JP2015536680A - 分子の作製 - Google Patents
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Abstract
Description
例示的な実施形態をより詳細に記載する前に、本明細書に用いられる用語の意味及び範囲を説明及び規定する以下の定義を示す。
様々な実施形態を記載する前に、本開示の教示が記載される特定の実施形態に限定されず、そのため当然ながら変更することができることを理解されたい。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態の説明のみを目的とし、本教示の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定を意図するものではないことも理解されたい。
上記の主題の方法を実施するためのキットも本開示によって提供される。主題のキットは、少なくとも複製起点カセットのセット;選択可能マーカーカセットのセット;1つ又は複数の機能的カセットのセット;及び対象の配列を含む標的カセットを含有し得る。これらのカセットの各々のカセットが異なる器に入れられ、標的カセットと複製起点カセットのいずれか、選択可能マーカーカセットのいずれか及び機能的カセットのいずれかとのハイブリダイゼーションにより、対象の宿主細胞に導入することができる生成物が生じる。或る特定の場合では、キットは同じ機能の第1の機能的カセットのセット;及び同じ機能の第2の機能的カセットのセットを含有し得る(ここで、第1及び第2の機能的カセットのセットは異なる機能を有し、例えば一方がプロモーターのセットであり、他方が精製カセットのセット又はシャトル複製起点である)。例えば、機能的カセットのセットは細菌細胞、哺乳動物細胞若しくは酵母細胞において活性を有する種々のプロモーターのセット、又はN末端若しくはN末端精製タグをコードするカセットのセットを含む機能的カセットのセットを含み得る。キットに含まれ得るカセットの更なる詳細は上記で説明している。カセットに加えて、キットは試薬、例えば緩衝剤、酵素及び上記の方法を行うのに必要な他の試薬を含有していてもよい。キットの様々な構成要素が別個の容器に入れられていてもよく、又は或る特定の適合する構成要素が所望に応じて単一の容器で予め合わせられていてもよい。
原理証明のためのカセット集合実験を以下のように行った。ピュロコックス・フリオスス(Pyrococcus furiosus)(Pfu)ファージポリメラーゼ遺伝子(pol)を、PCRによっておよそ4つの等しい500ヌクレオチド長セグメントに分けた。PCRプライマーは、ベクター及びセグメント♯2とアニールすることを可能にする末端配列を有するセグメント♯1を増幅するように設計した。セグメント♯2のPCRプライマーは、セグメント♯1とセグメント♯3との重複を可能するものであった。セグメント♯3のPCRプライマーは、セグメント♯2とセグメント♯4との重複を可能するものであった。最後に、PCRプライマーを、図11に示されるようにセグメント♯4がセグメント♯3及びベクターの他の末端と重複するように設計した。この実証実験では、個々のポリメラーゼセグメントを精製しなかった。5’及び3’末端がそれぞれセグメント♯1及び♯4と重複する配列を含むようにベクターを増幅した。増幅したポリメラーゼセグメントと線状ベクター骨格とを、ほぼ等しいモル比で混合し、その後表2に記載のように線形増幅を行った。
原理証明のためのベクター集合実験を以下のように行った。選択可能マーカー(SM)カセット(アンピシリン耐性)、大腸菌複製起点カセット(p15A)、シャトルカセット、付加的な要素のカセット及びGOIカセットの5つのカセットを作製した。
Claims (17)
- (a)(i)複製起点カセットのセットと、
(ii)選択可能マーカーカセットのセットと、
(iii)1つ又は2つ又はそれ以上の機能的カセットのセットと、
(iv)対象の配列を含む標的カセットと
を取得するステップと、ここで、前記(i)、(ii)、(iii)及び(iv)の各々のカセットが異なる器に入れられており、
(b)複製起点カセット、選択可能マーカーカセット及び1つ又は2つ又はそれ以上の機能的カセットを、前記(a)のセットから選択するステップと、
(c)前記ステップ(b)で選択したカセットと前記標的カセットとの集合反応を行うステップと、ここで、前記カセットが、対象の宿主細胞に形質転換又はトランスフェクトすることができる生成物を生じるために互いにハイブリダイズする末端を含み、
(d)前記ステップ(c)の生成物を宿主細胞に導入するステップと、
(e)前記1つ又は2つ又はそれ以上の選択された機能的カセット、前記標的カセット、前記複製起点カセット及び前記選択可能マーカーカセットを含むプラスミドを内部に有する形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞を選択するステップと
を含む方法。 - 前記1つ又は2つ又はそれ以上の機能的カセットのセットが、
プロモーターカセットのセット、
N末端精製タグカセットのセット、
C末端精製タグカセットのセット、
シャトル複製起点カセットのセット、
ターミネーターカセットのセット、
タンパク質発現エンハンサーカセットのセット、及び、
シャトル選択可能マーカーカセットのセット
から選択される、請求項1に記載の方法。 - 前記標的カセットが、ポリペプチド又は調節RNAのコード配列を含む、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記機能的カセットが異なる複数のプロモーターであり、前記コード配列が選択されたプロモーターに動作可能に連結したプラスミドが生じる、請求項3に記載の方法。
- 前記選択されたプロモーターが、原核生物又は真核生物の宿主細胞において活性を有する、請求項4に記載の方法。
- 前記機能的カセットが異なる複数のN末端精製タグをコードし、前記ポリペプチドとN末端精製タグとの融合物をコードするプラスミドが生じる、請求項3に記載の方法。
- 前記機能的カセットが異なる複数のC末端精製タグをコードし、前記ポリペプチドとC末端精製タグとの融合物をコードするプラスミドが生じる、請求項3に記載の方法。
- ステップ(c)において、各々の末端が、異なるカセットの他の1つの末端とハイブリダイズする、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複製起点カセットが、原核細胞及び真核細胞において動作可能である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記選択するステップ(b)が、
(i)同じ機能の第1の機能的カセットのセットから第1の機能的カセットを選択するステップと、
(ii)同じ機能の第2の機能的カセットのセットから第2の機能的カセットを選択するステップと、
を含み、前記第1の機能的カセット、前記第2の機能的カセット、前記標的カセット、前記複製起点カセット及び前記選択可能マーカーカセットを含む形質転換可能又はトランスフェクト可能な生成物が生じる、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。 - (i)複製起点カセットのセットと、
(ii)選択可能マーカーカセットのセットと、
(iii)1つ又は2つ又はそれ以上の機能的カセットのセットと、
(iv)対象の配列を含む標的カセットと
を含むキットであって、
前記(i)、(ii)、(iii)及び(iv)の各々のカセットが異なる器に入れられており、かつ、
前記複製起点カセットのいずれか、前記選択可能マーカーカセットのいずれか及び前記機能的カセットのいずれかと、前記標的カセットとのハイブリダイゼーションにより、宿主細胞に導入することができる形質転換可能又はトランスフェクト可能な生成物が生じる、キット。 - 同じ機能の第1の機能的カセットのセットからの第1の機能的カセットと、
同じ機能の第2の機能的カセットのセットからの第2の機能的カセットと、
を含む、請求項11に記載のキット。 - 1つ又は複数の機能的カセットのセットが異なるプロモーターのセットを含む、請求項11又は12に記載のキット。
- 前記プロモーターが、原核生物又は真核生物の細胞において活性を有する、請求項13に記載のキット。
- 1つ又は複数の機能的カセットのセットが、N末端精製タグをコードするカセットのセットを含む、請求項11〜14のいずれか一項に記載のキット。
- 1つ又は複数の機能的カセットのセットが、C末端精製タグをコードするカセットのセットを含む、請求項11〜15のいずれか一項に記載のキット。
- 1つ又は複数の機能的カセットのセットがターミネーターのセットを含む、請求項11〜16のいずれか一項に記載のキット。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000500981A (ja) * | 1995-11-30 | 2000-02-02 | マキシジェン,インコーポレイテッド | 反復的選択および組換えにより所望の特徴を有するポリヌクレオチドを作製する方法 |
JP2000512852A (ja) * | 1996-06-17 | 2000-10-03 | バイオダイナミックス アソシエイツ | 多成分核酸構築物を調製するための方法及びキット |
US20040161752A1 (en) * | 2000-07-21 | 2004-08-19 | Jarrell Kevin A. | Modular vector systems |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6165793A (en) * | 1996-03-25 | 2000-12-26 | Maxygen, Inc. | Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination |
US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US5948902A (en) | 1997-11-20 | 1999-09-07 | South Alabama Medical Science Foundation | Antisense oligonucleotides to human serine/threonine protein phosphatase genes |
FR2782323B1 (fr) | 1998-08-12 | 2002-01-11 | Proteus | Procede de production in vitro de sequences polynucleotidiques recombinees, banques de sequences et sequences ainsi obtenues |
AU2001277014A1 (en) * | 2000-07-21 | 2002-02-05 | Trustees Of Boston University | Modular vector systems |
US20050233340A1 (en) | 2004-04-20 | 2005-10-20 | Barrett Michael T | Methods and compositions for assessing CpG methylation |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000500981A (ja) * | 1995-11-30 | 2000-02-02 | マキシジェン,インコーポレイテッド | 反復的選択および組換えにより所望の特徴を有するポリヌクレオチドを作製する方法 |
JP2000512852A (ja) * | 1996-06-17 | 2000-10-03 | バイオダイナミックス アソシエイツ | 多成分核酸構築物を調製するための方法及びキット |
US20040161752A1 (en) * | 2000-07-21 | 2004-08-19 | Jarrell Kevin A. | Modular vector systems |
Non-Patent Citations (2)
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