾミブ(5nM)を用いて6時間処理した。AKTのリン酸化は、ホスホ−AKT(Ser473)抗体を用いて細胞溶解液のウエスタンブロットによって決定した(図37B)。アクチンがローディングコントロールとして機能した。
化合物Iは、ボルテゾミブの細胞毒性を増強する。漸増濃度の化合物I(1.5〜5.0μM)をボルテゾミブ(2.5、5.0nM)に添加したところ、LBおよびINA−6 MM細胞で相乗作用的な細胞毒性を誘導した(図37Aおよび表7)。重要なことに、ボルテゾミブ処理によるホスホ−Aktの誘導は、化合物Iの存在下で阻害された(図37B)。
濾胞性リンパ腫細胞株において有効な化合物I
本実施例は、化合物IがPI3Kシグナル伝達をブロックし、濾胞性リンパ腫細胞でアポトーシスを誘導するという証明を提供する。P110δは、図38Aで示されるようにFL細胞株中で発現される。特定の細胞株は、この細胞が化合物Iに曝された場合に、pAkt、Akt、pS6およびS6の産生の減少を示す(図38B)。PARPおよびカスパーゼ−3の切断が、化合物Iに曝された後、24時間後に0.1μMおよび0.5μMで用量依存性の様式で観察される(図38C)。
(実施例37)
初代MCL細胞において有効な化合物I
本実施例は、化合物IがMCLに対して有効であることを示す。化合物Iは、0.1μMまたは1μMの化合物Iに曝された場合、2例の患者の初代MCL細胞における構成的PI3Kシグナル伝達を用量依存性の様式でブロックすることが見出された(図39A)。化合物Iはまた、MCL細胞株で生存因子およびケモカインシグナル伝達を阻害することが観察されている。図39Bは、化合物Iの存在下で種々の生存因子に曝されたMCL株におけるpAktの有意な減少を示す。
初代MCL細胞において有効な化合物I
本実施例は、化合物IがMCLに対して有効であることを示す。化合物Iは、0.1μMまたは1μMの化合物Iに曝された場合、2例の患者の初代MCL細胞における構成的PI3Kシグナル伝達を用量依存性の様式でブロックすることが見出された(図39A)。化合物Iはまた、MCL細胞株で生存因子およびケモカインシグナル伝達を阻害することが観察されている。図39Bは、化合物Iの存在下で種々の生存因子に曝されたMCL株におけるpAktの有意な減少を示す。
(実施例38)
再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
データカットオフにおいて、6名のNHL患者および6名のCLL患者を含む12名の患者を本研究に登録した。患者には;メジアン年齢65(範囲:55〜80)歳の男性/女性n=8(67%)/4(33%)、および再発性/不応性疾患n=8(67%)/4(33%)を含めた。以前の治療のメジアン回数は3回(範囲:1〜11回)であった。すべての患者は式Iの化合物を100mgのBIDで受け;6名の患者はリツキシマブを受け、6名はベンダムスチンを受けた。NHLを有する1名の患者は、しゃっくりのためベンダムスチンを用量低減し、NHLを有する1名の患者は、ALT/AST増大のため式Iの化合物を用量低減した。他の患者はすべて全用量レジメンを受け、許容され得る耐容性であった。臨床応答評価は、2サイクルの組み合わせ処置を終了した6名の患者について入手可能であった。結果を以下の表8に示す。
有望な臨床活性を示す。
(実施例39)
再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のB細胞低悪性度NHLおよびCLLを有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
再発性または不応性のB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、再発性または不応性のB細胞低悪性度NHLおよびCLLを有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
12名のiNHL患者および8名のCLL患者を含む20名の患者を登録した。患者の特徴を図42にまとめている。すべての患者は式Iの化合物を、100mgを経口で1日あたり2回(BID)または150mgを経口で1日あたり2回(BID)のいずれかで、その患者が恩恵を被る限り受けた。また、患者は、リツキシマブ(375mg/m2を8週間毎週投与、サイクル1の1日目に開始)、またはベンダムスチン(90mg/m2を6サイクルの間の各々のサイクルの1日目と2日目に投与)のいずれかを受けた。腫瘍応答を標準的な診断基準に従って評価した。
図43に示すように、組み入れた悪性度分類≧3の有害事象には、主に、既に存在している疾患関連もしくは処置関連の状態に起因しているか、または併発した疾病に起因しているバックグラウンド事象を含めた。ベンダムスチンと化合物Iを受けた患者では、悪性度分類≧3の有害事象にB−誘発性骨髄抑制(B−induced myelosupression)を含めた。リツキシマブと化合物Iを受けた患者では、悪性度分類≧3の有害事象は稀であり、式Iの化合物と明白に関連しているわけではなかった。iNHL特異的一過性ALT/AST上昇が観察され;この事象は薬物を中断すると消散し、低用量レベルの式Iの化合物で治療を再開すると成功裡に管理された。試験した患者コホートにおいて、式Iの化合物に関連する用量制限毒性は観察されなかった。
図44に示されるように、ベンダムスチンと化合物Iまたはリツキシマブと化合物Iの併用療法を受けたiNHLまたはCLLを有するほぼすべての患者で節サイズの縮小が起こった。
さらに、ベンダムスチンと化合物Iを受けようがリツキシマブと化合物Iを受けようが、iNHLを有する患者およびCLLを有する患者で高レベルの抗腫瘍活性が観察された。図45の表にまとめたように、ベンダムスチンと化合物Iを受けたiNHLを有する1名の患者では完全奏効を示した。
したがって、リツキシマブまたはベンダムスチンと組み合わせた化合物Iの投与は、再発性または不応性の低悪性度B細胞NHLおよびCLLを有する患者において許容され得る安全性および有望な臨床活性を示す。
先の研究において、式Iの化合物の投与を伴う単独薬剤療法では、図46に示すように、CLLを有する患者の約2/3でリンパ球再分布が引き起こされ、これによりリンパ球増加症がもたらされた。対照的に、図47に示されるように、ベンダムスチンと化合物Iまたはリツキシマブと化合物Iでの併用療法では、CLLを有するすべての患者で悪性リンパ球数が減少した。
したがって、上記で考察した併用療法では、iNHLおよびCLLを有する患者では節サイズ縮小と抗腫瘍活性、ならびにCLLを有する患者では悪性リンパ球数の減少において驚くべき効果と優れた結果が得られ、副作用はほとんどない。
(実施例40)
慢性リンパ性白血病におけるB細胞レセプター(BCR)シグナル伝達およびナース様細胞(NLC)の生存促進作用に対するベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、BCR由来CLL細胞の活性化に対するベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の効果を示す。BCRの抗IgMとの架橋により、CLL細胞生存度がコントロールの121±5%まで有意に増大したことがわかった(平均値±SEM,n=15,*P<0.05)。この生存促進効果は式Iの化合物によって消去され、CLL細胞生存度は48時間でコントロールの85±3%まで低下した(平均値±SEM,n=15,*P<0.05)。また、NLCとの共培養におけるCLL細胞生存度も式Iの化合物によって、48時間で未処理コントロールの64±6%まで有意に低下した(平均値±SEM,n=10,*P<0.05)。BCR架橋によってCLL細胞によるケモカインCCL3およびCCL4の分泌が誘導され、これをCLL上清においてELISAによって定量化した。
慢性リンパ性白血病におけるB細胞レセプター(BCR)シグナル伝達およびナース様細胞(NLC)の生存促進作用に対するベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、BCR由来CLL細胞の活性化に対するベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の効果を示す。BCRの抗IgMとの架橋により、CLL細胞生存度がコントロールの121±5%まで有意に増大したことがわかった(平均値±SEM,n=15,*P<0.05)。この生存促進効果は式Iの化合物によって消去され、CLL細胞生存度は48時間でコントロールの85±3%まで低下した(平均値±SEM,n=15,*P<0.05)。また、NLCとの共培養におけるCLL細胞生存度も式Iの化合物によって、48時間で未処理コントロールの64±6%まで有意に低下した(平均値±SEM,n=10,*P<0.05)。BCR架橋によってCLL細胞によるケモカインCCL3およびCCL4の分泌が誘導され、これをCLL上清においてELISAによって定量化した。
