JP2016106562A - 麹菌変異株、形質転換体及び糖化酵素の生産方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】麹菌変異株は、フルフラール含有培地でアスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)AOK27L株を培養して変異させ、前記培地で生育する菌を選択し、フルフラール耐性を備える。麹菌変異株は、例えば、アスペルギルス・オリゼHO−FR株(受託番号:NITE BP−01953)である。形質転換体は、前記麹菌変異株に、糖化酵素遺伝子が導入されたものである。糖化酵素の生産方法は、前記麹菌変異株又は前記形質転換体を、固体培養して糖化酵素を生成させる。
【選択図】図1
Description
本実施形態の麹菌変異株は、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)AOK27L株(株式会社秋田今野商店より入手可能)を変異させたものであり、フルフラール耐性を備えている。前記AOK27L株は、固体培養した際の糖化酵素の生産効率が、他のアスペルギルス・オリゼよりも優れている。
本実施形態の形質転換体は、前記糖化酵素遺伝子が、麹菌変異株の染色体外の染色体外遺伝子として保持されていてもよいが、糖化酵素の発現安定性の点から、麹菌変異株の染色体中に組み込まれていることがより好ましい。
本実施形態の麹菌変異株又は形質転換体は、リグノセルロース系バイオマスを用いた固体培養による糖化酵素の生産に用いることができる。
まず、固体培地としてのCzapek−Dox(CD)培地(デキストリン3質量/体積%、リン酸2水素カリウム0.1質量/体積%、塩化カリウム0.2質量/体積%、硫酸マグネシウム0.05質量/体積%、硫酸鉄0.001質量/体積%、硝酸ナトリウム0.3質量/体積%、寒天1.5質量/体積%を含む)に、終濃度0.05質量/体積%となるようにフルフラールを添加した第1プレートを作製した。
CD培地に終濃度0.1質量/体積%となるようにフルフラールを添加したプレートを作製し、プレートの中央部に、得られた麹菌変異株の胞子懸濁液(1×107/mL)を10μL添加し、温度30℃で7日間、静置培養を行った後、プレートを写真撮影した。
PD液体培地(デキストリン2質量/体積%、ポリペプトン1質量/体積%、カザミノ酸0.1質量/体積%、リン酸2水素カリウム0.5質量/体積%、硫酸マグネシウム0.05質量/体積%、硝酸ナトリウム0.1質量/体積%)に、終濃度0.05質量/体積%となるようにフルフラールを添加したもの50mLを、200mL容三角フラスコに量り取った。そして、前記三角フラスコに、得られた麹菌変異株の胞子懸濁液を最終胞子濃度1×104/mLとなるように添加し、温度30℃で108時間、培養を行った後、PD液体培地を写真撮影した。
本実施例の麹菌変異株は、0.1質量/体積%のフルフラールを含有するCD培地で増殖させることができることから、AOK27L株と比較して、優れたフルフラール耐性を備えていることが明らかである。
また、本実施例の麹菌変異株に、セロビオハイドロラーゼ遺伝子、β−グルコシダーゼ遺伝子、エンドキシラナーゼ遺伝子、アラビノフラノシダーゼ遺伝子、グルクロニダーゼ遺伝子、エンドグルカナーゼ遺伝子からなる群から選択される1種以上の糖化酵素遺伝子が導入された形質転換体は、前記麹菌変異株と比較して、さらに優れたフルフラール耐性を備えるものと考えられる。
Claims (8)
- フルフラール含有培地でアスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)AOK27L株を培養して変異させ、前記培地で生育する菌を選択し、フルフラール耐性を備えることを特徴とする麹菌変異株。
- 前記麹菌変異株は、アスペルギルス・オリゼHO−FR株(受託番号:NITE BP−01953)であることを特徴とする請求項1記載の麹菌変異株。
- 請求項1又は請求項2記載の麹菌変異株に、糖化酵素遺伝子が導入されていることを特徴とする形質転換体。
- 前記糖化酵素遺伝子が、セロビオハイドロラーゼ遺伝子、β−グルコシダーゼ遺伝子、エンドキシラナーゼ遺伝子、アラビノフラノシダーゼ遺伝子、グルクロニダーゼ遺伝子、エンドグルカナーゼ遺伝子からなる群から選択される1種以上の遺伝子であることを特徴とする請求項3記載の形質転換体。
- 前記セロビオハイドロラーゼ遺伝子は、アクレモニウム・セルロリティカス(Acremonium cellulolyticus)由来であり、
前記β−グルコシダーゼ遺伝子は、アクレモニウム・セルロリティカス由来であり、
前記エンドキシラナーゼ遺伝子は、サーモアスカス(Thermoascus)属菌由来であり、
前記アラビノフラノシダーゼ遺伝子は、アクレモニウム・セルロリティカス由来であり、
前記グルクロニダーゼ遺伝子は、アクレモニウム・セルロリティカス由来であり、
前記エンドグルカナーゼ遺伝子は、アクレモニウム・セルロリティカス由来であることを特徴とする請求項4記載の形質転換体。 - 前記麹菌変異株の染色体中に前記糖化酵素遺伝子が組み込まれていることを特徴とする請求項3〜請求項5のいずれか1項記載の形質転換体。
- 請求項1又は請求項2の麹菌変異株、又は、請求項3〜請求項6のいずれか1項記載の形質転換体を固体培養して糖化酵素を生成させることを特徴とする糖化酵素の生産方法。
- 前記固体培養は、稲わら又はコーンストーバを酸性下で処理した前処理物を用いることを特徴とする請求項7記載の糖化酵素の生産方法。
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