CN106511794A

CN106511794A - 水稻胚胎素制作方法及应用

Info

Publication number: CN106511794A
Application number: CN201610942071.2A
Authority: CN
Inventors: 谢培增; 沈会强; 刘江; 谢成; 沈明阳; 郑晓云
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2016-10-26
Filing date: 2016-10-26
Publication date: 2017-03-22

Abstract

本发明公开了一种水稻胚胎素的制作方法，包括以下过程：对水稻胚胎干细胞进行细胞破壁处理，去杂，离心后得到水稻多能胚胎素。还公开采用该制作方法获得的水稻胚胎素及其应用。本发明从水稻多能胚胎干细胞中分离得到水稻多能胚胎素，已达到人胚胎素的作用，即能使人体内各种细胞保持活力，延长工作细胞的寿命；修复损伤细胞，恢复细胞的功能；激活体内休眠细胞，补充有效的工作细胞；保护自身干细胞的衰减和促进干细胞生成；激活自身休眠干细胞分化出新的细胞替补死亡的细胞，达到复原脏器的作用。

Description

水稻胚胎素制作方法及应用

技术领域

本发明涉及药物药品、食品与化妆品技术领域，尤其是一种水稻胚胎素，具体述及该水稻胚胎素的制作方法和应用。

背景技术

人类疾病虽然有上千种，然而真正的疾病只有一种，那就是细胞病，任何一个器官的细胞新陈代谢出了问题，细胞死亡达到一定程度，那么这个器官才会生病，导致细胞故障主要的原因是二方面：一是细胞营养、氧气供应不足，二是代谢废物不能及时排出导致细胞中毒所致，而现在对疾病的认识只是疾病的表现，而不是真正的原因，在治疗上多为对症治疗(如疼痛、发热等的处理)或对抗治疗(对肿瘤的切除，放、化疗等)，绝大多数疾病都是对症治。本研究是采用水稻胚胎素这组生物分子激活人体内干细胞分裂出新的功能细胞替代损伤与死亡的细胞，且恢复及正常功能，达到从根本上治疗疾病的目的。

1912年，瑞士科学家卡尔教授首次发现羊胚胎细胞中有一种能使细胞恢复活力的神奇物质--羊胚胎素；1931年，尼翰教授首次通过注射的方式将小羊的甲状旁腺细胞应用于一位在手术中甲状旁腺受损的临危病人挽救了其生命；1937年，尼翰教授第一次将活细胞疗法应用到大脑神经细胞，以后，尼翰教授将活细胞疗法扩展应用到肝脏、胰腺、肾脏、心脏、十二指肠、胸腺和脾脏。由于羊胚胎素来源于羊的胚胎细胞，与人类细胞有诸多方面不同，临床应用时有许多禁忌症，如过度敏感性人群，甲状腺机能亢进、严重的高血压患者，孕期妇女使用、肿瘤患者等不能应用。

由于鲜活细胞不能长时间保存，1949年尼翰教授和瑞士雀巢公司的科学家共同协作，首次研制出冻干活细胞进行细胞活化治疗；1955年瑞士Dr.Alfred Pfister医学博士部分解决了细胞提取时(冻干或冻结)造成的损伤和恶化过程与保存技术的缺陷。

1970年Martin Evans首次从小鼠胚囊中分离出与体外培养出小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell，ESCs，简称ES、EK或ESC细胞。)；1998年美国科学家体外培养人胚胎干细胞成功，此后国内外学者采用不同的干细胞治疗不同的疾病，其短期治疗效果可以肯定，但目前存在以下问题：无论是羊胎素还是胚胎干细胞，由于是异种(羊)与异体都存在着免疫排斥反应、过敏、体外培养时污染细菌引起全身感染等严重并发症。

1980年，由于鲜活羊胚胎素缺乏严格的消毒抑菌措施，无法长期保存，发生感染的危险性很大，瑞士医学界一直致力于发展提纯，消毒，杀菌，保存技术，但仍不能达到长时间保存的目的。

