JP2015529633A - 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 - Google Patents
生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2015529633A JP2015529633A JP2015517672A JP2015517672A JP2015529633A JP 2015529633 A JP2015529633 A JP 2015529633A JP 2015517672 A JP2015517672 A JP 2015517672A JP 2015517672 A JP2015517672 A JP 2015517672A JP 2015529633 A JP2015529633 A JP 2015529633A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bag3
- antibody
- cancer
- serum
- disease
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6887—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from muscle, cartilage or connective tissue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/101—Temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7095—Inflammation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
a.血清、血漿、尿または唾液からなる生物学的試料を得るステップと、
b.生物学的試料における抗BAG3またはBAG3関連抗体の存在を決定するステップと
を含む方法である。
c.生物学的試料から得た値を、基準値または健康な提供者から得た値と比較する追加のステップをさらに含む。
a.血清、血漿、尿または唾液からなる生物学的試料を得るステップと、
b.生物学的試料における抗BAG3またはBAG3関連抗体の存在を決定するステップと
を含む方法である。
c.生物学的試料から得た値を、基準値または健康な提供者から得た値と比較するステップ
をさらに含む。
順方向:配列番号1:AACGGTGACCGCGACCCTTT
逆方向:配列番号2:CCTTCCCTAGCAGGCGGCAG
プライマーセット2
順方向:配列番号3:CCGGCTGGCCCTTCTTCGTG
逆方向:配列番号4:CAGCCTAGAGCCCTCCCGGG
プライマーセット3
順方向:配列番号5:GTCACCTCTGCGGGGCATGC
逆方向:配列番号6:GGTGACTGCCCAGGCTGCTC
プライマーセット4
順方向:配列番号7:CCAGCCTCCCACGGACCTGA
逆方向:配列番号8:CTGGTGACTGCCCAGGCTGC
プライマーセット5
順方向:配列番号9:CAGGAGCAGCACGCCACTCC
逆方向:配列番号10:TGGTCCAACTGGGCCTGGCT
生物学的試料におけるbag3 mRNA検出用のRT−PCRキットは、bag3遺伝子発現のレベルを、患者の生存と相関させることができ、予後および療法の選択に使用することができる。好ましくは、生物学的試料は、組織試料である。
ペプチド1:DRDPLPPGWEIKIDPQ(配列番号11)
ペプチド2:SSPKSVATEERAAPS(配列番号12)
ペプチド3:DKGKKNAGNAEDPHT(配列番号13)
ペプチド4:NPSSMTDTPGNPAAP(配列番号14)
の使用に関する。
(実施例1)
培養ヒト一次心筋細胞およびラット心筋細胞細胞系H9c2における血清枯渇誘発性ストレス
心筋細胞は、ストレス性作用物質に対する応答を開始する保護因子を放出することが知られている。Hsp70、Hp27、Hsp90および他などのストレス誘発性タンパク質は、細胞内活性を発揮するが、ストレスに応答して分泌もされうるので、心筋細胞によるBAG3放出を、ストレス条件下で分析した。この目的のため、培養ヒト一次心筋細胞またはラット心筋細胞細胞系H9c2における血清枯渇誘発性ストレスの作用を分析した。図1に示されているように、本発明者らは、血清枯渇に16時間曝露された心筋細胞の上清にBAG3タンパク質を検出することができた(図1A)。この時点で、細胞生存は、血清枯渇により影響を受けなかったので(結果は示されず)、BAG3放出が細胞壊死に起因するという仮説を放棄した。したがって本発明者らは、BAG3が開口放出小胞に存在するかを確認した。事実、分画遠心分離手順(16)を介して細胞外小胞を単離することによって、これらがBAG3タンパク質を含有することを見出した(図1B)。
CHF患者の血清における抗BAG3抗体
本発明者らは、CHF患者の血清が、二次抗体として抗ヒトgGを使用したウエスタンブロットによりBAG3タンパク質を認識したことを見出した(3つの異なる患者由来の血清を用いた実験の代表的な結果を図2Aに示す)。この結果は、CHF患者の血清に抗BAG3抗体の存在を示した。この知見を確認するため、特異的ELISA検査により抗BAG3抗体の存在について50人の健康な提供者由来の血清と比較した、50人のCHF患者(駆出率<60%)由来の血清を分析した。図2Bに示されているように、対照血清と比較して有意に高い値の抗BAG3抗体を患者のものにおいて検出した。ELISA検査のROC分析は、任意単位0.083のカットオフを使用して、74%の感受性および68%の特異性をもたらす(図2C)。
マクロファージへのBAG3結合
本発明者らは、心筋細胞によるBAG3放出の機能的有意性について検討した。タンパク質がオートクリン経路に関与しうることを除外し、それは、イソチオシアン酸フルオレセイン(FITC)コンジュゲートBAG3を使用した実験で評価したように、心筋細胞表面に結合しないと思われたからである(図3A)。したがって、本発明者らは、BAG3が血球と相互作用しうるか調査した。事実、FITC−BASG3が細胞系J774のマクロファージに結合したことを見出した(図3B)。マクロファージへのBAG3結合は、競合性BAG3ペプチドにより、または抗BAG3モノクローナル抗体のBAG3配列決定F(ab’)2フラグメントにより特異的に損なわれた(表I)。特に、J774細胞を、14nMのFITC−BAG3タンパク質および625nMのBAG3ペプチド(ペプチド1、ペプチド2、ペプチド3、ペプチド4もしくはスクランブルペプチド)と共に、または抗BAG3モノクローナルおよびポリクローナル抗体(マウスモノクローナルAC1、AC2およびウサギポリクローナルTOS2)の420nMのF(ab’)2フラグメントと共にインキュベートした。マウスIgGのF(ab’)2フラグメントまたはウサギIgGのF(ab’)2フラグメントを陰性対照として使用した。
