JP2022110128A - 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 - Google Patents

組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法およびその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】治療用タンパク質原薬の適応性および費用対効果の高い製造方法を提供する。【解決手段】タンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットを含む回路システムおよびタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットを含む回路システムの一方または両方の使用を含む、流体を処理する方法が本明細書において提供される。本発明において提供される方法のいずれかを使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程を含む、治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的方法も提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その全体の内容を参照によって本明細書に組み入れる、2016年8月16日に出願された米国仮特許出願第62/375,689号の優先権を主張する。
本出願は、バイオテクノロジーおよび組換えタンパク質のバイオマニュファクチャリングの方法に関する。
組換えタンパク質をコードする核酸を含有する哺乳動物細胞は、治療的または商業的に重要なタンパク質を生成するために使用されることが多い。現在の多様な製品パイプラインの環境下では、バイオテクノロジー企業は、治療用タンパク質原薬の適応性および費用効果の高い製造に対する革新的解決策の開発に益々駆り立てられている。
本発明は、少なくとも部分的に、タンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットまたはタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットを含む回路システムを使用して、それぞれ、限外濾過/透析濾過およびウイルス濾過のユニット操作を連続的に実施することができるという発見に基づく。この発見に鑑みて、タンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットを含む回路システムおよびタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットを含む回路システムの一方または両方の使用を含む、流体を処理する方法が本明細書で提供される。本明細書で提供される方法のいずれかを使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程を含む、治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセスも提供される。
組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、(a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、該システムが、流体を、導管およびTFFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含まない濾液をTFFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(b)第1の期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(c)第2の期間に、透析濾過媒体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(d)第1および第2の期間の後、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに存在する組換え治療用タンパク質を含む流体を収集する工程とを含む前記方法が本明細書で提供される。これらの方法の一部の実施形態では、工程(b)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分(例えば、約0.5mL/分から約200mL/分)の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む。これらの方法の一部の実施形態では、第1の期間は、約0.1分から約12時間(例えば、約10分から約4時間)である。これらの方法の一部の実施形態では、工程(b)において流体を回路システムに流すことは、一方向に起こる。これらの方法の一部の実施形態では、工程(c)は、透析濾過媒体を、約0.1mL/分から約100L/分(例えば、約0.5mL/分から約200mL/分)の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む。これらの方法の一部の実施形態では、第2の期間は、約5分から
約12時間(例えば、約10分から約4時間)である。これらの方法の一部の実施形態では、工程(c)において透析濾過媒体を回路システムに流すことは、一方向に起こる。これらの方法の一部の実施形態では、導管は、約5mmから約5cm(例えば、約10mmから約3cm)の内径を有する。これらの方法の一部の実施形態では、TFFユニットは、約0.1cmから約50cm(例えば、約0.5cmから約20cm)の表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを含む。これらの方法の一部の実施形態では、回路システムは、導管内に配置されたポンプ(例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含む。
これらの方法の一部の実施形態は、(e)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットと、(ii)流体を第2の回路システムにもしくは第2の回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む第2の回路システムを準備する工程であって、該第2のシステムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(f)第3の期間に、工程(d)の収集した流体を、システムのポートと第2のシステムのポートの間で流体連通している接続導管を使用して第2のシステムに流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから回収する工程とをさらに含む。これらの方法の一部の実施形態では、工程(f)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分(例えば、約0.5mL/分から約200mL/分)の速度で、第2のシステムに流すことを含む。これらの方法の一部の実施形態では、第3の期間は、約0.1分から約12時間(例えば、約10分から約2時間)である。これらの方法の一部の実施形態では、工程(f)において流体を第2のシステムに流すことは、一方向に起こる。これらの方法の一部の実施形態では、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管は、約5mmから約5cm(例えば、約10mmから約3cm)の内径を有する。これらの方法の一部の実施形態では、TFVFユニットは、約0.1cmから約100m(例えば、約0.5cmから約200cm)の表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。これらの方法の一部の実施形態では、接続導管は、約5mmから約10cm(例えば、約10mmから約5cm)の内径を有する。これらの方法の一部の実施形態では、第2のシステムは、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管内に配置されたポンプ(例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含む。
組換え治療用タンパク質を含む流体を処理するための方法であって、(a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、該システムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(b)ある期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集する工程とを含む前記方法も提供される。これらの方法の一部の実施形態では、工程(b)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分(例えば、約0.5mL/分から約200mL/分)の速度で、システムに連続的に流すことを含む。これらの方法の一部の実施形態では、ある期間は、約5分から約12時間(例えば、約10分から約3時間)である。これらの方法の一部の実施形態では、工程(b)において流体をシステムに流すことは、一方向に起こる。これらの方法の一部の実施形態では、導管は、約5mmから約5cm(例えば、約10mmから約3cm)の内径を有する。これらの方
法の一部の実施形態では、TFVFユニットは、約0.1cmから約100m(例えば、約0.5cmから約200cm)の表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。これらの方法の一部の実施形態では、システムは、導管内に配置されたポンプ(例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含む。
治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセスであって、(a)細胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含む液体培養培地を準備する工程であって、液体培養培地が、第1のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS1)に供給される、前記工程と;(b)MCCS1を使用して、液体培養培地中の前記組換え治療用タンパク質を捕捉する工程であって、組換え治療用タンパク質を含むMCCS1の溶出液が、第2のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS2)に連続的に供給される、前記工程と;(c)MCCS2を使用して、組換え治療用タンパク質を精製およびポリッシュする工程であって、MCCS2からの溶出液が、組換え治療用タンパク質を含む流体である、前記工程と;(d)本明細書に記載の任意の方法のある方法を使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程とを含み、該プロセスが、前記液体培養培地から組換え治療用タンパク質を含む収集された流体または濾液に連続的に統合および実行され、収集された流体または濾液が治療用タンパク質原薬である、前記プロセスも提供される。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1によって少なくとも2つの異なるユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1によって、組換え治療用タンパク質を捕捉し、ウイルスを不活性化するユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1もしくはMCCS2、またはその両方の使用は、カラムスイッチングを含む。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも2つのクロマトグラフィーカラムを利用する。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも2つのクロマトグラフィー用膜を利用する。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムと少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜を利用する。これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS1は、第1の周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCCS1)である。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS1は、4カラムPCCSを含む。これらのプロセスの一部の実施形態では、4カラムPCCSにおける4つのカラムのうちの3つによって、液体培養培地から組換え治療用タンパク質を捕捉するユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、捕捉することは、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、または分子篩クロマトグラフィーを使用して実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、アフィニティークロマトグラフィーは:プロテインA結合捕捉メカニズム、基質結合捕捉メカニズム、抗体-または抗体断片-結合捕捉メカニズム、アプタマー結合捕捉メカニズム、およびコファクター結合捕捉メカニズムからなる群から選択される捕捉メカニズムにより実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、アフィニティークロマトグラフィーは、プロテインA結合捕捉メカニズムにより実施され、組換え治療用タンパク質は、抗体または抗体断片である。これらのプロセスの一部の実施形態では、4カラムPCCSにおける4つのカラムのうちの3つからの組換え治療用タンパク質を含有する溶出液は、4カラムPCCSの第4のカラムに供給される。これらのプロセスの一部の実施形態では、4カラムPCCSの第4のカラムによって、ウイルス不活性化のために組換え治療用タンパク質を含有する溶出液を低pHに保つことによりウイルスを不活性化するユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、4カラムPCCSの第4のカラムは、約10分から約1.5時間の期間、ウイルス不活性化のために組換えタンパク質を含有する溶出液を低pHに保つ。
これらのプロセスの一部の実施形態では、MCCS2は、第2の周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCCS2)である。これらのプロセスの一部の実施形態は、4カラ
ムPCCSの第4のカラムからの溶出液がPCCS2に供給される前に、インライン緩衝液調整リザーバを使用して、4カラムPCCSの第4のカラムからの溶出液のpHを調製する工程をさらに含む。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS2は、3つのクロマトグラフィーカラムと1つのクロマトグラフィー用膜を含む。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS2における3つのクロマトグラフィー用カラムによって、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィーによりPCCS1の溶出液から組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS2における3つのクロマトグラフィーカラムからの溶出液は、PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜に供給される。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜によって、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィーによりPCCS2の3つのクロマトグラフィー用カラムからの溶出液に存在する組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜によって、カチオン交換クロマトグラフィーによりポリッシュするユニット操作が実施される。これらのプロセスの一部の実施形態では、クロマトグラフィー用膜のフロースルーおよび洗浄液は、組換え治療用タンパク質を含む。これらのプロセスの一部の実施形態は、PCCS2における3つのカラムからの溶出液が、PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜に供給される前に、インライン緩衝液調整を使用して、PCCS2における3つのカラムからの溶出液のイオン濃度を調整する工程をさらに含む。これらのプロセスの一部の実施形態は、PCCS1とPCCS2の間のブレークタンクの使用をさらに含む。これらのプロセスの一部の実施形態は、溶出液がPCCS2に供給される前に、PCCS1から溶出液を濾過する工程をさらに含む。これらのプロセスの一部の実施形態は、治療用タンパク質原薬を医薬組成物に製剤化する工程をさらに含む。本明細書に記載の方法またはプロセスのいずれかの一部の実施形態では、組換え治療用タンパク質は、抗体もしくは抗体断片、酵素、工学的に操作されたタンパク質、または免疫原性タンパク質もしくはタンパク質断片である。
本明細書で使用される場合、名詞の前の単語「1つの(a)」は、特定の名詞の1つまたはそれ以上を表す。例えば、句「哺乳動物細胞(a mammalian cell)」は、「1つまたはそれ以上の哺乳動物細胞」を表す。
用語「タンジェンシャルフロー濾過ユニット」または「TFFユニット」は、当技術分野で公知であり、少なくとも1つのハウジング(シリンダーなど)およびフィルター表面の大部分がユニットを通る流体(例えば、細胞培養物)の流れに対して平行に位置するようにハウジング内に配置された少なくとも1つのクロスフロー(タンジェンシャル)フィルターを含むデバイスを意味する。TFFユニットは、当技術分野で周知であり、市販されている。ハウジングは、例えば、流体を、第1の入口/出口を通過させ、少なくとも1つのクロスフローフィルターを横切らせ、第2の入口/出口を通過させるように配置された第1の入口/出口と第2の入口/出口とを含むことができる。一部の例では、回路システムは、例えば、直列におよび/または並列に接続した複数のTFFユニットを含むことができる。例えば、2つまたはそれ以上のTFFユニットを含む回路システムは、システムにおいて隣接するTFFユニットの対を流体接続する流体導管を含むことができる。他の例では、回路システムは、流体導管により流体接続した2つまたはそれ以上のTFFユニットの2つまたはそれ以上のセットを含むことができる。本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のTFFユニットのいずれかは、第1の流れ方向と第2の流れ方向において流体を受容することができる。
用語「タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニット」または「TFVFユニット」は、当技術分野で公知であり、少なくとも1つのハウジング(シリンダーなど)およびウイルスフィルター表面の大部分がユニットを通る流体(例えば、細胞培養物)の流れに対し
て平行に位置するようにハウジング内に配置された少なくとも1つのクロスフロー(タンジェンシャル)ウイルスフィルターを含むデバイスを意味する。ハウジングは、例えば、流体を、第1の入口/出口を通過させ、少なくとも1つのクロスフローウイルスフィルターを横切らせ、第2の入口/出口を通過させるように配置された第1の入口/出口と第2の入口/出口とを含むことができる。一部の例では、回路システムは、例えば、直列におよび/または並列に接続した複数のTFVFユニットを含むことができる。例えば、2つまたはそれ以上のTFVFユニットを含む回路システムは、システムにおいて隣接するTFVFユニットの対を流体接続する流体導管を含むことができる。他の例では、回路システムは、流体導管により流体接続した2つまたはそれ以上のTFVFユニットの2つまたはそれ以上のセットを含むことができる。本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のTFVFユニットのいずれかは、第1の流れ方向と第2の流れ方向において流体を受容することができる。
用語「クロスフローフィルター」または「タンジェンシャルフィルター」は、当技術分野で公知であり、フィルター表面の大部分が流体(例えば、組換え治療用タンパク質を含む流体)の流れ(例えば、第1および第2の流れ方向)に対して平行であるようにTFFまたはTFVFユニット内に配置することができるように設計されたフィルターを意味する。例えば、クロスフローフィルターは、タンジェンシャルフロー濾過を可能にする任意の形状、例えば、管状または矩形を有し得る。特に有用なクロスフローフィルターは、流体がクロスフローフィルター表面を横切って流れる(例えば、1方向に流れるから2方向に流れるまで)場合、流体(例えば、細胞培養物)に少量の流体乱流またはせん断応力しか生じないように設計される。クロスフローフィルターは、例えば、Sartorius、MembraPure、Millipore、およびPall Corporationから市販されている。
用語「低乱流ポンプ」または「LTP」は、当技術分野で公知であり、単一方向(例えば、第1または第2の流れ方向)の、または流体(例えば、組換え治療用タンパク質を含む流体)に相当量のせん断応力もしくは流体乱流を誘導することなくシステム内に2つの方向(第1および第2の流れ方向)で流体(例えば、組換え治療用タンパク質を含む流体)を可逆的に流すシステムまたは回路内で流体(例えば、組換え治療用タンパク質を含む流体)を移動させることができるデバイスを意味する。LTPが、第1および第2の流れ方向を交互に繰り返しながら流体(例えば、組換え治療用タンパク質を含む流体)を流すために使用される場合、第2の流れ方向は、第1の流れ方向の方向とおよそ逆である。LTPの例は、ぜん動ポンプである。LTPの他の例は、当技術分野で公知である。
用語「哺乳動物細胞」は、任意の哺乳動物(例えば、ヒト、ハムスター、マウス、ミドリザル、ラット、ブタ、ウシ、またはウサギ)からの、またはそれに由来する任意の細胞を意味する。例えば、哺乳動物細胞は、不死化細胞であり得る。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、分化した細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、分化していない細胞である。哺乳動物細胞の非限定例は、本明細書に記載されている。哺乳動物細胞のさらなる例は、当技術分野で公知である。
用語「実質的に含まない」は、特定の物質(例えば、哺乳動物細胞)を少なくともまたは約90%含まない(例えば、少なくとももしくは約95%、96%、97%、98%、または少なくとももしくは約99%含まない、または約100%含まない)組成物(例えば、液体培養培地)を意味する。
用語「0.5×体積」は、体積の約50%を意味する。用語「0.6×体積」は、体積の約60%を意味する。同様に、0.7×、0.8×、0.9×、および1.0×は、それぞれ、体積の約70%、80%、90%、または100%を意味する。
用語「培養」または「細胞培養」は、制御された物理的条件のセット下での哺乳動物細胞の維持または増殖を意味する。
用語「哺乳動物細胞の培養物」は、制御された物理的条件のセット下で維持または増殖される複数の哺乳動物細胞を含有する液体培養培地を意味する。
用語「液体培養培地」は、in vitroで細胞(例えば、哺乳動物細胞)を成長または増殖させるのに十分な栄養を含有する流体を意味する。例えば、液体培養培地は:アミノ酸(例えば、20個のアミノ酸)、プリン(例えば、ヒポキサンチン)、ピリミジン(例えば、チミジン)、コリン、イノシトール、チアミン、葉酸、ビオチン、カルシウム、ナイアシンアミド、ピリドキシン、リボフラビン、チミジン、シアノコバラミン、ピルベート、リポ酸、マグネシウム、グルコース、ナトリウム、カリウム、鉄、銅、亜鉛、および重炭酸ナトリウムのうちの1つまたはそれ以上を含有し得る。一部の実施形態では、液体培養培地は、哺乳動物由来の血清を含有し得る。一部の実施形態では、液体培養培地は、哺乳動物由来の血清または別の抽出物を含有しない(既定の液体培養培地)。一部の実施形態では、液体培養培地は、微量の金属、哺乳動物成長ホルモン、および/または哺乳動物成長因子を含有し得る。液体培養培地の別の例は、最少培地(例えば、無機塩、炭素供給源、および水のみを含有する培地)である。液体培養培地の非限定例は、本明細書に記載されている。液体培養培地のさらなる例は当技術分野で公知であり、市販されている。液体培養培地は、任意の密度の哺乳動物細胞を含有し得る。例えば、本明細書で使用される場合、バイオリアクターから取り除かれた大量の液体培養培地は、哺乳動物細胞を実質的に含むことができない。
用語「動物由来成分を含まない液体培養培地」は、哺乳動物に由来する成分(例えば、タンパク質または血清)を全く含有しない液体培養培地を意味する。
用語「血清を含まない液体培養培地」は、哺乳動物の血清を含有しない液体培養培地を意味する。
用語「血清含有液体培養培地」は、哺乳動物の血清を含有する液体培養培地を意味する。
用語「既知組成の液体培養培地」は、当技術分野の用語であり、化学成分のすべてが既知である液体培養培地を意味する。例えば、既知組成の液体培養培地は、ウシ胎仔血清、ウシ血清アルブミン、またはヒト血清アルブミンを含有しないが、これは、これらの調製物が、典型的には、アルブミンおよび脂質の複雑な混合物を含有しないためである。
用語「タンパク質を含まない液体培養培地」は、タンパク質(例えば、検出可能なタンパク質)を何も含有しない液体培養培地を意味する。
用語「撹拌」は、バイオリアクター内で、液体培養培地の一部をかき混ぜることまたはそうでなければ移動させることを意味する。これは、例えば、バイオリアクター内の液体培養培地中の溶解O濃度を増加させるために実施される。撹拌は、任意の当技術分野で公知の方法、例えば、器具またはプロペラを使用して実施することができる。バイオリアクター内の液体培養培地の一部の撹拌を実施するために使用することができる例示的デバイスおよび方法は、当技術分野で公知である。
用語「治療用タンパク質原薬」は、夾雑するタンパク質、脂質、および核酸(例えば、液体培養培地中に存在するかまたは宿主細胞由来(例えば、哺乳動物、酵母、または細菌
宿主細胞由来)の夾雑タンパク質、脂質、および核酸)ならびに生物学的夾雑物(例えば、ウイルスおよび細菌夾雑物)から十分に精製または単離され、さらなる実質的な精製および/または汚染除去工程も用いずに医薬品に製剤化することができる組換えタンパク質(例えば、免疫グロブリン、タンパク質断片、工学的に操作されたタンパク質、または酵素)を意味する。
用語「統合されたプロセス」は、特定の結果(例えば、液体培養培地からの治療用タンパク質原薬の生成)を達成するために協同的に機能する複数の構造要素を使用して実施されるプロセスを意味する。
用語「連続的プロセス」は、流体を、システムの少なくとも一部を通して連続的に供給するプロセスを意味する。例えば、本明細書に記載の例示的な連続的生物学的製造システムのいずれかにおいて、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地は、操作しながら、そのシステムに連続的に供給され、治療用タンパク質原薬はそのシステムから送り出される。別の例では、連続的プロセスは、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を、バイオリアクターから、第1のMCCSを通して連続的に供給するプロセスである。連続的プロセスの別の例は、バイオリアクターから、第1および第2のMCCSを通して、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を連続的に供給するプロセスである。さらなる例として、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を、第1のMCCSを通して連続的に供給するプロセス、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を、第1および第2のMCCSを通して連続的に供給するプロセス、または組換え治療用タンパク質を含有する流体を、第2のMCCSを通して連続的に供給するプロセスが挙げられる。
用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリンタンパク質の少なくとも15個のアミノ酸(例えば、少なくとも20、30、40、50、60、70、80、90、または100個のアミノ酸)のアミノ酸配列(例えば、可変ドメイン配列、フレームワーク配列、または定常ドメイン配列)を含有するポリペプチドを意味する。免疫グロブリンは、例えば、軽鎖免疫グロブリンの少なくとも15個のアミノ酸、例えば、重鎖免疫グロブリンの少なくとも15個のアミノ酸を含んでもよい。免疫グロブリンは、単離された抗体(例えば、IgG、IgE、IgD、IgA、またはIgM)であってもよい。免疫グロブリンは、IgGのサブクラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4)であってもよい。免疫グロブリンは、抗体断片、例えば、Fab断片、F(ab’)断片、またはscFv断片であってもよい。免疫グロブリンは、二重特異的抗体もしくは三重特異的抗体、または二量体、三量体、もしくは多量体抗体、またはダイアボディ、Affibody(登録商標)、もしくはNanobody(登録商標)であってもよい。免疫グロブリンは、少なくとも1つの免疫グロブリンドメインを含有する工学的に操作されたタンパク質(例えば、融合タンパク質)でもあり得る。免疫グロブリンの非限定例は、本明細書に記載されており、免疫グロブリンのさらなる例は、当技術分野で公知である。
用語「タンパク質断片」または「ポリペプチド断片」は、少なくとももしくは約4個のアミノ酸長、少なくとももしくは約5個のアミノ酸長、少なくとももしくは約6個のアミノ酸長、少なくとももしくは約7個のアミノ酸長、少なくとももしくは約8個のアミノ酸長、少なくとももしくは約9個のアミノ酸長、少なくとももしくは約10個のアミノ酸長、少なくとももしくは約11個のアミノ酸長、少なくとももしくは約12個のアミノ酸長、少なくとももしくは約13個のアミノ酸長、少なくとももしくは約14個のアミノ酸長、少なくとももしくは約15個のアミノ酸長、少なくとももしくは約16個のアミノ酸長、少なくとももしくは約17個のアミノ酸長、少なくとももしくは約18個のアミノ酸長、少なくとももしくは約19個のアミノ酸長、または少なくとももしくは約20個のアミノ酸長、または20個超のアミノ酸長であるポリペプチド配列の一部を意味する。組換え
タンパク質断片は、本明細書に記載のプロセスのいずれかを使用して生成することができる。
用語「工学的に操作されたタンパク質」は、生物(例えば、哺乳動物)内に存在する内因性核酸によって天然にはコードされていないポリペプチドを意味する。工学的に操作されたタンパク質の例として、酵素(例えば、工学的に操作された酵素の安定性および/または触媒活性の増加を生じる1つまたはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加)、融合タンパク質、抗体(例えば、二価の抗体、三価の抗体、またはダイアボディ)、および少なくとも1つの組換えスキャホールド配列を含有する抗原結合タンパク質が挙げられる。
用語「マルチカラムクロマトグラフィーシステム」または「MCCS」は、合計2つまたはそれ以上の相互接続またはスイッチングクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜のシステムを意味する。マルチカラムクロマトグラフィーシステムの非限定例は、合計2つまたはそれ以上の相互接続またはスイッチングクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜を含有する周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCC)である。マルチカラムクロマトグラフィーシステムのさらなる例は、本明細書に記載されており、当技術分野で公知である。
用語「捕捉する」は、液体培養培地または希釈した液体培養培地中に存在する1つまたはそれ以上の他の成分(例えば、哺乳動物細胞に存在するかまたは哺乳動物細胞から分泌された培養培地のタンパク質または1つもしくはそれ以上の他の成分(例えば、DNA、RNA、または他のタンパク質))由来の組換え治療用タンパク質を、部分的に精製または単離(例えば、少なくともまたは約5%、例えば、少なくとももしくは約10重量%、15重量%、20重量%、25重量%、30重量%、40重量%、45重量%、50重量%、55重量%、60重量%、65重量%、70重量%、75重量%、80重量%、85重量%、90重量%、または少なくとももしくは約95重量%の純度)、濃縮、および安定化させるために実施される工程を意味する。典型的には、捕捉することは、組換え治療用タンパク質と結合する(例えば、アフィニティークロマトグラフィーの使用によって)樹脂を使用して実施される。組換え治療用タンパク質を液体培養培地または希釈した液体培養培地から捕捉するための非限定的方法は本明細書に記載されており、他にも当技術分野で公知のものがある。組換え治療用タンパク質は、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜(例えば、本明細書に記載のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜のいずれか)を使用して液体培養培地から捕捉することができる。
用語「精製する」は、組換え治療用タンパク質を、組換え治療用タンパク質を含有する流体中に存在する1つまたはそれ以上の他の不純物(例えば、バルク不純物)または成分(例えば、哺乳動物細胞中に存在するかもしくは哺乳動物細胞から分泌される液体培養培地のタンパク質または1つもしくはそれ以上の他の成分(例えば、DNA、RNA、他のタンパク質、エンドトキシン、ウイルスなど))から単離するために実施される工程を意味する。例えば、精製することは、最初の捕捉工程の間または後に実施することができる。精製は、組換え治療用タンパク質または夾雑物のいずれかに結合する樹脂、膜、または任意の他の固体支持体を使用して(例えば、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アニオンもしくはカチオン交換クロマトグラフィー、または分子篩クロマトグラフィーによって)実施することができる。組換え治療用タンパク質は、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜(例えば、本明細書に記載のクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜のいずれか)を使用して組換え治療用タンパク質を含有する流体から精製することができる。
用語「ポリッシュする」は、当技術分野の用語であり、残存する微量または少量の夾雑物または不純物を、組換え治療用タンパク質を含有する流体から除去して、最終的な所望の純度に近づけるために実施される工程を意味する。例えば、ポリッシュすることは、組換え治療用タンパク質を含有する流体を、組換え治療用タンパク質を含有する流体中に存在する標的組換え治療用タンパク質または少量の夾雑物もしくは不純物のいずれかに選択的に結合するクロマトグラフィー用カラムまたは膜吸収剤に通過させることによって実施することができる。このような例では、クロマトグラフィー用カラムまたは膜吸収剤の溶出液/濾液は、組換え治療用タンパク質を含有する。
用語「溶出液/濾液」は、当技術分野の用語であり、検出可能な量の組換え治療用タンパク質を含有するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から放出される流体を意味する。
用語「濾過する」は、所望されていない生物学的夾雑物(例えば、哺乳動物細胞、細菌、酵母細胞、ウイルス、またはマイコバクテリア)および/または微粒子物体(例えば、沈殿したタンパク質)の少なくとも一部(例えば、少なくとも80%、90%、95%、96%、97%、98%、または99%)の液体(例えば、本明細書に記載のシステムまたはプロセスのいずれかに存在する液体培養培地または流体)からの除去を意味する。
用語「分泌されたタンパク質」または「分泌された組換えタンパク質」は、もともと含有されていた少なくとも1つの分泌シグナル配列が、哺乳動物細胞内で、少なくとも部分的に、哺乳動物細胞内の分泌シグナル配列の酵素切断によって翻訳される場合に、少なくとも部分的に、細胞外空間(例えば、液体培養培地)に分泌されるタンパク質(例えば、組換えタンパク質)を意味する。当業者は、「分泌された」タンパク質が、分泌された細胞とみなされるために細胞から完全に解離する必要がないことを認識するであろう。
用語「灌流バイオリアクター」は、第1の液体培養培地中に複数の細胞(例えば、哺乳動物細胞)を含有するバイオリアクターであって、バイオリアクター中に存在する細胞の培養が、第1の液体培養培地の定期的または連続的除去と、それと同時または直後に、バイオリアクターに実質的に同体積の第2の液体培養培地を添加することを含むバイオリアクターを意味する。一部の例では、培養期間に漸増期間(例えば、約24時間の期間、約1分から約24時間の間の期間、または24時間を超える期間)にわたって、除去および添加された第1の液体培養培地の体積の漸増変化(例えば、増加または減少)が存在する(例えば、日数ベースの培養培地再供給率)。それぞれの日に除去され、置き換えられる培地の画分は、培養される特定の細胞、初期の播種密度、および特定時間における細胞密度に応じて変化し得る。「RV」または「リアクター容積」は、培養プロセスの開始時に存在する培養培地の体積(例えば、播種後に存在する培養培地の総体積)を意味する。
用語「フェドバッチバイオリアクター」は、当技術分野の用語であり、第1の液体培養培地中に複数の細胞(例えば、哺乳動物細胞)を含有するバイオリアクターであって、バイオリアクター中に存在する細胞の培養が、細胞培養から第1の液体培養培地または第2の液体培養培地の実質的または相当な除去を伴わずに、第2の液体培養培地の第1の液体培養培地への定期的または連続的添加を含むバイオリアクターを意味する。第2の液体培養培地は、第1の液体培養培地と同一であり得る。フェドバッチ培養の一部の例では、第2の液体培養培地は、第1の液体培養培地の濃縮形態である。フェドバッチ培養の一部の例では、第2の液体培養培地は、乾燥粉末として添加される。
用語「清澄化液体培養培地」は、細菌または酵母細胞培養物を実質的に含まない(例えば、少なくとも80%、85%、90%、92%、94%、96%、98%、または99
%含まない)、細菌または酵母細胞から得られた液体培養培地を意味する。
用語「ユニット操作」は、当技術分野の用語であり、液体培養培地から治療用タンパク質原薬を製造するプロセスで実施することができる機能的工程を意味する。例えば、操作のユニットは、濾過(例えば、夾雑する細菌、酵母、ウイルス、もしくはマイコバクテリア、および/または組換え治療用タンパク質を含有する流体由来の特定の物体の除去)、捕捉、エピトープタグの除去、精製、収容もしくは保存、ポリッシュ、ウイルス不活性化、組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/もしくはpHの調整、ならびに望ましくない塩の除去であり得る。
「比生産率」または「SPR」は、当技術分野の用語であり、本明細書で使用される場合、1日当たり哺乳動物細胞ごとに生産される組換え治療用タンパク質の質量または酵素活性を指す。組換え治療用抗体に対するSPRは、通常、質量/細胞/日数として測定される。組換え治療用酵素に対するSPRは、通常、ユニット/細胞/日数または(ユニット/質量)/細胞/日数として測定される。
「体積生産率」または「VPR」は、当技術分野の用語であり、本明細書で使用される場合、1日当たり培養物の体積当たり(例えば、バイオリアクター、ベッセル、またはチューブの容積の1L当たり)生産される組換え治療用タンパク質の質量または酵素活性を指す。組換え治療用抗体に対するVPRは、通常、質量/L/日数として測定される。組換え治療用酵素に対するVPRは、通常、ユニット/L/日数、または質量/L/日数として測定される。
特段定義されていなければ、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、この発明が属する技術分野の当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。方法および材料は、本発明において使用するために本明細書に記載され;当技術分野で公知の他の適切な方法および材料も使用することができる。材料、方法、および例は、例証に過ぎず、限定を意図するものではない。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、および他の参照文献は、参照によってそれらの全体として組み入れる。矛盾する場合には、定義を含み、本明細書が支配することになる。
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および図面から、ならびに特許請求の範囲から明らかとなる。
治療用タンパク質原薬の連続的製造をもたらす灌流培養バイオリアクターに接続された2つのPCCS製造システムを示す概略図である。アスタリスクは、タンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットを含む回路システム(例えば、本明細書に記載のTFFユニットを含む回路システムのいずれか)およびタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットを含む回路システム(例えば、本明細書に記載のTFVFユニットを含む回路システムのいずれか)の一方または両方を、この例示的な製造システムに配置することができる例示的位置を示す。 治療用タンパク質原薬の連続的製造をもたらす灌流培養バイオリアクターに接続された製造システムを示す概略図である。アスタリスクは、TFFユニットを含む回路システム(例えば、本明細書に記載のTFFユニットを含む回路システムのいずれか)およびタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットを含む回路システム(例えば、本明細書に記載のTFVFユニットを含む回路システムのいずれか)の一方または両方が、この例示的な製造システムにおける位置である例示的位置を示す。 3つのクロマトグラフィーカラムを含有するPCCシステムサイクルの図である。サイクルの開始時に、供給溶液をカラム1に負荷し、生成物ブレークスルーが起こるまでフロースルーは廃物となる(工程1)。この点で、カラム1からのフロースルーは、カラム2に向かい、カラム1からの未結合組換え治療用タンパク質を捕捉する(工程2)。カラム1に十分に負荷されると、ここで、供給はカラム2に向かって負荷され、一方、カラム1は、次のサイクルのために、洗浄、溶出、再生、および再平衡化される(工程3および4)。ここで、カラム2は、カラム1に対する工程1~3と同一である工程3~5を進む。最後に、カラム3は、カラム1および2と同様に、工程5~6を進む。3つすべてのカラムがこれらの工程を完了すると、サイクルは、カラム1に関して再スタートする。 ΔUVに基づいて切り替わるカラムの原理を実証する概略図である。T1は、ΔUVが所期の閾値レベルを有する場合の時間を示す。この閾値レベルに到達すると、カラム1からのフロースルーは、廃物ではなくカラム2に向かう。T2は、カラムが生成物で飽和された時間を示す。T1およびT2両方に対するΔUV値はプロセス特異的である。 組換え治療用タンパク質を含む流体をシステムに連続的に流し(「移送」)、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する(「透過液」)場合の(左パネル)、第1の期間の間のタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムの概略図であり、第1の期間の間の時間(h)に対する質量フラックス(g/h)を示すグラフ(右パネル)である。第1の期間の間、組換え治療用タンパク質は、回路システム内に保持され、回路システムを通って再循環する(「保持液」)。 透析濾過媒体をシステムに連続的に流し(「DF緩衝液」)、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する(「透過液」)場合の(左パネル)、第2の期間の間のタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムの概略図であり、第2の期間の間の時間(h)に対する質量フラックス(g/h)を示すグラフ(右パネル)である。第2の期間の間、組換え治療用タンパク質は、回路システム内に保持され、回路システムを通って再循環する(「保持液」)。 組換え治療用タンパク質を含む流体の限外濾過/透析濾過を実施するためのタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。フラックス(LMH)、組換え治療用タンパク質の倍数濃度(倍)、回路システムにおける流体の体積、ダイアボリューム、および時間に対するタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムのトランスメンブレン圧力(TMP)を示す。 組換え治療用タンパク質を含む流体の限外濾過/透析濾過を実施するためのタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。フラックス(LMH)、組換え治療用タンパク質の倍数濃度(倍)、回路システムにおける流体の体積、ダイアボリューム、および時間に対するタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムのトランスメンブレン圧力(TMP)を示す。 組換え治療用タンパク質を含む流体の限外濾過/透析濾過を実施するためのタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。フラックス(LMH)、組換え治療用タンパク質の倍数濃度(倍)、回路システムにおける流体の体積、ダイアボリューム、および時間に対するタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムのトランスメンブレン圧力(TMP)を示す。 組換え治療用タンパク質を含む流体をシステムに連続的に流し(「UF由来」)、組換え治療用タンパク質を含む濾液を連続的に収集する(「VF生成物」)場合の、タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムの概略図である。 タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む例示的回路システムを示す概略図である。 ウイルス濾過を実施するためにタンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムの使用から得たデータを示すグラフである。時間に対して、黒線は圧力(psi)を表し、グレーの線は透過液の質量(kg)を表す。 Planova(商標)の20Nフィルターを使用し、1~2mL/minで変化する再循環速度で12psiにて操作した、組換えヒト抗体(mAb)からのマウスマイニュートウイルス(MMV)のウイルス濾過を実施するためのTFVFユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。2.5時間にわたるTFVFユニットを含む回路システムの質量および圧力プロファイルを示す。 Planova(商標)の20Nフィルターを使用し、2mL/minの変化する再循環速度で6.6psiにて操作した、組換えヒト抗体(mAb)からのマウスマイニュートウイルス(MMV)の連続的ウイルス濾過を実施するためのTFVFユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。22時間にわたるTFVFユニットの質量および圧力プロファイルを示す。 Planova(商標)のBioEx(3cmの面積)を使用し、1mL/minの変化する再循環速度で19.8psiにて操作して、再供給した組換えヒト抗体(mAb)からのマウスマイニュートウイルス(MMV)の連続的ウイルス濾過を実施するためのTFVFユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。29時間にわたるTFVFユニットの質量および圧力プロファイルを示す。 Planova(商標)のBioEx(10cmの面積)を使用し、3mL/minの変化する再循環速度で19.8psiにて操作して、再供給した組換えヒト抗体(mAb)からのマウスマイニュートウイルス(MMV)の連続的ウイルス濾過を実施するためのTFVFユニットを含む例示的回路システムの使用の結果を示すグラフである。29時間にわたるTFVFユニットの質量および圧力プロファイルを示す。
組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、(a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、該システムが、流体を、導管およびTFFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含まない濾液をTFFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(b)第1の期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(c)第2の期間に、透析濾過媒体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(d)第1および第2の期間の後、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに存在する組換え治療用タンパク質を含む流体を収集する工程とを含む前記方法が本明細書で提供される。組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、(a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、該システムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(b)ある期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集する工程とを含む前記方法も提供される。当業者に認識されるように、これらの方法の一部の実施形態は、TFVFユニット(例えば、組換え治療用タンパク質を含む新たな体積の流体をTFVFユニットを含む回路システムの導管に流す場合の緩衝液として作用する)における1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを通過しなかった、TFVFユニットを含む回路システムの導管における組換え治療用タンパク質を含む任意の流体を再循環させることをさらに含むことができる。
治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセスであって、(a)細
胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含む液体培養培地を準備する工程であって、液体培養培地が、第1のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS1)に供給される、前記工程と;(b)MCCS1を使用して、液体培養培地中の組換え治療用タンパク質を捕捉する工程であって、組換え治療用タンパク質を含有するMCCS1の溶出液が、第2のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS2)に連続的に供給される、前記工程と;(c)MCCS2を使用して、組換え治療用タンパク質を精製およびポリッシュする工程であって、MCCS2からの溶出液が、組換え治療用タンパク質を含む流体である、前記工程と;(d)本明細書に記載の方法のいずれかの方法を使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程とを含み、該プロセスが、前記液体培養培地から組換え治療用タンパク質を含む収集された流体または濾液に連続的に統合および実行され、収集された流体または濾液が治療用タンパク質原薬である、前記プロセスも提供される。
TFFユニットを含む回路システムの使用を含む組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法
組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、(a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程と;(b)第1の期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(c)第2の期間に、透析濾過媒体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;(d)第1および第2の時点の後で、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに存在する組換え治療用タンパク質を含む流体を収集する工程とを含む前記方法が本明細書で提供される。当業者に認識されるように、これらの方法の一部の実施形態は、TFFユニット(例えば、組換え治療用タンパク質を含む新たな体積の流体および/または透析濾過媒体をTFFユニットを含む回路システムの導管に流す場合の緩衝液として作用する)における1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを通過しなかった、TFFユニットを含む回路システムの導管における組換え治療用タンパク質を含む任意の流体を再循環させることを含む。
一部の実施形態では、TFFユニットは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12個のタンジェンシャルフィルターを含む。これらの方法の一部の例では、TFFユニットは、約0.05cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、約1.0cm、約0.5cm、もしくは約0.1cm;約0.1cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、約1.0cm、もしくは約0.5
cm;約0.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、もしくは約1.0cm;約1.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm;約1.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、もしくは約2.0cm
約2.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、もしくは約2.5cm;約2.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、もしくは約3.0cm;約3.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、もしくは約3.5cm;約3.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、もしくは約4.0cm;約4.0cm
ら約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、もしくは約4.5cm;約4.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、もしくは約5.0cm;約5.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、もしくは約5.5cm
約5.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、もしくは約6.0cm;約6.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、もしくは約6.5cm;約6.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、もしくは約7.0cm;約7.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、もしくは約7.5cm;約7.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、もしくは約8.0cm;約8.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、もしくは約8.5cm;約8.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm
、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、もしくは約9.0cm;約9.0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、もしくは約9.5cm;約9.5cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、もしくは約10cm;約10cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、もしくは約12cm;約12cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、もしくは約14cm;約14cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、もしくは約16cm;約16cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、もしくは約18cm;約18cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、もしくは約20cm;約20cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、もしくは約22cm;約22cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、もしくは約24cm;約24cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、もしくは約26cm;約26cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、もしくは約28cm;約28cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm
約32cm、もしくは約30cm;約30cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、もしくは約32cm;約32cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、もしくは約34cm;約34cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、もしくは約36cm;約36cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、もしくは約38cm;約38cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、もしくは約40cm;約4
0cmから約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、もしくは約42cm;約42cmから約50cm、約48cm、約46cm、もしくは約44cm;約44cmから約50cm、約48cm、もしくは約46cm;約46cmから約50cmもしくは約48cm;または約48cmから約50cmの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを含むことができる。
一部の実施形態では、TFFユニットにおける1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターは、約1kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、約80kDa、約60kDa、約40kDa、約20kDa、約10kDa、もしくは約5kDa;約5kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、約80kDa、約60kDa、約40kDa、約20kDa、もしくは約10kDa;約10kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、約80kDa、約60kDa、約40kDa、もしくは約20kDa;約20kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、約80kDa、約60kDa、もしくは約40kDa;約40kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,
400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、約80kDa、もしくは約60kDa;
約60kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、約100kDa、もしくは約80kDa;約80kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、約150kDa、もしくは約100kDa;約100kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、約200kDa、もしくは約150kDa;約150kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、約250kDa、もしくは約200kDa;約200kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、約300kDa、もしくは約250kDa;約250kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,00
0kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、約350kDa、もしくは約300kDa;約300kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、約400kDa、もしくは約350kDa;
約350kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、約450kDa、もしくは約400kDa;約400kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、約500kDa、もしくは約450kDa;約450kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、約550kDa、もしくは約500kDa;約500kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、約600kDa、もしくは約550kDa;約550kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、約650kDa、もしくは約600kDa;約600kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,00
0kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、約700kDa、もしくは約650kDa;約650kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、約750kDa、もしくは約700kDa;約700kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、約800kDa、もしくは約750kDa;約750kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、約850kDa、もしくは約800kDa;
約800kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、約900kDa、もしくは約850kDa;約850kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、約950kDa、もしくは約900kDa;約900kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、約1,000kDa、もしくは約950kDa;約950kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、約1,200kDa、もしくは約1,000kDa;約1,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、約1,400kDa、もしくは約1,200kDa;約1,200kDaから約25,000kDa、約24,000k
Da、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、約1,600kDa、もしくは約1,400kDa;約1,400kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、約1,800kDa、もしくは約1,600kDa;約1,600kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、約2,000kDa、もしくは約1,800kDa;約1,800kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、約4,000kDa、もしくは約2,000kDa;約2,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、約6,000kDa、もしくは約4,000kDa;
約4,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、約8,000kDa、もしくは約6,000kDa;約6,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、約10,000kDa、もしくは約8,000kDa;約8,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、約12,000kDa、もしくは約10,000kDa;約10,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、約14,000kDa、もしくは約12,000kDa;約12,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、約16,000kDa、もしくは約14,000kDa;約14,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、約18,000kDa、もしくは約16,000kDa;約16,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、約20,000kDa、もしくは約18,000kDa;約18,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、約22,000kDa、もしくは約20,000kDa;約20,000kDaから約25,000kDa、約24,000kDa、もしくは約22,000kDa;約22,000kDaから約25,000kDaもしくは約24,000kDa;または約23,000kDaから約25,000kDaの分子量カットオフを有することができる。一部の実施形態では、TFFユニットは、例えば、セルロース(例えば、再生セルロース)またはポリエーテルスルホンから作製された1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを含む。TFFユニットにおいて使用することができる1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターの非限定例は、Milliporeから市販されている(例えば、Ultracel(登録商標)およびBiomax(登録商標))。TFFユニットにおいて使用することができる1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターのさらなる市販の供給源は、当技術分野において公知である。
導管は、簡単なチューブ、例えば、生体適合性チューブであり得る。有用なチューブの非限定例として、シリコーンゴム、ポリウレタン、ポリジオキサノン(PDO)、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ(グリセロールセバケート)、ポリグリコリド、ポリラクチド、ポリカプロラクトン、またはポリ無水物、またはこれらのおよび/もしくは他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。あるいはまたはさらに、本明細書に記載の導管のいずれかは、ポリ塩化ビニルを含むことができる。導管は、例えば、溶接可能な移送チューブであり得る。
一部の実施形態では、導管の内径は、約5mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、約10mm、約8mmもしくは約6mm;約6mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、約10mm、もしくは約8mm;約8mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、もしくは約10mm;約10mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、もしくは約12mm;約12mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、もしくは約14mm;約14mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、もしくは約16mm;約16mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、もしくは約18mm;約18mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、もしくは約20mm;約20mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、もしくは約22mm;約22mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、もしくは約24mm;約24mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、もしくは約26mm;約26mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、もしくは約28mm;約28mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、もしくは約30mm;約30mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、もしくは約32mm;約32mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、もしくは約34mm;約34mmから約50mm、約48mm、約46mm
、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、もしくは約36mm;約36mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm,から約38mm;約38mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、もしくは約40mm;約40mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、もしくは約42mm;約42mmから約50mm、約48mm、約46mm、もしくは約44mm;約44mmから約50mm、約48mm、もしくは約46mm;約46mmから約50mmもしくは約48mm;または約48mmから約50mmであり得る。
一部の実施形態では、導管は、約1.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約8.0cm、約6.0cm、約4.0cm、もしくは約2.0cm;約2.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約8.0cm、約6.0cm、もしくは約4.0cm;約4.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約8.0cm、もしくは約6.0cm;約6.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、もしくは約8.0cm;約8.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、もしくは約10cm;約10cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、もしくは約12cm;約12cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、もしくは約14cm;約14cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、もしくは約16cm;約16cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、もしくは約18cm;約18cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、もしくは約20cm;約20cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、もしくは約25cm;約25cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、もしくは約30cm;約30cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、もしくは約35cm;約35cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、もしくは約40cm;約40cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、もしくは約45cm;約45cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、もしくは約50cm;約50cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、もしくは約55cm;約55cmから約75cm、約70cm、約65cm、もしくは約60cm;約60cmから約75cm、約70cm、もしくは約65cm;約65cmから約75cmもしくは約70cm;または約70cmから約
75cmの全長を有する。
回路システムで使用することができる導管および導管の特性のさらなる例は、当業者によって周知である。
一部の例では、回路システムは、1、2、3、4、または5個のポートを含む。一部の例では、少なくとも1つのポートは、バルブであり得る。他の例では、少なくとも1つのポートは、注入ポートであり得るか、またはリブ付きスレッドを有し得る。少なくとも1つのポートは、当技術分野で一般に知られている任意のタイプのポートであり得る。
一部の例では、回路システムは、導管内に配置されたポンプ(例えば、低乱流ポンプ、例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含むことができる。
一部の例では、工程(b)は、組換え治療用タンパク質を含む流体を、約0.05mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、約0.5mL/分、もしくは約0.1mL/分の間;約0.1mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、もしくは約0.5mL/分;約0.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分
、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、もしくは約1.0mL/分;約1.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、もしくは約1.5mL/分;約1.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、もしくは約2.0mL/分;
約2.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、もしくは約2.5mL/分;約2.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.
5mL/分、もしくは約3.0mL/分;約3.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、もしくは約3.5mL/分;約3.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、もしくは約4.0mL/分;約4.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、もしくは約4.5mL/分;約4.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、もしくは約5.0mL/分;
約5.0mL/分から約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、もしくは約5.5mL/分;約5.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約
70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、もしくは約6.0mL/分;約6.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、もしくは約6.5mL/分;約6.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、もしくは約7.0mL/分;約7.0mL/分から約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、もしくは約7.5mL/分;約7.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、もしくは約8.0mL/分;約8.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約1
2mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、もしくは約8.5mL/分;
約8.5mL/分から約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、もしくは約9.0mL/分;約9.0mL/分から約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、もしくは約9.5mL/分;約9.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、もしくは約10mL/分;約10mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、もしくは約12mL/分;約12mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、もしくは約14mL/分;約14mL/分から約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、もしくは約16mL/分;約16mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、もしくは約18mL/分;約18mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、もしくは約20mL/分;約20mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分
、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、もしくは約22mL/分;約22mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分もしくは約24mL/分;
約23mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、もしくは約25mL/分;約25mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、もしくは約50mL/分;約50mLから約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、もしくは約100mL/分;約100mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、もしくは約150mL/分;約150mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、もしくは約200mL/分;約200mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約
400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、もしくは約250mL/分;約250mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、もしくは約300mL/分;約300mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、もしくは約350mL/分;約350mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、もしくは約400mL/分;約400mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、もしくは約450mL/分;約450mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、もしくは約500mL/分;約500mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、もしくは約550mL/分;約550mLから約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、もしくは約600mL/分;
約600mLから約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、もしくは約650mL/分;約650mLから約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、もしくは約700mL/分;約700mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、もしくは約750mL/分;約750mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、
約850mL/分、もしくは約800mL/分;約800mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、もしくは約850mL/分;約850mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、もしくは約900mL/分;約900mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約950mL/分;約950mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分;約1L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分;約5L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、もしくは約10L/分;約10L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、もしくは約20L/分;約20L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、もしくは約30L/分;約30L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、もしくは約40L/分;約40L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、もしくは約50L/分;約50L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、もしくは約60L/分;約60L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、もしくは約70L/分;約70L/分から約100L/分、約90L/分、もしくは約80L/分;約80L/分から約100L/分、もしくは約90L/分;または約90L/分から約100L/分の速度で、回路システムに連続的に流す(例えば、一方向にまたは二方向に流す)ことを含む。
一部の例では、工程(b)は、約0.01mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、約1.0mg/mL、約0.5mg/mL、約0.1mg/mL、もしくは約0.05mg/mL;約0.05mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、約1.0mg/mL、約0.5mg/mL、もしくは約0.1mg/mL;約0.1mg
/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、約1.0mg/mL、もしくは約0.5mg/mL;約0.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、もしくは約1.0mg/mL;約1.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、もしくは約1.5mg/mL;
約1.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、約2.5mg/mL、もしくは約2.0mg/mL;約2.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、約3.0mg/mL、もしくは約2.5mg/mL;約2.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg
/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、約3.5mg/mL、もしくは約3.0mg/mL;約3.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、約4.0mg/mL、もしくは約3.5mg/mL;約3.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、約4.5mg/mL、もしくは約4.0mg/mL;約4.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、約5.0mg/mL、もしくは約4.5mg/mL;約4.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、約5.5mg/mL、もしくは約5.0mg/mL;
約5.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、約6.0mg/mL、もしくは約5.5mg/mL;約5.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg
/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、約6.5mg/mL、もしくは約6.0mg/mL;約6.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、約7.0mg/mL、もしくは約6.5mg/mL;約6.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、約7.5mg/mL、もしくは約7.0mg/mL;約7.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、約8.0mg/mL、もしくは約7.5mg/mL;約7.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、約8.5mg/mL、もしくは約8.0mg/mL;約8.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、約9.0mg/mL、もしくは約8.5mg/mL;約8.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、9.5mg/mL、もしくは約9.0mg/mL;約9.0mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、もしくは9.5mg/mL;約9.5mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、もしくは約10mg/mL
;約10mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、もしくは約12mg/mL;約12mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、もしくは約14mg/mL;
約14mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、もしくは約16mg/mL;約16mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、もしくは約18mg/mL;約18mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、もしくは約20mg/mL;約20mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、もしくは約22mg/mL;約22mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、もしくは約24mg/mL;約24mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、もしくは約26mg/mL;約26mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、もしくは約28mg/mL;約28mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、もしくは約30mg/mL;約30mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、もしくは約32mg/mL;約32mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、もしくは約34mg/mL;約34mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、もしくは約36mg/mL;約36mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、もしくは約38mg/mL;約38mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、もしくは約40mg/mL;約40mg/mLから約50m
g/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、もしくは約42mg/mL;約42mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、もしくは約44mg/mL;約44mg/mLから約50mg/mL、約48mg/mL、もしくは約46mg/mL;約46mg/mLから約50mg/mLもしくは約48mg/mL;または約48mg/mLから約50mg/mLの組換え治療用タンパク質を含む流体を、回路システムに連続的に流す(例えば、一方向にまたは二方向に流す)ことを含む。
一部の実施形態では、第1の期間は、約0.1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、約2分、もしくは約1分;約1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、もしくは約2分;約2分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、もしくは約5分;約5分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、もしくは約10分;約10分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、もしくは約15分;約15分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、もしくは約20分;約20分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、もしくは約25分;約25分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約
2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、もしくは約30分;約30分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、もしくは約35分;約35分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、もしくは約40分;約40分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、もしくは約45分;約45分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、もしくは約50分;約50分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、もしくは約55分;約55分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、もしくは約1.0時間;約1.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、もしくは約1.5時間;約1.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、もしくは約2.0時間;約2.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、もしくは約2.5時間;約2.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、もしくは約3.0時間;約3.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、もしくは約3.5時間;約3.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、も
しくは約4.0時間;約4.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、もしくは約4.5時間;約4.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、もしくは約5.0時間;約5.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、もしくは約5.5時間;約5.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、もしくは約6.0時間;約6.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、もしくは約6.5時間;約6.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、もしくは約7時間;約7時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、もしくは約7.5時間;約7.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、もしくは約8.0時間;約8.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、もしくは約8.5時間;約8.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、もしくは約9.0時間;約9.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、もしくは約9.5時間;約9.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、もしくは約10時間;約10時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、もしくは約10.5時間;約10.5時間から約12時間、約11.5時間、または約11時間;約11時間から約12時間、または約11.5時間であり得る。
一部の例では、工程(c)は、透析濾過媒体を、約0.05mL/分から約100L/分まで、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、約0.5mL/分、もしくは約0.1mL/分の間;約0.1mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/
分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、もしくは約0.5mL/分;約0.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、もしくは約1.0mL/分;約1.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、もしくは約1.5mL/分;約1.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、もしくは約2.0mL/分;
約2.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約
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L/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、もしくは約7.0mL/分;約7.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、もしくは約7.5mL/分;約7.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、もしくは約8.0mL/分;約8.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、もしくは約8.5mL/分;約8.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、もしくは約9.0mL/分;約9.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、もしくは約9.5mL/分;
約9.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分
、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、もしくは約10mL/分;約10mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、もしくは約12mL/分;約12mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、もしくは約14mL/分;約14mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、もしくは約16mL/分;約16mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、もしくは約18mL/分;約18mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、もしくは約20mL/分;約20mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/
分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、もしくは約22mL/分;約22mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、もしくは約24mL/分;約23mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、もしくは約25mL/分;約25mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、もしくは約50mL/分;
約50mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、もしくは約100mL/分;約100mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、もしくは約150mL/分;約150mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、もしくは約200mL/分;約200mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、もしくは約250mL/分;約250mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分
、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、もしくは約300mL/分;約300mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、もしくは約350mL/分;約350mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、もしくは約400mL/分;約400mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、もしくは約450mL/分;約450mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、もしくは約500mL/分;約500mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、もしくは約550mL/分;約550mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、もしくは約600mL/分;約600mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、もしくは約650mL/分;約650mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、もしくは約700mL/分;約700mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、もしくは約750mL/分;
約750mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、もしくは約800mL/分;約800mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、
約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、もしくは約850mL/分;約850mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、もしくは約900mL/分;約900mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約950mL/分;約950mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分;約1L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分;約5L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、もしくは約10L/分;約10L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、もしくは約20L/分;約20L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、もしくは約30L/分;約30L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、もしくは約40L/分;約40L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、もしくは約50L/分;約50L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、もしくは約60L/分;約60L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、もしくは約70L/分;約70L/分から約100L/分、約90L/分、もしくは約80L/分;約80L/分から約100L/分もしくは約90L/分;または約90L/分から約100L/分の速度で、回路システムに連続的に流す(例えば、一方向にまたは二方向に流す)ことを含む。
透析濾過媒体は、例えば、生理学的に許容される緩衝液(例えば、リン酸緩衝食塩水)、または組換え治療用タンパク質を製剤化するために使用される緩衝液、例えば、グリシン、ホスフェート、アセテート、シトレートのうちの1つまたはそれ以上、充填剤(例えば、非還元炭水化物、例えば、ショ糖)、界面活性剤(例えば、ポリソルベート80、Triton X-100、およびTween)を含む緩衝剤であり得る。
これらの方法の一部の例では、第2の期間は、
約0.1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、約2分、もしくは約1分;約1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、もしくは約2分;約2分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約
35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、もしくは約5分;約5分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、もしくは約10分;約10分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、もしくは約15分;約15分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、もしくは約20分;約20分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、もしくは約25分;約25分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、もしくは約30分;約30分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、もしくは約35分;約35分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、もしくは約40分;約40分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、もしくは約45分;約45分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、もしくは約50分;約50分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、もしくは約55分;約55分から約12
時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、もしくは約1.0時間;約1.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、もしくは約1.5時間;約1.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、もしくは約2.0時間;約2.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、もしくは約2.5時間;約2.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、もしくは約3.0時間;約3.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、もしくは約3.5時間;約3.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、もしくは約4.0時間;約4.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、もしくは約4.5時間;約4.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、もしくは約5.0時間;約5.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、もしくは約5.5時間;約5.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、もしくは約6.0時間;約6.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、もしくは約6.5時間;約6.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、もしくは約7時間;約7時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、もしくは約7.5時間;約7.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、もしくは約8.0時間;約8.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、もしくは約8.5時間;約8.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、もしくは約9.0時間;約9.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、もしくは約9.5時間;約9.5時間から約12時間、
約11.5時間、約11時間、約10.5時間、もしくは約10時間;約10時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、または約10.5時間;約10.5時間から約12時間、約11.5時間、または約11時間;約11時間から約12時間、または約11.5時間であり得る。
一部の実施形態では、工程(d)で収集される組換え治療用タンパク質を含む流体は、約0.1mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、約1.0mg/mL、もしくは約0.5mg/mL;約0.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、もしくは約1.0mg/mL;約1.0mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、もしくは約1.5mg/mL;約1.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62
mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、もしくは約2.0mg/mL;約2.0mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、もしくは約2.5mg/mL;
約2.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、もしくは約3mg/mL;約3mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、もしくは約4mg/mL;約4mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約5
8mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、もしくは約5mg/mL;約5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、もしくは約6mg/mL;約6mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、もしくは約7mg/mL;約7mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、もしくは約8mg/mL;
約8mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、
約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、もしくは約9mg/mL;約9mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、もしくは約10mg/mL;約10mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、もしくは約12mg/mL;約12mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、もしくは約14mg/mL;約14mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、もしくは約16mg/mL;約16mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/
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4mg/mL、もしくは約82mg/mL;約82mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、もしくは約84mg/mL;約84mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、もしくは約86mg/mL;約86mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、もしくは約88mg/mL;約88mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、もしくは約90mg/mL;約90mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、もしくは約92mg/mL;約92mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、もしくは約94mg/mL;約94mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、もしくは96mg/mL;約96mg/mLから約100mg/mLもしくは約98mg/mL;または約98mg/mLから約100mg/mLの濃度の組換え治療用タンパク質を含む。
一部の実施形態では、第1および第2の期間の後に達成されたこれらの倍数透析濾過は、約1倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、約7倍、約6倍、約5倍、約4倍、約3倍、もしくは約2倍;約2倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、約7倍、約6倍、約5倍、約4倍、もしくは約3倍;約3倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、約7倍、約6倍、約5倍、もしくは約4倍;約4倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、約7倍、約6倍、もしくは約5倍;約5倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、約7倍、もしくは約6倍;約6倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、約8倍、もしくは約7倍;約7倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、約9倍、もしくは約8倍;約8倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、約10倍、もしくは約9倍;約9倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、約11倍、もしくは約10倍;約10倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、約12倍、もしくは約11倍;約11倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、約13倍、もしくは約12倍;約12倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、約14倍、もしくは約13倍;約13倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、約15倍、もしくは約14倍;約14倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、約16倍、もしくは約15倍;約15倍から約20倍、約19倍、約18倍、約17倍、もしくは約16倍;約16倍から約20倍、約19倍、約18倍、もしくは約17倍;約17倍から約20倍、約19倍、もしくは約18倍;約18倍から約20倍もしくは約19倍;または約19倍から約20倍である。
一部の実施形態では、回路システムは、収容タンクを含まない。
この方法の他の実施形態では、第1の期間の間、組換え治療用タンパク質と透析濾過媒体とを含む流体を一緒に回路システムに連続的に流し、次いで、第2の期間の間、透析濾
過媒体のみを回路システムに連続的に流す。
工程(d)において、流体は、シリンジ、重力、またはポンプ(例えば、導管内に配置されたぜん動ポンプ)を使用して収集することができる。工程(d)において、組換え治療用タンパク質を含む流体を収集するためのさらなる手段は、当技術分野で公知である。
これらの方法の一部の例は、(e)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニット、ならびに(ii)流体を第2の回路システムにもしくは第2の回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1の入口と第2の入口の間で流体連通している導管とを含む第2の回路システムを準備する工程であって、該第2のシステムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通って流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(f)第3の期間に、ステップ(d)の収集した流体を、システムにおけるポートと第2のシステムにおけるポートの間で流体連通している接続導管を使用して第2のシステムに流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液を、TFVFユニットから収集する工程とをさらに含む。当業者に認識されるように、これらの方法の一部の実施形態は、TFVFユニット(例えば、組換え治療用タンパク質を含む新たな体積の流体をTFVFユニットを含む回路システムの導管に流す場合の緩衝液として作用する)における1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを通過しなかった、第2の回路システム(TFVFユニットを含む)の導管における組換え治療用タンパク質を含む任意の流体を再循環させることをさらに含むことができる。
一部の実施形態では、TFVFユニットは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12個のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。これらの方法の一部の実施例では、TFVFユニットは、約0.05cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、約1.0cm、約0.5cm、もしくは約0.1cm;約0.1cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、約1.0cm、もしくは約0.5cm;約0.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m
、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、約1.5cm、もしくは約1.0cm;約1.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、約2.0cm、もしくは約1.5cm;約1.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、約2.5cm、もしくは約2.0cm
約2.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、約3.0cm、もしくは約2.5cm;約2.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm
、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、約3.5cm、もしくは約3.0cm;約3.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、約4.0cm、もしくは約3.5cm;約3.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、約4.5cm、もしくは約4.0cm;約4.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、約5.0cm、もしくは約4.5cm
約4.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、約5.5cm、もしくは約5.0cm;約5.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm
、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、約6.0cm、もしくは約5.5cm;約5.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、約6.5cm、もしくは約6.0cm;約6.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、約7.0cm、もしくは約6.5cm;約6.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、約7.5cm、もしくは約7.0cm;約7.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、約8.0cm、もしくは約7.5cm
約7.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、約8.5cm、もしくは約8.0cm;約8.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約
100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、約9.0cm、もしくは約8.5cm;約8.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約9.5cm、もしくは約9.0cm;約9.0cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、もしくは約9.5cm;約9.5cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、もしくは約10cm;約10cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、もしくは約12cm;約12cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、約16cm、もしくは約14cm
約14cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、約18cm、もしくは約16cm
;約16cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、約20cm、もしくは約18cm;約18cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、約22cm、もしくは約20cm;約20cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、約24cm、もしくは約22cm;約22cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、約26cm、もしくは約24cm;約24cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、約28cm、もしくは約26cm;約26cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、約30cm、もしくは約28cm;約28cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、約34cm、約32cm、もしくは約30cm
約30cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm
約36cm、約34cm、もしくは約32cm;約32cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、約36cm、もしくは約34cm;約34cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、約38cm、もしくは約36cm;約36cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、約40cm、もしくは約38cm;約38cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、約42cm、もしくは約40cm
約40cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、約44cm、もしくは約42cm;約42cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、約46cm、もしくは約44cm;約44cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cm、約48cm、もしくは約46cm;約46cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、約50cmもしくは約48cm;約48cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、約100cm、もしくは約50cm
約50cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、約150cm、もしくは約100cm;約100cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15
、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、約200cm、もしくは約150cm;約150cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、約400cm、もしくは約200cm;約200cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、約600cm、もしくは約400cm;約400cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm、もしくは約600cm;約600cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、約1m、約800cm;約800cmから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、約5m、もしくは約1m;約1mから約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、約10m、もしくは約5m;約5mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、約15m、もしくは約10m;約10mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、約20m、もしくは約15m;約15mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、約25m、もしくは約20m;約20mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、約30m、もしくは約25m;約25mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、約40m、約35m、もしくは約30m;約30mから約50m、約45m、約40m、もしくは約35m;約35mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50m、約45m、もしくは約40m;約40mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、約50mもしくは約45m;約45mから約100m、約90m、約80m、約70m、約60m、もしくは約50m;約50mから約100m、約90m、約80m、約70m、もしくは約60m;約60mから約100m、約90m、約80m、もしくは約70m;約70mから約100m、約90m、もしくは約80m;約80mから約100m、もしくは約90m;または約90mから約100mの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含むことができる。
一部の実施形態では、TFVFユニットは、約5nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、約35nm、約30nm、約25nm、約20nm、約15nm、もしくは約10nm;約10nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約7
0nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、約35nm、約30nm、約25nm、約20nm、もしくは約15nm;約15nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、約35nm、約30nm、約25nm、もしくは約20nm;約20nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、約35nm、約30nm、もしくは約25nm;約25nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、約35nm、もしくは約30nm;約30nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、約40nm、もしくは約35nm;約35nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、約50nm、約45nm、もしくは約40nm;約45nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、約55nm、もしくは約50nm;約50nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、約60nm、もしくは約55nm;約55nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、約65nm、もしくは約60nm;約60nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、約70nm、もしくは約65nm;約65nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、約75nm、もしくは約70nm;約70nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85nm、約80nm、もしくは約75nm;約75nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、約85n
m、もしくは約80nm;約80nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、約90nm、もしくは約85nm;約85nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、約95nm、もしくは約90nm;約90nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、約100nm、もしくは約95nm;約95nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、約110nm、もしくは約100nm;約100nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、約120nm、もしくは約110nm;約110nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、約130nm、もしくは約120nm;約120nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、約140nm、もしくは約130nm;約130nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、約150nm、もしくは約140nm;約140nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、約160nm、もしくは約150nm;約150nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、約170nm、もしくは約160nm;約160nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、約180nm、もしくは約170nm;約170nmから約220nm、約210nm、約200nm、約190nm、もしくは約180nm;約180nmから約220nm、約210nm、約200nm、もしくは約190nm;約190nmから約220nm、約210nm、もしくは約200nm;約200nmから約220nmもしくは約210nm;または約210nmから約220nmの孔径を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。TFVFユニットにおいて使用することができる様々なウイルスフィルターが当技術分野で公知である。例えば、TFVFユニットで使用することができるウイルスフィルターは、旭化成(東京、日本)から市販されている。一部の実施形態では、ウイルスフィルターは、Planova(商標)フィルター(例えば、Planova(商標)15N、Planova(商標)20N、Planova(商標)35N、またはPlanova(商標)75N)である。一部の実施形態では、ウイルスフィルターは、Planova(商標)BioEXフィルターである。TFVFユニットにおいて使用することができるウイルスフィルターは、例えば、中空繊維膜を含むことができる。
第2の回路システムにおける接続導管および導管は、簡単なチューブ、例えば、生体適合性チューブであり得る。有用なチューブの非限定例として、シリコーンゴム、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリジオキサノン(PDO)、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ(セバシン酸グリセロール)、ポリグリコリド、ポリラクチド、ポリカプロラクトン、もしくはポリ無水物、またはこれらのおよび/もしくは他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。あるいはまたはさらに、本明細書に記載の導管のいずれかは、ポリ塩化ビニルを含むことができる。本明細書に記載の導管のいずれかは、例えば、溶接可能な移送チューブであり得る。
一部の実施形態では、第2の回路システムにおける接続導管および/または導管の内径は、約5mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約
75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、約10mm、約8mm、もしくは約6mm;約6mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、約10mm、もしくは約8mm;約8mMから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、約12mm、もしくは約10mm;約10mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、約14mm、もしくは約12mm;約12mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、約16mm、もしくは約14mm;約14mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、約18mm、もしくは約16mm;約16mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、約20mm、もしくは約18mm;約18mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、約22mm、もしくは約20mm;約20mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、約24mm、もしくは約22mm;約22mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、約26mm、もしくは約24mm;約24mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、約30mm、約28mm、もしくは約26mm;約26mmから約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32
mm、約30mm、もしくは約28mm;約28mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、約32mm、もしくは約30mm;約30mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、約34mm、もしくは約32mm;約32mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、約36mm、もしくは約34mm;約34mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、約38mm、もしくは約36mm;約36mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、約40mm、から約38mm;約38mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、約42mm、もしくは約40mm;約40mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、約44mm、もしくは約42mm;約42mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、約46mm、もしくは約44mm;約44mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、約48mm、もしくは約46mm;約46mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、約50mm、もしくは約48mm;約48mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、約55mm、もしくは約50mm;約50mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、約60mm、もしくは約55mm;約55mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、約65mm、もしくは約60mm;約60mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、約70mm、もしくは約65mm;約65mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、約75mm、もしくは約70mm;約70mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、約80mm、もしくは約75mm;約75mmから約100mm、約95mm、約90mm、約85mm、もしくは約80mm;約80mmから約100mm、約95mm、約90mm、もしくは約85mm;約85mmから約100mm、約95mm、もしくは約90mm;約90mmから約100mmもしくは約95mm;または約95mmから約100mmであり得る。
一部の実施形態では、第2の回路システムにおける接続導管および導管は、約1.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約8.0cm、約6.0cm、約4.0cm、もしくは約2.0cm;約2.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm
、約10cm、約8.0cm、約6.0cm、もしくは約4.0cm;約4.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、約8.0cm、もしくは約6.0cm;約6.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、約10cm、もしくは約8.0cm;約8.0cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、約12cm、もしくは約10cm;約10cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、約14cm、もしくは約12cm;約12cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、約16cm、もしくは約14cm;約14cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、約18cm、もしくは約16cm;約16cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、約20cm、もしくは約18cm;約18cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、約25cm、もしくは約20cm;約20cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、約30cm、もしくは約25cm;約25cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、約35cm、もしくは約30cm;約30cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、約40cm、もしくは約35cm;約35cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、約45cm、もしくは約40cm;約40cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、約50cm、もしくは約45cm;約45cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、約55cm、もしくは約50cm;約50cmから約75cm、約70cm、約65cm、約60cm、もしくは約55cm;約55cmから約75cm、約70cm、約65cm、もしくは約60cm;約60cmから約75cm、約70cm、もしくは約65cm;約65cmから約75cmもしくは約70cm;または約70cmから約75cmの全長を有する。
第2の回路システムで使用することができる導管および導管の特性のさらなる例は、当業者によって周知である。
一部の例では、第2の回路システムは、1、2、3、4、または5個のポートを含む。一部の例では、第2の回路システムにおける少なくとも1つのポートは、バルブであり得る。他の例では、第2の回路システムにおける少なくとも1つのポートは、注入ポートであり得るか、またはリブ付きスレッドを有し得る。第2の回路システムにおける少なくとも1つのポートは、当技術分野で通常知られている任意のタイプのポートであり得る。
一部の例では、第2の回路システムは、第2のシステムにおける接続導管および/または導管内に配置されたポンプ(例えば、低乱流ポンプ、例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含むことができる。一部の実施形態では、第2の回路システムは、収容タンクを含まない。一部の実施形態では、接続導管は、収容タンクに流体接続していない。
一部の例では、工程(f)は、収集した工程(d)の流体を、約0.05mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、約0.5mL/分、もしくは約0.1mL/分;約0.1mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、約1.0mL/分、もしくは約0.5mL/分;約0.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、約1.5mL/分、もしくは約1.0mL/分;約1.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL
/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、約2.0mL/分、もしくは約1.5mL/分;約1.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、約2.5mL/分、もしくは約2.0mL/分;約2.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、約3.0mL/分、もしくは約2.5mL/分;
約2.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、約3.5mL/分、もしくは約3.0mL/分;約3.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、約4.0mL/分、もしくは約3.5mL/分;約3.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、
約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、約4.5mL/分、もしくは約4.0mL/分;約4.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、約5.0mL/分、もしくは約4.5mL/分;約4.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、約5.5mL/分、もしくは約5.0mL/分;約5.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、約6.0mL/分、もしくは約5.5mL/分;約5.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約1
6mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、約6.5mL/分、もしくは約6.0mL/分;
約6.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、約7.0mL/分、もしくは約6.5mL/分;約6.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、約7.5mL/分、もしくは約7.0mL/分;約7.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、約8.0mL/分、もしくは約7.5mL/分;約7.5mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分、約10mL/分、約9.5mL/分、約9.0mL/分、約8.5mL/分、もしくは約8.0mL/分;約8.0mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約24mL/分、約22mL/分、約20mL/分、約18mL/分、約16mL/分、約14mL/分、約12mL/分
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、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、もしくは約100mL/分;
約100mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、もしくは約150mL/分;約150mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、もしくは約200mL/分;約200mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、もしくは約250mL/分;約250mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、もしくは約300mL/分;約300mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、もしくは約350mL/分;約350mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、もしくは約400mL/分;約400mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、もしくは約450mL/分;約450mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、もしくは約500mL/分;約500mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、もしくは約55
0mL/分;約550mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、もしくは約600mL/分;約600mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、もしくは約650mL/分;約650mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、もしくは約700mL/分;約700mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、もしくは約750mL/分;
約750mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、もしくは約800mL/分;約800mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、もしくは約850mL/分;約850mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、もしくは約900mL/分;約900mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約950mL/分;約950mL/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分;約1L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分;約5L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、約20L/分、もしくは約10L/分;約10L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、約30L/分、もしくは約20L/分;約20L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、約40L/分、もしくは約30L/分;約30L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、約50L/分、もしくは約40L/分;約40L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、約60L/分、もしくは約50L/分;約50L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、約70L/分、もしくは約60L/分;約60L/分から約100L/分、約90L/分、約80L/分、もしくは約70L/分;約70L/分から約100L/分、約90L/分、もしくは約80L/分;約80L/分から約100L/分もしくは約90L/分;または約90L/分から約100L/分の速度で、第2のシステムに(接続導管を使用して)連続的に流す(例えば、一方向にまたは二方向に流す)ことを含む。
一部の例では、ステップ(f)において、TFVFユニットから収集した濾液は、約0.1mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94m
g/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、約1.0mg/mL、もしくは約0.5mg/mL;約0.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、約1.5mg/mL、もしくは約1.0mg/mL;約1.0mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、約2.0mg/mL、もしくは約1.5mg/mL;約1.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4
mg/mL、約3mg/mL、約2.5mg/mL、もしくは約2.0mg/mL;約2.0mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、約3mg/mL、もしくは約2.5mg/mL;
約2.5mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、約4mg/mL、もしくは約3mg/mL;約3mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、約5mg/mL、もしくは約4mg/mL;約4mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、約54mg/mL、約52mg/mL、約50mg/mL、約48mg/mL、約46mg/mL、約44mg/mL、約42mg/mL、約40mg/mL、約38mg/mL、約36mg/mL、約34mg/mL、約32mg/mL、約30mg/mL、約28mg/mL、約26mg/mL、約24mg/mL、約22mg/mL、約20mg/mL、約18mg/mL、約16mg/mL、約14mg/mL、約12mg/mL、約10mg/mL、約9mg/mL、約8mg/mL、約7mg/mL、約6mg/mL、もしくは約5mg/mL;約5mg/mLから約100
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約52mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、約56mg/mL、もしくは約54mg/mL;約54mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、約58mg/mL、もしくは約56mg/mL;約56mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、約62mg/mL、約60mg/mL、もしくは約58mg/mL;約58mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg
/mL、約62mg/mL、もしくは約60mg/mL;約60mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、約64mg/mL、もしくは約62mg/mL;約62mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、約66mg/mL、もしくは約64mg/mL;約64mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、約68mg/mL、もしくは約66mg/mL;約66mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、約70mg/mL、もしくは約68mg/mL;約68mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、約72mg/mL、もしくは約70mg/mL;約70mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、約74mg/mL、もしくは約72mg/mL;約72mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、約76mg/mL、もしくは約74mg/mL;約74mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、約78mg/mL、もしくは約76mg/mL;約76mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、約80mg/mL、もしくは約78mg/mL;約78mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、約82mg/mL、もしくは約80mg/mL;約80mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、約84mg/mL、もしくは約82mg/mL;約82mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、約86mg/mL、もしくは約84mg/mL;約84mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、約88mg/mL、もしくは約86mg/mL;約86mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、約90mg/mL、もしくは約88mg/mL;約88mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、約92mg/mL、もしくは約90mg/mL;約90mg/mLか
ら約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、約94mg/mL、もしくは約92mg/mL;約92mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、96mg/mL、もしくは約94mg/mL;約94mg/mLから約100mg/mL、約98mg/mL、もしくは96mg/mL;約96mg/mLから約100mg/mLもしくは約98mg/mL;または約98mg/mLから約100mg/mLの濃度の組換え治療用タンパク質を含む。
これらの方法の一部の例では、第3の期間は、約0.1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、約2分、もしくは約1分;約1分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、約5分、もしくは約2分;約2分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、約10分、もしくは約5分;約5分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約15分、もしくは約10分;約10分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、もしくは約15分;約15分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、もしくは約20分;約20分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、もしくは約25分;約25分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約
40分、約35分、もしくは約30分;約30分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、約40分、もしくは約35分;約35分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、約45分、もしくは約40分;約40分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、約50分、もしくは約45分;約45分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、約55分、もしくは約50分;約50分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.0時間、もしくは約55分;約55分から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、もしくは約1.0時間;約1.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、約2.0時間、もしくは約1.5時間;約1.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、約2.5時間、もしくは約2.0時間;約2.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、約3.0時間、もしくは約2.5時間;約2.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、約3.5時間、もしくは約3.0時間;約3.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、約4.0時間、もしくは約3.5時間;約3.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、約4.5時間、もしくは約4.0時間;約4.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時
間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、約5.0時間、もしくは約4.5時間;約4.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、約5.5時間、もしくは約5.0時間;約5.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、約6.0時間、もしくは約5.5時間;約5.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、約6.5時間、もしくは約6.0時間;約6.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、約7時間、もしくは約6.5時間;約6.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、約7.5時間、もしくは約7時間;約7時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、約8.0時間、もしくは約7.5時間;約7.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、約8.5時間、もしくは約8.0時間;約8.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、約9.0時間、もしくは約8.5時間;約8.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、約9.5時間、もしくは約9.0時間;約9.0時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、約10時間、もしくは約9.5時間;約9.5時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、約10.5時間、もしくは約10時間;約10時間から約12時間、約11.5時間、約11時間、もしくは約10.5時間;約10.5時間から約12時間、約11.5時間、または約11時間;約11時間から約12時間、または約11.5時間であり得る。
これらの方法の一部の例では、第3の期間は、例えば、約12時間から約72時間、約12時間から約69時間、約12時間から約66時間、約12時間から約63時間、約12時間から約60時間、約12時間から約57時間、約12時間から約54時間、約12時間から約51時間、約12時間から約48時間、約12時間から約45時間、約12時間から約42時間、約12時間から約39時間、約12時間から約36時間、約12時間から約33時間、約12時間から約30時間、約12時間から約27時間、約12時間から約24時間、約12時間から約21時間、約12時間から約18時間、約12時間から約15時間、約15時間から約72時間、約15時間から約69時間、約15時間から約66時間、約15時間から約63時間、約15時間から約60時間、約15時間から約57時間、約15時間から約54時間、約15時間から約51時間、約15時間から約48時間、約15時間から約45時間、約15時間から約42時間、約15時間から約39時間、約15時間から約36時間、約15時間から約33時間、約15時間から約30時間、約15時間から約27時間、約15時間から約24時間、約15時間から約21時間、約15時間から約18時間、約18時間から約72時間、約18時間から約69時間、約18時間から約66時間、約18時間から約63時間、約18時間から約60時間、約18時間から約57時間、約18時間から約54時間、約18時間から約51時間、約18時間から約48時間、約18時間から約45時間、約18時間から約42時間、約18時間から約39時間、約18時間から約36時間、約18時間から約33時間、約18時間から約30時間、約18時間から約27時間、約18時間から約24時間、約18時間から約21時間、約21時間から約72時間、約21時間から約69時間、約21時間から約66時間、約21時間から約63時間、約21時間から約60時間、約21時間から約57時間、約21時間から約54時間、約21時間から約51時間、約21時間から約4
8時間、約21時間から約45時間、約21時間から約42時間、約21時間から約39時間、約21時間から約36時間、約21時間から約33時間、約21時間から約30時間、約21時間から約27時間、約21時間から約24時間、約24時間から約72時間、約24時間から約69時間、約24時間から約66時間、約24時間から約63時間、約24時間から約60時間、約24時間から約57時間、約24時間から約54時間、約24時間から約51時間、約24時間から約48時間、約24時間から約45時間、約24時間から約42時間、約24時間から約39時間、約24時間から約36時間、約24時間から約33時間、約24時間から約30時間、約24時間から約27時間、約27時間から約72時間、約27時間から約69時間、約27時間から約66時間、約27時間から約63時間、約27時間から約60時間、約27時間から約57時間、約27時間から約54時間、約27時間から約51時間、約27時間から約48時間、約27時間から約45時間、約27時間から約42時間、約27時間から約39時間、約27時間から約36時間、約27時間から約33時間、約27時間から約30時間、約30時間から約72時間、約30時間から約69時間、約30時間から約66時間、約30時間から約63時間、約30時間から約60時間、約30時間から約57時間、約30時間から約54時間、約30時間から約51時間、約30時間から約48時間、約30時間から約45時間、約30時間から約42時間、約30時間から約39時間、約30時間から約36時間、約30時間から約33時間、約33時間から約72時間、約33時間から約69時間、約33時間から約66時間、約33時間から約63時間、約33時間から約60時間、約33時間から約57時間、約33時間から約54時間、約33時間から約51時間、約33時間から約48時間、約33時間から約45時間、約33時間から約42時間、約33時間から約39時間、約33時間から約36時間、約36時間から約72時間、約36時間から約69時間、約36時間から約66時間、約36時間から約63時間、約36時間から約60時間、約36時間から約57時間、約36時間から約54時間、約36時間から約51時間、約36時間から約48時間、約36時間から約45時間、約36時間から約42時間、約36時間から約39時間、約39時間から約72時間、約39時間から約69時間、約39時間から約66時間、約39時間から約63時間、約39時間から約60時間、約39時間から約57時間、約39時間から約54時間、約39時間から約51時間、約39時間から約48時間、約39時間から約45時間、約39時間から約42時間、約42時間から約72時間、約42時間から約69時間、約42時間から約66時間、約42時間から約63時間、約42時間から約60時間、約42時間から約57時間、約42時間から約54時間、約42時間から約51時間、約42時間から約48時間、約42時間から約45時間、約45時間から約72時間、約45時間から約69時間、約45時間から約66時間、約45時間から約63時間、約45時間から約60時間、約45時間から約57時間、約45時間から約54時間、約45時間から約51時間、約45時間から約48時間、約48時間から約72時間、約48時間から約69時間、約48時間から約66時間、約48時間から約63時間、約48時間から約60時間、約48時間から約57時間、約48時間から約54時間、約48時間から約51時間、約51時間から約72時間、約51時間から約69時間、約51時間から約66時間、約51時間から約63時間、約51時間から約60時間、約51時間から約57時間、約51時間から約54時間、約54時間から約72時間、約54時間から約69時間、約54時間から約66時間、約54時間から約63時間、約54時間から約60時間、約54時間から約57時間、約57時間から約72時間、約57時間から約69時間、約57時間から約66時間、約57時間から約63時間、約57時間から約60時間、約60時間から約72時間、約60時間から約69時間、約60時間から約66時間、約60時間から約63時間、約63時間から約72時間、約63時間から約69時間、約63時間から約66時間、約66時間から約72時間、約66時間から約69時間、または約69時間から約72時間であり得る。
これらの方法の一部の実施形態では、TFVFユニットを含む第2の回路システムに連
続的に流される、工程(d)の収集された流体は、約10-1から約10-20、約10-1から約10-19、約10-1から約10-18、約10-1から約10-17、約10-1から約10-16、約10-1から約10-15、約10-1から約10-14、約10-1から約10-13、約10-1から約10-12、約10-1から約10-11、約10-1から約10-10、約10-1から約10-9、約10-1から約10-8、約10-1から約10-7、約10-1から約10-6、約10-1から約10-5、約10-1から約10-4、約10-1から約10-3、約10-1から約10-2、約10-2から約10-20、約10-2から約10-19、約10-2から約10-18、約10-2から約10-17、約10-2から約10-16、約10-2から約10-15、約10-2から約10-14、約10-2から約10-13、約10-2から約10-12、約10-2から約10-11、約10-2から約10-10、約10-2から約10-9、約10-2から約10-8、約10-2から約10-7、約10-2から約10-6、約10-2から約10-5、約10-2から約10-4、約10-2から約10-3、約10-3から約10-20、約10-3から約10-19、約10-3から約10-18、約10-3から約10-17、約10-3から約10-16、約10-3から約10-15、約10-3から約10-14、約10-3から約10-13、約10-3から約10-12、約10-3から約10-11、約10-3から約10-10、約10-3から約10-9、約10-3から約10-8、約10-3から約10-7、約10-3から約10-6、約10-3から約10-5、約10-3から約10-4、約10-4から約10-20、約10-4から約10-19、約10-4から約10-18、約10-4から約10-17、約10-4から約10-16、約10-4から約10-15、約10-4から約10-14、約10-4から約10-13、約10-4から約10-12、約10-4から約10-11、約10-4から約10-10、約10-4から約10-9、約10-4から約10-8、約10-4から約10-7、約10-4から約10-6、約10-4から約10-5、約10-5から約10-20、約10-5から約10-19、約10-5から約10-18、約10-5から約10-17、約10-5から約10-16、約10-5から約10-15、約10-5から約10-14、約10-5から約10-13、約10-5から約10-12、約10-5から約10-11、約10-5から約10-10、約10-5から約10-9、約10-5から約10-8、約10-5から約10-7、約10-5から約10-6、約10-6から約10-20、約10-6から約10-19、約10-6から約10-18、約10-6から約10-17、約10-6から約10-16、約10-6から約10-15、約10-6から約10-14、約10-6から約10-13、約10-6から約10-12、約10-6から約10-11、約10-6から約10-10、約10-6から約10-9、約10-6から約10-8、約10-6から約10-7、約10-7から約10-20、約10-7から約10-19、約10-7から約10-18、約10-7から約10-17、約10-7から約10-16、約10-7から約10-15、約10-7から約10-14、約10-7から約10-13、約10-7から約10-12、約10-7から約10-11、約10-7から約10-10、約10-7から約10-9、約10-7から約10-8、約10-8から約10-20、約10-8から約10-19、約10-8から約10-18、約10-8から約10-17、約10-8から約10-16、約10-8から約10-15、約10-8から約10-14、約10-8から約10-13、約10-8から約10-12、約10-8から約10-11、約10-8から約10-10、約10-8から約10-9、約10-9から約10-20、約10-9から約10-19、約10-9から約10-18、約10-9から約10-17、約10-9から約10-16、約10-9から約10-15、約10-9から約10-14、約10-9から約10-13、約10-9から約10-12、約10-9から約10-11、約10-9から約10-10、約10-10から約10-20、約10-10から約10-19、約10-10から約10-18、約10-10から約10-17、約10-10から約10-16、約10-10から約10-15、約10-10から約10-14、約10-10から約10-13、約10
-10から約10-12、約10-10から約10-11、約10-11から約10-20、約10-11から約10-19、約10-11から約10-18、約10-11から約10-17、約10-11から約10-16、約10-11から約10-15、約10-11から約10-14、約10-11から約10-13、約10-11から約10-12、約10-12から約10-20、約10-12から約10-19、約10-12から約10-18、約10-12から約10-17、約10-12から約10-16、約10-12から約10-15、約10-12から約10-14、約10-12から約10-13、約10-13から約10-20、約10-13から約10-19、約10-13から約10-18、約10-13から約10-17、約10-13から約10-16、約10-13から約10-15、約10-13から約10-14、約10-14から約10-20、約10-14から約10-19、約10-14から約10-18、約10-14から約10-17、約10-14から約10-16、約10-14から約10-15、約10-15から約10-20、約10-15から約10-19、約10-15から約10-18、約10-15から約10-17、約10-15から約10-16、約10-16から約10-20、約10-16から約10-19、約10-16から約10-18、約10-16から約10-17、約10-17から約10-20、約10-17から約10-19、約10-17から約10-18、約10-18から約10-20、約10-18から約10-19、または約10-19から約10-20の総ウイルス力価を含み得る。
一部の実施形態では、ステップ(d)の収集された流体を、TFVFユニットを含む第2の回路システムに連続的に流す工程は、フィルターまたはTFVFユニットにおける1つまたはそれ以上のフィルターを通るフラックスが、例えば、約10LMHから約50LMH、約10LMBから約48LMH、約10LMHから約46LMH、約10LMHから約44LMH、約10LMHから約42LMH、約10LMHから約40LMH、約10LMHから約38LMH、約10LMHから約36LMH、約10LMHから約34LMH、約10LMHから約32LMH、約10LMHから約30LMH、約10LMHから約28LMH、約10LMHから約26LMH、約10LMHから約24LMH、約10LMHから約22LMH、約10LMHから約20LMH、約10LMHから約18LMH、約10LMHから約16LMH、約10LMHから約15LMH、約15LMHから約50LMH、約15LMBから約48LMH、約15LMHから約46LMH、約15LMHから約44LMH、約15LMHから約42LMH、約15LMHから約40LMH、約15LMHから約38LMH、約15LMHから約36LMH、約15LMHから約34LMH、約15LMHから約32LMH、約15LMHから約30LMH、約15LMHから約28LMH、約15LMHから約26LMH、約15LMHから約24LMH、約15LMHから約22LMH、約15LMHから約20LMH、約15LMHから約18LMH、約20LMHから約50LMH、約20LMBから約48LMH、約20LMHから約46LMH、約20LMHから約44LMH、約20LMHから約42LMH、約20LMHから約40LMH、約20LMHから約38LMH、約20LMHから約36LMH、約20LMHから約34LMH、約20LMHから約32LMH、約20LMHから約30LMH、約20LMHから約28LMH、約20LMHから約26LMH、約20LMHから約24LMH、約20LMHから約22LMH、約22LMHから約50LMH、約22LMBから約48LMH、約22LMHから約46LMH、約22LMHから約44LMH、約22LMHから約42LMH、約22LMHから約40LMH、約22LMHから約38LMH、約22LMHから約36LMH、約22LMHから約34LMH、約22LMHから約32LMH、約22LMHから約30LMH、約22LMHから約28LMH、約22LMHから約26LMH、約22LMHから約24LMH、約24LMHから約50LMH、約24LMBから約48LMH、約24LMHから約46LMH、約24LMHから約44LMH、約24LMHから約42LMH、約24LMHから約40LMH、約24LMHから約38LMH、約24LMHから約36LMH、約24LMHから約34LMH、約24LMHから約32LMH、約24LMHか
ら約30LMH、約24LMHから約28LMH、約24LMHから約26LMH、約26LMHから約50LMH、約26LMBから約48LMH、約26LMHから約46LMH、約26LMHから約44LMH、約26LMHから約42LMH、約26LMHから約40LMH、約26LMHから約38LMH、約26LMHから約36LMH、約26LMHから約34LMH、約26LMHから約32LMH、約26LMHから約30LMH、約26LMHから約28LMH、約28LMHから約50LMH、約28LMBから約48LMH、約28LMHから約46LMH、約28LMHから約44LMH、約28LMHから約42LMH、約28LMHから約40LMH、約28LMHから約38LMH、約28LMHから約36LMH、約28LMHから約34LMH、約28LMHから約32LMH、約28LMHから約30LMH、約30LMHから約50LMH、約30LMBから約48LMH、約30LMHから約46LMH、約30LMHから約44LMH、約30LMHから約42LMH、約30LMHから約40LMH、約30LMHから約38LMH、約30LMHから約36LMH、約30LMHから約34LMH、約30LMHから約32LMH、約32LMHから約50LMH、約32LMBから約48LMH、約32LMHから約46LMH、約32LMHから約44LMH、約32LMHから約42LMH、約32LMHから約40LMH、約32LMHから約38LMH、約32LMHから約36LMH、約32LMHから約34LMH、約34LMHから約50LMH、約34LMBから約48LMH、約34LMHから約46LMH、約34LMHから約44LMH、約34LMHから約42LMH、約34LMHから約40LMH、約34LMHから約38LMH、約34LMHから約36LMH、約36LMHから約50LMH、約36LMBから約48LMH、約36LMHから約46LMH、約36LMHから約44LMH、約36LMHから約42LMH、約36LMHから約40LMH、約36LMHから約38LMH、約38LMHから約50LMH、約38LMBから約48LMH、約38LMHから約46LMH、約38LMHから約44LMH、約38LMHから約42LMH、約38LMHから約40LMH、約40LMHから約50LMH、約40LMBから約48LMH、約40LMHから約46LMH、約40LMHから約44LMH、約40LMHから約42LMH、約42LMHから約50LMH、約42LMBから約48LMH、約42LMHから約46LMH、約42LMHから約44LMH、約44LMHから約50LMH、約44LMBから約48LMH、約44LMHから約46LMH、約46LMHから約50LMH、約46LMBから約48LMH、または約48LMHから約50LMHであるように実施することができる。
一部の実施形態では、ステップ(d)から収集された流体を、TFVFユニットを含む第2の回路システムに連続的に流す工程では、フィルターもしくはTFVFユニットにおける1つもしくはそれ以上のフィルターを通る圧力、またはTFVFを含む第2のシステムにおける圧力が、例えば、約2psiから約40psi、約2psiから約38psi、約2psiから約36psi、約2psiから約34psi、約2psiから約32psi、約2psiから約30psi、約2psiから約28psi、約2psiから約26psi、約2psiから約24psi、約2psiから約22psi、約2psiから約20psi、約2psiから約18psi、約2psiから約16psi、約2psiから約14psi、約2psiから約12psi、約2psiから約10psi、約2psiから約8psi、約2psiから約6psi、約2psiから約4psi、約4psiから約40psi、約4psiから約38psi、約4psiから約36psi、約4psiから約34psi、約4psiから約32psi、約4psiから約30psi、約4psiから約28psi、約4psiから約26psi、約4psiから約24psi、約4psiから約22psi、約4psiから約20psi、約4psiから約18psi、約4psiから約16psi、約4psiから約14psi、約4psiから約12psi、約4psiから約10psi、約4psiから約8psi、約4psiから約6psi、約6psiから約40psi、約6psiから約38psi、約6psiから約36psi、約6psiから約34psi、約6psiから約32psi、約6ps
iから約30psi、約6psiから約28psi、約6psiから約26psi、約6psiから約24psi、約6psiから約22psi、約6psiから約20psi、約6psiから約18psi、約6psiから約16psi、約6psiから約14psi、約6psiから約12psi、約6psiから約10psi、約6psiから約8psi、約8psiから約40psi、約8psiから約38psi、約8psiから約36psi、約8psiから約34psi、約8psiから約32psi、約8psiから約30psi、約8psiから約28psi、約8psiから約26psi、約8psiから約24psi、約8psiから約22psi、約8psiから約20psi、約8psiから約18psi、約8psiから約16psi、約8psiから約14psi、約8psiから約12psi、約8psiから約10psi、約10psiから約40psi、約10psiから約38psi、約10psiから約36psi、約10psiから約34psi、約10psiから約32psi、約10psiから約30psi、約10psiから約28psi、約10psiから約26psi、約10psiから約24psi、約10psiから約22psi、約10psiから約20psi、約10psiから約18psi、約10psiから約16psi、約10psiから約14psi、約10psiから約12psi、約12psiから約40psi、約12psiから約38psi、約12psiから約36psi、約12psiから約34psi、約12psiから約32psi、約12psiから約30psi、約12psiから約28psi、約12psiから約26psi、約12psiから約24psi、約12psiから約22psi、約12psiから約20psi、約12psiから約18psi、約12psiから約16psi、約12psiから約14psi、約14psiから約40psi、約14psiから約38psi、約14psiから約36psi、約14psiから約34psi、約14psiから約32psi、約14psiから約30psi、約14psiから約28psi、約14psiから約26psi、約14psiから約24psi、約14psiから約22psi、約14psiから約20psi、約14psiから約18psi、約14psiから約16psi、約16psiから約40psi、約16psiから約38psi、約16psiから約36psi、約16psiから約34psi、約16psiから約32psi、約16psiから約30psi、約16psiから約28psi、約16psiから約26psi、約16psiから約24psi、約16psiから約22psi、約16psiから約20psi、約16psiから約18psi、約18psiから約40psi、約18psiから約38psi、約18psiから約36psi、約18psiから約34psi、約18psiから約32psi、約18psiから約30psi、約18psiから約28psi、約18psiから約26psi、約18psiから約24psi、約18psiから約22psi、約18psiから約20psi、約20psiから約40psi、約20psiから約38psi、約20psiから約36psi、約20psiから約34psi、約20psiから約32psi、約20psiから約30psi、約20psiから約28psi、約20psiから約26psi、約20psiから約24psi、約20psiから約22psi、約22psiから約40psi、約22psiから約38psi、約22psiから約36psi、約22psiから約34psi、約22psiから約32psi、約22psiから約30psi、約22psiから約28psi、約22psiから約26psi、約22psiから約24psi、約24psiから約40psi、約24psiから約38psi、約24psiから約36psi、約24psiから約34psi、約24psiから約32psi、約24psiから約30psi、約24psiから約28psi、約24psiから約26psi、約26psiから約40psi、約26psiから約38psi、約26psiから約36psi、約26psiから約34psi、約26psiから約32psi、約26psiから約30psi、約26psiから約28psi、約28psiから約40psi、約28psiから約38psi、約28psiから約36psi、約28psiから約34psi、約28psiから約32psi、約28psiから約30psi、約30psiから約40psi、約30psiから約38psi、約30psiから
