JP2015533378A - 2段階接線流限外濾過を使用するポリペプチドの精製 - Google Patents
2段階接線流限外濾過を使用するポリペプチドの精製 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015533378A JP2015533378A JP2015538482A JP2015538482A JP2015533378A JP 2015533378 A JP2015533378 A JP 2015533378A JP 2015538482 A JP2015538482 A JP 2015538482A JP 2015538482 A JP2015538482 A JP 2015538482A JP 2015533378 A JP2015533378 A JP 2015533378A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tff
- unit operation
- interest
- tff unit
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 title claims abstract description 191
- 238000000746 purification Methods 0.000 title abstract description 68
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title description 7
- 238000010977 unit operation Methods 0.000 claims abstract description 728
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 365
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 231
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 231
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 179
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 168
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims abstract description 142
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 37
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 322
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 250
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims description 66
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 49
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 48
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 42
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 40
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 39
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 abstract description 1034
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 264
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 264
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 abstract description 64
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 59
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 45
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 44
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 38
- 238000011068 loading method Methods 0.000 abstract description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 32
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 28
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 abstract description 26
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 abstract description 23
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 abstract description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 abstract description 6
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 abstract description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 209
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 164
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 52
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 52
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 38
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 35
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 33
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 29
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 29
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 description 28
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 21
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 19
- 239000000306 component Substances 0.000 description 17
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 17
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 17
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 13
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 13
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 13
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 13
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 13
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 10
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 9
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 8
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 8
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 8
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000011112 process operation Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- -1 serum Substances 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 3
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108010000449 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000002259 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Receptors Human genes 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000003450 affinity purification method Methods 0.000 description 2
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 2
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 2
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 1,4a-dimethyl-7-propan-2-yl-2,3,4,4b,5,6,10,10a-octahydrophenanthrene-1-carboxylic acid Chemical compound C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 102100022014 Angiopoietin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 1
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 101100481403 Bos taurus TIE1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710149863 C-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100032976 CCR4-NOT transcription complex subunit 6 Human genes 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102000005598 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010059480 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 1
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 1
- 206010016803 Fluid overload Diseases 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004989 Hepsin Human genes 0.000 description 1
- 108090001101 Hepsin Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000753291 Homo sapiens Angiopoietin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000914324 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000914321 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000617725 Homo sapiens Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010091221 Lymphotoxin beta Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000018170 Lymphotoxin beta Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100028198 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710150918 Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920012266 Poly(ether sulfone) PES Polymers 0.000 description 1
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100024598 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Human genes 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N abts Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229950003145 apolizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 229960005395 cetuximab Drugs 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005112 continuous flow technique Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229950009760 epratuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229950001109 galiximab Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229960000578 gemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 102000014909 interleukin-1 receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040006732 interleukin-1 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N m-aminophenylboronic acid Chemical compound NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 JMZFEHDNIAQMNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229950008001 matuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229950010203 nimotuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012958 reprocessing Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 108010068698 spleen exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/362—Cation-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/10—Separation or concentration of fermentation products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/12—Purification
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2315/00—Details relating to the membrane module operation
- B01D2315/10—Cross-flow filtration
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2317/00—Membrane module arrangements within a plant or an apparatus
- B01D2317/02—Elements in series
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
- B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
- B01D61/145—Ultrafiltration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
本発明は、2段階接線流限外濾過(「TFF」)を用いて、関心対象の分子を含む溶液から該分子を分離する方法に関する。特に、本発明の方法は、その後の、すなわち下流の純化単位操作の前に、混入物および/または不純物レベルを劇的に低下させるための、馴化細胞培養上清などの粗製供給流の処理に関する。本発明の方法は、発酵または他の細胞培養工程のような生物学的生産システムからの粗製供給流の処理において使用することができ、さらに、クロマトグラフィー単位操作などの、高不純物負荷に対して感受性の高い下流工程の前の、時間を要する不純物沈殿工程(例えば、pH駆動性)および/または沈殿物濾過工程の必要性を排除することができる。開示される2段階TFF工程は、供給流、例えば細胞培養上清のpHに対応するかまたはそれに近いpH、典型的には7.5±1.0というpHで有利に実施することができる少なくとも2つのTFF単位操作を組み合わせている。供給流の関心対象のタンパク質の精製を目的とした、従来工程を補完する、改善する、またはそれに取って代わるためのTFF単位操作の使用は、直接的および間接的な処理コストの両方の顕著な削減を示し得る。例えば、沈殿工程および沈殿物濾過工程を排除することによる間接的な削減に加えて、2段階TFF単位操作によってもたらされる不純物負荷の減少は、下流のカラム性能、例えば、クロマトグラフィー分離、動的結合能、稼働寿命、および/または必要なカラムサイズの減少を改善することによる間接的削減をもたらし得る。特定の態様において、本発明の方法は、免疫グロブリン分子、例えば抗体の精製の工程において用いられ、このような工程は、アフィニティー精製段階、例えばプロテインAアフィニティークロマトグラフィー精製を欠いている。
本発明は、関心対象の分子、特に生体分子(例えば、タンパク質)を含む粗製溶液および/または生産溶液から該分子を分離および/または精製する方法に関する。バイオテクノロジーの分野が進歩するにつれて、粗製生産溶液から大量の生体分子を経済的に処理することは、次第に実際的に意味のあるものとなってきた。特に、生産および処理の経済的側面は、酵素、抗体、ならびにその他の特殊なタンパク質およびペプチドを含む生体分子および/または医薬の開発および製造に関する決定において決定的な役割を果たし得る。このような生体分子(例えば、タンパク質、ポリペプチド、抗体)の大部分の生産に関して、組換えDNA技法の使用が最適な生産方法となっている。このような方法を用いて、大量の所望の生体分子を種々の生物系において発現させることができる。このような系には、細胞ベースの系(細菌、酵母、昆虫、および哺乳動物の細胞培養物(例えば、関心対象のタンパク質の内因性発現を有するか、またはトランスジェニック細胞培養物)など)、トランスジェニック動物、およびトランスジェニック植物が含まれる。細胞培養系またはインビボ系の生体分子経路はまた、インビトロ生産システムの実施のために、必須成分にまで減少されている。しかしながら、これらの生産システムを用いた場合、バイオ医薬業界は、粗製生産溶液または生産材料から所望の生体分子(例えば、タンパク質)を回収するための改善されたまたは新規なシステムを開発する、対応した課題に直面する。粗製生産溶液には、馴化細胞培養培地、清澄化されたホモジナイズ/溶解された馴化細胞培養物、トランスジェニック動物由来の体液(例えば、血液、血清、乳汁、および尿)、ならびに最適な生体分子に加えて出発材料および成分を含むインビトロ生産溶液が含まれる。回収方法は、政府の純度および安全基準を満たす回収産物をもたらさなければならないばかりでなく、経済的に実行可能でなくてはならない。
(i) 第1のTFF単位操作は、該タンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収されるように、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、該タンパク質が第2のTFF単位操作の透過物中に回収されるように、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過する。
(i) 第1のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収されるようなカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第2のTFF単位操作の透過物中に回収されるようなカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過する。
(i) 第1のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収されるようなカットオフ値を有する、および/またはそのカットオフ値が該タンパク質の分子量の0.5倍である第1の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第2のTFF単位操作の透過物中に回収されるようなカットオフ値を有し、そのカットオフ値が1000 KDを超えない第2の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過する。
(i) 関心対象のタンパク質の分子量よりも小さいカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過する第1の接線流限外濾過単位操作;および
(ii) 関心対象のタンパク質の分子量よりも大きいカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過する第2の接線流限外濾過単位操作
を含む。本発明の成分 (i) および (ii) は、さらなる態様において、該タンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収され、かつ第2のTFF単位操作の透過物中に回収されることをさらに特徴とし得る。
(i) 関心対象のタンパク質の分子量の0.5倍またはそれ未満のカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過する第1の接線流限外濾過単位操作;および
(ii) 関心対象のタンパク質の分子量の少なくとも2倍であるが、1000 KD未満であるカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過する第2の接線流限外濾過単位操作
を含む。本発明の成分 (i) および (ii) は、さらなる態様において、該タンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収され、かつ第2のTFF単位操作の透過物中に回収されることをさらに特徴とし得る。
(i) 第1のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収されるようなカットオフ値を有する、および/またはそのカットオフ値が該タンパク質の分子量の0.5倍である第1の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、関心対象のタンパク質が第2のTFF単位操作の透過物中に回収されるようなカットオフ値を有し、そのカットオフ値が1000 KDを超えない第2の限外濾過膜を通して、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、該溶液は、該2段階TFFの上流で、0.1μm〜0.45μm細孔サイズのフィルターを通して濾過される細胞培養上清である。
(i) 第1のTFF単位操作は、30 kD〜50 kD(好ましくは50 kD)のカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、少なくとも300 kDであるが1000 kD以下である(好ましくは300 kDである)カットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 任意の第3のTFF単位操作は、30 kD〜50 kDまたはそれ未満(好ましくは50 kD)のカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過する。
この段落において記載される態様と関連した好ましい局面において、第1の産物流は、任意に滅菌された細胞培養上清である。任意の滅菌は、当技術分野で公知の、および/または本明細書において記載される任意の方法によって達成され得る。例えば、第1のTFF単位操作の上流の第1の産物流の滅菌は、0.1μm〜0.45μmの細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって達成され得、好ましくは0.2μmまたは0.22μmの細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって達成される。この段落において記載される態様と関連したさらなる好ましい局面において、第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作される;すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない。この段落において記載される態様と関連したさらなる好ましい局面において、任意の第3のTFF単位操作は、もし存在するのであれば、第2のTFF単位操作の直接下流にあるか、またはそれと平行して行われる;すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作(存在する場合)の間に介入する単位操作は存在しない。
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 任意の第3のTFF単位操作は、50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し、
この場合、第1の産物流は、0.22μm以下の細孔サイズを有するフィルター膜を通した濾過によって任意に滅菌された細胞培養上清であり;この場合、第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作のすぐ下流にあり;ならびにこの場合、任意の第3のTFF単位操作は、もし存在するのであれば、第2のTFF単位操作のすぐ下流にあるか、またはそれと平行して行われる。
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過する。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作される;すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し、
ならびにこの場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し、
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作される(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない)。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過する。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作される(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない)。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し、
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し、
この場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;かつ
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、第1および第2のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1および第2のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
ならびにこの場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
ならびにこの場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
ならびにこの場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満である。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり、
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
この場合、
(i) 第1のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第1の産物流を濾過し;
(ii) 第2のTFF単位操作は、300 kD〜1000 kD、好ましくは300 kDのカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第2の産物流を濾過し;かつ
(iii) 第3のTFF単位操作は、50 kDまたはそれ未満、好ましくは50 kDのカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、関心対象の免疫グロブリンを含む第3の産物流を濾過し;
この場合、
第2のTFF単位操作は、第1のTFF単位操作の直接下流で操作され(すなわち、この局面において、第1のTFF単位操作と第2のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第3のTFF単位操作は、第2のTFF単位操作の直接下流で、またはそれと平行して操作され(すなわち、この局面において、第2のTFF単位操作と第3のTFF単位操作の間に介入する単位操作は存在しない);
この場合、
第1の産物流は、0.1μm〜0.45μm(好ましくは0.2μmまたは0.22μm)の細孔サイズを有するフィルターを通した濾過によって滅菌された細胞培養上清であり;
この場合、第1、第2、および第3のTFF単位操作の操作後に、
(a) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、細胞培養上清中のHCP濃度と比べて少なくとも10%低下し;かつ/または
(b) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCPの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満であり;かつ/または
(c) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、細胞培養上清中のHCDNA濃度と比べて少なくとも30%低下し;かつ/または
(d) 該免疫グロブリンを含む溶液中のHCDNAの濃度は、該免疫グロブリン1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満であり;
ならびにこの場合、
該方法は、第1、第2、および第3のTFF単位操作の下流にクロマトグラフィー工程(例えば、イオン交換クロマトグラフィー工程および/またはアフィニティークロマトグラフィー工程)をさらに含む。
一般に、以下の語または語句は、概要、説明、実施例、および特許請求の範囲において使用される場合に、示された定義を有する。
驚いたことに、関心対象の分子を含む溶液から該分子を分離するための2段階接線流限外濾過(「2段階TFF」)の使用が、標準的な精製工程と比べて、溶液中の混入物のレベルを劇的に低下させることが発見された。したがって、本明細書において開示される2段階TFF方法は、既存の精製スキームを補完することができ、かつ/または既存の精製スキーム内の1つもしくは複数の単位操作に取って代わることができる。特に、本明細書において開示される2段階TFF方法は、混入物レベルを、付加的な不純物沈殿工程および清澄化/沈殿物濾過工程の必要性なしに、分子の下流の処理および/または精製が進行し得る程度にまで低下させる。本明細書において開示される方法は、生体分子の分離および/または精製工程に特に役に立つ。本明細書において開示される2段階TFF方法は、溶液から関心対象の分子を分離/精製/単離するための任意の工程において使用され得る。本明細書において開示される2段階TFF方法によって提供される混入物/不純物レベルの実質的な低下はまた、混入物/不純物レベルが工程の性能および/または単位操作の機能に悪影響を及ぼす任意の工程にも関連性がある。例えば、2段階TFF方法は、その効果的な可使時間を延長させるために、例えば、親和性分子、例えばプロテインA、またはクロマトグラフィー樹脂を保護するために(不純物負荷の減少による)、アフィニティークロマトグラフィー、例えばプロテインAカラム、またはイオン交換クロマトグラフィー単位操作の上流で使用され得る。ある種の態様において、本明細書において開示される2段階TFF方法は、既存の精製スキーム内の1つまたは複数の単位操作、例えばアフィニティークロマトグラフィーに取って代わることができ、したがって生体分子、例えば抗体を含む溶液からの該生体分子の非アフィニティー精製/単離/分離において使用することができる。他の態様において、本明細書において開示される2段階TFF方法は、アフィニティークロマトグラフィー、例えばプロテインAクロマトグラフィーもまた含む工程において使用することができる。
1段階TFFを用いた溶液からのタンパク質の処理
本実施例は、非アフィニティー精製方法、特に陰イオン交換クロマトグラフィー(「AEX」)および陽イオン交換クロマトグラフィー(「CEX」)を用いた、抗体を含む溶液からの該抗体の単離および/または精製に関する。抗体を含む最初の溶液は、清澄化された馴化細胞培養培地の供給流である。供給流は、50 kDカットオフを有する1段階の接線流濾過(「TFF」)を用いて前処理する。本実施例は、典型的な供給流から抗体を非アフィニティー単離する際の、当技術分野において日常的に用いられる一般的実践に関する(例えば、Gottschalk 2009;Alahari et al., BioPharm Int. March 2, 2009 (Supp.);Wang et al., BioPharm. Int. October 2, 2009を参照されたい)。特に、抗体は、その抗体の分子量を下回るカットオフ値を有する限外濾過膜を用いる1段階のTFFを用いて、最初に濃縮される(および本明細書において開示されるように部分精製される)。TFF工程に続いて、緩衝液交換/透析濾過してから、クロマトグラフィー工程を行う。本明細書において開示および例証される特定の方法とは関係ないが、本実施例に用いられる具体的な抗体は、抗コロニー刺激因子1受容体抗体(抗CSFR1;WO 2011/131407を参照されたい)である。
1段階接線流濾過および透析濾過(保持物中の産物)
1段階接線流濾過は、Tandem Pump Model 1082(Satorius Stedim Biotech S.A.、Aubagne, France)およびSartocon Slice Cassette PESU 50 kD(濾過面積200 cm2、製品# 3081465002 E-SG;Satorius Stedim)を備えたSatorius Sartocon Sliceユニットを用いて達成した。1段階のTFFにおいて、2.9 mg/mlの濃度の関心対象の抗体を含む945 mlの清澄化細胞培養上清(すなわち、供給流)を、136 mlまで濃縮した。
TFF/緩衝液交換段階からの産物流(すなわち、保持物)を、当技術分野で公知の標準的方法に従って陰イオン交換クロマトグラフィー(「AEX」)に供した。クロマトグラフィー条件は以下の通りであった:
交換材料:Q-Sepharose FF(GE Healthcare、Freiburg, Germany)
カラム:内径8 mm、長さ100 mm、体積5.03 ml
流速:150 cm/時間(1.25 ml/分)*
平衡化溶液:25 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、pH 7.5
負荷:タンパク質80 g/クロマトグラフィー材料1 l
洗浄溶液:25 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、pH 7.5
溶出方法:均一濃度
(*) 試料の負荷および溶出中に背圧の上昇が観察されたため、流速を低下させた。
上記の通り、AEXカラムから溶出された抗体は、pH 7.5を有する緩衝液中に存在した。その後のCEXを行うために、抗体含有溶出液を、1 Mクエン酸の添加によりpH 5.0にpH調整した。
pH調整および濾過の後に、CEXを用いて抗体を産物流から単離した。クロマトグラフィー条件は以下の通りであった。
交換材料:Poros 50HS(Life Technologies Co.、Carlsbad, CA, USA)
カラム:内径8 mm、長さ100 mm、体積5.03 ml
流速:150 cm/時間(= 1.25 ml/分)
平衡化溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、pH 5.0
負荷:タンパク質40 g/クロマトグラフィー材料1 l
洗浄溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、pH 5.0
溶出溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、750 mM NaCl、pH 5.0
溶出方法:22.5カラム体積での0% (v/v) 〜100% (v/v) 溶出溶液の直線勾配
最初のおよび最終的な産物流、ならびに精製工程の様々な中間段階における(典型的には各単位操作後)の産物流について、抗体、ならびに混入物である宿主細胞タンパク質(「HCP」)および宿主細胞DNA(「HCDNA」)の両方の濃度を決定した。清澄化細胞培養上清(最初の供給流)およびすべての中間産物流の抗体濃度は、プロテインA‐HPLC(プロテインAアフィニティー高速液体クロマトグラフィー;使用カラム:Applied BiosystemsのPA ImmunoDetection(登録商標)Sensor Cartridge for Perfusion Immunoassay(商標)Technology)によって決定した。CEXからプールされた溶出液中の抗体濃度は、UV 280 nm吸着によって決定した。
最初の供給流、中間産物流、および最終的な溶出液の抗体の濃度、抗体単量体の比率、および混入物レベルを表1に提供する。段階収率は、特定の単位操作について保持された抗体の割合を提供する。
2段階TFFを用いた溶液からのタンパク質の処理
本実施例は、非アフィニティー精製方法、特にAEXおよびCEXを用いた、抗体を含む溶液からの該抗体の単離および/または精製に関する。最初の溶液は、清澄化された馴化細胞培養培地の供給流である。供給流を2段階接線流濾過を用いて前処理したことを除いて、本実施例は実施例1と同一である。本実施例において、2段階TFFの第1のTFF単位操作は、実施例1で用いられた1段階TFF段階と同一であり、すなわち50 kDカットオフ値を有する限外濾過膜によって行われ、その後に緩衝液交換/透析濾過が行われた。しかしながら、実施例1とは異なり、本研究は、2段階TFFを提供する、300 kDカットオフを有するカラムを用いて行われる第2のTFF単位操作の付加を実証する。この設定は、図1または図2において見ることができる。例証される研究はさらに、50 kDカットオフを有するカラムを用いて行われる、300 kD TFFに続く第3のTFF/濃縮単位操作を付加した。本実施例において用いられる2段階TFFの模式図を図3に提供する。第2および第3のTFF単位操作(任意に透析濾過と組み合わされる)は、図4中の模式図に示されるように、平行して組み合わせることもできる。2段階TFF処理(TFF 50 kD、TFF 300 kD、TFF 50 kD)の後、AEXおよびCEXを実施例1と同様に行った(以下に説明されるように、遠心分離/濾過段階を除いて)。本研究は、実施例1で用いられた抗CSFR1抗体を用いて行った。
第1段階接線流濾過および透析濾過(保持物中の産物)
第1段階TFFおよび透析濾過は、実施例1において報告された1段階TFFについて記載されているように達成した。第1段階において、2.9 mg/mlの濃度の関心対象の抗体を含む945 mlの清澄化細胞培養上清を、136 mlまで濃縮した。
第2段階TFFは、Sartocon Slice Cassette PESU 300 kD(濾過面積200 cm2、製品# 3081467902E-SG;Satorius Stedim)を使用すること以外は、第1段階のTFFと同様に行った。この第2段階TFF中に、産物(抗体)はフィルターを通過し、透過物中に見出される(よって、この第2段階TFFの透過物は産物流を形成する)。この第2段階TFFにおいて、15.2 mg/mlの濃度の抗体を含む108 mlの試料(すなわち、第1段階TFFからの保持物)を、15倍の緩衝液容積(25 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、pH 7.5)に対して第2カラム上で透析濾過した。
第2段階TFFは、産物が透過物中に存在し、産物を含む試料の容積の劇的な増加(すなわち、産物流の容積の劇的増加)をもたらすように設計された。よって、50 kDカットオフを有するカラムを使用する第3のTFFを用いて、産物を濃縮し、産物流の容積を減少させた。この第3のTFF段階は、上記の第1段階TFFおよび実施例1におけるものと同一である、50 kDカットオフを有するカラムを使用した。この第3段階では、1.1 mg/mlの濃度の1627 mlの産物流(すなわち、第2段階TFFからの透過物)を、143 mlの容積まで濃縮した。
2段階TFF処理段階後のAEXは、実施例1と同様に進めた。クロマトグラフィー条件は以下の通りであった:
交換材料:Q-Sepharose FF(GE Healthcare、Freiburg, Germany)
カラム:内径8 mm、長さ100 mm、体積5.03 ml
流速:150 cm/時間(1.25 ml/分)
平衡化溶液:25 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、pH 7.5
負荷:タンパク質86 g/クロマトグラフィー材料1 l
洗浄溶液:25 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、pH 7.5
溶出方法:均一濃度
実施例1と同様に、CEXの前に、AEXカラムから溶出された試料を、1 Mクエン酸の添加によりpH 5.0にpH調整した。しかしながら、実施例1とは対照的に、この段階で沈殿は観察されず、したがって産物流の遠心分離/濾過は必要なかった。それどころか、産物流をCEXカラム上に直接負荷した。
pH調整の後に、実施例1に記載されるように、CEXを用いて抗体を産物流から単離した。クロマトグラフィー条件は以下の通りであった。
交換材料:Poros 50HS(Life Technologies Co.、Carlsbad, CA, USA)
カラム:内径8 mm、長さ100 mm、体積5.03 ml
流速:150 cm/時間(= 1.25 ml/分)
平衡化溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、pH 5.0
負荷:タンパク質20 g/クロマトグラフィー材料1 l
洗浄溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、pH 5.0
溶出溶液:10 mMクエン酸ナトリウム、750 mM NaCl、pH 5.0
溶出方法:22.5カラム体積での0% (v/v) 〜100% (v/v) 溶出溶液の直線勾配
抗体濃度、ならびに混入物である宿主細胞タンパク質(「HCP」)および宿主細胞DNA(「HCDNA」)の濃度は、実施例1に記載される方法に従って、実験の様々な段階で決定した。
最初の供給流、中間産物流、および最終的な溶出液の抗体の濃度、抗体単量体の比率、および混入物レベルを表2に提供する。段階収率は、特定の単位操作について保持された抗体の割合を提供する。
1段階TFFを用いた溶液からのタンパク質の処理
関心対象の異なるタンパク質、特に抗アンジオポエチン2 (Ang2)/VEGF抗体(例えば、米国特許出願公開第2010/0111967号を参照されたい)を含む供給流を用いて、実施例1を繰り返した。実施例1の方法からの逸脱のみを、本明細書において報告する。
1段階接線流濾過および透析濾過(保持物中の産物)
1段階TFFにおいて、2.7 mg/mlの濃度の抗Ang2/VEGF抗体を含む950 mlの清澄化細胞培養上清を、134 mlまで濃縮した。続いて、緩衝液交換もまた実施例1と同様に達成した。
カラムの負荷がタンパク質19 g/カラム材料1 lであったことを除いて、AEXは実施例1に従って進めた。実施例1において報告されたAEX工程とは対照的に、抗Ang2/VEGF抗体処理のこの段階において、背圧の上昇は観察されなかった;全単位操作を通して、流速150 cm/時間を維持した。これは、実施例1における最初の抗CSFR1供給流と比較して、最初の抗Ang2/VEGF抗体供給流中のHCDNAの濃度が劇的により低かったことによる可能性が高い(およそ80%低い;表1と表3を比較されたい)。これによって、沈殿および濾過の前のすべての単位操作について、HCDNAの濃度はより低くなる。
本工程を通して、HCDNAの濃度は実施例1におけるものと比較してより低いにもかかわらず、抗Ang2/VEGF産物流についても、5.0へのpH調整中に沈殿が観察された。この場合もやはり、産物流中の抗体の濃度が変化しなかったため、不純物のみが沈殿したと想定された。実施例1と同様に、CEXの前に、試料を遠心分離および濾過により清澄化した。
カラム負荷をタンパク質13 g/クロマトグラフィー材料1 lに下げたことを除いて、抗Ang2/VEGF試料のCEXは実施例1と同様に実施した。
抗体濃度、ならびに混入物HCPおよびHCDNAの濃度は、本実験を通して、実施例1に記載されるように決定した。
結果
供給流、中間産物流、および最終的な溶出液の抗体の濃度、抗体単量体の比率、および混入物レベルを表3に提供する。
2段階TFFを用いた溶液からのタンパク質の処理
本実施例は、実施例3の、すなわち抗Ang2/VEGF抗体を含む供給流を用いて、実施例2を繰り返す。実施例2の方法は再度詳述せず、その方法からの逸脱のみを本明細書において報告する。
第1段階接線流濾過および透析濾過(保持物中の産物)
第1段階TFFでは、2.7 mg/mlの濃度の関心対象の抗体を含む950 mlの清澄化細胞培養上清を、134 mlまで濃縮した。緩衝液交換は実施例2と同様に進めた。
第2段階TFFでは、11.9 mg/mlの濃度の抗体を含む98 mlの産物流試料(すなわち、第1段階TFFからの保持物)を、18倍の緩衝液容積に対して透析濾過した。
第3段階TFF/濃縮では、1.0 mg/mlの抗体を含む1524 mlの産物流を、157 mlの容積まで濃縮した。
負荷がタンパク質80 g/クロマトグラフィー材料1 lであったことを除いて、AEXは実施例2の方法に従って進めた。
pH調整は、実施例2に詳述される通りに行った。
CEXは、実施例2に詳述される通りに行った。
抗体濃度、ならびに混入物である宿主細胞タンパク質(「HCP」)および宿主細胞DNA(「HCDNA」)の濃度は、本実験を通して、実施例1に記載される方法に従って決定した。
最初の供給流、中間産物流、および最終的な溶出液の抗体の濃度、抗体単量体の比率、および混入物レベルを表4に提供する。
当技術分野で公知の方法に従った1段階TFFを使用すると、混入物レベル(例えば、HCPおよびHCDNA)を満足に低下させることができず、下流クロマトグラフィー工程、例えばAEXの過負荷を招く。しかしながら、本発明による2段階TFFを使用することにより、AEXカラムの過負荷は所与のカラムサイズで妨げられた。これは、2段階TFF方法によって、現在実行されているよりも顕著に小さいクロマトグラフィーカラムを用いて、同じ最初の供給流に関して、効率的な混入物減少、例えばHCDNAおよび/またはHCP除去が可能になることを示す。これは、本明細書において開示される2段階TFF方法に付随する顕著な経済的利点を表す。
Claims (15)
- 2段階接線流限外濾過 (TFF) を用いて、関心対象のタンパク質を含む細胞培養液から該タンパク質を分離する方法であって、該2段階TFFが第1のTFF単位操作および第2のTFF単位操作を含み、
第1のTFF単位操作が、該タンパク質が第1のTFF単位操作の保持物中に回収されるようなカットオフ値を有する第1の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第1の産物流を濾過し;かつ
第2のTFF単位操作が、該タンパク質が第2のTFF単位操作の透過物中に回収されるようなカットオフ値を有する第2の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第2の産物流を濾過し;
かつ、第1または第2の産物流が細胞培養上清である、
方法。 - 第1の産物流が細胞培養上清であり、かつ第1のTFF単位操作が第2のTFF単位操作の上流にある、請求項1記載の方法。
- 2段階TFFが、前記タンパク質が第3のTFF単位操作の保持物中にあるようなカットオフ値を有する第3の限外濾過膜を用いて、該タンパク質を含む第3の産物流を濾過する第3のTFF単位操作をさらに含み、かつ第3のTFF単位操作が第1および第2のTFF単位操作の下流にある、請求項1または2記載の方法。
- 第3の限外濾過膜のカットオフ値が第2の限外濾過膜のカットオフ値と同じである、請求項3記載の方法。
- 前記タンパク質が、少なくとも10 kDであるが500 kD以下の分子量を有する、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
- 第1の限外濾過膜が、前記タンパク質の分子量の2分の1(0.5倍)またはそれ未満のカットオフ値を有し、かつ
第2の限外濾過膜が、該タンパク質の分子量の少なくとも2倍であるが1000 kD以下であるカットオフ値を有する、
請求項5記載の方法。 - 前記タンパク質が150±75 kDの分子量を有する、請求項5または6記載の方法。
- 前記タンパク質が抗体である、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
- 第1の限外濾過膜が50 kDまたはそれ未満のカットオフ値を有し、かつ第2の限外濾過膜が300 kD〜1000 kDのカットオフ値を有する、請求項5〜8のいずれか一項記載の方法。
- 第1の限外濾過膜が50 kDのカットオフ値を有し、かつ第2の限外濾過膜が300 kDのカットオフ値を有する、請求項9記載の方法。
- 2段階TFFが、関心対象のタンパク質を含む溶液中の宿主細胞タンパク質 (HCP)の濃度を細胞培養上清と比べて少なくとも10%低下させ、かつ/または関心対象のタンパク質を含む溶液中の宿主細胞DNA (HCDNA)の濃度を細胞培養上清と比べて少なくとも30%低下させる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
- 2段階TFFが、関心対象のタンパク質を含む溶液中のHCPの濃度を、該タンパク質1 mg当たり400,000 ngもしくはそれ未満まで低下させ、かつ/または関心対象のタンパク質を含む溶液中のHCDNAの濃度を、該タンパク質1 mg当たり1,500,000 pgもしくはそれ未満まで低下させる、請求項8〜10のいずれか一項記載の方法。
- 2段階TFFの下流にカラムクロマトグラフィー工程をさらに含む、前記請求項のいずれか一項記載の方法。
- カラムクロマトグラフィー工程が非アフィニティーカラムクロマトグラフィー工程である、請求項13記載の方法。
- カラムクロマトグラフィー工程が陰イオン交換クロマトグラフィー (AEX) 単位操作または陽イオン交換クロマトグラフィー (CEX) 単位操作である、請求項13または14記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP12190682 | 2012-10-30 | ||
EP12190682.0 | 2012-10-30 | ||
PCT/EP2013/072511 WO2014067898A1 (en) | 2012-10-30 | 2013-10-28 | Purification of polypeptides using dual stage tangential-flow ultrafiltration |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015533378A true JP2015533378A (ja) | 2015-11-24 |
JP6345184B2 JP6345184B2 (ja) | 2018-06-20 |
Family
ID=47115562
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015538482A Active JP6345184B2 (ja) | 2012-10-30 | 2013-10-28 | 2段階接線流限外濾過を使用するポリペプチドの精製 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20150274773A1 (ja) |
EP (1) | EP2914612B1 (ja) |
JP (1) | JP6345184B2 (ja) |
KR (1) | KR20150079830A (ja) |
CN (1) | CN104755489B (ja) |
BR (1) | BR112015009553A2 (ja) |
CA (1) | CA2887684A1 (ja) |
ES (1) | ES2706190T3 (ja) |
HK (1) | HK1208872A1 (ja) |
HR (1) | HRP20190043T1 (ja) |
MX (1) | MX2015005178A (ja) |
PL (1) | PL2914612T3 (ja) |
RU (1) | RU2632568C2 (ja) |
SI (1) | SI2914612T1 (ja) |
WO (1) | WO2014067898A1 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019516964A (ja) * | 2016-04-14 | 2019-06-20 | ロンザ リミテッドLonza Limited | 宿主細胞タンパク質の検出のための組成物及び方法 |
JP2019532916A (ja) * | 2016-08-16 | 2019-11-14 | ジェンザイム・コーポレーション | 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 |
JP2019535676A (ja) * | 2016-10-28 | 2019-12-12 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. | チロシン硫酸化抗体変異体の除去のための精製方法;精製された組成物 |
JP2021516971A (ja) * | 2018-03-09 | 2021-07-15 | 嘉和生物▲薬▼▲業▼有限公司 | 上流生産プロセスでの段階的な分画による生体高分子の生産方法、生産モジュール、および生産における使用 |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
LT2483305T (lt) * | 2009-10-01 | 2016-11-25 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Daugiakopis galutinis imunoglobulino filtravimas |
US10207225B2 (en) | 2014-06-16 | 2019-02-19 | Emd Millipore Corporation | Single-pass filtration systems and processes |
WO2015195453A2 (en) * | 2014-06-16 | 2015-12-23 | Emd Millipore Corporation | Methods for increasing the capacity of flow-through processes |
ES2742704T3 (es) | 2014-06-25 | 2020-02-17 | Emd Millipore Corp | Elementos, módulos y sistemas de filtro compactos, enrollados en espiral |
KR102235952B1 (ko) | 2014-08-29 | 2021-04-07 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 잔류물의 재순환을 이용한 싱글 패스 접선 유동 여과 시스템 및 접선 유동 여과 시스템 |
US10350518B2 (en) | 2014-08-29 | 2019-07-16 | Emd Millipore Corporation | Processes for filtering liquids using single pass tangential flow filtration systems and tangential flow filtration systems with recirculation of retentate |
CN104845956A (zh) * | 2015-06-11 | 2015-08-19 | 山东农业大学 | 一种切向流超滤技术提取生姜蛋白酶的方法 |
CN110198952B9 (zh) * | 2016-08-17 | 2024-05-28 | 勃林格殷格翰国际公司 | 制备含有生物分子的高度浓缩的液体制剂的方法 |
EP3141594A3 (en) * | 2016-11-11 | 2017-06-14 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Method for sampling fluid streams for monitoring contaminants in a continuous flow |
CA3043294A1 (en) * | 2016-11-11 | 2018-05-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Method for sampling fluid streams for monitoring contaminants in a continuous flow |
US11028124B2 (en) | 2018-05-07 | 2021-06-08 | Repligen Corporation | Methods, devices and systems for 3-stage filtration |
US20210253633A1 (en) * | 2018-06-08 | 2021-08-19 | Bristol-Myers Squibb Company | Single pass tangential flow filtration hybrid configurations for enhancing concentration of macromolecule solutions |
CN114750976B (zh) * | 2022-06-15 | 2022-11-01 | 成都凯天电子股份有限公司 | 一种直升机自适应供油系统性能地面测试系统及方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03180192A (ja) * | 1989-12-07 | 1991-08-06 | Kirin Brewery Co Ltd | 遺伝子組換えによるヒトプロTGF―β1の製造 |
JP2000501939A (ja) * | 1995-12-12 | 2000-02-22 | シエーリング アクチエンゲゼルシヤフト | 組み換えヒトインターロイキン―8の精製法 |
JP2004528279A (ja) * | 2000-12-19 | 2004-09-16 | サルザー バイオロジクス インコーポレイテッド | 骨組織からの精製tgf−1およびtgf−2の単離 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4420398A (en) | 1981-08-13 | 1983-12-13 | American National Red Cross | Filteration method for cell produced antiviral substances |
US4888115A (en) | 1983-12-29 | 1989-12-19 | Cuno, Incorporated | Cross-flow filtration |
DE3432718C1 (de) | 1984-09-06 | 1986-05-22 | Biotest Pharma GmbH, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung einer Loesung von Milch- und/oder Kolostralimmunglobulinen |
GB2176715A (en) | 1985-06-27 | 1987-01-07 | Apv Int Ltd | Beer filtration |
AT385426B (de) * | 1986-06-30 | 1988-03-25 | Vogelbusch Gmbh | Verfahren zum kontinuierlichen filtrieren einer fluessigkeit und einrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
US5256294A (en) | 1990-09-17 | 1993-10-26 | Genentech, Inc. | Tangential flow filtration process and apparatus |
RU2049471C1 (ru) * | 1992-12-21 | 1995-12-10 | Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат" | Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат" |
US6214221B1 (en) * | 1999-02-22 | 2001-04-10 | Henry B. Kopf | Method and apparatus for purification of biological substances |
US20040167320A1 (en) * | 2003-02-24 | 2004-08-26 | Couto Daniel E. | Methods of tangential flow filtration and an apparatus therefore |
US7531632B2 (en) * | 2006-02-16 | 2009-05-12 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Clarification of transgenic milk using depth filtration |
US8741600B2 (en) | 2007-06-19 | 2014-06-03 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Method for separation of immunoglobulin monomers |
US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
KR101647871B1 (ko) | 2010-03-05 | 2016-08-11 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 인간 csf-1r에 대한 항체 및 이의 용도 |
-
2013
- 2013-10-28 EP EP13794828.7A patent/EP2914612B1/en active Active
- 2013-10-28 KR KR1020157013846A patent/KR20150079830A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-10-28 PL PL13794828T patent/PL2914612T3/pl unknown
- 2013-10-28 WO PCT/EP2013/072511 patent/WO2014067898A1/en active Application Filing
- 2013-10-28 SI SI201331326T patent/SI2914612T1/sl unknown
- 2013-10-28 CA CA2887684A patent/CA2887684A1/en not_active Abandoned
- 2013-10-28 CN CN201380056755.7A patent/CN104755489B/zh active Active
- 2013-10-28 RU RU2015120458A patent/RU2632568C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-10-28 MX MX2015005178A patent/MX2015005178A/es unknown
- 2013-10-28 ES ES13794828T patent/ES2706190T3/es active Active
- 2013-10-28 BR BR112015009553A patent/BR112015009553A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-10-28 JP JP2015538482A patent/JP6345184B2/ja active Active
-
2015
- 2015-04-30 US US14/701,306 patent/US20150274773A1/en not_active Abandoned
- 2015-09-24 HK HK15109412.4A patent/HK1208872A1/xx unknown
-
2019
- 2019-01-04 HR HRP20190043TT patent/HRP20190043T1/hr unknown
-
2020
- 2020-02-21 US US16/798,141 patent/US20200291064A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03180192A (ja) * | 1989-12-07 | 1991-08-06 | Kirin Brewery Co Ltd | 遺伝子組換えによるヒトプロTGF―β1の製造 |
JP2000501939A (ja) * | 1995-12-12 | 2000-02-22 | シエーリング アクチエンゲゼルシヤフト | 組み換えヒトインターロイキン―8の精製法 |
JP2004528279A (ja) * | 2000-12-19 | 2004-09-16 | サルザー バイオロジクス インコーポレイテッド | 骨組織からの精製tgf−1およびtgf−2の単離 |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019516964A (ja) * | 2016-04-14 | 2019-06-20 | ロンザ リミテッドLonza Limited | 宿主細胞タンパク質の検出のための組成物及び方法 |
JP2019532916A (ja) * | 2016-08-16 | 2019-11-14 | ジェンザイム・コーポレーション | 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 |
JP7106523B2 (ja) | 2016-08-16 | 2022-07-26 | ジェンザイム・コーポレーション | 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 |
JP2022110128A (ja) * | 2016-08-16 | 2022-07-28 | ジェンザイム・コーポレーション | 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 |
US11884703B2 (en) | 2016-08-16 | 2024-01-30 | Genzyme Corporation | Methods of processing a fluid including a recombinant therapeutic protein and use thereof |
JP2019535676A (ja) * | 2016-10-28 | 2019-12-12 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションMerck Sharp & Dohme Corp. | チロシン硫酸化抗体変異体の除去のための精製方法;精製された組成物 |
JP2023011753A (ja) * | 2016-10-28 | 2023-01-24 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー | チロシン硫酸化抗体変異体の除去のための精製方法;精製された組成物 |
JP7229157B2 (ja) | 2016-10-28 | 2023-02-27 | メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー | チロシン硫酸化抗体変異体の除去のための精製方法;精製された組成物 |
JP2021516971A (ja) * | 2018-03-09 | 2021-07-15 | 嘉和生物▲薬▼▲業▼有限公司 | 上流生産プロセスでの段階的な分画による生体高分子の生産方法、生産モジュール、および生産における使用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014067898A1 (en) | 2014-05-08 |
EP2914612B1 (en) | 2018-11-14 |
RU2632568C2 (ru) | 2017-10-05 |
BR112015009553A2 (pt) | 2017-10-03 |
MX2015005178A (es) | 2015-09-07 |
CA2887684A1 (en) | 2014-05-08 |
RU2015120458A (ru) | 2016-12-20 |
PL2914612T3 (pl) | 2019-04-30 |
ES2706190T3 (es) | 2019-03-27 |
HRP20190043T1 (hr) | 2019-02-22 |
US20150274773A1 (en) | 2015-10-01 |
EP2914612A1 (en) | 2015-09-09 |
KR20150079830A (ko) | 2015-07-08 |
US20200291064A1 (en) | 2020-09-17 |
HK1208872A1 (en) | 2016-03-18 |
SI2914612T1 (sl) | 2019-03-29 |
CN104755489B (zh) | 2019-01-15 |
JP6345184B2 (ja) | 2018-06-20 |
CN104755489A (zh) | 2015-07-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6345184B2 (ja) | 2段階接線流限外濾過を使用するポリペプチドの精製 | |
CA2930350C (en) | Immunoglobulin purification using pre-cleaning steps | |
JP6560673B2 (ja) | ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィーを用いた二重特異性抗体および二重特異性抗体生産副産物の分離法 | |
AU2017204893A1 (en) | Method for purifying Fc-fusion protein | |
JP7475381B2 (ja) | ウイルス濾過 | |
US20220194981A1 (en) | Improvement of affinity chromatography of immunoglobulins by using pre-capture flocculation | |
TW202245900A (zh) | 深層過濾器的再生及多次使用 | |
US20210355159A1 (en) | In-line product concentration to reduce volumetric load flow rate and increase productivity of a bind and elute chromatography purification | |
US20230049176A1 (en) | Methods to decrease impurities from recombinant protein manufacturing processes | |
TWI828671B (zh) | 用於純化重組蛋白質的全流通式方法 | |
US20210017223A1 (en) | Separation Method | |
JP2021535221A (ja) | 新規精製方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160622 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170615 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170810 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171206 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180423 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180522 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6345184 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |