JP2016029030A - 角結膜障害治療剤 - Google Patents

Abstract

【課題】サクランを含有する角結膜障害の治療剤及び予防剤を提供すること。【解決手段】サクランを含有する角結膜障害の治療剤又は予防剤。【選択図】なし

Description

本発明は、サクランを含有する角結膜障害の治療剤及び予防剤に関する。

淡水性藍藻類スイゼンジノリ（Ａｐｈａｎｏｔｈｅｃｅ ｓａｃｒｕｍ）由来の多糖類としてサクラン（ｓａｃｒａｎ）が知られている。サクランの用途としては、多糖類−金属イオンハイブリッド液晶ゲルとして偏光レンズ、光トラップ剤、光散乱剤、流速センサー、遊戯具、アクチュエーター、接着剤等が予想されているほか、スイゼンジノリについて抗酸化作用、抗アレルギー活性及び抗菌性が報告されていることから、抗ウイルス剤、抗ガン剤、食品用健康増進剤、食品増粘・安定化剤等の用途も予想されている（例えば、特許文献１）。

サクランの用途としては、また、ゲル状の徐放性担体及び該担体を利用して薬物を徐放させるドラッグデリバリーシステムが提案されている（例えば、特許文献２）。
サクランは、このように多様な用途の可能性が示唆されており、なかでも、新たな医薬用途を探索することが望まれる。

国際公開ＷＯ２００８／０６２５７４Ａ１公報 特開２０１１−６８６０６号公報

本発明は、上記事情に鑑み、サクランを含有する角結膜障害の治療剤及び予防剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、ドライアイその他の角結膜障害の治癒効力試験において、サクランが角膜障害に対して優れた改善効果を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。

具体的には、本発明は以下のようなものを提供する。
［１］サクランを含有する角結膜障害の治療剤又は予防剤。
［２］角結膜障害が、角膜炎、結膜炎及び角結膜炎よりなる群から選択される少なくとも１つである［１］の治療剤又は予防剤。
［３］角結膜障害が、ドライアイ、角膜潰瘍、角膜びらん、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、結膜上皮欠損、結膜上皮障害、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎及び糸状角膜炎よりなる群から選択される少なくとも１つである［１］の治療剤又は予防剤。
［４］点眼剤又は眼軟膏の剤型にある［１］から［３］の何れかに記載の治療剤又は予防剤。

本発明によれば、サクランを含有することにより、眼に投与した際における保水性、給水性に優れた、角結膜障害の治療剤及び予防剤を提供することができる。具体的には、角膜障害の治癒効力試験を行ったところ、本発明におけるサクランは、角膜障害モデルにおいて優れた治癒促進効果を発揮するので、角膜潰瘍、角膜びらん、点状表層角膜症、角膜上皮欠損等の角膜炎、結膜上皮欠損、結膜上皮障害等の結膜炎、乾性角結膜炎（ドライアイ）、上輪部角結膜炎、糸状角膜炎等の角結膜炎の治療剤及び予防剤として有効に作用する。

角膜障害の治癒効力試験の判定基準に関し角膜の分割及びスコアを示す図である。

以下、本発明の実施形態について説明する。
本発明の角結膜障害の治療剤及び予防剤は、サクランを含有するものである。
サクランは、硫酸化多糖類の一種であり、分子量が２，０００，０００以上とされ、ＣＡＳ登録番号が１０３９５５２−３６−７である。サクランは、具体的には、ヘキソース構造を持つ糖構造体及びペントース構造を持つ糖構造体がα−グリコシド結合又はβ−グリコシド結合により直鎖状又は分岐鎖状に連結した糖鎖ユニットの繰り返し構造を持ち、前記糖鎖ユニットが糖構造体として乳酸化された硫酸化糖を含み、かつ、前記糖鎖ユニットにおいては、水酸基１００個当たり２．７個以上の水酸基が硫酸化され、あるいは全元素中で硫黄元素が１．５重量％以上を占める糖誘導体である。

サクランは、日本固有種であるスイゼンジノリから抽出した多糖類をプロトン化し、部分的に加水分解して得られることが知られている（例えば、特許文献１）。
本発明に用いることができるサクランは、スイゼンジノリ由来のものに限定されない。

本発明において、角結膜障害とは、種々の要因により角膜や結膜が損傷を受けた状態にあるものをいう。角結膜障害は、例えば、ドライアイ（乾性角結膜炎）による涙液減少により生じることがあるほか、外傷、自己免疫疾患、薬剤毒性等によっても生じることがある。
角結膜障害は、病状の観点から、角膜潰瘍、角膜びらん、点状表層角膜症、角膜上皮欠損等の角膜炎と、結膜上皮欠損、結膜上皮障害等の結膜炎とに大別される。角結膜障害は、また、原因、発症部位及び病状の観点からは、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎、糸状角膜炎等の角結膜炎を含む。本発明の角結膜障害の治療剤及び予防剤は、これらの何れの角結膜障害にも用いることができ、なかでも乾性角結膜炎に好適である。乾性角結膜炎は、ドライアイとしても知られる。

本発明の角結膜障害の治療剤及び予防剤は、非経口で投与することができる。投与剤型としては、点眼剤、眼軟膏、注射剤等が挙げられ、なかでも、点眼剤、眼軟膏が好ましく、点眼剤がより好ましい。

これらは、汎用されている技術を用いて製剤化することができる。
例えば、点眼剤は、塩化ナトリウム、濃グリセリン等の等張化剤、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等の緩衝化剤、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の界面活性剤、クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン等の防腐剤等を必要に応じて用い、調製することができる。ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよいが、４〜８の範囲が好ましい。
眼軟膏は、白色ワセリン、流動パラフィン等の汎用される基剤を用い、調製することができる。

本発明の角結膜障害の治療剤及び予防剤は、予防剤としても有用であるが、好ましくは治療剤である。
本発明の角結膜障害の治療剤及び予防剤、特に治療剤の投与量は、症状、年令、剤型等によって適宜選択できるが、点眼剤であればサクラン濃度が０．００００１〜１％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．０００１〜１％（ｗ／ｖ）のものを１日１〜数回、具体的には１日１〜６回、好ましくは１日２〜３回、点眼すればよい。

以下に、サクラン調製例、製剤例および薬理試験の結果を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

［サクランの調製例］
適量の淡水性藍藻類スイゼンジノリ［Ａｐｈａｎｏｔｈｅｃｅ ｓａｃｒｕｍ］を凍結し、融解した後に水洗いすることにより水溶性色素を除去し、次いでエタノール中で一昼夜攪拌しながら脂溶性色素を除去した。こうして色素を除去したスイゼンジノリから、エタノールを分離した後、０．４〜０．６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液中で４０℃に加熱し、攪拌しながら約５時間かけて溶解させた。この操作により抽出した糖誘導体の水溶液を濃塩酸で中和し、６０〜８０％のイソプロピルアルコールに浸すことで脱塩した。脱塩後、この濃縮液を１００％イソプロパノールに攪拌しながら流し込みゲル状のサクランを析出させ、８５℃以上で６時間熱風乾燥し、繊維状の糖誘導体であるスイゼンジノリ由来のサクラン（本化合物）を得た。

［製剤例］
サクラン（本化合物）を用いた代表的な製剤例を以下に示す。

［製剤例１］点眼剤
１００ｍｌ中
本化合物 ２００ｍｇ
塩化ナトリウム ９００ｍｇ
滅菌精製水 適量

［製剤例２］点眼剤
１００ｍｌ中
本化合物 ２００ｍｇ
塩化ナトリウム ８００ｍｇ
リン酸水素二ナトリウム １００ｍｇ
リン酸二水素ナトリウム 適量
滅菌精製水 適量

［製剤例３］眼軟膏
１００ｇ中
本化合物 ０．２ｇ
流動パラフィン １０．０ｇ
白色ワセリン 適量

［薬理試験］
１．角膜障害の治癒効力試験
雄性ＳＤラットを用い、Ｆｕｊｉｈａｒａらの方法（Ｉｎｖｅｓｔ． Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ． Ｖｉｓ． Ｓｃｉ ４２（１）：９６−１００（２００１））に準じ、角膜障害モデルを作製した。角膜障害モデル作製後、村上らの方法（あたらしい眼科２１（１）：８７−９０．（２００４））に準じ、角膜障害の程度をスコア化した。

（試験方法）
雄性ＳＤラットに生理食塩液で５倍希釈したソムノペンチル注射液を２．５ｍＬ／ｋｇ腹腔内投与し全身麻酔を施し、エスカイン（１．５％）の吸入により麻酔状態を維持した。次いで両側の頬部皮膚を切開し、眼窩外涙腺を摘出し、ミッヘル縫合鎹にて縫合した。その後８週かけて角膜障害を誘発させた。また、涙腺摘出を行わない正常動物を用意した。
次に、正常動物にはリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を両眼（正常眼）に、角膜障害モデルにはＰＢＳ（コントロール）、本化合物０．００６％及び０．２％ＰＢＳ溶解液を両眼に、それぞれ１回５μＬ、１日６回、４週間点眼した。
点眼開始直前及び４週後に角膜をフルオレセインにて染色した。角膜の上部、中間部及び下部のそれぞれについて、フルオレセインによる染色の程度を下記の基準に従ってスコア判定し、上記各部のスコアの合計の平均値から角膜障害の程度を算出した。
正常眼についても上記と同様にして試験を行い上記各部のスコアの合計の平均値を求めた。

（判定基準）
１）角膜を図１に示すように上・中・下に３分割し、表１の基準に基づいて０−３のスコアを付与した。中間値として０．５を設けた。
２）３区画のスコアを合計し、各観察眼の障害スコア（０−９）とした。

（結果）
コントロール群における、上記各部のスコアの合計の平均値を基準（改善率：０％）にして下記計算式により算出した、本化合物点眼による改善率を表２に示す。なお、スコアの平均値は各８眼（４匹）の平均である。
改善率（％）＝｛（コントロール）−（本化合物）｝／障害度×１００
障害度＝｛（コントロール）−（正常眼）｝

（考察）
上記のラットを用いた薬理試験の結果から明らかなように、本化合物は、角膜障害を顕著に改善する。

２．角膜障害の治癒効力試験（点眼回数の検討）
上記の試験結果をもとに、本化合物０．２％ＰＢＳ溶解液の角膜障害の改善効果に及ぼす点眼回数の影響について同様の試験方法で検討した。

（試験方法）
雄性ＳＤラットに上記の試験と同様の操作を行い８週かけて角膜障害を誘発させた。また、涙腺摘出を行わない正常動物を用意した。
次に、正常動物にはＰＢＳ（正常眼）を両眼に１日６回、角膜障害モデルにはＰＢＳ（コントロール）を両眼に１日６回、本化合物０．２％ＰＢＳ溶解液を両眼に１日２回および６回、それぞれ１回５μＬ、４週間点眼した。
点眼開始直前、１週後、２週後及び４週後に角膜をフルオレセインにて染色し、上記試験と同様の方法で角膜障害の程度を算出した。
正常眼についても上記と同様にして試験を行い上記各部のスコアの合計の平均値を求めた。

（結果）
上記試験と同様に改善率を算出した、本化合物点眼による改善率を表３に示す。なお、スコアの平均値は各８眼（４匹）の平均である。

（考察）
上記のラットを用いた薬理試験の結果から明らかなように、本化合物は、角膜障害を顕著に改善し、１日２回点眼であっても改善効果がみられたが、特に１日６回点眼では早期から改善効果がみられた。

３．結膜上皮障害改善作用の評価試験
上記の試験結果をもとに、本化合物０．２％ＰＢＳ溶解液の結膜上皮障害（結膜杯細胞減少）に対する改善効果について検討した。

（試験方法）
雄性ＳＤラットに上記の試験と同様の操作を行い８週かけて結膜上皮障害を誘発させた。また、涙腺摘出を行わない正常動物を用意した。
次に、正常動物にはＰＢＳ（正常眼）を両眼に１日６回、結膜上皮障害モデルにはＰＢＳ（コントロール）を両眼に１日６回、本化合物０．２％ＰＢＳ溶解液を両眼に１日２回および６回、それぞれ１回５μＬ、４週間点眼した。
点眼開始４週後に眼瞼を摘出し病理組織学的検査を行った。摘出眼瞼を１０％中性緩衝ホルマリン液で浸漬固定し、パラフィン置換後、耳側を包埋面としてブロックを作製し、薄切を行って、ＰＡＳ反応標本を作製した。
対物４０倍のレンズを用い、上下眼瞼それぞれについて、標本ごとで観察されるすべての結膜杯細胞数をカウントした。

（結果）
本化合物４週間連続点眼による結膜杯細胞増加効果を表４に示す。なお、杯細胞数の平均値は各７〜８眼（４匹）の平均である。

（考察）
上記の病理組織学的試験結果から、本化合物は、涙腺摘出により生じた結膜上皮障害を改善する効果を有し、１日６回点眼のみならず１日２回点眼であってもその改善効果がみられた。

Claims (4)

1. サクランを含有する角結膜障害の治療剤又は予防剤。
2. 角結膜障害が、角膜炎、結膜炎及び角結膜炎よりなる群から選択される少なくとも１つである請求項１記載の治療剤又は予防剤。
3. 角結膜障害が、ドライアイ、角膜潰瘍、角膜びらん、点状表層角膜症、角膜上皮欠損、結膜上皮欠損、結膜上皮障害、乾性角結膜炎、上輪部角結膜炎及び糸状角膜炎よりなる群から選択される少なくとも１つである請求項１記載の治療剤又は予防剤。
4. 点眼剤又は眼軟膏の剤型にある請求項１から請求項３の何れかに記載の治療剤又は予防剤。

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