免疫組織化学によるPDACにおけるBAG3発現
本発明者らは、抗BAG3モノクローナル抗体を含み、かつ免疫組織化学(IHC)によりBAG3タンパク質を検出することができる、免疫組織化学キット(IHC)を開発した。このキットは、分析した346全て(100%)のPDAC生検において、BAG3発現を明らかにした。BAG3染色は、ランゲルハンス島の中程度の陽性を明らかにしたが、正常な膵管および膵腺房細胞は、BAG3発現を有さなかった。このことは、正常な膵臓および腫瘍塊に隣接した非新生物膵臓組織のどちらにもあてはまった。BAG3染色は、腫瘍細胞の細胞質において主に観察された。BAG3染色の強度は、陽性癌細胞の数と同様に様々であった。さらに、ランゲルハンス島は、陽性であり、IHCの良好な内部対照を構成した(図4A)。したがって、キットはIHCによるPDACにおけるBAG3タンパク質の検出を可能にする。さらに、他の腫瘍または正常な組織においても、IHCによるBAG3タンパク質の検出を可能にする。
療法に応答するBAG3タンパク質
膵癌の治療のための第一次化学療法は、ゲムシタビンである。療法への応答におけるBAG3タンパク質の役割を調査するため、本発明者らは、ヒトPDAC細胞におけるBAG3の下方調節の効果を分析した。細胞に、特異的siRNA標的bag3 mRNAまたは非特異的(NT)siRNAを形質移入し、細胞をゲムシタビンにより、指示された時間にわたって処理した。BAG3のサイレンシングは、薬剤に応答した細胞アポトーシスを増強した(図8)。
膵癌患者の血清におけるBAG3タンパク質
膵癌患者における広範囲の発現のため、BAG3が膵癌患者の血清に存在するかを調査した。事実、BAG3は検出可能であることが見出された。抗BAG3抗体も検出可能であったが、BAG3と複合して広がっていた。したがって、BAG3/抗体複合体を検出するELISA検査を開発した。51人の健康な提供者および55人のPDACに罹患している患者の血清を分析した(表IV)。
定量的リアルタイムPCRによるBAG3発現
BAG3発現の免疫組織化学データも、25個のPDAC組織試料におけるbag3 mRNAレベルの測定を確認した(表V)。
本発明者らは、UKCTOCSから派生したプロスペクティブバイオバンク内の症例対照研究セットによるPDACの診断の前に、BAG3抗体レベルを評価した(非特許文献3)。試験コホートの202,000人の閉経後の女性が募集時に一回血清を提供し、50,000人の女性が毎年継続的に血清試料を提供した。任意化後に膵癌を診断された女性を、癌登録データおよび郵送追跡質問表により同定した。
細胞培養
HCMa(ヒト心筋細胞−成人)を、Sciencell Research Laboratories(San Diego,CA)から購入し、Cardiac Myocyte Medium(CMM、FBS 5%、Cardiac Myocyte Growth Supplement 1%、ペニシリン/ストレプトマイシン溶液1%)(Sciencell Research Laboratories,San Diego,CA)で増殖させた。全ての実験は、低継代細胞培養物により実施した。胎児ラット心筋芽細胞(H9c2系)をAmerican Type Culture Collection(ATCC,Manassas,VA,USA)から購入し、10%のウシ胎仔血清(FBS)、100U/mLのペニシリンおよび100μg/mLのストレプトマイシンを補充したダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)で増殖させた。ネズミ単球マクロファージ細胞系のJ774A.1(ATCC,Manassas,VA,USA)を、10%のウシ胎仔血清(FBS)、25mMのHEPES、2mMのグルタミン、100u/mLのペニシリンおよび100μg/mLのストレプトマイシンを補充したDMEMで増殖させた。
血清を、解離緩衝液(1.5%のBSAおよび0.2Mのグリシンアセテートを有するPBS、pH2.5)により1:40に希釈して、500μlの最終容量にし、室温で20分間インキュベートした。次に血清をMicrocon遠心分離フィルター装置YM−100(100,000MWカットオフ;Millipore,Billerica,MA,USA)の試料レザバーにピペットで移し、14,100rpmにより室温で20分間遠心分離した。次に試料レザバーをフロースルーから取り外し、第2の管に逆向きで配置し、5,000rpmにより室温で3分間遠心分離した。解離した抗体を含有する収集溶液を、1MTris緩衝液、pH9.0によりpH7.0に調整した。濃縮水量を、希釈緩衝液(1.5%のBSAおよび0.1%のTween20を有するPBS)により初期量(500ul)に再構築した。14免疫ブロットによるBAG3タンパク質の検出では、解離抗体を、5%のウシ血清アルブミンを含有するTBSTにおいて、4℃で一晩かけて1:200に希釈した。
細胞を採取し、プロテアーゼインヒビターカクテル(1mMのフッ化フェニルメチルスルホニル、1mg/mlのペプスタチンA、2mg/mlのアプロチニン)を補充した、20mMのHEPES(pH7.5)、150mMのNaCl、0.1%のTriton(TNN緩衝液)を含有する緩衝液において、3サイクルの凍結解凍により溶解した。可溶性タンパク質を10,000gにより15分間遠心分離した後に収集し、これらの量をBradfordアッセイ(Bio−Rad,Hercules,CA)により決定した。25μgの総タンパク質および血清試料(PBS−T 0.05%中1:2)を、8%または10%のSDS−PAGEゲルに流し、電気泳動的にニトロセルロース膜に移動させた。ニトロセルロースブロットを、TBST緩衝液(20mMのTris−HCl、pH7.4、500mMのNaClおよび0.1%のTween20)中10%の脱脂粉乳によりブロッキングし、5%のウシ血清アルブミンまたは5%の脱脂粉乳を含有するTBST中の一次抗体と共に、4℃で一晩かけてインキュベートした。免疫反応性を、Pierce(Rockford,IL)から購入したホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート二次抗体およびAmersham Life Sciences Inc.(Arlington Heights,IL USA)から購入したECL検出試薬を伴う連続インキュベーションにより検出した。
タンパク質バンドを切り取り、続いてゲル片をMilliQ水およびアセトニトリルで洗浄し、タンパク質をShevchenkoプロトコールに記載されているようにin situで消化した。簡潔には、ゲル片を1,4−ジチオトレイトール(10mM)で還元し、ヨードアセトアミド(50mM)でアルキル化し、次に洗浄し、トリプシン溶液(12ng/μL)により氷上で1時間かけて再水和した。30μLの重炭酸アンモニウム(10mM、pH7.5)を加えた後、試料を25℃で一晩かけて消化した。5μLの得られたペプチド混合物を、ナノAcquity LC system(Waters Corp.Manchester,United Kingdom)に注入した。ペプチドを1.7μmのBEH C-18カラム(Waters Corp.Manchester,United Kingdom)により200nl/分の流速で分離した。勾配(溶液A:0.1%のギ酸、溶液B:0.1%のギ酸、100%のACN)は、5%で出発し、55分後に50%のBで終了した。MSおよびMS/MSデータは、Q−TOF Premier質量分析計(Waters Corp.,Micromass,Manchester,United Kingdom)を使用して得た。二重および三重に投入したペプチドイオンを、MassLynxソフトウエアにより自動的に選択し、フラグメント化した。MSデータを自動的に処理し、データベース検索によるタンパク質同定のピークリストを、ProteinLynxソフトウエアにより作製した。データベース検索は、SwissProtタンパク質データベースを使用するMASCOTサーバーにより実施した。SwissProtヒトデータベース(405506配列;146166984残基)を検索し、固定修飾として1つの欠損切断、カルバミドメチル(C)が許容された。ペプチド耐性を60ppmに設定し、MS/MS耐性を0.8Daに設定した。
H9c2の無血清培地から、4℃での連続遠心分離(2000×gで15分間、10,000×gで30分間)により細胞および大型の壊死組織片を排除した。最初の2つの遠心分離のそれぞれの終了時に、ペレットを廃棄し、上清を次のステップのために保持する。次に最終上清を150,000×gにより4℃で90分間超遠心分離して(SW50.1ローターおよびOptima L−90K Ultracentrifuge,Beckman Coulterにより)、エキソソームをペレット化する。ペレットをPBSで洗浄して、汚染タンパク質を排除し、最後に150,000×gにより4℃で90分間遠心分離した。16洗浄した後、ペレット(エキソソーム)を20μlのPBSに再懸濁し、ウエスタンブロットにより、抗BAG3 TOS−2ポリクローナル抗体を用いて総細胞溶解産物と比較して分析した。Rab−4を開口放出小胞のマーカーとして分析した。
rBAG3結合−J774A.1細胞を、PBS中の2%のFBS+0.1%のNaN3により氷上で15分間ブロッキングし、異なる濃度のFITC−rBAG3タンパク質(7、14および70nm)または2%のFBS+0.1%のNaN3を含有するPBS中のFITC−BSA(70nM)と共に、暗黒中において4℃で30分間インキュベートした(2.5%、105/100μl)。PBSにより洗浄した後、細胞をPBS+2%のFBS+0.1%のNaN3に再懸濁し、FACScan(BD Biosciences)フローサイトメーターにより分析した。
ポリミキシンBスルフェート(5μg/ml)の不在下または存在下でLPS(10ng/ml)により、またはrBAG3(14nM)もしくはBSA(14nM)により10または20時間処理したJ774A.1細胞(5×104/96ウエルマイクロプレート中)の上清において、IL6を測定した。処理した後、50μLの細胞培養培地を収集し、マウスIL6 Kit(eBioscience)により三重に分析した。
細胞を6ウエルプレートにおいてカバーガラス上で60〜70%の集密度に培養し、等量のrBAG3−FITCおよびBSA−FITCタンパク質をHCMaに加え、0.1%のNaN3を有するJ774A1培養培地に1時間加えた。カバーガラスを1×PBSで洗浄し、1×PBS中3.7%のホルムアルデヒドにより室温で30分間固定し、次に1×PBS 0.1Mグリシンと共に5分間インキュベートした。1:100希釈の抗β−インテグリンモノクローナル抗体と共に4℃でインキュベートした後、カバーガラスを1×PBSにより3回洗浄した。1:500希釈のヤギ抗マウスIgGDyLight 594コンジュゲート抗体(Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA,USA)と共に室温で45分間インキュベートした後、カバーガラスを再び1×PBSにより3回洗浄した。Hoechst 33342(Sigma Aldrich、2g/ml)と共に室温で10分間インキュベートした後、カバーガラスを再びPBSにより3回、次に蒸留水で洗浄した。次にカバーガラスを、間に47%(v/v)のグリセロールを含有するスライドに載せた。試料を共焦点レーザー走査顕微鏡(Zeiss LSM共焦点顕微鏡、Germany)の使用により分析した。画像は、実験および対照材料を比較するとき、同じ取得パラメーター(レーザー強度、光電子倍増管、ピンホール口径、対物レンズ63×、ズーム2)を使用して連続走査モードにより取得した。図の生成では、最低蛍光強度の特徴の視感のために明るい細胞蛍光バックグラウンドを残すこと、および異なる実験群間の比較を助けることに注意しながら、画像の明度およびコントラストを調整した。最終的な図は、Adobe Photoshop 7およびAdobe Illustrator 10を使用して組み立てた。Leica Q9 Confocal SoftwareおよびImageJをデータ分析に使用した。
NUNC Maxisorp 96ウエルELISAプレートを、組換えBAG3タンパク質の、PBS、pH7中の1μg/ml(50μl/ウエル)により被覆し、4℃で一晩インキュベートした。プレートを、洗浄緩衝液(PBS+0.05%のTween20)により2回洗浄し、次にPBS中0.5%の魚肉ゼラチンにより室温で1時間ブロッキング(150μl/ウエル)した。ブロッキングした後、プレートを洗浄緩衝液により2回洗浄し、血清を洗浄緩衝液中0.5%の魚肉ゼラチンにより1:70に希釈し、次に三重に適用し(50μl/ウエル)、室温で2時間インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液により6回洗浄した。抗ヒトIgG(H+L)抗体(Sigma Aldrich)を、洗浄緩衝液中0.5%の魚肉ゼラチンにより1:20,000に希釈し、50μl/ウエルで加え、4℃で30分間インキュベートした。インキュベートした後、プレートを6回洗浄し、TMB(50μl/ウエル)(eBioscience)により現像し、反応を4.5Mの硫酸(25μl/ウエル)により停止させ、プレートを450nmで分光光度的に分析した。
培養上清中の細胞から放出されたNOの安定した代謝産物である亜硝酸塩含有量(NO2 -)を、ポリミキシンBスルフェート(Sigma−Aldrich,St.Louis,MO,USA)5μg/mlの不在下または存在下でLPS(10ng/ml)により、またはrBAG3(7、14および28nM)もしくはBSA(25nM)により24時間処理した、J774A.1細胞(5×104/96ウエルマイクロプレート)において測定した。NO2-の量をグリース反応により測定した。簡潔には、100μLの細胞培養培地を、100μLのグリース試薬、等量の、5%(v:v)のリン酸中1%(w:v)のスルファニルアミドおよび0.1%(w:v)のナフチルエチレンジアミン−HClと混合し、室温で10分間インキュベートし、次に吸光度をマイクロプレート読み取り機Titertek(Dasit,Cornaredo,Milan,Italy)により550nmで測定した。試料中のNO2−の量(μM)を、亜硝酸ナトリウム標準曲線から計算した。
NUNC Maxisorp 96ウエルELISAプレートを、PBS、pH7中の抗BAG3モノクローナル抗体AC−1、AC−2またはAC−3により被覆し、4℃で一晩インキュベートした。プレートを、洗浄緩衝液(PBS+0.05%のTween20)により2回洗浄し、次にPBS中0.5%の魚肉ゼラチンにより室温で1時間ブロッキング(150μl/ウエル)した。ブロッキングした後、プレートを洗浄緩衝液により2回洗浄し、血清を洗浄緩衝液中0.5%の魚肉ゼラチンにより1:70に希釈し、次に三重に適用し(50μl/ウエル)、室温で2時間インキュベートした。次にプレートを洗浄緩衝液により6回洗浄した。抗ヒトIgG(H+L)抗体(Sigma Aldrich)を、洗浄緩衝液中0.5%の魚肉ゼラチンにより1:20,000に希釈し、50μl/ウエルで加え、4℃で30分間インキュベートした。インキュベートした後、プレートを6回洗浄し、TMB(50μl/ウエル)(eBioscience)により現像し、反応を4.5Mの硫酸(25μl/ウエル)により停止させ、プレートを450nmで分光光度的に分析した。
免疫組織化学プロトコールには、キシレンによる脱パラフィン化(deparaffination)、純水までアルコールの濃度を下降させることによる再水和、クエン酸緩衝液、pH6.0による95℃での30分間の非酵素的抗原回復およびメタノール中のH2O2による20分間の内在性ペルオキシダーゼ消光が含まれる。PBSによりすすいだ後、試料を、0.1%のPBS/BSA中5%の正常なウマ血清によりブロッキングした。BAG3を検出するため、試料を、3マイクログラム/mlの濃度のBAG3モノクローナル抗体AC−1、AC−2またはAC−3と共に室温で1時間インキュベートした。PBSにより十分に洗浄した後、切片をビオチン化二次抗マウスIgGと共に20分間インキュベートし、次にすすぎ、アビジン−ビオチン複合体ペルオキシダーゼ(Novocastra−Leica Microsystems,Milano,ITから購入した)と共にインキュベートし、ジアミノベンジジン(Sigma−Aldrich,St.Louis,MO)により現像した。最後に、切片をヘマトキシリンで対比染色し、アルコールで脱水し、キシレンで清浄化し、Permount(Fisher Scientific,Milan,IT)により装填した。
切除膵癌の組織試験片を取り出し、直ぐに液体窒素により凍結し、RNA抽出まで−80℃で保存した。全RNAをフェノール抽出により凍結組織および膵癌細胞系から単離した(TRIzol Reagent,Invitrogen Corporation,Carlsbad,CA,USA)。組織試料において、癌細胞充実性は、大部分の細胞領域のクリオスタット切片作製および切開により濃縮された。RNA濃度および純度(A260:A280>2.0、A260/A230>1.8)は、NanoDrop Spectrophotometer(Thermo Fisher,Waltham,MA,USA)により確認した。1.0μgの全RNAを、製造会社(Applied Biosystems,Applera,Foster City,CA,USA)の説明書に従って、High−Capacity cDNA Reverse Transcription Kitの使用により逆転写した。定量的リアルタイムPCRアッセイを使用して、腫瘍組織試料におけるBAG3の発現差異を評価した。ヒトbag3遺伝子のプライマーを、Primm srl(Milano,Italy)(順方向プリマ−:(配列番号16)CCTGTTAGCTGTGGTTG、逆方向プライマー:(配列番号17)AACATACAGATATTCCTATGGC)により合成した。全てのqPCRは、25μlの最終容量において、以下の条件:95℃で5分間、40サイクルの95℃で10秒間および60℃で30秒間に従って、QuantiFast SYBR Green PCRキット(QIAGEN,Hamburg,Germany)を使用し、ABI PRISM(登録商標)7700 Sequence Detection System(Applied Biosystems,Applera,Foster City,CA,USA)を稼働して、試料あたり3回繰り返して実施した。データは、S.D.Sソフトウエアv2.1を使用して、閾サイクル(Ct)値として取得した。それぞれの試料において、bag3 mRNAの相対的発現レベルを、内在性GAPDHの発現に正規化した後、比較法の使用により得た。
Claims (18)
- 病理学的状態の診断における使用のための抗BAG3抗体。
- 前記抗BAG3抗体は、可溶性BAG3と結合して免疫複合体を形成することを特徴とする請求項1に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 前記診断は、インビトロまたはエキソビボであることを特徴とする請求項1または2のいずれか一項に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 前記診断の受容個体は、哺乳類、好ましくはヒトであることを特徴とする請求項1または3のいずれか一項に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 前記病理学的状態は、心臓疾患、癌、糖尿病、炎症および炎症性関連疾患であって、皮膚、神経、骨、血管および結合組織の炎症および炎症性関連疾患から選択されることを特徴とする請求項1または4のいずれか一項に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 前記心臓疾患は、狭心症、梗塞前狭心症、心筋梗塞、心不全、虚血、急性冠疾患、急性心不全、慢性心不全、および医原性心疾患から選択されることを特徴とする請求項5に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 前記癌は、膵癌、膀胱癌、および前立腺癌から選択されることを特徴とする請求項5に記載の使用のための抗BAG3抗体。
- 生物学的試料における、抗BAG3抗体または抗BAG3抗体が可溶性BAG3に結合して形成された免疫複合体の存在を検出する方法であって、
a.血清、血漿、尿、または唾液からなる生物学的試料を得るステップと、
b.生物学的試料における抗BAG3またはBAG3関連抗体の存在を決定するステップと
を含むことを特徴とする方法。 - c.生物学的試料から得た値を、基準値または健康な提供者から得た値と比較するステップ
をさらに含むことを特徴とする請求項8に記載の方法。 - 前記決定ステップbは、ELISA検査により実施されることを特徴とする請求項6または9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記血清、血漿、尿、または唾液は、哺乳類、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項6から10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗BAG3抗体または前記免疫複合体の存在は、病態と関連することを特徴とする請求項6から11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記病理学的状態は、心臓疾患、癌、炎症および炎症性関連疾患であって、皮膚、神経、骨、血管、および結合組織の炎症および炎症性関連疾患から選択されることを特徴とする請求項12に記載の方法。
- 前記心臓疾患は、狭心症、梗塞前狭心症、心筋梗塞、心不全、急性冠疾患、虚血、急性心不全、慢性心不全、または医原性心疾患から選択されることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 前記癌は、膵癌、膀胱癌、および前立腺癌から選択されることを特徴とする請求項13に記載の方法。
- 生物学的試料における抗BAG3抗体または抗BAG3抗体が可溶性BAG3に結合して形成された免疫複合体の検出のためのELISAキットの使用であって、BAG3組換えタンパク質または可溶性BAG3を捕捉するBAG3特異的マウスモノクローナル抗体AC−1、AC−2 AC−3、AC−4およびAC−5、ならびにヒト免疫グロブリンを認識することができる抗体を含むことを特徴とするELISAキットの使用。
- 前記生物学的試料は、血清、血漿、尿、または唾液試料であることを特徴とする請求項16に記載の使用。
- 前記血清、血漿、尿、または唾液試料は、哺乳類、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項17に記載の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP12172531.1A EP2676966A1 (en) | 2012-06-19 | 2012-06-19 | BAG3 as biochemical serum and tissue marker |
EP12172531.1 | 2012-06-19 | ||
PCT/EP2013/061976 WO2013189778A1 (en) | 2012-06-19 | 2013-06-11 | Bag3 as biochemical serum and tissue marker |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2015529633A true JP2015529633A (ja) | 2015-10-08 |
JP2015529633A5 JP2015529633A5 (ja) | 2016-07-28 |
JP6654432B2 JP6654432B2 (ja) | 2020-02-26 |
Family
ID=48607259
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015517672A Expired - Fee Related JP6654432B2 (ja) | 2012-06-19 | 2013-06-11 | 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 |
JP2015517669A Pending JP2015521475A (ja) | 2012-06-19 | 2013-06-11 | 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015517669A Pending JP2015521475A (ja) | 2012-06-19 | 2013-06-11 | 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20150132764A1 (ja) |
EP (3) | EP2676966A1 (ja) |
JP (2) | JP6654432B2 (ja) |
KR (2) | KR102150903B1 (ja) |
CN (2) | CN104507965B (ja) |
AU (2) | AU2013279601A1 (ja) |
BR (2) | BR112014031958A2 (ja) |
CA (2) | CA2876922C (ja) |
ES (1) | ES2795981T3 (ja) |
IN (2) | IN2014DN10561A (ja) |
PL (1) | PL2861618T3 (ja) |
WO (2) | WO2013189775A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ITMI20130403A1 (it) * | 2013-03-18 | 2014-09-19 | Biouniversa Srl | Anticorpi anti-bag3 per uso terapeutico |
CN105021825B (zh) * | 2015-07-09 | 2016-08-17 | 陈勇 | 一种检测胰腺癌相关多肽dap44的elisa试剂盒 |
CN105769900A (zh) * | 2016-03-22 | 2016-07-20 | 山西大学 | Bag3基因在制备抗膀胱癌药物中的应用 |
IT201600069391A1 (it) * | 2016-07-04 | 2016-10-04 | Univ Degli Studi Di Salerno | Uso della proteina bag3 e suoi frammenti peptidici per il controllo dell’omeostasi vascolare |
WO2021140173A1 (en) | 2020-01-10 | 2021-07-15 | Biouniversa S.R.L. | Methods and uses for treating fibrotic solid tumors with bags inhibitors |
US11940450B2 (en) | 2021-03-16 | 2024-03-26 | University Of Connecticut | Biomarker panel for non-invasive diagnosis of congenital renal dysfunction |
CN113862361B (zh) * | 2021-10-25 | 2023-08-15 | 中山大学孙逸仙纪念医院 | 一种诊断和治疗膀胱癌的分子标志物hsf1及其用途 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1323733A1 (en) * | 2001-12-28 | 2003-07-02 | Arturo Leone | BAG3 nucleotide and protein sequences to be used in research, diagnostics and therapy for cell death-involving diseases |
WO2011067377A1 (en) * | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Biouniversa S.R.L. | Biochemical serum marker |
WO2012049664A2 (en) * | 2010-10-15 | 2012-04-19 | Sense Proteomic Limited | Auto-antigen biomarkers for lupus |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5652223A (en) * | 1994-03-14 | 1997-07-29 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | DNA encoding CAI resistance proteins and uses thereof |
US7951544B1 (en) * | 1999-07-09 | 2011-05-31 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Method for determining the prognosis of cancer patients by measuring levels of bag expression |
US20030073623A1 (en) * | 2001-07-30 | 2003-04-17 | Drmanac Radoje T. | Novel nucleic acid sequences obtained from various cDNA libraries |
DE60233744D1 (de) * | 2001-09-20 | 2009-10-29 | Univ Texas | Bestimmung der zirkulierenden therapeutischen antikörper, antigene sowie antigen-antikörper-komplexe mit elisa-tests |
US20090047689A1 (en) * | 2007-06-20 | 2009-02-19 | John Kolman | Autoantigen biomarkers for early diagnosis of lung adenocarcinoma |
WO2011044927A1 (en) * | 2009-10-12 | 2011-04-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | A method for the diagnosis or prognosis of an advanced heart failure |
-
2012
- 2012-06-19 EP EP12172531.1A patent/EP2676966A1/en not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-06-11 AU AU2013279601A patent/AU2013279601A1/en not_active Abandoned
- 2013-06-11 BR BR112014031958A patent/BR112014031958A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-06-11 PL PL13728180T patent/PL2861618T3/pl unknown
- 2013-06-11 KR KR1020157001313A patent/KR102150903B1/ko active IP Right Grant
- 2013-06-11 CA CA2876922A patent/CA2876922C/en active Active
- 2013-06-11 KR KR20157001228A patent/KR20150036102A/ko not_active Application Discontinuation
- 2013-06-11 WO PCT/EP2013/061971 patent/WO2013189775A1/en active Application Filing
- 2013-06-11 CN CN201380032138.3A patent/CN104507965B/zh active Active
- 2013-06-11 JP JP2015517672A patent/JP6654432B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-06-11 ES ES13728180T patent/ES2795981T3/es active Active
- 2013-06-11 BR BR112014031957A patent/BR112014031957A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-06-11 CN CN201380032196.6A patent/CN104619861A/zh active Pending
- 2013-06-11 WO PCT/EP2013/061976 patent/WO2013189778A1/en active Application Filing
- 2013-06-11 CA CA2876872A patent/CA2876872A1/en not_active Abandoned
- 2013-06-11 EP EP13728375.0A patent/EP2861754A1/en not_active Ceased
- 2013-06-11 JP JP2015517669A patent/JP2015521475A/ja active Pending
- 2013-06-11 AU AU2013279604A patent/AU2013279604B2/en not_active Ceased
- 2013-06-11 EP EP13728180.4A patent/EP2861618B1/en active Active
-
2014
- 2014-12-11 IN IN10561DEN2014 patent/IN2014DN10561A/en unknown
- 2014-12-11 IN IN10562DEN2014 patent/IN2014DN10562A/en unknown
- 2014-12-16 US US14/572,445 patent/US20150132764A1/en not_active Abandoned
- 2014-12-16 US US14/572,654 patent/US10359433B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1323733A1 (en) * | 2001-12-28 | 2003-07-02 | Arturo Leone | BAG3 nucleotide and protein sequences to be used in research, diagnostics and therapy for cell death-involving diseases |
WO2011067377A1 (en) * | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Biouniversa S.R.L. | Biochemical serum marker |
WO2012049664A2 (en) * | 2010-10-15 | 2012-04-19 | Sense Proteomic Limited | Auto-antigen biomarkers for lupus |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ANTI-CANCER DRUGS, vol. 23, JPN6017015768, April 2012 (2012-04-01), pages 445 - 454, ISSN: 0003551670 * |
CELL DEATH AND DISEASE, vol. 4, JPN6017015770, February 2013 (2013-02-01), pages 495, ISSN: 0003551671 * |
FEBS LETTERS, vol. 503, JPN6017015763, 2001, pages 151 - 157, ISSN: 0003551668 * |
THE AMERICAN JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY, vol. 108, JPN6017015773, July 2013 (2013-07-01), pages 1178 - 1180, ISSN: 0003551673 * |
THE AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 178, no. 6, JPN6017015766, 2011, pages 2504 - 2512, ISSN: 0003551669 * |
THE AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 181, no. 5, JPN6017015771, August 2012 (2012-08-01), pages 1524 - 1529, ISSN: 0003551672 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20150147767A1 (en) | 2015-05-28 |
EP2861618B1 (en) | 2020-03-11 |
IN2014DN10562A (ja) | 2015-08-28 |
CN104507965B (zh) | 2019-04-26 |
KR102150903B1 (ko) | 2020-09-03 |
EP2676966A1 (en) | 2013-12-25 |
CA2876922C (en) | 2022-09-20 |
US20150132764A1 (en) | 2015-05-14 |
BR112014031958A2 (pt) | 2017-08-01 |
KR20150036102A (ko) | 2015-04-07 |
EP2861618A1 (en) | 2015-04-22 |
PL2861618T3 (pl) | 2020-09-21 |
WO2013189775A1 (en) | 2013-12-27 |
CN104507965A (zh) | 2015-04-08 |
BR112014031957A2 (pt) | 2017-08-01 |
CA2876922A1 (en) | 2013-12-27 |
KR20150036111A (ko) | 2015-04-07 |
AU2013279601A1 (en) | 2015-01-15 |
CN104619861A (zh) | 2015-05-13 |
AU2013279604B2 (en) | 2018-03-29 |
JP6654432B2 (ja) | 2020-02-26 |
AU2013279604A1 (en) | 2014-12-18 |
WO2013189778A1 (en) | 2013-12-27 |
US10359433B2 (en) | 2019-07-23 |
CA2876872A1 (en) | 2013-12-27 |
ES2795981T3 (es) | 2020-11-25 |
EP2861754A1 (en) | 2015-04-22 |
JP2015521475A (ja) | 2015-07-30 |
IN2014DN10561A (ja) | 2015-08-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6654432B2 (ja) | 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのbag3 | |
Langley et al. | Extracellular matrix proteomics identifies molecular signature of symptomatic carotid plaques | |
Bi et al. | Mitochondrial damage‐induced innate immune activation in vascular smooth muscle cells promotes chronic kidney disease‐associated plaque vulnerability | |
CN106461681B (zh) | 用于诊断血管疾病的生物标志物及其用途 | |
WO2015089575A1 (en) | Method of diagnosis and treatment | |
JP5946937B2 (ja) | 線維性疾患および癌における治療選択肢としてのccr6を介するccl18シグナル伝達の遮断 | |
JP2021533163A (ja) | アネキシンa1を介した心血管石灰化の阻害に関する方法および組成物 | |
KR101983435B1 (ko) | Rnf20의 신장암 또는 간암 진단, 치료 및 치료제 스크리닝 용도 | |
JP7073528B2 (ja) | 同種移植片レシピエントを分類するためのバイオマーカー | |
CN108473529A (zh) | 检测和治疗肺高压的方法 | |
AU2012271293B2 (en) | Biomarkers for epithelial cancer diagnosis and treatment | |
KR20190020364A (ko) | 혈액 내 gastrokine 1 단백을 이용하는 위암 진단 | |
JPWO2017022634A1 (ja) | グリオーマの予後、遠隔部再発リスク及び浸潤を判定する方法及びキット並びにグリオーマを処置するための医薬組成物 | |
US11439696B2 (en) | Modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin 9 expression (PCSK9) with HSP 27 and/or HSP25 | |
CN117106894A (zh) | Nkrf在病理性心脏重构诊治中的应用 | |
JP6381013B2 (ja) | アトピー性角結膜炎の検出方法 | |
KR20200135994A (ko) | 심장 근육 손상의 진단 방법 | |
WO2011089392A1 (en) | Methods & devices for diagnosing cardiac disorders | |
FR3010187A1 (fr) | Utilisation de l'urotensine ii et/ou l'urp comme marqueurs pour le diagnostic du vasospasme post hsa |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150302 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160608 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160608 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170809 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20180123 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180522 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20180530 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20180622 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190826 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190926 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20191024 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191112 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200130 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6654432 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |