JP2015043750A - 培地充填方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本実施の形態の培地充填方法では、まず、細胞を培養するための培養容器を用意する(S11)。
上記した培養容器10を用意した後、培養容器10の細胞収容部3、特に細胞収容部3の周囲に立設された内壁5の内部に画成される培地領域に例えばピペットやガラスキャピラリー等を用いて受精卵等を含む培地を導入する(S12)。なお、培地は、内壁5の高さまで導入され、当該培地の表面張力により内壁5の外側へ漏出しないように保持されている。培養のための培地は、細胞を培養する能力を有するものであれば特に制限されず、例えば受精卵培養用の培養液としてはM16やCR1aa等が挙げられる。
次いで、培養容器10の側壁2の内側、すなわち培養容器10の底部1の上面1aと側壁2の内周面2aとから画成される培養領域にミネラルオイルを導入する(S13)。ミネラルオイルは、培養容器10に導入された培地を覆う高さまで導入され、これにより培地の乾燥が防止される。
上記したように細胞収容部3の凹部4は極めて小さいため、S12の培地導入工程に際して、細胞収容部3の凹部4には気泡が残存する可能性がある。特に、培養容器10がポリスチレン等の疎水性の高い材料から形成されている場合や表面張力が高い培地を使用する場合には、その可能性が高くなる。そこで、培地およびミネラルオイルが収容された培養容器10に例えば図3に示す蓋11を装着した後、その培養容器10を加振して細胞収容部3の凹部4に存在する気泡を除去する(S14)。
そして、上記したように培養容器10を加振して細胞収容部3の凹部4に存在する気泡を除去した後、その培養容器10を培養細胞の発育及び維持に必要なガスを含む環境雰囲気及び一定の環境温度をもたらすインキュベータに投入する(S15)。必要なガスには、水蒸気、遊離酸素(O2)及び二酸化炭素(CO2)が含まれる。環境温度とCO2含有量を調節することにより、培地のpHを一定時間内に安定させることができる。安定なCO2含有量と安定な温度により安定なpHが得られる。なお、例えば画像比較プログラムにより、培養中の細胞の画像を予め撮像して保存しておいた画像と比較することにより、培養の際の温度、ガス及び培地などの培養条件を調節することもできる。例えば、ラット受精卵を培養する際のインキュベータの培養条件は、5%CO2、5%O2、90%空気、37℃、湿度飽和である。
本発明者等は、異なる加振周波数で加振した複数の培養容器(実施例1、2、比較例1)において細胞収容部の凹部の画像を撮像し、その撮像画像から凹部の気泡除去率を測定した。
1−(画像2中の気泡が存在する凹部の数)/(画像1中の気泡が存在する凹部の数)
Claims (4)
- 細胞を培養するための培養領域を画成する底面と側面とを有し、前記底面に凹部を有する細胞収容部が設けられている培養容器へ培地を充填する培地充填方法であって、
前記培養容器の前記細胞収容部に培地を導入する培地導入工程と、
前記培養容器を加振して前記細胞収容部の前記凹部に存在する気泡を除去する加振工程と、を含む培地充填方法。 - 前記加振工程において、前記培養容器を前記底面と直交する方向へ加振する、請求項1に記載の培地充填方法。
- 前記培養容器の加振周波数が5kHz以上かつ1MHzより小さい、請求項2に記載の培地充填方法。
- 前記加振工程に続いて、前記培養容器の温度を一定に保持する保温工程を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の培地充填方法。
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