1983年，爱德华·贝驰博士继承尼翰羊胚胎素活性疗法的成就，发展出个性化的治疗技术，提纯为小分子的“全器官精华素”，更加易于吸收；帮助人体活化和新生出结构完整，功能活跃的新细胞；替换由于各种致害因素所导致的衰老病变细胞，增强各生命系统的功能，恢复人体精力和体力，达到更加显著的抗衰老疗效。

1998年美国科学家体外培养人胚胎干细胞成功。

此后，国内外学者采用不同的干细胞治疗不同的疾病，其短期治疗效果可以肯定，但目前存在以下问题：无论是羊胎素还是人胚胎干细胞，由于是异种(羊)与异体细胞，用后病人都存在着免疫排斥反应、过敏、体外培养时污染细菌引起全身感染等严重并发症。人胚胎干细胞还存在着伦理与法律问题。要避免这些问题，近160多年来，科学家梦想从植物的分生组织或形成层中分离出植物干细胞，但虽然做过许多艰苦的努力，却一直没有获得成功，甚至有人认为这是不可能实现的神话。

2005年，韩国云火科学技术院在世界首次成功分离与培养了植物干细胞，并将其命名为多贝尔(Ddobyul)。研究证明，植物干细胞具有强大的抗氧化和抗衰老活性，能显著提高人体免疫力和抗癌能力。

植物干细胞(Plant stem cell)包含有关于植物发育和生长的所有程式，拥有永恒生命力的细胞(immortal cell)，是植物生命力的根源(origin)。植物干细胞存在于被称为分生组织的特殊构造内，具有非常惊人的再生能力。这些使得植物可以在数百年间不断生长，并生成全新的器官。在干细胞临床试验应用上研究证明，动物干细胞可以分化成为组织细胞，动物干细胞修补受损组织可以确定，但植物干细胞与动物干细胞差别巨大，植物干细胞只能分化成为其他类型的植物细胞，绝对不可能分化出人类细胞。所以，直接采用植物干细胞用于修补人类组织细胞的损伤是不现实的。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，因植物干细胞不能直接用于修补人类细胞的损伤，那么植物干细胞的有效成份是否能激活人类自身干细胞分裂，来实现修复与补充人类组织细胞，达到疾病康复的目的呢？本发明人提出一种水稻胚胎素制作方法及应用，且证明植物胚胎素能修复机体损伤的细胞和激活机体内休眠状态的干细胞分裂，产生新的细胞替代死亡的细胞，且发挥其作用，达到从根本上防治疾病的效果，且操作简便，功效广泛，从而解决了这一技术难题。

本发明者选用水稻作为研究对象。水稻(拉丁学名：Oryza sativa英文：rice)作为一种生物，是草本稻属的一种，水稻原产中国，七千年前中国长江流域就种植水稻。为一年生，禾本科植物，单子叶，性喜温湿。稻是人类的主要粮食，也可用于酿酒、制糖等食用，其根性甘，平，归心，肝经，用于阴虚发热，自汗盗汗，口渴咽干。随现代科学发展对谷芽研究证明，谷芽中含有大量蛋白质酶，维生素A，B族维生素，淀粉及蛋白质等多类营养物质，提取其成份作为药用。

本发明提供以下技术方案：

一种水稻胚胎素的制作方法，包括以下步骤：

(1)精选稻种；

(2)育苗，在播种前8天进行晾晒，晾晒1～2天后用1％的石灰水浸泡2～3天，然后用水浸泡4～5天，催芽8天；

(3)收集水稻胚胎并获取水稻胚胎干细胞；

(4)对水稻胚胎干细胞进行细胞破壁处理，之后依次进行去杂处理，离心处理，得到水稻多能胚胎素；

所述水稻胚胎干细胞为多能水稻胚胎干细胞。

优选的，所述步骤(3)中，将收集到的水稻胚胎清洗后切碎，加入3～5倍的蒸馏水后粉碎打浆，获得含有水稻胚胎干细胞的水稻胚胎浆，再通过200目过滤后得到水稻胚胎干细胞。