式Iの化合物により、上清のCCL3濃度が4060±1392pg/mLから2901±1220pg/mLまで、およびCCL4レベルが5721±1789pg/mLから3223±1311pg/mLまで有意に低減された(平均値±SEM,n=6,*P<0.05)。また、CLL−NLC共培養物において、式Iの化合物によって、CLL細胞によるCCL3/4分泌も阻害された。CCL3濃度は式Iの化合物によって943±535pg/mLから156±8pg/mLまで、およびCCL4濃度は7433±4463pg/mLから316±53pg/mLまで低減された(平均値±SEM,n=5,*P<0.05)。
驚くべきことに、式Iの化合物によって、CLL−NLC共培養物におけるCXCL13レベルもまた、151±35から70±27pg/mLまで減少し(平均値±SEM,n=4,*P=0.05)、このことは式Iの化合物がCLL細胞およびNLCによって表されるCLL微小環境の両方に対して薬理作用を有することを示す。
また、本実施例は、式Iの化合物とベンダムスチンの組み合わせにより、骨髄間質細胞(MSC)とのCLL細胞の共培養物における間質媒介性薬物耐性が克服され得ることを示す。図48aおよび48bに示されるように、両薬物の上記組み合わせは、CLL細胞死に対してより高い効果を示す。
さらに、リンの流れを利用し、式Iの化合物が、式Iの化合物での処置を受けているCLL患者から得たサンプルにおいて構成的およびBCR誘導性のPI3K経路活性化を阻害することが示された。式Iの化合物での処理により、末梢CLL細胞においてpAkt(T308)が>90%下方調節された(n=12)。28日間の式Iの化合物での毎日の処置の前と後に採取した14名のCLL患者の血漿サンプルを、種々のサイトカインの濃度について分析した。興味深いことに、このような分析により、ベースラインから式Iの化合物での処置の28+日目までで、CCL3(186pg/mLから29pg/mLまで)、CCL4(303から70pg/mLまで)、CCL22(1067から533pg/mLまで)、CXCL13(316pg/mLから40pg/mLまで)、およびTNFα(104から29pg/mLまで)の平均血漿レベルの実質的な減少があることが明らかになり、CCL3/4およびCXCL13に関する本発明者らのインビトロデータが確認された。
総合すると、本実施例の結果は、式Iの化合物がBCR媒介性およびNLC媒介性のCLL細胞のインビトロにおける生存および活性化を有効に阻害することを示す。また、式Iの化合物は、CLL細胞に対するベンダムスチンなどの細胞毒性剤の活性を増強する。インビボデータは、式Iの化合物により、処理前の高いCCL3およびCCL4レベルが
低下することを示す。理論によって束縛されるものではないが、このような観察により、BCR由来シグナルの阻害がCLLにおける式Iの化合物の主要な作用機序であり得るという概念が示唆される。
低下することを示す。理論によって束縛されるものではないが、このような観察により、BCR由来シグナルの阻害がCLLにおける式Iの化合物の主要な作用機序であり得るという概念が示唆される。
(実施例41)
CLLにおけるホスファチジルイノシトール3−キナーゼ−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、CLLを有する患者におけるPI3k−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた式Iの化合物の効果を示す。
CLLにおけるホスファチジルイノシトール3−キナーゼ−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、CLLを有する患者におけるPI3k−δ経路の活性化に対するレナリドマイドと組み合わせた式Iの化合物の効果を示す。
サンプル収集および培養条件:単離された単核球を陰性B細胞選択し、培養状態にした。式Iの化合物はCalistoga Pharmaceuticals(Seattle,WA)から提供を受けた。レナリドマイド(Revlimid;Celgene)を入手し、抽出した。
フローサイトメトリーアッセイ:CD20、CD40、CD80、CD86またはIgG1(BD Biosciences,San Jose CA)に対する抗体を表面染色した。
イムノブロット分析:イムノブロットを行なった。抗体には、抗AKT、抗ホスホ−AKT(Ser473)、抗GSK3β、抗ホスホ−GSK3β(Ser9)(Cell Signaling,Danvers,MA)、抗p110δ(Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA)、および抗GapdH(Millipore,Billerica,MA)を含めた。
定量的RT−PCR:RNAをTRIzol試薬(Invitrogen)を用いて抽出し、cDNAをSuperScript First−Strand Synthesis System(Invitrogen)を用いて調整した。リアルタイムPCRを予備設計TaqMan(登録商標)Gene Expression AssaysおよびABI Prism 7700配列検出システム(Applied Biosystems、Foster City,CA)を用いて行なった。
PI3Kアッセイ:PI3KアッセイはCLL細胞の全細胞溶解液において行なった。ELISAアッセイは製造業者の指示(Echelon Biosciences,Salt Lake City,UT)に従って行なった。
トランスフェクション:CLL細胞をトランスフェクトした。p110δ siRNA(Ambion,Austin,Tx)を50nMの最終濃度で使用した。
免疫グロブリン検出:IgMの定量化(quantization)を行なった。簡単には、レナリドマイド処理またはビヒクルコントロール処理したCLL細胞に放射線照射し、PWM(5μg/mL)の非存在下または存在下で精製標的B細胞とともに培養状態にした。
統計解析:記載の統計学的評価はすべて、OSUの生物統計学センター(Center
for Biostatistics)によって先に記載の7の方法を用いて行なった。単独比較で、または多重比較では調整後のα=0.05のP値を有意とみなした。
for Biostatistics)によって先に記載の7の方法を用いて行なった。単独比較で、または多重比較では調整後のα=0.05のP値を有意とみなした。
本実施例の結果は、レナリドマイドがCLL細胞上のCD154を、AKT、IKKおよびNF−κBの核移行の活性化によって上方調節し、mRNAの転写と安定化が増大す
ることを示す。汎−インヒビターLY294002でのCLL細胞の処理によりこのAKT活性化が拮抗された。
ることを示す。汎−インヒビターLY294002でのCLL細胞の処理によりこのAKT活性化が拮抗された。
まず、PI3−キナーゼ活性化の特異性を確認するため、レナリドマイドでの処理後のPI3Kの酵素活性の直接的な増加を調べた。0.5μMのレナリドマイドありまたはなしで処理したCLL患者(N=9)由来のCD19+細胞をPI3−キナーゼ活性について、溶解液への1または10μMの式Iの化合物の添加ありおよびなしで調べた。結果は、μgのタンパク質に関して計算した。レナリドマイドによるPI3K経路を介したシグナル伝達は、4つの触媒性アイソフォーム;p110α、p110β、p110γおよびp110δによって起こり得る。さらに、低分子インヒビターである式Iの化合物によるPI3K−δの阻害により、PI3Kの酵素活性の増大が抑制されることがわかった(図49A)。
次に、式Iの化合物でのPI3K−δの阻害により、レナリドマイドによって誘導されるAKTの下流リン酸化の増大が抑制され得るかどうかの判定において、式Iの化合物によるPI3K−δの阻害によってPI3K活性の抑制がもたらされた。CLL患者(N=6)由来のCD19+細胞を、0.5μMのレナリドマイドおよび/または1もしくは10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間インキュベートした。ser473におけるAKTリン酸化をイムノブロットによって評価した。図49B参照。
この結果を確認するため、GSK3βのリン酸化を評価した。CLL患者(N=4)由来のCD19+細胞を、0.5μMのレナリドマイドおよび/または1もしくは10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間インキュベートした。ser9におけるGSK3βのリン酸化をイムノブロットによって評価した。4回の実験のうちの1回の結果を示す。レナリドマイドでの処理によりGSK3βのリン酸化の増大がもたらされ、これは式Iの化合物との共処理によって抑制可能であることがわかり、この場合も、PI3K−δとレナリドマイド依存性PI3K活性との間に関連性が示唆される。図49C参照。
この結果が実際にPI3K−δ阻害によるものであることを確認するため、CLL細胞においてPI3K−δをノックダウンした。CLL患者(N=3)由来のCD19+細胞をPI3K−δ、PI3K−γまたはナンセンス標的に対して標的化されるsiRNAでトランスフェクトした。p110δタンパク質発現をイムノブロットによって評価した。3回の実験のうちの1回の結果を示す。図49D参照。
レナリドマイドは、PI3K−δをノックダウンするとAKTのリン酸化を誘導できないことが示された。CLL患者(N=3)由来のCD19+細胞をPI3K−δ、PI3K−γまたはナンセンスに対して標的化されるsiRNAでトランスフェクトし、次いで、0.5μMのレナリドマイドとともにまたはそれなしで48時間インキュベートした。ser473におけるAKTリン酸化をイムノブロットによって評価した。3回の実験のうちの1回の結果を示す。図49E参照。
この所見は、レナリドマイドによるCLLにおけるPI3K活性化ならびにCLL細胞上のNF−κBおよびCD154に対するその後の効果はPI3K−δ依存性経路を利用していることを裏付ける。
レナリドマイド処理は、以前に、CLL細胞の活性化をもたらすことが示されている。この所見を拡張して、レナリドマイドによって抑制されるPI3K−δの阻害を調べ、B細胞抗原提示に重要な他の共刺激分子の上方調節が誘導されるかどうかを明らかにした。CLL患者(N=25)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。CD40またはCD8
6の表面発現を、CD40−またはCD86−PE抗体およびIgG1−PEアイソタイプコントロールを用いたフローサイトメトリーによって評価した。式Iの化合物での処理により、レナリドマイドによって誘導されるCD40およびCD86の上方調節を抑制することができた(それぞれ、p値=0.0102および<0.0001)(図50A)。
6の表面発現を、CD40−またはCD86−PE抗体およびIgG1−PEアイソタイプコントロールを用いたフローサイトメトリーによって評価した。式Iの化合物での処理により、レナリドマイドによって誘導されるCD40およびCD86の上方調節を抑制することができた(それぞれ、p値=0.0102および<0.0001)(図50A)。
同様に、PI3K−δの阻害により、レナリドマイドによって促進されるCD40、CD86、CD154およびCD80のmRNAの増大が抑制されることもわかった(すべての遺伝子についてp値<0.009)(図50B)。CLL患者(N=15)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。RNAを抽出し、cDNAに変換させ、RT−PCR分析を行ない、CD40、CD86およびCD154のmRNAの量を決定した。
レナリドマイドはCD20の内在化を誘導することも示されており、式Iの化合物との並行処理によってこの効果は抑制された(p値=0.0057)(図50C)。CLL患者(N=5)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。CD20の内在化を、CD20−PE抗体およびIgG1−PEアイソタイプコントロールを用いたフローサイトメトリーによってCD20の表面発現を定量化することにより評価した。
正常なB細胞に免疫グロブリンの産生を促進させるレナリドマイド処理CLL細胞にとってのCD40−CD154軸の重要性を考慮し、これが起こることが抑制され得るかどうかを明らかにするために式Iの化合物を評価した。CLL患者(N=6)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。CLL細胞に放射線照射し(20Gy)、5μg/mLのPWMの非存在下または存在下で精製B細胞との培養状態にした。IgMの定量化をELISA分析によって行なった。レナリドマイド処理CLL細胞は、以前5に、および本明細書において高IgMレベルを有することが示されているが、式Iの化合物でのCLL細胞の処理前ではIgMの産生が完全に抑制されることがわかった(p値<0.0001)(図50D)。
最後に、培養状態のCLL細胞のレナリドマイド処理を試験し、血管内皮増殖因子(VEGF)および塩基性線維芽細胞増殖因子(b−FGF)の腫瘍細胞産生が促進され得るかどうかを調べた。CLL患者(N=15)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。RNAを抽出し、cDNAに変換させ、RT−PCR分析を行ない、bFGFの量を決定した。レナリドマイド処理によってすべての患者においてb−FGFの転写上方調節が増大し(p値=0.0004)、式Iの化合物の共インキュベーションによってこの上方調節が抑制された(p値<0.001)(図50E)。
同様に、レナリドマイド処置によって患者のサブセット(13名のうち8名)においてVEGFの転写レベルが増大し、これは、この場合も式Iの化合物での処置によって可逆的であった(p値=0.002)(図50F)。(F)CLL患者(N=13)由来のCD19+細胞を0.5μMのレナリドマイドおよび/または10μMの式Iの化合物ありまたはなしで48時間処理した。RNAを抽出し、cDNAに変換させ、RT−PCR分析を行ない、VEGFの量を決定した。
データにより総合的に、CLL細胞のレナリドマイド媒介性活性化におけるPI3K−δ経路の裏付けが示された。このような所見の潜在的関連性は、CLLにおけるレナリドマイドの使用に関していくつかある。式Iの化合物、汎−PI3−キナーゼインヒビターおよび潜在的にPI3−キナーゼ下流のシグナル伝達に拮抗作用する他の薬剤とレナリド
マイドとの組合せはおそらく、この薬剤の免疫調節特性に対して拮抗作用性である。したがって、この併用療法の適用は、免疫調節が所望される場合、慎重にアプローチすべきである。対照的に、レナリドマイドの非免疫調節作用が所望される場合、式Iの化合物または代替的なPI3−キナーゼインヒビターなどの薬剤の適用は、その驚くべき効果に鑑みると、免疫活性化、腫瘍再発、およびこの処置と関連しているサイトカイン放出症候群の抑制のために魅力的であり得る。これは、VEGF16〜19およびb−FGF16、20、21(これらは、CLL細胞に対して保護効果を有する)などのサイトカインで特に当てはまり得る。実際、処置中に連続サイトカインレベルを調べた再発性CLLにおけるレナリドマイドの研究の一例では、非応答患者は、応答患者と比較して持続的に高いサイトカインレベル(例えば、b−FGF2)を有することがみとめられた。
マイドとの組合せはおそらく、この薬剤の免疫調節特性に対して拮抗作用性である。したがって、この併用療法の適用は、免疫調節が所望される場合、慎重にアプローチすべきである。対照的に、レナリドマイドの非免疫調節作用が所望される場合、式Iの化合物または代替的なPI3−キナーゼインヒビターなどの薬剤の適用は、その驚くべき効果に鑑みると、免疫活性化、腫瘍再発、およびこの処置と関連しているサイトカイン放出症候群の抑制のために魅力的であり得る。これは、VEGF16〜19およびb−FGF16、20、21(これらは、CLL細胞に対して保護効果を有する)などのサイトカインで特に当てはまり得る。実際、処置中に連続サイトカインレベルを調べた再発性CLLにおけるレナリドマイドの研究の一例では、非応答患者は、応答患者と比較して持続的に高いサイトカインレベル(例えば、b−FGF2)を有することがみとめられた。
(実施例42)
以前に処置されたB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、以前に処置されたB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
以前に処置されたB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、以前に処置されたB細胞悪性疾患を有する患者におけるリツキシマブおよび/またはベンダムスチンと組み合わせた式Iの化合物の安全性および活性を示す。
