JP2016094460A - 電磁放射酵母を含む神経変性疾患または障害の処置のための組成物、方法および使用 - Google Patents
電磁放射酵母を含む神経変性疾患または障害の処置のための組成物、方法および使用 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】30〜300GHzの範囲の電磁波で処理された酵母細胞、またはその電磁波で処理された酵母細胞から増殖された酵母細胞を含む組成物。該組成物は神経変性疾患または障害の処置のために使用する。好ましくは前記電磁波が約35〜約65GHzである組成物。更に前記電磁波の強度が1mW/cm2未満であり、好ましくは0.004〜0.2mW/cm2であり、平均周波数の0〜約0.5%の範囲で周波変調をすることが望ましく、処理時間が20〜13分間であることが望ましい電磁波による酵母処理方法。
【選択図】図3
Description
表1
15%の細胞の細胞分裂を同調させるのに必要な時間(t0、分)の概要を示す。
表2
以下は可能な生産手順の実施形態である。しかしながら、本発明の範囲内で、多くの異なる別の生産手順が可能であり、このことは当業者であれば認識できるであろう。
神経変性疾患または障害に似た症状を誘発するために1−メチル−4−フェニル−1,2,3,6−テトラヒドロピリジン(MPTP)で処置したマウスに、運動と組み合わせて、上記に従って処理した酵母細胞を含む組成物を与えた。
初期試験
Scanbur B & K, Sollentuna, Swedenから入手した体重27±2g、2か月齢の雄C57 BL/6マウス90個体を本試験に用いた。研究室に到着した後、マウスを温度(22±1℃)、湿度(55±5%)に制御された室内で1週間馴化させ、全てのマウスにLantmannen, Sweden製の食餌R35ペレットと水道水を自由に摂らせた。室内は一定の明暗周期(12時間オン/12時間オフ;AM6:00〜PM6:00の間点灯)とした。マウスを各15個体の6群に分け、ワイヤートップ実験室用ポリカーボネートケージ(55×35×18cm)で飼育した。ケージには区別のために数字を付けた。各ケージには、マウスが隠れたり眠ったりできる2つの巣を設けた。
表3 試験区の概要
回復試験1
到着3週間後に、上記に従う2群(n=10)のマウスにMPTP(40mg/kg、s.c.)を、また、2群に生理食塩水(ビヒクル、2ml/kg)を、到着後4週目の金曜日に投与した。到着後5週目、6週目および7週目も各金曜日に同様のMPTPまたはビヒクルの投与を維持した。各場合において、MPTP/ビヒクル投与(試験1〜5)の前に、活動試験チャンバーで挙動試験を行った。同時に、4週目〜7週目の間と8週目に1つのビヒクル群と1つのMPTP群に、毎週4日(月〜木)、30分の運動期間を与えた。この後、運動期間を終了したが、マウスは全て10週目と12週目に試験した(試験6および7:金)。24時間あけた標準的な2×40mg/kg用量の代わりに毎週一用量のMPTP(40mg/kg)が、MPTP投与1週間後に活動試験を行った場合に進行的な運動低下(hypokinesic)の増長をもたらすかどうかを検討するために設計された。この試験は、また、連続4日の回し車走行運動が神経毒の運動低下(hypokinesic)作用を弱めるかどうかを試験するために設計された。表4は、MPTPまたはビヒクルのいずれかを投与したマウスに関する、5週間の回し車運動を行った場合、または行わなかった場合の試験計画および処置を示す。
表4 MPTPまたはビヒクルのいずれかを投与したマウスに関する、6週間の回し車運動を行った場合、または行わなかった場合の試験計画および処置
■60分間にわたる自発的運動活動
第二の回復試験では、自発的運動活動試験の後にマウスに毎週一用量のMPTP(1×40 mg/kg、s.c)を投与し、その後、連続4日、回し車走行運動(下記表5参照)を連続4週間行い、運動活動試験後にMPTP投与を行わなかったこと以外は5週目も同様の手順とした。その後、全てのマウスを処置または回し車走行運動を行わずに2週間放置し、次に、再び自発的運動試験を行った後、L−ドーパ誘発性の運動活動試験を行った。処置または回し車走行運動を行わずにさらに2週間後、全てのマウスに最後の自発的運動試験を行った後、L−ドーパ誘発性の運動活動試験を行った(下記表5参照)。次の週に、MPTPマウスおよびビヒクルマウスを屠殺し、神経化学分析のために線条体領域を摘出した。
