TW201242598A - Combination therapies for hematologic malignancies - Google Patents

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cell
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cll
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TW101108394A
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Michael Gallatin
Roger G Ulrich
Neill A Giese
Brian Lannutti
Albert Yu
Langdon Miller
Thomas M Jahn
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Gilead Calistoga Llc
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Description

201242598 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本申請案屬於治療學及藥物化學領域。特定言之，本申 請案係關於某些嗜唾琳衍生物與其他治療性療法組合治療 血液惡性腫瘤及某些其他病狀之用途。 相關申請案之交又引用 本申請案主張2011年3月11日申請之美國臨時專利申請 案第61/452，03 4號及2011年6月3曰申請之美國臨時專利申 晴案第61/493,317说之優先權’該兩者均以全文引用的方 式併入本文中。 【先前技術】 經由3'磷酸化磷酸肌醇進行之細胞信號傳導已牵涉於多 種細胞過程，例如惡性轉型、生長因子信號傳導、發炎及 免疫性中。負貴產生此等磷酸化信號傳導產物之酶磷脂醯 肌醇3激酶（PI 3激酶；PI3K)最初鑑別其活性與病毒癌蛋白 (oncoproteins)及生長因子受體酪胺酸激酶相關，其使雄脂 醯肌醇（PI)及其磷酸化衍生物在肌醇環之3··經基處破酸 化。 咸信PI 3激酶活化涉及多種細胞反應，包括細胞生長、 分化及細胞凋亡。 對PI 3激酶之初始純化及分子選殖揭示其為一種由p85及 pi 10次單元組成之雜二聚體。已鑑別四種不同第1類 PI3K ’ 稱為 ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κδ及 ΡΙ3Κγ，各自由不同 110 kDa催化次單元及調控次單元組成。更詳言之，三個 163053.doc 201242598 化次單元，亦即ρ110α、ρ110β及ρΙΙΟδ各自與相同調控次 單元ρ85相互作用；而ρΙΙΟγ與不同調控次單元ρ101相互作 用。此等ΡΙ3Κ之各者在人類細胞及組織中之表現樣式亦不 同。 • 鑑別ΡΙ 3激酶之ρ 110δ同功異型物已描述於Chantry等 人，《/ 价〇/ C/zew，272:19236-41 (1997)中。觀測到人類 V P11 〇δ同功異型物係以組織限定方式表現。其係以高量表 現於淋巴細胞及淋巴組織中，表明該蛋白質可能在免疫系 統中之ΡΙ 3激酶介導之信號傳導中起作用。ΡΙ3Κ之ρΙΙΟβ 同功異型物亦可在某些癌症中之ΡΙ3Κ介導之信號傳導中起 作用。 需要針對與癌症、發炎疾病及自體免疫疾病有關之ΡΙ3Κ 介導之病症的療法。詳言之，需要針對作為血液惡性腫瘤 之癌症（諸如白血病及淋巴瘤）的療法。 現存針對慢性淋巴細胞性白血病（CLL)之化學免疫療法 可降低惡性淋巴細胞增殖且增強其細胞凋亡；然而，因為 現存藥物可能不會有效滲透至此等部位且因為非惡性基質 細胞會對惡性淋巴細胞提供支持，因此此等有益效應在淋 巴結中可能受限制。 針對CLL之現存化學療法或免疫療法包括環磷醯胺 (cyclophosphamide)、苯丁 酸氮芥（chlorambucil)、氟達拉 續（fludarabine)、利妥昔單抗、阿萊珠單抗（alemtuzumab) 及奥法木單抗。此等療法特別有效地殺死循環惡性淋巴細 胞’但減少惡性淋巴腺病變之有效性可能不足。此外，此 163053.doc 201242598 等療法不誘導淋巴細胞再分佈或導致淋巴細胞增多。 此項技術中需要可治療CLL患者的療法，其可調節淋巴 細胞與基質細胞之間的趨化性信號傳導。此外，需要可降 低此等信號傳導結果以使惡性淋巴細胞自淋巴結再分佈進 入循環中之療法。此再分佈可允許化學治療劑或免疫治療 劑更好地殺死此等細胞。 【發明内容】 本申請案藉由提供-種將此等化合物與其他化學療法或 免疫療法組合使用以治療癌症、發炎疾病及自體免疫疾病 之方法來滿足此項技術中之需要。特定言之，利用本文所 述之方法治療作為血液惡性腫瘤之癌症，諸如白血病及淋 巴瘤。 在一個態樣中，提供一種治療癌症之方法，其包含向需 要此治療之個體投與有效量之式A化合物，
HN丫、 （式 A)， n^Yn
^NH 其中R為Η、函基或C1-C6烷基；|^C1_C6烷基；或 其醫藥學上可接受之鹽；及 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 一或多種視情況選自由苯達莫司汀、利妥昔單抗及奥法 木單抗組成之群之其他治療劑。 163053.doc 6 - 201242598 在一個實施例中，化合物為
在另一實施例中，化合物為
在一些上述實施例中，癌症為血液惡性腫瘤。 在一些上述實施例中，血液惡性腫瘤為B細胞惡性腫 瘤。 在—些上述實施例中，血液惡性腫瘤為白血病或淋巴 瘤。 在些上述實施例中’癌症為慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)或非霍奇金氏淋巴瘤（n〇n H〇dgkin，s ， NHL) 〇 在些實施例中，癌症為惰性非霍奇金氏淋巴瘤 (iNHL) 〇 在其他實施例中， 個週期期間各自投與 化合物及一或多種治療劑係在至少一 至少一次，且其中一或多種治療劑係 163053.doc 201242598 在與投與化合物相同或不同之週期内投與個體。 在一些上述實施例中，週期為7至42天。 在-些上述實施例中，_或多種治療劑係在至少一個週 期之至少第一及第二天投與個體。 在一些上述實施例中，一或多種治療劑係在至少一個週 期期間每週投與個體。 在一些上述實施例中，每天兩次向個體投與5〇 與2〇〇 mg之間的化合物。 在一些上述實施例中，向個體投與50 mg/m2與1,500 mg/m2之間的一或多種治療劑。 在-些上述實施例中，化合物存在於包含化合物及至少 一種醫藥學上可接受之賦形劑之醫藥組合物中。 在-些上述實施例中，個體對標準化學治療性療法具有 抗性。 在一些上述實施例中，個體具有至少-個腫大淋巴結。 在-些上述實施例中，個體i}為至少—種化學療法治療 所難治癒，或Π)在化學療法治療之後復發，或其組合。 在另態、樣中’提供一種治療癌症之方法，其包含向需 要此治療之個體投與有效量之式A化合物，
163053.doc 201242598 其中R為Η、函基或C1-C6烷基；R，為C1C6烷基；或 其醫藥學上可接受之鹽；及 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 一或多種視情況選自由苯達莫司汀、利妥昔單抗、奥法 木單抗及來那度胺（lenalidomide)組成之群之其他治療劑。 在另一態樣中，提供一種治療病狀之方法，其包含向需 要此治療之個體投與有效量之式丨"或式π"化合物，
(II”) 或其醫藥學上可接受之鹽、及 。。或多種視情況選自由苯達莫司；了、利妥昔單抗及奧法 木單抗組成之群之其他治療劑， 巴細胞性白血病（CLL)或惰性非霍 其中該病狀為慢性淋 奇金氏淋巴瘤（iNHL)。 種化學療法治療所難 ’或其組合。 在一個實施例中，個體i)為至少一 治癒，或ii)在化學療法治療之後復發 ,些上述實施例中’化合物及—或多種治療劑係在至 夕一個週期期間各自投盥至少一 ^ , 议〃、至夕-人，且其中—或多種治療 '、，、投與化合物相同或不同之週期内投與個體。 在些上述實施例中，週期為7至42天。 在』上述實施例中，每天兩次向個體投與50 mg與200 163053.doc 201242598 mg之間的化合物。 在-個實施财’-或多種治療料笨達莫司心 在-些上述實施例令，在至少—個週期之至少第一及第 二天向個體投與苯達莫司汁。 在一些上述實施例中，投盥芏查 /、本達莫司汀至少6個週期。 在一些上述實施例中，苯这笪 ,2t,lcn 2 本達莫习〉丁之各劑量介於50 mg/m 與 150 mg/m 之間。 在一些上述實施例令， K方法另外包含向個體投與利妥昔 早抗。 在一些上述實施例中，在至少 社主'6個週期之每個週期之第 一天投與利妥昔單抗。 < 弟 在另-實施例中…或多種治療料利妥昔單抗。 在-些上述實施财，利妥昔單抗係在 ^ 間每週投與個體。 朗期 在一些上述實施例中，利妥 ——妥曰早抗之各劑量介於3。。 在另-實施例中…或多種治療劑為奥法木單抗。 單^些上述實施例中’經6個週期投與至少㈣奥法木 在另一態樣中，提供一 要此治療之個體投與有效 種治療病狀之方法，其包含向需 量之式I"或式II"化合物， 163053.doc 201242598
或其醫藥學上可接受之鹽、及 一或多種視情況選自由苯達莫司汀、利妥昔單抗、奧法 木單抗及來那度胺組成之群之其他治療劑。 在一個實施例中，一或多種治療劑為來那度胺。 在另一態樣中’提供一種治療患有B細胞病症之個體之 方法，其包含： a)鑑別患有B細胞惡性腫瘤之個體，其中該個體為至少 一或多種療法所難治癒或在至少一或多種療法治療之後復 發，該等療法選自由以下組成之群：硼替佐米 (bortezomib)(Velcade®)、卡菲佐米（carfiizomib)(PR-171)、 PR-047、雙硫命（disulfiram)、雷克塔西汀（lactacystin)、 PS-519 '依波尼黴素（ep〇neniycin)、環氧黴素 (epoxomycin)、阿克拉黴素（aclacinoniycin)、CEP-1612、 MG-132 ' CVT-63417、PS-341、乙烯颯三肽抑制劑、利托 那韋（ritonavir)、PI-083、（+/-)-7-曱基奥姆拉德（(+/-)-7-methylomuralide)、（-)-7-甲基奥姆拉德、派瑞福松 (perifosine)、利妥昔單抗、西地那非檸檬酸鹽（sildenafil citrate)(Viagra®)、CC-5103、沙立度胺（thalidomide)、伊 拉妥珠單抗（epratuzumab)(hLL2-抗CD22人類化抗體）、辛 163053.doc 201242598 伐他 丁（simvastatin)、恩紫妥林（enzastaurin)、Campath 1H®、地塞米松（dexamethasone)、DT PACE、奥利默森 (oblimersen)、抗新普拉通A10(antineoplaston A10)、抗新 普拉通AS2 1、阿萊珠單抗、β阿立辛、環磷醯胺、小紅莓 鹽酸鹽（doxorubicin hydrochloride)、聚乙二醇化脂質體小 紅莓鹽酸鹽、潑尼松（prednisone)、潑尼龍（prednisolone)、克 拉屈濱（cladribine)、長春新驗硫酸鹽（vincristine sulfate)、氟達拉濱、非格司亭（filgrastim)、美法侖 (melphalan)、重組干擾素a、卡莫司汀（carmustine)、順鉑 (cisplatin)、環碟醯胺、阿糖胞普（cytarabine)、依託泊皆 (etoposide)、美法余、海兔毒素 10(dolastatin 10)、銦 In 111單株抗體MN-14、釔Y 90人類化伊拉妥珠單抗、抗胸腺 細胞球蛋白（anti-thymocyte globulin)、白消安（busulfan)、 環抱素（cyclosporine)、曱胺喋呤（methotrexate) '黴酚酸嗎 咐乙酯（mycophenolate mofetil)、治療性同種異體淋巴細 胞、釔Y 90替坦異貝莫單抗（Yttrium Y 90 ibritumomab tiuxetan)、西羅莫司（sirolimus)、他克莫司（tacrolimus)、 卡麵（carboplatin)、塞替派（thiotepa)、太平洋紫杉醇 (paclitaxel)、阿地介白素（aldesleukin)、重組干擾素α、歐 洲紫杉醇（docetaxel)、異環磷酿胺（ifosfamide)、美司鈉 (mesna)、重組介白素-12(recombinant interleukin-12)、重 組介白素-11、Bcl-2家族蛋白質抑制劑ABT-263、地尼介 白素融合毒素（denileukin diftitox)、坦螺旋黴素 (tanespimycin)、依維莫司（everolimus)、聚乙二醇化非格 163053.doc 12 201242598 司亭（pegfilgrastim)、伏立諾他（vorinostat)、阿伏西地 (alvocidib)、重組flt3配位體、重組人類血小板生成素 (thrombopoietin)、淋巴激素（lymph〇kine)活化殺手細胞、 胺鱗汀三水合物（amifostine trihydrate)、胺基喜樹驗 (aminocamptothecin)、伊立替康鹽酸鹽（irinotecan hydrochloride)、卡泊芬淨乙酸鹽（caSp0fungin acetate)、克 羅拉濱（clofarabine)、阿法依伯汀（epoetin alfa)、奈拉濱 (nelarabine)、喷司他汀（pentostatin)、沙格司亭 (sargramostim)、長春瑞賓酒石酸氫鹽（vinoreibine ditartrate)、WT-1類似物肽疫苗、WT1 126-134肽疫苗、維 甲醯酚胺（fenretinide)、伊沙匹隆（ixabepilone)、奥赛力鉑 (oxaliplatin)、單株抗體CD19、單株抗體CD20、ω-3脂肪 酸、米托蒽醌鹽酸鹽（mitoxantrone hydrochloride)、奥曲 肽乙酸鹽（octreotide acetate)、托西莫單抗（tositumomab)及 蛾Ϊ 131托西莫單抗、莫特沙芬釓（motexafin gad〇linium)、 三氧化二坤（arsenic trioxide)、替皮法尼（tipifarrfib)、自體 性人類腫瘤源性HSPPC-96、維妥珠單抗（veltuzumab)、苔 蘚蟲素l(bryostatin 1)、抗CD20單株抗體、苯丁酸氮芬、 喷司他汀（pentostatin)、魯昔單抗（lumiliximab)、阿泊珠單 抗（apolizumab)、抗CD40、奥法木單抗、天西羅莫司 (temsirolimus)、苯達莫司$、嘌呤類似物、來那度胺、烧 基化劑及含蒽環黴素（anthracycline)療法或其組合； b)向需要此治療之個體投與式I"化合物 163053.doc (I”）， (I”），201242598
或其醫藥學上可接受之鹽；及 視晴况選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 或多種視情況選自由苯達莫司；丁、利妥昔單抗 度胺及奧法木單抗組成之群之其他治療劑。 在-個實施例中’個體為至少一或多種療法所難治癒或 在至少一或多種療法治療之後復發，該等療法選自由以下 組成之群：利妥昔單抗、院基化劑、氟達拉濱及含蒽環徽 素療法及其組合。 在一些上述實施例中，在至少一或多個週期期間每天兩 次向個體投與50 mg與200 mg之間的化合物。 在一些上述實施例中，在至少一或多個週期期間向個體 投與50 1^/1112與1，500 mg/m2之間的一或多種其他治療劑至 少一次’其中一或多種治療劑係在與投與化合物相同或不 同之週期内投與個體。 在另一態樣中，提供一種治療患有B細胞病症之個體之 方法，其包含： a)鑑別患有B細胞惡性腫瘤之個體，其中該個體為至少 一或多種療法所難治癒或在至少一或多種療法治療之後復 發’該等療法選自由以下組成之群：硼替佐米 163053.doc •14- 201242598 (Velcade®)、卡菲佐米（PR-171)、PR-047、雙硫侖、雷克 塔西汀、PS-519、依波尼黴素、環氧黴素、阿克拉黴素' CEP-1612、MG-132、CVT-63417、PS-341、乙烯砜三肽抑 制劑、利托那韋、PI-〇83、（+/_)_7_甲基奥姆拉德、卜)·' 曱基奥姆拉德 '派瑞福松、利妥昔單抗、西地那非檸檬酸 鹽（Viagra®)、CC-5103、沙立度胺、伊拉妥珠單抗（hLL2- 抗CD22人類化抗體）、辛伐他汀、恩紮妥林、Campath 1H®、地塞米松、DT PACE、奥利默森、抗新普拉通 A1 0、抗新普拉通AS2 1、阿萊珠單抗、β阿立辛、環鱗醢 胺、小紅莓鹽酸鹽 '聚乙二醇化脂質體小紅莓鹽酸鹽、潑 尼松、潑尼龍、克拉屈濱、長春新鹼硫酸鹽、氟達拉濱、 非格司亭、美法侖、重組干擾素α、卡莫司汀、順鉑、環 磷醯胺、阿糖胞苷、依託泊苷、美法侖、海兔毒素1〇、銦 In 111單株抗體ΜΝ-14、釔Υ 90人類化伊拉妥珠單抗 '抗 胸腺細胞球蛋白、白消安、環抱素、甲胺嗓吟、黴盼酸嗎 琳乙酯、治療性同種異體淋巴細胞、紀Y 90替坦異貝莫單 抗、西羅莫司、他克莫司、卡鉑、塞替派、太平洋紫杉 醇、阿地介白素、重組干擾素α、歐洲紫杉醇、異環磷醯 胺、美司鈉、重組介白素-12、重組介白素_11、Bcl-2家族 蛋白質抑制劑ABT-263、地尼介白素融合毒素、坦螺旋黴 素、依維莫司、聚乙二醇化非格司亭、伏立諾他、阿伏西 地、重組flt3配位體、重組人類血小板生成素、淋巴激素 活化殺手細胞、胺磷汀三水合物、胺基喜樹鹼、伊立替康 鹽酸鹽、卡泊芬淨乙酸鹽、克羅拉濱、阿法依伯汀、奈拉 163053.doc -15· 201242598 濱、喷司他汀、沙格司亭、長春瑞賓酒石酸氫鹽、貿丁_丨類 似物肽疫苗、WT1 126_134肽疫苗、維甲醯酚胺、伊沙匹 隆、奥赛力鉑、單株抗體CD19、單株抗體CD2〇、ω 3脂肪 酸、米托蒽醌鹽酸鹽、奥曲肽乙酸鹽、托西莫單抗及碘工 131托西莫單抗、莫特沙芬釓、三氧化二砷、替皮法尼、 自體性人類腫瘤源性HSPPC_96 '維妥珠單抗、苔蘚蟲素 1、抗CD20單株抗體、苯丁酸氮芥、喷司他汀、魯昔單 抗 '阿泊珠單抗、抗CD40、奥法木單抗、天西羅莫司、 苯達莫司汀、嘌呤類似物、來那度胺、烷基化劑及含蒽環 黴素療法或其組合； b)向需要此治療之個體投與式化合物
或其醫藥學上可接受之鹽；及 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 -或多種視情況選自由苯達莫司；了、利妥昔單抗、奧法 木單抗及來那度胺組成之群之其他治療劑。 在另一態樣中，本發明提供一種治療慢性淋巴細胞性白 血病（CLL)或惰性非霍奇金氏淋巴瘤（iNHL)之方法，其包 含向需要此治療之個體投與有效量之式j"化合物， 163053.doc -16- 201242598
或其醫藥學上可接受之鹽； 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 苯達莫司汀。 在-個實施例化合物及苯達莫司灯係在至少一個週 各自投與至少—次，且其中苯達莫司；τ係在與投與 化口物相同或不同之週期内投與個體。 在一些上述實施例中，週期為7至42天。 在-些上述實施例中’化合物係在至少一個週期期間每 天兩次投與個體’且其中苯達莫5切係在至少—個週期之 至少第一及第二天投與個體。 在一些上述實施例中，投與苯達莫司ί丁至少6個週期。 在一些上述實施例中，化合物之劑量介於50叫與200 叫之間，且其中笨達莫司；丁之劑量介於50 mg/m2與15〇 mg/m2之間。 、 在-些上述實施例中，方法另外包含投與一或多種選自 由利妥昔單抗及奥法木單抗組成之群之其他治療劑。 在—些上述實施例中，方法另外包含投與-或多種選自 由利妥θ早抗 '奥法木單抗及來那度胺組成之群之其他治 I63053.doc •17· 201242598 在另一態樣中，提供一種治療慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)或惰性非霍奇金氏淋巴瘤（iNHL)之方法，其包含向 需要此治療之個體投與有效量之式Ϊ"化合物，
或其醫藥學上可接受之鹽； 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 利妥昔單抗。 在個實施例中，化合物及利妥昔單抗係在週期期間各 自投與至少-次’且其中利妥昔單抗係在與投與化合物相 同或不同之週期内投與個體。 在一些上述實施例中，週期為7至42天。 在二上述實施你J巾，化合物係纟至少一個週期期間每 天兩次投與個體，且其中利妥昔單抗係在至少—個週期期 間每週投與個體。 在一些上述實施例中，化合物之劑量介於50 mg與200 mg之間’且其中利妥昔單抗之劑量介於_ mg/m2與彻 mg/m2之間。 j-些上述實施例中’方法另外包含投與一或多種選自 由苯達莫司>、丁及奧法★ 、 木單抗組成之群之其他治療劑。 在-些上述實施例中’方法另外包含投與一或多種選自 163053.doc 201242598 由苯達莫司/T、奥法木單抗及來那度胺组成之群之其他治 療劑。 在另態樣中’提供一種治療慢性淋巴細胞性白血病 (叫或惰性非霍奇金氏淋巴瘤（iNHL)之方法，其包含向 需要此治療之個體投與有效量之式丨"化合物，
或其醫藥學上可接受之鹽； 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 來那度胺。 在一個實施例中，化合物及來那度胺係在週期期間各自 投與至少一次，且其中來那度胺係在與投與化合物相同或 不同之週期内投與個體。 在另一態樣中，提供一種治療慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)或惰性非霍奇金氏淋巴瘤（iNHL)之方法，其包含向 需要此治療之個體投與有效量之式Γ化合物，
163053.doc 201242598 或其醫藥學上可接受之鹽； 視凊況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 奥法木單抗。 在一些上述實施例中’化合物之劑量介於5〇 mg與2〇〇 mg之間’且奥法木單抗之劑量介於200 mg與1500 mg之 間。在一些上述實施例中，投與奥法木單抗之初始劑量不 同於奥法木單抗之隨後劑量。 【實施方式】 除非另外疋義，否則本文中使用之所有技術術語、記法 及其他科學術語或專門名詞皆意欲具有熟習本發明所屬技 術者通常瞭解之含義。在一些情況下，為清晰起見及/或 為方便參考起見，在本文中定義具有通常瞭解之含義之術 語，且在本文中包括此等定義不一定解釋為表示與此項技 術中通常瞭解之含義存在實質性差異。本文中描述或參考 之許多技術及程序係由熟習此項技術者充分瞭解且通常由 其使用習知方法加以採用。適當時，涉及使用市售套組及 試劑之程序通常根據製造商規定之方案及/或參數來進 行，除非另外說明。 本文給出之對一般性方法之論述意欲僅出於說明性目 的。熟習此項技術者審閱本發明後將顯而易知其他替代性 方法及實施例。 一組與連接詞「或」相聯繫之項目不應當作要求在彼組 中具有相互排他性（mutual exclusivity)，而應當作「及/ 或」，除非另外明確陳述。儘管本發明之項目、要素或乡且 163053.doc •20- 201242598 刀可以單數描述或主張，但本發明範疇内意欲涵蓋複數， 除非明確陳述限於單數。 本發明提供關於治療癌症及發炎疾病之新穎治療策略的 方法。在一個態樣中，本發明提供一種治療個體癌症之方 法’其包含向該個體投與式A化合物
其中R為H、鹵基或C1-C6烷基；R·為C1-C6烷基；或其 醫藥學上可接受之鹽；及視情況選用之醫藥學上可接受之 賦形劑。 在一特定實施例中，鹵基為F;且R，為甲基、乙基或丙 基。 在一特定實施例中’ R連接於喹唑琳基環之5位，該環具 有結構
在一特定實施例中，R連接於喹唑啉基環之6位，該環具 有結構 163053.doc -21 · 201242598
除非另外規定，否則本文使用之術語「化合物」係指气 A化合物，諸如化合物I、化合物π、或對映異構體（諸如I" 或II")、或對映異構體混合物。 「式I化合物」或「化合物I」係指化合物5_氟_3苯基 [1-(9Η·嘌呤-6-基胺基）-丙基]_3H-喹唑啉-4-_，具有式^士 構： 、’。
此處展示化合物I之S-對映異構體，稱為Γ，：
「式π化合物」或「化合物„」係指化合物•嘌 呤-6-基胺基）乙基）-6-氟·3-苯基喹唑啉_4(3Η)-酮，具有式 II結構： 163053.doc •22- 201242598
此處展示化合物II之s-對映異構體，稱為Η":
在一個實施例中，式Α化合物為式I化合物。在另一實施 例中’式A化合物為式π化合物。在某些實施例中，化合 物為R-對映異構體與S-對映異構體之外消旋混合物。在某 些實施例中，化合物係以對映異構體之混合物形式使用， 且通常富含S-對映異構體。在一些實施例中，化合物主要 為S-對映異構體。在一些實施例中，本文所述之方法中使 用之式A化合物為至少80% S_對映異構體。在某些實施例 中’化合物主要由S-對映異構體構成，其中化合物包含至 少66-95%或85-99%之S-對映異構體。在一些實施例中，化 合物具有至少90%或至少95%之對映異構體過量（e e )的s_ 對映異構體。在一些實施例中，化合物具有至少98%或至 少99。/。之S-對映異構體過量（^卜在某些實施例中，化合 物包含至少95%之S.對映異構體4實例章節所提供之: 163053.doc • 23· 201242598 胞及患者實驗中，所用化合物！之樣品為95%以上s對映異 構體》 在特定實施例中，本文所述方法中使用之式ι或式n化合 物為至少80% S-對映異構體。在某些實施例中，式〗或式π 化合物主要由S-對映異構體構成，其中化合物包含至少 66-95%或85_99%之8對映異構體。在_些實施例中式工 或式II化合物具有至少90%或至少95%之對映異構體過量 (…的S-對映異構體。在-些實施例中，式！或式π化合物 具有至少98%或至少99%之S-對映異構體過量（e e )。在某 些實施例中’ U或式⑽合物包含至少95%之8_對映異構 體。在實例章節所提供之細胞及患者實驗中，所用化合物 I之樣品為95°/。以上S-對映異構體。 在一特定實施财，相較於其他PI3K同功異型物，化合 物選擇性抑制ΡΙ3Κ ρ 110δ。 在一特定實施例+，癌症為血液惡性腫瘤及/或實體腫 瘤。在另-㈣實施例中’血液惡性腫瘤為白血病或淋巴 在-些實施例中’淋巴瘤為成熟（周邊皮細胞贅瘤。在 特定實施例中，成熟Β細胞贅瘤係選自由以下組成之群： Β細胞慢性淋巴細胞性白血病/小淋巴細胞性淋巴瘤（聰^ lymphocytic lymphoma) ; Β細胞前淋巴細胞性白血病 (prolymphocytic ieukemia);淋巴漿細胞淋巴瘤 (LymPh〇plasmacytic lymph〇ma);邊緣區淋巴瘤⑽咕w zone lymphoma)，諸如脾邊緣區B細胞淋巴瘤（+/絨毛淋巴 163053.doc •24- 201242598 細胞）、結節邊緣區淋巴瘤（+/-單核細胞樣B細胞）及黏膜相 關淋巴組織（MALT)型結節外邊緣區B細胞淋巴瘤；毛細胞 白血病（Hairy cell leukemia);聚細胞骨髓瘤/锻細胞瘤 (plasmacytoma);渡泡中心性渡泡性淋巴瘤（Follicular lymphoma, follicle center);套細胞淋巴瘤（Mantle cell lymphoma)；彌漫性大細胞B細胞淋巴瘤（包括縱隔大B細胞 淋巴瘤（Mediastinal large B-cell lymphoma)、血管内大 B細 胞淋巴瘤及原發性滲出性淋巴瘤（Primary effusion lymphoma))；及伯基特氏淋巴瘤（Burkitt's lymphoma)/伯基 特氏細胞白血病（Burkitt's cell leukemia)。 在一些實施例中，淋巴瘤係選自由以下組成之群：多發 性骨髓瘤（MM)及非霍奇金氏淋巴瘤（NHL)、套細胞淋巴瘤 (MCL)、渡泡性淋巴瘤、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症 (Waldenstrom's macroglobulinemia，WM)或 B 細胞淋巴瘤 及彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL)。 在另一特定實施例中，白血病係選自由以下組成之群： 急性淋巴細胞性白血病（ALL)、急性骨髓白血病（AML)、 慢性淋巴細胞性白血病（CLL)及小淋巴細胞性淋巴瘤 (SLL)。急性淋巴細胞性白血病亦稱為急性淋巴母細胞白 血病且在本文中可互換使用。兩個術語均描述一種自骨髓 中之白血球，即淋巴細胞起始之癌症類型。 在一些實施例中，非霍奇金氏淋巴瘤（NHL)屬於兩個種 類之一，即侵襲性NHL或惰性NHL。侵襲性NHL生長快速 且可導致患者相對快速死亡。未治療存活期可以數月或甚 163053.doc -25· 201242598 至數週計。侵襲性NHL之實例包括B細胞贅瘤、彌漫性大B 細胞淋巴瘤、T/NK細胞贅瘤、多形性大細胞淋巴瘤 (anaplastic large cell lymphoma)、周邊T細胞淋巴瘤、前 驅B淋巴母細胞白血病/淋巴瘤、前驅T淋巴母細胞白血病/ 淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、成人T細胞淋巴瘤/白血病 (HTLV1 +)、原發性CNS淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、多形性移 植後淋巴增生性病症（PTLD)、AIDS相關淋巴瘤、真性組 織細胞性淋巴瘤（true histiocytic lymphoma)及母細胞性nk 細胞淋巴瘤。最常見類型之侵襲性NHL為彌漫性大細胞淋 巴瘤》 惰性NHL生長緩慢且對於大多數患者而言不顯示明顯症 狀直至疾病已進展至晚期。惰性NHL患者之未治療存活期 可以數年計。非限制性實例包括濾泡性淋巴瘤、小淋巴細 胞性淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤（諸如結節外邊緣區淋巴瘤（亦 稱為黏膜相關之淋巴組織-MALT淋巴瘤）、結節邊緣區b細 胞淋巴瘤（單核細胞樣B細胞淋巴瘤）、脾邊緣區淋巴瘤）及 淋巴漿細胞淋巴瘤（瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症）。 在一些情況下，可發生組織轉型，例如患者之惰性nhl 可轉變成侵襲性NHL。 在-些實施财，纟發明提供治療患有侵襲性nhl或惰 性NHL之患者之方法。 在-些實施例中，本發明提供治療患有選自由以下植成 之群之病狀之患者的方法：套細胞淋巴瘤(mcl)、彌漫性 大B細胞淋巴瘤（DLBCL)、渡泡性淋巴瘤_、急性淋巴 163053.doc •26- 201242598 細胞性白血病（ALL)、急性骨趙白血病（aml)、慢性淋巴 細胞性白血病（CLL)及小淋巴細胞性淋巴瘤（sll)、多發性 骨髓瘤（MM)及邊緣區淋巴瘤。 在-些實施例中，本發明方法係向患有復發或難治癒病 . 狀之患者投與。 在另#施例中，癌症為乳癌、肺癌、結腸癌或前列腺 癌。 在一特定實施例中，相較於無癌症個體中之ρΐ3κ活性， 癌症與異常ΡΙ3Κ活性相關。 在一特定實施例中，較佳個體為化學療法所難㈣或在 化學療法治療之後復發。在一替代性實施例中，個體為原 發性（de 77〇V〇)患者。 在一特定實施例中，方法包含降低該患者中之p觸活 性程度》 在一特定實施例中，個體為人類個體。 經歷已知治療劑治療之個體可經歷針對治療之抗性。舉 例而言，儘管FDA核准蝴替佐米用於復發/難治癒、復發、 及新診斷MM ’但-些患者對蝴替佐米無反應且其他患者 獲得針對侧替佐米之抗性。在一些實施例中，本文所述之 喧嗤琳酮化合物協同增強已知治療劑之功效。在—些實施 例中’本文所述之化合物可增強本文所述之任何治療劑。 在更特定實施例中，本文所述之化合物協同增強蛋白酶體 (Pr〇teaS〇me)抑制劑。在一些上述實施例中，個體對化學 治療性療法具有抗性。在一些上述實施例中，個體對蛋白 163053.doc -27- 201242598 酶體抑制劑具有抗性。在一些上述實施例令個體對棚替 佐米或卡菲佐米具有抗性。在一個實例令，本文所述之化 合物協同增強硼替佐米誘導之刪細胞毒性。在不受理論 束缚之情況下，在-些實施财，本文論述之化合物抑制 棚替佐米誘導之AKT碟酸化。在―些實施例中，本文所述 之方法用於克服針對蛋白酶體抑制劑療法之抗性。在一些 實施例中本發明提供—種治療對治療劑具有抗性或已對 治療劑產生抗性之個體的方法。 儘管不受理論束缚，但式A化合物與習知療法之間的協 同效應可歸因於本發明化合物能夠誘導腫瘤細胞移動入周 邊循環中。冑冑腫瘤細胞之周彡循環會使習知療法作用於 且更有效中和腫瘤之能力增強。此協同作用已在患者 中得以證明。 因此，方法包含除式A化合物之外，亦向患者投與治療 有效量之至少—種其他治療劑及/或治療程彳其經選擇 可治療該患者中之該癌症。「治療劑」可指一或多種如本 文所用之化合物。治療劑可為標準或實驗性化學療法藥 物。治療劑可包含一種以上化學療法藥物之組合。典型化 學療法藥物組合為本文巾所列之a_q ^可根據所治療疾病 之類型選擇特定治療劑。用於特定血液疾病之習知化學治 療性療法之非限制性實例描述於隨後章節中。在一特定實 施例中，本發明提供一種用硼替佐米及式A化合物（例如式 1 Π、1或Π”）治療造血系統癌症患者，例如CLL·患者之方 法’其中組合提供協同效應。 163053.doc • 28 - 201242598 在一特定實施例中’該治療劑係選自由以下組成之下 群：硼替佐米（Velcade®)、卡菲佐米（PR_171)、pR 〇47、 雙硫侖、雷克塔西 '汀、PS-519、依波尼黴素、環氧黴素、 阿克拉黴素、CEP-1612、MG-132、CVT-63417、PS-341、 乙烯砜三肽抑制劑、利托那韋、PLOM、（+/_)_7•曱基奥姆 拉德、（-)-7-曱基奥姆拉德、派瑞福松、利妥昔單抗、西 地那非檸檬酸鹽（Viagra®)、CC-5103、沙立度胺、伊拉妥 珠單抗（hLL2-抗CD22人類化抗體）、辛伐他灯、恩紮妥 林、Campath-ΙΗ®、地塞米松、DT PACE、奥利默森、抗 新普拉通A10、抗新普拉通AS2-1、阿萊珠單抗、β阿立 辛、環鱗醯胺、小紅莓鹽酸鹽、聚乙二醇化脂質體小紅每 鹽酸鹽、潑尼松、潑尼龍、克拉屈濱、長春新鹼硫酸鹽、 乳達拉濱、非格司亭、美法命、重組干擾素α、卡莫司 汀、順鉑、環磷醯胺、阿糖胞苷、依託泊苷、美法侖、海 兔毒素10、銦In 111單株抗體ΜΝ-14、釔Υ 90人類化伊拉 妥珠單抗、抗胸腺細胞球蛋白、白消安、環孢素、甲胺嗓 呤、黴酚酸嗎啉乙酯、治療性同種異體淋巴細胞、釔γ 9〇 替坦異貝莫單抗、西羅莫司、他克莫司、卡鉑、塞替派、 太平洋紫杉醇、阿地介白素、重組干擾素α、歐洲紫杉 醇、異環磷醯胺、美司鈉、重組介白素-12、重組介白素_ 11、Bcl-2家族蛋白質抑制劑ΑΒΤ-263、地尼介白素融合毒 素、坦螺旋黴素、依維莫司、聚乙二醇化非格司亭、伏立 諾他、阿伏西地、重組flt3配位體、重組人類血小板生成 素、淋巴激素活化殺手細胞、胺磷汀三水合物、胺基喜樹 163053.doc -29· 201242598 鹼伊立替康鹽酸鹽、卡泊芬淨乙酸鹽、克羅拉濱、阿法 依伯、汀、奈拉濱、喷司他汀、沙格司亭、長春瑞賓酒石酸 氫鹽、州類似物肽疫苗、WT1 126_m肽疫苗、維甲酿 盼胺、伊沙匹H赛力翻、單株抗體cdi9、單株抗體 CD20、ω_3脂肪酸、米托蒽輥鹽酸鹽、奥曲肽乙酸鹽 '托 西莫單抗及碘！ 131托西莫單抗、莫特沙芬釓、三氧化二 砷、替皮法尼、自體性人類腫瘤源性Hsppc_96、維妥珠 單抗、台蘚蟲素1、抗CD20單株抗體、苯丁酸氮芥 '喷司 他汀、魯昔單抗、阿泊珠單抗、抗(：1)4〇及奥法木單抗或 其組合。當前及實驗性療法中使用治療劑之組合，諸如以 上所列之彼等組合a-q。 在些實施例中’治療劑較佳為蛋白酶體抑制劑。在一 些實施例中，方法包含投與化合物及蛋白酶體抑制劑。蛋 白酶體抑制劑包括天然及合成化合物。蛋白酶體抑制劑之 非限制性實例包括硼替佐米（[(1R)_3_甲基苯 基比嗪-2-基羰基）胺基]丙醯基}胺基）丁基】_酸），其 由 Millennium pharmaceuticals以「Velcade®」銷售；卡菲 佐米（PR-171)及口服類似物pR-〇47，該兩者均由proteolix， Inc開發。蛋白酶體抑制劑之其他實例包括雙硫侖；雷克 塔西汀；合成化合物，諸如PS-5 19、依波尼黴素、環氧黴 素及阿克拉黴素；鈣蛋白酶（calpain)抑制劑，諸如CEP-1612 、 MG-132 、 CVT-63417 、 PS-341 ; 乙 烯颯三 肽抑制 劑；利托那韋；PI-083 ; (+/-)-7_甲基奥姆拉德；及（-)-7-甲基奥姆拉德。在特定實施例中，式A化合物係與硼替佐 163053.doc • 30· 201242598 米或卡菲佐米組合投與。在更特定實施射，式ι化合物 係與硼替佐米或卡菲佐米組合投與。在其他特定實施例 中，式π化合物係與硼替佐米或卡菲佐米組合投與。在特 足實施例中，式A化合物係與利妥昔單抗或奥法木單抗組 合投與。在更特定實施例中，式丨化合物係與利妥昔單抗 或奥法木單抗組合投與。在其他特定實施例中式π化合 物係與利妥昔單抗或奥法木單抗組合投與。 在一些實施例中，治療劑為烷基化劑。烷基化劑之非限 制性實例包括例如白消安、美法侖、苯丁酸氮芥、環磷醯 胺、氮芥（mechlorethamine)、烏拉莫司汀（uramustine)、異 環磷醯胺、卡莫司汀、洛莫司汀（1〇mustine)、鏈佐星 (streptozocin)、塞替派及基於鉑之化學治療性藥物，諸如 順鉑、卡鉑、奈達鉑（nedaplatin)、奥赛力鉑、撒塔鉑 (satraplatin)、四硝酸三銘（triplatin tetranitrate)。 在其他實施例中，任何本發明化合物皆可與一或多種其 他活性治療劑組合成單位劑型以同時或依序向患者投與。 組合療法可以同時或依序方案投與。當依序投與時，組合 可以兩次或兩次以上投藥來投與。 在一個實施例中’共投與本發明化合物與一或多種其他 /舌性治療劑通常係指同時或依序投與本發明化合物及一或 多種其他活性治療劑，以使治療有效量之本發明化合物及 一或多種其他活性治療劑均存在於患者體内。在一替代性 實施例中，化合物及治療劑不必定均存在於患者體内，但 化合物及治療劑之特定給藥時程會產生協同效應。 163053.doc •31 · 201242598 共投藥包括在投與單位劑量之一或多種其他活性治療劑 之則或之後投與單位劑量之本發明化合物；例如在投與一 或多種其他活性治療劑之數秒、數分鐘、數小時或數天内 投與本發明化合物。舉例而言，可首先投與單位劑量之本 發明化合物，隨後在數秒、數分鐘、數小時或數天内投與 單位劑量之一或多種其他活性治療劑。或者，可首先投與 單位劑量之一或多種其他治療劑，隨後在數秒、數分鐘、 數小時或數天内投與單位劑量之本發明化合物。在一些情 況下’可能需要首先投與單位劑量之本發明化合物，隨後 在數小時（例如1-12小時）之時期之後投與單位劑量之一或 多種其他活性治療劑。在其他情況下，可能需要首先投與 單位劑量之一或多種其他活性治療劑，接著在數小時（例 如1-12小時）之時期之後投與單位劑量之本發明化合物。在 一些情況下可能需要首先投與單位劑量之本發明化合 物，接著在數天（例如1-12天）之時期之後投與單位劑量之 一或多種其他活性治療劑。在其他情況下，可能需要首先 投與單位劑量之一或多種其他活性治療劑，隨後在數天 (例如1-12天）之時期之後投與單位劑量之本發明化合物。 在一些實施例中，給藥方案可涉及在數天、數週或數月期 間交替投與化合物及治療劑。 組合療法可提供「協同作用」及「協同效應」，亦即在 共同使用活性成分時達成之效應大於單獨使用化合物所產 生之效應的總和《當活性成分：（丨）以組合調配物形式共調 配且同時投與或傳遞；（2)以各別調配物形式交替或並行傳 163053.doc •32- 201242598 遞；或（3)根據某-其他方案時可達成協同效應。當以交替 療法傳遞時，在化合物係例如以各別錠劑、丸劑或膠囊形 式或藉由於Μ注射11中進行不同注射來依序投與或傳遞 :可達成協同效應一般而t，在交替療法期間，有效劑 里之各活性成分係依序（亦即連續）投與。 在-個態樣中’本發明提供一種醫藥組合物， I化合物： ，、匕3式 或其醫藥學上 之賦形劑。在一 在另一態樣中 II化合物：
可接受之鹽 個實施例中 及至少—種f藥學上可接受 組合物富含S-對映異構體。 本發明提供一種醫藥組合物 其包含式
或其醫藥學上可接森 接又之鹽；及至少一種醫筚風 之賦形劑。在—個實 /、予上可接受 個實施例中’組合物富含S_對映異構體。 163053.doc -33- 201242598 在一個態樣中’本發明提供一種治療患者之多發性骨髓 瘤（MM)之方法，其包含將式A化合物與另—治療劑組合投 與。在-些實施例中’式A為化合物⑷】。在特定實施例 中’式A為化合物工，·。在其他實施例中，式八為化合物 Π"。在一些上述實施例中，另一治療劑為蛋白酶體抑制 劑》在特定實施例中’另—治療劑為蝴替佐米。在一特定 實施例中，治療患者之多發性骨髓瘤之方法包含投與化合 物I"及蝴替佐米。在-特定實施例中，治療患者之多發性 骨髓瘤之方法包含投與化合物„”及蝴替佐米。在一些上述 實施例中’化合物！"或Π"具有至少6()%之對映異構體過 量在些上述實施例中，化合物I"或Π”具有至少70%之 對映異構體過量。纟一些上述實施例中，化合物】”或π ”具 有至少8〇%之對映異構體過量。在一些上述實施例中，化 :物I”或Π，，具有至少90%之對映異構體過量。在一些上述 實施例中，化合物j”或π"具有至少％%之對映異構體過 量。在一些上述實施例中，化合物〖"或π"具有至少98%之 對映異構體過量。在一些上述實施例中，化合似，，或π "具 有至少99%之對映異構體過量。 在一特定實施例中，治療劑之組合係與^化合物—起 投與，其中該組合係選自由以下組成之群： a) 苯達莫司汀； b) 利妥昔單抗； c) 苯達莫司汀及利妥昔單抗； d) 奧法木單抗；及 163053.doc •34. 201242598 e)來那度胺。 在替代性實施例中，化合物係與治療程序組合使用。在 一特定實施例中，治療程序係選自由以下組成之群：周邊 血液幹細鮮植、自難造血幹細胞移植、自體性骨趙移 植、抗體療法、生物療法、酶抑制劑療法、全身照射 (total body irradiation)、幹細胞輪注、在幹細胞支持下清 除骨髓（b_ marrow ablation whh ⑽ _ Μ—⑴活 體外處理之周邊血液幹細胞移植、臍帶血液移植、免疫酶 技術、免疫組織化學染色法、藥理學研究、低let钻·6〇γ 射線療法、博來黴素(ble〇mycin)、習知手術、放射療法、 高劑量化學療法及非㈣清除性同種㈣造血幹細胞移 植。 。在-特定實施例中’方法另外包含自該患者獲得生物樣 =及用選自由以下組成之群之分析程序分析該生物樣 液化學分析、染色體易位分析、針刺生檢（needle b1〇:y)、螢光原位雜交、實驗室生物標記分析、免疫組織 4干染色法、流動式細胞測量術或其組合。 出於命名目的’化合物之㈣魏及^基組分經相應 編號： 1 2 嘌呤
斤用術5吾「烧基」包括在其未經取代時僅含有 163053.doc •35· 201242598 C及Η之直鏈、分支鏈及環狀單價烴基及此等基團之組 合。實例包括曱基、乙基、異丁基、環己基、環戊基乙基 及其類似基團。本文中有時描述各此基團中之碳原子總 數’例如當基團可含有至多10個碳原子時，其可表示為卜 10C 或 C1-C10 或 C1-10。 如本文所用之「鹵基」包括包括氟、氣、溴及碘。氟及 氣通常較佳。 如本文所用之術語「選擇性ΡΙ3Κδ抑制劑」或「選擇性 ΡΙ3Κβ抑制劑」等係指分別抑制ρΙ3Κδ4ΡΙ3Κβ同功酶比抑 制ΡΙ3Κ家族之至少一種其他同功酶更有效的化合物。選擇 性抑制劑亦可具有針對ΡΙ3Κ之其他同功酶之活性，但需要 較尚濃度以達成對其他同功酶之相同抑制程度。「選擇 性」亦可用於描述對特定ΡΙ3激酶之抑制比類似化奋物更 大的化合物》「選擇性ΡΙ3Κδ抑制劑」化合物應理解為對 ΡΙ3Κδ的選擇性大於習知通常稱為ΡΙ3Κ抑制劑之化合物（例 如渥曼青黴素（wortmannin)或LY294〇02)。同時，渥曼青徽 素及LY294002視為「非選擇性PI3K抑制劑」。在某些實施 例中’選擇性負調控ΡΙ3Κδ表現或活性之任何類型的化合 物可在本發明方法中用作選擇性ΡΙ3Κδ抑制劑。此外，選 擇性負調控ΡΙ3Κδ表現或活性且具有可接受之藥理學性質 之任何類型的化合物可在本發明之治療方法中用作選擇性 ΡΙ3Κδ抑制劑。在不受理論束缚之情況下，本發明化合物 靶向ρΐ 10δ抑制為治療血液惡性腫瘤提供一種新額方法， 原因在於此方法抑制組成性信號傳導，從而可直接破壞腫 163053.doc -36- 201242598 瘤細胞。此外，在不受理論束缚之情況下，ρΐι〇δ抑制會 遏制對腫瘤細胞歸巢（homing)、存活及增殖而言至關重要 之微環境信號。 在一替代性實施例_，選擇性負調㈣卿表現或活性 之任何類型的化合物可在本發明方法中用作選擇性ρΐ3κβ 抑制劑。此外，選擇性負調^3Κβ表現或活性且具有可 接受之藥理學性質之任何類型的化合物可在本發明之治療 方法中用作選擇性ρΙ3Κβ抑制劑。 如本文所用之冶療」係指抑制病症，亦即遏止其發 展；減輕病症，亦即使其消退；或改善病症，亦即降低與 病症相關之至少-種症狀之嚴重性。在—些實施例中， 「治療」係指防止病症在^該病症但尚未診斷為患有其 之動物中出現。「病症」意欲涵蓋（但不限於）醫學病症、疾 病、病狀、症候群及其類似病症。 在另-態樣中，本發明包括一種抑制嗜驗性血球及/或 肥大細胞之功能且從而能夠治療特徵在於嗜驗性血球及/ 或肥大細胞活性過度或不合需要之疾病或病症的方法。根 據該方法，可使用選擇性抑制嗜鹼性血球及/或肥大細胞 中之填脂酿肌SI3激酶S(P㈣）之表現或活性的本發明化 合物。較佳地，該方法使用P⑽抑制劑的量足以抑制嗜 鹼性血球及/或肥大細胞釋放經刺激之組織胺。因此，使 用此等化合物及其細KS選擇性抑制劑可具有治療特徵 在於組織胺釋放之錢，亦即過敏性病症，包括諸如慢性 阻塞性肺病（C〇PD)、哮喘、ARDS、氣腫及相關病症之病 163053.doc -37- 201242598 症的價值β 方法可用於治療易受或可易受再灌注損傷，亦即由組織 或器官依次經歷缺血及再灌注之時期之情形所致的損傷之 個體術扣缺血」係指因動脈血液流入阻塞所致之局部 組織貧血。短暫缺血後再灌注會特徵性地導致嗜中性白血 球活化並穿過血管之内皮轉移（transmigrati〇n)入受影響區 域中。活化嗜中性白血球之累積又導致產生反應性氧代謝 物，其損壞所涉及組織或器官之組分。此「再灌注損傷」 現象通常與諸如血管性中風（包括全腦缺血及局灶性^ 血）、出血性休克、心肌缺血或梗塞、器官移植及腦血管 痙攣之病狀相關。A了說明，再灌注損傷發生在心臟繞道 程序結束時或發生在當心臟一旦接受血液受阻即開始再灌 注時之心跳驟停期間。預期抑制Ρΐ3κδ活性將導致此等情 形中之再灌注損傷之量降低。 在某些實施例中，本發明提供治療實體腫瘤之方法。在 特定實施例中，癌症為乳癌、肺癌、結腸癌或前列腺癌。 在某些實施例中’本發明提供治療與由ρΙ3Κβ介導之細胞 信號傳導活性異常或不合需要相關之實體腫瘤的方法' : 某些實施例中’實體腫瘤係選自由以下組成之群：姨臟 癌；膀胱癌，結腸直腸癌；乳癌，包括轉移性乳癌.前列 腺癌’包括雄激素依賴性及雄激素非依賴性前列腺癌，腎 癌’包括例如轉移性腎細胞癌；肝細胞癌；肺癌，包括例 如非小細胞肺癌（NSCLC)、細支氣管肺泡癌（br〇nchi〇l⑽ carcinoma ’ BAC)及肺腺癌；卵巢癌，包括例如進行性上 163053.doc -38- 201242598 皮癌或原發性腹膜癌；子宮頸癌；胃癌；食道癌；頭頸 癌’包括例如頭頸部鱗狀細胞癌；黑素瘤（melanoma);神 經内分泌癌’包括轉移性神經内分泌腫瘤；腦腫瘤，包括 例如神經膠質瘤（glioma)、多形性少枝膠質瘤（anaplastic oligodendroglioma)、成人多形性膠質母細胞瘤（adult glioblastoma multiforme)及成人多形性星形細胞瘤（aduh anaplastic astrocytoma);骨癌；及軟組織肉瘤。 已發現遺傳清除ρΙΙΟδ會產生侷限於免疫系統之輕度表 型。一般性觀測結果包括生物體有繁殖力而無嚴重解剖學 或行為異常。組織學檢查揭示主要器官似乎正常。Β細胞 及Τ細胞中之第I類ΡΙ3Κ總活性降低30-50%。此外，未觀測 到易感染性增強。此外’對造血系統之影響包括周邊血球 β十數正常、在脾及淋巴結中出現淋巴樣發育不全（lymphoid hypoplasia)且缺乏生發中心（germinal center)、骨髓中之 B220+IgM+B細胞祖細胞之數目降低、血清免疫球蛋白之 含量降低、及胸腺中之T細胞發育正常。 遺傳清除ρΙΙΟδ會影響對腫瘤形成具重要作用之骨髓及β 細胞信號傳導。特定言之，影響骨髓細胞之酪胺酸激酶信 號傳導、發育、增殖及存活。Β細胞功能受影響最大且包 括增殖、分化、細胞凋亡及對Β細胞存活因子（BCR、 CD40、IL-4、趨化因子（chemokine))之反應。因此，本發 明包括治療此等骨髓及B細胞功能之一或多者異常或不合 需要之疾病狀態的方法。 在分子層面上把向ρΙΙΟα、ρΙΙΟβ、ρΙΙΟδ、ρ11〇γ之全 163053.doc -39- 201242598 PI3K抑制劑（hvPS34、mTOR、DNA-ΡΚ及其他抑制劑）又會 靶向所有組織。潛在臨床適應症包括癌症，但臨床不利事 件包括癌症患者之咼騰島素血症（hyperinsuljnemia)。乾向 介導發炎之細胞及癌細胞之pl1〇§選擇性抑制劑（其中潛在 臨床適應症包括癌症、類風濕性關節炎、哮喘、過敏及 COPD)的優勢在於治療具有良好耐受性且避免如高胰島素 血症之副作用。因此，在一個態樣中，本發明提供一種治 療患有胰島素抗性或第2型糖尿病、癌症、類風濕性關節 炎、哮喘、過敏、COPD或可用本發明化合物治療之其他 病狀之患者的方法。對於需要此治療之患有過度胰岛素病 狀或傾向之患者，本發明化合物特別優於全ΡΙ3Κ抑制劑。 在某些實施例中，式I或式Γ，化合物較佳，原因在於其提供 治療血液惡性腫瘤之治療益處而對胰島素信號傳導無不利 影響》 在個實施例中’本發明係關於抑制ρΐ3Κ ρΙΙΟδ之方 法。在另一實施例中，本發明係關於抑制ρΐ3Κ ρΐ ι〇β或 ρΙΙΟγ之方法。 在某些實施例中’本文所述之方法具有很小或不具有脫 把活性（off target aetivity)e特定言之方法中使用之式工 化σ物針對超過3〇〇種蛋白激酶（包括實例Μ之表3中所總 結之蛋白激酶）顯示的活性很小。在某些實施例中，相較 於包含投與全ΡΙ3Κ抑制劑之方法，本文所述之方法在癌症 患者中不具有或具有最小高胰島素血症效應。在某些實施 例中，本文所述之方法適用於乾向介導歲填酸化之細 163053.doc 201242598 胞，因為式A化合物抑制Akt磷酸化。因此，可選擇適合用 本發明化合物治療之患者，在一個實施例中，係選擇展現 與造血系統癌症（諸如淋巴瘤、白血病或多發性骨髓瘤）相 關之Akt磷酸化升高的患者。 本文方法避免脫靶傾向且特徵在於在受體革蘭氏（gram) 篩檢中獲得陰性結果，不具有hERG抑制且無顯著p45〇抑 制。 本發明方法之另一優勢為心血管、呼吸道或中樞神經系 統不存在不良反應’如安全性藥理學研究所證明。此外， 於大鼠及狗中進行之28天毒性研究證明具有高治療指數， 例如NOAEL(未觀測到不良反應的量）>> 1〇 μΜβ此為暴露 組與其適當對照組之間在毒理學效應之頻率或嚴重性方面 不存在統計顯著或生物學顯著升高時之化學品最高實驗性 劑量。不良反應定義為導致功能性損害及/或病理性病 變、從而會影響整個生物體表現或降低生物體對另一攻擊 (challenge)之反應能力的任何效應。 在某些實施例中，本文所述之方法顯著減輕淋巴腺病 變，從而迫使淋巴細胞進入循環中。此淋巴細胞再分佈具 有將惡性CLL細胞置入淋巴結外部受保護較小之環境中之 潛在益處。在某些實施例中’化學療法及/或免疫療法與 如式A化合物之藥劑共投與會增強殺死(：][^細胞，同時減 輕淋巴細胞增多症。 ' 在另-實施例t ’本發明方法在標準成套測試中不具 遺傳毒性。 163053.doc 41 201242598 本發明之另一優勢在於化合物對一或兩種PI3K同功異型 物之選擇性使得安全性概況改良超過具有全PI3K抑制作用 之化合物。在另一優勢中，化合物I具有良好目標覆蓋範 圍且對葡萄糖或胰島素含量無不利影響之有利藥物動力學 概況，且在高於常用治療劑量之劑量下為正常健康志願者 所良好耐受。本發明之另一優勢包括能夠治療多種血液惡 性腫瘤，如本文實例所證明。 在某些實施例中，本發明方法係關於治療癌症。在某些 實施例中，癌症為血液惡性腫瘤。在特定實施例中，企液 惡性腫瘤係選自由以下組成之群：急性淋巴細胞性白血病 (ALL·)、急性骨髓白血病（AML·)、慢性淋巴細胞性白血病 (CLL·)、多發性骨髓瘤（MM)及非霍奇金淋巴瘤（NHL·) 〇在 某些實施例中，非霍奇金淋巴瘤係選自由以下組成之群： 彌漫性大B細胞淋巴瘤（LDBCL)、套細胞淋巴瘤（MCL)、 瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症（WM)及淋巴漿細胞淋巴 瘤。 PI3K牽涉許多血液惡性腫瘤且已確立關於用化合物I進 行治療之臨床前概念驗證（proof of concept)。下表概述特 定血液惡性腫瘤及作用於原發性患者細胞或疾病細胞株之 方法。 適應症 式A化合物之作用 原發性患者細胞 慢性淋巴細胞性白血病(CLL) 誘導細胞瑪亡 阻斷存活因子 163053.doc -42- 201242598 原發性患者細胞 阻斷PI3K信號傳導 抑制增殖 細胞株 阻斷PI3K信號傳導 誘導細胞凋亡 細胞株 阻斷PI3K信號傳導 誘導細胞凋亡 原發性患者細胞 24/24樣品中過度表現之Ρ11〇δ 誘導細胞调亡 急性骨髓性白血病(AML) 急性淋巴細胞性白血病(ALL)
非霍奇金氏淋巴瘤(NHL) (MCL DLBCL、FL) 多發性骨髓瘤(MM) 本文提供之資料證明本發明化合物適用於治療淋巴瘤及 白血病。淋巴瘤及白血病通常選擇性表現P110之δ同功異 型物，例如圖15證明ρ 11 〇δ在大多數淋巴瘤細胞株中佔優 勢，而通常未觀測到ρ 11 〇α。此外，圖16 Α中呈現之資料顯 示6種不同白血病細胞株之細胞培養物對化合物1敏感，且 受5-10微莫耳濃度之此化合物強烈影響。就降低若干細胞 株中之Akt(Ser473)產生而言，圖8及9支持化合物I。 CLL例如主要產生ριι〇δ及在較小程度上產生Ρ11〇γ以達 成信號傳導目的，因此預期抑制ρ110δ&/或ρ11〇γ之化合物 會展現針對此等細胞之選擇性細胞毒性。實例3顯示化合 物I對CLL細胞（包括取自不良預後患者之細胞（圖丨9)及顯 示對其他CLL治療劑具有抗性之患者之細胞（圖20))具有劑 量依賴性細胞毒性（圖3)。此外，實例13及圖13證明在28天 週期期間以50 mg BID之速率向者投與化合物1提供 顯著治療作用。觀測到淋巴細胞中之ALC濃度百分比減 小。因此，在一個態樣中，本發明提供使用式A化合物治 163053.doc -43- 201242598 療患有抗藥性CLL之CLL患者之方法。另一方面，實例丄7 表明主要依賴ρΙΙΟα達成信號傳導之纖維母細胞細胞株對 化合物I不敏感°因此’在一個態樣中，患者選擇可包括 排除患有主要依賴ρΐ 10α達成信號傳導之癌症之患者。 式Α化合物亦適用於治療淋巴瘤’包括β細胞淋巴瘤與τ 細胞淋巴瘤兩者。圖4中之資料證明6種不同ALL細胞株對 化合物I敏感，此導致所有6種細胞株之細胞存活率顯著降 低。圖12及實例12證明用50 mg化合物I每天兩次（BID)持 續2 8天治療之套細胞淋巴瘤患者的腫瘤負荷平均減小 44%。此外’圖14證明MCL患者在投與50 mg劑量之後在 2 8天週期結束時的血漿化合物I含量類似於在正常健康志 願者（NHV)中所觀測之血漿化合物I含量；因此，化合物在 治療週期期間不過度累積，患者在治療週期期間亦不因代 謝增強而變得具有耐受性。 此外’式A或式I化合物適用於治療組成性表現Akt鱗酸 化活性之造血系統癌症。實例8及圖8及9列出顯示組成性 Akt罐酸化之癌症細胞株，包括B細胞淋巴瘤、τ細胞淋巴 瘤、ALL、惡性組織細胞增多症（malignant histiocytosis)、 DLBCL及AML »使細胞暴露於化合物I可減少Akt磷酸化。 亦參見實例19，其顯示化合物I抑制13/13細胞株中的組成 性Akt磷酸化。 在某些實施例中，癌症為實體腫瘤。在特定實施例中， 癌症為乳癌、卵巢癌、肺癌、結腸癌或前列腺癌。圖6例 如顯示化合物I使兩種乳癌細胞株之細胞增殖降低，且圖 163053.doc -44· 201242598 10說明對三種不同乳癌細胞株之細胞毒性。類似地，圖7 證明化合物I對兩種卵巢癌細胞株具有細胞毒性。 對於治療實體腫瘤，有利的是使用表現針對pU叩之良 好活性（例如IC50小於約i μΜ且較佳小於約25〇 nM_參見 實例15)之式A化合物，原因在於實體腫瘤通常利用此同功 酶而非或多於Ρ11〇δ。因此，IC50小於約25〇 nM之式A化合 物較佳用於治療實體腫瘤；化合物卜〗”、"適於此用 途，如本文所證明。 在一些實施例t，供治療之個體在本文中描述為已診斷 有本文所述之可藉由使用式A化合物加以治療之至少一種 病狀的個體。在一些實施例中，個體已診斷有本文所列之 癌症’且已證明用至少一種習知化學治療劑治療難治癒。 舉例而言，對治療（諸如蛋白酶體抑制劑、自體性幹細胞 移植、CHOP方案、利妥昔單抗、氣達拉濱、阿萊珠單 抗、習知抗癌核苷類似物及烷基化劑）無反應的患者通常 對本文所述之治療方法有反應。因此，在—個實施例中， 本發明之療法係針對已接受一種或一種以上此療法之患 者。 在某些實施例中’本發明方法係針對3細胞或B淋巴細 胞相關疾病。B細胞在自體免疫疾'病之發病機制中起作 用。 式A化合物（特定言之式I、I"、Π及Π”）適於治療患有本 文所述之病狀’尤其人類血液癌症之多種個體。在一些實 施例中，經選擇供治療血液惡性腫瘤之個體為在其他療法 163053.doc -45- 201242598 之後復發或為其他療法所難治癒的個體。在一些實施例 中，選擇個體以治療對其他癌症藥物具有抗性之血液惡性 腫瘤。在一些實施例中，選擇個體以治療展現較高ρΐ 1〇§ 活性程度之血液惡性腫瘤。在一些實施例中，選擇個體以 治療展現相對較低Ρ11〇α活性程度之血液惡性腫瘤。在一 些實施例中，選擇個體以治療組成性表現Akt磷酸化活性 之血液惡性腫瘤。 在一個實施例中，本文所述之方法包括將本文所述之式 A化合物與用於治療癌症之療法組合投與個體。如本文所 用之「療法」或「治療」為藉由用於治療癌症之不包括使 用式A化合物之任何熟知習知或實驗性治療形式治療癌 症。在某些實施例中，式A化合物與用於治療癌症或自體 免疫疾病之習知或實驗性療法之組合提供優於不使用該組 合~療所得之結果的有益及/或所需治療結果。在某些實 施例中，用於治療癌症之療法為一般技術者所熟知且描述 於文獻中〃療法包括（但不限於）化學療法、化學療法之組 合、生物療法、免疫療法、放射免疫療法及使用單株抗體 及疫苗。 在一些上述實施例中，組合方法提供式Α化合物與療法 同時投與或在療法之投藥時期期間投與。在一些上述實施 例中，式Α化合物係與其他化學治療性療法同時投與。在 某些實施例中，組合方法規定式A化合物在投與療法之前 或’之後投與。 在—些上述實施例巾，個體係為至少一種標準或實驗性 163053.doc -46- 201242598 化學療法所難治癒。在一些上述實施例中，個體係為至少 兩種標準或實驗性化學療法所難治癒。在—些上述實施例 中，個體係為至少三種標準或實驗性化學療法所難治癒。 在一些上述實施例中，個體係為至少四種標準或實驗性化 學療法所難治癒。 在一些上述實施例中M固體係為至少一種選自由以下組 成之群之標準或實驗性化學療法所難、治癒：氟達拉濱、利 妥昔單抗、絲化劑、阿萊珠單抗及以上所狀化學療法 a-q 〇 在-些上述實施例中’個體係為至少兩種選自由以下組 成之群之標準或實驗性化學療㈣m·氟達拉濱、利 妥昔單抗、烧基化劑、阿萊珠單抗及以上所列之化學療法 狂-q 〇 在-些上述實施例中，個體係為至少三種選自由以下組 成之群之標準或實純化學療法所難㈣：氣達拉濱、利 女昔單抗、院基化劑、阿萊珠單抗及以上所列之化學療法 a-q 〇 在-些上述實施例中’個體係為至少四種選自由以下組 成之狀標準或實驗性化學療法所難治n達拉濱、利
妥昔單抗、烧基化劑、阿筮nD J丨7來珠早抗及以上所列之化學療法 a-q 〇 關於組合投藥 物與所選療法之 療之個體病狀性 之確切詳情可以實驗確定。投與式A化合 ;丨員序及時序之改進應適於個別個體、所治 質及一般而言主治醫師之判斷。 163053.doc -47· 201242598 以下描述實驗性或標準療法之非限制性實例。此外，某 些淋巴瘤之治療評述於以下中·· Cheson，B.D., Leonard, J.P., 「Monoclonal Antibody Therapy for B-Cell Non-Hodgkin's Lymphoma 」 The New England Journal of Me山2008，359(6)，第 613-626 頁；及 Wierda，W.G.， 「Current and Investigational Therapies for Patients with CLL」 Hematology 2006，第 285-294 頁。Morton, L.M.，等 人 「Lymphoma Incidence Patterns by WHO Subtype in the United States，1992-2001」2006，107(1)，第 265-276頁中分析美國淋巴瘤發病樣式概況。 治療非霍奇金氏淋巴瘤，尤其B細胞起源之非霍奇金氏 淋巴瘤包括（但不限於）使用單株抗體、標準化學療法（例如 CHOP、CVP、FCM、MCP及其類似方法）、放射免疫療法 及其組合，尤其抗體療法與化學療法之整合。 用於非霍奇金氏淋巴瘤/B細胞癌症之未結合單株抗體之 非限制性實例包括利妥昔單抗、阿萊珠單抗、人類或人類 化抗CD20抗體、魯昔單抗、抗TRAIL、貝伐單抗 (bevacizumab)、加利昔單抗（galiximab)、伊拉妥珠單抗、 SGN-40及抗CD74。用於治療非霍奇金氏淋巴瘤/B細胞癌 症之實驗性抗體藥劑之非限制性實例包括奥法木單抗、 ha20、PR0131921、阿萊珠單抗、加利昔單抗、SGN-40、 CHIR-12.12、伊拉妥珠單抗、魯昔單抗、阿泊珠單抗、米 拉珠單抗（milatuzumab)及貝伐單抗。任何單株抗體皆可與 利妥昔單抗、氟達拉濱或化學治療劑/療法組合。 163053.doc • 48 - 201242598 用於非霍奇金氏淋巴瘤/B細胞癌症之標準化學療法之非 限制性實例包括CHOP(環磷醯胺、小紅莓、長春新鹼、潑 尼松）、FCM(氟達拉濱、環磷醯胺、米托蒽醌）、CVP(環 磷醯胺、長春新鹼及潑尼松）、MCP(米托蒽醌、苯丁酸氮 芬及潑尼龍）、R-CHOP(利妥昔單抗+CHOP)、R-FCM(利妥 昔單抗+FCM)、R-CVP(利妥昔單抗+CVP)及R-MCP(R-MCP)。 用於非霍奇金氏淋巴瘤/B細胞癌症之放射免疫療法之非 限制性實例包括釔-90標記之替坦異貝莫單抗及碘-131標記 之托西莫單抗。此等治療劑核准用於患有復發或難治癒濾 泡性淋巴瘤或低度惡性淋巴瘤之個體中。 用於套細胞淋巴瘤之治療性療法包括組合化學療法，諸 如CHOP(環磷醯胺、小紅莓、長春新鹼、潑尼松）、多分 次CVAD(多分次（hyperfractionated)環礎醯胺、長春新驗、 小紅莓、地塞米松、曱胺喋呤、阿糖胞苷）及FCM(氟達拉 濱、環磷醯胺、米托蒽醌）。此外，此等療法可補充有單 株抗體利妥昔單抗（美羅華（Rituxan))以形成組合療法R-CHOP、多分次CVAD-R及R-FCM。其他方法包括將任何上 述療法與幹細胞移植或ICE(異環填醯胺（iphosphamide)、 卡鉑及依託泊苷）療法組合。 治療套細胞淋巴瘤之另一方法包括免疫療法，諸如使用 單株抗體，如利妥昔單抗（美羅華）。利妥昔單抗亦有效對 抗其他惰性B細胞癌症，包括邊緣區淋巴瘤、WM、CLL及 小淋巴細胞性淋巴瘤。利妥昔單抗與化學治療劑之組合尤 163053.doc -49- 201242598 其有效。一種改進方法為放射免疫療法，其中單株抗體與 放射性同位素粒子組合，諸如碘-131托西莫單抗（Bexxar®) 及釔-90替坦異貝莫單抗（Zevalin®)。在另一實例中， Bexxar®與CHOP依序用於治療中。另一免疫療法實例包括 使用基於個別患者腫瘤之遺傳組成的癌症疫苗。一淋巴瘤 疫苗實例為 GTOP-99(MyVax®)。 治療套細胞淋巴瘤之另一方法包括自體性幹細胞移植聯 合高劑量化學療法。 治療套細胞淋巴瘤之另一方法包括投與蛋白酶體抑制 劑，諸如Velcade®(硼替佐米或PS-341);或抗血管生成藥 劑，諸如沙立度胺，尤其與美羅華組合。另一治療方法為 投與引起Bcl-2蛋白質降解且增加癌細胞對化學療法之敏 感性之藥物，諸如奥利默森（根納三思（Genasense))與其他 化學治療劑組合。另一治療方法包括投與可引起細胞生長 受抑制及甚至細胞死亡之mTOR抑制劑；一非限制性實例 為天西羅莫司（CCI-779)、及天西羅莫司與Rituxan®、 Velcade®或其他化學治療劑組合。 用於MCL之其他新近療法已經揭示（iWziwre /Reviews; Jares，P. 20〇7)。非限制性實例包括夫拉平度（Flavopiridol)、 PD0332991、R-羅斯維汀（R-roscovitine)(塞里昔布 (Selicilib)、CYC202)、苯乙烯颯、奥巴克拉（Obatoclax) (GX15-070)、TRAIL、抗 TRAIL DR4及 DR5抗體、天西羅 莫司（CC1-779)、依維莫司（RAD001)、BMS-345541、薑黃 素（Curcumin)、伏立諸他（SAHA)、沙立度胺、來那度胺 163053.doc -50- 201242598 (vlimid 、CC-5013)及格爾德黴素（Geldanamycin)(17-AAG) 〇 用於治療瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症之其他治療劑之 非限制性實例包括派瑞福松、硼替佐米（Velcade®)、利妥 昔單抗、西地那非檸檬酸鹽（Viagra®)、CC-5103、沙立度 胺伊拉妥珠單抗（hLL2-抗C：D22人類化抗體）、辛伐他 /T 心絮妥林、卡普司- iHOampath-lH)、地塞米松、DT PACE奥利默森、抗新普拉通A10、抗新普拉通AS2-1、 阿萊珠單抗、β阿立辛、環磷醯胺、小紅莓鹽酸鹽、潑尼 松、長春新鹼硫酸鹽、氟達拉濱、非格司亭、美法侖、重 組干擾素α、卡莫司汀、順鉑、環磷醯胺、阿糖胞苷、依 託泊苷、美法命、海兔毒素1〇、銦Ιη “丨單株抗體ΜΝ_ 14、釔Υ 90人類化伊拉妥珠單抗、抗胸腺細胞球蛋白、白 消安 '環孢素、f胺喋呤、黴酚酸嗎啉乙酯、治療性同種 異體淋巴細胞、釔γ 90替坦異貝莫單抗、西羅莫司、他克 莫司、卡鉑、塞替派、太平洋紫杉醇、阿地介白素、重組 干擾素α、歐洲紫杉醇、異環磷醯胺、美司鈉、重組介白 素-12、重組介白素_u、Bci_2家族蛋白質抑制劑αβτ_ 263、地尼介白素融合毒素、坦螺旋黴素、依維莫司、聚 乙二醇化非格司亭、伏立諾他、阿伏西地、重組flt3配位 體、重組人類血小板生成素、淋巴激素活化殺手細胞、胺 填/丁一水5物、胺基喜樹鹼、伊立替康鹽酸鹽、卡泊芬淨 乙酸鹽、克羅拉濱、阿法依伯汀、奈拉濱、喷司他汀、沙 格司T、長春瑞賓酒石酸氫鹽、|丁_1類似物肽疫苗、界以 163053.doc -51 · 201242598 126-134肽疫苗、維甲、伊沙匹隆、㈣力# 株抗體CD19、單枝始聃早 早株抗體CD20、ω-3脂肪酸、米托蒽醌鹽 鹽、奥曲狀乙酸鹽、托西莫單抗及蛾1-131托西莫單抗、莫 mi、二氧化二坤、替皮法尼、自體性人類腫瘤源性 HSPPC_96、維妥珠單抗、苔蘚蟲素1及聚乙二醇化脂質體 小紅莓鹽酸鹽及其任何組合。 朴用於治療彌漫性大b細胞淋巴瘤（DLBCL)之其他治療劑 藥物療法之非限制性實例（別〇〇i/ 2〇〇5 Abrams〇n，j )包括環 磷醯胺、小紅莓、長春新鹼、潑尼松、抗CD2〇單株抗 體、依託泊苷、博來黴素，針對瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白 血症所列之許多藥劑及其任何組合，諸如ICE及RICE。 用於治療瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症之治療程序之非 限制性實例包括周邊血液幹細胞移植、自體性造血幹細胞 移植、自體性骨髓移植、抗體療法、生物療法、酶抑制劑 療法 '全身照射、幹細胞輸注、在幹細胞支持下清除骨 髓、活體外處理之周邊血液幹細胞移植、臍帶血液移植、 免疫酶技術、藥理學研究、低LET鈷-60γ射線療法、博來 黴素、習知手術、放射療法及非骨髓清除性同種異體造血 幹細胞移植。 用於治療慢性淋巴細胞性白血病之其他治療劑之非限制 性實例（Spectrum, 2006，Fernandes, D_)包括苯丁酸氮芬（瘤 克寧（Leukeran))、環磷醯胺（赛洛生（Cyl〇xan)、安道生 (Endoxan)、安道生那（Endoxana)、赛可斯汀（Cyclostin))、 氟達拉濱（福達華（Fludara))、喷司他汀（尼喷提（Nipent))、 163053.doc -52· 201242598 克拉屈濱（紐斯塔寧(Leustarin))、小紅莓（AdHamycin®、阿 黴素（Adriblastine))、長春新鹼（長春新鹼（〇nc〇vin))、潑尼 私 潑尼龍、阿萊珠單抗（卡普司、瑪布卡普司 (MabCampath))、針對瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症所列 之許多藥劑及組合化學療法及化學免疫療法，包括常見組 合療法：cvp(環磷醯胺、長春新鹼、潑尼松）；R_cvp(利 妥昔單抗-CVP); ICE(異環磷醯胺、卡鉑、依託泊苷）；R_ ICE(利妥昔單抗·ICE); FCR(氟達拉濱、環磷醯胺、利妥 昔單抗）；及FR(氟達拉濱、利妥昔單抗）。 在某些實施例中，方法包含除化合物之外亦向該患 者投與治療有效量之至少一種經選擇可治療該患者之該癌 症的治療劑及/或治療程序。在某些實施例中，方法包含 除化合物I或II之外亦向該患者投與治療有效量之選自由以 下組成之群之治療劑的組合：a)苯達莫司汀；b)利妥昔單 抗；c)苯達莫司汀及利妥昔單抗；句奥法木單抗；及勾來 那度胺。 本發明化合物可使用通常瞭解之此項技術中熟知之調配 技術加以調配以向動物個體投與。適於特定投藥模式及式 Α化合物之調配物可見於Remingt〇n,s pharmaceutica|
Sciences,最新版，Mack Publishing Company, Easton，PA 中。 本發明化合物可製備成前藥形式，亦即在投與個體之後 釋放本發明化合物之經保護形式。通常，保護基在體液 中，諸如在iL流中水解，從而釋放活性化合物，或保護基 163053.doc •53· 201242598 在活體内經氧化或還原以釋放活性化合物。對前藥之論述 見於 Smith and Wmiams Introduction to the Principles of Drug Design，Smith，H.J.; Wright，第 2版，London (1988) 中。 本發明化合物可以純粹化學品形式投與，但通常較佳的 疋以醫樂組合物或調配物形式投與化合物。因此，本發明 亦提供包含式A化合物及生物相容性醫藥載劑、佐劑或媒 劑之醫藥組合物。組合物可包括作為唯一活性部分之式A 化合物與其他藥劑（諸如寡核苷酸或聚核苷酸、寡肽或多 肽、藥物或激素）之組合，與賦形劑或其他醫藥學上可接 受之載劑混合》就載劑及其他成分可與調配物之其他成分 相容且對其接受者無害而言，其可視為醫藥學上可接受。 醫藥組合物經調配可含有適合醫藥學上可接受之載劑， 且可視情況包含#助於將活性化合物加工成可在醫藥學上 使用之製劑之賦形劑及助劑。投藥形式將通常決定載劑之 性質。舉例而言，用於非經腸投藥之調配物可包含呈水溶 性形式之活性化合物的水溶液 '適於非經腸投藥之载劑可 選自生理鹽水、緩衝生理鹽水、右旋糖、水及其他生理學 上相容溶液《用於非經腸投藥之較佳載劑為生理學上相容 緩衝液，諸如漢克氏溶液（Hank’s solution)、林格氏溶液 (Ringer's solution)或生理學上緩衝生理鹽水。對於組織或 細胞投藥，調配物中使用適於滲透特定障壁之滲透劑。此 等滲透劑通常在此項技術中為已知的。對於包含蛋白質之 製劑，調配物可包括穩定物質，肖如多元醇(例如蔑糖)及/ 163053.doc •54- 201242598 或界面活性劑（例如非離子界面活性劑）及其類似物。 或者’供非經腸使用之調配物可包含活性化合物之分散 液或製備成適當油狀注射懸浮液之懸浮液。適合親脂性溶 劑或媒劑包括脂肪油（諸如芝麻油）及合成脂肪酸酯（諸如油 酸乙酯或三酸甘油酯）或脂質體。水性注射懸浮液可含有 增加懸浮液黏度之物質’諸如羧基—甲基纖維素鈉、山梨 糖醇或葡聚糖。懸浮液視情況亦可含有適合穩定劑或增加 化合物之溶解性以允許製備高濃度溶液之試劑。提供活性 劑之pH值敏感性溶解及/或持續釋放之水性聚合物亦可用 作包衣或基質結構，例如曱基丙酸烯聚合物，諸如可自
Rohm America Inc.(Piscataway，N.J.)獲得之 Eudragit® 系 列。亦可使用乳液，例如水包油型及油包水型分散液，視 情況由乳化劑或分散劑（表面活性物質；界面活性劑）穩 定。懸浮液可含有懸浮劑，諸如乙氧基化異硬脂基醇、聚 氧乙烯山梨糖醇及脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧 化鋁、膨润土（bentonite)、瓊脂-瓊脂、黃蓍膠（gum tragacanth)及其混合物。 含有式A活性化合物之脂質體亦可用於非經腸投藥。脂 質體通常源於磷脂或其他脂質物質。呈脂質體形式之組合 物亦可含有其他成分，諸如穩定劑、防腐劑、賦形劑及其 類似物。較佳脂質包括天然與合成磷脂及磷脂醯膽鹼（卵 磷脂（lecithin))。形成脂質體之方法在此項技術中為已知 的。參見例如 Prescott (編），Methods in Cell Biology,第 XIV卷’第 33 頁，Academic Press，New York (1976)。 163053.doc •55- 201242598 包含適於口服之劑量之式A化合物的醫藥組合物可使用 此項技術中熟知之醫藥學上可接受之載劑加以調配。針對 口服調配之製劑可呈鍵劑、丸劑、膠囊、扁囊劑、糖衣藥 丸、口含錠、液體、凝膠、糖漿、漿液、酏劑、懸浮液或 散劑形式。為了說明，供口服使用之醫藥製劑可藉由以下 方式獲得：合併活性化合物與固體賦形劑，視情況研磨所 得混合物’及必要時在添加適合助劑之後加工顆粒混合物 以獲得銳劑或糖衣藥丸核心。口服調配物可採用類似於針 對非經腸使用所述類型之液體載劑，例如緩衝水溶液、懸 浮液及其類似物。 較佳口服調配物包括錠劑、糖衣藥丸及明膠膠囊。此等 製劑可含有一或多種賦形劑，其包括（不限於）： a) 稀釋劑，諸如糖，包括乳糖、右旋糖、蔗糖 '甘露 糖醇或山梨糖醇； b) 黏合劑，諸如矽酸鎂鋁、來自玉米、小麥、稻馬 鈴薯等之澱粉； e) 纖維素物質’諸如甲基纖維素、㈣基甲基纖維素 及缓曱基纖維素鈉、聚乙稀。比㈣酮、膠（諸如阿拉伯膠 及黃蓍膠)及蛋白質(諸如明膠及膠原蛋白(collagen)); d)崩解劑或增溶劑’諸如交聚乙烯吡咯啶鲖、澱粉、 瓊脂、㈣酸或其鹽（諸如海驗鈉）、或起純組合物； )潤/月劑’諸如二氧化石夕、滑石、硬脂酸或其鎮鹽或 鈣鹽、及聚乙二醇； f) 調味劑及甜味劑； 163053.doc -56- 201242598 g) 著色劑或顏料，例如以鑑別產物或表徵活性化合物 之量（劑量）；及 h) 其他成分，諸如防腐劑、穩定劑、膨脹劑、乳化 劑、溶解促進劑、調控滲透壓之鹽、及緩衝劑。 在一些較佳口服調配物中，醫藥組合物包含至少一種選 自以上群組（a)之物質、或至少一種選自以上群組（b)之物 質、或至少一種選自以上群組（c)之物質、或至少一種選自 以上群組（d)之物質、或至少一種選自以上群組（e)之物 質。較佳地，組合物包含選自以上群組（a)_(e)之兩個群組 之每一者的至少一種物質。 明膠膠囊包括由明膠製成之配合插入（push_fit)膠囊以及 由明膠及諸如甘油或山梨糖醇之包衣製成之軟質密封膠 囊。配合插入膠囊可含有活性成分與填充劑、黏合劑、潤 滑劑及/或穩定劑等混合。在軟質膠囊中，活性化合物可 在有或無穩定劑之情況下溶解或懸浮於適合流體，諸如脂 肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中。 糖衣藥丸可具有適合包衣，諸如濃縮糖溶液，該等包衣 亦可含有阿拉伯膠 '滑石、聚乙稀°比°各唆酿J、卡波莫凝膠 (earbopol gel)、聚乙二醇及/或二氧化鈦、塗料溶液及適合 有機溶劑或溶劑混合物。 醫藥組合物可以活性化合物之鹽形式提供。與相應游離 酸或游離鹼形式相比，鹽更易溶於水性或其他質子性溶劑 中。醫藥學上可接受之鹽在此項技術中為熟知的。含有酸 性部分之化合物可與適合陽離子形成醫藥學上可接受之 163053.doc -57- 201242598 鹽。適合醫藥學上可接受之陽離子包括例如鹼金屬（例如 鈉或鉀）及鹼土（例如鈣或鎂）陽離子。 含有驗性部分之結構式（Α)化合物可與適合酸形成醫藥 學上可接受之酸加成鹽。舉例而言，Berge等人在J戶/^⑽ 66:1 (1977)中詳細描述醫藥學上可接受之鹽。可在本 發明化合物之最終分離及純化期間就地製備或藉由使游離 鹼官能基與適合酸反應單獨製備鹽。 代表性酸加成鹽包括（但不限於）乙酸鹽、己二酸鹽、海 藻酸鹽、彳寧檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯績酸鹽、 硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽 (camphorolsulfonate)、二葡糖酸鹽（digluc〇nate)、甘油磷 酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸 鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽（異硫磺酸 鹽）、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽或硫酸鹽、菸 鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、 過氧硫酸鹽、3 -本基丙酸鹽、苦味酸鹽（picrate)、特戊酸 鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽或 峨酸氫鹽 '麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷 酸鹽。可用於形成醫藥學上可接受之酸加成鹽之酸實例包 括（不限於）無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸及填酸；及 有機酸，諸如草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。 驗性含氣基團可用諸如以下試劑加以四級銨化：低碳烷 基鹵化物，諸如甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物 及峨化物；硫酸二院酯，如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯 163053.doc • 58 · 201242598 及一戊酯；長鏈烧基鹵化物，諸如癸臭、__ 、土 丁 一院基、十四 烧基及十人烧基氣化物、漠化物及魏物；芳基统基齒化 物，諸如苯甲基及苯乙基漠化物；或其他試劑。藉此獲得 溶解性或分散性改進之產物。 包含本發明化合物於醫藥學上可接受之載劑中調配之植 合物可經製備，置放於適當容器t，並附治療指示病狀之 標籤。因& ’亦涵蓋一種製品，諸如包含本發明化合物之 劑型及含有該化合物使用說明之標蕺的容器。本發明亦涵 蓋套組。舉例而言，套組可包含醫藥組合物之劑型及含有 使用該組合物治療醫學病狀之說明之藥品說明書。在任一 情況下，標籤上指示之病狀可包括治療發炎病症、癌症 等。 投藥方法 包含式A化合物之醫藥組合物可藉由任何習知方法，包 括非經腸及經腸技術向個體投與。非經腸投藥形式包括組 合物藉由除經由胃腸道以外之途徑投與，例如靜脈内、動 脈内、腹膜内、髓内、肌肉内、關節内、鞘内及室内注 射。經腸投藥形式包括例如經口（包括經頰及舌下）及經直 腸投藥。經上皮投藥形式包括例如經黏膜投藥及經皮投 藥。經黏膜投藥包括例如經腸投藥以及經鼻、吸入及深度 肺投藥；經陰道投藥；及經直腸投藥。經皮投藥包括被動 或主動經皮（transdermal)或經皮（transcutaneous)形式，包 括例如貼片及離子導入療法裝置、以及表面施用糊劑、油 膏或軟膏。非經腸投藥亦可使用高壓技術，例如 163053.doc •59· 201242598 powderjecttm達成。 手術技術包括植入儲槽（ 似物，w炎之較佳投藥：:為=其類 關局部或表面傳遞或針對分散病症 傳遞，例如針對再灌注損傷或針對全身性病狀（諸如2 症（sept〗cemla))之靜脈内傳遞。對於其 呼吸道之疾病，例如慢性阻塞性肺病、：：病，包括涉及 丞f生肺病、哮喘及氣腫，投藥 吸人或職職與喷_、氣霧劑、散#丨及其類似 物來達成。 在-些上述實闕巾，式A化合物係在投與化學療法、 放射線療法及/或手術之前'期間或之後投與。所選調配 物及投藥途徑應適於個別個體、所治療個體之病狀性質及 一般而言主治醫師之判斷。 式A化合物之治療指數可藉由修飾或衍生化合物以便靶 向傳遞至表現標記的癌細胞來增強’該標記鑑別細胞為癌 細胞。舉例而言，化合物可連接於識別對癌細胞具有選擇 性或特異性之標記之抗體，以便化合物到達細胞附近以局 部施加其作用，如先前所述（參見例如Pietersz，等人， 加wimoi Λβν，129:57 (1992) ; Trail，等人，>Scze«ce，261:212 (1993);及 R〇wlinson-Busza，等人，Cwrr Ortco/，4:1142 (1992))。此等化合物之腫瘤定向傳遞會增強治療益處’尤 其可使放射治療或化學療法所致之潛在非特異性毒性最小 化。在另一態樣中，式A化合物及放射性同位素或化學治 療劑可結合於同一抗腫瘤抗體° 163053.doc • 60 - 201242598 藥劑本身及藥劑調配物之特徵可景多響所投與藥劑之物理 狀態、穩；t性、活體内釋放速率及活體内清除速率。此藥 物動力學及藥力學資訊可經由臨床前活體外及活體内研究 收集’隨後在臨床試驗期間在人類中進行確認^因此，對 於本發明方法巾使用之任何化合物，治療有效劑量可最初 由生物化學及/或基於細胞之分析加以估計。接著，可用 動物模型調配劑量以達成調節特定pl3K同功異型物或同功 異型物組合之表現或活性的所需循環濃度範圍。隨著人類 研究之進行，將得出關於治療各種疾病及病狀之適當劑量 及持續時間之進一步資訊。 儘管本發明化合物耐受性良好，但對治療劑量之限制之 一實㈣肝功能測試（LFT)升高。LFT涉及對患者之Α清或 血漿進行標準臨床生物化學測試以提供關於患者之肝狀態 之資訊。水準（諸如丙胺酸轉胺酶、天冬胺酸轉胺酶、鹼 性磷酸酯酶、膽紅素（bilirubin)&γ麩胺醯基轉肽酶）超出正 常範圍可顯示可能之肝毒性。可調整治療化合物之劑量以 避免或降低肝功能測試值升高及隨後肝毒性之可能性。舉 例而言，可向個體投與遞增劑量之化合物。在某一劑量 下，個體開始顯現LFT水準升高超出正常範圍，從而顯示 在彼劑畺下可能存在肝毒性。作為反應，劑量可降至使得 LFT水準降至如由治療醫師所判斷之可接受範圍内的水 準’例如在對於所治療個體而言正常之範圍内或在正常水 準之約25%至50%内的水準。因此，肝功能測試可用於滴 定化合物之投藥劑量。 163053.doc -61 - 201242598 此等化合物之毒性及治療功效可藉由標準醫藥程序在細 胞培養物或實驗動物中測定，例如測定LD5〇(使群體之游。 致死之劑量）及ed50(在群體之50%中具有治療有效性之劑 量）。毒性效應與治療效應之間的劑量比率為「治療指 數其通常表示為比率LD50/ED50。展現較大治療指 數，亦即毋性劑量實質上高於有效劑量之化合物較佳。自 此等細胞培養分析及其他動物研究獲得之資料可用於制定 供人類使用之劑量範圍。此等化合物之劑量較佳位於包括 毒性很小或無毒性之edm之循環濃度範圍内。 劑量可受限於治療相關之毒性症狀。除肝功能測試升高 之外，此等症狀亦包括貧血'視力模糊、腹瀉、嘔吐、疲 勞、黏膜炎、周邊水腫、發熱、周邊神經病、肋膜積液 (pleural effusion)、夜汗（night⑽⑽）及端坐呼吸 (orthopnea)或其組合，在某一劑量下，若個體顯現不可耐 受程度之此等症狀，則可降低劑量以消除不良事件且不再 出現不良事件，或降低至如治療醫師所判斷之可接受程 度》 在確定適用⑥患者之化合物劑量時之另一考慮為在血漿 中循環之所要濃度。在-特定實施例中，在自投藥起之Μ 小時期間，血液中之化合物濃度介於4〇 3 〇〇〇 ng/mL2 間。在另一特定實施例中，在自投藥起之12小時期間，血 液中之化合物濃度介於75_2,000 ng/mL之間。在另一特定 實施例中’在自投藥起之！2小時_，血液中之化合物濃 度介於500-2,000 ng/mL之間。在一較佳實施例中，在自投 163053.doc •62· 201242598 藥起之12小時期間，灰液中人 之化0物濃度介於40-3,000 ng/mL之間’其中化合物為 、1 11或II且口服量為約 叫、⑽mg' 15〇 mg或_叫。在_較佳實施例中， 在自投藥起之12小_，企液中之化合物漠度介於40-3,〇〇〇 之間，其中化合物為式I且口服量為約50 mg、 _ mg、150 mg或· mg。在一較佳實施例中在自投藥 起之12小時期fa1 ’血液中之化合物濃度介於40-3,000 ng/mL之間，其中化合物為式„且口服量為約5〇呵、ι〇〇 mg、150 mg或200 mg。在一些上述實施例中，血漿中之 最大濃度係在投藥兩小時内達成。 在某些實施例中，選擇式〗或式„化合物之劑量以在8至 12小時期間產生約10 11]^或1〇 nM以上之平均藥物血漿濃 度，且提供約500 nM或500 nM以上，較佳約1000 nM或 1000 ηΜ以上之峰值血漿濃度。在某些實施例中，選擇 或式II化合物之劑量以在8至12小時期間產生約1〇〇 11]^或 100 nM以上之平均藥物血漿濃度，且提供約5〇〇 nM或5〇〇 nM以上’較佳約1 〇〇〇 nM或1000 nM以上之峰值金衆濃 度。在某些實施例中’選擇式I或式II化合物之劑量以在8 至12小時期間產生約200 nM或200 nM以上之平均藥物血毁 濃度’且提供約500 nM或500 nM以上，較佳約1〇〇〇 nM或 1000 nM以上之峰值血漿濃度。 在某些實施例中，選擇式I或式II化合物之劑量以產生最 低化合物濃度在觀測到治療效應（諸如癌細胞之細胞凋亡） 之範圍内的血漿濃度。在某些實施例中，選擇式I或式II化 163053.doc •63- 201242598 合物之劑量以產生等於或高於血漿中之ρΙ3κδ同功異型物 活化ECso的最低血漿濃度。在某些實施例中，選擇式工或 式II化合物之劑量以在自投與化合物起至少12小時期間產 生高於細胞中ΡΙ3Κδ活化ECw含量且低於ΡΙ3Κγ活化£(：5〇含 量的最低血液濃度。舉例而言，若全血血漿中使卩^^^嗜 鹼性血球活化之ECso值為65 ηΜ且使ΡΙ3Κγ嗜鹼性血球活化 之ECw值為1100 ηΜ，則所選化合物劑量在自投與化合物 起8-12小時期間得到60 ηΜ與11〇〇 ηΜ之間的最低化合物血 漿濃度。類似地，可選擇劑量以使得最低血液濃度高於使 ρπκδ嗜鹼性血球活化之ecm含量且低於使ρΐ3Κα、ρΐ3Κβ 或ΡΙ3Κγ嗜鹼性血球活化之ECw含量。活體内使ρΐ3Κ同功 異型物活化或抑制之ECw值可由一般技術者確定。在替代 性實施例中，最低藥物濃度之上限可超過血漿中之 ΡΙ3Κγ、ΡΙ3Κα或ΡΙ3Κβ同功異型物之EC5〇值且不受其限 制。此外，藥物之血液濃度範圍係處於在治療血液惡性腫 瘤方面具有治療益處，同時使不良副作用減至最小之水 準。 舉例而言’儘管具有δ選擇性，但化合物可對p 1丨〇γ展現 足以適用於臨床的活性，亦即有效作用於依賴ρ11〇γ達成 k號傳導之癌症’原因在於可達成高於有效抑制Ρ丨丨〇^之 劑量之血漿含量’同時相對於其他同功異型物，特定言之 α同功異型物仍然具有選擇性。因此，在一些實施例中， 選擇化合物劑量以產生有效選擇性抑制ρ11〇5及ρ11〇γ之血 液濃度。 163053.doc •64· 201242598 在一些實施例中’化合物之劑量在自投與化合物起8至 12小時期間得到65 nM與11〇〇 nM之間的最低血漿濃度。在 一些上述實施例中’該時段為自投與化合物起至少12小 時。 在一特定實施例中，化合物係以治療有效量投與。 在一特定實施例中，化合物係以20-500毫克/天之劑量投 與。在一特定實施例中，化合物係以50-250毫克/天之劑量 投與8 在一特定實施例中，化合物係以每劑25 mg至150 mg之 劑量投與，且每天投與兩劑（例如以25 ^^至丨5〇 mg劑量每 天給藥兩次）。在一較佳實施例中，個體用5〇 ^^至丨〇〇 mg 式A化合物每天兩次加以治療。在其他較佳實施例中，個 體用15 0 mg式A化合物每天兩次加以治療。 在一特定實施例中，方法包含向該患者投與初始每曰劑 量20-500 mg之化合物且使該劑量遞增直至達成臨床功 效。劑量遞增可使用約25、50、100或150 mg之增量。劑 量可每曰、每隔一天' 每週兩次或每週一次增加。 在一特定實施例中，方法包含藉由投與達成臨床功效之 相同劑量之化合物或以增量遞減該劑量至可維持功效之水 準來持續治療該患者。 在一特定實施例中，方法包含向該患者投與初始每曰劑 量20-500 mg化合物且在至少6天期間增加該劑量至每天總 劑量50-400 mg»劑量視情況可進一步增加至約75〇毫克/ 天》 163053.doc -65- 201242598 在一特定實施例中，化合物係至少每日兩次投與。 在一特定實施例中，化合物係經口、靜脈内或藉由吸入 投與。較佳地’化合物係經口投與。在一些實施例中，其 係以約50 mg BID、約100 mg BID或約150 mg BID之劑量 經口投與β 對於本發明方法，可使用規定劑量時序及順序之任何有 效投藥方案。藥劑之劑量較佳包括包含有效量之藥劑之醫 藥劑量單位。如本文所用，「有效量」係指經由投與一或 多種醫藥劑量單位而足以調節ΡΙ3Κδ表現或活性及/或獲得 個體生理參數之可量測變化的量。「有效量」亦可指為改 善個體之疾病或病症所需之量。 式Α化合物之適合劑量範圍視此等考慮而變化，但一般 而言，化合物係以每公斤體重1〇.〇 μβ·15 mg ; 1.0 mg或0.5 mg-5 mg之範圍投與。因此，對於典型7〇 kg人 類個體’劑量範圍為每劑700 pg-1050 mg ; 70 pgJOO mg ;或35 mg-3 50 mg，且每天可投與兩劑或兩劑以上。相 較於例如靜脈内投藥’當化合物經口或經皮投與時，劑量 可較高。式Α化合物之毒性降低允許治療性投與相對較高 劑量。在一些上述實施例中，經口投與多達75〇毫克/天之 本發明化合物為適合的。在一些上述實施例中，式A化合 物係以劑量50 mg BID投與。在一些上述實施例中，式α化 合物係以劑量100 mg BID投與。在一些上述實施例中，式 A化合物係以劑量150 mg BID投與。在一些上述實施例 中’式A化合物係以劑量200 mg BID投與。在一此上述實 163053.doc •66· 201242598 施例中’式A化合物係以劑量350 mg BID投與。在特定實施 例中’對於治療白血病、淋巴瘤及多發性骨髓瘤，每劑約50_ 350 mg之劑量每天經口投與一次或較佳兩次常為適合的。 在一些上述實施例中，經口投與多達750毫克/天之化合 物I或II"為適合的。在一些上述實施例中，式〗"或式H"化合 物係以劑量5〇 mg BID投與。在一些上述實施例中，式〗，，或 式II”化合物係以劑量1〇〇 mg BID投與。在一些上述實施例 中’式I"或式ΙΓ化合物係以劑量150 mg BID投與。在一些上 it·貫施例中，式I或式II ’化合物係以劑量2〇〇 mg bid投與。 在一些上述實施例中’式〗"或式π，，化合物係以劑量35〇 mg BID投與。在一些上述實施例中，對於治療白血病、淋巴 瘤及多發性骨髓瘤，每劑約50·35〇 m η"化合物每天經口投與一次或較佳兩次常為適合：/戈式 -化合物可以單次快速劑量、如靜脈内或經皮投藥中之歷 經一段時間之劑量、或多次劑量投與。 給藥持續至少一個週期。在-些實施例中，週期為至少 7天。在-些實施例中，週期為約㈣。在—些實施例 中，持續給㈣28天且接著中止至少n些實施例 中，完整週期為持續每日給藥28天。每個週期之後可衡量 對患者臨床反應之評估1床結果可用於決定增加、減 小、中止或維持劑量。 視投藥途徑而定，可根據體重、體表面積或器官 算適合劑量。最終給藥方案將由主治醫師赛於優良醫學實 務’考慮改變藥物作用之各種因素而確定，該等因辛例如 163053.doc •67· 201242598 藥劑之特定活性；疾病狀態之特性及嚴重性；患者之反應 性；患者之年齡、狀況、體重、性別及膳食；及任何感染 之嚴重性。可考慮之其他因素包括投藥時間及頻率、藥物 組合、反應敏感性及對療法之耐受性/反應。熟練從醫者 尤其根據所揭示之劑量資訊及分析以及於人類臨床試驗中 觀測之藥物動力學資料’不經不當實驗便可常規性地進一 步改進適於治療的劑量，包括本文提及之任何調配物。適 當劑量可經由使用用於測定藥劑在體液或其他樣品中之濃 度之已建立分析以及劑量反應資料加以確定。 給藥頻率將視式A化合物之藥物動力學參數及投藥途徑 而定。調整劑量及投藥以提供足夠活性部分含量或維持所 要作用》因此’醫藥組合物可以維持所要最小化合物含量 必需之單次劑量、多次個別劑量、連續輸注、持續釋放健 槽或其組合投與。短效醫藥組合物（亦即半衰期較短）可一 天一次或一天一次以上（例如一天兩次、三次或四次）投與。 長效醫藥組合物可每3至4天、每週、或每兩週一次投與。 諸如皮下、腹膜内或硬膜下泵之泵可較佳用於連續輸注。 對本發明方法順利有反應之個體通常包括醫學及獸醫學 個體，包括人類患者。本發明方法所適用之其他個體為 描、狗、大型動物、禽類（諸如雞）及其類似物。一般而 a，受益於式A化合物之任何個體皆適於投與本發明方 法。在一些上述實施例中，患者具有del(17p)4del(u劬之 細胞遺傳特徵。在一些上述實施例中，患者患有淋巴腺病 。在一些上述實施例中’使用化合物I、、Η或H"會降 163053.doc •68· 201242598 低患者中之淋巴腺病變之尺寸。在一些上述實施例中，使 用化合物I、Γ、II或II"在一個治療週期之後會降低淋巴腺 病變之尺寸。在一些上述實施例中，使用化合物"、工工 或IΓ在一個治療週期之後會使淋巴腺病變之尺寸降低至少 10 /〇。在一些上述貫施例中，使用化合物I、I”、II或II"在 一個治療週期之後會使淋巴腺病變之尺寸降低至少250/(^ 在些上述實施例中，使用化合物I、I "、η或η ”在一個治 療週期之後會使淋巴腺病變之尺寸降低至少30%。在一些 上述貫施例中’使用化合物I、I”、II或II”在一個治療週期 之後會使淋巴腺病變之尺寸降低至少40%〇在一些上述實 施例中，使用化合物JJ”、ΙΓ,在一個治療週期之後會 使淋巴腺病變之尺寸降低至少50%。在一些上述實施例 中使用化合物1、Ρ、II或II"在一個治療週期之後會使淋 巴腺病變之尺寸降低至少75%。 在個態樣中’本發明提供一種治療病狀之方法，其包 含向需要此治療之個體投與式〗、式π化合物或其醫藥學上 可接受之鹽及一或多種治療劑，其中該病狀為癌症。在一 個實施例中，一或多種治療劑為蛋白酶體抑制劑。一或多 種治療劑可包括苯達莫司汀、利妥昔單抗、奥法木單抗及 /或來_那度胺°在另—實施例中，-或多種治療劑包括苯 達莫Ί /γ、利妥昔單抗或此兩種治療劑之組合。在另一實 施例中，一或多種治療劑包括奥法木單抗。在另一實施例 中’一或多種治療劑包括來那度胺。 一或多種治療劑之適合劑量範圍可變化，但一般而言， 163053.doc •69- 201242598 一或多種治療劑係以50 mg/m2至uoo mg/m2之範圍投與β 在一個實施例中，苯達莫司汀係以5〇mg/m2 之範圍投與。在另一實施例中，利妥昔單抗係以3〇〇 mg/m至400 mg/m2之範圍投與。在另一實施例中奥法木 單抗係以300 mg/m2之範圍投與。 一或多種治療劑與式A化合物之組合給藥可持續至少一 個週期在一些實施例中’ 一或多種治療劑與式A化合物 之組合給藥可持續至少7天。在其他實施例中，一或多種 治療劑與式A化合物之組合給藥可持續約28天。在一些實 施例中，式A化合物及一或多種治療劑係在至少一個週期 期間各自投與至少一次。一或多種治療劑可以與投與化合 物相同或不同之週期向個體投與。在一些實施例中，一或 多種治療劑係在至少一個週期之至少第一及第二天向個體 投與。在其他實施例中，一或多種治療劑係每週向個體投 與。可在各週期之後衡量對患者臨床反應之評估。臨床結 果可用於決定增加、減小、中止或維持劑量。 在一些上述實施例中，病狀為血液惡性腫瘤。在較佳實 施例中，病狀係選自由以下組成之群：多發性骨髓瘤急 性淋巴細胞性白血病、急性骨髓白血病、慢性淋巴細胞性 白血病、B細胞淋巴瘤、彌漫性大B細胞淋巴瘤、B細胞 ALL、T細胞ALL及霍奇金氏淋巴瘤。 在較佳實施例中，化合物實質上包含s-對映異構體。在 特定實施例争，化合物包含至少95❶/〇之S·對映異構體。在 一些上述實施例中’㈣該化合物及治療劑得到的協同益 163053.doc •70· 201242598 處優於不使用化合物與治療劑之組合所獲得之結果。 下列實例供說明而非限制本發明。在以下實例中，提及 「式I化合物」或「化合物I」係指此處所示之S-對映異構 體，且用於此等實例之樣品展現98.2% ee，如藉由對掌性 HPLC方法所量測：
此外，分析此化合物揭示該物質之下列特徵： 測試 測試結果 外觀 略微灰白色粉末 1H-NMR 光譜符合參照物 HPLC分析 98.1%(基於無水、無溶劑） 對掌性純度(HPLC) 98.2% ee 測試 測試結果 灼燒殘餘物 0.11% 紅外光譜分析(FTIR) 光譜符合參照物 13C-NMR 光譜符合參照物 粒度分析 中值直徑：11.3 μτη 水（卡爾費雪庫侖法 (Coulometric Karl Fischer)) 0.56% 性質或測試 測試結果 C、Η、F、Ν元素分析％ 預期值 實驗值 %C 63.3 63.5 %H 4.4 4.4 %N 23.5 23.1 %F 4.5 4.5 163053.doc -71 - 201242598 實例1 抑制MM細胞之細胞生長 此實例證明式I化合物抑制細胞激素（IGF-1及IL-6)對多 發性骨髓瘤（MM)細胞之細胞生長刺激作用。在IL-6或IGF-1存在或不存在下，LB細胞（骨髓單核細胞性骨髓瘤細胞 株）與式I化合物一起用對照培養基培養48小時。藉由量測 溴化3-(4,5-二曱基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四鈉（MTT ; Chemicon International)染料吸光度來評估式I化合物對MM 細胞生長之抑制作用。在培養48小時之最後4小時，向各 孔中添加10 pL 5 mg/mL MTT來脈衝式刺激細胞，隨後添 加100 μί含有0.04 N HC1之異丙醇。使用分光光度計 (Molecular Devices)在570/630 nm下量測吸光度。結果之 概述展示於圖1中。即使在細胞生長刺激性細胞激素存在 下，暴露於0.625 μΜ-2.5 μΜ化合物I亦抑制MM細胞生長。 實例2 BMSC對細胞毒性之影響 此實例證明骨髓基質細胞（BMSC)不防止化合物I誘導之LB 細胞細胞毒性。LB細胞在BMSC存在或不存在下用對照培養 基且與式I化合物一起培養48小時。使用[3Η]-胸苷攝取分析 評估細胞增殖。所有資料皆表示三個重複實驗之平均值（土 SD)。結果之概述展示於圖2中。在暴露於0.625 μΜ-I0 μΜ化 合物I之後，即使在BMSC存在下，LB細胞生長亦降低。 實例3 化合物對CLL細胞之細胞凋亡之影響 163053.doc •72- 201242598 此實例證明式i化合物誘導患者慢性淋巴細胞性白血病 (CLL)細胞之細胞凋亡。經由來自俄亥俄州立大學（Ohio State University)之 CLL研究協會（CLL Research Consortium) 自患有B-CLL之患者獲得周邊血液。使用Rosette-Sep(StemCell Technologies)分離初級CD19陽性細胞。細胞 在37°C、5% C02及高濕度下在補充有10%熱不活化胎牛血 清、2 mmol/L L-麩醯胺酸及青黴素（penicillin)(100單位/毫 升）/鍵黴素（streptomycin)(100 pg/mL ; Invitrogen)之 RPMI 1640(Invitrogen)中維持。在與式I化合物或培養基一起培 育96小時之後，5χ105個細胞用PBS洗滌且接著再懸浮於含 有 2 μΐ^ 膜聯蛋白（Annexin)V-FITC 儲備液（BioWhittaker， Inc)及 10 μΐ^ 20 pg/mL Pl(Sigma)之結合緩衝液（10 mmol/L HEPES/NaOH(pH 7.4)、150 mmol/L NaCl、5 mmol/L KC卜 1 mmol/L MgCl2、1.8 mmol/L CaCl2)中。在室溫下 於避光區域中培育10分鐘之後，藉由流動式細胞測量術在 FACScanTM(Becton Dickinson)上定量試樣。 用化合物I處理CLL患者細胞引起細胞凋亡且結果似乎具 有劑量依賴性，如圖3中所見。 化合物I誘導不良預後患者之CLL細胞的細胞凋亡，如圖 19中之資料所指示。 化合物I亦有效誘導難治癒/復發患者之CLL細胞的細胞 祠亡，如圖20中所示。 實例4 化合物對ALL細胞株之影響 163053.doc •73- 201242598 此實例證明式I化合物引起Τ-ALL與B-ALL(急性淋巴母 細胞白血病）白血病細胞株中之Akt構酸化降低及細胞增殖 減小，伴有細胞死亡。使用阿爾瑪藍（AlamarBlue)分析 (Invitrogen)對細胞株進行存活率分析。體積100 pL之細胞 (每孔1χ106個）置放於96孔平底盤中且向各盤中添加式I化 合物（每孔100 pL，2χ最終濃度）或單獨培養基。所有實驗 均以4個重複進行。培育細胞持續固定時間（48小時）。在培 育之後，添加10 gL AlamarBlue®至各孔中。培育細胞4小 時且使用SpectraMax® M5讀盤器2001獲得530-560 nm下之 光學密度。細胞存活率表示為經處理細胞/對照樣品之間 的吸收百分比。此等結果概述於圖4所示之表中。暴露於 化合物I引起多種ALL細胞株之細胞存活率實質性降低以及 Akt磷酸化降低。 實例5 化合物對ALL細胞週期之影響 此實例證明用式I化合物處理急性淋巴母細胞白血病 (ALL)細胞株CCRF-SB引起G0/G1細胞週期停滯。對在正 常生長條件下之經碘化丙錠染色之CCRF-SB細胞及在式I 化合物存在下生長之CCRF-SB細胞進行代表性榮光活化細 胞分選（FACS)分析。Go-G!、S及G2-M期細胞之平均百分比 計算於條帶圖（histograph)下方之表中。結果展示於圖5中。 實例6 抑制乳癌細胞之增殖
此實例證明式I化合物抑制乳癌細胞株之增殖。使T47D 163053.doc -74- 201242598 及HS-5 78T細胞株在血清加指定濃度之式I化合物存在下生 長。藉由AlamarBlue®分析（Invitrogen)在96孔盤之三個重 複孔中量測增殖。增殖分析之結果表示為平均細胞百分比 值且展示於圖6中。 實例7 抑制卵巢癌細胞株之增殖 此實例證明式I化合物抑制卵巢癌細胞株之增殖。使 IGROV-1及OVCAR-3細胞株在血清加指定濃度之式I化合 物存在下生長。藉由AlamarBlue分析（Invitrogen)在96孔盤 之三個重複孔中量測增殖。增殖分析之結果表示為平均細 胞百分比值且展示於圖7中。 實例8 降低Akt磷酸化 此實例證明式I化合物降低展現組成性Akt磷酸化之血液 腫瘤細胞株中之組成性Akt鱗酸化。評估一大組白血病及 淋巴瘤細胞株之組成性Akt磷酸化。此等細胞株代表B-淋 巴瘤、T-淋巴瘤、ALL、惡性組織細胞增多症、DLBCL及 AML。顯示血清非依賴性Akt磷酸化之細胞株用式I化合物 處理2小時。此後，細胞經溶解，經尺寸分級（size-fractioned)且用針對填酸化Akt(Ser473)之抗體進行免疫墨 點分析。結果展示於圖8中。在暴露於化合物I之後，所有 細胞株皆達成Akt(Ser473)降低。 實例9 化合物I在DLBCL中有效 163053.doc -75- 201242598 此實例證明化合物I在彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞中阻斷 PI3K信號傳導且誘導細胞凋亡。ΡΙΙΟδ表現於DLBCL細胞 株中，如圖26Α中所示。圖26Β顯示暴露於化合物I會使若 干DLBCL細胞株中之ρΑΚΤ含量降低。 實例10 誘導乳癌細胞之細胞凋亡 此實例證明式I化合物會誘導乳癌細胞株之細胞凋亡。HS-578Τ、T47D及MCF7細胞用式I化合物或相應DMSO濃度處理 24小時。藉由膜聯蛋白V-FITC/7AAD染色測定凋亡細胞之百 分比。底部左側，活細胞（膜聯蛋白V-FITC/PI陰性）；底部右 侧，早期凋亡細胞（僅膜聯蛋白V-FITC陽性）；頂部右側，中 期·晚期凋亡細胞（膜聯蛋白V-FITC/7AAD雙重陽性）；及頂部 左側，晚期凋亡/壞死細胞（僅7AAD陽性）。除底部左側象限 (活細胞）之外’指示各象限中之細胞之百分比。代表得到類 似結果之三個不同實驗之一個實驗展示於圖1〇中。 實例11 健康志願者中第7天之穩態血液含量 此實例提供關於在第7天式I化合物在健康人類個體血液 中之濃度的資料。在研究之第7天在經口投與5〇、1〇〇或 200 mg BID之式I化合物之後，監測12小時期間的濃度。 圖11追蹤自投藥起12小時期間的藥物血漿濃度。所有劑量 皆在兩小時内達成最大藥物濃度。投與5〇、1〇〇或2〇〇 BID之該化合物引起濃度水準超出嗜鹼性血球中之 EC5〇濃度至少12小時。 163053.doc •76- 201242598 此外，進行單次劑量研究，其中將17-400 mg式I化合物 投與健康志願者。量測化合物自投藥起24小時在血液中之 濃度且結果展示於圖24A中。在約6小時時，對於所有投與 劑量而言，化合物I在血液中之濃度皆為至少約100 nM。 在約12小時時，對於劑量50 mg及50 mg以上而言，化合物 I在血液中之濃度超過50 nM。化合物I在血液中之最大濃 度係在投藥2小時内達成。 在另一實驗中，在50 mg BID給與健康志願者（N=6)之第 7天量測平均化合物I濃度。平均最低濃度高於針對ΡΙ3Κδ 之EC50且平均峰值濃度低於針對ΡΙ3Κγ之EC50，如在全血 嗜鹼性血球活化分析中所測定，圖24Β。此實例證明在50 mg BID下投與之化合物I之濃度範圍水準在全血中高於 ED5〇 ΡΙ3Κδ嗜鹼性血球活化水準、但低於最小ED5〇 ΡΙ3Κγ 嗜鹼性血球活化水準至少12小時。 下表1提供研究中之個體之概述，其中在不同量下向個 體投與單次劑量（SD)或多次劑量（MD)之式I化合物。「η」 值係指各組中之個體數。 表1 組 方案 化合物I 安慰劑 1(η=8) SD 17mg(n=6) 安慰劑(n=2) 2(η=8) SD 50 mg(n=6) 安慰劑(n=2) 3(η=8) SD 125 mg(n=6) 安慰劑(n=2) 4(η=8) SD 250 mg(n=6) 安慰劑(n=2) 5(η=8) SD 400 mg(n=6) 安慰劑(n=2) 6(η=8) MD 50 mg BID x 7天(n=6) 安慰劑BID x 7天(n=2) 7(η=8) MD 100 mg BID x 7 天(n=6) 安慰劑BID x 7天(n=2) 8(η=8) MD 200 mg BID x 7 天(n=6) 安慰劑BID x 7天(n=2) 163053.doc •77- 201242598 實例12 對患有套細胞淋巴瘤之患者中之病變的效應 此實例提供關於患有套細胞淋巴瘤之患者在用式I化合 物治療1個週期（28天）之後之病變面積的資料。在治療之前 及在治療週期之後量測6個病變之面積。對28天經口投與 50 mg BID之式I化合物之反應引起病變面積相較於治療之 前的面積減小且表示腫瘤負荷減小44%。結果概述於圖12 所見之條形圖中。 實例13 CLL患者對治療之反應 此實例提供關於CLL·患者在經口投與式j化合物治療1個 週期（28天）之後之血液中之絕對淋巴細胞計數（ALC)之濃 度的資料。在完成一個治療週期後之4週期間量測血液 ALC濃度。觀測到淋巴細胞增多因治療而減少55%且淋巴 腺病變因治療而減少38%。在第1週與第2週之間觀測到 ALC濃度顯著減小，圖13。 實例14 比較淋巴瘤患者與健康志願者 此實例提供比較淋巴瘤患者與正常健康志願者中之式】 化合物之濃度的資料。在第28天經口投與5〇 mg Bm之化 合物於患有套細胞淋巴瘤之患者，在投藥後之6小時期間 量測化合物在血液中之濃度。亦觀測在投藥之第7天，$ 及1〇〇 mg經口投藥於正常健康志願者中的濃度。結果概^ 於圖14中。因此，化合物在治療週期期間不過度累積，串 163053.doc -78- 201242598 者在治療週期期間亦不因代謝增強而變得具有对受性。 實例15 化合物I對各種激酶之活性 此實例展示化合物I針對各類別之激酶之IC5Q概況，如表 2中所概述。儘管尤其對ρΐ ι0δ具有活性，但化合物I亦對 ρΠΟγ具有活性且活性甚至足以在治療上適用於在無毒劑 量下對抗ρΐ 1〇β ’原因為已證明化合物具有較高NOAEL等 級；而對第II-V類磷酸肌醇激酶展現很小活性。因此，儘 管具有δ選擇性，但化合物對ρ1 ι〇γ展現的活性可足以具有 臨床適用性’亦即對依賴ρ110γ達成信號傳導之癌症有 效，原因為可使得血漿含量高於有效抑制pi 1 〇γ之劑量， 同時相對於其他同功異型物，特定言之α同功異型物仍然 具有選擇性。 表2
第 1 類PI3K，IC50(nM) 第II類 ΡΙ3Κ， IC5〇(nM) 第III類 PI3K * ICs〇(nM) 第 IV類PI3K， !C5〇(nM) 其他填酸肌醇激酶 化合物 pl 10α ρΙΙΟβ pllOS ρΙΙΟγ αΐβ hVPS34 DNA- PK mTOR ΡΙΡ5Κα ΡΙΡ5Κβ I 435 128 1 14 >103 978 6,729 >103 >ιο3 1 >103 NVP-BEZ- 235 Novartis 19 293 63 267 3 6 1 2 ND
InvitroGen Adapta分析 *ND=未測出 實例16 化合物I在全激酵組蛋白激酶篩檢中無脫把活性 此實例證明化合物I在全激酶組蛋白激酶篩檢中具有很 163053.doc -79- 201242598 小或不具有脫靶活性。使用Ambit KINOMEscanTM，在10 μΜ下對超過350種蛋白激酶之全基因組篩檢未能偵測到任 何活性。篩檢中之一些激酶之實例展示於下表3中。 表3 篩檢中之相關激酶之實例 ABL FGFR1 JAK1 P38MAPK S6K AKT VEGFR1 JAK2 PDGFR SLK ALK FLT3 JNK1 PIM SRC BLK FRK KIT PKA SYK BRAF FYN LCK PKC TAK BTK HCK LYN PLK TIE CDK HER2 MAPK RAF TRK CSF1R ICK MEK RET TYK EGFR IGF1-R MET ROCK YES EPH ITK MLK ROS ZAP70 實例17 化合物I對Ρ1105之選擇性 此實例證明化合物I對ρΐ 1〇δ具有選擇性，如在同功異型 物特異性細胞基分析中所量測。
Swiss-3T3纖維母細胞及RAW-264接種於96孔組織培養 盤上且使其達到至少90%匯合。使細胞饑餓且用媒劑或化 合物I之連續稀釋液處理2小時並分別用PDGF或C5a刺激。 藉由ELISA偵測Akt磷酸化及總AKT。純化B細胞在室溫下 用媒劑或化合物I之連續稀釋液處理30分鐘，隨後添加純 化山羊抗人類IgM。結果表示為藉由IgM交聯誘導之相對 [3H]胸苷併入量。 163053.doc • 80 - 201242598 表4 ΡΙ3Κα EC5〇(nM) ___ ΡΙ3Κδ ECs〇(nM) ΡΙ3Κγ EC5〇(riM) 纖維母細胞細胞株 初級B細胞 單核細胞細胞株 PDGF誘導之ρΑΚΤ BCR介導之增殖 C5a誘導之PAKT >20,000 6 3,894 (η=12) (n=6) (η=11) 實例18 白血病及淋巴瘤細胞株中之pll〇5之表現 此實例證明PI3K ρΙΙΟδ高度表現於廣泛範圍之白血病及 淋巴瘤細胞株中。 ΡΙ3Κ ρ 110δ促進廣泛範圍之白血病及淋巴瘤細胞株增殖 及存活。所研究之細胞類型為MCL、DLBCL、AML、ALL 及 CML。 一組淋巴瘤及白血病細胞株中之PI3K ρ 110α、ρ 110β、 ρΙΙΟγ及ρΙΙΟδ之表現顯示於圖15中。藉由sdS-PAGE分離 來自106個細胞之蛋白質且使用對α、β ' γ及δ同功異型物 具有特異性之抗體藉由西方墨點法加以分析。純化重組 pi 10蛋白質用作對照。抗肌動蛋白（Anti-actin)抗體用於評 估相等裝載量之樣品。ρΐ 1〇δ以高量一致表現，而其他 pllO同功異型物高度可變。已知ΡΙ3Κ ρΐι〇δ均一表現於患 者 AML·細胞中，如由 Sujobert，等人，B/ood 2005 106(3), 1063-1066 所論述。 實例19 化合物I對pllOS之抑制效應 實例19顯示化合物I抑制Ρ11 〇δ會阻斷白血病及淋巴瘤細 163053.doc • 81 · 201242598 胞株中之伴有組成性路徑活化之PI3K信號傳導。 在白血病及淋巴瘤細胞株中，PI3K路徑通常受到異常調 控。發現48%之細胞株，或13/27之細胞株具有組成性p-AKT。此外，PI3K路徑活化依賴於ρΙΙΟδ。發現化合物I在 13/13之細胞株中抑制組成性ΑΚΤ磷酸化。 圖9之PAGE結果證明組成性ΑΚΤ磷酸化因11種細胞株（包 括B細胞及T細胞淋巴瘤）之各者中存在化合物I而受抑制。 細胞與1 0 μΜ化合物I 一起培育2小時。細胞溶解產物進行 SDS-PAGE且轉移於PDVF膜上並用適當抗體探測。發現化 合物I在11/11之細胞株中抑制組成性ΑΚΤ磷酸化。T-ALL 及B-ALL細胞株之其他細胞株資料展示於圖27中。藉由密 度測定術（densitometry)對在暴露於一定範圍濃度之化合物 1(0.1 μΜ至10 μΜ)之後的Akt及S6磷酸化減小進行定量，表 示為變化百分比，圖28。 實例20 化合物I抑制白血病細胞株之增殖且誘導細胞凋亡 實例20證明化合物I在白血病細胞株中抑制增殖且誘導 細胞凋亡。圖16A-B顯示用化合物I處理24小時會以劑量依 賴性方式降低細胞存活率。 在24小時時對在10% FBS血清存在下生長之ALL細胞株 進行增殖分析（AlamarBlue®)並進行量測。在96孔盤之三個 重複孔中量測增殖。化合物I對PI3K信號傳導之抑制引起 細胞週期進程阻斷及/或細胞死亡。在六種白血病細胞株 之各者中，10微莫耳濃度之化合物I使存活率降低40- 163053.doc -82· 201242598 50%，圖 16A 〇 备 化合物I誘導細胞凋亡。細胞用DMSO(媒劑）、1 μΜ或1 0 μΜ化合物I處理24小時。藉由膜聯蛋白V-FITC/7AAD染色 測定凋亡細胞之百分比。代表得到類似結果之不同實驗之 - 一個實驗展示於圖16Β中。 實例21 CLL細胞中之pllO 5之表現 此實例證明PI3K ρΙΙΟδ及ρΙΙΟδ同功異型物在患者CLL細 胞中表現。 ΡΙ3Κ介導之信號傳導路徑已牵涉CLL。此等路徑在細胞 增殖、阻止細胞凋亡及細胞遷移方面具有作用。試圖確定 ΡΙ3Κ同功異型物在患者CLL細胞中表現。 CLL患者人口統計狀況概述於下表5中。 表5 CLL患者人口統計狀況 (總計（7V=24)) I)細胞遺傳異常 13ql4.3 58% llq22.3 33% 17ρ13·1 20% 第12對染色體三體症 12% II)治療史 氟達拉濱難治癒 29% 未知 54% II) IgVH狀態 突變 33% 未突變 33% 未知 33% 163053.doc -83· 201242598 圖 17A-D之 PAGE影像比較 ρΐι〇α、ρΐι〇δ、ρΙΙΟβ及 ρΙΙΟγ ο 在患者Α-Ε之CLL細胞中之表現。相較於其他ΡΙ3Κ同功異 型物，ρΙΙΟδ及ρΙΙΟγ表現於各患者中。 實例22
化合物I誘導分裂卡斯蛋白酶（caspase)3及PARP 此實例證明化合物I誘導分裂卡斯蛋白酶3及PARP。圖 18A-B展示在1 μΜ、10 μΜ之化合物I或25 μΜ之LY294002 存在下卡斯蛋白酶3及PARP(聚（ADP)核糖聚合酶）分裂之結 果。 其他實驗提供化合物I誘導卡斯蛋白酶2及PARP分裂之證 據。細胞與化合物I或單獨媒劑一起培養24小時。此後， 細胞經溶解且經尺寸分級並用針對FLIP之抗體進行免疫墨 點分析，圖29。另外，添加全細胞溶解產物至塗有總卡斯 蛋白酶-3、分裂之卡斯蛋白酶-3、分裂之PARP及BSA的 MDS (Me so Scale Diagnostics)多點96孔4點盤中。蛋白質用 經SULFO-TAG試劑標記之抗體偵測並定量。經暴露於5 μΜ或10 μΜ之化合物I而達成分裂卡斯蛋白酶3及PARP之劑 量依賴性反應。 實例23 化合物I阻斷P13K信號傳導 此實例證明化合物I阻斷患者AML細胞中之PI3K信號傳 導^ ΡΙ3Κδ牽涉AML患者細胞之信號傳導。圖21展示在 0.1、1.0、10 μΜ之化合物I不存在或存在下碳酸化Akt產生 之結果。此證明化合物I降低患者AML細胞中之磷酸化Akt 163053.doc • 84· 201242598 產生。 實例24 基於全血量測嗜鹼性血球中之PI3K信號傳導 此實例顯示使用流動式細胞測量術藉由誘導CD63表面 表現來量測嗜鹼性血球中之PI3K信號傳導的全血分析。 抑制嗜鹼性血球中之PI3K信號傳導允許化合物I成為適 用藥力學標記。藉由CD63表面表現監測PI3K信號傳導。 特定言之，ρΙΙΟδ介導FCsRl信號傳導且ρΙΙΟγ介導fMLP受 體信號傳導。對嗜鹼性血球上由PI3K介導之CD63表現之 流動式細胞測量術分析包含下列依序步驟： 1. 收集周邊血液 2. 嗜鹼性血球刺激（fMLP或抗FCsRIMab) 3. 標記嗜鹼性血球（抗CCR3-FITC及抗CD63-PE) 4. 溶解並固定細胞 5. 藉由流動式細胞測量術進行分析 圖22A-C比較A)不刺激、B)用抗FCsRl刺激或C)用fMLP 刺激之結果。 圖23顯示化合物I在p 110δ介導之信號傳導最重要時尤其 具有活性，但在利用ρΙΙΟγ時亦相對具有活性：對於ρΙΙΟδ 測試，其在《1 μΜ下達成SD63表現降低50%，且對於 ρΙΙΟγ測試，其在約10 μΜ下達成SD63表現降低50%。使用 Flow2 CAST®套組量測人類全血中之嗜鹼性血球活化。全 血樣品用媒劑或化合物I之連續稀釋液處理，隨後用抗 FcsRI mAb或fMLP活化嗜鹼性血球。細胞用抗人類CD63- 163053.doc •85- 201242598 FITC與抗人類CCR3-PE mAb之組合染色。測定不同處理組 中之閘選嗜鹼性血球群體内之CD63陽性細胞百分比且相 對於媒劑對照加以校正。 實例25 化合物I減輕CLL患者中之淋巴腺病變 此實例提供具有del[17p]之CLL患者中之龐大淋巴腺病 變的尺寸降低之證據。具有del(17p)之患者患有腋部淋巴 腺病變’其藉由電腦斷層攝影術（CT)成像以提供5.9 cmx4.1 cm之基線量測結果，圖4〇a。在用化合物I治療一 個週期之後，淋巴腺病變降低至尺寸3.8xl.8 cm，圖 40B。一個週期治療為28天以200 mg BID或350 mg BID之 化合物I持續經口給藥。 實例26 化合物I對個趙之葡萄糖及胰島素含量之有限作用 此實例證明用化合物〖處理對葡萄糖及胰島素含量具有 很小或不具有作用。化合物j在長達1〇天期間以5〇 2〇〇 mg 量每天兩次投與個體。隨時間量測血糖及胰島素濃度且與 安慰劑結果進行比較，如圖25A_B中所示。 血糖濃度保持穩定，即使在用最高劑量之化合物〗處理 10天之後。在用化合物！處理7天之後，胰島素含量保持在 正常範圍内。此證明化合物丨對葡萄糖及胰島素含量具有 很小或不具有作用。· 實例27 材料及方法 163053.doc •86· 201242598 此實例提供關於進行實例28-35中所述之實驗之材料及 方法的資訊，該等實例係關於使用化合物I治療多發性骨 魏瘤。 材料 ρΐ 10δ抑制劑化合物I及化合物II由Calistoga Pharmaceuticals (Seattle，WA)提供。所用化合物I及II之樣品中之S對映異 構體超過95%。將化合物I以10 mM溶解於二甲亞砜中且儲 存在-20°C以進行活體外研究。將化合物II溶解於1 °/。羧基 甲基纖維素（CMC)/0.5%吐溫80(Tween 80)中且儲存在4°C 以進行活體内研究。重組人類ΡΙΙΟα、ΡΙΙΟβ、ΡΙΙΟγ及 Ρ110δ用含有0.1% BSA之無菌磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)復原。 觸替佐米由 Millennium Pharmaceuticals(Cambridge，MA)提 供。3-甲基腺 °票吟自 Sigma-Aldrich(St. Louis，MO)購買。 細胞培養
Dex敏感性（MM.1S)及抗性（MM.1R)人類MM細胞株由 Steven Rosen博士（Northwestern University，Chicago，IL)友 善提供。H929、RPMI8226及U266人類MM細胞株自美國 菌種保存中心（American Type Culture Collection)(Manassas, VA) 獲得。美法侖抗性RPMI-LR5及小紅莓（Dox)抗性RPMI-Dox40 細胞株由 William Dalton 博士（Lee Moffitt Cancer Center, Tampa, FL)友善提供。OPM1衆細胞性白血病細胞 由 Edward Thompson 博士（University of Texas Medical Branch, Galveston)提供。IL-6依賴性人類MM細胞株INA-6 由 Renate Burger博士（University of Kiel, Kiel, Germany)提 163053.doc -87- 201242598 供。LB人類MM細胞株於實驗室中產生。表型分析揭示無 細胞遺傳異常。表型分析展示於表6中。LB細胞株之CD表 現概況由流動式細胞測量分析確定。 表6 LB表現 CD標記 表現％ CD3 5.5% CD19 61.7% CD20 97.2% CD38 54.1% CD40 96.8% CD49e 5.9% CD70 98.0% CD138 96.3% 所有MM細胞株皆於RPMI1640培養基中培養。骨髓基質 細胞（BMSC)於含有15%胎牛血清、2 mM L-麩醯胺酸（Life Technologies)、100 U/mL 青黴素及 100 pg/mL 鏈黴素（Life Technologies)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基（Dulbecco's modification of Eagle’s medium)(DMEM)(Sigma)中培養。自健康 志願者收集之血液樣品藉由度處理以獲得 周邊血液單核細胞（PBMNC)。在根據赫爾辛基宣言 (Declaration of Helsinki)獲得知情同意書並由達納-法伯癌 症研究所之機構審查委員會（Institutional Review Board of the Dana-Farber Cancer Institute)(Boston，MA)核准之後， 自BM樣品獲得患者MM及BM細胞。使用Ficoll-Paque™密 度沈降分離BM單核細胞，且藉由用抗CD138磁性活化細 胞分離微珠（Miltenyi Biotec，Auburn，CA)進行陽性選擇來 163053.doc -88 - 201242598
純化漿細胞（>95% CD138+)。亦使用RosetteSep陰性選擇 系統（StemCell Technologies, Vancouver，BC，Canada)自 MM 患者之BM純化腫瘤細胞。 生長抑制分析 藉由量測溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二笨基四鈉 (MTT ·，Chemicon International, Temecula, CA)染料吸光度 來評估化合物I對MM細胞株、PBMC及BMSC之生長的生長 抑制作用》 化合物I對BM中旁分泌MM細胞生長之作用 MM細胞（2χ104個細胞/孔）在藥物存在或不存在下於 BMSC 塗佈之96 孔盤（Costar，Cambridge, ΜΑ)中培養48 小 時。藉由[3H]-胸苦（Perkin-Elmer, Boston，MA)攝取量來量 測DNA合成，其中[3H]-胸苷（0.5 μ Ci/孔）在48小時培養之 最後8小時期間添加。所有實驗皆以四個重複進行。 短暫阻斷P1105表現 使用細胞株 Nucleofector 套組 V(Amaxa Biosystems Gaitherburg, MD)用 siRNA ON-TARGET 加 SMART pool ΡΙΙΟδ或非特異性對照雙鏈體（Dharmacon Lafayette, Co)短 暫轉染INA-6細胞及LB細胞。 免疫螢光 活MM細胞（2.5χ104個）藉由使用細胞離心系統（Thermo Shandon，Pittsburgh，PA)在500 rpm下離心5分鐘而集結於 玻璃載片上。細胞於冷絕對丙酮及甲醇中固定10分鐘。在 固定之後，細胞於磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)中洗滌且接著用 163053.doc -89- 201242598 含5% FBS之PBS阻斷60分鐘。載片接著與抗CD 138抗體 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz，CA)—起在 4°C 培育 24小時，於PBS中洗滌，與山羊抗小鼠IgG—起在4°C培育 1小時，且使用Nikon E800螢光顯微術加以分析。 用吖咬撥（acridine orange)染色值測並定量酸性囊泡細 胞器（AVO)。 自體吞噬之特徵在於細胞質蛋白質之螯合及AVO之形 成》為偵測並定量化合物I或3MA處理之細胞中之AVO， 用吖啶橙在最終濃度1 pg/ml下進行活體染色15分鐘。在螢 光顯微鏡下檢查樣品。 血管生成分析 使用活體外血管生成分析套組（Chemicon，Temecula, CA) 測定化合物I之抗血管生成活性。HUVEC及内皮生長培養 基自 Lonza(Walkersville，MD，USA)獲得。HUVEC與化合 物I一起在37°C於聚合基質凝膠上培養。在8小時之後，使 用 Leika DM IL 顯微術（Leica Microsystems，Wetzlar， Germany)評估血管形成且用IM50軟體（Leica Microsystems Imaging Solutions，Cambridge，UK)加以分析。觀測HUVEC 細胞遷移及重排，且對分支點之數目計數。 西方昼點 MM細胞與或不與化合物I一起培養；收集；洗滌；且使 用放射免疫沈殿分析（RIPA)緩衝液、2 mM Na3 V04、5 mM NaF、1 mM笨甲基磺醯氟（5 mg/ml)溶解。全細胞溶解產物 進行十二烷基硫酸鈉·聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE)分 163053.doc •90· 201242598 離，轉移至純硝化纖維素膜（Bio-Rad Laboratories, Hercules，CA)中，且用抗AKT、磷酸化（p)-AKT(Ser473、 Thr308)、ERKl/2、P-ERKl/2、P-PDKl、STAT'P-STAT、P-FKRHL、P-70S6K、LC3 及 ΡΙ3Κ/ρ110α Ab(Cell Signaling Danvers, MA);抗 ρΙΙΟβ、ΡΙ3Κ/ρ110δ、3-填酸 甘油醛去氫酶（GAPDH)、α-微管蛋白（tubulin)及肌動蛋白 Ab(Santa Cruz Biotechnology, CA);及抗ρΐ 10γ Ab(Alexis， San Diego, CA)及抗LC3 Ab(Abgent，San Diego, CA)進行免 疫墨點分析》
ELISA 藉由ELISA評估與MM細胞一起共培養之人類BMSC分泌 細胞激素的情況。在有或無INA-6細胞下，BMSC與不同濃 度之化合物I一起於96孔盤中培養。在48小時之後，收集 上清液且儲存在-80°C。使用Duo set ELISA顯色套組（R&D Systems，Minneapolis, MN)量測細胞激素。所有量測皆以 三個重複進行。 人類細胞激素陣列 根據製造商說明書使用蛋白質組Profiler抗體陣列組 A(R&D Systems, Minneapolis，MN)評估培養物上清液中之 細胞激素含量，與BMSC之共培養物之上清液與用針對37 種細胞激素之Ab列陣之膜一起培育4小時。 人類MM之鼠類異種移植物模型 CB17 SCID小鼠（48-54 日齡）購自 Charles River Laboratories (Wilmington, ΜΑ)。所有動物研究皆根據達納-法伯癌症研 163053.doc -91 - 201242598 究所之動物檢理學委員會（Animal Ethics Committee of the Dana-Farber Cancer Institute)核准之方案進行。將含於 100 μί RPMI-1640中之3xl06個LB細胞皮下接種於小鼠之右側 腹中。當腫瘤可觸知時，小鼠歸入處理組，每日兩次接受 10 mg/kg或3 0 mg/kg管飼；且對照組中之7隻小鼠接受單獨 媒劑。每隔一天對最長垂直腫瘤直徑進行測徑規量測以使 用表示橢圓之3D體積之下式估計腫瘤體積：4/3χ(寬度/2)2χ(長 度/2)。當腫瘤達到2 cm或小鼠似乎瀕死時處死動物。自處 理第一天開始評估存活直至死亡。自處理第一天開始使用 測徑規量測評估腫瘤生長直至開始處死當天，其對於對照 組而言為第12天且對於處理組而言為第17天及第19天。用 canon IXY數位700攝影機捕捉影像。用LEICA DM IL顯微 鏡及 LEICA DFC300 FX 攝影機在 40u/0.60(Leica， Heidelberg, Germany)捕捉對腫瘤影像之離體分析值。 人類胎兒骨移植物植入CB17 SCID小鼠（SCID-hu)中。在 骨植入之後四週，2.5χ106個INA-6細胞於最終體積100 μΐ RPMI-1640培養基中直接注射入移植物中之人類ΒΜ腔穴 中。來自ΙΝΑ-6細胞之可溶性人類IL-6受體（shuIL-6R)之含 量增加用作SCID-hu小鼠中之MM細胞生長及疾病負荷之指 標。小鼠在INA-6細胞注射之後約4週產生可量測之血清 shuIL-6R，且接著持續7週每日接受10或30 mg/kg藥物或單 獨媒劑。收集血液樣品且使用酶聯免疫吸附分析（ELISA， R&D Systems. Minneapolis MN)評估其 shuIL-6R含量。 統計分析 163053.doc -92- 201242598 藉由鄧恩氏多重比較檢驗（Dunn's multiple comparison test)測定統計顯著性。最小顯著水準為p<〇.〇5。使用卡本· 麥爾曲線（Kaplan-Meier curve)及對數秩分析評估存活。藉 由使用CalcuSyn軟體程式（Biosoft，Ferguson, MO)進行等效 線圖分析來分析化合物I與硼替佐米之組合效應；組合指 數（CI)< 0.7指示協同效應。 實例28 MM細胞中之pll〇5之表現 此實例證明ρΐ 10δ高度表現於患者MM細胞中。為評估 ΡΪ3Κ/ρ110表現’使用針對重組人類ρΐ3Κ/ρ110α、ρΙΙΟβ、 ρΙΙΟγ及ρΙΙΟδ蛋白質的Ab，該等Ab具有針對此等同功異型 物之特定免疫反應性。評估11種MM細胞株（MM. 1 S、 OPM1、OPM2、RPMI8226、DOX40、LR5、MM.1R、 U266、INA-6、H929及LB)以及24個患者MM樣品中之 ρΙΙΟδ之表現且免疫墨點展示於圖30A及30B中。圖30A展 示使用特定抗體藉由免疫墨點分析所偵測之ΜΜ細胞株中 之ρΙΙΟα、ρΙΙΟβ、ρΙΙΟγ及ρι10δ的表現。抗α_微管蛋白 MAb充當裝載對照。使用抗Ρ110δ Ab藉由免疫墨點分析來 偵測患者MM細胞中之pii〇§(圖3〇B)e 抗GAPDH MAb充當裝載對照。ΙΝΑ-6及LB細胞強烈表 現 ρΙΙΟδ，而 MM.1S、OPM1、MM.1R、Dox40、U266 或 H929缺乏ρΙΙΟδ表現（圖30A)。 藉由免疫螢光分析確認MM.1S及LB細胞中之ρΙΙΟδ表現 (圖 30C) » 人類重組 ριι〇α、ρι 1〇β、Ρ11〇γ、ρι 1〇δ蛋白質 163053.doc •93- 201242598 於SDS樣品緩衝液中加熱3分鐘，隨後裝載於凝膠上。（每 個泳道10-20 ^ )藉由免疫墨點分析偵測重組人類 ΡΙΙΟα、ΡΙΙΟβ、ΡΙΙΟγ ' Ρ110δ蛋自 f。使用 ρι1〇δ特異性 經FITC結合之二次抗體量測mm 1S及LB細胞中之p 11 〇§含 量》ΡΙΙΟδ染成綠色，且核酸（dapi)染成藍色。 西方墨點揭示ρΙΙΟδ表現與其他同功異型物（α、β及γ)表 現之間不相關。重要的是所有患者MM細胞皆亦表現 ρΙΙΟδ(圖 30B)。 實例29 化合物I對ΜΜ細胞之細胞毒性 此實例證明化合物I針對具有ρΐ 10δ之細胞具有選擇性細 胞毒性。詳言之’化合物I在ρ11〇δ陽性ΜΜ細胞中以及在 初級患者ΜΜ細胞中強力誘導細胞毒性，在來自健康供體 之周邊血液單核細胞中不具有細胞毒性，說明治療指數有 利0 評估阻斷ρ 11 0δ基因表現對ΜΜ細胞之生長抑制作用。 LB及ΙΝΑ-6細胞用Ρ11〇δ siRNA(Si)或對照siRNA(模擬物） 轉染。在24小時之後，藉由西方墨點分析測定pi 1 〇δ之表 現，參見圖31Α。ΙΝΑ-6細胞用ρΐ 10δ siRNA或對照siRNA 轉染’且接著培養72小時。藉由MTT分析評估細胞生長， 參見圖31B。資料指示三個重複培養物之平均值士 SD，表 示為對照之倍數。用ρΐ 10δ siRNA而非模擬siRNA轉染使 ρΙΙΟδ下調且在72小時時抑制MM細胞生長（圖31A及31B)。 評估ρΐ 10δ特異性小分子抑制劑化合物I對MM細胞株、 163053.doc •94· 201242598 PBMC及患者MM細胞之生長抑制作用。 化合物I以劑量及時間依賴性方式誘導針對LB及INA-6 MM細胞（ρΙΙΟδ陽性）之細胞毒性；相反，注意到在ρ110δ 陰性細胞株中之細胞毒性最小（圖3 1C)。圖3 1C之圖例： LB(d)、INA-6(A)、rpmI 8226(〇)、〇PM2(〇)、 Η929(·)、U266»、rPMI-LR5(A)及 ΟΡΜ1(·)ΜΜ細胞與 或不與化合物I一起培養48小時。 重要的是化合物I亦誘導針對患者MM細胞之細胞毒性 (圖31D)，在濃度多達2〇 μΜ下在來自4個健康志願者之 PBMC中不具有細胞毒性（圖3丨Ε)。藉由陰性選擇自ΒΜ分 離之患者ΜΜ細胞與化合物I一起培養48小時。自健康供體 分離之周邊血液單核細胞與化合物I 一起培養72小時。資 料表示藉由對三個重複培養物進行ΜΤΤ分析所評估之平均 值士SD存活率’表示為未處理對照之百分比。此等結果強 烈表明對化合物I之敏感性與ρι 1〇5表現相關，且表明治療 窗有利。 為確定化合物I是否經由細胞凋亡誘導細胞毒性，藉由 西方墨點分析檢查卡斯蛋白酶及PARp之分裂。ινα·6細胞 與化合物1(0-5 μΜ)—起培養12〇小時。使用抗卡斯蛋白酶_ 3、卡斯蛋白酶-8、卡斯蛋白酶_9、PARI^a•微管蛋白鈾 對總細胞溶解產物進行免疫墨點分析。FL指示全長蛋白 質，且CL指示分裂之蛋白質。觀測到用化合物〖處理12〇小 時之INA-6MM細胞中之卡斯蛋白酶·8、卡斯蛋白酶_9、卡 斯蛋白酶-3及PARP的分裂顯著增加（圖31F)。此等結果指 163053.doc -95· 201242598 示由化合物i引發之細胞毒性係至少部分經由卡斯蛋白酶 依賴性（内在與外在）細胞凋亡介導。 實例30 化合物I抑制AKT及ERK磷酸化 此實例證明化合物I抑制AKT及ERK磷酸化。 PI3K之一種重要下游效應物為絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶 AKT，其因激酶域之活化環中之Thr308及C端尾中之 Ser473的磷酸化而活化。兩個位點之磷酸化均需要AKT之 N端普列克底物蛋白（pleckstrin)同源域與由PI3K產生之膜 磷酸肌醇之間的相互作用。顯示化合物I會抑制兩個域， 表明ΡΙΙΟδ為負責MM細胞株中之PI3K信號傳導之主要同功 異型物。 檢查化合物I對ΙΝΑ-6細胞中之ΑΚΤ及ERK路徑之抑制。 ΙΝΑ-6細胞與化合物I或LY294002 —起培養12小時，圖 32Α。肌動蛋白Ab用作裝載對照。ΙΝΑ_6及MM.1S細胞與 化合物1(0、0.25、1.0、5.0 μΜ)—起培養6小時，圖32Β。 LB及ΙΝΑ-6細胞與化合物I一起培養0-6小時，圖32C。使用 AKT、P-AKT(Ser473 及 Thr308)、ERK1/2、P-ERK1/2、Ρ-PDK1及P-FKRHL抗體對全細胞溶解產物進行免疫墨點分 析。α-微管蛋白用作裝載對照。 化合物I顯著阻斷ρΙΙΟδ陽性ΙΝΑ-6細胞中之ΑΚΤ及 ERK1/2之磷酸化（圖32Α)，但不影響Ρ11〇δ表現較低之 MM.1S細胞中之ΑΚΤ或ERK的磷酸化（圖32Β)。化合物I亦 以時間及劑量依賴性方式顯著抑制ΙΝΑ-6及LB ΜΜ細胞中 163053.doc •96· 201242598 之上游PDK-1及下游FKHRL之磷酸化（圖32C)，進一步確 認此等細胞中之PI3K/AKT路徑與ERK路徑均受到抑制。 實例31 化合物I誘導AVO形成及自鱧吞噬 此實例證明化合物I能夠引發細胞凋亡與自體吞噬。 AKT調控自體吞嗟，因此，對化合物I誘導LB及INA-6 MM細胞之自體呑噬進行研究。 INA-6及LB MM細胞用5 μΜ化合物I處理6小時。化合物I 處理誘導LC3在LB及ΙΝΑ-6細胞中累積，藉由螢光顯微術 或穿透電子顯微術所證實。由LC3之累積確定自噬體 (Autophagosome)形成；箭頭指示自嗟體，圖33Α。 INA-6細胞用5 μΜ化合物I處理或以血清饑餓處理6小 時，用1 pg/mL吖啶橙染色15分鐘，且藉由螢光顯微術加 以分析’圖3 3 B。 使用在有或無3-MA下用化合物I處理INA-6細胞所得之 溶解產物的LC3及beclin-Ι抗體、藉由西方墨點法來測定 LC3及beclin-Ι蛋白質含量。GAPDH充當裝載對照。 免疫螢光分析顯示，化合物1(5 μΜ，6小時）處理引發 ΙΝΑ-6及LB細胞中之LC3染色顯著增加（圖33Α)。電子顯微 分析亦顯示，用化合物I處理之ΜΜ細胞中之自體吞噬空泡 (autophagic vacuole)(箭頭）增加。因為自體吞嗤特徵為形 成酸性囊泡細胞器（AVO)，所以進行α丫咬燈染色。如圖 33Β中所示，用吖啶橙進行之活體染色揭示在化合物I處理 之LB及ΙΝΑ-6細胞中形成AVO。此外，在用化合物I處理6 163053.doc -97- 201242598 小時之後偵測到INA-6 MM細胞中之LC3-II及Beclinl蛋白 質顯著增加，此由3-MA自體吞噬抑制劑阻斷（圖33C)。 在高達100 μΜ濃度下，3-MA未在INA-6及LB細胞中誘 導細胞毒性，圖33D。ΡΙΙΟδ陽性LB細胞（♦)用3-ΜΑ(0-100 μΜ)處理24小時。資料表示三個重複培養物之平均值（士 SD)。 此等結果表明化合物I誘導AVO形成及自體呑噬的時間 點早於誘導卡斯蛋白酶/PARP分裂之時間點。 自體吞噬使細胞組分降解，使細胞組分再循環且對各種 細胞壓力有反應。在此實例中，化合物I處理ρ 110 δ陽性 ΜΜ細胞株誘導自體吞噬標記LC3-II。重要的是化合物I處 理引起自體吞噬顯著增加，證據為細胞質中存在自體吞噬 空泡、形成AVO、LC3之微管相關蛋白質I與自噬體進行膜 締合、及LC3-II蛋白質受顯著誘導。電子顯微分析確認化 合物I誘導之自噬體。LC3-II經由LC3-I轉化加以表現。反 之，自體吞噬之特異性抑制劑3-ΜΑ抑制化合物I誘導自體 吞噬。此等研究表明化合物I之早期細胞毒性效應與自體 吞嗤相關。 實例32 化合物I在BMSC存在下抑制細胞生長 此實例證明化合物I能夠在BMSC存在下抑制旁分泌ΜΜ 細胞生長。 因為IL-6及IGF-1講導ΜΜ細胞之生長及抗細胞凋亡，所 以檢查化合物I對此等細胞激素在ΙΝΑ-6及LB ΜΜ細胞中之 163053.doc -98- 201242598 效應之克服。LB及INA-6細胞用對照培養基（);或與5.0 μΜ(Η> 或 10 μΜ(口）化合物 I 一起在 IL-6(1 及 10 ng/ml)(圖 34A) 或IGF-1(10及100 ng/ml)(圖34B)存在或不存在下培養48小 時。藉由在72小時培養之最後8小時期間量測[3H]-胸苷併 入量來測定DNA合成。資料表示三個重複培養物之平均值 (土SD)。IL-6與IGF-1均不防止由化合物I誘導之生長抑制 (圖 34A及 34B)。 BM微環境賦予MM之增殖及藥物抗性，因此在BMSC存 在下檢查化合物I對MM細胞生長之抑制效應。 LB及INA-6 MM細胞用對照培養基（□)及與2.5 μΜ(®)、5 μΜ Λ及10 μΜ(·)化合物I 一起在BMSC存在或不存在下培 養48小時，圖34C。藉由[3H]-胸苷併入量來測定DNA合 成。資料表示三個重複培養物之平均值（士SD)。 藉由ELISA量測用化合物1(0-2.5 μΜ)處理之BMSC之培 養物上清液中的IL-6，圖34D。誤差長條圖指示SD(±)。 BMSC與1.0 μΜ化合物I一起或用對照培養基培養48小 時；使用細胞激素陣列偵測培養物上清液中之細胞激素， 圖 34Ε。 與或不與BMSC—起培養之ΙΝΑ-6細胞用化合物處理48小 時。使用指定抗體對總細胞溶解產物進行免疫墨點分析， 圖34F。肌動蛋白用作裝載對照。 來自2個不同患者（口、◊)之BMSC與化合物1(0-20 μΜ)-起培養48小時。藉由ΜΤΤ分析評估細胞存活率，圖34G。 值表示三個重複培養物之平均值士SD。 163053.doc -99· 201242598 重要的是化合物I抑制生長及細胞激素分泌（圖34C-E)以 及由BMSC誘導之AKT及ERK磷酸化（圖34F)。相反，未注 意到BMSC之生長受到顯著抑制（圖34G)。此等結果表示化 合物I在BM微環境之情形下阻斷旁分泌MM細胞生長。 實例33 化合物I抑制血管生成HuVEC小管形成 此實例證明化合物I能夠抑制HuVEC小管形成。研究 PI3K(詳言之pll〇同功異型物）在血管生成中之作用。内皮 細胞為達成腫瘤生長之血管生成之必需調控者。Akt路徑 與ERK路徑均與内皮細胞生長及血管生成調控相關；且重 要的是内皮細胞表現ρΐ 1〇δ。此等實例亦證明化合物I活體 外阻斷毛細管樣血管形成，伴有Akt磷酸化下調。 研究ΡΙΙΟδ抑制對血管生成之影響。HuVEC用0、1.0或 10 μΜ之化合物I處理8小時，且評估由内皮細胞達成之血 管形成（圖35 A) » HuVEC細胞接種於塗有基質膠之表面上 且在化合物I存在或不存在下使其形成小管8小時。藉由顯 微分析量測内皮細胞血管形成，圖35B。*P <0.005。
HuVEC與化合物1(0-20 μΜ)—起培養48小時，且藉由 ΜΤΤ分析評估存活率，圖35C。所示資料為來自一代表性 實驗之三個重複孔之平均值土SE »因此，化合物I以劑量依 賴性方式抑制毛細管樣血管形成（Ρ<〇·〇5)(圖35Β)，無相關 細胞毒性（圖35C)。 AKT及ERK1/2在經化合物I處理之HuVEC細胞中的磷酸 化及表現受到顯著下調。HuVEC與化合物1(0-200 μΜ)—起 163053.doc 201242598 培養8小時，且使用指定抗體、藉由免疫墨點法分析細胞 溶解產物’圖35D。肌動蛋白用作裝載對照。 此等研究結果表明化合物I可抑制血管生成，伴有AKT 及ERK活性下調。 實例34 化合物II活體内抑制MM細胞生長 此實例證明化合物II能夠活體内抑制人類MM細胞生 長。 評估P110δ抑制劑在SCID小鼠用人類MM細胞皮下注射 之異種移植物模型中的活體内功效。 對接受注射5 X 1 06個LB細胞之小鼠一天兩次用對照媒劑 (·)及化合物II 10 mg/kg(o)或30 mg/kg(o)經口處理。依 「材料及方法」中計算平均腫瘤體積，圖36A。誤差長條 圖表示SD(±)。 代表性全身影像來自用對照媒劑（上圖）或化合物11(3〇 mg/kg)(下圖）處理12天之小鼠，圖36B。 使用CD3 1及P-AKT Ab對自化合物11(30 mg/kg)處理小氣 (右圖）及對照小鼠（左圖）收集之腫瘤進行免疫組織化學分 析。CD31及P-ΑΚΤ陽性細胞為深棕色，圖36D。 小鼠用化合物II 10 mg/kg(--)、30 mg/kg(.·.)或對照媒劑 (-)處理。使用卡本-麥爾曲線自治療之第一天開始評估存 活直至處死，圖36C。 自對照媒劑或化合物11(30 mg/kg)處理小鼠收集腫瘤組 織。由細胞溶解產物進行西方墨點分析，測定碟酸化 163053.doc -101 · 201242598 PDKM及AKT(Ser473)之蛋白質含量，圖36E。使用肌動蛋 白作為裝載對照。 藉由連續量測血清shuIL-6R來監測植入SCID小鼠中之人 類骨碎片（bone chip)中之INA-6細胞的生長。小鼠用化合 物Π 10 mg/kg(ci)、30 mg/kg(A)或對照媒劑（·）處理，且藉 由ELISA每週測定shuIL-6R含量，圖36F。誤差長條圖指示 SD(±) 〇 相較於對照小鼠（n=7) ’化合物π(ριι〇δ抑制劑）顯著降低 處理組（η=7)中之ΜΜ腫瘤生長。比較腫瘤體積顯示對照組 相對於處理組之間具有統計顯著差異（相對於1〇 mg/kg， P<0.05 ;相對於30 mg/kg，Ρ<〇.〇1)(圖 36A)。相對於對照 小鼠，在第12天時觀測到處理小鼠中之腫瘤生長顯著降低 (圖36B)。卡本·麥爾曲線及對數秩分析顯示，分別相對於 10 mg/kg及 30 mg/kg化合物 II處理組之 23 天（95% CI，15-34 天）及32天（95% CI，27-49天），對照小鼠之平均總存活期 (OS)為15天（95%信賴區間，12-17天）。亦觀測到相較於對 照小鼠，處理組之平均OS統計顯著延長（相對於1〇 mg/kg ’ P=〇.〇86 ;相對於30 mg/kg，Ρ=〇·〇56)(圖 36C)。重 要的是用單獨媒劑或化合物II處理不影響體重。此外，免 疫組織化學（圖36D)及免疫墨點（圖36Ε)分析確認化合物Η 處理（30 mg/kg)顯著抑制P-Akt及p-PDK-1，以及顯著降低 CD31陽性細胞數及微血管密度（p<〇 〇1)(圖36D)。此表明 化合物II可經由遏制Akt路徑來抑制活體内血管生成。 為檢查化合物II在人類BM微環境之情形下對MM細胞生 163053.doc •102- 201242598 長之活體内活性，使用SCID-hu模型，其中IL-6依賴性 INA-6細胞直接注射入皮下植入SCID小鼠中之人類骨碎片 中。此模型以INA-6人類MM細胞之人類IL-6/BMSC-依賴 性生長重演人類BM微環境。此等SCID-hu小鼠每曰用化合 物II或單獨媒劑處理4週，且血清shuIL-6R監測為標記腫瘤 負荷。如圖36F中所示，相較於媒劑對照，化合物II處理 顯著抑制腫瘤生長。觀測到此模型中之腫瘤生長受到顯著 抑制，如INA-6細胞釋放之血清shuIL-6R含量減小所證 實，從而確認ρΙΙΟδ抑制會阻斷MM生長，從而活體内促進 ΒΜ微環境之活性。總之，此等資料證明化合物II抑制 ρΙΙΟδ會活體内顯著抑制ΜΜ生長且延長存活期。 實例35 化合物I與硼替佐米組合展現協同細胞毒性 此實例證明化合物I與硼替佐米組合介導協同ΜΜ細胞毒 性之效應。 研究化合物I與硼替佐米組合誘導協同ΜΜ細胞毒性之效 應。LB及INA-6 ΜΜ細胞用培養基（)及與化合物I 1.25 μΜ(®)、2.5 μΜΡ)或 5.0 μΜ(ο) —起在硼替佐米（0-5 ηΜ)存 在或不存在下培養。藉由ΜΤΤ分析評估細胞毒性；資料表 示四個重複培養物之平均值土SD，圖37Α。 ΙΝΑ-6細胞用化合物1(5 μΜ)及/或硼替佐米（5 ηΜ)處理6 小時。使用磷酸化AKT(ser473)抗體、藉由對細胞溶解產 物進行西方墨點分析來測定AKT之磷酸化，圖37B ^肌動 蛋白充當裝載對照。 163053.doc -103- 201242598 化合物I會增強硼替佐米之細胞毒性。提高添加至硼替 佐米（2.5、5·0 ηΜ)中之化合物I之濃度（1.5-5.0 μΜ)在LB及 ΙΝΑ-6 ΜΜ細胞中引發協同細胞毒性（圖37Α及表7) »重要 的是藉由硼替佐米處理誘導磷酸化Akt在化合物I存在下受 到抑制（圖37B)。 表7 組合指數(〇}_
6 Α· IN 2·22· 5 5 5 5 ·22··22· 9 8 9 6 6 5 4 5 6 5 6 7W 0·0·0·0·0·0· 18 4 3 2 1 3 4 5 7W 4^ 3 0·0·0·0·0·0· 硼替佐米 化合物I Fa Cl (ηΜ) 2.5 (μΜ) 1.25 0.39 0.57 2.5 2.5 0.52 0.58 2.5 6 0.57 0.67 5 1.25 0.42 0.88 5 2.5 0.60 0.25 5 5 0.67 0.22 實例36 化合物I對濾泡性淋巴瘤細胞株有效 此實例證明化合物I在濾泡性淋巴瘤細胞中阻斷PI3K信 號傳導且誘導細胞凋亡。ΡΙΙΟδ表現於FL細胞株中，如圖 38Α中所示。某些細胞株顯示當細胞暴露於化合物I時， pAkt ' Akt、pS6及S6之產生降低，圖38Β。在暴露於0.1 μΜ及0.5 μΜ之化合物I 24小時之後觀測到PARP及卡斯蛋 白酶-3以劑量依賴性方式分裂，圖38C。 實例37 化合物1對初級MCL細胞有效 163053.doc -104- 201242598 此實例證明化合物i針對MCL有效。發現當暴露於〇 ι μΜ或1 μΜ化合物I時，化合物；1以劑量依賴性方式阻斷二名 患者之初級MCL細胞中之組成性ρΙ3Κ信號傳導。亦觀測到 化合物I抑制MCL細胞株中之存活因子及趨化因子信號傳 導。圖39Β顯示在化合物在下暴露於不同存活因子之 MCL株中之pAkt顯著降低。 實例38 化合物與利妥昔單抗及/或苯達莫句汀组合對患有復發或 難治癒B細胞惡性趙瘤之患者的作用 此實例證明式I化合物與利妥昔單抗及/或苯達莫司汀組 合在患有復發或難治癒B細胞惡性腫瘤之患者中之安全性 及活性。 研究根據資料截止值招募12名患者，包括6名NHL患者 及6名CLL患者。患者包括：男性/女性n=8(67%)/4(33%)， 中值年齡為65(範圍：55-80)歲，且復發/難治癒疾病 n=8(67%)/4(33〇/〇) »先前療法之中值數目為3(範圍：卜 11)。所有患者皆接受式I化合物100 mg BID ; 6名患者接受 利妥昔單抗且6名患者接受苯達莫司汀β 1名NHL患者由於 打鳴而降低苯達莫司汀劑量且1名NHL患者由於ALT/AST 增加而降低式I化合物劑量；所有其他患者皆以可接受之 耐受性接受完全劑量方案。獲得已完成2個組合治療週期 之6名患者之臨床反應評估結果且結果展示於下表8中。 163053.doc -105· 201242598 表8· 方案 疾病 先前療法之數目 反應 式I化合物+苯達莫司汀 CLL .3 部分反應 式I化合物+苯達莫司汀 NHL 2 完全反應 式I化合物+苯達莫司汀 NHL 3 部分反應 式I化合物+利妥昔單抗 NHL 4 部分反應 式I化合物+利妥昔單抗 CLL 11 部分反應 式I化合物+利妥昔單抗 CLL 3 進行性疾病 因此，式I化合物與利妥昔單抗或苯達莫司汀組合投與 患有復發或難治癒B細胞惡性腫瘤之患者顯示可接受之安 全性及有前景之臨床活性。 實例39 化合物與利妥昔單抗及/或苯達莫司汀組合在患有復發或 難治癒B細胞惡性腫瘤之患者中之作用 此實例證明式I化合物與利妥昔單抗及/或苯達莫司汀組 合在患有復發或難治癒B細胞惰性NHL及CLL之患者中之 安全性及活性。 招募20名患者，包括12名iNHL患者及8名CLL患者。患 者特徵概述於圖42中。所有患者皆接受式I化合物，每天 兩次（BID) 口服100 mg或每天兩次（BID) 口服150 mg，持續 長達患者受益之久。患者亦接受利妥昔單抗375 mg/m2， 每週投與，歷時8週（在第1週期之第1天開始）；或苯達莫司 汀90 mg/m2，在每個週期之第1天及第2天投與，歷時6個 週期。根據標準準則評估腫瘤反應。 如圖43中所示，所包括之23級不良事件主要包含由預先 存在之疾病或治療相關病狀或間發病所致之背景事件。對 163053.doc •106· 201242598 於接受苯達莫司汀及化合物I之患者’ >3級不良事件包括B 誘導骨髓抑制。對於接受利妥昔單抗及化合物患者， 上3級不良事件不常見且不與式I化合物明確相關。觀測到 iNHL特異性短暫ALT/AST升高；此等事件在停藥後得以解 決且在以較低式1化合物劑量再起始療法的情況下而得以 成功處理。在測試患者組内未觀測到與式〗化合物相關之 劑量限制性毒性。 如圖44中所示’幾乎所有接受苯達莫司汀與化合物I、 或利妥昔單抗與化合物I之組合療法之iNHL或CLL患者皆 經歷結節尺寸減小。 此外’觀測到iNHL患者及CLL患者中之抗腫瘤活性程度 高’無論接受苯達莫司汀及化合物I、或利妥昔單抗及化 合物I。概述於圖45之表中’ 一名接受苯達莫司汀及化合 物I之iNHL患者具有完全反應。 因此，化合物I與利妥昔單抗或苯達莫司汀組合投與患 有復發或難治癒惰性B細胞NHL及CLL之患者顯示可接受 之安全性及有前景之臨床活性。 在一先前研究中，涉及投與式I化合物之單一藥劑療法 導致淋巴細胞再分佈，此導致約2/3 CLL患者中之淋巴細 胞增多，如圖46中所見。相反，如圖47中所示，苯達莫司 汀與化合物I、或利妥昔單抗與化合物I之組合療法導致所 有CLL患者中之惡性淋巴細胞計數減小。 因此’以上論述之組合療法於患有iNHL及CLL之患者中 在減小結節尺寸及產生抗腫瘤活性方面以及於患有CLL之 163053.doc •107· 201242598 患者中在減小惡性淋巴細胞計數方面提供驚人效果及優良 結果，而副作用很小。 實例40 化合物與苯達莫司汀組合在慢性淋巴細胞性白血病中對B 細胞受體（BCR)信號傳導之影響及對保姆樣細胞（11111·^-like cell，NLC)之促存活作用 此實例證明式I化合物與苯達莫司汀組合對BCR源性CLL 細胞活化之影響。發現BCR與抗IgM交聯使CLL細胞存活 率顯著增加至對照之121±5%(平均值土SEM，n=15， *P<0.05)。此促存活作用由式I化合物消除，其在48小時時 使CLL細胞存活率降低至對照之85±3%(平均值：tSEM， η=15，*Ρ<0·05)。與NLC之共培養之CLL細胞存活率在48 小時時亦由式I化合物顯著降低至未處理對照之64±6%(平 均值土SEM，n=10，*P<0.05)。BCR交聯誘導CLL細胞分泌 趨化因子CCL3及CCL4，CLL上清液中之分泌量由ELISA 定量。 式I化合物使上清液CCL3濃度自4060±1392 pg/mL顯著降 低至 2901±1220 pg/mL，且 CCL4含量自 5721±1789 pg/mL 顯著降低至 3223±1311pg/mL(平均值土SEM，n=6，* P<0.05)。在CLL-NLC共培養物中，式I化合物亦抑制CLL細 胞分泌CCL3/4。式I化合物使CCL3濃度自943±535 pg/mL降 低至 156±8 pg/mL，且 CCL4 濃度自 7433±4463 pg/mL 降低至 316±53 pg/mL(平均值土SEM，η=5，*Ρ<0·05)。 驚人地，式I化合物亦使CLL-NLC共培養物中之CXCL13 I63053.doc -108- 201242598 含量自151±35減小至70±27 pg/mL(平均值土SEM，n=4， *Ρ=0·05)，表明式I化合物對CLL細胞與如由NLC表示之 CLL微環境均具有藥理學作用。 此實例亦證明式I化合物與苯達莫司汀組合可在CLL細胞 與骨髓基質細胞（MSC)之共培養物中克服基質介導的藥物 抗性。如圖48a及48b中所示，兩種藥物之組合指示對CLL 細胞死亡之影響增加。 此外，磷酸流用於證明式I化合物在自經受式I化合物治 療之CLL患者獲得之樣品中抑制組成性及BCR誘導之PI3K 路徑活化。式I化合物治療使周邊CLL細胞中之pAkt(T308) 下調>90%(n=12)。分析每日用式I化合物治療28天之前及 之後獲得之來自14名CLL患者之血漿樣品的各種細胞激素 濃度。有趣的是，此等分析揭示以下平均血漿含量自基線 至式I化合物治療第28天後實質性降低：CCL3(自186 pg/mL 至 29 pg/mL)、CCL4(自 303 至 70 pg/mL)、 CCL22(1067 至 533 pg/mL)、CXCL13(316 pg/mL 至 40 pg/mL)及TNFa(104至29 pg/mL)，從而證明本發明活體外 資料與CCL3/4及CXCL13相關。 總之，此實例之結果顯示式I化合物活體外有效抑制 BCR及NLC介導之CLL細胞存活及活化。此外，式I化合物 增強細胞毒性劑（諸如苯達莫司汀）針對CLL細胞之活性。活 體内資料指示式I化合物使升高之治療前CCL3及CCL4含量 降低。儘管不受理論束缚，但此等觀測結果表明抑制BCR 源性信號可為式I化合物在C L L中之關鍵作用機制之概念。 163053.doc •109- 201242598 實例41 化合物與來那度胺組合對CLL中之磷脂醯肌醇3激酶5路 徑活化的影響 此實例展示式I化合物與來那度胺組合對CLL患者中之 PI3k5路徑活化的影響。 樣品收集及培養條件：經分離之單核細胞為經負性選擇 之B細胞且置放於培養中。式I化合物由Calistoga Pharmaceuticals(Seattle，WA)供應。獲得並萃取來那度胺 (雷利米得（Revlimid) ; Celgene)。 流動式細胞測量分析：針對CD20、CD40、CD80、 CD86 或 IgGl 之抗體（BD Biosciences，San Jose CA)經表面 染色。 免疫墨點分析：進行免疫墨點術。抗體包括抗AKT、抗 磷酸化 AKT(Ser473)、抗 GSK30、抗磷酸化 GSK3p(Ser9)(Cell Signaling, Danvers，ΜΑ)、抗pi 105(Santa Cruz Biotechnology， Santa Cruz，CA)及抗GapdH( Millipore，Billerica，MA)。 定量RT-PCR :使用TRIzol試劑（Invitrogen)提取RNA且使 用Superscript第一股合成系統（Invitrogen)製備cDNA。使 用預先設計之TaqMan®基因表現分析及ABI Prism 7700序 列偵測系統（Applied Biosystems，Foster City，CA)進行即時 PCR。 PI3K分析：對CLL細胞之全細胞溶解產物進行PI3K分 析。根據製造商說明書（Echelon Biosciences，Salt Lake City，UT)進行ELISA分析。 163053.doc -110· 201242598 轉染：轉染CLL細胞。在50 πΜ最終濃度下使用？11〇§ siRNA(Ambion，Austin, Τχ)。 免疫球蛋白偵測：定量測定IgM。簡言之，來那度胺處 理或媒劑對照處理之CLL細胞經照射且在PWM(5 pg/mL)不 存在或存在下與目標純化B細胞一起置放於培養中。 統計分析：所報導之全部統計評估皆由OSU之生物統計 學中心（Center for Biostatistics)用先前所述之方法進行。 對於單一比較或在針對多重比較調整之後，α=0.05之P值 視為顯著。 此實例之結果顯示來那度胺藉由活化ΑΚΤ、IKK及NF-κΒ核易位以增強imRNA轉錄及穩定化而使CLL細胞上之 CD154上調。用全抑制劑LY294002處理CLL細胞拮抗此 AKT活化。 為首先確認PI3激酶活化之特異性，測定在用來那度胺 處理之後PI3K之酶促活性的直接增強。在添加及不添加1 或10 μΜ式I化合物至溶解產物中之情況下檢查用或不用 0.5 μΜ來那度胺治療之CLL患者（Ν=9)之CD19+細胞的ΡΙ3 激酶活性。相對於蛋白質之微克數計算結果。來那度胺經 由ΡΙ3Κ路徑之信號傳導可經由以下四個催化同功異型物發 生：ρ 110α、ρ 110 β、ρ 11 〇γ及ρ 110δ。此外，發現經由小分 子抑制劑式I化合物抑制ΡΙ3Κδ可阻止ΡΙ3Κ酶促活性增強 (圖 49Α) 〇 接著，在確定用式I化合物抑制ΡΙ3Κδ是否可阻止來那度 胺誘導ΑΚΤ下游磷酸化增強時，式I化合物抑制ΡΙ3Κδ引起 163053.doc 201242598 PI3K活性受阻。將CLL患者（N=6)之CD19+細胞與或不與 0.5 μΜ來那度胺及/或1或10 μΜ式I化合物一起培育48小 時。藉由免疫墨點法評估ser473處之AKT填酸化。參見圖 49B。 為確認此等結果，評估GSK3P之磷酸化。將CLL患者 (N=4)之CD19+細胞與或不與0.5 μΜ來那度胺及/或1或10 μΜ式I化合物一起培育48小時。藉由免疫墨點法評估ser9 處之GSK3P磷酸化。展示四個實驗之一之結果。發現來那 度胺治療引起GSK30磷酸化增強，此可藉由與式I化合物 共治療加以阻止，再次表明ΡΙ3Κδ與來那度胺依賴性PI3K 活性之間有關聯。參見圖49C。 為確認此等結果實際上歸因於ΡΙ3Κδ抑制，阻斷CLL細 胞中之卩13〖5表現。（：1^患者@=3)之€019+細胞用靶向 ΡΙ3Κδ、ΡΙ3Κγ或無意義目標之siRNA轉染。藉由免疫墨點 法評估ρΐ 10δ蛋白質表現。展示三個實驗之一之結果。參 見圖49D。 來那度胺顯示當阻斷ΡΙ3Κδ表現時不能誘導ΑΚΤ之磷酸 化。（：1^患者@=3)之€019+細胞用靶向？13^^、？13尺？或 無意義物之siRNA轉染且接著與或不與0.5 μΜ來那度胺一 起培育48小時。藉由免疫墨點法評估ser473處之ΑΚΤ磷酸 化。展示三個實驗之一之結果。參見圖49E。 此等發現證明，來那度胺活化CLL中之PI3K及隨後對 CLL細胞上之NF-κB及CD154之作用係利用PI3Kδ依賴性路 徑。 163053.doc -112- 201242598 先前已顯示來那度胺治療可引起CLL細胞活化。為擴展 此等研究結果，對抑制ΡΙ3Κδ阻止來那度胺進行研究以查 明其是否誘導對Β細胞抗原呈現具重要作用之其他共刺激 分子上調。CLL患者（Ν=25)之CD19+細胞用或不用0.5 μΜ 來那度胺及/或10 μΜ式I化合物處理48小時。使用CD40-PE 或CD86-PE抗體及IgGl-PE同型對照，藉由流動式細胞測 量術評估CD40或CD86之表面表現。用式I化合物處理能夠 阻止來那度胺誘導CD40及CD86上調（p值分別=0.0102及 <0.0001)(圖 50A) ° 類似地，亦發現抑制ΡΙ3Κδ可阻止來那度胺促進CD40、 CD86、CD154及CD80之mRNA增加（對於所有基因，ρ值 <0.009)(圖50B)。CLL患者（N=15)之CD19+細胞用或不用 0.5 μΜ來那度胺及/或10 μΜ式I化合物處理48小時。提取 RNA並轉變成cDNA且進行RT-PCR分析以測定CD40、 CD86 及 CD154mRNA 之量。 來那度胺亦已顯示可誘導CD20内化，與式I化合物同時 處理阻止此效應（ρ值=0.0057)(圖50C)。CLL患者（N=5)之 CD 19 +細胞用或不用0.5 μΜ來那度胺及/或10 μΜ式I化合物 處理48小時。使用CD20-PE抗體及IgGl-PE同型對照，藉 由流動式細胞測量術定量CD20之表面表現來評估CD20之 内化。 鑒於CD40-CD154軸對於來那度胺處理之CLL細胞促進 正常B細胞產生免疫球蛋白之重要性，評估式I化合物以查 明其是否可阻止此事件。CLL患者（N=6)之CD 19+細胞用或 163053.doc •113· 201242598 不用0.5 μΜ來那度胺及/或10 μΜ式I化合物處理48小時。 照射CLL細胞（20 Gy)且在5 pg/mL PWM不存在或存在下與 純化B細胞一起置放於培養中。藉由ELISA分析定量測定 IgM。儘管來那度胺處理之CLL細胞先前且在本文中已顯 示IgM含量增加，但發現用式I化合物預處理CLL細胞可完 全阻止1吕]^產生（？值<0_0001)(圖500)。 最後，測試來那度胺處理培養物中之CLL細胞以確定其 是否可促進腫瘤細胞產生血管内皮生長因子（VEGF)及鹼性 纖維母細胞生長因子（13-?0尸）。0^患者"=15)之0019 +細 胞用或不用0.5 μΜ來那度胺及/或10 μΜ式I化合物處理48 小時。提取RNA並轉變成cDNA且進行RT-PCR分析以測定 bFGF之量。來那度胺處理增強所有患者中之b-FGF之轉錄 上調（P值=0.0004)且式I化合物之共培育阻止此上調（p值 <0.001)(圖 50E)。 類似地，來那度胺處理增加一子組（8/13)患者中之VEGF 轉錄量，此再次可藉由用式I化合物處理而逆轉（p值 =0.002)(圖 50F)。（F)來自 CLL 患者（N=13)之 CD19+細胞用 或不用0.5 μΜ來那度胺及/或10 μΜ式I化合物處理48小 時。提取RNA並轉變成cDNA且進行RT-PCR分析以測定 VEGF之量。 資料總體而言支持ΡΙ3Κδ路徑涉及來那度胺介導之CLL 細胞活化。此等發現之潛在相關性為如與來那度胺用於 CLL·相關之若干者。式I化合物、全PD激酶抑制劑及拮抗 ΡΙ3激酶下游信號傳導之潛在其他藥劑與來那度胺之組合 I63053.doc •114· 201242598 可能對此藥劑之免疫調節性質具有拮抗性。因此，若需要 免疫調節，則應慎重應用此組合療法。相反，若需要來那 度胺之非免疫調節作用，則因諸如式丨化合物或替代性pl3 激酶抑制劑之藥劑之驚人作用而應用該等藥劑對於阻止與 此治療相關之免疫活化、腫瘤加劇（tumor fUre)及細胞激 素釋放症候群而言可能具有吸引力，此對於具有針對cll 細胞之保護作用之細胞激素（諸如VEGf i6_19&b_FGF 16、20、21)而言特別成立。實際上，一項檢查治療期間 連續細胞激素含量的對復發CLL中之來那度胺的研究注意 到相較於有反應患者，無反應患者之細胞激素含量（包括b_ FGF 2)持久升高。 實例42 化合物與利妥昔單抗及/或苯達莫司汀組合在患有先前經 >台療之B細胞惡性肢瘤之患者中的作用 此實例證明式I化合物與利妥昔單抗及/或笨達莫司汀組 合在患有先前經治療之B細胞惡性腫瘤之患者中的安全性 及活性。 研究招募49名患者’包括27名iNHL患者及22名CLL患 者。患者特徵概述於圖5丨中。在基線，患者具有不良預後 性特徵，包括較大年齡、龐大腺病變及難治癒疾病。所有 患者皆已接受> 1個先前治療方案且一些患者已接受多達9 個先前方案。先前療法包括利妥昔單抗、烷基化劑及/或 氣達拉濱；大多數iNHL患者已用先前含蒽環黴素療法治 療。許多患者較早得到追蹤（F〇11〇w_up)，其中療法之持續 163053.doc -115- 201242598 時間在1至12個週期之範圍内。 所有患者皆接受式I化合物，每天兩次（BID)口服1〇〇 或每天兩次（BID)口服150 mg，持續長達患者受益之久。 患者亦接受利妥昔單抗375 mg/m2，每週投與，在第1週期 之第1天開始，歷時8週；或苯達莫司汀9〇 mg/m2,在各週 期之第1天及第2天投與，歷時6個週期。根據標準準則評 估腫瘤反應。 如圖52中所示，23級不良事件主要包含由預先存在之疾 病、先前療法之毒性、或間發病所致之背景事件。對於接 受苯達莫司汀及式I化合物之患者，23級不良事件包括B誘 導骨髓抑制。對於接受利妥昔單抗及式〗化合物之患者， 23級不良事件不常見且不與式I化合物明確相關。觀測到 iNHL特異性短暫ALT/AST升高；此等事件在中斷藥物後得 以解決且已在以較低式I化合物劑量再起始療法的情況下 成功處理。在測試患者組内未觀測到與式j化合物相關之 劑量限制性毒性。 如圖53Α及53Β中所示，幾乎所有接受苯達莫司汀與式工 化合物、或利妥昔單抗與式I化合物組合療法之iNHL或 CLL·患者皆經歷結節尺寸減小。 此外’觀測到iNHL患者及CLL患者中之抗腫瘤活性程度 尚’無論接受苯達莫司汀及式I化合物、或利妥昔單抗及 式I化合物。如圖54所概述，兩名接受苯達莫司汀及式1化 合物之iNHL患者具有完全反應。 在先前研究中，涉及投與式Ϊ化合物之單一藥劑療法引 163053.doc •116- 201242598 起淋巴細胞再分佈，在CLL患者中產生短暫淋巴細胞增多 症’如圖55中所見。相反，如圖56中所示，笨達莫司丁與 式I化合物、或利妥昔單抗與式I化合物之組合療法引起 CLL患者中之惡性淋巴細胞計數更快速減小。 因此’以上論述之組合療法於患有iNHL及CLL之患者中 在減小結節尺寸及產生抗腫瘤活性方面以及於患有Cll之 患者中在減小惡性淋巴細胞計數方面提供驚人效果及優良 結果，而副作用很小。 實例43 化合物與地塞米松、苯達莫司汀及/或氟達拉濱組合對與 骨趙基質細抱（MSC)共培·養之CLL細胞的影響 此實例證明當CLL細胞與MSC在對CLL細胞具有細胞毒 性之藥物（例如地塞米松、苯達莫司汀及氟達拉濱）存在下 共培養時，式I化合物對此等細胞之影響。 C L L細胞與M S C在單獨培養基（對照）或含有指定濃度之 式I化合物、地塞米松、苯達莫司汀或氟達拉濱或組合藥 物之培養基中共培養。 活、’’田胞群體藉由明壳Di〇C6染色及卩丨排除表徵，且閘選 於各等问線圖之右下角巾。活細胞之百分比顯示於此等各 閑選圖上方°如圖57a中所示，式I化合物與地塞米松、苯 達莫司ίτ或a達拉濱之組合指示對CLL細胞死亡之作用增 強。 樂物處理樣品之存活率相對於各別時間點時對照樣品之 存活率UG0%)加以校h圖57b顯示在24、48及72小時之 163053.doc -117- 201242598 後§平估之9個不同患者樣品的平均值（士SEM)。組合療法使 在MSC存在下之CLL細胞存活顯著降低，其中ρ<·〇5，如描 述各藥物處理培養物之結果與對照培養物之結果之比較情 況的星號所指示。舉例而言，在72小時之後，CLL細胞相 對於未處理對照之存活率為93%(±〇.6%)(就式I化合物而言） 及60%(±8·7%)(就苯達莫司汀而言），但就2種藥物之組合 而言，降低至42.7%(±11.4%)。觀測到式I化合物與氟達拉 濱、或式I化合物與地塞米松之組合有類似結果。 因此，此等結果表明式I化合物使CLL細胞對細胞毒性劑 敏感，推測起來此係由破壞MSC源性抗藥性信號達成β 實例44 化合物與舆法木單抗组合對CLL之影響 此實例概述化合物I與奥法木單抗組合治療先前已針對 CLL加以治療之患者之丨_2期重複週期（28天/週期）研究。 化合物1(150 mg，每天2次[BID])與歷經24週給予之12次 奥法木單抗輸注連續共投與。奥法木單抗在第1天或第2天 (相對於第一劑化合物〗）以初始劑量3〇〇 mg投與。一週後， 奥法木單抗以每週〗，〇〇〇 mg投與7劑，接著以每4週！，〇〇〇 mg投與4劑》在完成奥法木單抗治療之後，只要個體受 益，各個體即繼續接受15〇 mg BID劑量之化合物〗作為單 一藥劑》 在整組21名患者中，有11名患者之人口統計及初步功效 資料可利用。中值[範圍]年齡為63 [54 76]歲。大多數 (9/11 ’ 82%)患者患有龐大腺病變（^丨個淋巴結之最長尺寸 163053.doc 201242598 量測為之5 cm)。先前療法之中值[範圍]數目為3 [1-6]，包 括先前暴露於烷基化劑（10/11 ; 90%)、利妥昔單抗（9/11 ; 82。/。）、嘌呤類似物（8/11 ; 72%)、阿萊珠單抗（3/11 ; 28%) 及/或奥法木單抗（2/11 ; 18%)。根據資料截止值，中值[範 圍]治療持續時間為5 [0-7]個週期。幾乎所有個體（9/11 ; 82%)的淋巴腺病變在前2個週期内顯著且快速地減輕《在 11名患者中，在第2週期或第2週期後結束時可評估10名患 者之反應評估結果。8名患者（80%)滿足反應準則，如由研 究者基於 Hallek M,等人（Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia: a report from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute-Working Group 1996 guidelines. Blood. 2008年6月 15 曰；111(12):5446-56)公佈之準則 所判斷。1名患者之淋巴腺病變減輕滿足穩定疾病準則， 且1名患者之疾病進展。預期周邊淋巴細胞計數因單一藥 劑ΡΙ3Κδ抑制所致的短暫增加在量值及持續時間方面降 低。化合物I與奥法木單抗組合誘導減輕短暫淋巴細胞增 多症。 初步安全性資料顯示組合治療具有有利安全性概況且缺 乏骨髓抑制。此外，藥力學資料揭示在28天治療之後， CLL相關趨化因子及細胞激素（CCL3、CCL4、CXCL13及 TNFa)之升高的基線含量降低。結果表明化合物I與奥法木 單抗組合在患有先前經治療之CLL之患者中提供良好耐受 之非細胞毒性治療方案。 163053.doc •119- 201242598 實例45 化合物與BCL-2拮抗劑組合對CLL之影響 此實例展示化合物I與BCL-2拮抗劑ABT-737及ABT-263 組合對基質暴露CLL細胞之影響。 CU.知廣相必：自滿足Cll診斷及免疫表型準則之同意 患者獲得周邊血液、骨髓及淋巴結。使用菲科·帕克 (Ficoll-Paque)(GE Healthcare，Waukesha，WI)密度梯度離心 自血液及組織樣品分離周邊血液單核細胞（PBMC)。樣品 新鮮分析或於含10〇/〇二甲亞砜（DMSO ; Sigma-Aldrich，St. Louis, MO)之胎牛血清（bd Biosciences，San Diego，CA)中 活冷凍並儲存於液氮中且隨後解凍以進行分析。製備單細 胞懸浮液以在螢光活化細胞分選（FACS)機器上進行分析， 且CD19+ CLL細胞通常佔分析細胞之>85〇/0。 鈿應#:鼠類CD154·fL細胞株維持於補充有10°/。FBS、 2.05 mM L-麩醯胺酸（HyClone，Logan，UT)及青黴素-鏈黴 素（Cellgro，Manassas，VA)之 RPMI 1640 培養基中。人類基 質細胞株 StromaNKTert 購自 Riken 細胞庫（Tsukuba，Japan) 且維持於補充有1 pg/mL氫皮質酮（hydrocortisone)、10% FBS、10%人類血清（Invitrogen，Grand Island，NY)、2.05 mM L-麩醯胺酸及青黴素-鏈黴素之α-ΜΕΜ中》保姆樣細 胞（NLC)藉由將CLL患者之PBMC懸浮於含10% FBS及青黴 素-鏈黴素-麵醯胺酸之完全RPMI 1640培養基中以達到1〇7 個細胞/毫升（總計2 mL)之濃度來產生。使細胞於24孔盤 (Corning Life Sciences)中生長 14天。 163053.doc •120· 201242598 cxz.知應典細龙异培# : CLL細胞在標準化條件下 於基質細胞株或初級NLC上培養。簡言之，基質細胞在各 實驗前一天以3xl05個細胞/毫升/孔之濃度接種於24孔盤 (0〇1*11111§1^€6 8(^611〇63)上且在37〇、於5%(3〇2中培月。基 質細胞匯合藉由相差顯微術確認，且CLL細胞接著以3 X10 個細胞/毫升之濃度添加於基質細胞層上。培養物接著用 化合物處理規定時期。CLL細胞藉由輕緩吸移與培養基一 起移除以進行分析’且接著在分析之前於PBS中洗滌。除 非另外指示，否則使用24小時共培養時間點。 細廣存活举廣/試及拭齋.藉由FACS分析膜聯蛋白乂- FITC(BD Biosciences，San Diego，CA)及蛾化丙鍵: (PI)(Sigma)來測定 CLL細胞存活率。ABT-737、ABT-263及 化合物I在-20°C儲存於DMSO中直至使用。
5//3粼沉分於：藉由基於培養盤之螢光測定術或FACS* 法分析CLL患者周邊血液、骨髓及淋巴結樣品。簡言之’ 將CLL患者之PBMC製備成單細胞懸浮液且使用毛地黃皂 苷（digitonin)(0.002°/。）輕緩地使其可通透。對於基於螢光 測定術之方法，此時添加1〇〇 μΜ JC-Uhvitrogen)且細胞 接著裝載於3 84孔盤上’其中個別孔含有僅個別BH3肽。 接著於 Tecan Safire 2上以 Ex 545 +/- 20 nM及 Em 590 +/-20 nm及3小時時程 '以三個重複進行JC1-BH3分析。對於 基於FACS之方法，依次使用人類Fc Block(BD
Pharmingen)、抗 CD19-V450(BD Pharmingen)及抗 CXCR4-APC(BD Pharmingen)對CLL患者PBMC之單細胞懸浮液染 163053.doc 121 201242598 色。細胞於PBS中洗滌且接著添加入個別FACS管中，各管 含有僅個別BH3肽。在室溫下培育樣品30分鐘，添加100 μΜ JC-1至各管中，且再培育樣品30分鐘》於BD FACS Canto II上以407、488及633 nm雷射進行FACS量測》使用 530/30 nm濾光片（FITC)及 585/42 nm濾光片（PE)根據 488 nm雷射量測JC-1，且使用PE信號中值之替代性變化計算 粒線體去極化程度。所報導之回應各BH3肽之粒線體去極 化相對於在陰性對照物二曱亞颯（DMSO)(0%)及陽性對照 物粒線體解偶劑羰基氰化物4·(三氟曱氧基）-苯腙 (FCCP)(100%)之情況下，JC-1染料之PE螢光中值變化百分 比加以校正。 基於好資#者〈Cdcez’w)之恭辜分# :藉由在96孔盤中每 孔接種1X1 〇4個細胞24小時來產生CD 154+ L或StromaNKTert 匯合單層細胞。0.5χ106個細胞/毫升之CLL細胞單細胞懸 浮液接著用1 pg/mL弼黃綠素-AM(Invitrogen)標記1小時。 細胞接著經短暫離心且用化合物或媒劑處理1至24小時。 未黏著細胞藉由吸出洗除。CLL細胞黏著藉由螢光測定術 (Ex/Em=485/520 nm)定量且使用Nikon TE2000倒裝活細胞 成像系統直接觀測。 實稃分夯汊旄妒：結果係以平均值標準誤差及重複數目 展示，如各圖中所述。統計比較係利用史都登氏配對或非 配對 t檢驗法（Student's paired or unpaired t-test)、曼-惠特 尼U檢驗法（Mann-Whitney U test)或線性回歸分析法。用 針對 PC 之 GraphPad Prism 5 軟體（GraphPad Software，San 163053.doc -122· 201242598
Diego，CA)進行分析。使用 FACS Diva 第 6.1.1 版（BD Pharmingen)分析流動式細胞測量資料。使用2008 IW-CLL 準則評估臨床反應，其中反應者定義為達成完全或部分反 應作為最佳反應之患者，且非反應者定義為在完成第一療 法之6個月内罹患穩定疾病、難治癒疾病或進行性疾病之 患者。除非另外指示，否則雙尾P值$0.05視為統計顯著》 當前，許多接受第一線傳統CLL療法之患者經常復發且 對其療法顯現抗性。因為暴露於各種基質之CLL細胞對細 胞毒性化學療法（Kurtova AV 等人，Diverse marrow stromal cells protect CLL cells from spontaneous and drug-induced apoptosis: development of a reliable and reproducible system to assess stromal cell adhesion-mediated drug resistance. Blood. 2009; 114(20):4441-4450)與 BH3 模擬物，諸如 ABT-737 或 ABT-263(Vogler M 等人，Concurrent up-regulation of BCL-XL and BCL2A1 induces approximately 1000-fold resistance to ABT-737 in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 2009;113(18):4403-4413)治療具有抗性，所以基質微環境中之CLL細胞可接受 來自基質之增殖信號或抗細胞凋亡信號且變得抗細胞凋 亡。因此，拮抗相互作用之藥劑可降低基質介導之CLL抗 性。 式I化合物可調節基質微環境。在臨床研究中，大多數 用化合物I及靶向BCR路徑之其他藥劑治療之患者展現快 速且短暫淋巴細胞增多《在不受任何理論束缚之情況下， 化合物I可藉由抑制CLL細胞向CXCL12/13之趨化性、降低 163053.doc -123· 201242598 CLL細胞遷移於基質細胞下方、下調趨化因子分泌或抑制 其他下游目標（諸如AKT及ERK)之磷酸化來調節基質微環 境。為表徵化合物I是否藉由增強粒線體細胞凋亡或激活 (priming)來調節CLL-基質相互作用，使用BH3概況分析量 測由衍生自促死亡BCL-2家族蛋白質之促死亡BH3域之肽 所誘導的粒線體滲透作用。 首先，檢查30名患者之周邊血液之CLL細胞。大多數患 者先前尚未經治療，且無患者近來已接受療法。在進行 BH3概況分析時之0.03 μΜ最終濃度下，BIM BH3肽在大多 數患者樣品中誘導顯著量之去極化，其中22/30(73.3%)之 樣品截至1小時時之去極化>50%。如圖58Α中所示，CLL 細胞之細胞凋亡受高度激活。此外，ΒΗ3概況分析之結果 顯示，大多數CLL患者樣品顯示BAD ΒΗ3肽之去極化相對 增強，表明主要依賴於BCL-2(n=23)。如圖58B中所示，觀 測到一些樣品更依賴於MCL-l(n = 5)或BCL-XL(n = 2)。如 圖58C中所示，觀測到根據2008 IW-CLL準則達成部分反 應（PR)或完全反應（CR)之未治療患者之治療前樣品受激活 大於完成前線CLL療法6個月期間或6個月内罹患進行性疾 病（PD)之患者之樣品（Ρ=〇·〇24)。如圖58D中所示’ BH3概 況分析顯示具有未突變IGHV狀態之患者（n=7)受激活顯著 大於具有突變IGHV狀態之患者（n=i8)(P=0·0026)。如圖 5 8E中所示，觀測到與生殖系之VH同源性之百分比正相關 於激活程度（P=0.0043)。因此，觀測到CLL細胞之細胞凋 亡受高度激活’ CLL細胞通常依賴於BCL-2 ’且增強之激 163053.doc •124· 201242598 活與改善之臨床反應及未突變IGHV相關。 接著，評估化合物I對活體外基質暴露CLL細胞之黏著、 存活率及激活之影響。圖59A-E大體上顯示觀測到化合物I 使螯合於基質中之CLL細胞釋放以克服基質介導之抗性。 周邊血液源性CLL細胞用鈣黃綠素-AM標記且與或不與化 合物1(10 μΜ)—起於stromaNKTert上共培養24小時，藉由 輕緩吸移加以沖洗，且藉由廣視野顯微術觀測。如圖59A 中所示，與stromaNKTert共培養且用化合物I處理之CLL細 胞在24小時時展現較少黏著。此外，圖59B顯示即使在化 合物I處理（發生CLL細胞死亡之前）僅1小時之後，亦可偵 測到CLL細胞之黏著降低。此外，圖59C顯示CLL細胞反 應於化合物I而自基質去黏著，從而增強對CLL細胞之殺死 作用。特定言之，圖59C描述2名患者之平均存活率百分比 以及SEM，且此等患者之兩者均顯示對單獨100 nM ABT-737或10 μΜ化合物I具有基質介導之極度抗性。觀測到兩 種化合物之組合克服此抗性。 為避免檢查到化合物I直接殺死CLL細胞，在基質存在下 處理對ΑΒΤ-737與化合物I均具有抗性之兩個CLL患者樣 品。在兩個樣品中，化合物I恢復CLL細胞在基質存在下對 ΑΒΤ-737之敏感性。此外，用化合物1(10 μΜ)與各種劑量 之ΑΒΤ-737及其口服類似物ΑΒΤ-263之組合處理基質暴露 CLL細胞顯示，基質暴露CLL細胞在任一 ΒΗ3模擬物殺死 時展現劑量依賴性增強。特定言之，參考圖59D，觀測到 在StromaNKTert存在下對ΑΒΤ-737之抗性，但可用低至10 163053.doc -125- 201242598 nM濃度之ABT-737克服。參考圖59E，ABT-263具有類似 劑量-反應曲線。 為確定ΡΙ3Κ抑制是否藉由增強激活來增強基質暴露CLL 細胞之敏感性，ΡΒ源性CLL細胞與或不與StromaNKTert細 胞一起培養24小時且使用膜聯蛋白-PI及BH3概況分析加以 檢查。未處理CLL細胞通常在24小時之離體培養中展現細 胞；周亡（Collins RJ 等人，Spontaneous programmed death (apoptosis) of B-chronic lymphocytic leukaemia cells following their culture in vitro. British journal of haematology. 1989; 71(3):343-350) »四個CLL患者樣品之基質共培養使得未處 理細胞避免細胞凋亡。特定言之，參考圖60A ’雙因子 ANOVA分析顯示基質在化合物I不存在下避免細胞凋亡。 在基質不存在下，觀測到化合物1誘導的細胞凋亡多於對 照。在基質存在下，觀測到化合物1誘導的細胞凋亡明顯 多於對照。因此，在基質存在或不存在下，未觀測到化合 物I之殺死作用之間有顯著差異。 然而，化合物I可使抗性或避免細胞凋亡發生逆轉。相 較於未處理基質暴露CLL細胞之小於10%之細胞凋亡，偵 測到用化合物1(10 μΜ)處理之基質暴露CLL細胞之細胞凋 亡超過40%。此外，如圖60Β中所示，ΒΗ3概況分析顯示相 較於未處理細胞，用化合物I處理之基質暴露CLL細胞在24 小時時展現粒線體激活增強（ρ=〇.075)。如圖60C中所示， BAD ΒΗ3肽與用作肽之ΑΒΤ-737在用化合物I處理之CLL細 胞中均誘導顯著更多之粒線體去極化（分別為p=0.046及 163053.doc -126- 201242598 p=0.047)。此表明用化合物I處理引起CLL自基質去黏著， 同時粒線體激活增強及對BCL-2拮抗作用之敏感性增強。 總之，此實例表明PI3K抑制拮抗基質對CLL細胞之保 護，且化合物I有效逆轉基質對CLL細胞之影響：黏著、粒 線體激活降低及對抑制BCL-2之療法之敏感性降低。此 外，化合物I之功效可能與淋巴細胞在患者中之再分佈相 關。藉由使CLL細胞自基質釋放，化合物I可能使CLL細胞 脫離抗細胞凋亡基質環境，藉此增強其粒線體激活並易受 細胞凋亡。此實例亦表明PI3K抑制與BCL-2抑制之組合使 對BCL-2抑制之反應增強。 【圖式簡單說明】 圖1展示多發性骨髓瘤（MM)細胞（使用LB細胞）生長隨不 同濃度之細胞激素IGF-1及IL-6與化合物I之組合而變的圖 解概述。 圖2展示在48小時之後’多發性骨髓瘤（MM)細胞之細胞 生長隨與不同濃度之化合物I及存在或不存在骨髓基質細 胞（BMSC)而變的圖解概述。 圖3展示慢性淋巴細胞性白血病（Cll)細胞之細胞凋亡隨 與不同濃度之式I化合物而變的圖解概述。 圖4展示化合物I對若干不同急性淋巴母細胞白血病 (ALL)細胞株之細胞存活率、Akt(Ser473)磷酸化降低及卡 斯蛋白酶3活化之影響的彙總表。 圖5展示化合物I對急性淋巴母細胞白血病（all)細胞株 之細胞週期之影響的概述。 163053.doc -127· 201242598 圖6展示不同濃度化合物i對乳癌T47D及HS-578T細胞株 在48小時及72小時時之細胞生長之影響的圖解概述。 圖7展示不同濃度化合物I對卵巢IGR〇v_i及OVCAR-3細 胞株在48小時及72小時時之細胞生長之影響的圖解概述。 圖8展示化合物I對許多白血病及淋巴瘤細胞株中之Akt 填酸化之影響的概述。 圖9展示SDS-PAGE影像且顯示各種造血系統癌症細胞株 中之Akt及pAkt隨存在或不存在化合物I而變，從而顯示化 合物I會抑制Akt磷酸化。 圖1 〇展示乳癌細胞株中之凋亡細胞及活細胞群體隨不同 濃度之式I化合物而變的圖解概述，從而證明化合物會誘 導細胞凋亡。 圖11展示在經口投與50、100及2 00 mg劑量之化合物I之 後12小時期間健康人類個體血液中之該化合物的濃度。 圖12展示在用化合物I治療28天（1個週期）之後，診斷有 套細胞淋巴瘤之人類患者令之病變面積與治療前病變面積 的比較。 圖13展示在用式I化合物治療28天（1個週期）之後4週期間 患者血液中之ALC(絕對淋巴細胞計數）。 圖14展示相較於在第7天（D7)使用相同給藥時程或1〇〇 mg化合物1每天兩次（BID)給藥之正常健康志願者之血液中 的濃度，在第28天投藥（50 mg BID)之後6小時期間患有或 不患有套細胞淋巴瘤（MCL)之患者血液中的化合物I濃度。 圖15展示一組淋巴瘤及白血病細胞株中之PI3K同功異型 163053.doc -128- 201242598 物表現。 圖16 A展示暴露於化合物I之白血病細胞株之細胞存活率 及細胞凋亡資料。在圖16B中，膜聯蛋白染色指示經處理 細胞之細胞凋亡增加。 圖17A-D展示CLL患者細胞中之不同pi3K同功異型物表 現之PAGE結果。 圖18展示在化合物I存在下誘導（a)卡斯蛋白酶3及 (B)PARP分裂。 圖19展示暴露於化合物I引起不良預後患者之慢性淋巴 細胞性白血病（CLL)細胞之細胞;周亡增加，從而證明化合 物I在抗藥性患者中有效。 圖20展示暴露於式I化合物引起難治癒/復發患者之慢性 淋巴細胞性白血病（CLL)細胞之細胞凋亡增加。 圖21展示在0.1、1.0、10 μΜ化合物I不存在或存在下產 生磷酸化Akt之結果。 圖22展示關於嗜鹼性血球中之PI3K信號傳導之流動式細 胞測量結果，從而證明（Β)抗FCeRl或（c)fMLP相較於不刺 激（A)使CD63表現增強。 圖23展示嗜鹼性血球中由化合物I對PI3K抑制之抑制， 且證明化合物I不僅特別有效抑制由ρ110δ路徑誘導之CD63 表現’而且在微莫耳激度下有效抑制由ρ11〇γ路徑誘導之 表現。 圖24展示（Α)化合物I在不同劑量下單次劑量投與健康志 願者、及（Β)在12小時期間維持有效劑量之藥物動力學概 163053.doc -129· 201242598 況的藥物動力學資料。 圖25展示各種劑量之化合物I對（A)葡萄糖及（B)胰島素含 量之影響，展現很小脫靶活性。 圖26A展示一組DLBCL細胞株中之PI3K同功異型物表 現。 圖26B展示在化合物I存在或不存在下，DLBCL細胞株中 之 pAkt之 SDS-PAGE影像。 圖27展示在SDS-PAGE中，10 μΜ濃度之化合物I對ALL 細胞株中之Akt及S6磷酸化的影響。 圖28展示在用一系列化合物I稀釋液處理之後，Akt、S6 及GSK-3p磷酸化之降低具有劑量依賴性。 圖29展示化合物I對ALL細胞株具有下調cFLIP、分裂卡 斯蛋白酶3及分裂PARP的劑量依賴性作用。 圖30展示A)MM細胞株及B)患者MM細胞；及C)MM.1S 及LB細胞中之pi 10δ之表現。 圖31A展示用pll0δsiRNA(Si)或對照siRNA(模擬物）轉染 之LB及ΙΝΑ-6細胞中之ρΙΙΟδ的表現。 圖31Β展示在用ρΙΙΟδ siRNA(Si)或對照siRNA(模擬物）轉 染之後，INA-6細胞生長曲線圖。 圖3 1C展示與或不與化合物I 一起培養48小時之活細胞 %。 圖31D展示在與濃度為0至20 μΜ之化合物I一起培養48小 時後之活ΜΜ細胞％。 圖31Ε展示在與各種濃度之化合物I一起培養72小時之 163053.doc •130- 201242598 後’來自健康供血者之周邊血液活單核細胞％。 圖31F展示與化合物Ι(〇-5 μΜ)—起培養120小時之ΙΝΑ-6 細胞溶解產物的免疫墨點結果。 圖32展示在Α)ΙΝΑ-6細胞與化合物I或LY294002培養12小 時；Β)ΙΝΑ-6及MM.1S細胞與各種濃度之化合物I培養6小 時；C)LB及ΙΝΑ-6細胞與化合物I培養〇_6小時之後的免疫 墨點AKT及ERK表現概況。 圖33A展示用化合物I處理6小時之INA-6及LB MM細胞 及LC3累積之螢光及穿透電子顯微影像；箭頭指示自噬 體。 圖33B展示用5 μΜ化合物I處理或以血清饑餓處理6小時 之ΙΝΑ-6細胞之螢光顯微影像。 圖33C展示用或不用化合物I及3-ΜΑ(3 -曱基腺嘌呤，一 種已知的自噬抑制劑）處理之ΙΝΑ-6細胞中之LC3及beclin-1 蛋白質含量的免疫墨點。 圖33D展示在用高達1〇〇 μΜ 3-MA處理24小時後之ρΐ 10δ 陽性LB細胞生長％。 圖34展示在不同量之IL-6或IGF-1存在或不存在下與0、 5及10 μΜ之化合物I共培養之A)LB或B)INA-6細胞的生長 抑制程度；圖例：對照培養基（) ; 5.0 μΜ(·)或10 μΜ(ο) 之化合物I。 圖34C及34D展示在BMSC存在下之ΜΜ細胞生長抑制。 僅34C之圖例：對照培養基（□)、化合物I 2.5 μΜ禪）、5 μΜ (β)及 10 μΜ(·)。 163053.doc -131 - 201242598 圖34E展示與化合物I或對照培養基一起培養48小時之 BMSC之培養物上清液中之IL-6的免疫墨點。 圖34F展示與或不與BMSC—起培養之用化合物I處理之 INA-6細胞中的AKT及ERK表現概況之免疫墨點。 圖34G展示在與化合物I一起培養48小時之後，2名不同 患者中之BMSC細胞生長％。 圖35A展示與0、1及10 μΜ化合物I 一起培養8小時之 HuVEC(人類臍靜脈内皮細胞）及所評估之微管形成之顯微 影像。 圖35B展示概述用化合物I處理之HuVEC細胞中之内皮細 胞血管形成的柱狀圖。 圖3 5C展示HuVEC細胞生長％隨化合物I之培養濃度遞增 而變的圖。 圖35D展示在與化合物I一起培養8小時之後，HuVEC細 胞溶解產物之Akt及ERK表現降低。 圖36A圖示用0、10 mg/kg或30 mg/kg化合物II處理之具 有人類MM異種移植物之SCID小鼠中的腫瘤體積隨時間而 變，顯示對人類異種移植腫瘤具有強活體内活性。 圖36B展示比較化合物II處理12天之小鼠上之人類MM異 種移植物腫瘤與對照小鼠腫瘤之像片。 圖36C展示用0、10及30 mg/kg化合物II處理之具有人類 MM異種移植物之SCID小鼠隨時間的存活率。 圖36D展示自化合物II處理小鼠收集之腫瘤的免疫組織 化學分析影像與對照腫瘤的比較；其中CD3 1及P-AKT陽性 163053.doc -132- 201242598 細胞為深棕色。 圖36E展示偵測自化合物II處理小鼠收集之腫瘤組織之 PDK-1及AKT含量的免疫墨點與對照腫瘤的比較。 圖36F展示在4週處理期間所量測之用0、10 mg/kg或30 mg/kg化合物II處理之小鼠中之sIL6R含量的圖，如藉由 ELISA測定。 圖37A展示在用化合物I及不同量之硼替佐米（B)處理之 後，活LB或INA-6 MM細胞％ ;圖例：培養基（_)、化合物I 1.25 μΜ_)、2·5 μΜ(®)或 5.0 μΜ(α)。 圖3 7Β展示比較用化合物I及/或硼替佐米處理6小時之 INA-6細胞中之AKT磷酸化程度的免疫墨點。 圖3 8展示（A)—組濾泡性淋巴瘤細胞株中之PI3K同功異 型物表現；（B)在暴露於化合物I之後，pAkt、Akt、pS6及 S6之表現降低；及（C)在暴露於化合物I之後PARP及卡斯蛋 白酶-3分裂以劑量依賴性方式增強。 圖39展示（A)在各種量之化合物I存在下，初級MCL細胞 中之組成性PI3K信號傳導之量；（B)含有存活因子及不同 量之化合物I之MCL細胞株中的pAkt產生降低。 圖40展示（A)在用化合物I治療之前及（B)在用化合物I治 療1個週期之後CLL患者中之龐大淋巴腺病變的電腦斷層 攝影術腋部影像。 圖41展示ΡΙ3Κδ路徑之組成性活化驅動iNHL及CLL中之 惡性B細胞增殖、存活及異常移行（trafficking)。 圖42展示涉及20名患有惰性非霍奇金淋巴瘤（iNHL)及慢 163053.doc -133- 201242598 性淋巴細胞性白血病（CLL)之患者之研究中之患者特徵及 治療配置的彙總表。 圖43展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R)組 合投與iNHL或CLL患者之研究中之安全性概況的彙總表。 圖44展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R)組 合投與iNHL或CLL患者之功效的圖解概述。 圖45展示在式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R) 組合投與時，iNHL或CLL患者之反應率的彙總表。 圖46展示向CLL患者僅投與式I化合物作為單一藥劑之研 究中之淋巴細胞計數的圖解概述。 圖47展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R)組 合投與CLL患者之研究中之淋巴細胞計數的圖解概述。 圖48A展示描述在用式I化合物、苯達莫司汀或兩種藥物 組合處理之後，CLL細胞存活率之等高線圖。圖48B展示 描述用式I化•合物（5 μΜ)、苯達莫司汀（10 μΜ)或藥物組合 處理之CLL細胞之平均相對存活率的圖（平均值士SEM， η=4) 〇 圖49Α展示細胞中之ΡΙ3Κδ酶促活性隨暴露於來那度胺 及不同量之式I化合物而變之圖解概述。 圖49Β及49C展示顯示來那度胺及/或式I化合物對CD19 + 細胞中之磷酸化之影響的免疫墨點分析影像。 圖49D及49Ε展示顯示轉染siRNA或無意義siRNA對 CD 19+細胞中之蛋白質表現之影響的免疫墨點分析影像。 圖50八展示來那度胺及/或式1化合物對（：]：1^患者€〇19 +細 163053.doc -134- 201242598 胞表面表現CD40、CD86之影響的圖解概述。 圖508展示來那度胺及/或式1化合物對（：[[患者〇〇19 +細 胞表現CD40、CD86及CD154mRNA之影響的圖解概述。 圖50(：展示來那度胺及/或式1化合物對(：1^患者€〇19 +細 胞中之CD20之影響的圖解概述。 圖50D展示來那度胺及/或式I化合物對CLL患者CD19+細 胞中之IgM濃度之影響的圖解概述。 圖5 0E及50F展示來那度胺及/或式I化合物對CLL患者 CD 19+細胞表現細胞激素mRNA之影響的圖解概述。 圖5 1展示涉及49名患有惰性非霍奇金淋巴瘤（iNHL)及慢 性淋巴細胞性白血病（CLL)之患者之研究中之患者特徵及 治療配置的彙總表。 圖52展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R)組 合投與iNHL或CLL患者之研究中之安全性概況的彙總表。 圖53 A展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R) 組合投與iNHL患者之功效的圖解概述。 圖53B展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R) 組合投與CLL患者之功效的圖解概述。 圖54展示在式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R) 組合投與後，iNHL或CLL患者之反應率的彙總表。 圖55展示向CLL患者僅投與式I化合物作為單一藥劑之研 究中之淋巴細胞計數的圖解概述。 圖56展示式I化合物與苯達莫司汀（B)或利妥昔單抗（R)組 合投與CLL患者之研究中之淋巴細胞計數的圖解概述。 163053.doc •135· 201242598 圖57A展示描述在用式I化合物、苯達莫司汀、氟達拉 濱、地塞米松或組合藥物處理之後48小時，CLL細胞存活 率之等高線圖。圖57B展示描述用式I化合物（5 μΜ)、苯達 莫司汀（10 μΜ)、氟達拉濱（10 μΜ)、地塞米松（10 μΜ)或組 合藥物處理之CLL細胞之平均相對存活率的柱狀圖（平均值 土SEM，η=9)。 圖58Α展示定量粒線體去極化的圖，粒線體去極化係由 周邊血液CLL細胞中最終濃度為0.03 μΜ之ΒΙΜ ΒΗ3肽誘 導，該等CLL細胞之ΒΗ3概況已藉由FACS進行分析 (n=3 0)。圖58B展示來自3名個別患者的BH3概況，其顯示 主要依賴於BCL2 ' Mcl-1及Bcl-XL之樣式。圖58C為展示 根據2008 IW-CLL準則達成部分反應（PR)或完全反應（CR) 之未治療患者與在完成前線CLL療法之6個月期間或6個月 内患有進行性疾病（PD)之患者中之BIM去極化比較的亂 (p = 0.024)。圖58D為展示具有未突變IGHV狀態之患者 (n=7)與具有突變IGHV狀態之患者（n=18)中之BIM去極化 比較的圖（p=0.0026)。圖58E為展示與生殖系同源之VH百 分比與激活程度之間相關性之圖（ρ=0·0043)。 圖59Α及59Β展示描述分別在24小時及1小時時藉由全孔 螢光測定術定量之CLL細胞黏著的圖（單尾ρ分別=0.045及 0.032)。圖59C展示描述CLL細胞存活率的圖，如藉由在 StromaNKTert存在或不存在下與如圖中描述之藥物療法共 培養24小時之PB源性CLL細胞之膜聯蛋白V/PI所評估。圖 59D展示在ABT-737存在下與或不與StromaNKTert—起及 163053.doc -136· 201242598 與或不與化合物I 一起培養24小時之CLL細胞的劑量反應曲 線。圖59E展示在ABT-263存在下與或不與StromaNKTert — 起及與或不與化合物I 一起培養之CLL細胞的劑量反應曲 線。 圖60A展示所有四個患者樣品之總CLL細胞之細胞凋亡 百分比，如藉由膜聯蛋白V/PI量測。圖60B展示描述用化 合物I處理之基質暴露CLL細胞中之粒線體去極化與對照物 比較的圖（單尾ρ=0·0749)。圖60C展示描述用BAD BH3肽 及ABT-737與化合物I一起處理基質暴露CLL細胞中之粒線 體去極化與對照物比較的圖（單尾p分別=0.0462及 0.0468) ° 163053.doc -137·

Claims (1)

  1. 201242598 七、申請專利範圍： 1. -種治療癌症之方法，其包括向需要此治療之個體投與 有效量之式A化合物，
    V 其中R為H、齒基或C1_C6燒基；R，為cic6烧基；或 其醫藥學上可接受之鹽；及 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 或夕種其他治療劑，視情況選自由笨達莫司汀 (bendamUSUne)、利妥昔單抗（rituximab)、來那度胺 (nalidomide)及奥法木單抗（〇fatumumab)組成之群。 2. 如請求項1之方法，其中該化合物為 3. 如請求項1之方法 4. 如
    其中該化合物為
    4主+、 叫 〜石去，其中該癌症為血液惡性腫 瘤 163053.doc 201242598 5.如请求項4之方法 瘤0 其中該血液惡性腫瘤為B細胞惡性腫 其中該血液惡性腫瘤為白血病或淋 6.如請求項4之方法 巴瘤。 如請求項1之方汰 , ’其中該癌症為慢性淋巴細胞性白血 病（CLL)或非靂 <么& & 寸金氏淋巴瘤（non-Hodgkin's lymphoma， NHL)。 8 ·如请求項1之方法，立士分卢 去其中该癌症為惰性非霍奇金氏淋巴 瘤（iNHL) 〇 如凊求項1之方法’其中該化合物及該一或多種治療劑 在至少-個週期期間各自投與至少一次，且其中該一或 多種療劑係在與投與該化合物相同或不同之週期内投 與該個體》 10.如請求項9之方法’其中該週期為7至42天。 11‘如請求項9之方法’其中該-或多種治療劑係在至少一 個週期之至少第一及第二天投與該個體。 12.如請求項9之方法，苴中坊_ 击其中該一或多種治療劑係在至少一 個週期期間每週投與該個體。 如請求項丨至8中任一項之方 甲每天兩次向該個體 投與50 mg至200 mg之間的該化合物。 14·如請求項1至8中任一項之方法 mg/m2至 1，5〇〇 mg/m2之間的該一 15. 如請求項1至8中任一項之方法， 含該化合物及至少一種醫藥學上 ’其中向該個體投與5〇 或多種治療劑。 其中該化合物存在於包 可接受之賦形劑之醫藥 163053.doc 201242598 組合物中。 16. 如請求項1至8申任一項之方法，其中該個體對標準化學 治療性療法具有抗性。 17. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該個體具有至少一 個腫大淋巴結。 18. 如請求項1至8中任一項之方法，其中該個體i)為至少一 種化學療法治療所難治癒，或Π)在化學療法治療之後復 發，或其組合。 19. 一種治療患有B細胞病症之個體之方法，其包含： a)鑑別患有B細胞惡性腫瘤之個體，其中該個體為至 少一或多種療法所難治癒或在至少一或多種療法之後復 發，該一或多種療法選自由以下組成之群：硼替佐米 (bortezomib)(Velcade®) > 卡菲佐米（carfilzomib)(PR-171)、PR-047、雙硫侖（disulfiram)、雷克塔西汀 (lactacystin)、PS-5 19、依波尼黴素（eponemycin)、環氧 黴素（epoxomycin)、阿克拉黴素（aclacinomycin)、CEP-1612、MG-132、CVT-63417、PS-341、乙烯颯三肽抑制 劑、利托那韋（ritonavir)、PI-083、（+/-)-7-甲基奥姆拉德 ((+/-)-7-methylomuralide)、（-)-7-甲基奥姆拉德、派瑞福 松（perifosine)、利妥昔單抗、西地那非棒檬酸鹽 (sildenafil citrate)(Viagra®)、CC-5103、沙立度胺（thalidomide)、 伊拉妥珠單抗（epratuzumab)(hLL2-抗CD22人類化抗 體）、辛伐他 ί丁（simvastatin)、恩紮妥林（enzastaurin)、 Campath 1H®、地塞米松（dexamethasone)、DT PACE、 163053.doc 201242598 奥利默森（oblimersen)、抗新普拉通 Al〇(antineoplaston A10)、抗新普拉通AS2 1、阿萊珠單抗（alemtuzumab)、β 阿立辛（beta alethine)、環填酿胺（cyclophosphamide)、小 紅莓鹽酸鹽（doxorubicin hydrochloride)、聚乙二醇化月旨 質體小紅每鹽酸鹽、潑尼松（prednisone)、潑尼龍 (prednisolone)、克拉屈濱（cladribine)、長春新驗硫酸鹽 (vincristine sulfate)、達拉濱（fludarabine)、非格司亭 (filgrastim)、美法侖（melphalan)、重組干擾素α、卡莫司 *汀（carmustine)、順始（cisplatin)、環碳醯胺、阿糖胞苷 (cytarabine)、依託泊苷（etoposide)、美法侖、海兔毒素 10(dolastatin 10)、銦 In 111 單株抗體 MN-14、纪Y 90 人 類化伊拉妥珠單抗（epratuzumab)、抗胸腺細胞球蛋白 (anti-thymocyte globulin)、白消安（busulfan)、環抱素 (cyclosporine)、曱胺喘呤（methotrexate)、黴紛酸嗎淋乙 酯（mycophenolate mofetil)、治療性同種異體淋巴細胞' 在乙 Y 90替坦異貝莫單抗（Yttrium Y 90 ibritumomab tiuxetan)、 西羅莫司（sirolimus)、他克莫司（tacrolimus)、卡翻 (carboplatin)、塞替派（thiotepa)、太平洋紫杉醇 (paclitaxel)、阿地介白素（aldesleukin)、重組干擾素a、 歐洲紫杉醇（docetaxel)、異環填酿胺（ifosfamide)、美司 納（mesna)、重組介白素-12(recombinant interleukin-12) 、 重組 介白素 -11 、 Bcl-2 家族 蛋白質 抑制劑 ABT-263、地尼介白素融合毒素（denileukin diftitox)、坦螺旋 黴素（tanespimycin)、依維莫司（everolimus)、聚乙二醇 163053.doc 201242598 化非格司亭（pegHlgrastim)、伏立諾他（vorinostat)、阿伏 西地（alvocidib)、重組flt3配位體、重組人類血小板生成 素（thrombopoietin)、淋巴激素（lymphokine)活化殺手細 胞、胺鱗汀三水合物（amifostine trihydrate)、胺基喜樹 驗（aminocamptothecin)、伊立替康鹽酸鹽（irinotecan hydrochloride)、卡泊芬淨乙酸鹽（caspofungin acetate)、 克羅拉濱（clofarabine)、阿法依伯汀（epoetin alfa)、奈拉 濱（nelarabine)、喷司他汀（pentostatin)、沙格司亭 (sargramostim)、長春瑞賓酒石酸氫鹽（vinorelbine ditartrate)、WT-1類似物肽疫苗、WT1 126-134肽疫苗、 維曱醯盼胺（fenretinide)、伊沙匹隆（ixabepilone)、奥赛 力鉑（oxaliplatin)、單株抗體CD19、單株抗體CD20、ω-3 脂肪酸、米托蒽S昆鹽酸鹽（mitoxantrone hydrochloride)、 奥曲肽乙酸鹽（octreotide acetate)、托西莫單抗 (tositumomab)及埃I 13 1托西莫單抗、莫特沙芬亂 (motexafin gadolinium)、三氧化二石申（arsenic trioxide)、 替皮法尼（tipifarnib)、自體性人類腫瘤源性HSPPC-96、 維妥珠單抗（veltuzumab)、苔蘇蟲素1 (bryostatin 1)、抗 CD20單株抗體、苯丁酸氮茶（chlorambucil)、喷司他，汀 (pentostatin)、魯昔單抗（lumiliximab)、阿泊珠單抗 (apolizumab)、抗CD40、奥法木單抗、天西羅莫司 (temsirolimus)、苯達莫司汀（bendamustine)、嗓吟類似 物、來那度胺（lenalidomide)、烧基化劑及含蒽環黴素 (anthracycline)療法或其組合； 163053.doc 201242598 b)向需要此治療之個體投與式〖"化合物
    (I") V-NH 或其醫藥學上可接受之鹽；及 視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑；及 或多種其他治療劑，視情況選自由苯達莫司汀、利 妥昔單抗、來較胺及奥法木單抗組成之群。 20. 21. 22. 如清求項19之方法，其中該個體係為至少一或多種療法 所難治癒或在至少一或多種療法後復發，該一或多種療 法選自由以下組成之群：利妥昔單抗烧基化劑、敗達 拉濱及含蒽環黴素（anthraeyeline)療法及其組合。 如4求項19之方法’其中在至少一或多個週期期間每天 兩次向該個體投與50 mg與200 mg之間的該化合物。 如凊求項19或20之方法，其中在至少一或多個週期期間 向該個體投與50 1118/1112至15〇〇 mg/m2之間的該—或多種 其他治療劑至少-次，其中該一或多種治療劑係在與投 與該化合物相同或不同之週期内投與該個體。 163053.doc
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI820146B (zh) * 2018-06-15 2023-11-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 嘌呤酮化合物及其在治療癌症中之用途

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2531142T3 (es) 2005-10-17 2015-03-11 Sloan Kettering Inst Cancer Péptidos WT1 de unión a HLA de clase II, y composiciones y métodos que los comprenden
WO2007120673A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof
US9259399B2 (en) 2007-11-07 2016-02-16 Cornell University Targeting CDK4 and CDK6 in cancer therapy
US8193182B2 (en) 2008-01-04 2012-06-05 Intellikine, Inc. Substituted isoquinolin-1(2H)-ones, and methods of use thereof
MY191407A (en) 2008-01-04 2022-06-27 Intellikine Llc Certain chemical entities, compositions and methods
CN104042618B (zh) 2008-11-13 2018-02-16 吉利德卡利斯托加公司 恶性血液病的治疗
US9492449B2 (en) 2008-11-13 2016-11-15 Gilead Calistoga Llc Therapies for hematologic malignancies
DK2663309T3 (en) 2011-01-10 2017-06-19 Infinity Pharmaceuticals Inc METHODS FOR PRODUCING ISOQUINOLINONES AND SOLID FORMS OF ISOQUINOLINONES
CN104684577B (zh) 2012-01-13 2018-05-08 纪念斯隆凯特林癌症中心 免疫原性wt-1肽及其使用方法
US9737521B2 (en) 2012-11-08 2017-08-22 Rhizen Pharmaceuticals Sa Pharmaceutical compositions containing a PDE4 inhibitor and a PI3 delta or dual PI3 delta-gamma kinase inhibitor
US10815273B2 (en) 2013-01-15 2020-10-27 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
PT2945647T (pt) 2013-01-15 2020-11-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Péptidos imunogénicos wt-1 e métodos de uso dos mesmos
CN105142656B (zh) * 2013-03-12 2019-05-10 大日本住友制药株式会社 水性液体组合物
CN103271897A (zh) * 2013-06-04 2013-09-04 李春启 美司那在制备抗血管生成类药物中的应用
ES2535452B1 (es) * 2013-08-02 2016-03-02 Dalana3 S.L. Potenciación del efecto del metotrexato mediante el uso combinado con estatinas lipofílicas
US20150148345A1 (en) * 2013-11-26 2015-05-28 Gilead Sciences, Inc. Therapies for treating myeloproliferative disorders
WO2015160975A2 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
EP3148532B1 (en) 2014-05-28 2021-03-03 Piramal Enterprises Limited Pharmaceutical combination comprising a cdk inhibitor and a thioredoxin reductase inhibitor for the treatment of cancer
CU24428B1 (es) 2014-07-04 2019-06-04 Lupin Ltd Derivados de quinolizinona como inhibidores de pi3k
CN105380956B (zh) * 2015-11-04 2017-12-19 张陆军 一种治疗白血病的含艾德拉尼的药物组合物及应用
WO2017223422A1 (en) * 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
SG11202003956TA (en) 2017-11-30 2020-06-29 Singapore Health Serv Pte Ltd A system and method for classifying cancer patients into appropriate cancer treatment groups and compounds for treating the patient
CN112569342A (zh) * 2020-12-21 2021-03-30 中南大学 卡泊芬净和/或其可药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用及抗肿瘤药物
CN116019798B (zh) * 2022-07-20 2024-03-12 中南大学湘雅二医院 苯乙酰谷氨酰胺在制备预防和/或治疗阿霉素所致心脏毒性的药物中的应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2567883A1 (en) * 2004-05-25 2005-12-15 Icos Corporation Methods for treating and/or preventing aberrant proliferation of hematopoietic cells
CN104042618B (zh) * 2008-11-13 2018-02-16 吉利德卡利斯托加公司 恶性血液病的治疗
MX2011011036A (es) * 2009-04-20 2012-01-20 Gilead Calistoga Llc Metodos de tratamiento para tumores solidos.
NZ789041A (en) * 2010-06-03 2023-09-29 Pharmacyclics Llc The use of inhibitors of bruton’s tyrosine kinase (btk)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI820146B (zh) * 2018-06-15 2023-11-01 瑞典商阿斯特捷利康公司 嘌呤酮化合物及其在治療癌症中之用途

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Publication number Publication date
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