27名のiNHL患者および22名のCLL患者を含む49名の患者を本研究に登録した。患者の特徴を図51にまとめている。ベースラインにおいて、患者は、有害な予後の特徴、例えば、高齢であるとか、大きな腺症(bulky adenpoathy)および不応性疾患を有していた。患者はすべて、以前に≧1回の処置レジメンを受けたことがあり、一部は、以前に9回ものレジメンを受けたことがあった。以前の処置には、リツキシマブ、アルキル化剤および/またはフルダラビンが含まれており、iNHLを有する患者のほとんどが以前にアントラサイクリン含有治療薬での処置を受けたことがあった。フォローアップは多くの患者で早期に行ない、治療期間は1〜12サイクルの範囲とした。
すべての患者は式Iの化合物を、100mgを経口で1日あたり2回(BID)または150mgを経口で1日あたり2回(BID)のいずれかで、その患者が恩恵を被る限り受けた。また、患者は、リツキシマブ(375mg/m2を8週間毎週投与、サイクル1の1日目に開始)、またはベンダムスチン(90mg/m2を6サイクルの間、各々のサイクルの1日目と2日目に投与)のいずれかを受けた。腫瘍応答を標準的な診断基準に従って評価した。
図52に示されるように、悪性度分類≧3の有害事象には、主に、既に存在している疾患、以前の治療による毒性または併発した疾病に起因しているバックグラウンド事象を含めた。ベンダムスチンと式Iの化合物を受けた患者では、悪性度分類≧3の有害事象にB−誘発性骨髄抑制を含めた。リツキシマブと式Iの化合物を受けた患者では、悪性度分類≧3の有害事象は稀であり、式Iの化合物と明白に関連しているわけではなかった。iNHL特異的一過性ALT/AST上昇が観察され;この事象は薬物を中断すると消散し、低用量レベルの式Iの化合物で治療を再開して成功裡に管理された。試験した患者コホートにおいて、式Iの化合物による関連する用量制限毒性は観察されなかった。
図53Aおよび53Bに示されるように、ベンダムスチンと式Iの化合物またはリツキシマブと式Iの化合物の併用療法を受けた、iNHLまたはCLLを有するほぼすべての患者で節サイズの縮小が起こった。
さらに、ベンダムスチンと式Iの化合物を受けようがリツキシマブと式Iの化合物を受けようが、iNHLを有する患者およびCLLを有する患者で高レベルの抗腫瘍活性が観察された。図54にまとめたように、ベンダムスチンと式Iの化合物を受けたiNHLを有する2名の患者では完全奏効を示した。
先の研究において、式Iの化合物の投与を伴う単独薬剤療法では、図55に示すように、CLLを有する患者においてリンパ球再分布が引き起こされ、これにより一過性リンパ球増加症がもたらされた。対照的に、図56に示されるように、ベンダムスチンと式Iの化合物またはリツキシマブと式Iの化合物での併用療法では、CLLを有する患者において悪性リンパ球数がより急速に減少した。
したがって、上記で考察した併用療法では、iNHLとCLLを有する患者では節サイズ縮小と抗腫瘍活性、ならびにCLLを有する患者では悪性リンパ球数の減少において驚くべき効果と優れた結果が得られ、副作用はほとんどない。
(実施例43)
骨髄間質細胞(MSC)と共培養したCLL細胞におけるデキサメタゾン、ベンダムスチンおよび/またはフルダラビンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、CLL細胞に細胞毒性を有する薬物(例えば、デキサメタゾン、ベンダムスチンおよびフルダラビン)の存在下で、CLL細胞をMSCと共培養した場合の、CLL細胞に対する式Iの化合物の効果を示す。
骨髄間質細胞(MSC)と共培養したCLL細胞におけるデキサメタゾン、ベンダムスチンおよび/またはフルダラビンと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、CLL細胞に細胞毒性を有する薬物(例えば、デキサメタゾン、ベンダムスチンおよびフルダラビン)の存在下で、CLL細胞をMSCと共培養した場合の、CLL細胞に対する式Iの化合物の効果を示す。
CLL細胞をMSCと、培地単独(コントロール)中、あるいは示した濃度の式Iの化合物、デキサメタゾン、ベンダムスチンもしくはフルダラビンまたは組み合わせたこれらの薬物を含有する培地中で共培養した。
生存している細胞集団は、明るいDiOC6染色およびPI排除を特徴としており、各々のコンタープロットの右下の角にゲーティングした。生存している細胞の割合をこれらのゲートの各々の上部に示す。図57aに示されるように、式Iの化合物とデキサメタゾン、ベンダムスチンまたはフルダラビンとの組み合わせは、CLL細胞死に対してより高い効果を示す。
薬物処理サンプルの生存度を、それぞれの時点でコントロールサンプルの生存度に対して正規化した(100%)。図57bは、24、48および72時間後に評価した9例の異なる患者サンプルからの平均値(±SEM)を示す。MSCの存在下でのCLL細胞生存は、各々の薬物処理培養物からの結果とコントロール培養物からの結果の比較を示すアスタリスクによって示されるように、併用療法によって有意に低下した(P<.05)。例えば、72時間後、未処理コントロールに対するCLL細胞生存度は、式Iの化合物で93%(±0.6%)およびベンダムスチンで60%(±8.7%)であったが、この2つの薬物の組み合わせでは42.7%(±11.4%)まで低下した。式Iの化合物とフルダラビンまたは式Iの化合物とデキサメタゾンの組み合わせでは同等の結果が認められた。
したがって、この結果は、式Iの化合物によって、おそらくMSC誘導薬物耐性シグナルが妨害されることによりCLL細胞が細胞毒性剤に対して感受性になった(sensitized)ことを示す。
(実施例44)
CLLにおけるオファツムマブと組み合わせた化合物の効果
本実施例に、以前にCLLの処置を受けたことがある患者の処置のためのオファツムマブと組み合わせた化合物Iの反復サイクル(28日間/サイクル)のフェーズ1−2試験をまとめる。
CLLにおけるオファツムマブと組み合わせた化合物の効果
本実施例に、以前にCLLの処置を受けたことがある患者の処置のためのオファツムマブと組み合わせた化合物Iの反復サイクル(28日間/サイクル)のフェーズ1−2試験をまとめる。
化合物I(150mgを1日2回[BID])を、24週間にわたって与えた、オファ
ツムマブの12回の注入とともに連続的に共投与した。オファツムマブは、300mgの初期用量で1日目または2日目(化合物Iの最初の用量に関連して)のいずれかに投与した。1週間後、オファツムマブを1,000mgで毎週7用量で、次いで1,000mgで4週間毎に4用量で投与した。オファツムマブ処置の終了後、各々の被験体は、化合物Iを単独薬剤として150mgの用量をBIDで、被験体が恩恵を被る限り継続して受けた。
ツムマブの12回の注入とともに連続的に共投与した。オファツムマブは、300mgの初期用量で1日目または2日目(化合物Iの最初の用量に関連して)のいずれかに投与した。1週間後、オファツムマブを1,000mgで毎週7用量で、次いで1,000mgで4週間毎に4用量で投与した。オファツムマブ処置の終了後、各々の被験体は、化合物Iを単独薬剤として150mgの用量をBIDで、被験体が恩恵を被る限り継続して受けた。
21名の患者の全コホートから、11名の患者のデモグラフィックの予備有効性データが得られた。メジアン[範囲]年齢は63[54〜76]歳であった。患者の大部分(9/11;82%)は、大きな腺症(測定された最長寸法が≧5cmのリンパ節が≧1個)を有していた。以前の治療(例えば、アルキル化剤(10/11;90%)、リツキシマブ(9/11;82%)、プリンアナログ(8/11;72%)、アレムツズマブ(3/11;28%)および/またはオファツムマブ(2/11;18%)への以前の曝露)のメジアン[範囲]回数は3[1〜6]回であった。データカットオフにおいて、メジアン[範囲]処置期間は5[0〜7]サイクルであった。ほぼすべての被験体(9/11;82%)で、最初の2サイクル以内にリンパ節腫脹の顕著で急速な低減が起こった。11名の患者のうち、10名がサイクル2の終了時点またはそれ以降に応答評価について評価可能であった。8名の患者(80%)が、治験担当者によってHallek Mら(Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia:a report
from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute−Working Group 1996 guidelines.Blood.2008 Jun 15;111(12):5446−56)において公開された診断基準に基づいて判断されるように応答の診断基準を満たしていた。1名の患者ではリンパ節腫脹が低減し、疾患の安定の診断基準を満たし、1名の患者では疾患進行があった。単独薬剤でのPI3Kδ阻害で予測された末梢リンパ球数の一過性の増加は、規模も期間も低減された。一過性リンパ球増加症の低減は、化合物Iとオファツムマブ(oftatumumab)の組み合わせによって誘導された。
from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute−Working Group 1996 guidelines.Blood.2008 Jun 15;111(12):5446−56)において公開された診断基準に基づいて判断されるように応答の診断基準を満たしていた。1名の患者ではリンパ節腫脹が低減し、疾患の安定の診断基準を満たし、1名の患者では疾患進行があった。単独薬剤でのPI3Kδ阻害で予測された末梢リンパ球数の一過性の増加は、規模も期間も低減された。一過性リンパ球増加症の低減は、化合物Iとオファツムマブ(oftatumumab)の組み合わせによって誘導された。
安全性の予備データは、上記組み合わせ処置が好ましい安全性プロフィールを有し、骨髄抑制はなかったことを示す。さらに、薬力学的データにより、CLL関連ケモカインおよびサイトカイン(CCL3、CCL4、CXCL13およびTNFα)の高いベースラインレベルは28日間の処置後、低下したことが明らかになった。この結果は、化合物Iとオファツムマブの組み合わせにより、以前に処置されたCLLを有する患者において十分耐容性であり、非細胞毒性の処置レジメンがもたらされることを示唆している。
(実施例45)
CLLにおけるBCL−2アンタゴニストと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、間質曝露CLL細胞に対するBCL−2アンタゴニストであるABT−737およびABT−263と組み合わせた化合物Iの効果を示す。
CLLにおけるBCL−2アンタゴニストと組み合わせた化合物の効果
本実施例は、間質曝露CLL細胞に対するBCL−2アンタゴニストであるABT−737およびABT−263と組み合わせた化合物Iの効果を示す。
CLL細胞の精製:末梢血、骨髄、およびリンパ節をCLLの診断基準および免疫表現型基準を満たす、同意を得た患者から採取した。末梢血単核球(PBMC)を血液および組織サンプルから、Ficoll−Paque(GE Healthcare,Waukesha,WI)密度勾配遠心分離を用いて単離した。サンプルは、新鮮状態、または10%ジメチルスルホキシド(DMSO;Sigma−Aldrich,St.Louis,MO)含有ウシ胎仔血清(BD Biosciences,San Diego,CA)中で生存可能に凍結させ、液体窒素中で保存し、後に分析のために解凍した状態のいず
れかで分析した。単細胞懸濁液を蛍光標示式細胞分取(FACS)機での分析のために調製し、CD19+ CLL細胞が分析した細胞のおおむね>85%を占めていた。
れかで分析した。単細胞懸濁液を蛍光標示式細胞分取(FACS)機での分析のために調製し、CD19+ CLL細胞が分析した細胞のおおむね>85%を占めていた。
細胞株:マウスCD154+ L細胞株を、10%FBS、2.05mM L−グルタミン(HyClone,Logan,UT)およびペニシリン−ストレプトマイシン(Cellgro,Manassas,VA)を補充したRPMI 1640培地中で維持した。ヒト間質細胞株StromaNKTertを理研細胞バンク(つくば,日本)から購入し、1μg/mL ヒドロコルチゾン、10%FBS、10%ヒト血清(Invitrogen,Grand Island,NY)、2.05−mM L−グルタミンおよびペニシリン−ストレプトマイシンを補充したα−MEM中で維持した。ナース様細胞(NLC)は、CLLを有する患者由来のPBMCを、10%FBSおよびペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミンを含むRPMI 1640完全培地中に107細胞/mL(合計2mL)の濃度まで懸濁させることによって確立した。細胞を24ウェルプレート(Corning Life Sciences)内で14日間増殖させた。
CLL細胞と間質細胞の共培養物:CLL細胞を、標準化した条件下で、間質細胞株または一次NLC上で培養した。簡単には、間質細胞を各々の実験の1日前に、24ウェルプレート(Corning Life Sciences)に3×105細胞/mL/ウェルの濃度で播種し、37℃で5%CO2にてインキュベートした。間質細胞のコンフルエンスを位相差顕微鏡検査によって確認し、次いで、CLL細胞を間質細胞層上に3×106細胞/mLの濃度で添加した。次いで、培養物を化合物で、指定された期間処理した。CLL細胞を、分析のために培地で静かにピペッティングすることによって取り出し、次いで、PBS中で洗浄した後、分析した。特に記載のない限り、24時間の共培養時点を使用した。
細胞生存度の試験および試薬:CLL細胞生存度は、FACSによるAnnexin V−FITC(BD Biosciences,San Diego,CA)およびヨウ化プロピジウム(Propidium Iodine)(PI)(Sigma)の分析によって決定した。ABT−737、ABT−263および化合物Iは、使用までDMSO中で−20℃にて保存した。
BH3プロファイリング:CLL患者の末梢血、骨髄およびリンパ節サンプルを、プレートベースの蛍光定量法またはFACS法のいずれかによって分析した。簡単には、CLL患者由来のPBMCを単細胞懸濁液にし、ジギトニン(0.002%)を用いて静かに透過性にした。蛍光定量法(fluorimtery)ベースの方法では、100μMのJC−1(Invitrogen)をこのときに添加し、次いで、細胞を、個々のウェルに個々のBH3−単独ペプチドが含まれた384ウェルプレートに負荷した。次いで、JC1−BH3アッセイを三連で、Tecan Safire 2において、励起545+/−20nMおよび発光590+/−20nmで3時間の時間推移にて実施した。FACSベースの方法では、CLL患者PBMC由来の単細胞懸濁液を、ヒトFc Block(BD Pharmingen)、続いて抗CD19−V450(BD Pharmingen)および抗CXCR4−APC(BD Pharmingen)を用いて染色した。細胞をPBS中で洗浄し、次いで個々のFACSチューブに添加し、各々のチューブには個々のBH3−単独ペプチドを含めた。サンプルを室温で30分間インキュベートし、100μMのJC−1を各々のチューブに添加し、サンプルをさらに30分間インキュベートした。FACS測定はBD FACS Canto IIで、407、488および633nmのレーザーを用いて行なった。JC−1を488−nmレーザーで、530/30−nmフィルター(FITC)および585/42−nmフィルター(PE)を用いて測定し、ミトコンドリア脱分極の程度を、PEシグナルのメジアンの変化のサロゲートを用いて計算した。各々のBH3ペプチドに応答してレポートされたミトコンドリア脱分
極を、陰性コントロールであるジメチルスルホキシド(DMSO)(0%)および陽性コントロールであるミトコンドリア内脱共役剤カルボニルシアニド4−(トリフルオロメトキシ)−フェニルヒドラゾン(FCCP)(100%)でのJC−1色素のPE蛍光のメジアン変化の割合に対して正規化する。
極を、陰性コントロールであるジメチルスルホキシド(DMSO)(0%)および陽性コントロールであるミトコンドリア内脱共役剤カルボニルシアニド4−(トリフルオロメトキシ)−フェニルヒドラゾン(FCCP)(100%)でのJC−1色素のPE蛍光のメジアン変化の割合に対して正規化する。
カルセインベース接着アッセイ:コンフルエントなCD154+ LまたはStromaNKTert細胞の単層を、1×104細胞/ウェルを96ウェルプレート内で24時間プレート培養することによって作製した。次いで、0.5×106細胞/mlのCLL細胞の単細胞懸濁液を1μg/mLのカルセイン−AM(Invitrogen)で1時間標識した。次いで細胞をスピンダウンさせ、化合物またはビヒクルで1〜24時間処理した。非接着細胞を吸引によって洗い流した。CLL細胞接着を蛍光定量法(励起/発光=485/520nm)によって定量化し、Nikon TE2000倒立型生細胞イメージングシステムを用いて直接可視化した。
データ分析および統計:結果を、平均の標準誤差および反復回数(各々の図に記載)とともに示す。統計比較には、スチューデントの対応ありもしくは対応なしのt−検定、マンホイットニーU検定、または線形回帰解析を使用した。解析は、PC用のGraphPad Prism 5ソフトウェアを用いて行なった(GraphPad Software,San Diego,CA)。フローサイトメトリーデータは、FACS Divaバージョン6.1.1(BD Pharmingen)を用いて解析した。臨床応答は2008 IW−CLL診断基準を用いて評価し、応答群(responders)は、最良の応答として完全奏効または部分奏効が得られた患者と定義し、非応答群(non−responders)は、最初の治療の終了の6ヶ月以内に安定な疾患、不応性疾患または進行性疾患を有する患者と定義した。特に記載のない限り、両側p値≦0.05を統計的に有意とみなした。
現在、従来の第一選択のCLL治療を受けている多くの患者は、しばしば再発し、その処置に対して抵抗性となる。種々の間質に曝露されたCLL細胞は、細胞毒性化学療法(Kurtova AVら Diverse marrow stromal cells
protect CLL cells from spontaneous and drug−induced apoptosis:development of a reliable and reproducible system to assess stromal cell adhesion−mediated drug resistance.Blood.2009;114(20):4441−4450)とBH3−模倣物(ABT−737またはABT−263など)(Vogler Mら Concurrent up−regulation of BCL−XL and BCL2A1 induces approximately 1000−fold resistance to ABT−737 in chronic lymphocytic leukemia.Blood.2009;113(18):4403−4413)の両方での処置に対して抵抗性となるため、間質微小環境内のCLL細胞は、間質から増殖シグナルまたは抗アポトーシスシグナルを受け、細胞アポトーシスから保護された状態になることがあり得る。したがって、この相互作用に拮抗作用する薬剤により、CLLにおける間質媒介性耐性が低減され得る。
protect CLL cells from spontaneous and drug−induced apoptosis:development of a reliable and reproducible system to assess stromal cell adhesion−mediated drug resistance.Blood.2009;114(20):4441−4450)とBH3−模倣物(ABT−737またはABT−263など)(Vogler Mら Concurrent up−regulation of BCL−XL and BCL2A1 induces approximately 1000−fold resistance to ABT−737 in chronic lymphocytic leukemia.Blood.2009;113(18):4403−4413)の両方での処置に対して抵抗性となるため、間質微小環境内のCLL細胞は、間質から増殖シグナルまたは抗アポトーシスシグナルを受け、細胞アポトーシスから保護された状態になることがあり得る。したがって、この相互作用に拮抗作用する薬剤により、CLLにおける間質媒介性耐性が低減され得る。
式Iの化合物により間質微小環境が調節され得る。臨床試験において、化合物IとBCR経路を標的化する他の薬剤で処置したほとんどの患者が、急速で一過性のリンパ球増加症を示した。なんら理論によって束縛されるものではないが、化合物Iは間質微小環境を、CXCL12/13に向けてのCLL細胞の化学走性を阻害すること、間質細胞下でのCLL細胞の遊走を低減させること、ケモカイン分泌を下方調節すること、または他の下流標的(AKTおよびERKなど)のリン酸化を阻害することにより調節する可能性があ
る。化合物IがCLL−間質相互作用をミトコンドリアのアポトーシスまたはプライミングを増大させることにより調節するかどうかを特性評価するため、BH3プロファイリングを使用し、死滅促進BCL−2ファミリータンパク質の死滅促進BH3ドメイン由来のペプチドによって誘導されるミトコンドリアの透過性化(permeabilization)を測定した。
る。化合物IがCLL−間質相互作用をミトコンドリアのアポトーシスまたはプライミングを増大させることにより調節するかどうかを特性評価するため、BH3プロファイリングを使用し、死滅促進BCL−2ファミリータンパク質の死滅促進BH3ドメイン由来のペプチドによって誘導されるミトコンドリアの透過性化(permeabilization)を測定した。
まず、30名の患者の末梢血由来のCLL細胞を調べた。ほとんどの患者は以前に処置を受けたことがなく、最近は誰も治療を受けていなかった。BH3プロファイリングにおいて0.03μMの最終濃度で、BIM BH3ペプチドは、ほとんどの患者サンプルにおいて有意な量の脱分極を誘導し、サンプルの22/30(73.3%)は1時間までに>50%の脱分極を有した。図58Aに示されるように、CLL細胞はアポトーシスに対して高度にプライミングされた。また、BH3プロファイリングの結果により、ほとんどのCLL患者サンプルはBAD BH3ペプチドと比べて比較的高い脱分極を示すことが示され、このことから、主にBCL−2(n=23)に依存性であることが示唆される。図58Bに示されるように、いくつかのサンプルは、MCL−1(n=5)またはBCL−XL(n=2)に対してより依存性であることが観察された。図58Cに示されるように、2008 IW−CLL診断基準による部分奏効(PR)または完全奏効(CR)が得られた処置未経験患者からの処置前サンプルは、フロントラインCLL治療完結の6ヶ月間または該期間以内で、進行性疾患(PD)を有する患者からのサンプルよりもプライミングされたことが観察された(p=0.024)。図58Dに示されるように、BH3プロファイリングは、非変異IGHV状態を有する患者(n=7)が変異IGHV状態を有する患者(n=18)よりも有意にプライミングされることを示す(p=0.0026)。図58Eに示されるように、生殖細胞系列とのVH相同性の割合はプライミングレベルと正に相関していることが観察された(p=0.0043)。したがって、CLL細胞はアポトーシスに対して高度にプライミングされること、CLL細胞は通常、BCL−2依存性であること、ならびにプライミングの増大は臨床応答の改善および非変異IGHVと関連していることが観察された。
次に、間質曝露CLL細胞の接着、生存度およびプライミングに対する化合物Iのインビトロでの効果を評価した。図59A〜Eは、一般的に、化合物Iによって、間質内に隔離されたCLL細胞が解放され、間質媒介性耐性が克服されることが観察されたことを示す。末梢血由来CLL細胞をカルセイン−AMで標識し、StromaNKTertと24時間、化合物I(10μM)ありまたはなしで共培養し、静かにピペッティングすることによってすすぎ洗浄し、広視野顕微鏡検査によって可視化した。図59Aに示されるように、StromaNKTertと共培養し、化合物Iで処理したCLL細胞では、24時間目に示された接着性は低かった。また、図59Bにより、CLL細胞の接着の低減は、1時間だけの化合物Iでの処理の後(CLL細胞死が起こり得る前)であっても検出可能であることが示された。さらに、図59Cにより、化合物Iに応答した間質からのCLL細胞の剥離によりCLL細胞の死滅の増強がもたらされることが示された。特に、2名の患者について生存度の平均割合をSEMとともに図59Cに示したが、これらの患者ではともに、100nMのABT−737または10μMの化合物Iのいずれか単独に対して著しい間質媒介性耐性が示された。この耐性は、上記2つの化合物の組み合わせによって克服されることが観察された。
化合物IによるCLL細胞の直接的な死滅を調べることを回避するため、ABT−737と化合物Iの両方に対して耐性である2つのCLL患者サンプルを間質の存在下で処理した。両方のサンプルにおいて、化合物Iにより、間質の存在下におけるABT−737に対するCLL細胞の感受性が回復した。さらに、種々の用量のABT−737およびその経口アナログABT−263と組み合わせて化合物I(10μM)で処理した間質曝露CLL細胞により、間質曝露CLL細胞は、いずれかのBH3模倣物による死滅の用量依
存性の増大を示すことが示された。特に、図59Dを参照すると、StromaNKTertの存在下ではABT−737に対する耐性が観察されたが、10nMという低い濃度のABT−737で克服され得る。図59Eを参照すると、ABT−263でも同様の用量反応曲線が得られた。
存性の増大を示すことが示された。特に、図59Dを参照すると、StromaNKTertの存在下ではABT−737に対する耐性が観察されたが、10nMという低い濃度のABT−737で克服され得る。図59Eを参照すると、ABT−263でも同様の用量反応曲線が得られた。
PI3K阻害によってプライミングの増大により間質曝露CLL細胞の感受性が増大したのかどうかを調べるため、PB由来CLL細胞をStromaNKTert細胞とともにまたはなしで24時間培養し、Annexin−PIおよびBH3プロファイリングを用いて調べた。未処理CLL細胞では、おおむね、24時間にわたるエキソビボ培養においてアポトーシスが示された(Collins RJら Spontaneous programmed death(apoptosis)of B−chronic lymphocytic leukaemia cells following their culture in vitro.British journal of haematology.1989;71(3):343−350)。4つのCLL患者サンプルの間質共培養により、未処理細胞においてアポトーシスからの保護がもたらされた。特に、図60Aを参照すると、二元配置ANOVA分析により、化合物Iの非存在下では、間質によってアポトーシスからの保護がもたらされることが示された。間質の非存在下では、化合物Iによって、コントロールよりも多くのアポトーシスが誘導されることが観察された。間質の存在下では、化合物Iにより、コントロールよりも有意に多くのアポトーシスが誘導されることが観察された。したがって、間質の存在下または非存在下での、化合物Iによる死滅間に有意差は観察されなかった。
しかしながら、耐性またはアポトーシスからの保護は化合物Iによって逆転された。化合物I(10μM)で処理した間質曝露CLL細胞では40%を超えるアポトーシスが検出されたのに対して、未処理間質曝露CLL細胞ではアポトーシスは10%未満であった。また、図60Bに示されるように、BH3プロファイリングにより、化合物Iで処理した間質曝露CLL細胞では、24時間の時点に未処理細胞と比べてミトコンドリアのプライミングの増大が示されている(p=0.075)ことが示された。図60Cに示されるように、ペプチドとして使用したBAD BH3ペプチドおよびABT−737の両方で、化合物Iで処理したCLL細胞において有意に多くのミトコンドリア脱分極が誘導された(それぞれ、p=0.046およびp=0.047)。このことは、化合物Iでの処理により、ミトコンドリアのプライミングの増大およびBCL−2拮抗作用に対する感受性の増大を伴って、間質からのCLLの剥離がもたらされることを示唆する。
総合すると、本実施例により、PI3K阻害は間質によるCLL細胞の保護に拮抗作用すること、ならびに化合物IはCLL細胞に対する間質の効果:接着、ミトコンドリアのプライミングの低減、およびBCL−2を阻害する治療に対する感受性の低減を逆転することにおいて有効であることが示唆された。また、化合物Iの有効性は、患者におけるリンパ球再分布と関連している可能性がある。CLL細胞を間質から解放することにより、化合物Iは、おそらくCLL細胞が抗アポトーシス間質環境から逸出することを可能にし、それによりそのミトコンドリアのプライミングを増大させ、アポトーシスを受け易くした。また、本実施例によって、PI3K阻害とBCL−2阻害との組み合わせによりBCL−2阻害に対する応答が増大することが示唆された。
本発明の好ましい実施形態においては、例えば、以下が提供される。
(項目1)
癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式A
の化合物;または
その薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中RはH、ハロまたはC1−C6アルキルであり;R’はC1−C6アルキルである、方法。
(項目2)
前記化合物が
である、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記化合物が
である、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記癌が血液学的な悪性疾患である、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記血液学的な悪性疾患がB細胞悪性疾患である、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記血液学的な悪性疾患が白血病またはリンパ腫である、項目4に記載の方法。
(項目7)
前記癌が慢性リンパ性白血病(CLL)または非ホジキンリンパ腫(NHL)である、項目1に記載の方法。
(項目8)
前記癌が低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)である、項目1に記載の方法。
(項目9)
前記化合物および前記1つ以上の治療剤は各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与され、該1つ以上の治療剤が前記被験体に、該化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目1に記載の方法。
(項目10)
前記サイクルが7〜42日間である、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記1つ以上の治療剤が前記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される、項目9に記載の方法。
(項目12)
前記1つ以上の治療剤が前記被験体に少なくとも1サイクルの間に毎週投与される、項目9に記載の方法。
(項目13)
50mg〜200mgの前記化合物が前記被験体に1日あたり2回投与される、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目14)
50mg/m 2 〜1,500mg/m 2 の前記1つ以上の治療剤が前記被験体に投与される、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目15)
前記化合物が、該化合物および少なくとも1つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目16)
前記被験体が標準の化学療法の処置に対して抵抗性である、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
前記被験体が少なくとも1つの肥大リンパ節を有する、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目18)
前記被験体が、i)少なくとも1つの化学療法の処置に不応性であるか、またはii)化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
B細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、該被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法。
(項目20)
前記被験体が、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである、項目19に記載の方法。
(項目21)
50mg〜200mgの前記化合物が前記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に1日あたり2回投与される、項目19に記載の方法。
(項目22)
50mg/m 2 〜1,500mg/m 2 の前記1つ以上の追加の治療剤が前記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に少なくとも1回投与され、該1つ以上の治療剤が該被験体に、前記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目19または20に記載の方法。
(項目1)
