JP2016104797A - 口腔用組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
1. 抽出物調製
植物サンプルとしてササゲ、小豆(大納言)、小豆(襟裳小豆)、紫花豆、白花豆、クロインゲンマメ、キントキマメの7種を用いた。
各植物サンプルは市販品を購入し、20gを粉砕機で細かく粉砕後、水200mlで70℃・2時間抽出した。得られた抽出液は、3000rpm・10分間遠心分離し、上清を濾過後、凍結乾燥したものを各植物熱水抽出物として試験に供した。
2-1. バイオフィルム形成
S. mutans UA159株を5mlのBrain Heart Infusion(BHI)液体培地にて37℃・10時間嫌気培養し、3000rpm・10分間遠心分離して集めた細菌を、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)によってOD550nm=0.5に調製し、これを供試菌懸濁液とした。
バイオフィルム形成は、96穴マイクロプレートを用いて試験を行った。各ウェルに、植物熱水抽出物60μl、CSP20μl、S. mutans供試菌懸濁液20μl、0.1% Sucrose添加 Todd Hewitt Broth 100μlを添加し、37℃・5%CO2条件下で16時間培養を行ってCSP誘導群のバイオフィルムを形成した。CSPの濃度は終濃度で1μM、各サンプルの熱水抽出物の濃度は終濃度で1mg/mlだった。
比較のため、CSPを添加せず、それ以外は上記と同一の条件にして培養を行い、CSP非誘導群のバイオフィルムを形成した。
さらに、コントロールとして、CSP誘導群及びCSP非誘導群のそれぞれについて、サンプルの熱水抽出物を添加せず、それ以外は上記と同一の条件にして培養をおこなった。
CPS誘導群とCSP非誘導群のそれぞれについて、培養後の上清を取り除き、PBSで2回各ウェルの洗浄を行った。洗浄後、各ウェルに0.25%サフラニン溶液を添加し15分間静置後余剰サフラニン溶液を取り除き、PBSで2回各ウェルの洗浄を行った。洗浄後各ウェルにエタノールを添加し、30分間震蕩することで染色させたサフラニンを溶出させ、マイクロプレートリーダーを用いて492nmの吸光度を測定し、バイオフィルム形成量を定量した。
その結果を図1及び図2に示す。
図1は、植物抽出物を加えて培養を行った群(sample群)とコントロール群(control群)におけるバイオフィルム形成量を、CSP誘導群とCSP非誘導群のそれぞれについて示している。また、図2は、control群のバイオフィルム形成量を100としたときのsample群のバイオフィルム形成量の割合を、CSP誘導群とCSP非誘導群のそれぞれについて示している。
図1より、control群ではCSP誘導群においてCSP非誘導群よりもバイオフィルム形成量が増加していた。この増加分が、CSPをオートインデューサーとするクオラムセンシングによるバイオフィルムの増加分だと考えられた。
また、sample群では、CSP誘導群(黒棒)のバイオフィルム形成量はcontrol群よりも少なくなっていたが、CSP非誘導群(白棒)のバイオフィルム形成量はcontrol群から変化していなかった。このことは図2からも明らかであり、CSP誘導群(黒棒)ではsample群のバイオフィルム形成量はcontrol群よりも少なかった(100%未満)が、CSP非誘導群(白棒)ではsample群のバイオフィルム形成量はcontrol群と変わらなかった(約100%)。このことから、sample群に添加した植物抽出物によってCSPをオートインデューサーとするS. mutansのクオラムセンシングが制御され、バイオフィルムの形成量が増加しなかったと考えられた。
また、図1において、CSP誘導群に大納言小豆、襟裳小豆、紫花豆、キントキマメの熱水抽出物を加えて培養を行った場合(sample群のCSP+)、CSPも植物抽出物も加えない群(control群のCSP-)よりもバイオフィルム形成量が減少していた。
以下の処方に従ってチューインガムを調製した。
ガムベース 20.0重量%
砂糖 55.0
グルコース 15.0
水飴 9.0
香料 0.5
襟裳小豆熱水抽出物(実施例1) 0.5
100.0
以下の処方に従ってキャンディを調製した。
砂糖 50.0重量%
水飴 34.0
香料 0.5
大納言小豆熱水抽出物(実施例1) 0.5
水 残
100.0
以下の処方に従って練り歯磨を調製した。
炭酸カルシウム 50.0重量%
グリセリン 20.0
カルボオキシメチルセルロース 2.0
ラウリル硫酸ナトリウム 2.0
香料 1.0
サッカリン 0.1
襟裳小豆熱水抽出物(実施例1) 1.0
クロルヘキシジン 0.01
水 残
100.0
Claims (3)
- CSPによリコントロールされるStreptococcus mutansのクオラムセンシングを制御する、小豆、ササゲ、白花豆、紫花豆、黒インゲン豆、キントキマメから選ばれる少なくとも1種類以上の豆類の抽出物を配合することを特徴とするバイオフィルム形成抑制のための口腔用組成物。
- CSPによリコントロールされるStreptococcus mutansのクオラムセンシングを制御する、小豆、ササゲ、白花豆、紫花豆、黒インゲン豆、キントキマメから選ばれる少なくとも1種類以上の豆類の抽出物を配合することを特徴とするバイオフィルム形成抑制のための飲食品。
- CSPによリコントロールされるStreptococcus mutansのクオラムセンシングを制御する、小豆、ササゲ、白花豆、紫花豆、黒インゲン豆、キントキマメから選ばれる少なくとも1種類以上の豆類の抽出物から配合されるバイオフィルム形成抑制のための飲食品の製法であって、
該製法が、該豆類の抽出物を、水及び、メタノール、エタノール、n‐プロパノール、n‐ブタノールから選択される低級アルコール、エーテル、クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、グリセリン、プロピレングリコールから選択される有機溶媒の1種または2種以上の抽出溶媒を使用して、50〜90℃で1〜5時間抽出することを特徴とするバイオフィルム形成抑制のための飲食品の製法。
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