优选的，所述步骤(4)中，所述细胞破壁处理采用低温高速珠磨法将水稻胚胎干细胞破壁，所述离心处理为在5℃-50℃的温度条件下，3000r/min，离心10-15分钟。

优选的，还包括对得到的水稻胚胎素进行灭菌处理，60℃温度下持续10小时。

本发明还提供一种水稻胚胎素，采用上述制作方法得到。

优选的，所述水稻胚胎素包括42％的辅酶Q10,6％的氨基酸，5％的表皮生长因子，41％的熊果甙，核酸，泛酸，假马齿苋，表皮修复因子，超氧化物歧化酶，所述水稻胚胎素的纯度为98％以上。

本发明还提供一种水稻胚胎素的用途，用于制备治疗心脑血管、糖尿病、胃十二指肠溃疡、肝炎、肾功能衰竭的慢性疾病的药物以及抗衰老与美容制品。

优选的，所述药物或制品的剂型包括口服丸剂、口服液、外敷乳剂、注射给药剂。

优选的，所述水稻胚胎素在制备药物或制品中占单位剂量药物或制品的1％-12％。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：从水稻胚胎干细胞中分离得到水稻多能胚胎素混合物(多为小分子肽)经口服或局部外用可直接吸收。REF进入人体后可激活自身休眠干细胞分化出新的细胞替补死亡的细胞，达到复原脏器的作用，它既超过目前干细胞移植的治疗作用，又无干细胞移植后可能出现的并发症，如免疫排斥反应，用药途征方便、安全，还可避免人胚胎素伦理与法律的问题，为从根本上防治各类、各种疾病，尤其是慢性、疑难性疾病，抗衰老、延长寿命、美容等是最佳的自然养生疗法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。

本发明是通过从水稻胚胎干细胞(rice embryonic stem cell，RES)中提取的水稻胚胎素(rice embryo factor，REF)，用于防治目前被视为各类不治之症性疾病，尤其是各类慢性、疑难性疾病和抗衰老与美容。

REF的作用原理：REF可替代人胚胎素(HEF)，能保持细胞活力，延长工作细胞的寿命；修复损伤细胞，恢复细胞的功能；延长体内干细胞的寿命；激活体内休眠细胞，补充有效的工作细胞；激活自身休眠干细胞，分化不同组织细胞，以替代更新衰老、损伤和死亡的细胞，使组织器官复原，达到源头根治疾病，逆转青春的效果。

水稻胚胎干细胞，存在于水稻胚胎中，从水稻育苗第8天的水稻胚(水稻1～3片叶稻苗时)，包括子叶、胚芽、胚轴、胚根和胚乳，袪除稻壳、各类危险因子与杂质，水稻胚胎中存在大量的水稻胚胎干细胞，不需完全分离出水稻胚胎干细胞，故一块收集，而获得水稻胚胎干细胞和水稻其他细胞。

对水稻胚胎(稻苗)清洁，用无菌蒸馏水反复冲洗、切碎，按1：5的比例加入无菌蒸馏水粉碎打浆，获得水稻胚胎浆，含水稻胚胎干细胞、水稻其他组织细胞、植物纤维、组织液等成份，过滤去植物纤维，保留水稻胚胎干细胞、水稻其他组织细胞、组织液等成份。

水稻胚胎干细胞采用低温高速珠磨法破壁处理，包括细胞壁与细胞核模，同时可使与细胞尺度相当的虫卵、细菌也会被杀灭，最后经离心后获得水稻胚胎素。

本发明水稻胚胎素为多能胚胎素。

本发明REF由于取8天内水稻胚胎内，其绝大部分均为多能胚胎干细胞，所以获取的胚胎素均为多能胚胎素，其作用能保持细胞活力，延长工作细胞的寿命；修复损伤细胞，恢复细胞的功能；激活体内休眠细胞，补充有效的工作细胞；保护自身干细胞的衰减和促进干细胞生成；激活自身休眠干细胞分化出各类细胞，替补死亡的细胞，达到复原脏器的作用，用于治疗各类疾病，尤其是慢性或疑难性疾病与抗衰老疗效非常显效，该产可长期保存、无毒性、无排异反应，用药口服与外用、方便、安全，还可避免人胚胎素伦理与法律的问题。