約36psi、約30psiから約34psi、約30psiから約32psi、約32psiから約40psi、約32psiから約38psi、約32psiから約36psi、約32psiから約34psi、約34psiから約40psi、約34psiから約38psi、約34psiから約36psi、約36psiから約40psi、約36psiから約38psi、または約38psiから約40psiであるように実施することができる。
TFVFユニットを含む回路システムの使用を含む組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法
(a)(i)第1および第2の入口を有するTFVFユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、該システムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;(b)ある期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集する工程とを含む前記方法も提供される。当業者に認識されるように、これらの方法の一部の実施形態は、TFVFユニット(例えば、組換え治療用タンパク質を含む新たな体積の流体をTFVFユニットを含む回路システムの導管に流す場合の緩衝液として作用する)における1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを通過しなかった、TFVFユニットを含む回路システムの導管における組換え治療用タンパク質を含む任意の流体を再循環させることをさらに含むことができる。
一部の実施形態では、TFVFユニットは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12個のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。これらの方法の一部の例では、TFVFユニットは、約0.05cmから約100m(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含むことができる。
一部の実施形態では、TFVFユニットは、約5nmから約220nm(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の孔径を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む。TFVFユニットにおいて使用することができる様々なウイルスフィルターが当技術分野で公知である。例えば、TFVFユニットにおいて使用することができるウイルスフィルターは、旭化成(東京、日本)から市販されている。一部の実施形態では、ウイルスフィルターは、Planova(商標)フィルター(例えば、Planova(商標)15N、Planova(商標)20N、Planova(商標)35N、またはPlanova(商標)75N)である。一部の実施形態では、ウイルスフィルターは、Planova(商標)BioEXフィルターである。TFVFユニットにおいて使用することができるウイルスフィルターは、例えば、中空繊維膜を含むことができる。
導管は、簡単なチューブ、例えば、生体適合性チューブであり得る。有用なチューブの非限定例として、シリコーンゴム、ポリウレタン、ポリジオキサノン(PDO)、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリヒドロキシブチレート、ポリ(グリセロールセバケート)、ポリグリコリド、ポリラクチド、ポリカプロラクトン、もしくはポリ無水物、またはこれらのおよび/もしくは他のポリマーを含むコポリマーもしくは誘導体が挙げられる。あるいはまたはさらに、導管は、ポリ塩化ビニルを含むことができる。導管は、例えば、溶接可能な移送チューブであり得る。
一部の実施形態では、回路システムにおける導管の内径は、約5mmから約50mm(例えば、または本明細書に記載のその下位範囲のいずれか)であり得る。一部の実施形態では、回路システムにおける導管は、約1.0cmから約75cm(例えば、または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の全長を有する。第2の回路システムにおいて使用することができる導管および導管の特性のさらなる例は、当技術分野で周知である。
一部の例では、回路システムは、1、2、3、4、または5個のポートを含む。一部の例では、回路システムにおける少なくとも1つのポートは、バルブであり得る。他の例では、回路システムにおける少なくとも1つのポートは、注入ポートであり得るか、またはリブ付きスレッドを有し得る。回路システムにおける少なくとも1つのポートは、当技術分野で通常知られている任意のタイプのポートであり得る。一部の例では、回路システムは、導管内に配置されたポンプ(例えば、低乱流ポンプ、例えば、ぜん動ポンプ)をさらに含むことができる。一部の実施形態では、回路システムは、収容タンクを含まない。
一部の例では、工程(b)は、組換え治療用タンパク質を含む流体を、約0.05mL/分から約25mL/分の間(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の速度で、回路システムに連続的に流す(例えば、一方向にまたは二方向に流す)ことを含む。一部の例では、工程(b)において、TFVFユニットから収集した濾液は、約0.1mg/mLから約100mg/mL(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の濃度の組換え治療用タンパク質を含む。これらの方法の一部の例では、ある期間は、約5分から約12時間(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)であり得る。
これらの方法の一部の例では、ある期間は、例えば、約12時間から約72時間(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)であり得る。
一部の実施形態では、少なくとも1つのポートの1つを通してTFVFユニットを含む回路システムに連続的に流される流体は、約10-1から約10-20(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)の総ウイルス力価を含むことができる。
一部の実施形態では、流体を、TFVFユニットを含む回路システムを通して連続的に流す工程は、フィルターまたはTFVFユニットにおける1つもしくはそれ以上のフィルターを通るフラックスが、例えば、約10LMHから約50LMH(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)であるように実施することができる。
一部の実施形態では、流体を、TFVFユニットを含む回路システムを通して連続的に流す工程は、フィルターまたはTFVFユニットにおける1つもしくはそれ以上のフィルターを通る圧力、またはTFVFを含むシステムにおける圧力が、例えば、約2psiから約40psi(または本明細書に記載のこの範囲の下位範囲のいずれか)であるように実施することができる。
一部の実施形態では、方法は、組換えタンパク質を含む流体に関する1つまたはそれ以上のユニット操作を実施する工程をさらに含むことができる。これらのユニット操作の非限定例として:組換え治療用タンパク質を捕捉すること、組換え治療用タンパク質を精製すること、組換え治療用タンパク質をポリッシュすること、ウイルスの不活性化、ウイルス濾過、組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/またはpHを調整すること、組換え治療用タンパク質を含有する流体の濾過、沈殿および凝結、水性二相抽出、凍結乾燥、および結晶化が挙げられる。これらの例示的ユニット操作のそれぞれの非限定的態様は、本明細書に記載されている。
治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセス
治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセスが本明細書で提供される。このプロセスは、細胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を準備する工程であって、液体培養培地が第1のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS1)に供給される、工程と;MCCS1を使用して、液体培養培地中の組換え治療用タンパク質を捕捉する工程であって、組換え治療用タンパク質を含有するMCCS1の溶出液が、第2のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS2)に連続的に供給される、前記工程と;MCCS2を使用して、組換え治療用タンパク質を精製およびポリッシュする工程であって、MCCS2からの溶出液が組換え治療用タンパク質を含む流体である、前記工程と;本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程とを含み、該プロセスは、液体培養培地から組換え治療用タンパク質を含む収集された流体または濾液に連続的に統合および実行され、収集された流体または濾液は治療用タンパク質原薬である。これらのプロセスを実施するために使用することができるシステムの例は、図1および2に示される(ここで、アスタリスクは、タンジェンシャルフロー濾過ユニットおよびタンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムの一方または両方が、場合により、このシステムに導入される場所を示す)。例えば、タンジェンシャルフロー濾過ユニットおよびタンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムの一方または両方は、第1のユニット操作の実施前、第1および第2のユニット操作の実施の間、第2および第3のユニット操作の実施の間、第3および第4のユニット操作の実施の間、第4および第5のユニット操作の実施の間、第5および第6のユニット操作の実施の間、第6および第7のユニット操作の実施の間、第7および第8のユニット操作の実施の間、ならびに/または第8および第9のユニット操作の間に使用することができる。
本明細書に記載のプロセスは、液体培養培地から治療用原薬の連続的かつ時間効率の良い生産を提供する。例えば、治療用タンパク質を含有する流体(例えば、液体培養培地)を第1のMCCSに供給するのと、治療用タンパク質原薬(治療用タンパク質を含有する)を第2のMCCSから溶出するのとの間の経過時間は、例えば、約4時間から約48時間の間(両端を含む)、例えば、約4時間から約40時間の間、約4時間から約35時間の間、約4時間から約30時間の間、約4時間から約28時間の間、約4時間から約26時間の間、約4時間から約24時間の間、約4時間から約22時間の間、約4時間から約20時間の間、約4時間から約18時間の間、約4時間から約16時間の間、約4時間から約14時間の間、約4時間から約12時間の間、約6時間から約12時間の間、約8時間から約12時間の間、約6時間から約20時間の間、約6時間から約18時間の間、約6時間から約14時間の間、約8時間から約16時間の間、約8時間から約14時間の間、約8時間から約12時間の間、約10時間から20時間の間、約10時間から18時間の間、約10時間から16時間の間、約10時間から14時間の間、約12時間から約14時間の間、約10時間から約40時間の間、約10時間から約35時間の間、約10時間から約30時間の間、約10時間から約25時間の間、約15時間から約40時間の間、約15時間から約35時間の間、約15時間から約30時間の間、約20時間から約40時間の間、約20時間から約35時間の間、または約20時間から約30時間の間(両端を含む)であり得る。他の例では、治療用タンパク質を含有する流体(例えば、液体培養培地)をMCCS1に供給するのと、治療用タンパク質原薬(治療用タンパク質を含有する)をMCCS2から溶出するのとの間の経過時間は、例えば、約4時間より長くかつ約40時間未満(両端を含む)、例えば、約4時間より長くかつ約39時間未満、約38時間、約37時間、約36時間、約35時間、約34時間、約33時間、約32時間、約31時間、約30時間、約29時間、約28時間、約27時間、約26時間、約25時間、約24時間、約23時間、約22時間、約21時間、約20時間、約19時間、約18時間、約17時間、約16時間、約15時間、約14時間、約13時間、約12時間、約
11時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、または約4.5時間(両端を含む)である。
一部の例示的プロセスは、全プロセスにおいて、収容工程を利用しない(例えば、リザーバ(例えば、ブレークタンク)を使用しない)。他のプロセスは、全プロセスにおいて、最大で1、2、3、4、または5個のリザーバ(例えば、ブレークタンク)を使用してもよい。本明細書に記載のプロセスのいずれかは、方法全体において、最大で1、2、3、4、または5個のリザーバ(例えば、ブレークタンク)を使用してもよく、各ブレークタンクは、全期間、例えば、約5分から約6時間未満の間(両端を含む)、例えば、約5分から約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、または約30分の間(両端を含む)、治療用タンパク質を収容するだけである。本明細書に記載のプロセスで使用されるリザーバのいずれか(例えば、ブレークタンク)は、例えば、1mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約5mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、もしくは約20mLの間(両端を含む);約20mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、もしくは約40mLの間(両端を含む);約40mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,
500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、もしくは約60mLの間(両端を含む);約60mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、もしくは約80mLの間(両端を含む);
約80mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、もしくは約120mLの間(両端を含む);約120mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、もしくは約140mLの間(両端を含む);約140mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、もしくは約160mLの間(両端を含む);約160mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8
,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、もしくは約180mLの間(両端を含む);約180mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、もしくは約220mLの間(両端を含む);約220mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、もしくは約240mLの間(両端を含む);約240mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、もしくは約260mLの間(両端を含む);
約260mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、もしくは約280mLの間(両端を含む);約280mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約40
0mL、約350mL、もしくは約300mLの間(両端を含む);約300mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、もしくは約350mLの間(両端を含む);約350mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、もしくは約450mLの間(両端を含む);約450mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、もしくは約500mLの間(両端を含む);約500mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、もしくは約550mLの間(両端を含む);約550mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、もしくは約650mLの間(両端を含む);約650mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、もしくは約700mLの間(両端を含む);約700mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,0
00L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、もしくは約750mLの間(両端を含む);
約750mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、約850mL、もしくは約800mLの間(両端を含む);約800mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、約900mL、もしくは約850mLの間(両端を含む);約850mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、約950mL、もしくは約900mLの間(両端を含む);約900mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、約1,000L、もしくは約950mLの間(両端を含む);約950mLから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、約1,500L、もしくは約1,000Lの間(両端を含む);約1,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、約2,000L、もしくは約1,500Lの間(両端を含む);約1,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、約2,500L、もしくは約2,000Lの間(両端を含む);約2,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、約3,000L、もしくは約2,500Lの間(両端を含む);約2,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、約3,500L、もしくは約3,000Lの間(両端を含む);約3,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L、約4,000L、もしくは約3,500Lの間(両端を含む);約3,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、約4,500L
、もしくは約4,000Lの間(両端を含む);約4,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、約5,000L、もしくは約4,500Lの間(両端を含む);約4,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、約5,500L、もしくは約5,000Lの間(両端を含む);約5,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、約6,000L、もしくは約5,500Lの間(両端を含む);約5,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、約6,500L、もしくは約6,000Lの間(両端を含む);約6,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、約7,000L、もしくは約6,500Lの間(両端を含む);約6,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、約7,500L、もしくは約7,000Lの間(両端を含む);約7,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、約8,000L、もしくは約7,500Lの間(両端を含む);約7,500Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、約8,500L、もしくは約8,000Lの間(両端を含む);約8,000Lから約10,000L、約9,500L、約9,000L、もしくは約8,500Lの間(両端を含む);約8,500Lから約10,000L、約9,500L、もしくは約9,000Lの間(両端を含む);約9,000Lから約10,000Lもしくは約9,500Lの間(両端を含む);または、約9,500Lから約10,000Lの間(両端を含む)である容量を有することができる。
流体が第1のMCCSに入る前に、流体を収容するために使用される(本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて)任意のリザーバ(例えば、ブレークタンク)は、例えば、1mLから第1のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約100%の間(両端を含む)、例えば、1mLから第1のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約90%、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%、または約5%の間(両端を含む)である容量を有することができる。流体が第2のMCCSに入る前に、流体を収容するために使用される(本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて)リザーバのいずれか(例えば、ブレークタンク)は、例えば、1mLから第2のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約100%の間(両端を含む)、例えば、1mLから第2のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約90%、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%、または約5%の間(両端を含む)である容量を有することができる。
これらのプロセスの種々のさらなる態様は、以下に詳細に記載されており、限定することなく、本明細書において提供されるプロセスにおいて、任意の組合せで使用することができる。提供されたプロセスの例示的態様は、以下に記載されているが、しかし、本明細書に記載のプロセスにさらなる工程(例えば、さらなるユニット操作の性能)を追加することができ、本明細書に記載のプロセスの工程のうちのいずれかを実施するために他の材料を使用することができることを当業者なら理解するであろう。
液体培養培地
細胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地は、任意の供給源に由来し得る。例えば、液体培養培地は、組換え細胞培養物(例えば、組換え細菌、酵母、または哺乳動物細胞培養物)から得ることができる。液体培養培地は、フェドバッチ細胞(例えば、哺乳動物細胞)培養物(例えば、組換え治療用タンパク質を分泌する哺
乳動物細胞の培養物を含有するフェドバッチバイオリアクター)または灌流細胞(例えば、哺乳動物細胞)培養物(例えば、組換え治療用タンパク質を分泌する哺乳動物細胞の培養物を含有する灌流バイオリアクター)から得ることができる。液体培養培地は、組換え治療用タンパク質を分泌する細菌または酵母細胞の培養物由来の清澄化された液体培養培地でもあり得る。
組換え細胞培養物から得られる液体培養培地を濾過または清澄化して、細胞および/またはウイルスを実質的に含まない液体培養培地を得ることができる。細胞を除去するために、液体培養培地を濾過または清澄化するための方法は、当技術分野で公知である(例えば、0.2μm濾過および交互タンジェンシャルフロー(ATF(商標))システムを使用する濾過)。
液体培養培地を濾過または清澄化するためのさらなる例示的方法として、例えば、固定化細胞分離(例えば、Kuhtreiberら、Springer Science &
Business Media、2013年;Meuwlyら、Biotechnol.Adv.25(1):45~56頁、2007年;Jenら、Biotechnol.Bioeng.50(4):357~364頁、1996年;Piretら、Biotechnol.Adv.8(4):763~783頁、1990年;およびTyoら、Enzyme Microb.Technol.9(9):514~520頁、1987年に記載された、例えば、中空繊維膜、平板膜、ゲルカプセル化、セラミックマトリックス、および流動床);密度ベースの細胞分離(例えば、重力沈降(例えば、円錐沈降カラムを使用して実施される重力沈降(例えば、Kitanoら、Appl.Microbiol.Biotechnol.24(4):282~286頁、1986年;Shintaniら、Cytotechnology 6(3):197~208頁、1991年に記載される)、リアクター内の沈降ゾーン(例えば、Takazawaら、Appl.Microbiol.Biotechnol.32(3):280~284頁、1989年に記載される)、ドルトムントセトラー(Dortmund settler)(例えば、Hulscherら、Biotechnol.Bioeng.39(4):442~446、1992年に記載される)、および傾斜セトラー(例えば、Boycottら、Nature 104:532頁、1920年;Acrivosら、J.Fluid Mechanics 92(3):435~457頁、1979年;Searlesら、Biotechnol.Prog.10(2):198~206頁、1994年;Koharaら、J.Chem.Eng.Japan 28(6):703~707頁、1995年;Shenら、Biotechnol.Prog.27(5):1282~1296頁、2011年;Wangら、Biotechnol.Prog.26(5):1361~1366頁、2010年;Pohlscheidtら、Biotechnol.Prog.29(1):222~229頁、2013年;Hechtら、Biotechnol.Prog.30(3):607~615頁、2014年)に記載される);遠心分離(例えば、連続遠心分離(例えば、Hamamotoら、J.Ferment.Bioeng.67(3):190~194頁、1989年;Tokashikiら、Cytotechnology 3(3):239~244頁、1990年;およびTakamatsuら、Appl.Microbiol.Biotechnol.45(4):454~457頁、1996年に記載される)、Centritechの遠心分離(Pneumatic Scale Angelusから市販され、例えば、Johnsonら、Biotechnol.Prog.12(6):855~864頁、1996年;Kimら、Biotechnol.Prog.23(5):1186~1197頁、2007年;Kimら、Biotechnol.Prog.24(1):166~174頁、2008年;Hechtら、Biotechnol.Prog.30(3):607~615頁、2014年;Chotteauら、Perfusion Processes,In:Al-Rubeai M(編)、Animal Cell Culture、Springer、Cham
、Switzerland、2015年に記載される)、および連続的向流を利用する遠心分離(例えば、Pattasserilら、BioProcess Int.11(3):38~47頁、2013年)に記載される);音響沈降(例えば、音響セトラー、例えば、Kilburnら、Biotechnol Bioeng.34(4):559~562、1989年;Shirgaonkarら、Biotechnol.Adv.22(6):433~444頁、2004年;Doblhoff-Dierら、Biotechnol.Prog.10(4):428~432頁、1994年;Gaidaら、Biotechnol.Prog.12(1):73~76頁、1996年;Bierauら、J.Biotechnol.62(3):195~207頁、1998年;Crowleyら、BioProcess Int.2(3):46~50頁、2004年;Gorenfloら、Biotechnol.Prog.19(1):30~36頁、2003年;Puiら、Biotechnol.Prog.11(2):146~152頁、1995年;Gorenfloら、Biotechnol.Bioeng.80(4):438~444頁、2002年;Dalmら、Biotechnol.Bioeng.88(5):547~557頁、2004年;Gorenfloら、Biotechnol.Prog.19(1):30~36頁、2005年に記載の音響セトラーを使用する);およびハイドロサイクロン分離(例えば、Elsayedら、Int.J.Biotechnol.Wellness Indust.2(4):153頁、2013年;Castilhoら、Continuous animal cell perfusion processes:the first step toward integrated continuous biomanufacturing、Subramanian G.(編)、Continuous Processing in Pharmaceutical Manufacturing、Wiley-VCH、Weinheim、Germany、2014年;Jockwerら、The use of hydroclones for mammalian cell retention in perfusion bioreactors、Animal Cell Technology:From Target to Marketにおける、Springer、301~306頁、2001年;Pintoら、Cytotechnology 56(1):57~67頁、2008年;Elsayedら、Eng.Life Sci.6(4):347~354頁、2006年;Elsayedら、BMC Proceedings 5(補遺8):65頁、2001年;Castilhoら、Animal cell
separation、Castilhoら(編)における、Animal Cell
Technology:From Biopharmaceuticals to Gene Therapy、Taylor & Francis、New York、NY、273~294頁、2008年に記載のハイドロクロン分離機を使用する)が挙げられる。
液体培養培地を濾過または清澄化するためのさらなる例示的方法として、例えば、スピン濾過(例えば、Himmelfarbら、Science 164(3879):555~557頁、1969年;Tolbertら、In Vitro 17(10):885~890頁、1981年;Reuvenyら、J.Immunol.Methods 86(1):61~69頁、1986年;Avgerinosら、Nat.Biotechnol.8(1):54~58頁、1990年;Kimら、Biotechnol.Prog.24(1):166~174頁、2008年;Bierauら、J.Biotechnol.62(3):195~207頁、1998年;Castilhoら、Biotechnol.Prog.18(4):776~781頁、2002年;Deoら、Biotechnol.Prog.12(1):57~64頁、1996年;Emeryら、Appl.Microbiol.Biotechnol.43(6):1028~1033頁、1995年;Hechtら、Biotechnol.Prog.30(3):607~615頁、2014年;Vallez-Chetreaunuら、J.Biote
chnol.130(3):265~273頁、2007年;Yabannavarら、Biotechnol.Bioeng.40(8):925~933頁、1992年;Yabannavarら、Biotechnol.Bioeng.40(8):925~933頁、1994年;Deoら、Biotechnol.Prog.12(1):57~64頁 1996年;およびCastilhoら、Biotechnol.Prog.18(4):776~781頁、2002年に記載のスピン濾過)を使用して実施される、例えば、サイズベースの細胞分離;中空繊維濾過(例えば、バイオリアクター内に直接配置された中空繊維カートリッジの設置(例えば、Seamansら、J.Ferment.Bioeng.70(4):241~245頁、1990年、およびKyungら、Cytotechnology 14(3):183~190頁、1994年に記載される))、タンジェンシャルフロー濾過(TFF)(例えば、Brennanら、Biotechnol.Tech.1(3):169~174頁、1987年;Velezら、Biotechnol.Bioeng.33(7):938~940頁、1989年;de la Broiseら、Biotechnol.Bioeng.38(7):781~787頁、1991年;Greenfieldら、Bioprocess Eng.6(5):213~219頁、1991年;Kawaharaら、Cytotechnology 14(1):61~66頁、1994年;Karstら、Biochem.Eng.J.110:17~26頁、2016年;Martinら、BMC Proceedings 9:1頁、2015年;Clinckeら、Biotechnol.Prog.29(3):754~767頁、2013年に記載される);交互タンジェンシャルフロー(ATF)濾過(例えば、Kellyら、Biotechnol.Prog.30(6):1291~1300頁、2014年;Karstら、Biochem.Eng.J.110:17~26頁、2016年;Kimら、Cytotechnology 1~10頁、2015年;Xuら、J.Biotechnol.231:149~159頁、2016年;Warikooら、Biotechnol.Bioeng.109(12):3018~3029頁、2012年;Clinckeら、Biotechnol.Prog.29(3):754~767頁、2013年;Wrightら、Bioprocess
International、第13巻、2015年3月10日;Yangら、Biotechnol.Prog.30(3):616~625頁、2014年;およびPadawerら、Biotechnol.Prog.29(3):829~832頁、2013年に記載される);ディスポーザブル浮上濾過の使用(例えば、Taoら、Biotechnol.Prog.27(3):824~829頁、2011年);ボルテックスフロー濾過(VFF)(例えば、Mercilleら、Biotechnol.Bioeng.43(9):833~846頁、1994年;Mercilleら、Biotechnol.Bioeng.67(4):435~450頁、2000年;およびRothら、Pharmaceutical Technology 21(10)、1997年に記載される);ならびに連続的デプス濾過(Vogelら、Biotechnol.Bioeng.109(12):3049~3058頁、2012年、およびKlutzら、Chemical Engineering Processing:Process Intensification 102:88~101頁、2015年に記載される)が挙げられる。
組換え細胞は、遠心分離を使用し、細胞を実質的に含まない液体培養培地である上清を除去するか、または細胞を液体培養培地を含有する容器(例えば、バイオリアクター)の重力方向の底に沈降させ、沈降させた組換え細胞から離れた液体培養培地(細胞を実質的に含まない液体培養培地)を除去することによって、液体培養培地から除去することができる。
液体培養培地は、本明細書に記載の組換え治療用タンパク質のいずれかを産生する組換え細胞(例えば、組換え細菌、酵母、または哺乳動物細胞)の培養物から得ることができ
る。本明細書に記載のプロセスのいずれかの一部の例は、組換え治療用タンパク質を産生する組換え細胞(例えば、組換え細菌、酵母、または哺乳動物細胞)を培養する工程をさらに含むことができる。
液体培養培地は、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の液体培養培地のタイプのいずれかであり得る。例えば、液体培養培地は:動物由来の成分を含まない液体培養培地、血清を含まない液体培養培地、血清含有液体培養培地、既知組成の液体培養培地、およびタンパク質を含まない液体培養培地からなる群から選択することができる。本明細書に記載のプロセスのいずれかでは、培養物から得られる液体培養培地は、第1のMCCS(例えば、第1のPCCS)に供給される前に、第2の流体(例えば、緩衝液)の添加によって希釈することができる。
細胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地は、液体培養培地を第1のMCCS(例えば、第1のPCCS)に供給する前に、保存することができる(例えば、約15℃未満(例えば、約10℃未満、約4℃未満、約0℃未満、約-20℃未満、約-50℃未満、約-70℃、または約-80℃未満)の温度で、少なくとも1日(例えば、少なくとも約2日、少なくとも約5日、少なくとも約10日、少なくとも約15日、少なくとも約20日、または少なくとも約30日)の間)。あるいは、一部の例では、液体培養培地は、バイオリアクターから直接第1のMCCS(例えば、第1のPCCS)に供給される(例えば、濾過または清澄化工程の後、バイオリアクターから直接第1のMCCS(例えば、第1のPCCS)に供給される)。
組換え治療用タンパク質
本明細書に記載の方法によって生成することができる組換え治療用タンパク質の非限定例として、免疫グロブリン(軽および重鎖免疫グロブリンを含む)、抗体、または抗体断片(例えば、本明細書に記載の抗体断片のいずれか)、酵素(例えば、ガラクトシダーゼ(例えば、アルファ-ガラクトシダーゼ)、Myozyme、またはCerezyme)、タンパク質(例えば、ヒトエリスロポエチン、腫瘍壊死因子(TNF)、またはインターフェロンアルファもしくはベータ)、または免疫原性もしくは抗原性タンパク質もしくはタンパク質断片(例えば、ワクチンにおいて使用するためのタンパク質)が挙げられる。組換え治療用タンパク質は、少なくとも1つの多官能組換えタンパク質スキャホールドを含有する工学的に操作された抗原結合ポリペプチドであり得る(例えば、Gebauerら、Current Opin.Chem.Biol.13:245~255頁,2009年;および米国特許出願公開第2012/0164066号(参照によってその全体として本明細書に組み入れる)に記載される組換え抗原結合タンパク質を参照のこと)。抗体である組換え治療用タンパク質の非限定例として:パニツムマブ、オマリズマブ、アバゴボマブ(abagovomab)、アブシキシマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブ(alacizumab)、アラシズマブ、アレムツズマブ、アリロクマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ(anatumomab)、アンルキンズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アチヌマブ(atinumab)、トシリズマブ、バシリキシマブ(basilizimab)、ベクツモマブ(bectumomab)、ベリムマブ、ベバシズマブ、ベシレソマブ、ベズロトクスマブ、ビシロマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブ、セツキシマブ、シクスツムマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、デンスマブ(densumab)、エクリズマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エファングマブ、エプラツズマブ、エルツマクソマブ、エタラシズマブ、フィギツムマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、イゴボマブ、イムガツズマブ、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブ、ラベツズマブ、レブリキズマブ、モキセツモマブ、ナタリズマブ、オビヌツズマブ、オレゴボマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラロキヌマブ、ツコツズマブ、トラ
スツズマブ、ベルツズマブ、ザルツムマブ、およびザツキシマブが挙げられる。本明細書に記載の方法によって生成することができる組換え治療用抗体のさらなる例は、当技術分野で公知である。本発明の方法によって生成することができる組換え治療用タンパク質のさらなる非限定例として:アルグルコシダーゼアルファ、ラロニダーゼ、アバタセプト、ガルスルファーゼ、ルトロピンアルファ、抗血友病因子、アガルシダーゼベータ、インターフェロンベータ-1a、ダーベポエチンアルファ、テネクテプラーゼ、エタネルセプト、凝固第IX因子、卵胞刺激ホルモン、インターフェロンベータ-1a、イミグルセラーゼ、ドルナーゼアルファ、エポエチンアルファ、インスリンもしくはインスリン類似体、メカセルミン、因子VIII、因子VIIa、抗トロンビンIII、プロテインC、ヒトアルブミン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、インターロイキン-11、ラロニダーゼ、イデュルスルファーゼ、ガルスルファーゼ、α-1-プロテイナーゼ阻害剤、ラクターゼ、アデノシンデアミナーゼ、組織プラスミノーゲン活性剤、チロトロピンアルファ(例えば、Thyrogen(登録商標))およびアルテプラーゼが挙げられる。本発明の方法によって生成することができる組換えタンパク質のさらなる例として、酸α-グルコシダーゼ、アルグルコシダーゼアルファ(例えば、Myozyme(登録商標)およびLumizyme(登録商標))、α-L-イズロニダーゼ(例えば、Aldurazyme(登録商標))、イズロン酸スルファターゼ、ヘパランN-スルファターゼ、ガラクトース-6-スルファターゼ、酸β-ガラクトシダーゼ、β-グルクロニダーゼ、N-アセチルグルコサミン-1-ホスホトランスフェラーゼ、α-N-アセチルガラクトサミニダーゼ、酸リパーゼ、リソソーム酸セラミダーゼ、酸スフィンゴミエリナーゼ、β-グルコシダーゼ(例えば、Cerezyme(登録商標)およびCeredase(登録商標))、ガラクトシルセラミダーゼ、α-ガラクトシダーゼ-A(例えば、Fabrazyme(登録商標))、酸β-ガラクトシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ノイラミニダーゼ、ヘキソサミニダーゼA、およびヘキソサミニダーゼBが挙げられる。
分泌された、可溶性組換え治療用タンパク質は、液体培養培地を、細胞(例えば、哺乳動物細胞)から除去またはそうでなければ物理的に分離することによって、液体培養培地(例えば、第1のおよび/または第2の液体培養培地)から回収することができる。液体培養培地を細胞(例えば、哺乳動物細胞)から除去するための様々な異なる方法は、当技術分野で公知であり、例えば、遠心分離、濾過、ピペッティング、および/または吸引を含む。次いで、分泌された組換え治療用タンパク質は、種々のタイプのクロマトグラフィー(例えば、アフィニティークロマトグラフィー、分子篩クロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、またはアニオン交換クロマトグラフィー)および/または濾過(例えば、分子量カットオフ濾過)を含む様々な生化学技術を使用して、液体培養培地から、回収およびさらに精製することができる。
マルチカラムクロマトグラフィーシステム
本明細書に記載のプロセスは、2つまたはそれ以上の(例えば、2、3、4、5、または6個の)マルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS)の使用を含む。MCCSは、2つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラム、2つまたはそれ以上のクロマトグラフィー用膜、または少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムと少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜との組合せを含むことができる。非限定例では、MCCS(例えば、本発明のプロセスのいずれかに記載の第1および/または第2のMCCS)は、4つのクロマトグラフィー用カラム、3つのクロマトグラフィー用カラムと1つのクロマトグラフィー用膜、3つのクロマトグラフィー用カラム、2つのクロマトグラフィー用カラム、2つのクロマトグラフィー用膜、および2つのクロマトグラフィー用カラムと1つのクロマトグラフィー用膜を含むことができる。クロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜の組合せのさらなる例は、限定することなく、当業者によってMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)における使用が想起される。MCC
Sに存在する個々のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜は、同一であり得(例えば、同一の形状、体積、樹脂、捕捉メカニズム、およびユニット操作を有する)、または異なり得る(例えば、異なる形状、体積、樹脂、捕捉メカニズム、およびユニット操作のうちの1つまたはそれ以上を有する)。MCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)に存在する個々のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜は、同一のユニット操作(例えば、捕捉する、精製する、またはポリッシュするユニット操作)または異なるユニット操作(例えば、捕捉する、精製する、ポリッシュする、ウイルスを不活性化する、組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/またはpHを調整する、ならびに濾過するなどからなる群から選択される異なるユニット操作)を実施することができる。
MCCSに存在し得る(例えば、第1および/または第2のMCCSに存在し得る)1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムは、例えば、少なくとも約2mL、少なくとも約5mL、少なくとも約10mL、少なくとも約15mL、少なくとも約20mL、少なくとも約25mL、少なくとも約30mL、少なくとも約35mL、少なくとも約40mL、少なくとも約45mL、少なくとも約50mL、少なくとも約55mL、少なくとも約60mL、少なくとも約65mL、少なくとも約70mL、少なくとも約75mL、少なくとも約80mL、少なくとも約85mL、少なくとも約90mL、少なくとも約95mL、少なくとも約100mL、少なくとも約110mL、少なくとも約120mL、少なくとも約130mL、少なくとも約140mL、少なくとも約150mL、少なくとも約160mL、少なくとも約170mL、少なくとも約180mL、少なくとも約190mL、少なくとも約200mL、少なくとも約250mL、少なくとも約300mL、少なくとも約350mL、少なくとも約400mL、少なくとも約450mL、少なくとも約500mL、少なくとも約550mL、少なくとも約600mL、少なくとも約650mL、少なくとも約700mL、少なくとも約750mL、少なくとも約800mL、少なくとも約850mL、少なくとも約900mL、少なくとも約950mL、少なくとも約1L、少なくとも約10L、少なくとも約20L、少なくとも約30L、少なくとも約40L、少なくとも約50L、少なくとも約60L、少なくとも約70L、少なくとも約80L、少なくとも約90L、少なくとも約100L、少なくとも約110L、少なくとも約120L、少なくとも約130L、少なくとも約140L、少なくとも約150L、少なくとも約160L、少なくとも約170L、少なくとも約180L、少なくとも約190L、または少なくとも約200Lの樹脂体積を有することができる。
MCCSに存在し得る(例えば、第1および/または第2のMCCSに存在し得る)1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムは、約2mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、約10mL、もしくは約5mLの間;約5mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、もしくは約10mLの間;約10mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL
、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、もしくは約15mLの間;約15mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、もしくは約20mLの間;約20mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、もしくは約25mLの間;約25mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、もしくは約30mLの間;約30mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、約40mL、もしくは約35mLの間;約35mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、約45mL、もしくは約40mLの間;約40mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、約50mL、もしくは約45mLの間;約45mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、約60mL、もしくは約50mLの間;約50mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、約70mL、もしくは約60mLの間;約60mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、約80mL、もしくは約70mLの間;約70mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、約90mL、もしくは約80mLの間;約80mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、
約400mL、約300mL、約200mL、約100mL、もしくは約90mLの間;約90mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、約200mL、もしくは約100mLの間;約100mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、約300mL、もしくは約200mLの間;約200mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、約400mL、もしくは約300mLの間;約300mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、約500mL、もしくは約400mL;約400mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、約600mL、もしくは約500mLの間;約500mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約700mL、もしくは約600mLの間;約600mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、もしくは約700mLの間;約700mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、もしくは約800mLの間;約800mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、もしくは約900mLの間;約900mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、もしくは約1Lの間;約1Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、もしくは約5Lの間;約5Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、もしくは約10Lの間;10Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、もしくは約20Lの間;20Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、もしくは約40Lの間;約40Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、もしくは約60Lの間;約60Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、もしくは約80Lの間;約80Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、もしくは約100Lの間;約100Lから約200L、約180L、約160L、約140L、もしくは約120Lの間;約120Lから約200L、約180L、約160L、もしくは約140Lの間;約140Lから約200L、約180L、もしくは約160Lの間;約160Lから約200Lもしくは約180Lの間;または約180Lから約200Lの樹脂体積を有することができる。
本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて使用されるMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)における1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムは、実質的に同一の樹脂体積を有することができるかまたは異なる樹脂体積を有することができる。MCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)における1つまたはそ
れ以上のクロマトグラフィーカラムについて使用される流速は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、約5mL/分、約2mL/分、もしくは約1mL/分の間;約1mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、約5mL/分、もしくは約2mL/分の間;約2mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、もしくは約5mL/分の間;約5mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、もしくは約10mL/分の間;約10mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、もしくは約15mL/分の間;約15mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、約25mL/分、もしくは約20mL/分の間;約20mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、約30mL/分、もしくは約25mL/分の間;約25mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/
分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、約40mL/分、もしくは約30mL/分の間;
約30mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、約50mL/分、もしくは約40mL/分の間;約40mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、約60mL/分、もしくは約50mL/分の間;約50mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、約70mL/分、もしくは約60mL/分の間;約60mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、約80mL/分、もしくは約70mL/分の間;約70mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約90mL/分、もしくは約80mL/分の間;約80mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、もしくは約90mL/分の間;約90mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、もしくは約100mL/分の間;約100mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、もしくは約150mL/分の間;約150mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/
分、約250mL/分、もしくは約200mL/分の間;約200mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、もしくは約250mL/分の間;約250mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、もしくは約300mL/分の間;約300mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、もしくは約350mL/分の間;約350mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、約450mL/分、もしくは約400mL/分の間;約400mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、約500mL/分、もしくは約450mL/分の間;約450mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、約600mL/分、もしくは約500mL/分の間;約500mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、約700mL/分、もしくは約600mL/分の間;約600mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、約800mL/分、もしくは約700mL/分の間;約700mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約900mL/分、もしくは約800mL/分の間;約800mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約900mL/分の間;約900mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分の間;約1L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分の間;約5L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、もしくは約10L/分;約10L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、もしくは約20L/分の間;約20L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、もしくは約40L/分の間;約40L/分から約100L/分、約80L/分、もしくは約60L/分の間;約60L/分から約100L/分もしくは約80L/分の間;または約80L/分から約100L/分であり得る。
MCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)における1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムは、実質的に同一の形状を有することができるかまたは実質的に異なる形状を有することができる。例えば、MCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)における1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムは、実質的に円柱の形状を有することができるかまたは実質的に同じ楕円柱の形状を有することができる。
MCCSに存在することができる(例えば、第1および/または第2のMCCSに存在することができる)1つまたはそれ以上のクロマトグラフィー用膜は、例えば、約1mL
から約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、約10mL、もしくは約5mLの間(両端を含む);約2mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、約10mL、もしくは約5mLの間(両端を含む);約5mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、もしくは約15mLの間(両端を含む);約15mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、もしくは約20mL
の間(両端を含む);
約20mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、もしくは約25mLの間(両端を含む);約25mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、もしくは約30mLの間(両端を含む);約30mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、もしくは約35mLの間(両端を含む);約35mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、もしくは約40mLの間(両端を含む);約40mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、もしくは約45mLの間(両端を含む);約45mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.
5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、もしくは約50mLの間(両端を含む);約50mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、もしくは約55mLの間(両端を含む);
約55mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、もしくは約60mLの間(両端を含む);約60mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、もしくは約65mLの間(両端を含む);約65mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、もしくは約70mLの間(両端を含む);約70mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、もしくは約75mLの間(両端を含む);約75mLから約10L、約9.5
L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、もしくは約80mLの間(両端を含む);約80mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、約90mL、もしくは約85mLの間(両端を含む);約85mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約95mL、もしくは約90mLの間(両端を含む);約90mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、もしくは約95mLの間(両端を含む);
約95mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、もしくは約125mLの間(両端を含む);約125mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL
、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、もしくは約150mLの間(両端を含む);約150mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、約200mL、もしくは約175mLの間(両端を含む);約175mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、約225mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、約250mL、もしくは約225mLの間(両端を含む);約225mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、約275mL、もしくは約250mLの間(両端を含む);約250mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、約300mL、もしくは約275mLの間(両端を含む);約275mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、約325mL、もしくは約300mLの間(両端を含む);約300mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、約350mL、もしくは約325mLの間(両端を含む);
約325mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約
3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、約375mL、もしくは約350mLの間(両端を含む);約350mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、約400mL、もしくは約375mLの間(両端を含む);約375mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、約425mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、約450mL、もしくは約425mLの間(両端を含む);約425mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約475mL、もしくは約450mLの間(両端を含む);約450mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、もしくは約475mLの間(両端を含む);約475mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、もしくは約500mLの間(両端を含む);約500mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、もしくは約550mLの間(両端を含む);約550mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、もしくは約650mLの間(両端を含む);約650mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900m
L、約850mL、約800mL、約750mL、もしくは約700mLの間(両端を含む);約700mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、もしくは約750mLの間(両端を含む);約750mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、もしくは約800mLの間(両端を含む);約800mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、約900mL、もしくは約850mLの間(両端を含む);約850mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、約950mL、もしくは約900mLの間(両端を含む);約900mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、約1L、もしくは約950mLの間(両端を含む);約950mLから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、約1.5L、もしくは約1Lの間(両端を含む);
約1Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、約2L、もしくは約1.5Lの間(両端を含む);約1.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、約2.5L、もしくは約2Lの間(両端を含む);約2Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、約3L、もしくは約2.5Lの間(両端を含む);約2.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、約3.5L、もしくは約3Lの間(両端を含む);約3.0Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、約4L、もしくは約3.5Lの間(両端を含む);約3.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、約4.5L、もしくは約4Lの間(両端を含む);約4Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、約5L、もしくは約4.5Lの間(両端を含む);約4.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、約5.5L、もしくは約5Lの間(両端を含む);約5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、約6L、もしくは約5.5Lの間(両端を含む);約5.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、約6.5L、もしくは約6Lの間(両端を含む);約6Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、約7L、もしくは約6.5Lの間(両端を含む);約6.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、約7.5L、もしくは約7Lの間(両端を含む);約7Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、約8L、もしくは約7.5Lの間(両端を含む);約7.5Lから約10L、約9.5L、約9L、約8.5L、もしくは約8Lの間(両端を含む);約8Lおよび約10L、約9.5L、約9L、もしくは約8.5Lの間(両端を含む);
約8.5Lから約10L、約9.5L、もしくは約9Lの間(両端を含む);約9Lから約10Lもしくは約9.5Lの間(両端を含む);または約9.5Lから約10Lの間の床体積を有することができる。
1つまたはそれ以上(例えば、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24個の)異なるタイプの緩衝液を、本明細書に記載のプロセスのいずれかにおける2つまたはそれ以上のMCCSの使用の間に用いることができる。当技術分野で公知であるように、本明細書に記載のプロセスにおいて使用される2つまたはそれより多いMCCSにおいて使用される1つまたはそれ以上のタイプの緩衝液は、2つまたはそれ以上のMCCS(例えば、第1および第2のMCCS)のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜に存在する樹脂、組換え治療用タンパク質、および2つまたはそれより多いMCCSの特定のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー膜によって実施されるユニット操作(例えば、本明細書に記載の例示的ユニット操作のいずれか)に応じて変わることになる。本明細書に記載のプロセスのいずれかにおける2つまたはそれ以上のMCCSの使用の間に用いられる緩衝液の体積およびタイプはまた、当業者によって決定される(例えば、以下により詳細に議論される)。例えば、本明細書に記載のプロセスのいずれかにおける2つまたはそれ以上のMCCSの使用の間に用いられる緩衝液の体積およびタイプは、組換えタンパク質薬物生成物において、以下のものの1つまたはそれ以上を最適化するために選択される:組換え治療用タンパク質の全体的収率、組換え治療用タンパク質の活性、組換え治療用タンパク質の純度のレベル、および組換え治療用タンパク質を含有する流体由来の生物学的夾雑物の除去(例えば、活性ウイルス、マイコバクテリア、酵母、細菌、または哺乳動物細胞の非存在)。
第1および/または第2のMCCSは、周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCCS)であり得る。PCCSは、例えば、2つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムからの組換え治療用タンパク質の連続的溶出を可能とするために切り替えられる2つまたはそれより多いクロマトグラフィーカラム(例えば、3つのカラムまたは4つのカラム)を含むことができる。PCCSは、2つもしくはそれ以上のクロマトグラフィーカラム、2つもしくはそれ以上のクロマトグラフィー用膜、または少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムおよび少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜を含むことができる。カラム操作は、一般的に、負荷、洗浄、溶出、および再生工程からなる。PCCSでは、複数のカラムを使用して、循環様式で、離散的かつ連続的に同一の工程を実行する。カラムは、順番に操作されるため、1つのカラムからのフロースルーおよび洗浄液は別のカラムによって捕捉される。PCCSのこの特有の特徴により、バッチ方式のクロマトグラフィーの間で典型的であるように、動的結合能の代わりに、その静的結合能に近い樹脂の負荷が可能となる。3つのカラムを含有するPCCSにおいて使用される3カラムスイッチング技法の例を図3に示す。サイクルは、カラムスイッチング技法において使用される3つのカラムのそれぞれからの溶出プールを生じる3つの完全なカラム操作として定義される。このサイクルのすべての工程が完了すると、サイクルは再スタートする。連続的循環と溶出の結果として、PCCSに入る流体は連続的に処理され、組換え治療用タンパク質を含有する溶出液が連続的に生成される。
図3に示す例示的サイクルのように、PCCSサイクルにおいて1つの工程から別の工程へ進行するために、カラムスイッチング戦略が用いられる。カラムスイッチング方法は、図3に示す例示的PCCSシステムにおける3つのカラムのカラムごとに2つの自動切換え操作を用い、1番目の操作は初期生成物のブレークスルーに関連し、2番目の操作はカラム飽和と同時に起こる。カラムスイッチング操作が行われるべき時間の決定は、PCCSに存在する各クロマトグラフィーカラムからの溶出液における組換え治療用タンパク質濃度のモニタリング(例えば、UVモニタリングによって実施されるモニタリング)に
よって決定される。例えば、カラムスイッチングは、フィードバック制御に関する生成物濃度のインライン測定の可能な任意のPATツールによって決定することができる。PATツールは、フィードバック制御に関する生成物濃度のリアルタイムインライン測定を可能とする。
図4は、供給入口とカラム出口の間のUV吸光度差(ΔUV)に基づいて、例示的PCCSにおけるカラムスイッチングの例を示す。例えば、カラム負荷の間(工程1;図3)、PCC制御システムは、吸光度が安定する際の不純物ベースラインレベルを決定する。生成物のブレークスルーとして(工程2;図3)、不純物ベースラインを超える出口UVシグナルの増加が存在する。ΔUVが所定の閾値(例えば、生成物の3%のブレークスルー)に達する時点で、カラム1からのフロースルーが、廃物に代わってカラム2に向けられる(t1;図4)。カラム1が生成物でほぼ飽和され、ΔUVが所定の値に達した場合(t2;図4)、供給は、カラム2に切り替わる。PCCSにおいて使用されるカラムスイッチング戦略によって、供給された生成物の濃度およびキャパシティーにかかわらず、カラムの均一な負荷が可能となる。各カラムからの溶出液で検出される組換えタンパク質のレベルに基づく同様のカラムのスイッチを設計することができる。当技術分野で公知であるように、カラムのスイッチを、第1または第2のMCCSにおける1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜を通過する時間または流体(例えば、緩衝液)量に基づいて設計することもできる。
PCCSでは、PCCSに存在する各クロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜における組換え治療用タンパク質の滞留時間(RT)は、第1のカラム/膜からのブレークスルーをPCCSにおける別のカラム/膜において捕捉することができるため、カラム/膜のサイズを増加させることなく減少させることができる。連続処理システムは、:V=DRTの方程式を使用して、カラム/膜の体積(V)とRTを変化させることによって、任意の灌流速度(D)で液体培養培地を処理するように設計することができる。
本明細書に記載したプロセスで使用される少なくとも2つのMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)によって実施することができる1つまたはそれ以上のユニット操作は、例えば、組換え治療用タンパク質を捕捉すること、組換え治療用タンパク質を含有する流体に存在するウイルスを不活性化すること、組換え治療用タンパク質を精製すること、組換え治療用タンパク質をポリッシュすること、組換え治療用タンパク質を含有する流体を収容すること(例えば、本明細書に記載の例示的ブレークタンクのいずれかを使用して)、組換え治療用タンパク質を含有する流体から微粒子材料および/または細胞を濾過または除去すること、および組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/またはpHを調整することを含む。
捕捉することのユニット操作は、例えば、捕捉メカニズムを利用する、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー樹脂を含む1つもしくはそれ以上のMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して実施することができる。捕捉メカニズムの非限定例として、プロテインA結合捕捉メカニズム、抗体-または抗体断片-結合捕捉メカニズム、基質結合捕捉メカニズム、アプタマー結合捕捉メカニズム、タグ結合捕捉メカニズム(例えば、ポリHisタグベースの捕捉メカニズム)、およびコファクター結合捕捉メカニズムが挙げられる。捕捉することは、カチオン交換もしくはアニオン交換クロマトグラフィー、または分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂を使用して実施することもできる。組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用することができる非限定的樹脂は、本明細書に記載されている。組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用することができる樹脂のさらなる例は、当技術分野で公知である。
組換え治療用タンパク質を含有する流体に存在するウイルスを不活性化するユニット操作は、約3.0から5.0の間(例えば、約3.5から約4.5の間、約3.5から約4.25の間、約3.5から約4.0の間、約3.5から約3.8の間、または約3.75)のpHで、少なくとも30分の期間(例えば、約30分から1.5時間の間の期間、約30分から1.25時間の間の期間、約0.75時間から1.25時間の間の期間、または約1時間の期間)組換え治療用タンパク質を含有する流体をインキュベートすることができる、例えば、クロマトグラフィーカラム、クロマトグラフィー膜、または収容タンクを含む1つまたはそれ以上のMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して実施することができる。
組換えタンパク質を精製するユニット操作は、例えば、捕捉システムを利用する、例えば、樹脂を含有するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を含む1つまたはそれ以上のMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して実施することができる。捕捉メカニズムの非限定例として、プロテインA結合捕捉メカニズム、抗体-または抗体断片結合捕捉メカニズム、基質結合捕捉メカニズム、アプタマー結合捕捉メカニズム、タグ結合捕捉メカニズム(例えば、ポリHisタグベースの捕捉メカニズム)、およびコファクター結合捕捉メカニズムが挙げられる。精製することは、カチオン交換もしくはアニオン交換クロマトグラフィー、または分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂を使用して実施することもできる。組換え治療用タンパク質を精製するために使用することができる非限定的樹脂は、本明細書に記載されている。組換え治療用タンパク質を精製するために使用することができる樹脂のさらなる例は、当技術分野で公知である。
組換えタンパク質をポリッシュするユニット操作は、例えば、カチオン交換、アニオン交換、または分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる、例えば、樹脂を含有する、クロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を含む1つまたはそれ以上のMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して実施することができる。組換え治療用タンパク質をポリッシュするために使用することができる非限定的樹脂は、本明細書に記載されている。組換え治療用タンパク質をポリッシュするために使用することができる樹脂のさらなる例は、当技術分野で公知である。
組み合わされる第1および第2のMCCSにおいて、少なくとも1つのリザーバ(例えば、ブレークタンク)または最大で1、2、3、4、もしくは5個のリザーバ(例えば、ブレークタンク)を含むMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して、組換え治療用タンパク質を含有する流体を収容するユニット操作を実施することができる。例えば、このユニット操作を達成するために使用することができるリザーバ(例えば、ブレークタンク)は、例えば、約1mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約5mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約
5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約20mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、もしくは約20mLの間(両端を含む);約20mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、もしくは約40mLの間(両端を含む);約40mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、もしくは約60mLの間(両端を含む);約60mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、もしくは約80mLの間(両端を含む);約80mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260
mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、もしくは約120mLの間(両端を含む);
約120mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、約160mL、もしくは約140mLの間(両端を含む);約140mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、約180mL、もしくは約160mLの間(両端を含む);約160mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、約200mL、もしくは約180mLの間(両端を含む);約180mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、約220mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、約240mL、もしくは約220mLの間(両端を含む);約220mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、約260mL、もしくは約240mLの間(両端を含む);約240mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、約280mL、もしくは約260mLの間(両端を含む);約260mLから約
10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、約300mL、もしくは約280mLの間(両端を含む);約280mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、約350mL、もしくは約300mLの間(両端を含む);約300mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、約400mL、もしくは約350mLの間(両端を含む);
約350mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、約500mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、約600mL、もしくは約500mLの間(両端を含む);約500mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、約800mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、約900mL、もしくは約800mLの間(両端を含む);約800mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、約1L、もしくは約900mLの間(両端を含む);約900mLから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約5L、もしくは約1Lの間(両端を含む);約1Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,
000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、もしくは約5Lの間(両端を含む);約5Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、もしくは約10Lの間(両端を含む);約10Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、約40L、もしくは約20Lの間(両端を含む);約20Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、約60L、もしくは約40Lの間(両端を含む);約40Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約80L、もしくは約60Lの間(両端を含む);約60Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、もしくは約80Lの間(両端を含む);約80Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、もしくは約100Lの間(両端を含む);
約100Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、もしくは約200Lの間(両端を含む);約200Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、もしくは約300Lの間(両端を含む);約300Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、もしくは約400Lの間(両端を含む);約400Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、もしくは約500Lの間(両端を含む);約500Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、約700L、もしくは約600Lの間(両端を含む);約600Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、約800L、もしくは約700Lの間(両端を含む);約700Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,0
00L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、約900L、もしくは約800Lの間(両端を含む);約800Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、約1,000L、もしくは約900Lの間(両端を含む);約900Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、約2,000L、もしくは約1,000Lの間(両端を含む);約1,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、約3,000L、もしくは約2,000Lの間(両端を含む);約2,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、約4,000L、もしくは約3,000Lの間(両端を含む);約3,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、約5,000L、もしくは約4,000Lの間(両端を含む);約4,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、約6,000L、もしくは約5,000Lの間(両端を含む);約5,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、約7,000L、もしくは約6,000Lの間(両端を含む);約6,000Lから約10,000L、約9,000L、約8,000L、もしくは約7,000Lの間(両端を含む);約7,000Lから約10,000L、約9,000L、もしくは約8,000Lの間(両端を含む);約8,000Lから約10,000Lもしくは約9,000Lの間(両端を含む);または約9,000Lから約10,000Lの間(両端を含む)の体積をそれぞれ有することができる。
本明細書に記載のプロセスにおいて使用されるリザーバ(例えば、ブレークタンク)は、例えば、約1mLから約10,000Lの間(両端を含む)(または本明細書に記載のこの体積範囲の下位範囲のいずれか)である容量を有することができる。流体が第1のMCCSに入る前に、流体を収容するために使用される(本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて)リザーバのいずれか(例えば、ブレークタンク)は、例えば、1mLから第1のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約100%の間(両端を含む)、約1mLから第1のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約90%、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%、または約5%の間(両端を含む)である容量を有することができる。流体が第2のMCCSに入る前(かつ流体が第1のMCCSを離れた後)に、流体を収容するために使用されるリザーバのいずれか(例えば、ブレークタンク)は、例えば、1mLから第2のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約100%の間(両端を含む)、例えば、約1mLから第2のMCCSの第1のカラムの負荷体積の約90%、約80%、約70%、約60%、約50%、約40%、約30%、約20%、約10%、または約5%の間(両端を含む)である容量を有することができる。
リザーバ(例えば、ブレークタンク)は、少なくとも10分間(例えば、少なくとも20分間、少なくとも30分間、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも4時間、少なくとも6時間、少なくとも8時間、少なくとも10時間、少なくとも12時間、少なくとも14時間、少なくとも16時間、少なくとも18時間、少なくとも20時間、少なくとも22時間、少なくとも24時間、少なくとも26時間、少なくとも28時間、少なくとも30時間、少なくとも32時間、少なくとも34時間、少なくとも36時間、少なくとも38時間、少なくとも40時間、少なくとも42時間、少なくとも44時間、少なくとも46時間、または少なくとも48時間)、組換え治療用タンパク質を含有する流体をそれぞれ収容することができる。他の例では、リザーバ(例えば、ブレークタンク)は、全期間、例えば、約5分から約48時間未満の間(両端を含む)、例えば、約5分から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36
時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、もしくは約5時間の間(両端を含む);約5時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、もしくは約6時間の間(両端を含む);約6時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、もしくは約7時間の間(両端を含む);約7時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、もしくは約9時間の間(両端を含む);約9時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、もしくは約10時間の間(両端を含む);約10時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時
間、もしくは約14時間の間(両端を含む);約14時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、約20時間、もしくは約18時間の間(両端を含む);約18時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、約22時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、約24時間、もしくは約22時間の間(両端を含む);約22時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、約26時間、もしくは約24時間の間(両端を含む);約24時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、約28時間、もしくは約26時間の間(両端を含む);約26時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、約30時間、もしくは約28時間の間(両端を含む);約28時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、約32時間、もしくは約30時間の間(両端を含む);約30時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、約34時間、もしくは約32時間の間(両端を含む);約32時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、約36時間、もしくは約34時間の間(両端を含む);約34時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、約38時間、もしくは約36時間の間(両端を含む);約36時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、約40時間、もしくは約38時間の間(両端を含む);約38時間から約48時間、約46時間、約44時間、約42時間、もしくは約40時間の間(両端を含む);約40時間から約48時間、約46時間、約44時間、もしくは約42時間の間(両端を含む);約42時間から約48時間、約46時間、もしくは約44時間の間(両端を含む);約44時間から約48時間もしくは約46時間の間(両端を含む);約46時間から約48時間の間(両端を含む)、治療用タンパク質を収容するだけである。
リザーバ(例えば、ブレークタンク)は、組換え治療用タンパク質を含有する流体の収容と冷却(例えば、25℃未満、15℃未満、または10℃未満の温度で)の両方のために使用することができる。リザーバは、円柱、楕円柱、または略矩形の密封され、不透性のバッグを含む任意の形状を有することができる。
組換え治療用タンパク質を含有する流体を濾過するユニット操作は、例えば、フィルター、または分子篩樹脂を含有するクロマトグラフィーカラムもしくはクロマトグラフィー用膜を含むMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して、実施することができる。当技術分野で公知であるように、任意の沈殿した材料および/または細胞(例えば、沈殿した、折り畳まれていないタンパク質;沈殿した、望ましくない宿主細胞タンパク質;沈殿した脂質;細菌;酵母細胞;真菌細胞;マイコバクテリア;および/または哺乳動物細胞)を除去することができる多種多様なサブミクロンフィルター(例えば、1μm未満、0.5μm未満、0.3μm未満、約0.2μm、0.2μm未満、100nm未満、80nm未満、60nm未満、40nm未満、20nm未満、または10nm未満の孔径を有するフィルター)が、当技術分野で利用可能である。約0.2μmまたは0.2μm未満の孔径を有するフィルターは、組換え治療用タンパク質を含有する流
体から細菌を効率的に除去することが知られている。当技術分野で公知であるように、分子篩樹脂を含有するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を、MCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)で使用して、組換え治療用タンパク質を含有する流体を濾過するユニット操作を実施することができる。
組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/またはpHを調整するユニット操作は、組換え治療用タンパク質を含有する流体に新たな緩衝溶液を添加する緩衝液調整リザーバ(例えば、インライン緩衝液調整リザーバ)を含み、利用するMCCS(例えば、第1および/または第2のMCCS)を使用して実施することができる(例えば、単一のMCCS内のカラム間、または最後から2番目のMCCS(例えば、第1のMCCS)の最後のカラムの後であって、組換え治療用タンパク質を含有する流体が、次のMCCS(例えば、第2のMCCS)の第1のカラムに供給される前)。当技術分野で認識することができるように、インライン緩衝液調整リザーバは、任意のサイズであってもよく(例えば、100mLより多い)、任意の緩衝溶液(例えば、組換え治療用タンパク質を含有する流体と比較して増加したかもしくは低下したpH、組換え治療用タンパク質を含有する流体と比較して増加もしくは低下したイオン(例えば、塩)濃度、および/またはMCCS(例えば、第1のまたは第2のMCCS)の少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムもしくは少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜に存在する樹脂に結合するために、組換え治療用タンパク質と競合する薬剤の増加もしくは低下した濃度のうちの1つまたはそれ以上を有する緩衝溶液)を含有することができる。他の例では、流体のイオン濃度および/またはpHを調整するユニット操作は、サイズ排除クロマトグラフィーおよび向流透析を使用して実施することができる(例えば、Kurnikら、Biotechnol.Bioeng.45(2):149~157頁、1995年;およびKlutzら、J.Biotechnol.213:120~130頁、2015年を参照のこと)。
第1および/または第2のMCCSは、2回またはそれ以上のユニット操作を実施することができる。例えば、第1および/または第2のMCCSは、少なくとも以下のユニット操作をそれぞれ実施することができる:組換え治療用タンパク質を捕捉し、組換え治療用タンパク質を含有する流体中に存在するウイルスを不活性化すること;組換え治療用タンパク質を捕捉し、組換え治療用タンパク質を含有する流体中に存在するウイルスを不活性化し、組換え治療用タンパク質を含有する液体のイオン濃度および/またはpHを調整すること;組換え治療用タンパク質を精製し、組換え治療用タンパク質をポリッシュすること;組換え治療用タンパク質を精製し、組換え治療用タンパク質をポリッシュし、組換え治療用タンパク質を含有する流体を濾過するかまたは組換え治療用タンパク質を含有する流体から沈殿物および/もしくは特定の物体を除去すること;ならびに組換え治療用タンパク質を精製し、組換え治療用タンパク質をポリッシュし、組換え治療用タンパク質を含有する流体を濾過するかまたは組換え治療用タンパク質を含有する流体から沈殿物および/もしくは特定の物体を除去し、組換え治療用タンパク質を含有する液体のイオン濃度および/またはpHを調整すること。
組換え治療用タンパク質の捕捉
本発明のプロセスは、第1のMCCSを使用して組換え治療用タンパク質を捕捉する工程を含む。当技術分野で認識されるように、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地は、様々な異なる手段を使用して、第1のMCCSに連続的に供給され得る。例えば、液体培養培地は、第1のMCCSに能動的にポンプで供給することができ、液体培養培地は、重力を使用して、第1のMCCSに供給することができる。液体培養培地は、第1のMCCSに供給される前に、リザーバ(例えば、収容タンク)内に保存することができる、または液体培養培地は、細胞(例えば、組換え治療用タンパク質を培養培地に分泌する哺乳動物細胞)の培養物を含有するバイオリアクターから第1のMCCSに能動的にポ
ンプで供給することができる。
液体培養培地は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、約5mL/分、もしくは約2mL/分の間(両端を含む);約0.5mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、約5mL/分、もしくは約2mL/分の間(両端を含む);約1mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、約10mL/分、約5mL/分、もしくは約2mL/分の間(両端を含む);約2mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/
分、約15mL/分、約10mL/分、もしくは約5mL/分の間(両端を含む);約5mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、約15mL/分、もしくは約10mL/分の間(両端を含む);
10mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、約20mL/分、もしくは約15mL/分の間(両端を含む);約15mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、約25mL/分、もしくは約20mL/分の間(両端を含む);約20mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、約30mL/分、もしくは約25mL/分の間(両端を含む);約25mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分
、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、約35mL/分、もしくは約30mL/分の間(両端を含む);約30mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、約40mL/分、もしくは約35mL/分の間(両端を含む);約35mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、約45mL/分、もしくは約40mL/分の間(両端を含む);約40mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、約50mL/分、もしくは約45mL/分の間(両端を含む);
約45mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70
mL/分、約65mL/分、約60mL/分、約55mL/分、もしくは約50mL/分の間(両端を含む);約50mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、約60mL/分、もしくは約55mL/分の間(両端を含む);約55mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、約65mL/分、もしくは約60mL/分の間(両端を含む);約60mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、約70mL/分、もしくは約65mL/分の間(両端を含む);約65mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、約75mL/分、もしくは約70mL/分の間(両端を含む);約70mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、約80mL/分、もしくは約75mL/分の間(両端を含む);
約75mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、約85mL/分、もしくは約80mL/分の間(両端を含む);約80mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、約90mL/分、もしくは約85mL/分の間(両端を含む);約85mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、約95mL/分、もしくは約90mL/分の間(両端を含む);約90mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、約100mL/分、もしくは約95mL/分の間(両端を含む);約95mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、約150mL/分、もしくは約100mL/分の間(両端を含む);約100mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL
/分、約300mL/分、約250mL/分、約200mL/分、もしくは約150mL/分の間(両端を含む);約150mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、約250mL/分、もしくは約200mL/分の間(両端を含む);
約200mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、約300mL/分、もしくは約250mL/分の間(両端を含む);約250mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、約350mL/分、もしくは約300mL/分の間(両端を含む);約300mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、約400mL/分、もしくは約350mL/分(両端を含む);約350mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、約450mL/分、もしくは約400mL/分の間(両端を含む);約400mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、約500mL/分、もしくは約450mL/分(両端を含む);約450mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、
約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、約550mL/分、もしくは約500mL/分の間(両端を含む);約500mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、約600mL/分、もしくは約550mL/分の間(両端を含む);約550mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、約650mL/分、もしくは約600mL/分の間(両端を含む);約600mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、約700mL/分、もしくは約650mL/分の間(両端を含む);約650mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、約750mL/分、もしくは約700mL/分の間(両端を含む);約700mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、約800mL/分、もしくは約750mL/分の間(両端を含む);約750mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、約850mL/分、もしくは約800mL/分の間(両端を含む);
約800mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、約900mL/分、もしくは約850mL/分の間(両端を含む);約850mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約950mL/分、もしくは約900mL/分の間(両端を含む);約900mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、
約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約950mL/分の間(両端を含む);約950mL/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分の間(両端を含む);約1L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、約10L/分、もしくは約5L/分の間(両端を含む);約5L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、約15L/分、もしくは約10L/分の間(両端を含む);約10L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、約20L/分、もしくは約15L/分の間(両端を含む);約15L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、約25L/分、もしくは約20L/分の間(両端を含む);約20L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、約30L/分、もしくは約25L/分の間(両端を含む);約25L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、約35L/分、もしくは約30L/分の間(両端を含む);約30L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、約40L/分、もしくは約35L/分の間(両端を含む);約35L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、約45L/分、もしくは約40L/分の間(両端を含む);約40L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、約50L/分、もしくは約45L/分の間(両端を含む);約45L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、約55L/分、もしくは約50L/分の間(両端を含む);約50L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、約60L/分、もしくは約55L/分の間(両端を含む);約55L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、約65L/分、もしくは約60L/分の間(両端を含む);約60L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、約70L/分、もしくは約65L/分の間(両端を含む);約65L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、約75L/分、もしくは約70L/分の間(両端を含む);約70L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、約80L/分、もしくは約75L/分の間(両端を含む);約75L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、約85L/分、もしくは約80L/分の間(両端を含む);約80L/分から約100L/分、約95L/分、約90L/分、もしくは約85L/分の
間(両端を含む);約85L/分から約100L/分、約95L/分、もしくは約90L/分の間(両端を含む);約90L/分から約100L/分もしくは約95L/分の間(両端を含む);または約95L/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速で、第1のMCCSに供給(負荷)することができる。組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地は、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の例示的供給源のいずれかに由来し得る。
一部の実施例は、液体培養培地を、第1のMCCSに供給する前に、濾過する任意選択の工程をさらに含む。本明細書に記載の液体培養培地もしくは組換え治療用タンパク質を含有する流体を濾過する例示的手段のいずれか、または当技術分野で公知の任意の濾過手段を使用して、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を、第1のMCCSに供給する前に、濾過することができる。
本明細書に記載の方法では、組換え治療用タンパク質を液体培養培地から捕捉する工程は、第1のMCCSを使用して実施される。当技術分野で認識されるように、組換え治療用タンパク質の捕捉を達成するために、第1のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたは少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜は、捕捉メカニズム(例えば、本明細書に記載の例示的捕捉メカニズムのいずれか)を利用する樹脂を含有しなければならないか、またはカチオンイオン交換、アニオンイオン交換、もしくは分子篩クロマトグラフィーを実施することができる樹脂を含有する。例えば、組換え治療用タンパク質が、抗体または抗体断片である場合、捕捉システムは、プロテインA結合捕捉メカニズムまたは抗原結合捕捉メカニズム(捕捉抗原は、組換え治療用抗体または抗体断片によって特異的に認識される)であり得る。組換え治療用タンパク質が酵素である場合、捕捉メカニズムは、酵素に特異的に結合する抗体もしくは抗体断片を使用して、組換え治療用酵素、組換え治療用酵素を捕捉するための酵素の基質、組換え治療用酵素を捕捉するための酵素のコファクターを捕捉することができ、または組換え治療用酵素がタグを含有する場合、組換え治療用酵素中に存在するタグに特異的に結合するタンパク質、金属キレート、もしくは抗体(もしくは抗体断片)を使用して、組換え治療用酵素、組換え治療用酵素を捕捉するための酵素の基質、組換え治療用酵素を捕捉するための酵素のコファクターを捕捉することができる。組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用することができる非限定的樹脂は、本明細書に記載されており、組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用することができるさらなる樹脂は、当技術分野で公知である。プロテインA結合捕捉メカニズムを利用する樹脂の1つの非限定例は、MabSelect SuRe樹脂(GE Healthcare、Piscataway、NJ)である。
組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用することができる第1のMCCSに存在するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜の例示的な非限定的サイズおよび形状は、本明細書に記載されている。第1のMCCSに供給(負荷)される)液体培養培地は、例えば、約0.05mg/mLから約100mg/mLの間の組換え治療用タンパク質(例えば、約0.1mg/mLから約90mg/mLの間、約0.1mg/mLから約80mg/mLの間、約0.1mg/mLから約70mg/mLの間、約0.1mg/mLから約60mg/mLの間、約0.1mg/mLから約50mg/mLの間、約0.1mg/mLから約40mg/mLの間、約0.1mg/mLから約30mg/mLの間、約0.1mg/mLから約20mg/mLの間、0.5mg/mLから約20mg/mLの間、約0.1mg/mLから約15mg/mLの間、約0.5mg/mLから約15mg/mLの間、約0.1mg/mLから約10mg/mLの間、または約0.5mg/mLから約10mg/mLの間の組換え治療用タンパク質)を含有することができる。組換え治療用タンパク質が、捕捉するユニット操作を実施するために使用される樹脂に結合するのに必要とされる平均時間は、例えば、約1秒から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55
分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、約2分、約1分、約30秒、約20秒、約10秒、もしくは約5秒の間(両端を含む);約5秒から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、約2分、約1分、約30秒、約20秒、もしくは約10秒の間(両端を含む);約10秒から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、約2分、約1分、約30秒、もしくは約20秒の間(両端を含む);約20秒から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、約2分、約1分、もしくは約30秒の間(両端を含む);約30秒から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、約2分、もしくは約1分の間(両端を含む);約1分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、約3分、もしくは約2分の間(両端を含む);約2分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、約4分、もしくは約3分の間(両端を含む);約3分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、約5分、もしくは約4分の間(両端を含む);約4分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、約6分、もしくは約5分の間(両端を含む);約5分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、約8分、もしくは約6分の間(両端を含む);約6分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、約10分、もしくは約8分の間(両端を含む);約8分から約60分、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、約12分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、約14分、もしくは約12分の間(両端を含む);約12分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、約16分、もしくは約14分
の間(両端を含む);約14分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、約18分、もしくは約16分の間(両端を含む);約16分から約60分、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、約20分、もしくは約18分の間(両端を含む);約18分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、約25分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、約30分、もしくは約25分の間(両端を含む);約25分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、約35分、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、約40分、もしくは約35分の間(両端を含む);約35分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、約45分、もしくは約40分の間(両端を含む);約40分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、約50分、もしくは約45分の間(両端を含む);約45分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、約55分、もしくは約50分の間(両端を含む);約50分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、もしくは約55分間の間(両端を含む);約55分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1時間、もしくは約60分(両端を含む);約60分から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、約2時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約3時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、もしくは約8時間の間(両端を含む)約8時間から約24時間、約20時間、約16時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約24時間、約20時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約24時間もしくは約20時間の間(両端を含む);または約20時間から約24時間の間(両端を含む)であり得る。
当技術分野で認識されるように、第1のMCCSに存在するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を使用して組換え治療用タンパク質を捕捉するために、第1のMCCSに存在するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー膜を負荷、洗浄、溶出、および再生する逐次的クロマトグラフィー工程が実施されなければならない。本明細書に記載の各逐次的クロマトグラフィー工程に対して割り当てられる任意の例示的流速、緩衝液の体積、および/または時間長は、これらの異なる逐次的クロマトグラフィー工程のうちの1つまたはそれ以上(例えば、組換え治療用タンパク質を捕捉するために使用される第1のMCCSに存在するクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー膜を負荷、洗浄、溶出、および再生する逐次的クロマトグラフィー工程のうちの1つまたはそれ以上)で使用することができる。第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)において、クロマトグラフィー用カラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜で捕捉するために使用することができる各逐次的クロマトグラフィー工程に対して割り当てられる非限定的流速、緩衝液の体積、および/または時間長を以下に提供する。さらに、
第1のMCCSにおいて使用することができる例示的緩衝液溶出緩衝液を以下に記載する。
捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂(例えば、本明細書に記載の捕捉に対して使用することができる例示的樹脂のいずれか)を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜を含有する第1のMCCSに、上述の負荷流速(流量)のいずれかを使用して、組換え治療用タンパク質を含有する液体培養培地を負荷することができる。一部の例では、捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する単一のクロマトグラフィー用カラムまたは単一のクロマトグラフィー用膜は、例えば、約10分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、約60分、約50分、約40分、約30分、約20分、もしくは約15分の間(両端を含む);約15分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、約60分、約50分、約40分、約30分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、約60分、約50分、約40分、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、約60分、約50分、もしくは約40分の間(両端を含む);約40分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、約60分、もしくは約50分の間(両端を含む);約50分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、約70分、もしくは約60分の間(両端を含む);約60分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、約80分、もしくは約70分の間(両端を含む);約70分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、約90分、もしくは約80分の間(両端を含む);約80分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、約100分、もしくは約90分の間(両端を含む);約90分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約110分、もしくは約100分の間(両端を含む);約100分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、もしくは約110分の間(両端を含む);約110分から約48時間、約44時間、約40
時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、約3時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、約6時間、もしくは約5時間の間(両端を含む);約5時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約7時間、もしくは約6時間の間(両端を含む);約6時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、もしくは約7時間の間(両端を含む);約7時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、もしくは約24時間の間(両端を含む);約24時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、もしくは約28時間の間(両端を含む);約28時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、もしくは約32時間の間(両端を含む);約32時間から約48時間、約44時間、約40時間、もしくは約36時間の間(両端を含む);約36時間から約48時間、約44時間、もしくは約40時間の間(両端を含む);約40時間から約48時間もしくは約44時間の間(両端を含む)、または約44時間から約48時間の間(両端を含む)で負荷される。第1のMCCSが、一連の捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも2つのクロマトグラフィー用カラムを含む一部の例では、一連の2つのクロマトグラフィー用カラムを負荷するのに必要な時間は、例えば、約50分から約180分の間(例えば、約60分から約180分の間、約70分から約180分の間、約80分から約180分の間、約90分から約180分の間、約100分から約180分の間、約110分から150分の間、および約125分から約145分の間)である。
捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する第1のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜に組換え治療用タンパク質を負荷した後、少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜を少なくとも1種の洗浄緩衝液で洗浄する。当技術分野で認識されるように、少なくとも1種(例えば、2、3、または4種)の洗浄緩衝液は、組換え治療用タンパク質ではないすべてのタンパク質を、組換え治療用タンパク質の樹脂との相互作用を乱すことなく、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から溶出するものを意味する。
洗浄緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過することができる。使用される洗浄緩衝液の体積(例えば、2種以上の洗浄緩衝液が使用される場合には、使用さ
れる洗浄緩衝液の組み合わせた総体積)は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。
洗浄の総時間は、例えば、約2分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間
、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、約30分、約20分、約10分、もしくは約5分の間(両端を含む);約5分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、約30分、約20分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、約30分、もしくは約20分(両端を含む);約20分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、約40分、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約50分、もしくは約40分の間(両端を含む);約40分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、もしくは約50分の間(両端を含む);約50分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、約1.5時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、約2時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、約2.5時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、約3時間、もしくは約2.5時間の間(両端を含む);約2.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、約3.5時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、約4時間、もしくは約3.5時間の間(両端を含む);約3.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、約4.5時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、もしくは約4.5時間の間(両端を含む);約4.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、もしくは約5時間の間(両端を含む);約5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、もし
くは約6時間の間(両端を含む);約6時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、約8時間、もしくは約7時間の間(両端を含む);約7時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約9時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、もしくは約9時間の間(両端を含む);約9時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、もしくは約10時間の間(両端を含む);約10時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、もしくは約14時間の間(両端を含む);約14時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約24時間、約22時間、約20時間、もしくは約18時間の間(両端を含む);約18時間から約24時間、約22時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約24時間もしくは約22時間の間(両端を含む);または約22時間から約24時間の間(両端を含む)であり得る。
捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する第1のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜を洗浄した後、組換え治療用タンパク質は、溶出緩衝液を捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する第1のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過させることによって、少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜から溶出させる。溶出緩衝液は、捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を、約0.2mL/分から約100L/分(両端を含む)の間の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で通過することができる。精製するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜のそれぞれから組換え治療用タンパク質を溶出するために使用される溶出緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30
XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。
溶出の総時間は、例えば、約2分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約40分、約30分、約20分、約10分、もしくは約5分の間(両端を含む);約5分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約40分、約30分、約20分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約40分、約30分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約40分、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、もしくは約40分の間(両端を含む);約40分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、約1.25時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.5時間、もしくは約1.25時間の間(両端を含む);
約1.25時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、約2.0時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、約2.5時間、もしくは約2.0時間の間(両端を含む);約2.0時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、約5時間、もしくは約2.5時間の間(両端を含む);約2.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約7.5時間、もしくは約5時間の間(両端を含む);約5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、もしくは約7.5時間の間(両端を含む);約7.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、もしくは約10時間の間(両端を含む);約10時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、もしくは約14時間の間(両端を含む);約14時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約24時間、約22時間、約20時間、もしくは約18時間の間(両端を含む);約18時間から約24時間、約22時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約24時間もしくは約22時間の間(両端を含む);または約22時間から約24時間の間(両端を含む)であり得る。これらの方法で使用することができる溶出緩衝液の非限定例は、捕捉メカニズムおよび/または治療用タンパク質に応じて変わることになる。例えば、溶出緩衝液は、異なる濃度の塩(例えば、増加した塩濃度)、異なるpH(例えば、増加または低下した塩濃度)、または捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂に結合するのに組換え治療用タンパク質と競合するであろう分子を含有することができる。本明細書に記載の各例示的捕捉メカニズムに対するこのような溶出緩衝液の例は、当技術分野で周知である。
捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する第1のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜からの組換え治療用タンパク質の溶出の後であって、次の体積の液体培養培地を少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷することができる前に、少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜は、再生緩衝液を使用して平衡化されなければならない。再生緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過することができる。捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を平衡化するために使用される再生緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含
む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。
本明細書に記載のプロセスの一部では、第1のMCCSは、組換え治療用タンパク質を、低pH(例えば、4.6未満、4.4未満、4.2未満、4.0未満、3.8未満、3.6未満、3.4未満、3.2未満、または3.0未満のpH)で、例えば、約1分から3.0時間(例えば、約1時間)、組換え治療用タンパク質を含有する流体を収容し、組換え治療用タンパク質を含有する流体中に存在するウイルスを不活性化するリザーバを含む。ウイルスを不活性化するユニット操作を実施するために使用することができるリザーバの例は、組換え治療用タンパク質を含有する流体が第2のMCCSに供給される前に、例えば、約1分から1.5時間、組換え治療用タンパク質を含有する流体を収容することができる撹拌フラスコ(例えば、500mLの撹拌フラスコ、例えば、プログラムされた撹拌プレートを有する500mLの撹拌フラスコ)である。ウイルスの不活性化のユニッ
ト操作を実施するために使用されるリザーバは、プログラムされた撹拌プレート(例えば、流体を、リザーバ内で、例えば、4時間ごとに混合する(例えば、周期的に混合する)ようプログラムされた撹拌プレート)を有する500mLの撹拌フラスコであり得る。ウイルスの不活性化のユニット操作を実施するために使用することができるリザーバの別の例は、組換え治療用タンパク質を含有する流体が第2のMCCSに供給される前に、例えば、約1分から1.5時間、組換え治療用タンパク質を含有する流体を収容することができるプラスチックバッグ(例えば、500mLのプラスチックバッグ)である。一部の例では、組換え治療用タンパク質を含有する流体は、ウイルス不活性化のユニット操作を実施するために使用されるリザーバに供給される際に、既に、低pH(例えば、4.6未満、4.4未満、4.2未満、4.0未満、3.8未満、3.6未満、3.4未満、3.2未満、または3.0未満のpH)を有することができる。ウイルス不活性化は、チューブ状反応器(例えば、Klutzら、Chemical Engineering Processing:Process Intensification 102:88~101頁、2016年b;Klutzら、Chemical Engineering Research Design 95:22~33頁、2015年に記載される)またはコイルドフローインバーター(例えば、Klutzら、Chemical Engineering Research Design 95:22~33頁、2015年;およびKlutzら、Chemical Engineering Processing:Process Intensification 102:88~101頁、2016年bを参照のこと)を使用して実施することもできる。当業者に認識されるように、様々な他の手段を使用して、ウイルスを不活性化するユニット操作を実施することができる。例えば、組換え治療用タンパク質を含有する流体のUV照射(例えば、UV-C光を使用する)を使用して、ウイルスを不活性化するユニット操作を実施することもできる(例えば、Lorenzら、Biotechnol.Prog.25(2):476~482頁、2009年;Caillet-Fauquetら、J.Virol.Methods 118(2):131~139頁、2004年;Gunnら、米国特許第6,586,172号、2003年;Kaiserら、米国特許第7,695,675号、2002年;Baeら、Kor.J.Microbiol.Biotechnol.4:377~382頁、2009年;Liら、Biologicals 33(2):101~110頁、2005年;およびWangら、Vox Sang.86(4):230~238頁、2004年を参照のこと)。組換え治療用タンパク質を含有する流体に存在するウイルスの不活性化のユニット操作を実施するために使用することができるリザーバの非限定例は、本明細書に記載されている。
第1のMCCSは、4つのクロマトグラフィーカラムを含有するPCCSであって、4つのクロマトグラフィーカラムのうちの少なくとも3つが、組換え治療用タンパク質を液体培養培地から捕捉するユニット操作を実施する(例えば、捕捉するユニット操作を実施することができる樹脂を含有する少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムのいずれか(例えば、本明細書に記載のもののいずれか)を含む第1のMCCSを使用して)PCCSを含むことができる。これらの例では、PCCの4番目のカラムは、組換え治療用タンパク質を含有する流体中のウイルスを不活性化するユニット操作を実施することができる(例えば、組換え治療用タンパク質を含有する流体のウイルス不活性化を達成するために使用することができる本明細書に記載の例示的カラムのいずれか)。
組換え治療用タンパク質を含有する流体は、第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)から連続的に溶出され、第2のMCCSに連続的に供給される。第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)の溶出液において回収される組換え治療用タンパク質のパーセントは、例えば、少なくとも70%、少なくとも72%、少なくとも74%、少なくとも76%、少なくとも78%、少なくとも80%、少なくとも82%、少なくとも84%、少なくとも86%、少なくとも88%、少なくとも90%、少なくとも92%、
少なくとも94%、少なくとも96%、または少なくとも98%であり得る。第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)からの溶出液は、当技術分野で公知の様々な手段(例えば、チューブ)を使用して第2のMCCS(例えば、第2のPCCシステム)に供給することができる。第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)の溶出液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、第2のMCCS(例えば、第2のPCCシステム)に供給することができる。
本明細書に記載の一部のプロセスは、第2のMCCS(例えば、第2のPCCシステム)に供給される前の第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)からの溶出液のイオン濃度および/またはpHを調整する工程をさらに含むことができる。本明細書に記載されているように、第1のMCCS(例えば、第1のPCCシステム)からの溶出液のイオン濃度および/またはpHは、緩衝液を溶出液に添加することによって(例えば、インライン緩衝液調整リザーバの使用により)調整することができる(第2のMCCSに供給される前に)。緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、第1のMCCSからの溶出液に添加することができる。
本明細書に記載のプロセスは、第1のMCCSからの溶出液を第2のMCCSに供給する前に、第1のMCCSからの溶出液を収容または保存する工程(場合により、冷却する工程も)さらに含むことができる。本明細書に記載されているように、この収容または保存工程は、本明細書に記載のリザーバ(例えば、バックアップタンク)のいずれかを使用して実施することができる。
本明細書に記載のプロセスは、溶出液が第2のMCCSに供給される前に、第1のMCCSからの溶出液を濾過する工程も含むことができる。本明細書に記載の濾過のための例示的フィルターまたは方法のいずれかを使用して、溶出液が第2のMCCSに供給される前に、第1のMCCSからの溶出液を濾過することができる。
組換え治療用タンパク質のポリッシュおよび精製
本明細書に記載のプロセスは、第2のMCCSを使用して組換え治療用タンパク質を精製およびポリッシュする工程であって、MCC2からの溶出液が治療用タンパク質原薬である、前記工程を含む。第2のMCCSは、組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つの(例えば、2、3、または4つの)クロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つの(例えば、2、3、または4つの)クロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を含むことができる。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜は、捕捉メカニズム(例えば、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の捕捉メカニズムのいずれか)を利用する樹脂、またはアニオン交換、カチオン交換、もしくは分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂を含有することができる。組換え治療用タンパク質をポリッシュする操作のユニットを実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜は、アニオン交換、カチオン交換、または分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂(例えば、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のアニオン交換、カチオン交換、または分子篩クロマトグラフィーを実施するための例示的樹脂のいずれか)を含有することができる。
組換え治療用タンパク質を精製する操作のユニットを実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムもしくはクロマトグラフィー用膜のサイズ、形状、および体積、ならびに/または組換え膜をポリッシュする操作のユニットを実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィー膜のサイズおよび形状は、本明細書に記載のクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜の例示的サイズ、形状、および体積の任意の組合せであり得る。当業者によって認識されるように、組換え治療用タンパク質を精製またはポリッシュする工程は、例えば、組換え治療用タンパク質を精製またはポリッシュする操作のユニットを実施するために使用される少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を負荷する、洗浄する、溶出する、および平衡化する工程を含むことができる。典型的には、精製のユニット操作を実施するために使用されるクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から生じる溶出緩衝液は、組換え治療用タンパク質を含有する。典型的には、ポリッシュのユニット操作を実施するために使用されるクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から生じる負荷および/または洗浄緩衝液は、組換え治療用タンパク質を含有する。
例えば、組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜のサイズは、例えば、約2.0mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、約10mL、もしくは約5.0mLの間(両端を含む);約5.0mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、約15mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、約20mL、もしくは約15mLの間(両端を含む);約15m
Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、約25mL、もしくは約20mLの間(両端を含む);約20mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、約30mL、もしくは約25mLの間(両端を含む);約25mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、約35mL、もしくは約30mLの間(両端を含む);
約30mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、約40mL、もしくは約35mLの間(両端を含む);約35mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、約45mL、もしくは約40mLの間(両端を含む);約40mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90
L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、約50mL、もしくは約45mLの間(両端を含む);約45mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、約55mL、もしくは約50mLの間(両端を含む);約50mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、約60mL、もしくは約55mLの間(両端を含む);約55mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、約65mL、もしくは約60mLの間(両端を含む);約60mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、約70mL、もしくは約65mLの間(両端を含む);約65mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、
約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、約75mL、もしくは約70mLの間(両端を含む);
約70mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、約80mL、もしくは約75mLの間(両端を含む);約75mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、約85mL、もしくは約80mLの間(両端を含む);約80mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、約90mL、もしくは約85mLの間(両端を含む);約85mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約95mL、もしくは約90mLの間(両端を含む);約90mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、もしくは約95mLの間(両端を含む);約95mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから200L、約180L、約160L、約140L
、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、もしくは約120mLの間(両端を含む);約120mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、約160mL、もしくは約140mLの間(両端を含む);
約140mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、約180mL、もしくは約160mLの間(両端を含む);約160mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、約200mL、もしくは約180mLの間(両端を含む);約180mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、約250mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、約300mL、もしくは約250mLの間(両端を含む);約250mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、約350mL、もしくは約300mLの間(両端を含む);約300mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約3
0L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、約400mL、もしくは約350mLの間(両端を含む);約350mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、約450mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、約500mL、もしくは約450mLの間(両端を含む);約450mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、約550mL、もしくは約500mLの間(両端を含む);約500mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、約600mL、もしくは約550mLの間(両端を含む);約550mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、約650mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、約700mL、もしくは約650mLの間;約650mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、約750mL、もしくは約700mLの間(両端を含む);約700mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、約800mL、もしくは約750mLの間(両端を含む);約750mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、約850mL、もし
くは約800mLの間(両端を含む);約800mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、約900mL、もしくは約850mLの間(両端を含む);約850mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、約950mL、もしくは約900mLの間(両端を含む);
約900mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、約1L、もしくは約950mLの間(両端を含む);約950mLから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、約5L、もしくは約1Lの間(両端を含む);約1Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、約10L、もしくは約5Lの間(両端を含む);約5Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、約15L、もしくは約10Lの間(両端を含む);約10Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、約20L、もしくは約15Lの間(両端を含む);約15Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、約25L、もしくは約20Lの間(両端を含む);約20Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、約30L、もしくは約25Lの間(両端を含む);約25Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、約35L、もしくは約30Lの間(両端を含む);約30Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、約40L、もしくは約35Lの間(両端を含む);約35Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、約45L、もしくは約40Lの間(両端を含む);約40Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、約50L、もしくは約45Lの間(両端を含む);約45Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、約55L、もしくは約50Lの間(両端を含む);約50Lから200L、約180L、約160L、
約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、約60L、もしくは約55Lの間(両端を含む);約55Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、約65L、もしくは約60Lの間(両端を含む);約60Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、約70L、もしくは約65Lの間(両端を含む);約65Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、約75L、もしくは約70Lの間(両端を含む);約70Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、約80L、もしくは約75Lの間(両端を含む);約75Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、約85L、もしくは約80Lの間(両端を含む);約80Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、約90L、もしくは約85Lの間(両端を含む);約85Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約95L、もしくは約90Lの間(両端を含む);約90Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、もしくは約95Lの間(両端を含む);約95Lから200L、約180L、約160L、約140L、約120L、もしくは約100Lの間(両端を含む);約100Lから200L、約180L、約160L、約140L、もしくは約120Lの間(両端を含む);約120Lから200L、約180L、約160L、もしくは約140Lの間(両端を含む);約140Lから200L、約180L、もしくは約160Lの間(両端を含む);約160Lから約200Lもしくは約180Lの間(両端を含む);または約180Lから約200Lの間(両端を含む)の体積を有することができる。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたは少なくとも1つのクロマトグラフィー膜に負荷される場合の組換え治療用タンパク質を含有する流体の流速は、例えば、約0.1mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、約2mL/分、約1mL/分、もしくは約0.5mL/分の間(両端を含む);約0.5mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、約2mL/分、もしくは約1mL/分の間(両端を含む);約1mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、もしくは約2mL/分の間(両端を含む);約2mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、もしくは約3mL/分の間(両端を含む);約3mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約1
2.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、もしくは約4mL/分の間(両端を含む);約4mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、もしくは約6mL/分の間(両端を含む);約6mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、もしくは約8.0mL/分の間(両端を含む);約8mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、もしくは約10.0mL/分の間(両端を含む);約10mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約25mL/分、もしくは約12.5mL/分の間(両端を含む);約12.5mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、もしくは約25mL/分の間(両端を含む);約25mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、もしくは約100mL/分の間(両端を含む);約100mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、もしくは約200mL/分の間(両端を含む);約200mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、もしくは約400mL/分の間(両端を含む);約400mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、もしくは約600mL/分の間(両端を含む);約600mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約800mL/分の間(両端を含む);約800mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分の間(両端を含む);約1L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分の間(両端を含む);約5L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、もしくは約10L/分の間(両端を含む);約10L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、もしくは約20L/分の間(両端を含む);約20L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、もしくは約40L/分の間(両端を含む);約40L/分から約100L/分、約80L/分、もしくは約60L/分の間(両端を含む);約60L/分から100L/分もしくは約80L/分の間(両端を含む);または約80L/分から約100L/分の間(両端を含む)であり得る。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷される流体中の組換え治療用タンパク質の濃度は、例えば、約0.05mg/mLから約100mg/mLの間の組換えタンパク質(例えば、約0.1mg/mLから約90mg/mLの間、約0.1mg/mLから約80mg/mLの間、約0.1mg/mLから約70
mg/mLの間、約0.1mg/mLから約60mg/mLの間、約0.1mg/mLから約50mg/mLの間、約0.1mg/mLから約40mg/mLの間、約0.1mg/mLから約30mg/mLの間、約0.1mg/mLから約20mg/mLの間、0.5mg/mLから約20mg/mLの間、約0.1mg/mLから約15mg/mLの間、約0.5mg/mLから約15mg/mLの間、約0.1mg/mLから約10mg/mLの間、または約0.5mg/mLから約10mg/mLの間の組換え治療用タンパク質)であり得る。精製するユニット操作を実施するために使用される少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー膜における樹脂は、アニオン交換またはカチオン交換クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂であり得る。精製するユニット操作を実施するために使用される少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜における樹脂は、カチオン交換樹脂(例えば、Capto-S樹脂、GE Healthcare Life Sciences、Piscataway、NJ)であり得る。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜への組換え治療用タンパク質の負荷の後、少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜は、少なくとも1種の洗浄緩衝液で洗浄される。当技術分野で認識されるように、少なくとも1種(例えば、2、3、または4種)の洗浄緩衝液は、組換え治療用タンパク質ではないすべてのタンパク質を、組換え治療用タンパク質の樹脂との相互作用を乱すことなく、またはそうでなければ組換え治療用タンパク質を溶出しながら、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から溶出するものを意味する。
洗浄緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過することができる。使用される洗浄緩衝液の体積(例えば、1種より多い洗浄緩衝液が使用される場合には、使用される洗浄緩衝液の組み合わせた総体積)は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30XCV、約28XCV、約26X
CV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。洗浄の総時間は、例えば、約2分から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、約20分、約10分、もしくは約5分の間(両端を含む);約5分から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、約20分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、約1.25時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、約1.5時間、もしくは約1.25時間の間(両端を含む);約1.25時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、約2.0時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、約2.5時間、もしくは約2.0時間の間(両端を含む);約2.0時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時
間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約4時間、もしくは約2.5時間の間(両端を含む);約2.5時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、もしくは約24時間の間(両端を含む);約24時間から約48時間、約40時間、約36時間、約32時間、もしくは約28時間の間(両端を含む);約28時間から約48時間、約40時間、約36時間、もしくは約32時間の間(両端を含む);約32時間から約48時間、約40時間、もしくは約36時間の間(両端を含む);約36時間から約48時間もしくは約40時間の間(両端を含む);または約40時間から約48時間の間(両端を含む)であり得る。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜の洗浄後、組換え治療用タンパク質は、溶出緩衝液を、組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過させることによって、少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜から溶出される。溶出緩衝液は、組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速の範囲の下位範囲のいずれか)で通過することができる。組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜のそれぞれから組換え治療用タンパク質を溶出するために使用される溶出緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV
、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。溶出の総時間は、例えば、約2分から約3時間の間(例えば、約2分から約2.5時間の間、約2分から約2.0時間の間、約2分から約1.5時間の間、約2分から約1.5時間の間、約2分から約1.25時間の間、約2分から約1.25時間の間、約2分から約1時間の間、約2分から約40分の間、約10分から約40分の間、約20分から約40分の間、または約30分から1.0時間の間)であり得る。これらの方法で使用することができる溶出緩衝液の非限定例は、樹脂および/または治療用タンパク質に応じて変わることになる。例えば、溶出緩衝液は、異なる濃度の塩(例えば、増加した塩濃度)、異なるpH(例えば、増加または低下した塩濃度)、または樹脂に結合するために組換え治療用タンパク質と競合する分子を含有することができる。本明細書に記載の例示的捕捉メカニズムのそれぞれに対するこのような溶出緩衝液の例は、当技術分野で周知である。
組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜からの組換え治療用タンパク質の溶出後であって、組換え治療用タンパク質を含有する流体の次の体積が少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷される前に、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜は、再生緩衝液を使用して平衡化されなければならない。再生緩衝液は、組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、通過することができる。組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる樹脂を
含有する少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を平衡化するために使用される再生緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、約4XCV、もしくは約3XCVの間(両端を含む);約2XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、約6XCV、約5XCV、もしくは約4XCVの間(両端を含む);約3XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約5XCVの間(両端を含む);約4XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、約7XCV、もしくは約6XCVの間(両端を含む);約5XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、約8XCV、もしくは約7XCVの間(両端を含む);約6XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、約9XCV、もしくは約8XCVの間(両端を含む);約7XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、約10XCV、もしくは約9XCVの間(両端を含む);約8XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、約11XCV、もしくは約10XCVの間(両端を含む);約9CVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、約12XCV、もしくは約11XCVの間(両端を含む);約10XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、約13XCV、もしくは約12XCVの間(両端を含む);約11XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、約14XCV、もしくは約13XCVの間(両端を含む);約12XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、約16XCV、もしくは約14XCVの間(両端を含む);約14XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、約18XCV、もしくは約16XCVの間(両端を含む);約16XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、約20XCV、もしくは約18XCVの間(両端を含む);約18XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、約22XCV、もしくは約20XCVの間(両端を含む);約20XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、約24XCV、もしくは約22XCVの間(両端を含む);約22XCVから約30XCV、約28XCV、約26XCV、もしくは約24XCVの間(両端を含む);約24XCVから約30XCV、約28XCV、もしくは約26XCVの間(両端を含む);約26XCVから約30XCVもしくは約28XCVの間(両端を含む);または約28XCVから約30XCVの間(両端を含む)であり得る。組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜の溶出液
における組換え治療用タンパク質の濃度は、例えば、約0.05mg/mLから約100mg/mLの間の組換え治療用タンパク質(例えば、約0.1mg/mLから約90mg/mLの間、約0.1mg/mLから約80mg/mLの間、約0.1mg/mLから約70mg/mLの間、約0.1mg/mLから約60mg/mLの間、約0.1mg/mLから約50mg/mLの間、約0.1mg/mLから約40mg/mLの間、約2.5mg/mLから約7.5mg/mLの間、約0.1mg/mLから約30mg/mLの間、約0.1mg/mLから約20mg/mLの間、0.5mg/mLから約20mg/mLの間、約0.1mg/mLから約15mg/mLの間、約0.5mg/mLから約15mg/mLの間、約0.1mg/mLから約10mg/mLの間、約0.5mg/mLから約10mg/mLの間、約10mg/mLから約200mg/mLの間、約10mg/mLから約150mg/mLの間、約10mg/mLから約100mg/mLの間、約10mg/mLから約50mg/mLの間、約50mg/mLから約200mg/mLの間、約50mg/mLから約150mg/mLの間、約50mg/mLから約100mg/mLの間、約100mg/mLから約200mg/mLの間、約100mg/mLから約150mg/mLの間、または約150mg/mLから約200mg/mLの間の組換え治療用タンパク質)であり得る。
組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜は、カチオン交換、アニオン交換、または分子篩クロマトグラフィーを実施するために使用することができる樹脂を含有することができる。当技術分野で認識されるように、第2のMCCSにおける組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー膜を使用して組換え治療用タンパク質をポリッシュする工程は、例えば、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を負荷する、追跡する、および再生する工程を含むことができる。例えば、負荷する、追跡する、および再生する工程が、ポリッシュする工程を実施するために使用される場合、組換え治療用タンパク質は、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用される第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー膜における樹脂に結合せず、組換え治療用タンパク質は、負荷するおよび追跡する工程において、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から溶出され、再生する工程が、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜から任意の不純物を除去するために使用された後、組換え治療用タンパク質を含有するさらなる流体を、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷することができる。負荷する、追跡する、および再生する工程のそれぞれにおいて使用される例示的流速および緩衝液の体積を以下に記載する。
組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムもしくはクロマトグラフィー膜のサイズ、形状、および体積、ならびに/または組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜のサイズおよび形状は、本明細書に記載のクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜の例示的サイズ、形状、および体積の任意の組合せであり得る。例えば、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜のサイズは、例えば、約0.5mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160m
L、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約30mL、約20mL、約10mL、約5mL、もしくは約2.5mLの間(両端を含む);約2.5mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約30mL、約20mL、約10mL、もしくは約5mLの間(両端を含む);約5mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約30mL、約20mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、約30mL、もしくは約20mLの間(両端を含む);約20mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、約40mL、もしくは約30mLの間(両端を含む);約30mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、約60mL、もしくは約40mLの間(両端を含む);約40mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、約80mL、もしくは約60mLの間(両端を含む);約60mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、約100mL、もしくは約80mLの間(両端を含む);約80mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、約140mL、約120mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、約160mL、もしくは約140mLの間(両端を含む);約140mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、約180mL、もしくは約160mLの間(両端を含む);約160mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約200mL、もしくは約180mLの間(両端を含む);約180mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10
L、約1L、約800mL、約600mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、約800mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、約1L、もしくは約800mLの間(両端を含む);約800mLから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、約10L、もしくは約1Lの間(両端を含む);約1Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、約20L、もしくは約10Lの間(両端を含む);約10Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、約40L、もしくは約20Lの間(両端を含む);約20Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、約60L、もしくは約40Lの間(両端を含む);
約40Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、約80L、もしくは約60Lの間(両端を含む);約60Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、約100L、もしくは約80Lの間(両端を含む);約80Lから約200L、約180L、約160L、約140L、約120L、もしくは約100Lの間(両端を含む);約100Lから約200L、約180L、約160L、約140L、もしくは約120Lの間(両端を含む);約120Lから約200L、約180L、約160L、もしくは約140Lの間(両端を含む);約140Lから約200L、約180L、もしくは約160Lの間(両端を含む);約160Lから約200Lもしくは約180Lの間(両端を含む);または約180Lから約200Lの間(両端を含む)の体積を有することができる。組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷される場合の組換え治療用タンパク質を含有する流体の流速は、例えば、約0.1mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、約2mL/分、約1mL/分、約0.5mL/分、もしくは約0.2mL/分の間(両端を含む);約0.2mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、約2mL/分、もしくは約1mL/分の間(両端を含む);約1mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、約3mL/分、もしくは約2mL/分の間(両端を含む);約2mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、約6mL/分、約4mL/分、もしくは約3mL/分の間(両端を含む);約3mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL
/分、約8.0mL/分、約6mL/分、もしくは約4mL/分の間(両端を含む);約4mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、約8.0mL/分、もしくは約6mL/分の間(両端を含む);約6mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、約10.0mL/分、もしくは約8.0mL/分の間(両端を含む);約8mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、約12.5mL/分、もしくは約10.0mL/分の間(両端を含む);約10mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、約25mL/分、もしくは約12.5mL/分の間(両端を含む);約12.5mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、約50mL/分、もしくは約25mL/分の間(両端を含む);約25mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、約100mL/分、もしくは約50mL/分の間(両端を含む);約50mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、約200mL/分、もしくは約100mL/分の間(両端を含む);約100mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、約400mL/分、もしくは約200mL/分の間(両端を含む);約200mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、約600mL/分、もしくは約400mL/分の間(両端を含む);約400mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、約800mL/分、もしくは約600mL/分の間(両端を含む);約600mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、約1L/分、もしくは約800mL/分の間(両端を含む);約800mL/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、約5L/分、もしくは約1L/分の間(両端を含む);約1L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、約10L/分、もしくは約5L/分の間(両端を含む);約5L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、約20L/分、もしくは約10L/分の間(両端を含む);約10L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、約40L/分、もしくは約20L/分の間(両端を含む);約20L/分から約100L/分、約80L/分、約60L/分、もしくは約40L/分の間(両端を含む);
約40L/分から約100L/分、約80L/分、もしくは約60L/分の間(両端を含む);約60L/分から約100L/分もしくは約80L/分の間(両端を含む);または約80L/分から約100L/分の間(両端を含む)であり得る。組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷される組換え治療用
タンパク質を含有する流体の総体積は、例えば、約1.0mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約75mL、約50mL、約25mL、約10mL、もしくは約5mLの間(両端を含む);約5mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約75mL、約50mL、約25mL、もしくは約10mLの間(両端を含む);約10mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約75mL、約50mL、もしくは約25mLの間(両端を含む);約25mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、約75mL、もしくは約50mLの間(両端を含む);約50mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、約100mL、もしくは約75mLの間(両端を含む);約75mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、約125mL、もしくは約100mLの間(両端を含む);約100mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、約150mL、もしくは約125mLの間(両端を含む);約125mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、約175mL、もしくは約150mLの間(両端を含む);約150mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、約200mL、もしくは約175mLの間(両端を含む);約175mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、約225mL、もしくは約200mLの間(両端を含む);約200mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、約250mL、もしくは約225mLの間(両端を含む);約225mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、
約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、約400mL、もしくは約250mLの間(両端を含む);約250mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、約600mL、もしくは約400mLの間(両端を含む);約400mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、約800mL、もしくは約600mLの間(両端を含む);約600mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、約1L、もしくは約800mLの間(両端を含む);約800mLから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、約5L、もしくは約1Lの間(両端を含む);約1Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、約10L、もしくは約5Lの間(両端を含む);約5Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、約25L、もしくは約10Lの間(両端を含む);約10Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、約50L、もしくは約25Lの間(両端を含む);約25Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、約100L、もしくは約50Lの間(両端を含む);
約50Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、約200L、もしくは約100Lの間(両端を含む);約100Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、約400L、約300L、もしくは約200Lの間(両端を含む);約200Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、約500L、もしくは約400Lの間(両端を含む);約400Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、約600L、もしくは約500Lの間(両端を含む);約500Lから約1,000L、約900L、約800L、約700L、もしくは約600Lの間(両端を含む);約600Lから約1,000L、約900L、約800L、もしくは約700Lの間(両端を含む);約700Lから約1,000L、約900L、もしくは約800Lの間(両端を含む);約800Lから約1,000Lもしくは約900Lの間(両端を含む);または約900Lから約1,000Lの間(両端を含む)であり得る。ポリッシュする工程を実施するために使用される少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜における樹脂は、アニオン交換またはカチオン交換樹脂であり得る。ポリッシュするユニット操作を実施するために使用される少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜における樹脂は、カチオン交換樹脂(例えば、Sartobind(登録商標)Q樹脂、Sartorius、Goettingen、Germanyであり得る。
組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる第2のMCCSにおける少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜を負荷する工程の後に、追跡する工程が実施される(例えば、追跡緩衝液が、少なくとも1つのクロマトグラフィー膜またはクロマトグラフィー用膜を通過し、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜に実質的に結合しない組換え治療用タンパク質を収集する)。これらの例では、追跡緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、少なくとも1つのクロマトグラフィ
ーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過することができる。使用される追跡緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約100XCVの間(例えば、約1XCVから約90XCVの間、約1XCVから約80XCVの間、約1XCVから約70XCVの間、約1XCVから約60XCVの間、約1Xから約50XCVの間、約1XCVから約40XCVの間、約1XCVから約30XCVの間、約1XCVから約20XCVの間、約1XCVから約15XCVの間、約5XCVから約20XCVの間、約5XCVから約30XCVの間、約1XCVから約14XCVの間、約1XCVから約13XCV、約1XCVから約12XCV、約1XCVから約11XCV、約2XCVから約11XCV、約3XCVから約11XCV、約4XCVから約11XCV、約2.5XCVから約5.0XCV、約5XCVから約11XCV,または約5XCVから約10XCV)であり得る。追跡する工程の総時間は、例えば、約1分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、約20分、約10分、約5分、もしくは約2分の間(両端を含む);約2分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、約20分、約10分、もしくは約5分の間(両端を含む);約5分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、約20分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、約30分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、約1時間、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1.25時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、もしくは約1.25時間の間(両端を含む);約1.25時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、約2時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、約3時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、約4時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、約6時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、約8時間、もしくは約6時間の間(両端を含む);約6時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、約10時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、約12時間、もしくは約10時間の間(両端を含む);約10時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、約14時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、約16時間、もしくは約14時間の間(両端を含む);約14時間から約24時間、約22時間、約20時間、約18時間、も
しくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約24時間、約22時間、約20時間、もしくは約18時間の間(両端を含む);約18時間から約24時間、約22時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約24時間から約22時間の間(両端を含む);または約22時間から約24時間の間(両端を含む)であり得る。負荷する工程および追跡する工程において、カラムから生じる溶出液に存在する治療用組換えタンパク質の組み合わせた濃度は、例えば、約0.1mg/mLから約100mg/mLの間の組換えタンパク質(例えば、約0.1mg/mLから約90mg/mLの間、約0.1mg/mLから約80mg/mLの間、約0.1mg/mLから約70mg/mLの間、約0.1mg/mLから約60mg/mLの間、約0.1mg/mLから約50mg/mLの間、約0.1mg/mLから約40mg/mLの間、約2.5mg/mLから約7.5mg/mLの間、約0.1mg/mLから約30mg/mLの間、約0.1mg/mLから約20mg/mLの間、0.5mg/mLから約20mg/mLの間、約0.1mg/mLから約15mg/mLの間、約0.5mg/mLから約15mg/mLの間、約0.1mg/mLから約10mg/mLの間、約0.5mg/mLから約10mg/mLの間、または約1mg/mLから約5mg/mLの間の組換え治療用タンパク質)であり得る。
追跡する工程の後であって、組換え治療用タンパク質を含有する流体の次の体積を、ポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィー用カラムまたはクロマトグラフィー用膜に負荷することができる前に、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜は、再生緩衝液を使用して再生されなければならない。再生緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を通過することができる。ポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムまたはクロマトグラフィー用膜を再生するために使用される再生緩衝液の体積は、例えば、約1Xカラム容積(CV)から約500XCVの間(例えば、約1XCVから約450XCVの間、約1XCVから約400XCVの間、約1XCVから約350XCVの間、約1XCVから約300XCVの間、約1XCVから約250XCVの間、約1XCVから約200XCVの間、約1XCVから約150XCVの間、約1XCVから約100XCVの間、約1XCVから約90XCVの間、約1XCVから約80XCVの間、約1XCVから約70XCVの間、約1XCVから約60XCVの間、約1Xから約50XCVの間、約1XCVから約40XCVの間、約1XCVから約30XCVの間、約1XCVから約20XCVの間、約1XCVから約15XCVの間、約5XCVから約20XCVの間、約5XCVから約30XCVの間、約1XCVから約14XCVの間、約1XCVから約13XCV、約1XCVから約12XCV、約1XCVから約11XCV、約2XCVから約11XCV、約3XCVから約11XCV、約4XCVから約11XCV、約2.5XCVから約5.0XCV、約5XCVから約11XCV、または約5XCVから約10XCVの間)であり得る。
他の例では、ポリッシュするユニット操作を実施するために使用される1つまたはそれ以上のクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー用膜は、組換え治療用タンパク質を含有する流体に存在する不純物に選択的に結合するかまたはその不純物を保持する樹脂を含有し、1つまたはそれ以上のカラムおよび/または膜を再生する工程の代わりに、1つまたはそれ以上のカラムおよび/または膜は、1つまたはそれ以上のカラムおよび/または膜における樹脂の結合能に到達されるかまたは実質的に到達されたに近い場合に、置き換えられる(例えば、実質的に同様のカラムおよび/または膜と置き換えられる)。
これらの方法の一部の例では、第2のMCCSは、3つのクロマトグラフィーカラムと1つのクロマトグラフィー用膜を含有するPCCSを含み、例えば、ここで、PCCSにおける3つのクロマトグラフィーカラムは、組換え治療タンパク質を精製するユニット操作を実施し(例えば、タンパク質を精製する操作のユニットを実施するために使用することができる少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムを使用して)、PCCSにおけるクロマトグラフィー用膜は、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施する。これらの例では、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができるPCCSにおけるクロマトグラフィー用膜は、組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができる、本明細書に記載の例示的クロマトグラフィー用膜のいずれかであり得る。本明細書に記載のカラムスイッチング方法のいずれかは、この例のPCCSにおける第1の3つのクロマトグラフィーカラムおよびクロマトグラフィー用膜を切り替えることができる時間を決定するために使用することができる。
この例の一部の実施形態は、溶出液が、PCCSにおけるクロマトグラフィー用膜に供給される前に、PCCSにおける3つのクロマトグラフィー用カラムからの溶出液のイオン濃度および/またはpHを調整する工程をさらに含むことができる。本明細書に記載されているように、PCCSにおける3つのクロマトグラフィーカラムからの溶出液のイオン濃度および/またはpHは、緩衝液を、PCCSにおける3つのクロマトグラフィーカラムの溶出液に添加することによって(例えば、インライン緩衝液調整リザーバの使用により)調整することができる(この例のPCCSにおけるクロマトグラフィー用膜に供給される前に)。緩衝液は、例えば、約0.2mL/分から約100L/分の間(両端を含む)の流速(例えば、本明細書に記載のこの流速範囲の下位範囲のいずれか)で、溶出液に添加することができる。
これらの例は、溶出液を、クロマトグラフィー用膜(組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができるクロマトグラフィー用膜)に供給する前に、この例のPCCSにおける3つのクロマトグラフィーカラムからの溶出液を収容または保存する工程をさらに含むことができる。本明細書に記載されているように、この収容または保存工程は、本明細書に記載のリザーバ(例えば、バックアップタンク)のいずれかを使用して実施することができる。
これらの例は、例示的PCCSシステムにおけるクロマトグラフィー用膜からの溶出液(組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができるクロマトグラフィー用膜の溶出液)を濾過する工程も含むことができる。本明細書に記載の濾過のための例示的フィルターまたは方法のいずれかを使用して、この例示的PCCSにおけるクロマトグラフィー用膜からの溶出液(組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作を実施するために使用することができるクロマトグラフィー用膜の溶出液)を濾過することができる。
当業者によって認識されるように、治療用タンパク質原薬は、本明細書に記載の方法のいずれかを使用して、第2のMCCSから周期的に溶出することができる。例えば、本明細書に記載の方法のいずれかは、治療用タンパク質原薬を、例えば、第1および第2のMCCSにおいて使用されるクロマトグラフィーカラムおよび/またはクロマトグラフィー膜によって、例えば、約30秒から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約30分、約20分、約10分、約5分、もしくは約1分の間(両端を含む);約1分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時
間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約30分、約20分、約10分、および約5分の間(両端を含む);約5分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約30分、約20分、もしくは約10分の間(両端を含む);約10分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、約30分、もしくは約20分の間(両端を含む);約20分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、約1時間、もしくは約30分の間(両端を含む);約30分から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、約1.5時間、もしくは約1時間の間(両端を含む);約1時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、約2時間、もしくは約1.5時間の間(両端を含む);約1.5時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、約3時間、もしくは約2時間の間(両端を含む);約2時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、約4時間、もしくは約3時間の間(両端を含む);約3時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、約5時間、もしくは約4時間の間(両端を含む);約4時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、約8時間、もしくは約5時間の間(両端を含む);約5時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、約12時間、もしくは約8時間の間(両端を含む);約8時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、約16時間、もしくは約12時間の間(両端を含む);約12時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、約20時間、もしくは約16時間の間(両端を含む);約16時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、約24時間、もしくは約20時間の間(両端を含む);約20時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、約28時間、もしくは約24時間の間(両端を含む);約24時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、約32時間、もしくは約28時間の間(両端を含む);約28時間から約48時間、約44時間、約40時間、約36時間、もしくは約32時間の間(両端を含む);約32時間から約48時間、約44時間、約40時間、もしくは約36時間の間(両端を含む);約36時間から約48時間、約44時間、もしくは約40時間の間(両端を含む);約40時間から約48時間もしくは約44時間の間(両端を含む);または約44時間から約48時間の間(両端を含む)の期間、溶出することができる。
培養方法
本明細書に記載の方法の一部は、液体培養培地を含有するバイオリアクター(例えば、灌流またはフェドバッチバイオリアクター)中で組換え治療用タンパク質を分泌する細胞(例えば、組換え哺乳動物細胞)を培養する工程であって、細胞(例えば、哺乳動物細胞)を実質的に含まない大量の液体培養培地が、灌流バイオリアクターから連続的または周期的に除去され、第1のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS1)に供給
される、前記工程をさらに含む。バイオリアクターは、例えば、約1Lから約10,000Lの間(例えば、約1Lから約50Lの間、約50Lから約500Lの間、約500Lから約1000Lの間、500Lから約5000Lの間、約500Lから約10,000Lの間、約5000Lから約10,000Lの間、約1Lから約10,000Lの間、約1Lから約8,000Lの間、約1Lから約6,000Lの間、約1Lから約5,000Lの間、約100Lから約5,000Lの間、約10Lから約100Lの間、約10Lから約4,000Lの間、約10Lから約3,000Lの間、約10Lから約2,000L、または約10Lから約1,000Lの間)の体積を有することができる。バイオリアクター中に存在する液体培養培地の量は、例えば、約0.5Lから約5,000Lの間(例えば、約0.5Lから約25Lの間、約25Lから約250Lの間、約250Lから約500Lの間、250Lから約2500Lの間、約250Lから約5,000Lの間、約2500Lから約5,000Lの間、約0.5Lから約5,000Lの間、約0.5Lから約4,000Lの間、約0.5Lから約3,000Lの間、約0.5Lから約2,500Lの間、約50Lから約2,500Lの間、約5Lから約50Lの間、約5Lから約2,000Lの間、約5Lから約1,500Lの間、約5Lから約1,000L、または約5Lから約500Lの間)であり得る。細胞を培養する工程は、例えば、フェドバッチバイオリアクターまたは灌流バイオリアクターを使用して実施することができる。細胞を培養する工程(例えば、哺乳動物細胞を培養する工程)の非限定例および異なる態様は、以下に記載されており、任意の組合せで使用することができる。
細胞
本明細書に記載の方法の一部において培養される細胞は、細菌(例えば、グラム陰性細菌)、酵母(例えば、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、ハンセヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)、クリベロミセス・ラクティス(Kluyveromyces lactis)、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)、ヤロウィア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)、またはアークスラ・アデニニボランス(Arxula adeninivorans))、または哺乳動物細胞であり得る。哺乳動物細胞は、懸濁液または接着細胞中で成長する細胞であり得る。本明細書に記載のプロセスのいずれかで培養することができる哺乳動物細胞の非限定例として:チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞(例えば、CHO DG44細胞またはCHO-K1細胞)、Sp2.0、骨髄腫細胞(例えば、NS/0)、B細胞、ハイブリドーマ細胞、T細胞、ヒト胎児性腎臓(HEK)細胞(例えば、HEK 293EおよびHEK 293F)、アフリカミドリザル腎臓上皮細胞(Vero)細胞、およびメイディン・ダービー・イヌ(Cocker Spaniel)腎臓上皮(MDCK)細胞が挙げられる。接着細胞が培養される一部の例では、培養物は、複数のマイクロキャリア(例えば、1つまたはそれ以上の孔を含有するマイクロキャリア)を含有することもできる。本明細書に記載のプロセスのいずれかで培養することができるさらなる哺乳動物細胞は、当技術分野で公知である。
哺乳動物細胞は、組換え治療用タンパク質をコードする組換え核酸(例えば、哺乳動物細胞のゲノムに安定して組み入れられる核酸)を含有することができる。本明細書に記載の方法を使用して生成することができる組換え治療用タンパク質である、例示的組換え治療用タンパク質をコードする組換え核酸の非限定例は、以下に記載されている。一部の場合には、バイオリアクター(例えば、本明細書に記載のバイオリアクターのいずれか)中で培養される哺乳動物細胞は、より大きな培養物に由来した。
組換え治療用タンパク質をコードする核酸は、分子生物学および分子遺伝学において公知の多種多様な方法を使用して、哺乳動物細胞に導入することができる。非限定例として
、トランスフェクション(例えば、リポフェクション)形質導入(例えば、レンチウイルス、アデノウイルス、またはレトロウイルス感染)、および電気穿孔が挙げられる。一部の場合には、組換え治療用タンパク質をコードする核酸は、哺乳動物細胞の染色体に安定して組み込まれず(一過性トランスフェクション)、一方他のものには、核酸が組み込まれる。あるいはまたはさらに、組換え治療用タンパク質をコードする核酸は、プラスミドおよび/または哺乳動物の人工染色体(例えば、ヒトの人工染色体)中に存在し得る。あるいはまたはさらに、核酸は、ウイルスベクター(例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、またはアデノウイルスベクター)を使用して、細胞に導入することができる。核酸は、プロモーター配列(例えば、β-アクチンプロモーターおよびCMVプロモーターのような強力なプロモーター、または誘導性プロモーター)に作動可能に連結することができる。核酸を含有するベクターは、所望の場合、選択マーカー(例えば、哺乳動物細胞にハイグロマイシン、ピューロマイシン、またはネオマイシン抵抗性を付与する遺伝子)を含有することもできる。
一部の場合には、組換え治療用タンパク質は、分泌されたタンパク質であり、哺乳動物細胞によって細胞外培地(例えば、第1および/または第2の液体培養培地)中に放出される。例えば、可溶性組換え治療用タンパク質をコードする核酸配列は、哺乳動物細胞に存在する酵素によって切断され、次に、細胞外培地(例えば、第1および/または第2の液体培養培地)中に放出される組換え治療用タンパク質のNまたはC末端の分泌シグナルペプチドをコードする配列を含有することができる。
細胞培地
液体培養培地は、当技術分野で公知である。液体培養培地(例えば、第1および/または第2の組織培養培地)には、哺乳動物の血清(例えば、ウシ胎仔血清およびウシ血清)、および/または成長ホルモンもしくは成長因子(例えば、インスリン、トランスフェリン、および上皮成長因子)を補充することができる。あるいはまたはさらに、液体培養培地(例えば、第1および/または第2の液体培養培地)は、既知組成の液体培養培地、動物由来の成分を含まない液体培養培地、血清を含まない液体培養培地、または血清含有液体培養培地であり得る。既知組成の液体培養培地、動物由来の成分を含まない液体培養培地、血清を含まない液体培養培地、および血清含有液体培養培地の非限定例は、市販されている。
液体培養培地は、典型的には、エネルギー源(例えば、グルコースなどの炭水化物)、必須アミノ酸(例えば、20種のアミノ酸とシステインの基本的なセット)、ビタミンおよび/または低濃度で必要とされる他の有機化合物、遊離脂肪酸、および/または微量元素を含有する。液体培養培地(例えば、第1および/または第2の液体培養培地)には、所望の場合、例えば、哺乳動物のホルモンもしくは成長因子(例えば、インスリン、トランスフェリン、もしくは上皮成長因子)、塩および緩衝液(例えば、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩)、ヌクレオシドおよび塩基(例えば、アデノシン、チミジン、およびヒポキサンチン)、タンパク質および組織加水分解物、ならびに/またはこれらの添加剤の任意の組合せを補充することができる。
本明細書に記載の方法のいずれかで細胞(例えば、哺乳動物細胞)を培養するために使用することができる多種多様な異なる液体培養培地は、当技術分野で公知である。本発明のプロセスにおいて有用でもあり得る培地成分として、これらに限定されないが、既知組成(CD)加水分解物、例えば、CDペプトン、CDポリペプチド(2つまたはそれ以上のアミノ酸)、およびCD成長因子が挙げられる。液体組織培養培地および培地成分のさらなる例は、当技術分野で公知である。
当業者は、本明細書に記載の第1の液体培養培地と第2の液体培養培地は、同じタイプ
の培地であってもよく、または異なる培地であってもよいことを認識するであろう。
例示的バイオリアクターのさらなる特徴
本明細書に記載のバイオリアクターのいずれかの内部表面は、少なくとも1つのコーティング(例えば、ゼラチン、コラーゲン、ポリ-L-オルニチン、ポリスチレン、およびラミニンのうちの少なくとも1つのコーティング)を有してもよく、当技術分野で公知であるように、O、CO、およびNを液体培養培地中に注入するための1つまたはそれ以上のポート、ならびに液体培養培地を撹拌するための撹拌メカニズムを有してもよい。バイオリアクターは、制御された加湿雰囲気下で(例えば、20%超、30%超、40%超、50%超、60%超、70%超、75%超、80%超、85%超、90%超、もしくは95%超の湿度、または100%の湿度で)細胞培養物をインキュベートすることができる。バイオリアクターは、大量の液体培養培地をバイオリアクターから除去することができる機械的デバイス、場合により、バイオリアクターからの液体培養培地の移送のプロセスの間、細胞を液体培養培地から除去する機械的デバイス内のフィルター(例えば、ATFシステム)を備えることもできる。
温度
哺乳動物細胞を培養する工程は、約31℃から約40℃の温度で実施することができる。当業者は、温度が、培養する工程の間に特定の時点で、例えば、時間ごとまたは日数ごとの基準で変化し得ることを認識するであろう。例えば、温度は、細胞(例えば、哺乳動物細胞)によるバイオリアクターの最初の播種の約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、14日、15日、16日、17日、18日、19日、もしくは約20日後またはそれ以上の日数後に、変化またはシフト(例えば、増加または低下)し得る。例えば、温度は、上昇方向にシフトし得る(例えば、最大もしくは約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19℃、または最大もしくは約20℃の変化)。例えば、温度は、下降方向にシフトし得る(例えば、最大もしくは約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19℃、または最大もしくは約20℃の変化)。
CO
本明細書に記載の培養する工程は、バイオリアクター内の液体培養培地を、最大または約15%のCO(例えば、最大もしくは約14%のCO、12%のCO、10%のCO、8%のCO、6%のCO、5%のCO、4%のCO、3%のCO、2%のCO、または最大もしくは約1%のCO)を含有する雰囲気に曝露することをさらに含むことができる。
灌流バイオリアクター
本明細書に記載の培養する工程は、灌流バイオリアクターを使用して実施することができる。灌流バイオリアクター内で細胞(例えば、哺乳動物細胞)を培養する工程は、第1の体積の第1の液体培養培地(例えば、任意の濃度の哺乳動物細胞を含有する、例えば、実質的に細胞を含まない第1の体積の第1の液体培養培地)のバイオリアクターからの除去、および第1の液体培養培地に第2の体積の第2の液体培養培地を添加することを含む。除去および添加することは、同時にもしくは逐次的に、またはその2つを組み合わせて実施することができる。さらに、除去および添加することは、(任意の所与の期間にわたって(例えば、24時間の期間にわたって、約1時間から約24時間までの漸増期間にわ
たって、もしくは24時間を超える漸増期間にわたって)バイオリアクターの容積もしくは第1の液体培養培地の体積の、例えば、0.1%から800%の間(例えば、1%から700%の間、1%から600%の間、1%から500%の間、1%から400%の間、1%から350%の間、1%から300%の間、1%から250%の間、1%から100%の間、100%から200%の間、5%から150%の間、10%から50%の間、15%から40%の間、8%から80%の間、および4%から30%の間)の体積を除去して置き換える速度で)連続的に、もしくは周期的に(例えば、3日に1回、1日おき、1日に1回、1日に2回、1日に3回、1日に4回、もしくは1日に5回)、またはこれらの任意の組合せで、実施することができる。周期的に実施する場合、除去または置き換えられる体積(例えば、約24時間の期間内に、約1時間から約24時間の漸増期間内に、または24時間を超える漸増期間内に)は、例えば、バイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の0.1%から800%の間(例えば、1%から700%の間、1%から600%の間、1%から500%の間、1%から400%の間、1%から300%の間、1%から200%の間、1%から100%の間、100%から200%の間、5%から150%の間、10%から50%の間、15%から40%の間、8%から80%の間、および4%から30%の間)であり得る。除去された第1の体積の第1の液体培養培地と添加された第2の体積の第2の液体培養培地は、一部の場合には、培養期間の全体または部分にわたって、それぞれ24時間の期間(あるいは、約1時間から約24時間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)にわたって、およそ同じ期間、収容される。当技術分野で公知であるように、第1の体積の第1の液体培養培地が除去される速度(体積/時間の単位)と第2の体積の第2の液体培養培地が添加される速度(体積/時間の単位)は、変化し得る。第1の体積の第1の液体培養培地が除去される速度(体積/時間の単位)と第2の体積の第2の液体培養培地が添加される速度(体積/時間の単位)は、ほぼ同一であってもよく、または異なってもよい。
あるいは、除去および添加される体積は、培養期間中、それぞれ24時間の期間(あるいは、1時間から約24時間の間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)にわたって、変化(例えば、徐々に増加)し得る。例えば、培養期間にわたって、それぞれ24時間の期間内(あるいは、約1時間から24時間を超える間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)に、除去された第1の液体培養培地の体積と添加される第2の液体培養培地の体積は、培養期間にわたって、バイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の0.5%から約20%の間である体積からバイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の約25%から約150%まで増加(例えば、徐々にまたは乱れた増分により)し得る。
当業者は、第1の液体培養培地と第2の液体培養培地は、同じタイプの培地であり得ることを認識するであろう。他の場合には、第1の液体培養培地と第2の液体培養培地は、異なってもよい。
第1の液体培養培地の第1の体積は、例えば、第1の体積の第1の液体培養培地をバイオリアクターから除去することができる機械的システムによって除去することができる(例えば、バイオリアクターからの細胞を実質的に含まない第1の体積の第1の液体培養培地)。あるいはまたはさらに、第1の体積の第1の液体培養培地は、細胞(例えば、哺乳動物細胞)を除外する分子量カットオフを有する滅菌膜により、第1の体積の第1の液体培養培地の漏出または重力流動によって除去することができる。
第2の体積の第2の液体培養培地は、例えば、灌流ポンプによって、自動化様式で、第1の液体培養培地に添加することができる。
一部の場合には、第1の体積の第1の液体培養培地(例えば、哺乳動物細胞を実質的に
含まない第1の体積の第1の液体培養培地)を除去することおよび第1の液体培養培地に第2の体積の第2の液体培養培地を添加することは、哺乳動物細胞によるバイオリアクターの播種の少なくとも1時間以内(例えば、2時間以内、3時間以内、4時間以内、5時間以内、6時間以内、7時間以内、8時間以内、9時間以内、10時間以内、12時間以内、14時間以内、16時間以内、18時間以内、24時間以内、36時間以内、48時間以内、72時間以内、96時間以内、または96時間後)には起こらない。
フェドバッチバイオリアクター
本明細書に記載の培養する工程は、フェドバッチバイオリアクターを使用して実施することができる。フェドバッチバイオリアクター内で細胞を培養する工程は、培養期間の大半にわたって、第1の液体培養培地への第2の体積の第2の液体培養培地の添加(定期的または連続的添加)を含む。第2の液体培養培地を添加することは、(任意の所与の期間にわたって(例えば、24時間の期間にわたって、約1時間から約24時間までの漸増期間にわたって、もしくは24時間を超える漸増期間にわたって)バイオリアクターの容積もしくは第1の液体培養培地の体積の、例えば、0.1%から300%の間(例えば、1%から250%の間、1%から100%の間、100%から200%の間、5%から150%の間、10%から50%の間、15%から40%の間、8%から80%の間、および4%から30%の間)の体積を添加する速度で)連続的に、もしくは周期的に(例えば、3日に1回、1日おき、1日に1回、1日に2回、1日に3回、1日に4回、もしくは1日に5回)、またはこれらの任意の組合せで、実施することができる。周期的に実施する場合、添加される体積(例えば、約24時間の期間内に、約1時間から約24時間の漸増期間内に、または24時間を超える漸増期間内に)は、例えば、バイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の0.1%から300%の間(例えば、1%から200%の間、1%から100%の間、100%から200%の間、5%から150%の間、10%から50%の間、15%から40%の間、8%から80%の間、および4%から30%の間)であり得る。添加される第2の体積の第2の液体培養培地は、一部の場合には、培養期間の全体または部分にわたって、それぞれ24時間の期間(あるいは、約1時間から約24時間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)にわたって、およそ同じ期間、収容される。当技術分野で公知であるように、第2の体積の第2の液体培養培地が添加される速度(体積/時間の単位)は、培養期間の全体または部分にわたって変化し得る。例えば、添加される第2の液体培養培地の体積は、培養期間中、それぞれ24時間の期間(あるいは、1時間から約24時間の間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)にわたって、変化(例えば、徐々に増加)し得る。例えば、培養期間にわたって、それぞれ24時間の期間内(あるいは、約1時間から24時間を超える間の漸増期間または24時間を超える漸増期間)に、添加される第2の液体培養培地の体積は、培養期間にわたって、バイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の0.5%から約20%の間である体積からバイオリアクターの容積または第1の液体培養培地の体積の約25%から約150%まで増加(例えば、徐々にまたは乱れた増分により)し得る。第2の体積の第2の液体培養培地が添加される速度(体積/時間の単位)は、培養期間の全体または部分にわたって、ほぼ同一であり得る。
当業者は、第1の液体培養培地と第2の液体培養培地は、同じタイプの培地であり得ることを認識するであろう。他の場合には、第1の液体培養培地と第2の液体培養培地は、異なってもよい。第2の液体培養培地の体積は、例えば、灌流ポンプによって、自動化様式で、第1の液体培養培地に添加することができる。
一部の場合には、第1の液体培養培地に第2の体積の第2の液体培養培地を添加することは、哺乳動物細胞によるバイオリアクターの播種の少なくとも1時間以内(例えば、2時間以内、3時間以内、4時間以内、5時間以内、6時間以内、7時間以内、8時間以内、9時間以内、10時間以内、12時間以内、14時間以内、16時間以内、18時間以
内、24時間以内、36時間以内、48時間以内、72時間以内、96時間以内、または96時間後)には起こらない。フェドバッチ培養物中の細胞培養培地は、典型的には、培養期間の終わりに採取され、本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて使用されるが、しかし、フェドバッチ培養物中の細胞培養培地は、培養期間中の1回またはそれ以上の時点で採取され、本明細書に記載のプロセスのいずれかにおいて使用される場合もある。
当業者は、種々の培養パラメータのいずれか(例えば、容器、体積、培養物の体積を置き換える速度または頻度、撹拌頻度、温度、培地、およびCO濃度)を、これらの方法を実施するために、任意の組合せで使用することができることを認識するであろう。さらに、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の哺乳動物細胞のいずれかを使用して、組換えタンパク質を産生することができる。
ユニット操作のさらなる例
組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法の一部の例は、1つまたはそれ以上のさらなるユニット操作(例えば、組換え治療用タンパク質を捕捉すること、組換え治療用タンパク質を精製すること、組換え治療用タンパク質をポリッシュすること、ウイルスの不活性化、ウイルス濾過、組換え治療用タンパク質を含有する流体のイオン濃度および/またはpHを調整すること、組換え治療用タンパク質を含有する流体の濾過、沈殿および凝結、水性二相抽出、凍結乾燥、および結晶化のうちの1つまたはそれ以上)を実施することをさらに含むことができる。治療用タンパク質原薬を製造するための統合された連続的プロセスの一部の例は、1つまたはそれ以上のさらなるユニット操作、例えば、沈殿および凝結、水性二相抽出、凍結乾燥、および結晶化のうちの1つまたはそれ以上をさらに含むことができる。
沈殿および凝結
一部の例では、本明細書に記載のプロセスおよび方法は、沈殿および/または凝結のユニット操作を実施することをさらに含む。沈殿を実施するための方法は、例えば、McNerneyら、MAbs、第2巻、Taylor & Francis、413~427頁、2015年におけるPDADMAC Flocculation of Chinese Hamster Ovary Cells:Enabling a Centrifuge-Less Harvest Process for Monoclonal
Antibodies、Roushら、Biotechnol.Prog.24(3):488~495頁、2008年;Liuら、MAbs、第5巻、Taylor & Francis、480~499頁、2010年におけるRecovery and Purification Process Development for Monoclonal Antibody Production;Tscheliessnigら、J.Biotechnol.188:17~28頁、2014年;Sommerら、Process Biochem.49(11):2001~2009頁、2014年;Brodskyら、Biotechnol.Bioeng.109(10):2589~2598頁、2012年;Lydersenら、Ann.NY Acad.Sci.745(1):222~231頁、1994年;およびItoら、J.Chromatogr.B878(2):154~164頁、2010年に記載されている。沈殿方法は、溶液のpHおよび/もしくは導電率(塩溶または塩析)のような因子を変更することによって、または沈殿剤、例えば、エタノール、硫酸アンモニウム、ポリエチレングリコール(PEG)、カプリル酸、および二価のイオンの添加により、達成することができる。凝結を実施するための方法は、例えば、Riskeら、J.Biotechnol.128(4):813~823頁、2007年;Kangら、Biotechnol.Bioeng.110(11):2928~2937頁、2013年;Singhら、Biotechnol.Bioeng.113(4):698~716頁、2015年;Gagnonら、J.Chromatogr.A1221:57~70頁、2012年;Buchache
rら、Biotechnol.J.1(2):148~163頁、2006年;Wattら、Vox Sang.18(1):42~61頁、1970年;Bellら、Downstream Processing、Springer、1~72頁、1983年におけるThe formation of protein precipitates and their centrifugal recovery;Changら、Biotechnol.Bioeng.31(8):841~846頁、1988年;Itoら、J.Chromatogr.B878(2):154~164頁、2010年;Hammerschmidtら、Biotechnol.J.10(8):1196~1205頁、2015年;Hammerschmidtら、Process Biochem.51(2):325~332頁、2016年;Hammerschmidtら、Biotechnol.J.9(6):766~775頁、2014年;およびWarikooら、Biotechnol.J.10(8):1101~1102頁、2015年に記載されている。凝結は、凝結剤、例えば、分散した微粒子のより大きなサイズのクラスターへの接着を引き起こし、平均粒径分布の増加をもたらす多価電解質に依拠する。次いで、凝結は、濾過、沈降、または遠心分離によって回収することができる。
連続的水性二相抽出
一部の例では、本明細書に記載のプロセスおよび方法は、例えば、Azevedoら、Sep.Purif.Technol. 65(1):14~21頁、2009年;Gomesら、Sep.Purif.Technol.65(1):22~30頁、2009年;Kumarら、Biotechnol.Bioeng.75(5):570~580頁、2001年;Mashayekhiら、Biotechnol.Bioeng.102(6):1613~1623頁、2009年;Rosaら、J.Chromatogr.A1217(16):2296~2305頁、2010年;Haraguchiら、Fluid Phase Equilibria 215(1):1~15頁、2004年;Hartら、Nat.Biotechnol.12(11):1113~1117頁、1994年;およびAzevedoら、Trends Biotechnol.27(4):240~247頁、2009bに記載される、水性二相抽出のユニット操作を実施することをさらに含む。
水性二相抽出は、組換え治療用タンパク質区分が1つの相に、一方、不純物区分が他の相になるような2つの非混和性水性相の形成に依拠する。有機溶媒混合物は、タンパク質が有機相において変性し得るため、適切ではない。したがって、組換え治療用タンパク質に対する水性二相抽出は、通常、臨界濃度と超えるポリマー-ポリマーまたはポリマー-水中に溶解した塩のいずれかで行われる(Azevedoら、Trends Biotechnol.27(4):240~247頁、2009年)。PEG、ポリビニルアルコール、デキストラン、およびデンプンなどのポリマー、ならびにリン酸塩、硫酸塩、およびクエン酸塩などの緩衝塩を使用して、2つの相を作成した。組換え治療用タンパク質の特定の相への特異性を改良するために、相形成成分の官能化も可能である(Ruiz-Ruizら、J.Chromatogr.A1244:1~13頁、2012年)。
水性二相系および従来の有機-水性系における相抽出のメカニズムは同様であり;したがって、化学産業で使用される標準の抽出装置のほとんどは、水性二相抽出に適用することができる(KulaおよびSelber、Encyclopedia of Bioprocess Technology、2002年、ならびにVazquez-Villegasら、Sep.Purif.Technol.141:263~268頁、2015年)。水性二相抽出は、適当なカラム接触器、スプレーカラム、回転ディスク接触器、またはミキサー-セトラーユニットを使用して実施することができる(Rosaら、J.Chromatogr.B880:148~156頁、2012年;Muendgesら、Biotechnol.Prog.31(4):925~936頁、2015年;およ
びEspitia-Salomaら、Food Bioprod.Process 92(2):101~112頁、2014年)。マルチプレートカラム接触器およびミキサー・セトラー構成部などの多段階水性二相抽出デバイスの使用は、回収率および/または純度の改良により、単一段階抽出の限定を克服することができる(Espitia-Salomaら、Biotechnol.J.11(5):708~716頁、2016年、およびRosaら、J.Biotechnol.139(4):306~313頁、2009年)。多段階水性二相抽出は、mAbの精製に対して成功裏に評価されてきた(Muendgesら、Biotechnol.Prog.31(4):925~936頁、2015年;Rosaら、Biotechnol.J.8(3):352~362頁、2013年;Rosaら、J.Biotechnol.139(4):306~313頁、2009年;Eggersgluessら、Chemical Engineering &
Technology 37(4):675~682頁、2014年)。連続的ATPEデバイスは、モノクローナル抗体の下流での処理において使用するためのクロマトグラフィーによらない有望な代替案を提供し;1ユニットで同時に清澄化、濃縮および部分的精製することを可能にする。産業スケールでのATPEの適用に関する懸念の1つは、プロセスにおいて必要とされるポリマーと塩の高い消費率と、結果として、水処理に与えるそれらの影響に関連する(Espitia-Salomaら、Biotechnol.J.11(5):708~716頁、2016年)。
凍結乾燥
一部の例では、本明細書に記載のプロセスおよび方法は、凍結乾燥(例えば、連続的凍結乾燥)のユニット操作を実施することをさらに含む。連続的凍結乾燥を実施するための方法は、De Meyerら、Int.J.Pharm.496(1):75~85頁、2015年;Weisselberg、米国特許第8,528,225号、2013年;およびReyら、Freeze Drying/Lyophilization of Pharmaceutical and Biological Products、Informa Healthcare、London、UK、1~28頁、2010年におけるGlimpses into the Realm of Freeze-Drying:Classical Issues and New Venturesに記載されている。
結晶化
一部の例では、本明細書に記載のプロセスおよび方法は、結晶化(例えば、連続的結晶化)のユニット操作を実施することをさらに含む。結晶化を実施するための方法は、例えば、Petersら、Protein Expression Purif.39(1):43~53頁、2005年;Schmidtら、Eng.Life Sci.5(3):273~276頁、2005年;Hekmat、Bioprocess Biosystems Eng.38(7):1209~1231頁、2015年;Basuら、Expert Opin.Biol.Ther.4(3):301~317頁、2004年;Hekmat、Bioprocess Biosystems Eng.38(7):1209~1231頁、2015年;Powerら、Chem.Eng.Sci.133:125~139頁、2015年;Lawtonら、Organic Process Research Development 13(6):1357~1363頁、2009年;Wongら、Crystal Growth Design 12(11):5701~5707頁、2012年;Liら、Organic Process Research Development 20(2):510~516頁、2015年;Poechlauerら、Organic Process Research Development 16(10):1586~1590頁、2012年;Masciaら、Angewandte Chemie International Edition 52(47):12359~12363頁、2013年;Furutaら、Chem.Eng
.Process 102:210~218頁、2016年;Powerら、Chem.Eng.Sci.133:125~139頁、2015年;およびNeugebauerら、Crystal Growth Design 15(3):1089~1095頁、2015年に記載されている。連続的結晶化は、混合懸濁液混合生成物除去反応器(MSMPR)、プラグ流反応器(PFR)、および連続振動バッフル晶析装置(COBC)を使用して実施することができる(例えば、Suら、Chemical Engineering Processing:Process Intensification 89:41~53頁、2015年を参照のこと)。
クロマトグラフィーの例示的タイプ
本発明の方法およびプロセスで(例えば、本明細書に記載の方法およびプロセスで実施されるユニット操作で)使用することができるクロマトグラフィーの例示的タイプとして、連続的逆流クロマトグラフィー(例えば、連続的環状クロマトグラフィーおよび連続的輻流クロマトグラフィー)、連続的向流クロマトグラフィー(例えば、刺激移動床クロマトグラフィー、周期的向流クロマトグラフィー、連続的向流タンジェンシャルクロマトグラフィー、およびマルチカラム向流溶媒勾配精製)、およびフロースルークロマトグラフィー(例えば、拡大床クロマトグラフィー)が挙げられる。
逆流クロマトグラフィーでは、樹脂床は、床内の液体流の方向と垂直に移動する。連続的逆流システムでは、分離が軸方向でのみ起こる従来のバッチシステムと対照的に、静止状態の分離が軸および周方向に起こる(Ganetsosら(編)、Preparative and Production Scale Chromatography、第61巻、Marcel Dekker,Inc.、New York、NY、113~126頁、1992年におけるBridges and Barker、Continuous Cross-Current Chromatographic Refiners)。逆流クロマトグラフィーの非限定例は、連続的環状クロマトグラフィーおよび連続的輻流クロマトグラフィーである。
連続的環状クロマトグラフィーにより、クロマトグラフィーマトリックスの回転環状床を使用して、多成分混合物の連続的分離が可能となる。連続的環状クロマトグラフィーを実施するための方法は、例えば、Martin、Discussions of the
Faraday Society 7:332~336頁、1949年;Giddings、Anal.Chem.34(3):314~319頁、1962年;Foxら、J.Chromatogr.A43:48~54頁、1969年;Fox、J.Chromatogr.A43:55~60頁、1969年;ならびにNicholasおよびFox、J.Chromatogr.A43:61~65頁、1969年;GiovanniniおよびFreitag、Biotechnol.Bioeng.73(6):522~529頁、2001年;BloomingburgおよびCarta、Chem.Eng.J.55(1~2):B19~B27頁、1994年;TakahashiおよびGoto、Separation Sci.Technol.26(1):1~13頁、1991年;ならびにVogelら、Biotechnol.Bioeng.80(5):559~568頁、2002年に記載されている。連続的環状クロマトグラフィーは、典型的には、環を形成する2つの同心円のシリンダー間に充填される従来の吸着剤の床を使用する。環状床は、その垂直軸の周りをゆっくりと回転する。分離される供給混合物を、固定ノズルを介して、移動吸着床の上部に連続的に導入する。アイソクラティッククロマトグラフィーの最も簡便なケースでは、回転する環が、供給の方向に流れる(逆流)溶出緩衝液で浸水される。時間が進行するにつれて、供給物の異なる成分が、軸方向に分離し、固定した入口のポイントから環状床の底にらせん状のバンドを生じさせる。いくつかの固定した出口が、分離した成分が連続的に回収される床の底に保たれる。供給点からの各成分のバンドの偏位角度、すなわち、らせん状のバンドの傾斜は、流速、環の回転速度、
および固定相への成分の親和性に依存する。
連続的輻流クロマトグラフィーは、供給物とすべての必要な緩衝液が、軸方向(軸に沿って)の代わりに、径方向に(水平方向に周辺部から内部にまたは中心から外側に)流れること以外は、連続的環状クロマトグラフィーと同様に作動する。輻流カラムの効果的な床高さは、内側のシリンダーと外側のシリンダーの間の距離であり、一方、断面積は、チューブの表面積と関連する。床深さが短く、カラムの断面積が大きいことにより、圧力低下を低く維持しながら、高流速での分離が可能となる(Besselinkら、J.Chromatogr.A1271(1):105~114頁、2013年)。連続的輻流クロマトグラフィーのさらなる態様は、例えば、Cabanneら、J.Chromatogr.B845(2):191~199頁、2007年;Kinnaら、Biotechnol.Bioeng.113(1):130~140頁、2016年;Weaverら、BioPharm 3(7):25~28頁、1990年;Sunら、Biomed.Chromatogr.14(7):478~482頁、2000年;TharakanおよびBelizaire、J.Chromatogr.A702(1):191~196頁、1995年;Guら、Chem.Eng.Sci.46(5):1279~1288頁、1991年;Huangら、Chem.Eng.J.38(3):179~186頁、1988年;Kinnaら、Biotechnol.Bioeng.113(1):130~140頁、2016年;ならびにLayら、Food Bioprod.Process.84(1):78~83頁、2006年に記載されている。
連続的向流クロマトグラフィーの非限定例として、刺激移動床クロマトグラフィー、周期的向流クロマトグラフィー、連続的向流タンジェンシャルクロマトグラフィー、およびマルチカラム向流溶媒勾配精製が挙げられる。
向流クロマトグラフィーにより、バッチクロマトグラフィーと比較して、生産性をより効率的に改善し、溶媒/緩衝液の消費を減少させる固定相の使用が可能となる。液体-固体間の向流移動は、固相吸着剤(クロマトグラフィー樹脂)を液相流と逆方向に回転させることによって得ることができる。これは、固体吸着剤/カラムを液流と逆方向に物理的に回転させることによって(真の移動床)、または周期的もしくは半連続的方式で精巧なカラムとバルブの移動を使用する固相の連続的移動を刺激することによって(刺激移動床)達成することができる。
刺激移動床クロマトグラフィーは、吸着剤を実際に移動させることなく、液相と固相の連続的移動と向流移動の利点を得るフロースキームを利用する。伝統的なバッチクロマトグラフィーにおいて使用する大量に充填した床の代わりに;SMBクロマトグラフィーシステムは、複数の少量を充填した床の接続によって特徴付けられる。刺激向流フローは、カラム間に位置する複雑なバルブシステムを介して実行され、その結果、入口と出口の配置は、液流の方向にカラム間で周期的に切り替わる。刺激移動床クロマトグラフィーを使用する方法は、例えば、Jungbauerら、Trends Biotechnol.31(8):479~492頁、2013年;Lowら、J.Chromatogr.B848(1):48~63頁、2007年;Xieら、Biotechnol.Bioprocess Eng.6(6):363~375頁、2001年;Imamoglu、Modern Advances in Chromatography、Springer、211-231頁、2002年におけるSimulated Moving Bed Chromatography (SMB)for Application in
Bioseparation;Munら、Ind.Eng.Chem.Res.42(9):1977~1993頁、2003年;Rajendranら、J.Chromatogr.A1216(4):709~738頁、2009年;GottschlichおよびKashe、J.Chromatogr.A765(2):201~206頁、19
97年;Keβlerら、J.Chromatogr.A1176(1):69~78頁、2007年;Kroberら、J.Chromatogr.A1307:99~110頁、2013年;Rodrigues、Simulated Moving Bed Technology:Principles,Design,and Process Applications、Butterworth-Heinemann、2015年;ならびにAnicetoら、Separation Purification Reviews 44(1):41~73頁、2015年に記載されている。
向流クロマトグラフィーの別の例は、周期的向流クロマトグラフィーである。向流クロマトグラフィーを実施するための例示的方法は、本明細書に記載されている。向流クロマトグラフィーを実施するためのさらなる方法は、例えば、Mahajanら、J.Chromatogr.A1227:154~162頁、2012年;Warikooら、Biotechnol.Bioeng.109(12):3018~3029頁、2012年;およびGodawatら、Biotechnol.J.7(12):1496~1508頁、2012年に記載されている。
連続的向流タンジェンシャルクロマトグラフィーは、固定床カラムに樹脂粒子を充填する代わりに、それによって、樹脂が(スラリーの形態で)、一連の静的ミキサーと中空繊維膜モジュールを通って流れる、向流クロマトグラフィーのタイプである。微多孔中空繊維膜は、大きな樹脂粒子を保持する一方、溶解した種(タンパク質および緩衝液成分)はすべて膜を通過させ、透過水とする。結合、洗浄、溶出、ストリッピング、および平衡化工程で使用される緩衝液は、多段階の構成で、向流を樹脂スラリーに流す。連続的向流タンジェンシャルクロマトグラフィーを実施する方法は、例えば、Duttaら、Biotechnol.Prog.32(2):430~439頁、2016年;Shinkazhら、米国特許第7,988,859号、2011年;Napadenskyら、Separation Science Technology 48(9):1289~1297頁、2013年;およびDuttaら、J.Biotechnol.213:54~64頁、2015年に記載されている。
マルチカラム向流溶媒勾配精製は、3つの成分画分の分離能の高い分離のための直線勾配を使用することができるマルチカラムクロマトグラフィープロセスである。マルチカラム向流溶媒勾配精製を実施するための方法は、AumannおよびMorbidelli、Biotechnol.Bioeng.98(5):1043~1055頁、2007年;Muller-Spathら、Biotechnol.Bioeng.100(6):1166~1177頁、2008年;ならびにAumannおよびMorbidelli、Biotechnol.Bioeng.99(3):728~733頁、2008年に記載されている。
フロースルークロマトグラフィーの例は、拡大床クロマトグラフィーである。拡大床クロマトグラフィー(EBC)は、所望のタンパク質を粗製供給材料(例えば、供給材料を含有する微粒子)から直接精製することを可能とする流動化クロマトグラフィー吸着床を利用する(Chase、Trends Biotechnol.12(8):296~303頁、1994年;Thommes、New Enzymes for Organic Synthesis、Springer、185~230頁、1997年におけるFluidized Bed Absorption as a Primary Recovery Step in Protein Purification;Anspachら、J.Chromatogr.A865(1):129~144頁、1999年;およびGagnon、J.Chromatogr.A1221:57~70頁、2012)。伝統的なクロマトグラフィーカラムと比較した拡大床クロマトグラフィーの設定における主要な差異は、トップフローアダプターが適当に配置され、その結果、床は、液流の
方向に上向きに拡大することが可能となるという点である。拡大床クロマトグラフィーを実施するための方法は、例えば、Kinnaら、Biotechnol.Bioeng.113(1):130~140頁、2016年;Farid、J.Chromatogr.B848(1):8~18頁、2007年;Chhatreら、Bioprocess
Biosystems Eng.30(1):1~11頁、2007年;Linら、J.Chromatogr.A1304:78~84頁、2013年;Zhaoら、Chinese J.Chem.Eng.17(4):678~687頁、2009年;Smithら、J.Chromatogr.A968(1):121~128頁、2002年;Feuserら、Process Biochem.34(2):159~165頁、1999年;Ozyurtら、J.Chromatogr.A944(1):203~210頁、2002年;Anspachら、J.Chromatogr.A865(1):129~144頁、1999年;OwenおよびChase、J.Chromatogr.A757(1):41~49頁、1997年;ならびにOwenおよびChase、Chem.Eng.Sci.54(17):3765~3781頁、1999年に記載されている。
例示的利点
本明細書に記載のプロセスは、治療用タンパク質原薬に存在する組換え治療用タンパク質の容積測定による生産性の実質的増加をもたらすことができる。例えば、本明細書に記載のプロセスは、治療用タンパク質原薬に存在する組換え治療用タンパク質の容積測定による生産性の少なくとも2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、および10倍の増加をもたらすことができる。組換え治療用タンパク質の生物学的活性は、当技術分野で公知の様々な方法を使用して評価することができ、特定の組換え治療用タンパク質の活性に依存することになる。例えば、免疫グロブリン(例えば、抗体または抗体断片)である組換え治療用タンパク質の生物学的活性は、その特異的エピトープに結合する組換え治療用抗体の親和性を測定することによって(例えば、Biocoreまたは競合酵素結合免疫吸着アッセイを使用して)決定することができる。組換え治療用タンパク質は、酵素(例えば、組換えガラクトシダーゼ、例えば、組換えアルファ-ガラクトシダーゼ)であってもよく、生物学的活性は、組換え治療用酵素の活性を測定することによって決定される(例えば、検出可能な基質の濃度の減少または検出可能な生成物の濃度の増加を測定することによって(例えば、分光光度計または発光を使用して)、組換え治療用酵素の触媒速度定数を決定する)。例えば、組換え治療用ガラクトシダーゼの生物学的活性は、グロボトリアオシルセラミド(GL-3)もしくはガラビオシルセラミドのレベルの低下、またはジヘキソシドセラミドもしくはガラクトースのレベルの増加を測定することによって検出することができる。
本明細書に記載のプロセスは、組換え治療用タンパク質の回収率の増加(例えば、治療用タンパク質原薬中の液体培養培地に存在する組換え治療用タンパク質の収率の増加)をもたらすことができる。例えば、本発明のプロセスは、約70%超、約80%超、約82%超、約84%超、約86%超、約88%超、約90%超、約92%超、約94%超、約96%超、または約98%超の組換え治療用タンパク質の収率をもたらすことができる。本発明のプロセスは、約80%から約90%の間、約82%から約90%の間、約84%から約90%の間、約84%から約88%の間、約84%から約94%の間、約82%から約92%の間、または約85%から約95%の間の収率をもたらすことができる。
治療用タンパク質原薬に存在する組換え治療用タンパク質の濃度は、約1.0mg/mL超、約1.5mg/mL超、約2.0mg/mL超、約2.5mg/mL超、約3.0mg/mL超、約3.5mg/mL超、約4.0mg/mL超、約4.5mg/mL超、約5.0mg/mL超、約5.5mg/mL超、約6.0mg/mL超、約6.5mg/mL超、約7.0mg/mL超、約7.5mg/mL超、約8.0mg/mL超、約8.