表5 MPTPまたはビヒクルのいずれかを投与したマウスに関する、3週間の回し車運動を行った場合、または行わなかった場合の試験計画および処置
60分にわたる自発的運動活動試験および閾値下L−ドーパ試験を示す。
■60分間にわたる自発的運動活動
**60分試験ケージに馴化した後にL−ドーパ(5mg/kg s.c.)
回復試験
回復試験を行った。この試験では、自発的運動活動試験の後に、マウスに毎週一用量のMPTP(1×30mg/kg、s.c)を投与し、最初の連続2週間は回し車走行活動を行わず、MPTP+運動(2)群では、3週目に回し車走行運動を開始し、MPTP+運動(4)群では、3週目と4週目も回し車走行運動を行わず、5週目からそれ以降回し車走行を受けた。その後、M5週目〜10週目は、運動活動試験後にさらなるMPTP投与を行わなかったこと以外は、PTP+運動(2)群とMPTP+運動(4)群の回し車走行手順を維持した。MPTP+運動(2)群およびMPTP+運動(4)群に回し車走行運動をさせている30分間は、ビヒクル群とMPTP群のマウスを30分間同じ室内に置いた1つのケージに入れた。その後、全てのマウスを処置または回し車走行運動を行わずに2週間放置し、次に、再び自発的運動活動試験を行った後、L−ドーパ誘発性の運動活動試験を行った。その後、次の9週間、2週おきに自発的運動活動(試験1〜14)とL−ドーパ誘発性の運動活動(試験1〜5、試験の6、8、10、12および14週)の双方を評価した以外は、全てのマウスを回し車走行運動条件下またはプレクシグラスケージ内で座らせた状態で維持した。次の週(15週目)に、MPTPマウスおよびビヒクルマウスを屠殺し、DAおよびBDNFの神経化学分析のために前頭皮質、頭頂皮質、海馬および線条体領域を摘出した。この計画によれば、1つのビヒクル群(運動無しが含まれた)だけが、ビヒクル注射動物において回し車走行運動が挙動変化をもたらさなかったことを示す。表6は、MPTPまたはビヒクルのいずれかを投与したマウスに関する、試験IIで行ったような、3週間の回し車運動を行った場合、または行わなかった場合の試験計画および処置の概要である。60分にわたる自発的運動活動試験および閾値下L−ドーパ試験を示す。
表6 MPTPまたはビヒクルのいずれかを投与したマウスに関する、3週間の回し車運動を行った場合、または行わなかった場合の試験計画および処置
60分にわたる自発的運動活動試験および閾値下L−ドーパ試験を示す。
*SMA+L−ドーパ
3◇=運動+処理された酵母を3週目に開始;◇5=運動+処理された酵母を5週目に開始
初期試験
6週齢のマウスへのMPTPの投与は、MPTP処置7週間後にHPLC分析により明らかにされたところでは、後の処置によって線条体のDA含量に以下のような変化が見られた。MPTPの投与は、ビヒクル群に比べ、線条体のDA含量の低下を誘発した。よって、一元配置ANOVAは、線条体のDA含量に有意な群間効果を示した F(5,30)=35.92、P<0.0001。図3は、線条体のDA含量を示す。y軸はドーパミンレベルを示す(ng/mg正味重量)。x軸には、種々のサンプルを棒で示す。棒31は、ビヒクル単独(対照サンプル)の群1である。棒32は、ビヒクルと運動を組み合わせた群2である。棒33は、MPTP40mg/kgの群3である。棒34は、MPTP40mg/kgと運動を組み合わせた群4である。棒35は、MPTP40mg/kgを処理された酵母と組み合わせた群5である。棒36は、MPTP40mg/kgを処理された酵母および運動と組み合わせた群6である。
歩行F(5,54)=44.19 P<0.0001;立ち上がりF(5,54)=33.50 P<0.0001および全活動F(5,54)=25.69 P<0.0001。
2.MPTP誘発性の運動低下は、L−ドーパ刺激の後に毎日の運動によって部分的に回復され、この効果は回し車走行を処理された酵母と組み合わせることで増大した。
3.高用量(2*40mg/kg)においてMPTPにより誘発されるDA枯渇は毎日の運動によって部分的に元に戻ったが、回し車走行と処理された酵母の組合せはこの回復効果を著しく増大させることはなかった。
回復試験1
図6は自発的運動活動を示す。運動計画はMPTPの運動活動欠陥を軽減した。処理された酵母(酵母)は、自発的活動のほぼ完全な回復を誘発した。
図9は自発的運動活動に関する結果を示す。運動計画はMPTPの運動活動欠陥を軽減した。処理された酵母(酵母)は、自発的活動の完全な回復を誘発した。
図13は自発的運動活動を示す。処理された酵母(酵母)は、MPTPを2回投与した後の自発的活動に著しい回復効果を誘発した。
Claims (21)
- 神経変性疾患または障害の治療または予防のための、30GHz〜300GHzの範囲の電磁波で処理された酵母細胞、またはその電磁波で処理された酵母細胞から増殖された酵母細胞を含む組成物。
- 前記電磁波が約35GHz〜約65GHzの範囲である、請求項1に記載の組成物。
- 前記電磁波が40GHz、41GHz、42GHz、42.2GHz、43GHz、44GHz、45GHz、46GHz、47GHz、48GHz、49GHz、50GHz、51GHz、52GHz、53GHz、54GHzまたは55GHzからなる群から選択される、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記電磁波が1mW/cm2未満の電力密度を有する、請求項1〜3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記電磁波が0.004mW/cm2〜0.2mW/cm2の間の電力密度を有する、の請求項4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記電磁波が平均周波数の0%〜約0.5%の範囲で周波変調される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 処理時間が20分〜130分の間である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記酵母細胞がサッカロミセス属(サッカロミセス)である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記酵母細胞がサッカロミセス・カールスベルゲンシス(Sacharomyces carlsbergesis)またはサッカロミセス・セレビシエ(Sacharomyces cerevisiae)からなる群から選択される、請求項8に記載の組成物。
- 前記神経変性疾患または障害がパーキンソン病である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記神経変性疾患または障害がアルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症(ALS)である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記神経変性疾患または障害が2型真性糖尿病である、請求項1〜9のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記処置が経口処置である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の組成物を調製する方法であって、
増殖培地を調製する工程;
該増殖培地を滅菌または低温殺菌する工程;
該増殖培地で酵母細胞を増殖させる工程;および
該酵母細胞を電磁波で処理する工程を含み、該電磁波が30GHz〜300GHzの範囲である、方法。 - 約35GHz〜約65GHzの範囲、例えば、40GHz、41GHz、42GHz、42.2GHZ、43GHz、44GHz、45GHz、46GHz、47GHz、48GHz、49GHz、50GHz、51GHz、52GHz、53GHz、54GHzまたは55GHzである、請求項14に記載の方法。
- 前記電磁波が1mW/cm2未満の電力密度を有する、請求項14または15に記載の方法。
- 前記電磁波が0.004mW/cm2〜0.2mW/cm2の電力密度を有する、請求項16に記載の方法。
- 前記電磁波が平均周波数の0%〜約0.5%の範囲で周波数変調される、請求項14〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 処理時間が20分〜130分の間である、請求項14〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記の処理された酵母細胞を前記増殖培地で増殖させる工程をさらに含む、請求項14〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記増殖培地が麦汁である、請求項14〜20のいずれか一項に記載の方法。
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