JP2016206190A - 分析方法 - Google Patents
分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016206190A JP2016206190A JP2016083850A JP2016083850A JP2016206190A JP 2016206190 A JP2016206190 A JP 2016206190A JP 2016083850 A JP2016083850 A JP 2016083850A JP 2016083850 A JP2016083850 A JP 2016083850A JP 2016206190 A JP2016206190 A JP 2016206190A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- labeled
- stratum corneum
- stable isotope
- susceptible
- ion suppression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 116
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims abstract description 62
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 34
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 238000000752 ionisation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 claims description 63
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 33
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 33
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 30
- 239000010410 layer Substances 0.000 claims description 15
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 claims description 13
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 claims description 13
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 10
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims description 10
- 239000004820 Pressure-sensitive adhesive Substances 0.000 claims description 9
- 238000000688 desorption electrospray ionisation Methods 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 abstract description 41
- 239000010422 internal standard material Substances 0.000 abstract description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 56
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 53
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 40
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 25
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000019624 protein content Nutrition 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 8
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 5
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 3
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 3
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 229940079889 pyrrolidonecarboxylic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229910052715 tantalum Inorganic materials 0.000 description 3
- GUVRBAGPIYLISA-UHFFFAOYSA-N tantalum atom Chemical compound [Ta] GUVRBAGPIYLISA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000838 Al alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 2
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 210000000245 forearm Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 2
- 229910001120 nichrome Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000623 nickel–chromium alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003870 refractory metal Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920002050 silicone resin Polymers 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 2
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 2
- 229940045136 urea Drugs 0.000 description 2
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 2
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000004696 Poly ether ether ketone Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001698 laser desorption ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052758 niobium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010955 niobium Substances 0.000 description 1
- GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N niobium atom Chemical compound [Nb] GUCVJGMIXFAOAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920002530 polyetherether ketone Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 210000002374 sebum Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N silicon carbide Chemical compound [Si+]#[C-] HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- LOIYMIARKYCTBW-UHFFFAOYSA-N trans-urocanic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CNC=N1 LOIYMIARKYCTBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOIYMIARKYCTBW-OWOJBTEDSA-N trans-urocanic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CNC=N1 LOIYMIARKYCTBW-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
所定の間隔で切れ目が入れられている複数の粘着テープを用いて、皮膚から、複数層の角層を剥離する。
剥離された角層中のタンパク質の含有量を測定する。
角層を剥離した粘着テープを切れ目の間隔に対応する幅で切断した後、切断された粘着テープの角層が固定されている側と反対側の面を、所定の間隔を隔てて柱状部材に固定する。
柱状部材20に固定された、切断された粘着テープ10'に所定量の内部標準物質を供給する。
切断された粘着テープ10'が固定されている柱状部材20を移動させながら、角層から生成したイオンを質量分析する。
DART又はDESIを用いて、所定量のアミノ酸及び内部標準物質から生成したイオンを質量分析することにより、検量線を作成することができる。
3枚の刃が2mm間隔で固定されているカッターを用いて、上面が直径が22mmの円状の粘着テープD−Squame disc(CuDerm社製)に切れ目11を3本入れ、粘着テープ10を得た。
直角を挟む二辺の長さが10mm、高さが160mmの直角二等辺三角柱状の石英製のプリズム(藤原製作所社製)の高さ方向Hに対して平行に、3mm×60mmの両面テープ21を、角部Cを挟む間隔が14mmとなるように2枚固定し、柱状部材20(N=15)を得た。
(検量線作成用試料の水溶液の調製)
安定同位体で標識されていない、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、グルタミン、リジン、チロシン、ヒスチジン、セリン(以上、和光純薬社製)と、安定同位体で標識されているグリシン、リジン(以上、純正科学社製)を、それぞれ所定の濃度になるように純水中に溶解させ、5種類の検量線作成用試料の水溶液を得た。なお、各検量線作成用試料の水溶液における安定同位体で標識されていない、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、グルタミン、リジン、チロシン、ヒスチジン、セリンの濃度は、それぞれ1μg/mL、2.5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mLである。また、各検量線作成用試料の水溶液における安定同位体で標識されているグリシン、リジンの濃度は、それぞれ10μg/mLである。
安定同位体で標識されているグリシン(14Nが15Nにより置換されているグリシン)(純正科学社製)と安定同位体で標識されているリジン(2個の14Nが15Nにより置換されているリジン)(純正科学社製)を、濃度がそれぞれ10μg/mLになるように純水中に溶解させ、内部標準物質の水溶液を得た。
3枚の刃が2mm間隔で固定されているカッターを用いて、上面が直径が22mmの円状の粘着テープD−Squame disc(CuDerm社製)を、粘着テープ10に対応するように、幅が2mmの短冊状に切断した。
前腕屈側部を洗浄した後、乾燥させた。次に、粘着テープ10を用いて、前腕屈側部から10層の角層を剥離した。
D−squame Scan 850A(CuDerm社)を用いて、1〜10層目の角層を剥離した粘着テープ10の単位面積当たりのタンパク質の含有量[μg/cm2]を測定した。次に、切断された粘着テープ10'の面積[cm2]を用いて、1〜10層目の角層の切断された粘着テープ10'の1枚当たりのタンパク質の含有量[μg]を算出した。
10層の角層を剥離した粘着テープ10の切れ目11の根元部分を切断し、幅が2mmの矩形状の切断された粘着テープ10'を得た。次に、1〜10層目の角層を剥離した、切断された粘着テープ10'を、担体10a側の面が両面テープ21に接着するように、柱状部材20に10mmピッチで固定した。
柱状部材20に固定された、切断された粘着テープ10'に、内部標準物質の水溶液を1μLずつ添加した後、30分間乾燥させた。
検量線の作成と同様にして、柱状部材20に固定された、切断された粘着テープ10'から生成したイオンを順次質量分析した。次に、1〜10層目の角層の抽出クロマトグラムのピーク面積比を算出した後、検量線を用いて、1〜10層目の角層の切断された粘着テープ10'の1枚当たりの各アミノ酸の含有量を求めた。ここで、角層の抽出クロマトグラムのピーク面積比は、各粘着テープ10'毎に算出された、安定同位体で標識されているグリシン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されておらず、イオンサプレッションを受けやすいアミノ酸のピークの面積の比及び安定同位体で標識されているリジン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されておらず、イオンサプレッションを受けにくいアミノ酸のピークの面積の比である。さらに、1〜10層目の角層の切断された粘着テープ10'の1枚当たりのタンパク質の含有量を用いて、1〜10層目の角層中のタンパク質の含有量に対するアミノ酸の含有量の比を算出した。
(検量線作成用試料の水溶液の調製)
安定同位体で標識されていない、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、グルタミン、リジン、チロシン、ヒスチジン、セリン(以上、和光純薬社製)を、それぞれ所定の濃度になるように純水中に溶解させ、5種類の検量線作成用試料の水溶液を得た。なお、各検量線作成用試料の水溶液における安定同位体で標識されていない、グリシン、アラニン、プロリン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、グルタミン、リジン、チロシン、ヒスチジン、セリンの濃度は、それぞれ1μg/mL、2.5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mLである。
得られた検量線作成用試料の水溶液を用いた以外は、実施例1と同様にして、質量分析した。
10a 担体
10b 粘着剤層
11 切れ目
10' 切断された粘着テープ
20 柱状部材
21 両面テープ
100 サンプルステージ
200 DARTイオン源
300 質量分析計
310 イオン導入管
311 抵抗発熱線
大気圧イオン化法を用いて、該内部標準物質が供給された試料から生成したイオンを質量分析する工程と、を有し、前記安定同位体で標識されたグリシン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されていない、イオンサプレッションを受けやすいアミノ酸由来のピークの面積の比、及び/又は前記安定同位体で標識されたリジン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されていない、イオンサプレッションを受けにくいアミノ酸由来のピークの面積の比を用いて、前記角層に含まれるアミノ酸を定量分析し、前記イオンサプレッションを受けやすいアミノ酸が、アラニン、プロリン、バリン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、及びグルタミンから選択される少なくとも1つであり、前記イオンサプレッションを受けにくいアミノ酸が、チロシン、ヒスチジン、及びセリンから選択される少なくとも1つである。
Claims (7)
- 皮膚に含まれる成分を定量分析する方法であって、
皮膚から採取された試料に、安定同位体で標識されたイオンサプレッションを受けやすい化合物及び/又は安定同位体で標識されたイオンサプレッションを受けにくい化合物を含む所定量の内部標準物質を供給する工程と、
大気圧イオン化法を用いて、該内部標準物質が供給された試料から生成したイオンを質量分析する工程と、
を有することを特徴とする分析方法。 - 前記皮膚に含まれる成分は、角層に含まれるアミノ酸であり、
前記イオンサプレッションを受けやすい化合物は、グリシンであり、
前記イオンサプレッションを受けにくい化合物は、リジンであることを特徴とする請求項1に記載の分析方法。 - 前記安定同位体で標識されたグリシン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されていない、イオンサプレッションを受けやすいアミノ酸由来のピークの面積の比、及び/又は前記安定同位体で標識されたリジン由来のピークの面積に対する、安定同位体で標識されていない、イオンサプレッションを受けにくいアミノ酸由来のピークの面積の比を用いて、前記角層に含まれるアミノ酸を定量分析することを特徴とする請求項2に記載の分析方法。
- 表面に粘着剤層が形成されている担体を用いて、前記皮膚から角層を剥離する工程と、
該角層を剥離した担体を所定の幅で切断する工程と、
該切断された担体の前記角層が固定されている側と反対側の面を、所定の間隔を隔てて柱状部材に固定する工程をさらに有し、
該切断された担体が固定されている柱状部材を移動させながら、前記角層から生成したイオンを質量分析することを特徴とする請求項2に記載の分析方法。 - 前記角層中のタンパク質の含有量を測定する工程をさらに有し、
該タンパク質の含有量が測定された角層に前記所定量の内部標準物質を供給することを特徴とする請求項2に記載の分析方法。 - 前記大気圧イオン化法は、DART又はDESIであることを特徴とする請求項1に記載の分析方法。
- 皮膚に含まれる成分の定量分析に用いられる内部標準物質であって、
安定同位体で標識されたイオンサプレッションを受けやすい化合物及び/又は安定同位体で標識されたイオンサプレッションを受けにくい化合物を含むことを特徴とする内部標準物質。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/JP2016/062540 WO2016171182A1 (ja) | 2015-04-24 | 2016-04-20 | 分析方法及び内部標準物質 |
TW105112721A TW201702595A (zh) | 2015-04-24 | 2016-04-22 | 分析方法及內部標準物質 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015089520 | 2015-04-24 | ||
JP2015089520 | 2015-04-24 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016206190A true JP2016206190A (ja) | 2016-12-08 |
JP6101385B2 JP6101385B2 (ja) | 2017-03-22 |
Family
ID=57489691
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016083850A Active JP6101385B2 (ja) | 2015-04-24 | 2016-04-19 | 分析方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6101385B2 (ja) |
TW (1) | TW201702595A (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106970168A (zh) * | 2017-05-03 | 2017-07-21 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | Dart‑ms法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007503818A (ja) * | 2003-08-29 | 2007-03-01 | パーキンエルマー ラス インコーポレイテッド | 代謝酵素活性及び代謝産物レベルの同時検出のための質量分析法 |
JPWO2009151091A1 (ja) * | 2008-06-13 | 2011-11-17 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | アルツハイマー病の検査方法 |
JP2014013201A (ja) * | 2012-07-04 | 2014-01-23 | Shiseido Co Ltd | 成分分布可視化装置、成分分布可視化方法、及び成分分布可視化プログラム |
JP2014206488A (ja) * | 2013-04-15 | 2014-10-30 | 株式会社 資生堂 | 分析方法 |
JPWO2013012028A1 (ja) * | 2011-07-21 | 2015-02-23 | 和光純薬工業株式会社 | 血漿中アミノ酸分析用標準液 |
-
2016
- 2016-04-19 JP JP2016083850A patent/JP6101385B2/ja active Active
- 2016-04-22 TW TW105112721A patent/TW201702595A/zh unknown
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007503818A (ja) * | 2003-08-29 | 2007-03-01 | パーキンエルマー ラス インコーポレイテッド | 代謝酵素活性及び代謝産物レベルの同時検出のための質量分析法 |
JPWO2009151091A1 (ja) * | 2008-06-13 | 2011-11-17 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | アルツハイマー病の検査方法 |
JPWO2013012028A1 (ja) * | 2011-07-21 | 2015-02-23 | 和光純薬工業株式会社 | 血漿中アミノ酸分析用標準液 |
JP2014013201A (ja) * | 2012-07-04 | 2014-01-23 | Shiseido Co Ltd | 成分分布可視化装置、成分分布可視化方法、及び成分分布可視化プログラム |
JP2014206488A (ja) * | 2013-04-15 | 2014-10-30 | 株式会社 資生堂 | 分析方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
特許庁標準技術集平成17年度「質量分析技術(マススペクトロメトリー)」, vol. 2-6-1, JPN6016025477, 12 May 2006 (2006-05-12), pages 183 - 186, ISSN: 0003350942 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TW201702595A (zh) | 2017-01-16 |
JP6101385B2 (ja) | 2017-03-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ruzsanyi et al. | Detection of human metabolites using multi-capillary columns coupled to ion mobility spectrometers | |
US7968842B2 (en) | Apparatus and systems for processing samples for analysis via ion mobility spectrometry | |
Shen et al. | Mass imaging of ketamine in a single scalp hair by MALDI-FTMS | |
US20130299688A1 (en) | Techniques for analyzing mass spectra from thermal desorption response | |
Song et al. | Rectilinear ion trap mass spectrometer with atmospheric pressure interface and electrospray ionization source | |
JP4821970B2 (ja) | 肌質の評価方法 | |
Arce et al. | Sample-introduction systems coupled to ion-mobility spectrometry equipment for determining compounds present in gaseous, liquid and solid samples | |
Kleeblatt et al. | Detection of gaseous compounds by needle trap sampling and direct thermal-desorption photoionization mass spectrometry: concept and demonstrative application to breath gas analysis | |
Wright | Metabolite identification by mass spectrometry: forty years of evolution | |
CN106198704A (zh) | 一种用于离子迁移谱的定量分析方法 | |
JP5970246B2 (ja) | 分析方法及び分析キット | |
Wissdorf et al. | Simulation of ion motion at atmospheric pressure: particle tracing versus electrokinetic flow | |
JP6101385B2 (ja) | 分析方法 | |
Kim et al. | In-line coupling of single-drop microextraction with capillary electrophoresis-mass spectrometry | |
JP6199592B2 (ja) | 分析方法 | |
Rahman et al. | Direct analysis of aqueous solutions and untreated biological samples using nanoelectrospray ionization mass spectrometry with pipette tip in series with high-ohmic resistor as ion source | |
JP2009231066A (ja) | 質量分析装置 | |
Dai et al. | Identification and quantification of four anthraquinones in rhubarb and its preparations by gas chromatography–mass spectrometry | |
WO2016171182A1 (ja) | 分析方法及び内部標準物質 | |
Inoue et al. | Rapid on-site air sampling with a needle extraction device for evaluating the indoor air environment in school facilities | |
Yang et al. | Ultrasensitive detection of volatile aldehydes with chemi-ionization-coupled time-of-flight mass spectrometry | |
Moon et al. | Investigations of some liquid matrixes for analyte quantification by MALDI | |
Alimpiev et al. | New approaches to the laser mass spectrometry of organic samples | |
BR112016026459B1 (pt) | Métodos para determinar a quantidade de norendoxifeno e para determinar a quantidade de tamoxifeno e metabólitos do mesmo em uma amostra humana por espectrometria de massas | |
Gong et al. | Quantitative analysis of exhaled breath collected on filter substrates via low-temperature plasma desorption/ionization mass spectrometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160901 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170207 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170224 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6101385 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |