JP2015519048A - 膵臓前駆細胞及び機能的β細胞をhPSCから生成するための方法及び組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
EGF及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
アンフィレグリン(AR)及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
トランスフォーミング成長因子α(TGFa)及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
ベタセルリン(BTC)及び/又はその活性変異体及び/又は断片;
エピレグリン(EPR)及び/又はその活性変異体及び/又は断片;
ニューレグリン(例えば、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4を含む)及び/又はその活性変異体及び/又はそ断片;及び/又は
これらの二種又はそれ以上の組み合わせ
を含んでなる。
ニコチンアミド(ナイアシンアミド及びニコチン酸アミドとしても知られている)、その塩、溶媒和物及び複合体;
ベンズアミド及び/又は3−アミノベンズアミド(Otonkoski et al., 1993)などのポリ(ADP−リボース)合成酵素阻害剤;
サーチノール、M15、スプリトマイシン(Bitterman et al., 2002)などのSir-2阻害剤;
AN-9、CI-994、FK228、LAQ-824、MS275、SAHA、バルプロ酸、TSA、酪酸ナトリウム(Bitterman et al., 2002)などのHDAC阻害剤;及び/又は
これらの二種又はそれ以上の組み合わせ
を含んでなる。
Noggin及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
BMPR1A及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
BMPR1B及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
ドルソモルフィン(Dorsomorphin)及び/又はその塩又は溶媒和物;
LDN 193189(DM-3189としても知られている)及び/又はその塩又は溶媒和物;
CHORDIN及び/又はその活性複合体及び/又は断片;及び/又は
これらの二種又はそれ以上のいずれかの組み合わせ
の一種又はそれ以上を含んでなる。
a)多能性幹細胞集団を
I)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a又はCIHR 99021)、
II)nodalアゴニスト(場合によってはActA)、FGFアゴニスト(場合によってはbFGF)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a、CIHR99021)及び
III)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びFGFアゴニスト(場合によってはbFGF)
の組み合わせと接触させ、ステージ1の分化細胞を製造する工程、
b)ステージ1の分化細胞を、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a)及び/又はnoggin成分(場合によってはドルソモルフィン)と接触させ、ステージ2の分化細胞を製造する工程、
c)ステージ2の分化細胞を、Noggin成分(場合によってはNoggin)、レチノイン酸(RA)又はRA類似体、及び場合によってはシクロパミン−KAAD(Cyc)、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)、及び/又はエキセンディン−4成分(場合によってはエキセンディン−4)と接触させることにより、内胚葉細胞集団を提供する工程、及び
d)内胚葉細胞集団を、EGF成分、ニコチンアミド成分及び/又はNoggin成分、場合によっては少なくとも一種のEGF成分と少なくとも一種のニコチンアミド成分とを含んでなる組み合わせと、少なくとも一部の内胚葉細胞集団をNKX6-1+膵臓前駆細胞へ分化誘導するのに十分な量で接触させる工程。
a)本明細書に記載の方法に従ってNKX6-1陽性膵臓前駆細胞集団を製造し、
b)前記細胞集団、又はNKX6-1富化若しくは単離集団を被検体内に導入すること、
を含んでなる生成方法を包含する。
a)NKX6-1陽性膵臓前駆細胞を含んでなる細胞集団を生成し、
b)NKX6-1陽性膵臓前駆細胞を、インスリン産生細胞、場合によってはNKX6-1陽性インスリン産生細胞を得るのに十分な時間CD34+内皮細胞と共培養すること
を含んでなる生成方法を包含する。
a)EGF成分、
b)ニコチンアミド成分、及び/又は
Noggin成分
を含んでなるキットを包含する。
本明細書で使用される用語「FGFアゴニスト」は、サイトカインなどの分子を意味し、例えば、FGFシグナリング経路を活性化させる、例えばFGF受容体を結合して活性化させるFGF又は低分子を包含する。本明細書で使用される用語「FGF」は、任意の線維芽成長因子、例えばヒトFGF1(遺伝子ID:2246)、FGF2(bFGFとしても知られている;遺伝子ID:2247)、FGF3(遺伝子ID:2248)、FGF4(遺伝子ID:2249)、FGF5(遺伝子ID:2250)、FGF6(遺伝子ID:2251)、FGF7(遺伝子ID:2252)、FGF8(遺伝子ID:2253)、FGF9(遺伝子ID:2254)及びFGF10(遺伝子ID:2255)を指し、それらの活性複合体及び断片(天然活性複合体及び断片を含む)を含んでいてもよい。幾つかの実施形態において、FGFは、bFGF、FGF10、FGF4及び/又はFGF2である。
a)多能性幹細胞集団を
I)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a又はCIHR 99021)、
II)nodalアゴニスト(場合によってはActA)、FGFアゴニスト(場合によってはbFGF)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a、CIHR99021)及び
III)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びFGFアゴニスト(場合によってはbFGF)
の組み合わせと接触させ、ステージ1の分化細胞を製造する工程、
b)ステージ1の分化細胞を、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a)及び/又はnoggin成分(場合によってはドルソモルフィン)と接触させ、ステージ2の分化細胞を製造する工程、
c)ステージ2の分化細胞を、Noggin成分(場合によってはNoggin)、レチノイン酸(RA)又はRA類似体、及び場合によってはシクロパミン−KAAD(Cyc)、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)、及び/又はエキセンディン−4成分(場合によってはエキセンディン−4)と接触させることにより、内胚葉細胞集団を提供する工程、及び
d)内胚葉細胞集団を、EGF成分、ニコチンアミド成分及び/又はNoggin成分、場合によっては少なくとも一種のEGF成分と少なくとも一種のニコチンアミド成分とを含んでなる組み合わせと、少なくとも一部の内胚葉細胞集団をNKX6-1+膵臓前駆細胞へ分化誘導するのに十分な量で接触させる工程。
上述のように、NKX6-1膵臓前駆細胞及び分化されたインスリン産生細胞を単離することができる。従って、更なる側面は、本明細書に記載される方法に従って製造されるNKX6-1陽性膵臓前駆細胞及び/又は分化させたインスリン産生細胞の富化、精製又は単離された細胞集団を包含する。別の側面は、NKX6-1陽性膵臓前駆細胞及び/又は分化させたインスリン産生細胞の富化、精製又は単離された細胞集団と、好適な希釈剤とを含んでなる組成物を包含する。
細胞培養基本培地;及び
i)EGF成分、
ii)ニコチンアミド成分、及び
iii)Noggin成分、及び
iv)場合によってはエキセンディン−4成分
の一種又はそれ以上
を含んでなる培地組成物である。
EGF成分、
ニコチンアミド成分、及び/又は
Noggin成分、及び/又は
場合によってはエキセンディン−4成分
を含んでなるキットを包含する。
NKX6-1+HPSC由来膵臓前駆細胞(例えばHpx1/2富化された)及びそれらのβ細胞誘導体は多数の用途に使用可能である。
機能的β細胞を生成する能力を有する膵臓前駆細胞は、重要な転写因子:PDX1、SOX9、NKX6-1及びPTF1Aの発現を特徴とする。NKX6-NKX6-11は、機能的β細胞集団の発生に必須であるため、特に重要である(Sander et al., 2000)。現在までの間、PDX1膵臓内胚葉からのこれら前駆細胞の発生を制御する因子は知られていない。
NENAEx因子の組み合わせのいずれがNKX6-1+前駆細胞の生成にとって必須であるかを更に決定するために、レポーターNKX6-1-GFP hESC上及び第二の未操作hESC系H1(WA01)上で異なる組み合わせを試験した。細胞内フローサイトメトリーを使用して、H1由来集団におけるNKX6-1+細胞の割合を評価した。図4に示すように、Noggin、EGF及びニコチンアミドの組み合わせ(NENA)は、NKX6-1を誘導する上でNoggin、EGF、ニコチンアミド及びエキセンディン−4の四種の因子の組み合わせと同等に有効であった。EGF及びニコチンアミドの組み合わせ(ENA)はNKX6-1発現を誘導した(46.9±7.4%)が、レベルは常に三種の因子の組み合わせ(NENA)と比べて低いものであった(図4A)。H1(WA01)分化は、NENA処理に応答して非常によく似たパターンを示した(図4B)。H9細胞系を使用して同様のデータが得られた。これは、この誘導プロトコールが細胞系依存型ではなく、hPSC由来NKX6-1前駆細胞の生成に広く適用可能であることを実証している。
hPSC由来NKX6-1富化集団の発生能を確立するために、免疫無防備マウスの乳房脂肪体内に5-10´106個のNENA誘導細胞を移植した(分化14日目)。移植後4週間での移植片分析は、PDX1及びNKX6-1の両方の発現を維持した導管様構造(例えば、CK19+)の存在を明らかにした。この段階で、移植片には僅かしかグルカゴン+細胞が含まれておらず、インスリン+細胞はほぼ含まれていなかった(図5A)。移植後6週間で、移植片には相当数のNKX6-1+細胞が含まれていた(図5B)。6週目の移植片は、4週目の移植片と比べて、含まれるインスリン+細胞の割合が高かった。これらのインスリン+細胞は全てNKX6-1を共発現した(図5B)。移植片中に存在するインスリン+細胞がhPSC由来インスリン産生細胞を表すことを実証するために、抗ヒトcペプチド抗体を用いて免疫組織化学を行った。図5Cに示すように、移植片はcペプチド+細胞を含有しており、このことは、インスリンが血液から採取されているのではなく、ヒト細胞によって産生されていることを裏付けるものである。更に、抗グルカゴン抗体で共染色することにより、cペプチド+細胞がグルカゴンを発現しないことが判明した。このことは、それらが多ホルモン性ではないことを示している(図5C)。これら移植研究からの知見は、NENA誘導前駆細胞がインビボ移植後にインスリン産生細胞及び導管細胞へ分化可能であることを実証している。
最近の研究によって、表面マーカーCD142がhPSC由来培養物から多能性膵臓前駆細胞を単離するのに使用可能な潜在的エピトープとして同定された(Kelly et al., 2011)。異なる抗体のライブラリーを分析すると、二種の前記抗体HPx1及びHPx2がNKX6-1+前駆細胞集団を染色することが判明した。図6に示されるように、HPx(例えば、HPx1及び/又はHPx2)は培養13日目にNENA誘導NKX6-1-GFP+集団のおよそ60%を染色する。HPxはまた、NKX6-1-GFP-陰性細胞集団を染色する。非処理培養物において検出されたHPx+細胞はごく僅かであり、このことは、HPx染色がNKX6-1+前駆細胞の発生とよく相関していることを実証している。抗CD142抗体は、Kelly et al.らによって報告されるように(Kelly et al., 2011)、NKX6-1-GFP集団のかなりの部分を標識する(図6C)。しかしながら、これらの条件下ではわずかなNKX6-1+細胞しか検出されないという事実にもかかわらず、非誘導培養物も大きなCD142集団を含有する(図6C)。これらの知見は、CD142発現がNKX6-1+前駆細胞の発生とそれほど相関していないことを示す。HPx染色パターンは、それがNKX6-1+前駆細胞の発生をモニタリングし、かつ、細胞培養混合物からそれらを単離するための優れた試薬であることを示唆している。
HPx(例えば、HPx、HPx1、HPx2、Px、Px1及びPx2は互換可能に使用される:HPx1及びHPx2は同じ集団を認識し、HPx1とHPx2は互換可能に及び/又は共に使用できる)とCD142抗体とを比較する2つの実験を行った(図7)。
BMP4、bFGF、VEGFの組み合わせによる誘導によって、H1 hESC細胞系を用いてHES由来内皮細胞を生成した。6日目に、CD34+を選別し、50ng/mlのbFGF及び100ng/mlのVEGFを補充したEGM-2培地(Lonza)中で培養した。6日目のCD34+細胞の分析により、それらがKDR、CD31及びvWFを発現し、かつ、アセチル化LDLを取り込む能力を示すことが判明した(図8)。
これらの研究に関して、NKX6-1-GFPレポーター細胞系から生成した培養10日目のNENAEx誘導前駆細胞を凝集させ、凝集物をコンフルーエントなhESC由来CD34+内皮細胞上に播種した。これら培養物を5ng/mlのbFGF及び100ng/mlのVEGFを含むNENAEx含有培地中に更に7日間維持した。対照として、細胞を単層として保つか、又は、凝集物をコラーゲン被覆皿上にて内皮細胞不在下で培養した。図9Aに示すように、内皮細胞上で培養した細胞は、単層として培養されたもの又はコラーゲン上の凝集物として培養されたものよりも高い割合でNKX6-1-GFP+細胞を維持した。インスリン産生細胞の存在に関して異なる集団の分析により、顕著な差異が明らかになった。内皮細胞と共培養させた凝集物のみが、かなりの数のcペプチド+細胞を生成した。NKX6-1-GFP+細胞のおよそ33%がcペプチド+であった。これは、凝集物集団全体の17%(53%GFP細胞の33%)を表す。RT-qPCR分析は、フローサイトメトリー分析を裏付け、内皮細胞と共培養させた集団のみがインスリン及びグルカゴンメッセージの両方を発現したことを示した(図9B)。これらの知見は、hESC由来内皮細胞がNKX6-1+前駆細胞からのcペプチド+細胞の成熟をサポートすることができることを実証している。cペプチド+細胞がNKX6-1-GFPを共発現するという事実は、それらが単一ホルモン性β細胞であることを強く示唆している。
**エキセンディン−4はNKX6-1の誘導には必要とされない。
後部前腸(ステージ3)集団のマーカー
ステージ3の内胚葉細胞は少なくともFOXA2を発現しなければならず、PDX1に対して陽性又は陰性であり得る(HNF1b、肝細胞核因子4、α(HNF4A)遺伝子ID:3172及びワンカットホメオボックス1(ONECUT1/HNF6)遺伝子ID:3175などの他の因子も発現し得る)。
NKX6-1+膵臓前駆細胞に分化させた細胞は、NKX6-1を発現することに加えて、FOXA2、PDX1、SRY(性別決定領域Y)−ボックス9(SOX9)遺伝子ID:6662及び膵臓特異的転写因子1a(PTF1A)遺伝子ID:256297を発現する。
・Noggin
・BMPR1A
・BMPR1B
・ドルソモルフィン
・LDN 193189
・CHORDIN
・又は上記の組み合わせ。
・EGF
・アンフィレグリン(AR)
・トランスフォーミング成長因子α(TGFa)
・ベタセルリン(BTC)
・ヘパリン結合EGF(HB-EGF)
・エピレグリン(EPR)
・ニューレグリン(NRG1、NRG2、NRG 3、NRG4)
又は上記の組み合わせ、及びMAPK又はPI3キナーゼ活性化因子などを含む下流シグナル分子に影響を与え得るEGF因子。
・ポリ(ADP−リボース)合成酵素阻害剤、例えばベンズアミド及び3−アミノベンズアミドなど(Otonkoski et al., 1993)
・Sir-2阻害剤、例えばサーチノール、M15、スプリトマイシンなど(Bitterman et al., 2002)
・他のHDAC阻害剤、例えばAN-9、CI-994、FK228、LAQ-824、MS275、SAHA、バルプロ酸、TSA、酪酸ナトリウムなど(Bitterman et al., 2002)
HPSC由来膵臓前駆細胞(HPx1/2富化)及びそれらのβ細胞誘導体を使用して予測薬物毒性学及び創薬を行うことができた。
1)インビトロで生成したNKX6-1陽性及び/又はインスリン陽性細胞の有効性及び機能性を試験するための、糖尿病動物モデルへの細胞移植。簡潔には、異なる免疫不全動物モデル(ここで、遺伝学的に又は薬物処理(ストレプトゾトシン処理)により糖尿病を誘導することができる)へ細胞を移植し、動物血清中のヒトCペプチドレベル及び血中グルコース濃度を測定することによってヒトPSC由来膵臓細胞(NKC6-1陽性及び/又はインスリン陽性)の機能性を評価する。
NENAを使用して実施例1に記載したように膵臓前駆細胞を調製した。図10に示すように、HPx1+細胞を、蛍光活性化細胞選別(FACS)を用いて単離し、HP´1+細胞及び選別前細胞(PS)と比べて高レベルのNKX6-1/TBP、SOX9/TBP及びPTF1a/TBP mRNAを発現する集団について富化する。
実施例1に記載した「NENA」処理を用いてNKX6-1+膵臓細胞を生成し、免疫無防備マウスに移植した。これらの細胞は、グルコースチャレンジに応答するヒトCペプチド分泌によって示される(indicted)ように機能的インスリン産生細胞を生成する。H1(WA01)d13分化細胞を免疫無防備マウスへ移植してから6、12及び18週後に、グルコースチャレンジに応答するヒトCペプチド分泌レベルをELISAによって測定した(図11)。5回の移植(1、2、3、4及び5とする)+対照細胞を使用する移植(「対照」とする)を行った。マウス1、2、4及び5の血清Cペプチドレベルは著しく上昇した。
Bitterman, K.J., Anderson, R.M., Cohen, H.Y., Latorre-Esteves, M. and Sinclair, D.A. 2002 Inhibition of Silencing and Accelerated Aging by Nicotinamide, a putative negative regulator of yest Sir2 and Human SIRT1. JBC 277(47): 45099
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Claims (29)
- 内胚葉細胞集団からNKX6-1+膵臓前駆細胞を製造する方法であって、内胚葉細胞集団を、EGF成分、ニコチンアミド成分及び/又はNoggin成分、場合によっては少なくとも一種のEGF成分と少なくとも一種のニコチンアミド成分との組み合わせと接触させ、少なくとも一部の内胚葉細胞集団のNKX6-1+膵臓前駆細胞への分化を誘導することを含んでなり、前記組み合わせはさらに少なくとも一種のNoggin成分を含んでいてもよい、製造方法。
- Noggin成分が、
Noggin及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
BMPR1A及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
BMPR1B及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
ドルソモルフィン(Dorsomorphin)及び/又はその塩又は溶媒和物;
LDN 193189(DM-3189としても知られている)及び/又はその塩又は溶媒和物;
CHORDIN及び/又はその活性複合体及び/又は断片;及び/又は
これらの二種又はそれ以上のいずれかの組み合わせ
の一種又はそれ以上を含んでなる、請求項1に記載の方法。 - Noggin成分がNogginである、請求項2に記載の方法。
- EGF成分が、
EGF及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
アンフィレグリン(AR)及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
トランスフォーミング成長因子α(TGFa)及び/又はその活性複合体及び/又は断片;
ベタセルリン(BTC)及び/又はその活性変異体及び/又は断片;
エピレグリン(EPR)及び/又はその活性変異体及び/又は断片;
ニューレグリン(例えば、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4を含む)及び/又はその活性変異体及び/又は断片;及び/又は
これらの二種又はそれ以上の組み合わせ
を含んでなる、請求項1に記載の方法。 - EGF成分がEGF及び/又はその活性複合体及び/又は断片である、請求項4に記載の方法。
- EGF複合体がヘパリン結合EGF(HB-EGF)である、請求項5に記載の方法。
- ニコチンアミド成分が、
ニコチンアミド(ナイアシンアミド及びニコチン酸アミドとしても知られている)、その塩、溶媒和物及び複合体;
ベンズアミド及び/又は3−アミノベンズアミドなどのポリ(ADP−リボース)合成酵素阻害剤;
サーチノール、M15、スプリトマイシンなどのSir-2阻害剤;
AN-9、CI-994、FK228、LAQ-824、MS275、SAHA、バルプロ酸、TSA、酪酸ナトリウムなどのHDAC阻害剤;及び/又は
これらの二種又はそれ以上の組み合わせ
を含んでなる、請求項1に記載の方法。 - ニコチンアミド成分がニコチンアミド及び/又はその塩、溶媒和物及び/又は複合体である、請求項7に記載の方法。
- 少なくとも一種のNoggin成分、少なくとも一種のEGF成分及び少なくとも一種のニコチンアミド成分の組み合わせが、Noggin、EGF及びニコチンアミド(例えばNENA)を含んでなる、請求項1に記載の方法。
- エキセンディン−4成分を更に含んでなる、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- エキセンディン−4成分がエキセンディン−4である、請求項10に記載の方法。
- 内胚葉細胞集団が、胚性幹細胞(ESC)又は人工多能性幹細胞(iPSC)などの多能性幹細胞(PSC)から分化させたものである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 多能性幹細胞がヒトESC(hESC)又はヒトiPSC(hiPSC)である、請求項12に記載の方法。
- 内胚葉細胞集団を製造することを最初に含んでなる、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 内胚葉細胞集団を製造する方法が、工程(又は副工程)a、b及びcの一つ又はそれ以上と工程dとを含んでなる、請求項14に記載の方法:
a)多能性幹細胞集団を
I)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a又はCIHR 99021)、
II)nodalアゴニスト(場合によってはActA)、FGFアゴニスト(場合によってはbFGF)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a、CIHR99021)及び
III)nodalアゴニスト(場合によってはActA)及びFGFアゴニスト(場合によってはbFGF)
の組み合わせと接触させ、ステージ1の分化細胞を製造する工程、
b)ステージ1の分化細胞を、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)及び場合によってはwntシグナリングアゴニスト(場合によってはWnt3a)及び/又はnoggin成分(場合によってはドルソモルフィン)と接触させ、ステージ2の分化細胞を製造する工程、
c)ステージ2の分化細胞を、Noggin成分(場合によってはNoggin)、レチノイン酸(RA)又はRA類似体、及び場合によってはシクロパミン−KAAD(Cyc)、FGFアゴニスト(場合によってはFGF10)、及び/又はエキセンディン−4成分(場合によってはエキセンディン−4)と接触させることにより、内胚葉細胞集団を提供する工程、及び
d)内胚葉細胞集団を、EGF成分、ニコチンアミド成分及び/又はNoggin成分、場合によっては少なくとも一種のEGF成分と少なくとも一種のニコチンアミド成分とを含んでなる組み合わせと、少なくとも一部の内胚葉細胞集団をNKX6-1+膵臓前駆細胞へ分化誘導するのに十分な量で接触させる工程。 - NKX6-1+インスリン産生細胞集団を生成する方法であって、
a.請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法に従ってNKX6-1陽性膵臓前駆細胞集団を製造し、
b.前記細胞集団、又はNKX6-1富化若しくは単離集団を被検体内に導入すること、
を含んでなる生成方法。 - インスリン産生細胞を生成する方法であって、
a.NKX6-1陽性膵臓前駆細胞を含んでなる細胞集団を生成し、
b. NKX6-1陽性膵臓前駆細胞をCD34+内皮細胞と共培養すること
を含んでなる生成方法。 - NKX6-1陽性膵臓前駆細胞を含んでなる細胞集団が、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法に従って製造される、請求項17に記載の方法。
- NKX6-1陽性細胞集団を富化又は単離することを含んでなる、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 富化又は単離工程が、細胞集団をHPxエピトープ検出抗体と接触させ、HPx1及び/又はHPx2結合細胞亜集団を単離又は部分的に精製することを含んでなる、請求項19に記載の方法。
- 前記HPxエピトープ検出抗体がHPx1及び/又はHPx2である、請求項20に記載の方法。
- 請求項19〜21のいずれか一項に記載の方法に従って製造される富化及び/又は単離されたNKX6-1陽性細胞集団、及び/又は、前記細胞集団と好適な希釈剤とを含んでなる組成物。
- 少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%又は最大で約95%のNKX6-1陽性細胞を含んでなる、請求項22の富化されたNKX6-1陽性細胞集団。
- 少なくとも30%、35%、40%又は少なくとも50%のNKX6-1陽性膵臓前駆細胞を含んでなる、請求項23の単離されたNKX6-1陽性細胞集団。
- 少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%又は最大で約95%のNKX6-1陽性インスリン産生細胞を含んでなる、請求項23の富化/単離されたNKX6-1陽性細胞集団。
- EGF成分、ニコチンアミド成分、及び場合によってはNoggin成分及び/又はエキセンディン−4成分を含んでなる培地補充組成物。
- 好適な基本培地、EGF成分、ニコチンアミド成分、及び場合によってはNoggin成分及び/又はエキセンディン−4成分を含んでなる培地培養組成物。
- EGF成分、
ニコチンアミド成分、及び/又は
Noggin成分、及び/又は
場合によってはエキセンディン−4成分
を含んでなるキット。 - 予測薬物毒性学、創薬、移植組織工学及び/又は疾患モデリングのための、請求項22〜25のいずれか一項に記載の細胞集団の使用。
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