JP2016029071A - 細胞膜透過性の線維芽細胞増殖因子の医療用途 - Google Patents
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Abstract
Description
FGF2の作用機序については、非特許文献23などにおいて、FGF1と同様に、FGFRを介したシグナル伝達及び細胞内移行、並びに細胞内での作用について報告されている。
このように、抗アポトーシス効果については、FGFRとの相互作用に関わらずFGF1が核内に移行することで生じるとの報告がある一方で、FGFRとの相互作用によりFGF1が細胞内に移行した後は、むしろ核内に移行しない方が増大するという報告もある。従って、FGF1の抗アポトーシス効果の作用機序については、明らかになっていないというのが現状である。もっとも、FGF1による抗アポトーシス効果を確認する試験でも、FGF1とFGFRとの相互作用を前提とする条件でなされるのが通常である。
本発明者らは、FGF12が細胞外からFGFRに依存せずに細胞内に移行でき、その細胞内移行を担う細胞膜透過ペプチドドメイン(以下、CPPドメインと略称することがある)が、中央部(以下、CPP−Mドメインということがある)とC末端部(以下、CPP−Cドメインということがある)の2か所に存在することを報告した(非特許文献8)。この報告では、FGF11サブファミリーの他のメンバーにも類似のドメインが存在するが、FGF1にはCPP−Cドメインが存在せず、このドメインが、FGF12の細胞内移行を促進していることを示した。この報告ではまた、FGF12のCPP−CドメインからなるペプチドをFGF1に融合し、得られたキメラタンパクがFGFRに依存せずに細胞内に移行できることも示した。
また、本発明は、他の実施形態において、FGF1又はFGF2をコードするDNA配列と、CPP−CをコードするDNA配列とを含むDNA分子、或いはこれらのDNA配列を含むベクターを提供する。
また、本発明は、更に他の実施形態において、上記キメラタンパク質、DNA分子、又はベクターを有効成分とする、医薬用組成物を提供する。
本発明はまた、更に他の実施の形態において、上記キメラタンパク質、DNA分子、ベクター又は組成物の医薬又は細胞培養培地を調製するための使用を提供する。
FGF:線維芽細胞増殖因子(ただし、本明細書においては、後述する変異体やキメラタンパク質を含めて総称することがある)
FGF1:線維芽細胞増殖因子1(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
FGF2:線維芽細胞増殖因子2(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
FGF11:線維芽細胞増殖因子11(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
FGF12:線維芽細胞増殖因子12(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
FGF13:線維芽細胞増殖因子13(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
FGF14:線維芽細胞増殖因子14(ただし、本明細書においては、後述する変異体を含めて総称することがある)
変異体:配列番号1〜5に示すアミノ酸配列の何れかによって表わされるFGF1、配列番号6〜10に示すアミノ酸配列の何れかによって表わされるFGF2、又は配列番号11〜29に示すアミノ酸配列の何れかによって表わされる細胞膜透過ペプチドのアミノ酸の一部を置換若しくは削除又は1以上のアミノ酸を付加したタンパク質又はペプチド、或いは、既知の他のFGF1、FGF2又は細胞膜透過ペプチドのアミノ酸の一部を置換若しくは削除又は1以上のアミノ酸を付加したタンパク質又はペプチドをいう。
CPP:細胞膜透過ペプチド
CPP−Cドメイン:FGF11サブファミリーメンバーのC末端領域に存在する細胞膜透過ペプチドドメイン
CPP−Mドメイン:FGF11サブファミリーメンバーの中央部に存在する細胞膜透過ペプチドドメイン
CPP−C:特に言及しない限り、FGF11サブファミリーCPP−Cドメイン又はその一部のアミノ酸が置換又は欠失しているアミノ酸配列を含み且つ膜透過能を有するペプチド
CPP−FGF1キメラタンパク質:CPP−CをFGF1に融合したキメラタンパク質