实施例1

水稻胚胎素的制作方法

1.获取水稻胚胎组织

1.1精选稻种：

选择稻种的要求：优选来自高产、健康无病、当年稻种。本实施例从广州农科所种子基地获取优质、高产、抗病的杂交水稻组合(品种)。根据产量要求不同，稻种数量各异，可以10、100、500千克为一基数，本发明根据试验与实验用量以500千克水稻为一个基数。

1.2正确育苗：

在播种前8d进行晒种，晒1～2d后用1％的石灰水浸泡2～3d，以利于消毒杀菌，促进种子萌发。然后用清水洗净再用冷水浸泡4～6d，使种子充分吸水，注意换水和搅拌，最后滤起催芽8d，可见胚叶、胚芽、胚轴、胚根和胚乳时，胚苗约1.5cm左右，即为水稻胚胎。

1.3清洁胚苗：

收集水稻胚胎时，按清洁操作，随后用无菌纯水浸泡胚苗30min，袪除各类危险因子，如杂质，反复冲洗水稻胚胎组织后置入无菌袋中。

2.从水稻胚胎中获取干细胞

2.1水稻胚胎中提取胚胎干细细作以下处理

2.1.1从水稻胚胎中提取多能水稻干细胞：

水稻胚胎干细胞存在于水稻胚胎中，从水稻育苗第8d的水稻胚(水稻1～3片叶稻苗时)，包括子叶、胚芽、胚轴、胚根和胚乳，袪除稻壳、各类危险因子与杂质，水稻胚胎中存在大量的水稻胚胎干细胞，不需完全分离出水稻胚胎干细胞，故一块收集，而获得水稻胚胎干细胞和其他水稻细胞。

2.1.2对水稻胚胎(稻苗)清洁：

用无菌蒸馏水反复冲洗、切碎，加入1：5的无菌蒸馏水粉碎打浆，获得水稻胚胎浆，内含水稻胚胎干细胞、其他水稻组织细胞、植物纤维、组织液等。

2.1.3胚胎浆过滤：

通过200目过滤器，滤去植物纤维和杂质，保留水稻胚胎干细胞、水稻其他组织细胞和组织液。

2.1.4水稻干细胞的鉴定：

本实施例采用基因检测，同时还要作核型分析以确定所培养细胞的核型正常，以及开展体内、体外的分化实验对获得的水稻干细胞进行鉴定。

3.从水稻胚胎干细胞中萃取胚胎素

3.1破碎细胞：

目前已发展了多种细胞破碎方法，以便适应不同用途和不同类型的细胞壁破碎。破碎方法可规纳为机械法和非机械法两大类。①机械法：包括高压匀浆破碎法(homogenization)、振荡珠击破碎法(Skaking Bead)、高速搅拌珠研磨破碎法(finegrinding)、超声波破碎法(ultrasonication)等。②非机械法：渗透压冲击破碎法(osmoticshock)、冻融破碎法(freezing and thawing)、酶溶破碎法(enzyme lysis)、化学破碎法(chemical treatment)和去垢剂破碎法(detergents)等，根据环境条件，分别选用。本发明将水稻胚胎浆采用低温高速珠磨法破壁处理，包括细胞壁与细胞核膜，细胞破壁后胚胎浆呈悬浮状液体，即RESC液。所采用的细胞破碎方法可使与细胞尺度相当的虫卵、细菌同时杀灭。