癌を処置するための方法であって、そのような処置の必要な被験体に有効量の式A
の化合物;または
その薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップを含み、
式中RはH、ハロまたはC1−C6アルキルであり;R’はC1−C6アルキルである、方法。
(項目2)
前記化合物が
である、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記化合物が
である、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記癌が血液学的な悪性疾患である、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記血液学的な悪性疾患がB細胞悪性疾患である、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記血液学的な悪性疾患が白血病またはリンパ腫である、項目4に記載の方法。
(項目7)
前記癌が慢性リンパ性白血病(CLL)または非ホジキンリンパ腫(NHL)である、項目1に記載の方法。
(項目8)
前記癌が低悪性度非ホジキンリンパ腫(iNHL)である、項目1に記載の方法。
(項目9)
前記化合物および前記1つ以上の治療剤は各々が、少なくとも1サイクルの間に少なくとも1回投与され、該1つ以上の治療剤が前記被験体に、該化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目1に記載の方法。
(項目10)
前記サイクルが7〜42日間である、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記1つ以上の治療剤が前記被験体に、少なくとも1サイクルの少なくとも初日と2日目に投与される、項目9に記載の方法。
(項目12)
前記1つ以上の治療剤が前記被験体に少なくとも1サイクルの間に毎週投与される、項目9に記載の方法。
(項目13)
50mg〜200mgの前記化合物が前記被験体に1日あたり2回投与される、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目14)
50mg/m 2 〜1,500mg/m 2 の前記1つ以上の治療剤が前記被験体に投与される、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目15)
前記化合物が、該化合物および少なくとも1つの薬学的に許容され得る賦形剤を含む薬学的組成物中に存在する、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目16)
前記被験体が標準の化学療法の処置に対して抵抗性である、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
前記被験体が少なくとも1つの肥大リンパ節を有する、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目18)
前記被験体が、i)少なくとも1つの化学療法の処置に不応性であるか、またはii)化学療法での処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせである、項目1〜8のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
B細胞障害を有する被験体を処置する方法であって、
a)B細胞悪性疾患を有する被験体を確認するステップであって、該被験体は、ボルテゾミブ(Velcade(登録商標))、カルフィルゾミブ(PR−171)、PR−047、ジスルフィラム、ラクタシスチン、PS−519、エポネマイシン、エポキソマイシン、アクラシノマイシン、CEP−1612、MG−132、CVT−63417、PS−341、ビニルスルホントリペプチドインヒビター、リトナビル、PI−083、(+/−)−7−メチルオムラリド、(−)−7−メチルオムラリド、ペリホシン、リツキシマブ、クエン酸シルデナフィル(Viagra(登録商標))、CC−5103、サリドマイド、エプラツズマブ(hLL2−抗CD22ヒト化抗体)、シンバスタチン、エンザスタウリン、Campath 1H(登録商標)、デキサメタゾン、DT PACE、オブリメルセン、アンチネオプラストンA10、アンチネオプラストンAS2 1、アレムツズマブ、βアレチン、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン、PEG化リポソーム塩酸ドキソルビシン、プレドニゾン、プレドニゾロン、クラドリビン、硫酸ビンクリスチン、フルダラビン、フィルグラスチム、メルファラン、組み換えインターフェロンα、カルムスチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、メルファラン、ドラスタチン10、インジウムIn111モノクローナル抗体MN−14、イットリウムY90ヒト化エプラツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン、ブスルファン、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、治療用異種リンパ球、イットリウムY90イブリツモマブチウキセタン、シロリムス、タクロリムス、カルボプラチン、チオテパ、パクリタキセル、アルデスロイキン、組み換えインターフェロンα、ドセタキセル、イホスファミド、メスナ、組み換えインターロイキン−12、組み換えインターロイキン−11、Bcl−2ファミリータンパク質インヒビターABT−263、デニロイキンジフチトクス、タネスピマイシン、エベロリムス、ペグフィルグラスチム、ボリノスタット、アルボシジブ、組み換えflt3リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リンホカイン活性化キラー細胞、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、塩酸イリノテカン、酢酸カスポファンギン、クロファラビン、エポエチンα、ネララビン、ペントスタチン、サルグラモスチム、二酒石酸ビノレルビン、WT−1アナログペプチドワクチン、WT1 126−134ペプチドワクチン、フェンレチニド、イクサベピロン、オキサリプラチン、モノクローナル抗体CD19、モノクローナル抗体CD20、ω−3脂肪酸、塩酸ミトキサントロン、酢酸オクトレオチド、トシツモマブおよびヨウ素I131トシツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、三酸化ヒ素、ティピファルニブ、自家ヒト腫瘍由来HSPPC−96、ベルツズマブ、ブリオスタチン1、抗CD20モノクローナル抗体、クロラムブシル、ペントスタチン、ルミリキシマブ、アポリズマブ、抗CD40、オファツムマブ、テムシロリムス、ベンダムスチン、プリンアナログ、レナリドマイド、アルキル化剤ならびにアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発しているか、またはそれらの組み合わせであるステップ;
b)そのような処置の必要な被験体に、式I”
の化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩;ならびに
必要に応じて薬学的に許容され得る賦形剤;ならびに
必要に応じてベンダムスチン、リツキシマブ、レナリドマイドおよびオファツムマブからなる群より選択される1つ以上の追加の治療剤
を投与するステップ
を含む方法。
(項目20)
前記被験体が、リツキシマブ、アルキル化剤、フルダラビンおよびアントラサイクリン含有治療薬からなる群より選択される少なくとも1つ以上の処置に不応性であるか、または該処置後に再発している、ならびにそれらの組み合わせである、項目19に記載の方法。
(項目21)
50mg〜200mgの前記化合物が前記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に1日あたり2回投与される、項目19に記載の方法。
(項目22)
50mg/m 2 〜1,500mg/m 2 の前記1つ以上の追加の治療剤が前記被験体に、少なくとも1サイクル以上の間に少なくとも1回投与され、該1つ以上の治療剤が該被験体に、前記化合物の投与と同じまたは異なるサイクルで投与される、項目19または20に記載の方法。
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