5mg/mL超、約9.0mg/mL超、約10.0mg/mL超、約12.5mg/mL超、または約15.0mg/mL超であり得る。
本明細書に記載のプロセスは、少なくとも約5日、少なくとも約10日、少なくとも約15日、少なくとも約20日、少なくとも約25日、少なくとも約30日、少なくとも約35日、少なくとも約40日、少なくとも約45日、少なくとも約50日、少なくとも約55日、少なくとも約60日、少なくとも約65日、少なくとも約70日、少なくとも約75日、少なくとも約80日、少なくとも約85日、少なくとも約90日、少なくとも約95日、少なくとも約100日、少なくとも約110日、少なくとも約120日、少なくとも約130日、少なくとも約140日、少なくとも約150日、少なくとも約160日、少なくとも約170日、少なくとも約180日、少なくとも約190日、少なくとも約200日、少なくとも約210日、少なくとも約220日、少なくとも約230日、少なくとも約240日、少なくとも約250日、少なくとも約260日、少なくとも約270日、少なくとも約280日、少なくとも約290日、少なくとも約300日、少なくとも約310日、少なくとも約320日、少なくとも約330日、少なくとも約340日、少なくとも約350日、または少なくとも約365日の連続期間にわたって、少なくとも約5g/日、少なくとも約6g/日、少なくとも約7g/日、少なくとも約8g/日、少なくとも約9g/日、少なくとも約10g/日、少なくとも約11g/日、少なくとも約12g/日、少なくとも約13g/日、少なくとも約14g/日、少なくとも約15g/日、少なくとも約16g/日、少なくとも約17g/日、少なくとも約18g/日、少なくとも約19g/日、少なくとも約20g/日、少なくとも約25g/日、少なくとも約30g/日、少なくとも約35g/日、または少なくとも約40g/日の治療用タンパク質原薬中の組換え治療用タンパク質の正味の収量をもたらすことができる。
本発明において提供されるプロセスは、著しく改良された比生産率をもたらすことができる。例えば、組換えタンパク質原薬において達成される比生産率は、異なるプロセス(例えば、バッチ精製プロセスまたは統合されていないおよび/または連続的ではないプロセス)を使用して達成される比生産率より、少なくとも2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、110倍、120倍、130倍、140倍、150倍、160倍、170倍、180倍、190倍、または200倍大きい。本発明のプロセスによって達成される組換えタンパク質原薬の生産性は、少なくとも10,000ユニット/L、少なくとも15,000ユニット/L、少なくとも約20,000ユニット/L、少なくとも約25,000ユニット/L、少なくとも約30,000ユニット/L、少なくとも約35,000ユニット/L、または少なくとも約40,000ユニット/L(第1および/または第2の液体培養培地中)であり得る。本発明の方法によって達成される組換えタンパク質原薬の生産性は、少なくとも1g/L、少なくとも1.5g/L、少なくとも2.0g/L、少なくとも2.5g/L、少なくとも3.0g/L、少なくとも4.0g/L、少なくとも4.5g/L、または少なくとも5.0g/Lであり得る。
本明細書に記載のプロセスによって、液体培養培地からの治療用原薬の時間効率の良い生産ももたらされる。例えば、治療用タンパク質を含有する流体(例えば、液体培養培地)を第1のMCCSに供給するのと、第2のMCCSの出口から治療用タンパク質原薬(治療用タンパク質を含有する)を溶出するのとの間の経過時間は、例えば、約4時間から約48時間の間(末端値を含む)、例えば、約4時間から約40時間の間、約4時間から約35時間の間、約4時間から約30時間の間、約4時間から約28時間の間、約4時間から約26時間の間、約4時間から約24時間の間、約4時間から約22時間の間、約4時間から約20時間の間、約4時間から約18時間の間、約4時間から約16時間の間、約4時間から約14時間の間、約4時間から約12時間の間、約6時間から約12時間の間、約8時間から約12時間の間、約6時間から約20時間の間、約6時間から約18時
間の間、約6時間から約14時間の間、約8時間から約16時間の間、約8時間から約14時間の間、約8時間から約12時間の間、約10時間から20時間の間、約10時間から18時間の間、約10時間から16時間の間、約10時間から14時間の間、約12時間から約14時間の間、約10時間から約40時間の間、約10時間から約35時間の間、約10時間から約30時間の間、約10時間から約25時間の間、約15時間から約40時間の間、約15時間から約35時間の間、約15時間から約30時間の間、約20時間から約40時間の間、約20時間から約35時間の間、または約20時間から約30時間の間(末端値を含む)である。他の例では、治療用タンパク質を含有する流体(例えば、液体培養培地)を第1のMCCSに供給するのと、第2のMCCSの出口から治療用タンパク質原薬(治療用タンパク質を含有する)を溶出するのとの間の経過時間は、例えば、約4時間超であり、約40時間未満(末端値を含む)、例えば、4時間超かつ約39時間、約38時間、約37時間、約36時間、約35時間、約34時間、約33時間、約32時間、約31時間、約30時間、約29時間、約28時間、約27時間、約26時間、約25時間、約24時間、約23時間、約22時間、約21時間、約20時間、約19時間、約18時間、約17時間、約16時間、約15時間、約14時間、約13時間、約12時間、約11時間、約10時間、約9時間、約8時間、約7時間、約6時間、約5時間、または約4.5時間未満(末端値を含む)である。
本発明は、以下の実施例においてさらに記載されるが、特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定するものではない。
回路システムを使用する限外濾過/透析濾過の性能
限外濾過/透析濾過回路システムを作成して、組換え二重特異的抗体を含む流体を連続的に濃縮および緩衝液交換した。組換え二重特異的抗体を、プロテインAカラムに対して最初に精製し、次いで、24g/Lの濃度の溶出液を限外濾過/透析濾過回路システムにおいて使用した。回路システムは、第1および第2の入口と、第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを有し、流体をシステムにもしくはシステムから流す、またはその両方のためのポートを含むタンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットを含んだ。第1の期間に、組換え二重特異的抗体を含有する流体を、回路システムを通して連続的に流し、組換え二重特異的抗体を含まない濾液(図5の「透過」を参照のこと)を廃棄した。第1の期間の間、一定体積の流体を導管内に維持した。
この工程の後、第2の期間に、透析濾過媒体を、少なくとも1つのポートを通して回路システムに連続的に流し、組換え二重特異的抗体を含まない濾液を廃棄した(図6)。第1の期間の間、一定体積の流体を導管内に維持した。このプロセスにおけるこの回路システムのマスフローは、図5および図6に示される。
次いで、第2の期間の終わりに、回路システムの組換え二重特異的タンパク質を含む流体を回路システムから収集した。このプロセスは、組換え二重特異的抗体の96%の回収率をもたらした。タンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む例示的回路システムを使用する実験からのデータを図7~9に示す。
回路システムを使用するウイルス濾過の性能
次いで、タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムを作成し、実施例1に記載のタンジェンシャルフロー濾過ユニットを含む回路システムから回収した組換え二重特異的抗体を含む流体からのウイルスの連続的除去を提供する。タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットにおけるフィルターの孔径は、パルボウイルス除去を提供するために、約20nmであった。
実施例1に記載の回路システムから除去した組換え二重特異的抗体を含む、濃縮して緩衝液交換した流体を、図10に示すように、タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む第2の回路システムに供給した。(タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットを含む回路システムの別の例は、図11に示す。)流体を、第2の回路システムを通して連続的に流し、組換え二重特異的抗体を含む流体を、タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットから回収した(図10の「ウイルスを含まない」VF生成物を参照のこと)。回路システムに流された流体に存在する任意のウイルス粒子は、回路システム内に保持され、組換え二重特異的抗体を含む流体を、タンジェンシャルフローウイルス濾過ユニットから収集した。この回路システムは、約24時間作動し、フラックス減衰も圧力の増加も、この期間にわたって観察されなかった(図12を参照のこと)。
TFVFユニットを含む回路システムを使用するウイルス排除の性能
TFVFユニットを含む回路システムに対するウイルス排除能を、マウスマイニュートウイルス(MMV)を使用するいくつかの実験で試験した。以下に特段留意されていなければ、0.5%のウイルス材料でスパイクした5mg/mLの組換えヒト抗体を含んだ試験流体を使用して濾過を実施し、およそ6logの最終MMV力価を得た。試験したTFVFユニットは、3cmのPlanova(商標)BioEXフィルターまたは10cmのPlanova(商標)20NもしくはPlanova(商標)BioEXフィルターのいずれかを含んだ。
試験流体が一度TFVFユニットを通って流れた場合に、試験したシステムにおいてTFVFユニットによって保持されたMMVウイルスの量を試験するために実験を設計した。この実験では、保持液のウイルス力価の決定を可能とするために、主な供給ベッセルへのフローバックよりも個別の圧力ベッセルに、保持液を収集した。10cmのPlanova(商標)20Nフィルターを含むTFVFユニットを有するシステムは、12psiにて、1から2mL/分の間で変化する流速で作動した。濾液重量への線形フィットによって図13に示すように、流速は、フィルターのフラックス速度45.6LMHに影響を及ぼさず、流速を、膜の寿命を最大限にするために、独立して調整することができることを意味した。実験の結論では、濾液は試験流体の体積の28%を表すことが分かったが、一方、試験流体の体積の72%を保持液収集ベッセルに収集した。濾液のウイルス力価は、検出限界を下回ったが、一方、保持液の力価は、出発試験流体の力価より高かった。ウイルスに対する質量バランスによって、システムが作動すると、ウイルスの重要な画分はTFVFユニットのフィルターによって捕捉されなかったが、貫流して保持液で濃縮されたことが示された。
6.6psiにて、2mL/分の再循環速度で作動させながら、10cmのPlanova(商標)20Nフィルターを含むTFVFユニットを含む回路システムに対するウイルス排除について22時間の期間試験した(図14)。システムは、579mLの試験流体の初期負荷を課され、操作(5.95log力価)後、システムがサンプルの収集を停止する前に、510mLの濾液を生じた。いずれのフラックス減衰もなく、510L/mの負荷を達成し、フィルターを通したフラックスは、一定の23.0LMHのままであった。保持液ベッセルに残っている69mLは、実験の完了時に見かけ上濁っていることが分かったが、実行中のいずれの時点でも、フィルターのフラックス減衰は見られなかった。濾液のウイルス力価は、検出限界(<0.83log)を下回ったが、一方、保持液の力価は、試験流体の力価よりも0.53log高い6.48logであった。この結果は、負荷/保持液ベッセル中のウイルスの3.4xの濃度を表す。ウイルス負荷全体の約半分はフィルターによって捕捉されなかったが、代わりに、再循環し続け、フィルターに対する捕捉負担を低減し、フラックス減衰を妨げた。
新たな流体を周期的に再供給して、20psiにて、それぞれ、1mL/分または3mL/分の再循環速度で29時間実行した場合の(それぞれ、図15および16)、3cmまたは10cmのPlanova(商標)BioEXフィルターを含むTFVFユニットを含む回路システムに対するウイルス排除。3cmのフィルターを有するTFVFユニットを使用して実施した実験は、高力価のウイルスの大きなボーラスがシステムに導入され(例えば、外部汚染により)、次に、ウイルスを含まない材料で希釈して流出させるシナリオを繰り返すよう設計した。このシステムに、6.13logのウイルスでスパイクした約400mLの試験流体の初期ボーラスを課し、20時間濾過した。最初の20時間の濾過からの濾液のウイルス力価は、検出限界(<1.09log)未満であった。約20時間の濾過後、約400mLのウイルスを含まない抗体溶液の新たなボーラスを添加した。この材料をさらに9時間濾過したところ、濾液のウイルス力価は、検出限界未満であった。図15は、3cmのPlanova(商標)BioEXフィルターを含むTFVFを含む回路システムを使用する圧力および質量プロファイルを示す。フラックスは、最初の20時間を通して42.8LMHで一定のままであったが、再供給の後、36.4LMHの新たな一定速度まで下降した。フィルターに対する総スループットは、1190L/mであった。
10cmのPlanova(商標)BioEXフィルターを含むTFVFユニットを含む回路システムを使用して実施した実験は、低力価のウイルスの流れが、システムに連続的に導入される(例えば、汚染された緩衝液から)シナリオを繰り返すよう設計した。初期のウイルススパイク材料(6.13logのMMV力価)を、新たな組換え抗体溶液中に1:30で希釈して、希釈供給材料を作成した。希釈供給材料のウイルス力価は、4.66logであった。この希釈供給材料を、作業体積が最少閾値を超えて維持されるように新たな希釈供給材料を周期的に添加しながら、29時間、システムを通して濾過した。濾液のウイルス力価は、最初の20時間と次の9時間で決定し、両方のサンプルに対して検出限界(<0.83log)未満であった。図16は、実験に対する圧力および質量プロファイルを示す。フラックスは、最初の20時間を通して39.4LMHで一定のままであったが、供給後、34.5LMHの新たな速度まで下降した。フィルターに対する総スループットは、1120L/mであった。
これらの結果は、連続的再循環によりウイルス濾過を作動させることにより、捕捉されたウイルスによる目詰まりを低減することによって、膜の有用寿命が延長されることを示す。透過率(システムの圧力により)および再循環速度(ポンプ速度により)を調整する能力は、独立して、単一のフィルターの操作を複数日数まで拡大するプロセス最適化を可能とする。
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と併せて記載されているが、前述の記載は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される本発明の範囲を例証することを意図するものであり、限定することを意図するものではないことが理解されるべきである。他の態様、利点、および修正は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

Claims (72)

  1. 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、
    (a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフロー濾過(TFF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、
    該システムが、流体を、導管およびTFFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含まない濾液をTFFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;
    (b)第1の期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;
    (c)第2の期間に、透析濾過媒体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含まない濾液を廃棄する工程と;
    (d)第1および第2の期間の後、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに存在する組換え治療用タンパク質を含む流体を収集する工程と
    を含む前記方法。
  2. 工程(b)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項1に記載の方法。
  3. 工程(b)は、流体を、約0.5mL/分から約200mL/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項2に記載の方法。
  4. 第1の期間は、約0.1分から約12時間である、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。
  5. 第1の期間は、約10分から約4時間である、請求項4に記載の方法。
  6. 工程(b)において流体を回路システムに流すことは、一方向に起こる、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
  7. 工程(C)は、透析濾過媒体を、約0.1mL/分から約100L/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
  8. 工程(c)は、透析濾過媒体を、約0.5mL/分から約200mL/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項7に記載の方法。
  9. 第2の期間は、約5分から約12時間である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
  10. 第2の期間は、約10分から約4時間である、請求項9に記載の方法。
  11. 工程(c)において透析濾過媒体を回路システムに流すことは、一方向に起こる、請求項1~10のいずれか1項に記載の方法。
  12. 導管は、約5mmから約5cmの内径を有する、請求項1~11のいずれか1項に記載の方法。
  13. 導管は、約10mmから約3cmの内径を有する、請求項12に記載の方法。
  14. TFFユニットは、約0.1cmから約50cmの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の方法。
  15. TFFユニットは、約0.5cmから約20cmの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルフィルターを含む、請求項14に記載の方法。
  16. 回路システムは、導管内に配置されたポンプをさらに含む、請求項1~15のいずれか1項に記載の方法。
  17. ポンプは、ぜん動ポンプである、請求項16に記載の方法。
  18. (e)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットと、(ii)流体を第2の回路システムにもしくは第2の回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む第2の回路システムを準備する工程であって、
    該第2のシステムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;
    (f)第3の期間に、工程(d)の収集した流体を、システムのポートと第2のシステムのポートの間で流体連通している接続導管を使用して第2のシステムに流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集する工程と
    をさらに含む、請求項1~17のいずれか1項に記載の方法。
  19. 工程(f)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分の速度で、第2のシステムに流すことを含む、請求項18に記載の方法。
  20. 工程(f)は、流体を、約0.5mL/分から約200mL/分の速度で、第2のシステムに流すことを含む、請求項19に記載の方法。
  21. 第3の期間は、約0.1分から約12時間である、請求項18~20のいずれか1項に記載の方法。
  22. 第3の期間は、約10分から約2時間である、請求項21に記載の方法。
  23. 工程(f)において流体を第2のシステムに流すことは、一方向に起こる、請求項18から22のいずれか1項に記載の方法。
  24. TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管は、約5mmから約5cmの内径を有する、請求項18~23のいずれか1項に記載の方法。
  25. TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管は、約10mmから約3cmの内径を有する、請求項24に記載の方法。
  26. TFVFユニットは、約0.1cmから約100mの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む、請求項18~25のいずれか1項に記載の方法。
  27. TFVFユニットは、約0.5cmから約200cmの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む、請求項26に記載の方法。
  28. 接続導管は、約5mmから約10cmの内径を有する、請求項18~27のいずれか1項に記載の方法。
  29. 接続導管は、約10mmから約5cmの内径を有する、請求項28に記載の方法。
  30. 第2のシステムは、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管内に配置されたポンプをさらに含む、請求項18~29のいずれか1項に記載の方法。
  31. TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管内に配置されたポンプは、ぜん動ポンプである、請求項30に記載の方法。
  32. 組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する方法であって、
    (a)(i)第1および第2の入口を有するタンジェンシャルフローウイルス濾過(TFVF)ユニットと、(ii)流体を回路システムにもしくは回路システムから流す、またはその両方のための少なくとも1つのポートを含む、TFVFユニットの第1および第2の入口の間で流体連通している導管とを含む回路システムを準備する工程であって、
    該システムが、流体を、導管およびTFVFユニットを通して流すことができ、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集することができるように構成されている、前記工程と;
    (b)ある期間に、組換え治療用タンパク質を含む流体を、少なくとも1つのポートの1つを通して回路システムに連続的に流し、組換え治療用タンパク質を含む濾液をTFVFユニットから収集する工程と
    を含む前記方法。
  33. 工程(b)は、流体を、約0.1mL/分から約100L/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項32に記載の方法。
  34. 工程(b)は、流体を、約0.5mL/分から約200mL/分の速度で、回路システムに連続的に流すことを含む、請求項33に記載の方法。
  35. ある期間は、約5分から約12時間である、請求項32~34のいずれか1項に記載の方法。
  36. ある期間は、約10分から約3時間である、請求項35に記載の方法。
  37. 工程(b)において流体をシステムに流すことは、一方向に起こる、請求項32~36のいずれか1項に記載の方法。
  38. 導管は、約5mmから約5cmの内径を有する、請求項32~37のいずれか1項に記載の方法。
  39. 導管は、約10mmから約3cmの内径を有する、請求項38に記載の方法。
  40. TFVFユニットは、約0.1cmから約100mの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む、請求項32~39のいずれか1項
    に記載の方法。
  41. TFVFユニットは、約0.5cmから約200cmの表面積を有する1つまたはそれ以上のタンジェンシャルウイルスフィルターを含む、請求項40に記載の方法。
  42. システムは、導管内に配置されたポンプをさらに含む、請求項32~41のいずれか1項に記載の方法。
  43. 導管内に配置されたポンプは、ぜん動ポンプである、請求項42に記載の方法。
  44. 治療用タンパク質薬物物質を製造するための統合された連続的プロセスであって、
    (a)細胞を実質的に含まない組換え治療用タンパク質を含む液体培養培地を準備する工程であって、液体培養培地が、第1のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS1)に供給される、前記工程と;
    (b)MCCS1を使用して、液体培養培地中の前記組換え治療用タンパク質を捕捉する工程であって、組換え治療用タンパク質を含有するMCCS1の溶出液が、第2のマルチカラムクロマトグラフィーシステム(MCCS2)に連続的に供給される、前記工程と;
    (c)MCCS2を使用して、組換え治療用タンパク質を精製およびポリッシュする工程であって、MCCS2からの溶出液が、組換え治療用タンパク質を含む流体である、前記工程と;
    (d)請求項1~43のいずれか1項に記載の方法を使用して、組換え治療用タンパク質を含む流体を処理する工程と
    を含み、
    該プロセスが、前記液体培養培地から組換え治療用タンパク質を含む収集された流体または濾液に連続的に統合および実行され、収集された流体または濾液が治療用タンパク質薬物物質である、前記プロセス。
  45. MCCS1によって少なくとも2つの異なるユニット操作が実施される、請求項44に記載のプロセス。
  46. MCCS1によって、組換え治療用タンパク質を捕捉し、ウイルスを不活性化するユニット操作が実施される、請求項45に記載のプロセス。
  47. MCCS1もしくはMCCS2、またはその両方の使用は、カラムスイッチングを含む、請求項44~46のいずれか1項に記載のプロセス。
  48. MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも2つのクロマトグラフィーカラムを利用する、請求項44~47のいずれか1項に記載のプロセス。
  49. MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも2つのクロマトグラフィー用膜を利用する、請求項44~47のいずれか1項に記載のプロセス。
  50. MCCS1および/またはMCCS2は、少なくとも1つのクロマトグラフィーカラムおよび少なくとも1つのクロマトグラフィー用膜を利用する、請求項44~47のいずれか1項に記載のプロセス。
  51. MCCS1は、第1の周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCCS1)である、請求項44~50のいずれか1項に記載のプロセス。
  52. PCCS1は、4カラムPCCSを含む、請求項51に記載のプロセス。
  53. 4カラムPCCSにおける4つのカラムのうちの3つによって、液体培養培地から組換え治療用タンパク質を捕捉するユニット操作が実施される、請求項52に記載のプロセス。
  54. 捕捉することは、アフィニティークロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィー、または分子篩クロマトグラフィーを使用して実施される、請求項53に記載のプロセス。
  55. アフィニティークロマトグラフィーは、プロテインA結合捕捉メカニズム、基質結合捕捉メカニズム、抗体または抗体断片結合捕捉メカニズム、アプタマー結合捕捉メカニズム、およびコファクター結合捕捉メカニズムからなる群から選択される捕捉メカニズムにより実施される、請求項54に記載のプロセス。
  56. アフィニティークロマトグラフィーは、プロテインA結合捕捉メカニズムにより実施され、組換え治療用タンパク質は、抗体または抗体断片である、請求項55に記載のプロセス。
  57. 4カラムPCCSにおける4つのカラムのうちの3つからの組換え治療用タンパク質を含有する溶出液は、4カラムPCCSの第4のカラムに供給される、請求項53~56のいずれか1項に記載のプロセス。
  58. 4カラムPCCSの第4のカラムによって、ウイルス不活性化のために組換え治療用タンパク質を含有する溶出液を低pHに保つことによりウイルスを不活性化するユニット操作が実施される、請求項57に記載のプロセス。
  59. 4カラムPCCSの第4のカラムは、約10分から約1.5時間の期間に、ウイルス不活性化のために組換えタンパク質を含有する溶出液を低pHに保つ、請求項58に記載のプロセス。
  60. MCCS2は、第2の周期的向流クロマトグラフィーシステム(PCCS2)である、請求項58に記載のプロセス。
  61. 4カラムPCCSの第4のカラムからの溶出液がPCCS2に供給される前に、インライン緩衝液調整リザーバを使用して、4カラムPCCSの第4のカラムからの溶出液のpHを調整する工程をさらに含む、請求項60に記載のプロセス。
  62. PCCS2は、3つのクロマトグラフィーカラムおよび1つのクロマトグラフィー用膜を含む、請求項61に記載のプロセス。
  63. PCCS2における3つのクロマトグラフィー用カラムによって、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィーによりPCCS1の溶出液から組換え治療用タンパク質を精製するユニット操作が実施される、請求項62に記載のプロセス。
  64. PCCS2における3つのクロマトグラフィーカラムからの溶出液をPCCS2におけるクロマトグラフィー用膜に供給する、請求項63に記載のプロセス。
  65. PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜によって、カチオンまたはアニオン交換クロマトグラフィーによりPCCS2の3つのクロマトグラフィー用カラムからの溶出液に
    存在する組換え治療用タンパク質をポリッシュするユニット操作が実施される、請求項64に記載のプロセス。
  66. PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜によって、カチオン交換クロマトグラフィーによりポリッシュするユニット操作が実施される、請求項65に記載のプロセス。
  67. クロマトグラフィー用膜のフロースルーおよび洗浄液は、組換え治療用タンパク質を含む、請求項66に記載のプロセス。
  68. PCCS2における3つのカラムからの溶出液が、PCCS2におけるクロマトグラフィー用膜に供給される前に、インライン緩衝液調整を使用して、PCCS2における3つのカラムからの溶出液のイオン濃度を調整する工程をさらに含む、請求項57に記載のプロセス。
  69. PCCS1とPCCS2の間のブレークタンクの使用をさらに含む、請求項60に記載のプロセス。
  70. PCCS2に供給される前に、PCCS1から溶出液を濾過する工程をさらに含む、請求項60に記載のプロセス。
  71. 治療用タンパク質薬物物質を医薬組成物に製剤化する工程をさらに含む、請求項44~70のいずれか1項に記載のプロセス。
  72. 組換え治療用タンパク質は、抗体もしくは抗体断片、酵素、工学的に操作されたタンパク質、または免疫原性タンパク質もしくはタンパク質断片である、請求項44~55および57~71のいずれか1項に記載の方法。
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