JP2015518830A5

JP2015518830A5 -

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Publication number: JP2015518830A5
Application number: JP2015512766A
Authority: JP
Filing date: 2013-05-14
Publication date: 2017-08-24
Anticipated expiration: 2033-05-14

Description

上記の概要及び本発明の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むことでより深い理解がなされるであろう。本発明を説明する目的のため、図面は本発明の各実施形態を示している。しかしながら、本発明は、示される正確な構成、実施例、及び手段に限定されない点は理解されるべきである。
ＢＡＬＦ総タンパク質濃度を示す。総タンパク質は、ＰｉｅｒｃｅＢＣＡ蛋白定量法を用いて測定された。各データポイントは、単一の動物から得られた測定値を表す。横線は、全測定値の平均を表す。学生Ｔ試験分析が実施された。データは、表１．２に表形式で示されている。サイトカイン／ケモカイン分析の結果を示す。図２Ａは、肺ホモジネートのサイトカイン／ケモカイン分析を示す。２２の異なるサイトカイン／ケモカインの濃度が、製造者のプロトコルに従い、マウス２２−多重ビードキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、肺ホモジネートについて判定され、ＢｉｏＲａｄＢｉｏｐｌｅｘ機器を用いて分析された。データバーは、６個のサンプルの平均値を表す。データは、表１−３及び１−４に表形式で示されている。図２Ｂは、ＢＡＬＦのサイトカイン／ケモカイン分析を示す。２２の異なるサイトカイン／ケモカインの濃度が、製造者のプロトコルに従い、マウス２２−多重ビードキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、ＢＡＬＦ（気管支肺胞洗浄液）について判定され、ＢｉｏＲａｄＢｉｏｐｌｅｘ機器を用いて分析された。データバーは、６個のサンプルの平均値を表す。データは、表１−５及び１−６に表形式で示されている。ヒト臍帯組織誘導細胞（ｈＵＴＣ）の投与後１日目、６日目、１０日目、及び１４日目の気管支肺胞（ＢＡＬ）洗浄液組成物に対するｈＵＴＣ注入及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）処理の効果を示す。図３Ａは、ＮＳＧマウスの結果を示し、図３Ｂは、ＢＡＬＢ／ｃマウスの結果を示す。ネガティブコントールは、生理食塩水及び／又は溶媒で偽感染／感作された。ＢＡＬ洗浄液は、全細胞数について検査された。各ケースにおいて、５匹の動物が評価された。結果は、細胞数の平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表されている。（^＊、ｐ＜０．００５、^＊＊＊、ｐ＜０．００１）。ｈＵＴＣの投与後１日目、６日目、１０日目、及び１４日目のＢＡＬ洗浄液組成物に対するｈＵＴＣ注入及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）処理の効果を示す。ネガティブコントールは、生理食塩水及び／又は溶媒で偽感作された。ＢＡＬ洗浄液は、好中球とマクロファージの存在の有無について検査された。各ケースにおいて、５匹の動物が評価された。結果は、細胞数の平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表されている。（^＊、＜ｐ０．００５、^＊＊＊、ｐ＜０．００１）。ｈＵＴＣをＮＯＤ／ＳＣＩＤγマウスに投与した後１日目、６日目、１０日目、１４日目のＢＡＬ上澄みサイトカイン組成物におけるｈＵＴＣ注入及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）処理の効果を示す。図５Ａは、ＭＣＰ−１のサイトカイン反応を示す。図５Ｂは、ＴＮＦ−αのサイトカイン反応を示す。図５Ｃは、ＴＮＦ−αの反応を示し、図５Ｄは、ＩＬ−１βの反応を示す。各反応は、群当たり５匹のマウスから独立して判定され、平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表されている。（^＊、ｐ＜０．０５）。ｈＵＴＣをＢＡＬＢ／ｃマウスに投与した後１日目、６日目、１０日目、１４日目のＢＡＬ上澄み組成物におけるｈＵＴＣ注入／及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）処理の効果を示す。サイトカイン反応は、ＭＣＰ−１（図６Ｂを参照）ＴＮＦ−α（図６Ｂを参照）、ＲＡＮＴＥＳ（図６Ｃを参照）、及びＩＬ−１β（図１Ｄを参照）について示されている。各反応は、群当たり５匹のマウスから独立して判定され、平均値±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表されている。（^＊、ｐ＜０．０５）。倍率１００で測定され、群及び時間当たり５匹の動物から平均値±ＳＤとして表される平均肺胞壁間距離（Ａ）及び肺胞数（Ｂ）を示す。記号は、エラスターゼ群と対比した統計的分析の結果、^＊ｐ＜０．０１、^＊＊ｐ、０．００５、^＊＊＊ｐ、０．００１を示す。対照マウス（ＰＢＳ）又はエラスターゼ治療（Ｅｌ）を受けたマウス、エラスターゼ＋ｈＵＴＣ治療（Ｅｌ＋ｈＵＴＣ）を受けたマウス、又はｈＵＴＣだけを受けたマウスの固定肺部のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色（ｎ＝群当たり５）を使用した気腫損傷の検出を示す。各サンプルについて示される３つの代表的なスライド。元の倍率ｘ１００。ｈＵＴＣが、１日目、６日目、１０日目、及び１４日目に免疫無防備状態（ＮＯＤ／ＳＣＩＤγ）マウスのエラスターゼ誘発気腫の範囲を低減したことを示す。気腫損傷は、固定肺部のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色（ｎ＝群当たり５）を使用して検出された。元の倍率ｘ１００。ｈＵＴＣが、１日目、６日目、１０日目、１４日目に免疫応答性の（ＢＡＬＢ／ｃ）マウスのエラスターゼ誘発気腫の範囲を低減したことを示す。気腫損傷は、固定肺部のヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色（ｎ＝群当たり５）を使用して検出された。元の倍率ｘ１００。ＮＯＤ／ＳＣＩＤγマウスにｈＵＴＣを投与した後１日目、６日目、１０日目、１４日目のｈＵＴＣ注入及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）治療の肺機能に及ぼす効果を示す。ネガティブコントールは、生理食塩水及び／又は溶媒で偽処理された。ＢＡＬＢ／ｃマウスにｈＵＴＣを投与した後１日目、６日目、１０日目、１４日目のｈＵＴＣ注入及び／又はブタ膵臓エラスターゼ（ＰＰＥ）治療の肺機能に及ぼす効果を示す。ネガティブコントールは、生理食塩水及び／又は溶媒で偽処理された。

組織病理学
非洗浄マウスから肺を取り出し、１０％（ｖ／ｖ）フォルマリン／ＰＢＳ中で固定し、パラフィンに封入し、スライスし、ヘマトキシリン／エオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。図８は、１日目の各処理群の代表的な顕微鏡写真を示す。引き続いてｈＵＴＣの投与を受けたエラスターゼ処理マウスは、同時点で生理食塩水の投与を受けたエラスターゼ処理マウスと比較して、有意な病状の軽減を示した。エラスターゼ処理による気腔腫大は、ｈＵＴＣ投与によって減じられた（図８及び関連する凡例ｐ１７）。図９は、ｈＵＴＣが、１日目、６日目、１０日目、１４日目における免疫無防備状態（ＮＯＤ／ＳＣＩＤγ）マウスのエラスターゼ誘発気腫の範囲を低減したことを示す。図１０は、ｈＵＴＣが、１日目、６日目、１０日目、１４日目における免疫応答性の（ＢＡＬＢ／ｃ）マウスのエラスターゼ誘発気腫の範囲を低減したことを示す。

Claims

患者の肺における粘液過分泌、気道柔組織の破壊、線維症、組織損傷及び炎症のうちの１つ又は２つ以上に係る１つ又は２つ以上の炎症促進性メディエータの産生を低減するために臍帯組織由来細胞を含む組成物であって、前記細胞は、実質的に血液を含まないヒト臍帯組織から単離されており、培養液中で自己再生及び増殖が可能であり、ＣＤ１１７又はＣＤ４５の産生がなく、ｈＴＥＲＴ又はテロメラーゼを発現しない、組成物。
前記患者が、肺疾患、肺障害、又は肺損傷を有する、請求項１に記載の組成物。
前記１つ又は２つ以上の炎症促進性メディエータが、前記肺疾患、肺障害、及び／又は肺損傷の進行に係る、請求項１に記載の組成物。
前記肺疾患、肺障害、及び／又は肺損傷が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）からなる群から選択される、請求項２又は３に記載の組成物。
前記肺疾患、肺障害、及び／又は肺損傷が、慢性閉塞性肺疾患である、請求項４に記載の組成物。
前記慢性閉塞性肺疾患が、慢性気管支炎又は気腫である、請求項５に記載の組成物。
前記低減することが、前記慢性閉塞性肺疾患の部位に前記臍帯組織由来細胞を投与することを含む、請求項５又は６に記載の組成物。
前記１つ又は２つ以上の炎症促進性メディエータが、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
前記臍帯組織由来細胞が、前記１つ又は２つ以上の炎症促進性メディエータの前記産生を抑制する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
前記細胞が、前記患者の前記肺組織、血管平滑筋、又は血管内皮に栄養作用を及ぼす、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、及びこれらの組み合わせのうちの１つ又は２つ以上の産生を低減するために臍帯組織由来細胞を含む組成物であって、前記細胞は、実質的に血液を含まないヒト臍帯組織から単離されており、培養液中で自己再生及び増殖が可能であり、ＣＤ１１７又はＣＤ４５の産生がなく、ｈＴＥＲＴ又はテロメラーゼを発現しない、組成物。
前記臍帯組織由来細胞が、ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、及びこれらの組み合わせのうちの１つ又は２つ以上の前記産生を抑制する、請求項１１に記載の組成物。
前記臍帯組織由来細胞に、ＣＤ１１７及びＣＤ４５の産生がない、請求項１〜８、１１又は１２のいずれか１項に記載の組成物。
前記臍帯組織由来細胞が、更に、
（ａ）ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、及びＣＤ９０を発現する、
（ｂ）ＣＤ３１又はＣＤ３４を発現しない、
（ｃ）ヒト線維芽細胞、間葉系幹細胞、又は腸骨稜骨髄細胞と比較して、インターロイキン８又はレチクロン１の発現レベルが増加する、並びに
（ｄ）少なくとも肺組織の細胞に分化する可能性を有する、という特性のうちの１つ又は２つ以上を含む、請求項１、１１又は１３に記載の組成物。
前記低減することが、少なくとも１つの他の細胞型及び／又は少なくとも１つの他の剤と共に前記臍帯組織由来細胞を投与することを含む、請求項１〜８又は１１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
前記他の細胞型が、肺前駆細胞、血管平滑筋細胞、血管平滑筋前駆細胞、周細胞、血管内皮細胞、血管内皮前駆細胞、又は他の多分化能幹細胞から選択される肺組織細胞である、請求項１５に記載の組成物。
前記剤が、抗血栓性薬剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節薬、血管新生促進剤、又は抗アポトーシス剤である、請求項１５に記載の組成物。
患者の肺における粘液過分泌、気道柔組織の破壊、線維症、組織損傷及び炎症のうちの１つ又は２つ以上に係る１つ又は２つ以上の炎症促進性メディエータの産生を低減するために使用されるキットであって、前記キットが、臍帯由来細胞と、薬学的に許容されるキャリア及び／又は希釈剤とを含み、前記細胞が、実質的に血液を含まないヒト臍帯組織から単離されており、培養液中で自己再生及び増殖が可能であり、ＣＤ１１７又はＣＤ４５の産生がなく、ｈＴＥＲＴ又はテロメラーゼを発現しない、キット。
ＴＮＦ−α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、及びこれらの組み合わせのうちの１つまたは２つ以上の産生を低減するために使用されるキットであって、前記細胞が、実質的に血液を含まないヒト臍帯組織から単離されており、培養液中で自己再生及び増殖が可能であり、ＣＤ１１７又はＣＤ４５の産生がなく、ｈＴＥＲＴ又はテロメラーゼを発現しない、キット。