CPP−FGF2キメラタンパク質:CPP−CをFGF2に融合したキメラタンパク質。なお、CPP−FGF1キメラタンパク質とCPP−FGF2キメラタンパク質とを総称して単にキメラタンパク質と言うことがある。
FGFR:線維芽細胞増殖因子受容体
FACS:フローサイトメトリー
親水性アミノ酸:本明細書で用いる際、少なくともアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、及びリジンが含まれる。
疎水性アミノ酸:本明細書で用いる際、少なくともアラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、バリン、プロリン、及びグリシンが含まれる。
中性アミノ酸:本明細書で用いる際、少なくともアスパラギン、グルタミン、チロシン、トレオニン、及びセリンが含まれる。
1−1.FGF1
FGF1は、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ等の哺乳動物で知られる生理活性物質であり、ヒトFGF1としては、配列番号1によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、マウスFGF1としては、配列番号2によって表されるアミノ酸配列を有するものがある。また、ラットFGF1としては、配列番号3によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、ウシFGF1としては、配列番号4によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、ウマFGF1としては、配列番号5によって表されるアミノ酸配列を有するものがある。本発明では何れの哺乳動物に由来するFGF1でキメラタンパクを構成してもよく、例えば、治療対象となる動物に応じて選択することができる。
このようなアミノ酸の置換に加え、上記で維持することが望ましいとされたアミノ酸以外については、上述した配列同一性を有する範囲で他のアミノ酸で置換してもよい。但し、置換されるアミノ酸の数は、好ましくは10個未満であり、より好ましくは8個未満であり、更に好ましくは5個未満である。
FGF2も、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ等の哺乳動物で知られる生理活性物質であり、ヒトFGF2としては、配列番号6によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、マウスFGF2としては、配列番号7によって表されるアミノ酸配列を有するものがある。また、ラットFGF2としては、配列番号8によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、ウシFGF2としては、配列番号9によって表されるアミノ酸配列を有するものがあり、ウマFGF2としては、配列番号10によって表されるアミノ酸配列を有するものがある。本発明では何れの哺乳動物に由来するFGF2でキメラタンパクを構成してもよく、例えば、治療対象となる動物に応じて選択することができる。
本発明で有効成分として使用されるキメラタンパクは、FGF1又はFGF2にFGF11サブファミリーCPP−Cドメインを含むCPP(CPP−C)を融合した構造を有する。CPPをFGF1等に融合させたキメラタンパク質としては、ジフテリア毒素AをFGF1に融合させたキメラタンパクが知られているが、このキメラタンパク質を投与してFGF1を細胞内に移行させてもDNAの合成に止まり、細胞分裂及び増殖にはFGFRの関与が必要であると理解されていたところ(非特許文献4及び24)、FGF1にCPP−Cを融合させたキメラタンパク質では、FGF1が種々の生理活性を発揮した。
例えば、ヒトFGF11乃至14のCPP−Cドメインは、それぞれ、配列番号11、12、13及び14に示すアミノ酸配列で表わされる。マウスFGF11乃至14のCPP−Cドメインは、それぞれ、配列番号15、16、17及び18によって表されるアミノ酸配列で表わされる。また、ラットFGF11乃至14のCPP−Cドメインは、それぞれ、配列番号19、20、21、及び22に示すアミノ酸配列で表わされ、ウシFGF11乃至14のCPP−Cドメインは、それぞれ、配列番号23、24、25、及び26に示すアミノ酸配列で表わされ、ウマFGF11、FGF13及び14のCPP−Cドメインは、それぞれ、配列番号27、28、及び29に示すアミノ酸配列で表わされる。
1番目: プロリン、又はロイシン(好ましくは、プロリン)
2番目: イソロイシン、又はロイシン(好ましくは、ロイシン)
3番目: グルタミン酸、又はリジン(好ましくは、グルタミン酸)
4番目: バリン
5番目: システイン、又はアラニン(好ましくは、アラニン)
6番目: メチオニン、又はバリン(好ましくは、メチオニン)
7番目: チロシン
8番目: アルギニン、リジン、又はグルタミン(好ましくは、アルギニン)
9番目: グルタミン酸
10番目:プロリン
本発明によるキメラタンパクは、FGF1又はFGF2に、CPP−Cが融合されているものであるが、両者は、直接結合してもよく、ペプチドからなる連結部分を介して結合してもよい。ペプチドからなる連結部分としては、アスパラギン酸やグルタミン酸等の親水性アミノ酸で構成することが好ましい。また、立体構造の点から、10個未満のアミノ酸からなる連結部分が好ましく、3個未満のアミノ酸からなる連結部分がより好ましい。
上述したCPP−FGF1又はCPP−FGF2キメラタンパク質の調製方法の例を以下に示す。
このキメラタンパク質をコードするDNAを組み込むベクターとしては、宿主内で複製保持されるものであれば、いずれのベクターも使用できる。例えば、大腸菌由来のプラスミド(pBR322、pBR325、pUC12、pET−3)、枯草菌由来のプラスミド、λファージなどのバクテリオファージやその誘導体、レトロウイルス、アデノウイルスやワクシニアウイルスなどの動物ウイルス、昆虫ウイルスなどの発現ベクターが挙げられる。
宿主としては、大腸菌(例えば、BL21、BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE)、枯草菌(例えば、Bacillus subtilis DB305)、酵母(例えばPichia pastoris,Saccharomyces cerevisiae)、動物細胞(例えばCOS cell, CHO cell、BHK cell、NIH3T2 cell、HUVE cell, LEII cell)、昆虫細胞などが挙げられる。
本発明では、上述したキメラタンパク質をコードする組換えDNA又はそのような組換えDNAを有するベクターを有効成分として使用することもできる。この実施の形態では、例えば、このような組換えDNA又はベクターを用いて上述したキメラタンパク質を体内で発現させて目的の治療を行うこともできる。
また、本発明によるキメラDNAを生体に導入し発現する方法としては、例えば、膜融合リポソーム、ナノ粒子等がある。
本発明によるCPP−FGF1キメラタンパク質は、FGF1を主要な構成部分とするため、天然のFGF1で予防若しくは治療可能な症状又は疾患に有効である。従って、発生期だけでなく成人において脳、中枢神経、腎臓、胎盤、副腎、皮膚、毛髪、鼓膜、眼、腸管などの消化管などさまざまな組織での細胞分裂、細胞増殖、抗アポトーシス、幹細胞の防護、血管新生等の生理作用が関与する種々の医学的用途に有効である。例えば、本発明のキメラタンパク質は、これらに限定されるものではないが、放射線、化学療法、物理的介入、アポトーシス又はその他の原因による、脳、中枢神経、腎臓、胎盤、副腎、皮膚、毛髪、鼓膜、眼、腸管等の消化管、卵巣等の生殖組織などの組織の脱落、変性、潰瘍、壊死、損傷又は障害、或いは下肢虚血性疾患又は虚血性冠動脈疾患等の虚血性症状又は疾患、或いは肺癌、胃癌、大腸癌、膵癌、腎細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、子宮体癌、卵巣癌、膀胱癌、尿管癌、血管肉腫等の腫瘍細胞の増殖又は転移等の予防又は治療に有効である。
このような併用される活性成分は、適応症に応じて選択され、例えば、腫瘍の治療の場合には、分子標的薬等を組み合わせることができ、放射線障害の予防又は治療においては、サイトカインや増殖因子等を組み合わせることができる。
各実施例で利用した試験方法及び材料をここでまとめて示す。
1.FGF1、FGF12B及びFGF12Bフラグメント
配列番号1に示すアミノ酸配列を有するFGF1を非特許文献8に記載する方法に従って、調製した。FGF12B及びFGF12Bフラグメントも非特許文献8に記載する手順で調製した。FGF12Bのアミノ酸配列を配列番号34に示す。
2.キメラタンパク質
FGF11サブファミリーであるFGF11、FGF12、FGF13及びFGF14に由来する各CPP−CをFGF1に融合したキメラタンパク質(以下、それぞれCPPF1、CPPF2、CPPF3及びCPPF4と略称する)を、非特許文献8に記載する方法に従って調製した。非特許文献8の関連記載を参照によりここに組み込む。
各キメラタンパク質の構造を図1Aに示し、キメラタンパク質のアミノ酸配列を配列番号30〜33に示す。
3.FACS
非特許文献8に記載する方法に従って、各FGFを蛍光標識し、FACS Calibur(BDバイオサイエンス社製)にて蛍光強度を測定した。
4.TUNELアッセイ
非特許文献8に記載する方法に従って、マウス組織のパラフィン包埋切片よりアポトーシスを検出した。
5.実験マウス
各実施例でのマウスの処理は、放射線医学総合研究所動物実験委員会により事前に承認された動物実験計画に記載する動物倫理に基づき行われた。
この試験では、FGFRの発現が低い細胞に対するCPP‐FGF1キメラタンパク質の細胞内移行能を評価した。
この試験では、放射線により誘発される細胞のアポトーシスに対するCPP−FGF1キメラタンパク質の抑制効果を評価した。
この試験では、放射線により誘発される細胞のアポトーシスに対するFGF12B及びFGF12フラグメントの抑制効果を評価した。
試験手順は、上述のアポトーシス抑制効果に関する評価と同様である。図4Bは、コントロール群及び各試験群のアポトーシス率の平均値+/−標準偏差(S.D.)を表す。図中*は、コントロール群に対する多重検定によりP<0.05となった試験群を示し、***は同検定でP<0.001となった試験群を示す。
この試験では、放射線による脱毛・毛包障害に対するCPP−FGF1キメラタンパク質の予防効果を評価した。毛包は、成長期において細胞分裂を活発に行っており、この時期では放射線に対して高い感受性を有する。このため、この時期の毛包に放射線を照射するとアポトーシスが引き起こされ易いが、このアポトーシスは毛包障害の指標となる。
そこで、成長期のマウス毛包において放射線誘導性アポトーシスに対するCPP−FGF1キメラタンパク質の抑制効果を測定して、毛包障害予防効果を評価した。
コントロール群では、12Gyの全身ガンマ線照射により、毛包バルブ領域にアポトーシスを示すTUNEL陽性細胞を、毛包バルブあたり約11個検出した。FGF1投与群及びFGF12投与群では、コントロール群に対して毛包バルブあたりのTUNEL陽性細胞数が有意に減少した。また、CPP−FGF1キメラタンパク質(CPPF1、CPPF2、CPPF3及びCPPF4)を投与した群では、いずれも、コントロール群に対してのみならずFGF1投与群(P<0.001)及びFGF12投与群(P<0.05)に対しても有意に毛包バルブあたりのTUNEL陽性細胞数が減少した。これにより、CPP−FGF1キメラタンパク質が、FGF1やFGF12より、脱毛・毛包障害に対するより高い予防効果を示すことが実証された。
本試験では、放射線による小腸の障害に対するCPP−FGF1キメラタンパク質の予防効果を評価した。放射線の被ばくにより障害を受けた小腸上皮の回復過程では、幹細胞が存在するクリプトが非常に重要な役割を担う。従って、放射線による障害の程度は、クリプトに存在するアポトーシス数と相関する。そこで、放射線を照射されたマウスのクリプトにおけるアポトーシス数を測定して、放射線による小腸の障害に対するCPP−FGF1の予防効果を評価した。
これにより、CPP−FGFキメラタンパクが、FGF1やFGF12と比較して、放射線による小腸の障害に対する保護効果が高いことが実証された。
この試験では、放射線照射後に再生したクリプト数を指標にして、CPP−FGF1キメラタンパク質の放射線による障害を受けた小腸の回復を促進させる効果を評価した。
5%マウス血清入りの生理食塩水を投与したコントロール群では、10Gyの全身ガンマ線照射により、空腸のクリプト生存率は0.26にすぎず、FGF1投与群でも、有意に増加しなかった。一方、各CPP−FGF1キメラタンパク質(CPPF1、CPPF2、CPPF3、及びCPPF4)を投与した群では、空腸のクリプト生存率は、それぞれ0.45、0.48、0.48、及び0.51となり、コントロール群のみならずFGF1投与群に対しても有意に高かった(P<0.05)。この結果によっても、CPP−FGF1キメラタンパク質は、FGF1と比較して、放射線により障害を受けた小腸の回復促進効果が極めて高いことが実証された。
本試験でも、CPP−FGF1キメラタンパク質の放射線による障害を受けた小腸の回復を促進させる効果を評価した。但し、この試験では、クリプトの長さを指標とする。クリプトの長さは、クリプトに存在する細胞数、すなわち上皮細胞の増殖能を反映するので、小腸の障害からの回復能力を評価するよい指標となる。
この結果によっても、CPP−C融合FGFは、FGF1と比較して、放射線により障害を受けた小腸の回復促進効果がより高いことが実証された。
この試験では、CPP−FGFキメラタンパク質の毛包に存在する幹細胞を放射線から防護する効果について評価した。
5%マウス血清入り生理食塩水を投与し12Gyの全身ガンマ線照射したコントロール群では、非照射群に対して、毛包バルジ領域のKeratin15陽性毛包幹細胞が減少した。また、FGF1投与群でも、毛包幹細胞は照射により減少した。一方、CPP−FGF1キメラタンパク質(CPPF1、CPPF2、CPPF3、及びCPPF4)を投与した群では、バルジ領域における毛包幹細胞数がコントロール群のみならずFGF1投与群に対しても有意に多く、毛包幹細胞数が非照射コントロール群以上のレベルまでに達した。この結果により、CPP−FGF1キメラタンパク質は、FGF1と比較して、放射線に対して毛包幹細胞を保護・維持する効果がより高いことが実証された。
この試験では、CPP−FGF1キメラタンパク質の癌細胞に対する細胞内移行能を評価した。
癌細胞の増殖を抑制する効果に関する評価1
この試験では、WST−1の細胞による分解を利用して、CPP−FGF1キメラタンパク質の癌細胞の増殖を抑制する効果を評価した。安定なテトラゾリウム塩であるWST−1は、代謝活性を持つ細胞の表面で可溶性のフォルマザンに分解されるため、培養中の代謝活性を持つ細胞数と直接的に相関する。そこで、各FGF投与前後のフォルマザン量を450nmでの吸光度により測定して、腫瘍細胞増殖を抑制する効果を評価した。
この試験では、コロニー形成法により、CPP−FGF1キメラタンパク質の癌細胞の増殖を抑制する効果を評価した。
この試験では、CPP−FGF1キメラタンパク質の癌細胞の腫瘤形成を抑制する効果をマウス移植モデルを用いて評価した。
マウスを用いた実験は、事前に承認された動物実験計画に基づき動物倫理に配慮しながら実施された。生後7週齢のオスSCIDマウスの右大腿部に、1x106個のヒト膵臓癌細胞株MIAPaCa−2を10μlのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に懸濁して皮下注射した。その1時間後、24時間後、48時間後、7日後、14日後及び21日後の合計6回、コントロール群では、0.5mlの5%マウス血清入り生理食塩水をマウスの腹腔に投与し、試験群では、10μgのCPP−FGF1キメラ蛋白質(CPPF2)を、0.5mlの5%マウス血清入り生理食塩水で希釈したものを投与した。癌細胞株皮下注射した後、皮下腫瘤の大きさを経時的にデジタルノギスで計測して、各群5匹の平均体積を算出した。
図12は、コントロール群及び試験群における右大腿皮下腫瘍の経時的体積変化を示し、図中、矢印は腹腔内投与の時期を示す。CPPF2を投与した試験群では、腫瘍の平均体積が18日以降、31日までコントロール群よりも常に小さかった。この結果により、CPP−FGF1キメラタンパク質に、癌細胞の腫瘤形成を抑制する効果があることが示された。
この試験では、浸潤アッセイによりCPP−FGF1キメラタンパク質による癌細胞の転移を抑制する効果を評価した。癌細胞は細胞転移を起こす際にプロテアーゼを分泌して基底膜を破壊して遊走する特性があり、この癌細胞の特性を利用する浸潤アッセイを使ってCPP−FGF1キメラタンパク質の癌細胞浸潤抑制効果を評価した。
次いで、下部ウェル及び上部ウェルの培養液に5μg/mlヘパリンを添加し、コントロール群のウェルではFGFを無添加とし、試験群のウェルでは、更に100ng/mLになるようにそれぞれFGF1及びCPPF2を加えた。37℃、5%CO2の雰囲気のインキュベータにプレートを入れて24時間培養し、癌細胞のゲルへの浸潤を誘発させた。浸潤した細胞をチャンバーのフィルターごとディフクイック(Sysmex社製)で固定染色し、染色された細胞数を算出して浸潤細胞数とした。試験は、各群に4つのチャンバーを割り当てて行い、その平均値を求め、培養液に懸濁した細胞数に対する各群の浸潤細胞数の平均値の割合を求めて浸潤細胞率とした。
Claims (14)
- 維芽細胞増殖因子1(以下、FGF1という)と、
ぞれぞれ、配列番号11〜29で表される、線維芽細胞増殖因子11〜14(以下、それぞれFGF11、FGF12、FGF13及びFGF14という)のC末端領域に存在する膜透過ドメインのアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列の一部のアミノ酸が置換され、且つ
1番目: プロリン、又はロイシン
2番目: イソロイシン、又はロイシン
3番目: グルタミン酸、又はリジン
4番目: バリン
5番目: システイン、又はアラニン
6番目: メチオニン、又はバリン
7番目: チロシン
8番目: アルギニン、リジン、又はグルタミン
9番目: グルタミン酸
10番目:プロリン
のアミノ酸配列を含む膜透過ペプチド(以下CPP−Cという)とを含む、キメラタンパク質;
該キメラタンパク質をコードするDNA配列を含むDNA分子、或いは
該キメラタンパク質をコードするDNA配列を含む、ベクター
を含有する、医薬用又は細胞培養用組成物。 - 細胞の維持又は増殖のため、幹細胞の防護のため、細胞のアポトーシスを抑制するため、細胞の遊走を促進するため、又は虚血性組織の機能回復のために使用される、請求項1に記載の医薬用又は細胞培養用組成物。
- 創傷治癒促進のため、幹細胞の死滅を引き起こす処置に対する幹細胞の保護のため、放射線による組織の障害を予防又は治療するため、虚血性疾患を予防又は治療するため、或いは悪性腫瘍の治療のために使用される、請求項1に記載の医薬用組成物。
- 前記幹細胞の死滅を引き起こす処置が、放射線被ばく又は化学療法である、請求項3に記載の医薬組成物。
- 腸管の放射線による障害を予防又は治療するため、放射線又は化学療法による毛包の障害を予防又は治療するため、下肢虚血性疾患の予防又は治療のため、虚血性冠動脈疾患の予防又は治療のため、糖尿病性皮膚潰瘍又は糖尿病性壊疽の予防又は治療のため、或いは鼓膜穿孔の治療のために使用される、請求項1に記載の医薬用組成物。
- 腸管の放射線による障害を予防又は治療するため、或いは放射線又は化学療法による毛包の障害を予防又は治療するために使用される、請求項1に記載の医薬用組成物。
- 脳、中枢神経、腎臓、胎盤、副腎、皮膚、毛髪、鼓膜、眼、消化管、及び生殖組織からなる群から選択される組織の脱落、変性、潰瘍、壊死、損傷又は障害の予防又は治療のために使用される、請求項1に記載の医薬用組成物。
- 前記FGF1は、以下のアミノ酸配列の何れかを含み、且つFGF1活性が維持されている、請求項1〜7の何れか1項に記載の医薬用又は細胞培養用組成物:
1)配列番号1〜5の何れかによって表されるアミノ酸配列、
2)配列番号1によって表されるアミノ酸配列に対して80%以上の配列同一性を有し、且つ該アミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸が維持されているアミノ酸配列、
3)配列番号2によって表されるアミノ酸配列に対して80%以上の配列同一性を有し、且つ該アミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸が保持されているアミノ酸配列、
4)配列番号3によって表されるアミノ酸配列に対して80%以上の配列同一性を有し、且つ該アミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸が保持されているアミノ酸配列、
5)配列番号4に表されるアミノ酸配列に対して80%以上の配列同一性を有し、且つ該アミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸が保持されているアミノ酸配列、並びに
6)配列番号5に表されるアミノ酸配列に対して80%以上の配列同一性を有し、且つ該アミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸が保持されているアミノ酸配列。 - 前記FGF1は、配列番号1〜5の何れかによって表される1〜150のアミノ酸配列に対して90%以上の配列同一性を有する、請求項8に記載の医薬用組成物。
- 前記CPP−Cは、40以下のアミノ酸からなる請求項1〜9の何れか1項に記載の医薬組成物。
- 前記CPP−Cは、FGF11、FGF12、FGF13及びFGF14の何れかに由来する連続する25以下のアミノ酸からなる、請求項11に記載の医薬組成物。
- 前記CPP−Cは、前記FGF1のC末端領域に、直接又は連結部を介して結合又は挿入されている、請求項1〜11の何れか1項に記載の医薬組成物。
- 前記キメラタンパク質は、配列番号30〜33の何れかに表されるアミノ酸配列に少なくとも90%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項1〜12の何れか1項に記載の医薬組成物。
- 前記キメラタンパク質は、配列番号30〜33の何れかに表されるアミノ酸配列の22〜28、及び133のアミノ酸を維持している、請求項13に記載の医薬組成物。
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