3.2 RESC液去脂：

采用冷冻法去除细胞溶液中的脂肪。

3.3 REF的提取：

采用离心机在≤50℃，且≥5℃的温度条件下，3000r/min左右离心15分钟，去除下部沉淀物，收集上部悬浮液，将悬浮液过截留分子量为800000道尔顿以上的中空纤维超滤器，得超滤液，即为REF液，待检测。本实施例中采用离心方式既可去除其他杂质和不破坏多肽结构，又能获得更多的水稻胚胎素，操作也更方便。设定离心机温度在5℃-50℃之间，既可以使提取的胚胎素呈液状，且有较大的限象温度，确保提取的胚胎素不会失活，优选设定离心机温度在5℃-30℃，进一步优选5℃-10℃，本实施例中采用5℃。

3.4 REF的收集：

根据后续产品制作与配制要求，可将REF液冷冻干燥后得到类白色疏松团块即水稻胚胎素(固体)，或将上述超滤液经超滤浓缩至50％浓度的REF(液体)分装保存，待检测。

4. REF的检测

4.1光学显微镜的检测：

采用光学或电子显微镜观察，无杂质、无细胞、见小颗粒混合液体即为本实施例提取制备的水稻胚胎素。

4.2生化的检测：

①蛋白含量的测定：按凯氏氮法采用分光光度计测量法，检测到蛋白质的含量；②分子量的鉴定：采用三氯乙酸氮溶指数(THA-NSI)进行肽含量检测方法对悬浮液内容物进行检测，分子量在180～1000道尔顿以下，为小肽、寡肽和多肽的物质为REF。经生化分析胚胎素主要成分辅酶Q10、核酸、泛酸、脂类、多肽、氨基酸、熊果甙、假马齿苋、SOD(超氧化物歧化酶)等，其他成分需进一步研究。③纯度鉴定：采用区带电泳法鉴定，具体操作见临床生化技术；④免疫活性鉴定：采用双向琼脂扩散试验。

4.3主要成分：

经生化分析本实施例提取的胚胎素主要成分为：辅酶Q10占42％,氨基酸占6％，EGF(表皮生长因子)占5％，熊果甙，核酸，泛酸，假马齿苋，ERF(表皮修复因子)，SOD(超氧化物歧化酶)等41％，水稻胚胎素的纯度为98％以上，其他成分需进一步研究。

4.4成分特点：

辅酶Q10：是一种维他命，也是一种脂溶性醌，高效抗氧化剂，能防止心律不齐，过敏症，心绞痛，浮肿，高血压及消灭多余脂肪。它在延缓衰老方面起到非常重要的作用。辅酶Q10和维他命C、E很相似，帮助起中和作用。

泛酸：我们熟知的维他命5，能潜在的控制烦恼、失望、焦虑、头痛、慢性疲劳等，还能帮助改善酒精或烟草引起的性功能障碍。

假马齿苋：研究表明，假马齿苋能支持大脑的学习和记忆部分。假马齿苋有抗氧化性，能保护决定记忆的区域及减少脑部压力。传统应用已表明，假马齿苋对促进大脑功能有直接作用，如加强集中注意力和改善记忆。

5. REF的灭菌处理

5.1通过细胞破壁法

破壁时细菌也破膜而失活。5.2巴斯特灭菌处理(灭菌与灭毒)：

60℃，连续10h。达到彻底灭菌，又可保持水稻胚胎素的活性。通常采用高温度消毒需短时消毒，不超过6个小时。本实施例采用连续长时间较高温度进行消毒，完全彻底的去除病毒，同时确保胚胎素的生物活性，在后续临床试验中可见发挥出了高效的生物活性。

6. REF的安全性检验

6.1进行动物急性毒性试验、动物过敏性试验、家兔热源试验。

6.2细菌培养检验。

7. REF的剂型与浓度(含量)配制

所述水稻胚胎素在制备药物或制品中占单位剂量药物的1％-12％。所述单位剂量为配制药物或制品最小单位的量中所含胚胎素的百分含量，如一颗丹丸所含胚胎素的百分含量，一瓶药酒所含胚胎素的百分浓度，一片面膜所含胚胎素的百分含量。

7.1丹剂

7.1.1 REF保肝解毒茶丹：

在保肝解毒茶丹加入5％的REF，配制成REF保肝解毒茶丹。

7.1.2 REF保心通络茶丹：

在保心通络茶丹加入5％的REF，配制成REF保心通络茶丹。

7.1.3 REF保胰稳糖茶丹：

在保胰稳糖茶丹加入5％的REF，配制成REF保胰稳糖茶丹。

7.1.4 REF保脾养胃茶丹：

在保脾养胃茶丹加入5％的REF，配制成REF保脾养胃茶丹。

7.1.5 REF保肺增氧茶丹：

在保肺增氧茶丹加入5％的REF，配制成REF保肺增氧茶丹。

7.1.6 REF保肾养元茶丹：

在保肾养元茶丹加入5％的REF，配制成REF保肾养元茶丹。

7.2药酒

7.2.1 REF药酒：

50℃米酒配制成5％浓度的REF酒。

7.2.2功夫宝芝林REF药酒：

用功夫宝芝林酒配制成5％浓度的功夫宝芝林REF酒。

7.3口服液

7.3.1 REF口服液：

用纯净灭菌蒸馏水配制成5％浓度的REF口服液。

7.3.2 REF野生蜂蜜口服液：

用纯净灭菌蒸馏水先配制成12％的野生蜂蜜液，再配制成5％浓度的REF野生蜂蜜液。

7.4饮料

7.4.1 REF矿泉水：

用矿泉水配制成1％浓度的REF饮料。

7.4.2 REF饮料：

在自配饮料中加入1％浓度的REF，配制成REF饮料。

7.5化妆品

7.5.1REF保洁面霜：

在的保洁面霜中加5％REF，制作成REF保洁面霜。

7.5.2面膜

7.5.2.1 REF保肤保湿面膜：

在保肤保湿面膜中加5％REF，制作成REF保肤保湿面膜。

7.5.2.2 REF保肤祛痘面膜：

在保肤祛痘面膜中加5％REF，制作成REF保肤祛痘面膜。

7.5.2.3 REF保肤祛斑面膜：

在保肤祛斑面膜中加5％REF，制作成REF保肤祛斑面膜。

7.5.2.4 REF保肤定春面膜：

在保肤定春面膜中加5％REF，制作成REF保肤定春面膜。

7.5.3 REF保肤精华液：

在保肤精华液中加5％REF，制作成REF保肤精华液。

7.6外用药

7.6.1 REF喷雾剂：

在自配的喷雾剂中10％REF，制作成REF喷雾剂。

8.包装

8.1丹剂包装

8.1.1 REF保肝解毒茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.1.2 REF保心通络茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.1.3 REF保胰稳糖茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.1.4 REF保脾养胃茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.1.5 REF保肺增氧茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.1.6 REF保肾养元茶丹：

采用玻璃小瓶，0.3g，30粒密封包装。

8.2药酒包装

8.2.1 REF药酒：

采用玻璃瓶50ml，陶瓷瓶500ml密封包装。

8.2.2功夫宝芝林REF药酒：

采用玻璃瓶50ml，陶瓷瓶500ml密封包装。

8.3口服液包装

8.3.1 REF口服液：

采用玻璃瓶10ml密封包装。

8.3.2 REF野生蜂蜜口服液：

采用玻璃瓶10ml密封包装。

8.4饮料包装

8.4.1 REF矿泉水：

采用塑料瓶500ml罐装。(

8.4.2 REF饮料：

采用铁罐250ml罐装。

8.5化妆品包装

8.5.1 REF护肤霜：

采用玻璃瓶90克罐装。

8.5.2面膜包装

8.5.2.1 REF保肤保湿面膜：

采用塑料袋包装。

8.5.2.2 REF保肤祛痘面膜：

采用塑料袋包装。

8.5.2.3 REF保肤祛斑面膜：

采用塑料袋包装。

8.5.3 REF保肤精华液：

采用玻璃瓶100ml包装。

8.6 REF喷雾剂：

PET塑料瓶100ml包装。

9.储藏方法

9.1茶丹储藏

9.1.1 REF保肝解毒茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.1.2 REF保心通络茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.1.3 REF保胰稳糖茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.1.4 REF保脾养胃茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.1.5 REF保肺增氧茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.1.6 REF保肾养元茶丹：

放置5℃以下，保存1年以上。

9.2药酒储藏

9.2.1 REF药酒：

放置常温(25℃)下存放20年。

9.2.2功夫宝芝林REF药酒：

放置常温(25℃)下存放20年。

9.3 口服液储藏

9.3.1 REF口服液：

常温保存365天，置凉暗处保存。

9.3.2 REF野生蜂蜜口服液：

常温保存365天，置凉暗处保存。

9.4饮料储藏

9.4.1 REF饮料：

常温保存365天，置凉暗处保存。

9.4.2 REF饮料：

常温保存365天，置凉暗处保存。

9.5化妆品储藏

9.5.1 REF护肤霜：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃3～4年。

9.5.2面膜储藏

9.5.2.1 REF保肤保湿面膜：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2～3年。

9.5.2.2 REF保肤祛痘面膜：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2～3年。

9.5.2.3 REF保肤祛斑面膜：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2～3年。

9.5.2.4 REF保肤定春面膜：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2～3年。

9.5.3精华素：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2～3年。

9.6外用药

9.6.1 REF喷雾剂：

常温保存365天，置凉暗处保存，0～4℃2年。

实施例2

REF治疗动物实验

选用大小白鼠、兔、犬、猴做出不同创伤与不同15种疾病的模型，应用对照与REF干预先后治疗500只以上不同的动物实验，模型包括以下各系统9种代表性疾病：(1)犬颅脑损伤模型；(2)猴脑缺血模型；(3)犬慢性阻塞性肺疾病模型；(4)犬胃、十二指肠溃疡模型；(5)犬肝硬变(肝硬化)模型；(6)犬急性心肌梗死动型；(7)犬糖尿病模型；(8)犬肾功能衰竭模型；(9)犬烧伤模型(REF治疗动物实验为本发明创新)；(10)其他模型。各组动物模型标准按实验要求统一标准；疗效标准按相关疾病疗效标准。本研究证明：对各系统9种代表性疾病治疗疗效均较好，其结果见表1。

表1 REF干预与常规治疗15种疾病疗效比较(X±S)

与对组比*P<0.01

实施例3

REF的临床应用试验

1. REF治疗的疾病：

胚胎素治疗适应于各系统疾病，包括亚健康、促进儿童正常生长、发育、免疫系统缺陷性疾病、传染疾病、肿瘤(各类良恶性肿瘤)、神经系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、心血管系统疾病、内分泌系统疾病、骨骼及肌肉系统疾病、血液系统疾病、泌尿系统疾病、生殖系统疾病、性功能疾病、外周血管疾病、肤疾病，眼、耳、鼻、咽、喉疑难性疾病，抗衰老和美容等。

2. REF治疗的疾病例数：

各类疾病与抗衰老的治疗方法先后治疗病人2000余例。

3. REF的治疗方案：

①REF的选择：根据不同的疾病程度选择不同的剂型的REF产品。

②疗程方案：短疗程10次；中疗程30次；长程疗程60次。③疗程方案：短疗程适用于抗衰老；中疗程适用于抗衰老+慢性疾病；长疗程适用于慢性疾病或恶性肿瘤。

4. REF的治疗方法

4.1 REF丹剂药品(REF保肝解毒茶丹、REF保心通络茶丹、REF保胰稳糖茶丹、REF保脾养胃茶丹、REF保肺增氧茶丹、REF保肾养元茶丹6种)服用方法：

短疗程：3.0g，口服，3次/日，连续10d；

中疗程：3.0g，口服，3次/日，连续30d；

长疗程：3.0g，口服，3次/日，每年连续60次，连续3年。

4.2 REF药酒(REF药酒、功夫宝芝林REF药酒2种)服用方法：

短疗程：30ml，口服，2次/日，连续10d；

中疗程：30ml，口服，2次/日，连续30d；

长疗程：30ml，口服，2次/日，每年连续60次，连续3年。

4.3 REF口服液(REF口服液、REF野生蜂蜜口服液2种)服用方法：

短疗程：10ml，口服，2次/日，连续10d；

中疗程：10ml，口服，2次/日，连续30d；

长疗程：10ml，口服，2次/日，每年连续60次，连续3年。

4.4 REF饮料(REF矿泉水、REF饮料2种)饮用方法：

短疗程：1瓶(500ml、250ml)，口服，2次/日，连续10d；

中疗程：10ml，口服，2次/日，连续30d；

长疗程：10ml，口服，2次/日，每年连续60次，连续3年。

4.5 REF护肤霜应用方法：

洁面后外涂用，2次/日，可长期应用，本研究应用30天观察疗效。

4.6 REF喷雾剂应用方法：

创面清创后喷洒，2次/日，治愈为止。

4.7 REF面膜(REF保肤保湿面膜、REF保肤祛痘面膜、REF保肤祛斑面膜、REF保肤定春面膜4种)，1次/日，可长期应用。

5. REF的治疗效果

5.1应用REF系列产品症状变化情况

根据本技术治疗2000余例病人统计结果全部有效，应用REF系列产品症状变化时间表2。

应用REF系列产品症状变化时间表2

5.2 REF系列产品干预与常规治疗20种疾病病人疗效比较

本发明先后治疗各系统不同的各种疾病2000余例，主要各系统代表性疾病50种临床治疗观察结果见表2。各组疾病按诊断标准，疗效标准按相关疾病疗效标准。各系统疾病，采用REF系列产品干预与常规治疗20种疾病病人疗效比较其疗效见表3。

表3 REF系列产品干预与常规治疗20种疾病病人疗效比较(X±S)

与对组比*P<0.01

5.3其他疾病未作对比试验500例以上，有效率均在98％以上。见表4。

表4 REF干预未作对比试验疾病病人疗效

其他疾病500例以上，有效率均在98％以上。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种水稻胚胎素的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)精选稻种；

(3)收集水稻胚胎并获取水稻胚胎干细胞；

所述水稻胚胎干细胞为多能水稻胚胎干细胞。

2.如权利要求1所述水稻胚胎素的制作方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将收集到的水稻胚胎清洗后切碎，加入3～5倍的蒸馏水后粉碎打浆，获得含有水稻胚胎干细胞的水稻胚胎浆，再通过200目过滤后得到水稻胚胎干细胞。

3.如权利要求1所述水稻胚胎素的制作方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述细胞破壁处理采用低温高速珠磨法将水稻胚胎干细胞破壁，所述离心处理为在5℃-50℃的温度条件下，3000r/min，离心10-15分钟。

4.如权利要求1所述水稻胚胎素的制作方法，其特征在于，还包括对得到的水稻胚胎素进行灭菌处理，60℃温度下持续10小时。

5.一种水稻胚胎素，其特征在于，采用如权利要求1-4任一所述制作方法得到。

6.如权利要求5所述的水稻胚胎素，其特征在于，包括42％的辅酶Q10,6％的氨基酸，5％的表皮生长因子，41％的熊果甙，核酸，泛酸，假马齿苋，表皮修复因子，超氧化物歧化酶，所述水稻胚胎素的纯度为98％以上。

7.一种如权利要求6所述水稻胚胎素的用途，其特征在于，用于制备治疗心脑血管、糖尿病、胃十二指肠溃疡、肝炎、肾功能衰竭的慢性疾病的药物以及抗衰老与美容制品。

8.如权利要求7所述水稻胚胎素的用途，其特征在于，所述药物或制品的剂型包括口服丸剂、口服液、外敷乳剂、注射给药剂。

9.如权利要求6-8任一所述水稻胚胎素的用途，其特征在于，所述水稻胚胎素在制备药物或制品中占单位剂量药物或制品的1％-12％。