JP2014529599A - 3つの発色団を有する発光ランタニドキレート及びそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の1つの態様は、式(I)
したがって本発明の他の態様は、式(II)
幾つかの好ましい実施態様では、キレート分子は、特に置換基R2として単一の反応性基Z(例えば−NCS)を含む。
本発明のさらに他の態様は、上記の発光ランタニドキレートと共役した生体特異的結合体を含む検出可能分子に関する。共役は通常、当該キレートの反応性基によって得られる。
本発明のさらなる態様は、a)上記のランタニドキレートによって標識付けされた生体特異的結合反応体と検体との間のバイオ複合体を形成させる工程;b)励起波長を有する放射線で該バイオ複合体を励起させ、これにより励起バイオ複合体を形成させる工程;およびc)該励起バイオ複合体から放出される発光放射線を検出する工程;を含む、生体特異的結合アッセイの実施方法に関する。
本発明のさらに他の態様は、上記の発光ランタニドキレートと共役した固体担体物質に関する。発光ランタニドキレートは通常、固体担体物質に共有結合的あるいは非共有結合的に固定化される。
4−ヨード−2,6−ピリジンジカルボン酸ジエチル(1)(5.57g,17.3ミリモル)をエタノール(130ml)中に懸濁させた。撹拌状態の溶液に、ホウ水素化ナトリウム(2.95g,78ミリモル)を少量ずつ15分で加えた。混合物を1.5時間還流してから室温に自然冷却した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、残留物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液(35ml)中に懸濁させた。懸濁液を速やかに沸騰させ、自然冷却し、そして溶媒を蒸発除去した。残留物をDMFとジクロロメタンの混合物(1:1,65ml)中に懸濁させ、懸濁液をセライトパッドを介して濾過し、濾液から溶媒を蒸発除去した。生成物を水から結晶化させ、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で乾燥した。収量3.37g(60%)。
三臭化リン(2.45ml,26ミリモル)を無水DMF(19.5ml)に0℃にて滴下して半固体の混合物を得た。本混合物に2,6−ビス(ヒドロキシメチル)−4−ヨードピリジン(2)(3.36g,12.7ミリモル)を少量ずつ加えた。添加中に固体混合物が溶解した。本混合物を室温にまで温め、室温で4時間撹拌した。反応混合物を、炭酸水素ナトリウムの5%水溶液100mlに注いだ。沈殿した生成物を濾過によって捕集し、水で洗浄し、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で乾燥した。収量4.51g(91%)。
無水アセトニトリル(125ml)とジ−イソプロピルエチルアミン(16.5ml)との混合物中に、4−ブロモ−6−ブロモメチル−2−カルボキシエチルピリジン(4)(2.99g,9.3ミリモル)とグリシンエチルエステル塩酸塩(6.52g,46.7ミリモル)を溶解した。本混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、シリカを固定相として、そしてジクロロメタン:メタノール(97:3)を溶離液として使用して、得られた生成物をカラムクロマトグラフィーで精製した。収量2.78g(86%)。
化合物3(0.94g,2.4ミリモル)と化合物5(1.66g,4.8ミリモル)を無水アセトニトリル(80ml)中に溶解した。無水炭酸カリウム(1.67g,12ミリモル)を加え、本混合物を55〜60℃で4時間撹拌した。反応混合物を室温に自然冷却し、セライトパッドを介して濾過した。濾液から溶媒を蒸発除去し、シリカを固定相として、そしてジクロロメタン:メタノール(95:5)を溶離液として使用して、得られた生成物をカラムクロマトグラフィーで精製した。収量1.57g(71%)。
化合物6(412mg,0.45ミリモル)を無水ジクロロメタン(6ml)中に溶解した。トリエチルアミン(2ml)、ヨウ化銅(I)(3.2mg,0.017ミリモル)、二塩化ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(9.5mg,0.014ミリモル)、および4−エチニルアニリン(52.5mg,0.45ミリモル)を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気し、室温で3時間撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、得られた生成物を、シリカを固定相として、そしてジクロロメタン:メタノール(90:10)を溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーで精製した。収量193mg(47%)。
化合物7(190mg)と化合物8(240mg,0.54ミリモル)を無水テトラヒドロフラン(3ml)中に溶解した。トリエチルアミン(3ml)、ヨウ化銅(I)(2.3mg,0.012ミリモル)、二塩化ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(4.3mg,0.006ミリモル)、および(63.8mg,0.54ミリモル)を加えた。反応混合物をアルゴンで脱気し、55〜60℃で一晩撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、シリカを固定相として、そしてジクロロメタン:メタノール(90:10)を溶離液として使用して、得られた生成物をカラムクロマトグラフィーで精製した。収量155mg(44%)。
化合物9(152mg,0.092ミリモル)をKOHの0.5Mエタノール溶液(7.7ml)中に溶解し、水(3.6ml)を加えた。本混合物を室温で2時間撹拌した。本混合物から溶媒を蒸発除去し、残留物を水(2.5ml)中に溶解し、塩酸(6M)を加えることによってpHを6.5に調整した。塩化ユーロピウム(34mg,0.092ミリモル)を水(920μl)中に溶解して得た溶液を反応混合物に加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌し、炭酸水素ナトリウムまたは塩酸を反応混合物に加えることによってpHを6.3〜6.5に保持した。反応混合物から沈殿した生成物を遠心分離によって単離した。生成物を、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で一晩乾燥した。収量115mg。
チオホスゲン(42μl,0.55ミリモル)、NaHCO3(52mg,0.61ミリモル)、およびクロロホルム(1.65ml)の混合物に化合物10(108mg,0.08ミリモル)の水溶液を加えた。室温で1時間撹拌した後、水相をクロロホルムで洗浄した(3×1ml)。次いでpHを1M酢酸で6.8〜7.2に調整し、アセトン(33ml)を使用して生成物を沈殿させた。生成物を遠心分離によって捕集し、沈殿物をアセトンで洗浄し(3×30ml)、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で一晩乾燥した。
1−ブロモ−3,5−ジメトキシベンゼン(12)(1.00g,4.60ミリモル)を乾燥ジクロロメタン(40ml)中に溶解し、氷浴にて冷却した。三臭化ホウ素(1.33ml,13.82ミリモル)を加え、混合物を2時間撹拌した。本混合物を室温にまで自然加温し、一晩撹拌した。メタノール(1.4ml)を滴下して反応を終了させ、本混合物を水(50ml)中に注ぎ込み、室温で2時間撹拌した。反応混合物をNaHCO3で中和し、酢酸エチル(30ml)で2回抽出した。有機層を合わせてNa2SO4上で乾燥し、溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そしてメタノール:ジクロロメタン(5:95)を溶離液として使用して、得られた生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製した。得られた生成物は白色固体であった。収量0.71g(81%)。
化合物13(0.49g,2.59ミリモル)をDMF(10ml,乾燥)中に溶解した。無水K2CO3(2.15g,15.56ミリモル)とブロモ酢酸tert−ブチル(1.15ml,7.78ミリモル)を加え、混合物を、アルゴン雰囲気下にて50℃で一晩撹拌した。水(17ml)を加え、混合物を酢酸エチル(3×40ml)で抽出した。有機抽出物を合わせてNaHCO3上で乾燥し、溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そしてジクロロメタンを溶離液として使用して、粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製した。得られた生成物は白色固体であった。収量0.95g(87%)。
化合物14(2.00g,4.79ミリモル)をDMF(4ml,乾燥)中に溶解し、本溶液をマイクロ波反応バイアル中に入れた。ジエチルアミン(12ml,乾燥)、Pd(PPh3)2Cl2(168mg,0.24ミリモル)、CuI(46mg,0.24ミリモル)、およびPPh3(251mg,0.96ミリモル)を加え、バイアルをアルゴン雰囲気中に密閉した。セプタムを介してトリメチルシリルアセチレン(996μl,7.19ミリモル)を加え、マイクロ波加熱を使用して混合物を120℃で30分撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、ジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(10:90)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって精製した。収量1.36g(65%)。
化合物15(1.29g,2.98ミリモル)をジクロロメタン(40ml,乾燥)中に溶解した。フッ化テトラブチルアンモニウム(0.934g,3.57ミリモル)を加え、混合物をアルゴン雰囲気中にて室温で45分撹拌した。本混合物を、10%クエン酸溶液(20ml)で、そして水(4×40ml)で4回洗浄した。有機相をNa2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(10:90)を溶離液として使用して、粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製した。得られた生成物は黄色固体であった。収量895mg(83%)。
化合物16(0.167g,0.459ミリモル)と化合物7(0.167g,0.184ミリモル)を、無水テトラヒドロフラン(4ml)とトリエチルアミン(2.5ml)との混合物中に溶解した。二塩化ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(3.8mg,0.0054ミリモル)とヨウ化銅(I)(2.3mg,0.012ミリモル)を加え、混合物を、アルゴン雰囲気下にて55〜60℃で一晩撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、シリカゲルを固定相として、そしてメタノール:ジクロロメタン(10:90)を溶離液として使用してカラムクロマトグラフィーによって精製した。収量71mg(27%)。
化合物17(68mg,0.048ミリモル)をトリフロロ酢酸(1ml,13.5ミリモル)中に溶解し、混合物を室温で1.5時間撹拌した。加熱することなく、反応混合物から溶媒を蒸発除去した。残留物にジエチルエーテル(2.5ml)を加え、混合物を15分撹拌した。混合物から沈殿した生成物を遠心分離によって単離した。沈殿物をジエチルエーテルで2回洗浄してから、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で乾燥した。乾燥した沈殿物(64mg,0.051ミリモル)を、水酸化カリウムの0.5Mエタノール溶液(4ml)と水(1.8ml)との混合物中に溶解した。本混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物から溶媒を蒸発除去し、残留物を水(1.7ml)中に溶解した。塩酸(6M)を加えることによってpHを6.5に調整した。塩化ユーロピウム(20mg,0.055ミリモル)を水(485μl)中に溶解して得た溶液を反応混合物に滴下した。反応混合物を室温で2時間撹拌し、炭酸水素ナトリウムを加えることによってpHを6.3〜6.5に維持した。水酸化ナトリウムを加えることでpHを8.5〜9.0に調整することによって混合物から過剰のユーロピウムを沈殿させ、沈殿物を遠心分離によって除去した。生成物をアセトン(25ml)で沈殿させ、遠心分離によって単離した。沈殿物をアセトン(3×10ml)で洗浄し、減圧デシケーター中にシリカゲル上で一晩乾燥させた。収量180g。
化合物18(175mg,0.143ミリモル)の水溶液を、クロロホルム(2.85ml)、チオホスゲン(74μl,0.97ミリモル)、および炭酸水素ナトリウム(91mg,1.09ミリモル)の混合物に滴下した。反応混合物を室温で45分撹拌した。2つの相を分離し、水相をクロロホルム(3×6ml)で洗浄した。1M酢酸でpHを7に調整し、生成物をアセトン(57ml)で沈殿させ、遠心分離によって分離した。沈殿物をアセトン(3×15ml)で洗浄し、減圧デシケーター中にてシリカゲル上で一晩乾燥した。収量216mg。
炭酸水素ナトリウム水溶液(2ml,50mM,pH9.8)とDMF(200μl)との混合物に化合物11(5.3ml)と従来の九配位座α−ガラクトースEuキレート(21)(5.5mg)を溶解させることによって、これら出発物質をタウリン(それぞれの反応に対して5mg)に結合させた。本混合物を室温で一晩インキュベートした。生成物(20と22)を、逆相HPLC(RP−18カラム)を使用することによって精製した。溶媒は、A:酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液(20mM,pH7)およびB:酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液中50%アセトニトリル(20mM,pH7)であった。勾配を5%の溶媒Bからスタートし、25分にて溶媒Bの量を100%まで直線的に上げた。16.7分(20)時点と15.1分(22)時点にて、生成物がカラムから溶離した。生成物を含有するフラクションを捕集し、プールし、溶媒を蒸発除去した。
Tn1抗体の標識付けは、90倍過剰の化合物19を使用することによって、"von Lode P.et al.,Anal.Chem.,2003,75,3193−3201"に記載のように行った。反応は室温で一晩行った。Superdex200HR10/30ゲル濾過カラム(GEヘルスケア社)を用いてトリス−食塩水−アジド緩衝液(50mMトリス,0.9%NaCl,pH7.75)を溶離液として使用することにより、標識付け抗体を過剰の化合物19から分離した。抗体を含有するフラクションをプールし、Victor(商標)Plate蛍光光度計を使用して、ユーロピウムの濃度を、Eu標準物質と突き合わせて測定した。1.6Eu/IgGの標識化度が得られた。
化合物19で標識付けしたTn1抗体を、心筋トロポニンI用のサンドイッチイムノアッセイにて試験した。対照標準化合物としては、化合物21で標識付けしたTn1抗体(標識化度11Eu/IgG)を使用した。10μlの希釈トレーサー抗体(5ng/μl)と20μlのTn1標準溶液を、プレコートしたアッセイウェル(96ウェルフォーマットにて単一ウェル、Tn1抗体に対してストレプタビジンとビオチニル化捕捉抗体でコーティングしたウェル、Innotrac Diagnostics社)にピペットで入れた。反応混合物を、振とうしながら36℃にて20分インキュベートした。ウェルを6回洗浄し、乾燥させてからVictor(商標)Plate蛍光光度計で測定した。得られた結果を表2に示す。対照標準AとBは12回の繰り返しにて、そして他の対照標準C〜Fは6回の繰り返しにて測定した。
本発明のキレートは九座(ランタニドに対して最適)であり、3つの独立した発色団を有する。したがって、2つの独立した発色団を有する、現在使用されている九座キレートと比較して50%高いルミネセンスをもたらすはずである。2つ又は3つの発色団を有する他の公知のキレート(例えば、NOTAやDOTAをベースとする構造)と比較して、本発明のキレートは、発光イオンのすぐ近くにあるCH2基がより少ない。したがって、C−H結合の振動エネルギーマニホルドを介してのイオンルミネセンスの非発光クエンチングがそれほど重大ではなく、このためルミネセンスがより強まるはずである。さらに、配位子は、非環式の九座キレートであるので、ランタニドイオンと錯体形成したときに全く立体障害がない。その場合には、発光ランタニドイオンとピリジン窒素との間の距離が、1)供与体ピリジン窒素からランタニドイオンへの効率的なエネルギー伝達のために、そして2)高い錯体安定性のために最適となり、したがってルミネセンスの増大をもたらす。本発明のキレートは、3つの発色団を有する他のDOTAベースのキレートと比較して合成がより簡単である。本発明のキレートの3つの発色団は、互いに全く異なっていてもよく、このことは、より多くのバリエーションが可能であること、および調整の適応性(例えば、種々の溶媒に対する溶解性、種々の励起波長、およびエネルギー伝達等)がより高いことを意味する。安価で小型のLEDを使用して標識化生体分子を励起させることができる。したがって、より小型でより安価な工業向けのバイオアッセイ用機器を使用することができる。本発明のキレートによる配位子場は、約615nmにて他の輝線を凌ぐ輝線強度をきわだたせ、したがって観察されるルミネセンスは、他のキレートと比較して改良されるはずである。発色団の対称性が高められているので、ルミネセンス効率が増大すると推定される。
4−ヨード−1,3,5−トリヒドロキシベンゼン(3.41g,13.5ミリモル;Acta Chem.Scand.1991,45,539)、乾燥K2CO3(6.17g,44.7ミリモル)、ブロモ酢酸エチル(4.96ml,44.7ミリモル)、および乾燥MeCN(100ml)の混合物を55℃で一晩撹拌した。混合物を濾過し、固体物質をMeCNで洗浄し、濾液から溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そしてMeOH:CH2Cl2(最初は0:100、次いで20:80)を溶離液として使用して、生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製した。収量0.64g(9%)。
この化合物24は、実施例11に記載の合成と類似の方法を使用して化合物23から合成した。マイクロ波加熱を使用することによって、混合物を最初は100℃で30分、次いで120℃で20分撹拌した。混合物をEt2O(50ml)で抽出し、H2O(2×20ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、次いでシリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(最初は20:80、次いで30:70)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率70%。
本化合物25は、実施例12に記載の合成と類似の方法を使用して化合物24から合成した。10%クエン酸とH2Oで洗浄した後、生成物(100%)を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。
ベンゼン−1,3−ジチオール(0.76g,4ミリモル)、乾燥K2CO3(2.21g,16ミリモル)、ブロモ酢酸エチル(0.93ml,8.4ミリモル)、および乾燥MeCN(20ml)の混合物を、アルゴン雰囲気下にて55℃で一晩撹拌した。本混合物を濾過し、固体物質をMeCNで洗浄し、濾液から溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そしてCH2Cl2を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量0.96g(76%)。
化合物26(0.64g,2.04ミリモル)とN−ブロモスクシンイミド(0.47g,2.66ミリモル)をCH2Cl2(10ml)中に溶解して得た混合物を室温で4日撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、シリカゲルを固定相として、そして石油エーテル:CH2Cl2(20:80)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量0.50g(63%)。
本化合物28は、実施例11に記載の合成と類似の方法を使用して化合物27から合成した。マイクロ波加熱を使用することによって、混合物を100℃で30分撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(最初は10:90、次いで20:80)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率82%。
本化合物29は、実施例12に記載の合成と類似の方法を使用して化合物28から合成した。10%クエン酸とH2Oで洗浄した後、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(最初は10:90、そして最後は15:85)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率41%。
4−ブロモチオフェノール(0.95g,5ミリモル)、乾燥K2CO3(1.38g,10ミリモル)、ブロモ酢酸エチル(0.72ml,6.5ミリモル)、および乾燥MeCN(20ml)の混合物を、アルゴン雰囲気下にて室温で3日間撹拌した。混合物を濾過し、固体物質をMeCNで洗浄し、濾液から溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(最初は2:98、次いで7:93)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量1.22g(88%)。
本化合物31は、実施例11に記載の合成と類似の方法を使用して化合物30から合成した。
マイクロ波加熱を使用することによって、混合物を120℃で40分撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(10:90)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率88%。
本化合物32は、実施例12に記載の合成と類似の方法を使用して化合物31から合成した。10%クエン酸とH2Oで洗浄した後、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(最初は5:95、次いで10:90)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率68%。
4−エチニルアニリン(1.38g,11.8ミリモル)を、氷冷した(CF3CO)2O(6.6ml)中に少量ずつ加えた。氷浴中にて10分撹拌した後、混合物を室温で2.5時間撹拌した。本混合物を氷水(100ml)中に注ぎ込み、生成物を濾過し、H2Oで洗浄した。得られた生成物(2.29g,91%)を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。
化合物33(0.55g,2.58ミリモル)と6−ブロモ−2,6−ジヒドロキシメチルピリジン(0.47g,2.15ミリモル;Acta Chem.Scand.1988,Ser B,42,614)を乾燥トリエチルアミン(5ml)と乾燥テトラヒドロフラン(10ml)中に溶解して得た混合物をアルゴンで脱気した。ビス(トリフェニルホスフィン)−塩化パラジウム(II)(30mg,43μモル)とCuI(16mg,86μモル)を加えた後、混合物を55℃で19時間撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、残留物をCH2Cl2(40ml)とH2O(20ml)との低温混合物で処理し、濾過し、生成物(0.56g,75%)を低温のH2O(10ml)とCH2Cl2(10ml)で洗浄した。収量0.56g(75%)。
化合物34(0.56g,1.6ミリモル)をCHCl3(65ml)中に混合して得た懸濁液にPBr3(225μl)を加えた。60℃で20時間撹拌した後、混合物を5%NaHCO3(35ml)で中和した。水相をCHCl3(40ml)で抽出し、有機相を合わせてNa2SO4で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発除去した。得られた生成物を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。
本化合物36は、実施例4に記載の合成と類似の方法を使用して化合物34から合成した。70℃での反応時間は27時間であった。シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(1:69:30)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率66%。
化合物36(120g,0.148ミリモル)と化合物25(145mg,0.355ミリモル)を乾燥トリエチルアミン(1ml)と乾燥テトラヒドロフラン(2ml)中に混合して得た混合物をアルゴンで脱気した。ビス(トリフェニルホスフィン)塩化パラジウム(II)(10mg,14μl)とCuI(6mg,28μモル)を加えた後、混合物を55℃で22時間撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、残留物をCH2Cl2(40ml)中に溶解し、H2O(3×10ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(1:69:30)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量115mg(47%)。
本化合物38は、実施例33に記載の合成と類似の方法を使用して化合物36と29から合成した。シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(1:69:30)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率85%。
本化合物39は、実施例33に記載の合成と類似の方法を使用して化合物36と32から合成した。シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(1:69:30)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率81%。
化合物37(105mg,63μモル)とKOHの0.5Mエタノール溶液(9ml)との混合物を室温で30分撹拌し、水(2ml)を加えた。室温で3時間撹拌した後、EtOHを蒸発除去し、残留物を室温で30分撹拌し、6MのHClでpHを約6.5に調整した。塩化ユーロピウム(III)(23mg,63μモル)をH2O(0.17ml)中に溶解して得た溶液を10分以内に加え、固体NaHCO3でpHを5〜7に維持した。室温で一晩撹拌した後、1MのNaOHでpHを8.5に上げ、沈殿物を遠心分離し、上澄み液をフェノールで抽出した(0.75gで1回、そして0.5gで3回)。フェノール相を合わせてH2O(1ml)とEt2O(20ml)で処理し、アセトンですりつぶした。沈殿物を遠心分離し、アセトンで洗浄した。生成物を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=14.5分。UV/VIS=359nm。
本化合物41は、実施例36に記載の合成と類似の方法を使用して化合物38から合成した。Rf(HPLC)=17.3分。UV/VIS=318,325および350(sh)nm。
本化合物42は、実施例36に記載の合成と類似の方法を使用して化合物39から合成した。Rf(HPLC)=21.5分。UV/VIS=349nm。
本化合物43は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用してキレート40から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=20.9分。UV/VIS=325(sh)、340、および362(sh)nm。
本化合物44は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用してキレート41から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=23.3分。UV/VIS=305(sh)、318、および335(sh)nm。
本化合物45は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用してキレート42から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=27.9分。UV/VIS=339nm。
本化合物46は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用してキレート43から合成した。Rf(HPLC)=14.3分。UV/VIS=349nm。
本化合物47は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用してキレート44から合成した。Rf(HPLC)=17.2分。UV/VIS=349および324(sh)nm。
本化合物48は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用してキレート45から合成した。Rf(HPLC)=20.5分。UV/VIS=336nm。
本化合物49は、実施例3に記載の合成と類似の方法を使用して4−(フラン−2−イル)−6−ブロモメチル−2−カルボキシエチルピリジン(WO2005/021538)から合成した。シリカゲルを固定相として、そしてメタノール:CH2Cl2(5:95)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。
本化合物50は、実施例3に記載の合成と類似の方法を使用して4−(チオフェン−2−イル)−6−ブロモメチル−2−カルボキシエチルピリジン(WO2005/021538)から合成した。シリカゲルを固定相として、そしてメタノール:CH2Cl2(5:95)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。
化合物49(0.16g,0.48ミリモル)、2,6−ジブロモメチル−4−ブロモピリジン(83mg,0.24ミリモル;Acta Chem.Scand.1988,Ser B,42,614)、乾燥K2CO3(0.13g,0.96ミリモル)、および乾燥MeCN(8ml)の混合物を55℃で4.5時間撹拌した。反応混合物を濾過し、固体物質をMeCNで洗浄し、濾液から溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(1:69:30)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量0.19g(95%)。
本化合物52は、実施例47に記載の合成と類似の方法を使用して化合物50から合成した。シリカゲルを固定相として、そしてエタノール:CH2Cl2(2:98から15:85までの勾配)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収率50%。
化合物51(0.18g,0.21ミリモル)と4−エチニルアニリン(30mg,0.26ミリモル)を乾燥トリエチルアミン(1ml)と乾燥テトラヒドロフラン(2ml)中に溶解して得た混合物をアルゴンで脱気した。ビス(トリフェニルホスフィン)塩化パラジウム(II)(10mg,14μモル)とCuI(6mg,28μモル)を加えた後、混合物を55℃で20時間撹拌した。溶媒を蒸発除去した後、シリカゲルを固定相として、そしてトリエチルアミン:酢酸エチル:石油エーテル(最初は1:69:30、次いで1:79:20)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって生成物を精製した。収量0.14g(74%)。
本化合物54は、実施例49に記載の合成と類似の方法を使用して化合物52から合成した。収率50%。
化合物53(0.13g,0.143ミリモル)とKOHの0.5Mエタノール溶液(9ml)との混合物を室温で30分撹拌し、水(1ml)を加えた。室温で3時間撹拌した後、EtOHを蒸発除去した。H2O(3ml)を加えた後、混合物を室温で3時間撹拌し、6MのHClでpHを約6.5に調整した。塩化ユーロピウム(III)(52mg,0.143ミリモル)をH2O(0.39ml)中に溶解して得た溶液を10分以内に加え、固体NaHCO3でpHを5〜7に維持した。室温で一晩撹拌した後、1MのNaOHでpHを8.5に上げた。本溶液にテトラヒドロフランを入れてこすり、沈殿物を遠心分離し、テトラヒドロフランで洗浄した。得られた生成物を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=24.9分。UV/VIS=323および355(sh)nm。
本化合物56は、実施例51に記載の合成と類似の方法を使用して化合物54から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=26.3分。UV/VIS=325および356(sh)nm。
本化合物57は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用して化合物55から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=33.4分。UV/VIS=325nm。
本化合物58は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用して化合物56から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=34.7分。UV/VIS=325nm。
本化合物59は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用してキレート57から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=23.2分。UV/VIS=321nm。
本化合物60は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用してキレート58から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=24.9分。UV/VIS=322nm。
4−ブロモレゾルシノール(1.00g,5.29ミリモル)をDMF(20ml,乾燥)中に溶解した。無水K2CO3(4.39g,31.74ミリモル)とブロモ酢酸エチル(2.30ml,15.87モリモル)を加えた。混合物をアルゴン雰囲気下にて40℃で一晩撹拌した。水(30ml)を加え、混合物を酢酸エチル(1×20ml,2×10ml)で抽出した。有機抽出物を合わせて水(2×10ml)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。シリカゲルを固定相として、そしてジクロロメタンを溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製した。収量1.70g(89%)。
化合物61(1.56g,4.33ミリモル)をDMF(3ml,乾燥)中に溶解し、本溶液をマイクロ波反応バイアル中に入れた。ジエチルアミン(9ml,乾燥)、Pd(PPh3)2Cl2(152.0mg,0.217ミリモル)、CuI(41.2mg,0.217ミリモル)、およびPPh3(113.6mg,0.433ミリモル)を加え、バイアルをアルゴン雰囲気にて密閉した。セプタムを介してトリメチルシリルアセチレン(925μl,6.50ミリモル)を4加え、マイクロ波加熱を使用して混合物を100℃で30分撹拌した。ジクロロメタンを溶離液として使用して、シリカゲルを介して反応混合物を濾過し、濾液から溶媒を蒸発除去した。粗生成物をジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(10:90)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製した。収量0.99g(61%)。
化合物62(398.9mg,1.054ミリモル)をジクロロメタン(10ml,乾燥)中に溶解した。フッ化テトラブチルアンモニウム(330.7mg,1.265ミリモル)を加え、混合物を、アルゴン雰囲気中にて室温で1.5時間撹拌した。混合物を10%クエン酸溶液(5ml)と水(4×10ml)で洗浄した。有機相をNa2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発除去した。シリカゲルを固定相として、そして酢酸エチル:石油エーテル(15:85)を溶離液として使用して、カラムクロマトグラフィーによって粗生成物を精製した。収量259.2mg(80%)。
4−ブロモ−3−メトキシアニリン(2.00g,9.90ミリモル)をTHF(15ml)中に溶解した。本溶液を氷冷したトリフルオロ酢酸無水物(15ml,107.8ミリモル)に加え、混合物を氷浴にて20分撹拌した。混合物を氷水中に注ぎ込み、撹拌を10分続けた。混合物をジクロロメタン(2×20ml)で抽出した。有機層を合わせて5%NaHCO3(5×40ml)と水(30ml)で洗浄した。洗浄した有機層をNa2SO4で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発除去した。本生成物(3.08g,>99%)を、さらなる精製を行うことなく使用した。
本化合物65は、実施例9に記載の合成と類似の方法を使用して化合物64(3.08g,10ミリモル)から合成した。収量0.51g(17%)。
本化合物66は、実施例10記載の合成と類似の方法を使用して化合物65(0.51g,1.78ミリモル)から合成した。CH3CNを溶媒として使用した。40℃での反応時間は18時間であった。収量0.47g(71%)。
本化合物67は、実施例11に記載の合成と類似の方法を使用して化合物66(0.46g,1.24ミリモル)から合成した。マイクロ波加熱における100℃での反応時間は30分であった。収量0.37g(77%)。
本化合物68は、実施例12に記載の合成と類似の方法を使用して化合物67(0.37g,0.96ミリモル)から合成した。収量0.30g(99%)。
本化合物69は、実施例30に記載の合成と類似の方法を使用して化合物68(0.37g,0.96ミリモル)から合成した。収量0.19g(44%)。
本化合物70は、実施例31に記載の合成と類似の方法を使用して化合物69(0.19g,0.42ミリモル)から合成した。収量0.22g(90%)。
本化合物71は、実施例4に記載の合成と類似の方法を使用して化合物70(0.19g,0.42ミリモル)と化合物5(0.25g,0.73ミリモル)から合成した。55℃での反応時間は20時間であった。収量0.23g(57%)。
本化合物72は、実施例33記載の合成と類似の方法を使用して化合物71(0.11g,0.10ミリモル)と化合物63(75mg,0.25ミリモル)から合成した。収量140mg(87%)。
本化合物73は、実施例36に記載の合成と類似の方法を使用して化合物72(0.14g,0.09ミリモル)から合成した。本生成物を、さらなる精製を行うことなく次の工程に使用した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=14.5分。UV/VIS=350nm。
本化合物74は、実施例15に記載の合成と類似の方法を使用して化合物73(0.1g,0.07ミリモル)から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=18.7分。UV/VIS=340nm。
本化合物75は、実施例16に記載の合成と類似の方法を使用して化合物74から合成した。HPLC実験に対する条件:実施例16を参照。Rf(HPLC)=14.5分。UV/VIS=351nm。
作製したイソチオシアネート活性化キレート(19、43、44、45、57、および75)を、実施例16に記載のようにタウリンと共役させた。生成物を半分取逆相HPLC(RP−18カラム)で精製した。生成物フラクションから溶媒を蒸発除去し、残留物を50mMのTRIS緩衝液中に溶解した。
Tn1標識化抗体を実施例17に記載のように作製した。
Claims (18)
- 共役基が、互いに共役するように配置された1つ、2つ、または3つの部分からなり、それぞれの部分が、エテニレン(−CH=CH−)、エチンジイル(−C≡C−)、カルボニル(−C(=O)−)、および(ヘテロ)芳香環もしくは(ヘテロ)芳香環系のビラジカル(−Het/Ar−)(例えば、フェニレン、ビフェニレン、ナフチレン、ピリジレン、ピラジニレン、ピリミジニレン、ピリダジニレン、フリレン、チエニレン、ピロリレン、イミダゾリレン、ピラゾリレン、チアゾリレン、イソチアゾリレン、オキサゾリレン、イソオキサゾリレン、フラザニレン、1,2,4−トリアゾール−3,5−イレン、およびオキサジアゾリレン)から選ばれ、(ヘテロ)芳香環もしくは(ヘテロ)芳香環系のビラジカル(−Het/Ar−)のそれぞれは、未置換であっても、あるいはモノ−R4−置換、ジ−R4,R5−置換、トリ−R4,R5,R6−置換、テトラ−R4,R5,R6,R7−置換、またはペンタ−R4,R5,R6,R7,R8−置換されていてもよく、ここでこのような可能な置換基R4、R5、R6、R7、およびR8のそれぞれは、C1−12アルキル、−(CH2)0−6COOH、−(CH2)0−6COO−、−(CH2)0−6SO3H、−(CH2)0−6SO3 −、−NHC(=O)R10、−NCH3C(=O)R10、−C(=O)NHR10、−C(=O)NCH3R10、−NHC(=O)NHR10、NHC(=S)NHR10、−C(=O)R10、−F、−Cl、−Br、−I、ヒドロキシル(−OH)、メルカプト(−SH)、−OR9、−SR9、および親水性基から選ばれ、R9は、−CF3、−C1−12アルキル、−(CH2)1−6COOH、−(CH2)1−6COO−、−(CH2)1−6SO3H、−(CH2)1−6SO3 −、−NHC(=O)R10、−NCH3C(=O)R10、−C(=O)NHR10、−C(=O)NCH3R10、−NHC(=O)NHR10、−NHC(=S)NHR10、−C(=O)R10、および親水基から選ばれ、R10は、C1−12アルキル、−(CH2)1−6COOH、−(CH2)1−6COO−、−(CH2)1−6SO3H、−(CH2)1−6SO3 −、および親水性基から選ばれる、請求項1に記載の発光ランタニドキレート。
- G1とG2とG3の少なくとも2つが独立して共役基である、請求項1〜2のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- G1とG2とG3のそれぞれが独立して共役基である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 反応性基が、アジド基(−N3);アルキニル基(−C≡CH);アルキレン基(−CH=CH2);アミノ基(−NH2);アミノオキシ基(−O−NH2);カルボキシル基(−COOH);アルデヒド基(−CHO);メルカプト基(−SH);マレイミド基;またはイソシアナート(−NCO)、イソチオシアナート(−NCS)、ジアゾニウム(−N+N)、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、反応性エステル、ピリジル−2−ジチオ、もしくは6−置換−4−クロロ−1,3,5−トリアジン−2−イルアミノを含むこれらの活性化誘導体;を含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 反応性基Zが、距離を形成する形成ビラジカルであるスペーサーを含み、該スペーサーが1〜5部分から形成されていて、各部分が、フェニレン、1〜10個の炭素原子を有するアルキレン、エチンジイル(−C≡C−)、エーテル(−O−)、チオエーテル(−S−)、ジスルフィド(−S−S−)、アミド(−C(=O)−NH−、−NH−C(=O)−、−C(=O)−NH3−、および−NCH3−C(=O)−)、チオウレア(−NH−C(=S)−NH−)、およびトリアゾールからなる群から選ばれる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 共役基が、フェニルエチニル、フェニル、チエニル、およびフリルから独立して選ばれ、それぞれが置換されていてもよい、請求項1〜6のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 親水性基が単糖類または二糖類を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 親水性基が、距離を形成する形成ビラジカルであるスペーサーを含み、該スペーサーが1〜5部分から形成されていて、各部分が、フェニレン、1〜10個の炭素原子を有するアルキレン、エチンジイル(−C≡C−)、エーテル(−O−)、チオエーテル(−S−)、ジスルフィド(−S−S−)、アミド(−C(=O)−NH−、−NH−C(=O)−、−C(=O)−NH3−、および−NCH3−C(=O)−)、チオウレア(−NH−C(=S)−NH−)、およびトリアゾールからなる群から選ばれる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- (i)G1とG3のそれぞれが3,5−ビス(カルボキシメトキシ)フェニルエチニルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(ii)G1とG2とG3のそれぞれがフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが親水性基であり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(iii)G1とG2とG3のそれぞれがフェニルエチニルであり、−A1と−A2の一方が−Hであり、−A1と−A2の他方がスペーサーを含む反応性基であり、そしてR1とR2とR3のそれぞれが親水性基である;あるいは
(iv)G1とG3のそれぞれが4−(カルボキシメチルチオ)フェニルエチニルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(v)G1とG3のそれぞれが2,4−ビス(カルボキシメチルチオ)フェニルエチニルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(vi)G1とG3のそれぞれが2,4,6−トリス(カルボキシメトキシ)フェニルエチニルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(vii)G1とG3のそれぞれがフラン−2−イルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(viii)G1とG3のそれぞれがチエン−2−イルであり、G2がフェニルエチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、R1とR3のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;あるいは
(ix)R1−G1とR3−G3のそれぞれが(2,4−ジ(NaOOC−CH2−O−)フェニル)エチニルであり、G2が(2−(NaOOC−CH2−O−)フェニル)エチニルであり、−A1と−A2のそれぞれが−Hであり、そしてR2が反応性基である;
請求項1〜9のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。 - ランタニドイオンLn3+が、ユーロピウム(III)、テルビウム(III)、ジスプロシウム(III)、およびサマリウム(III)から選ばれ、好ましくはユーロピウム(III)から選ばれる、請求項1〜10のいずれか一項に記載の発光ランタニドキレート。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の式(I)の発光ランタニドキレートと共役した生体特異的結合反応体を含む検出可能分子。
- 生体特異的結合反応体が、抗体、抗原、受容体配位子、特異的結合タンパク質、DNAプローブ、RNAプローブ、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、修飾ポリヌクレオチド、タンパク質、オリゴ糖類、多糖類、リン脂質、PNA、ステロイド、ハプテン、薬剤、受容体結合配位子、およびレクチンから選ばれる、請求項12に記載の検出可能分子。
- 生体特異的結合反応体が抗体である、請求項12または13にいずれかに記載の検出可能分子。
- a)請求項1〜11のいずれか一項に記載のランタニドキレートによって標識付けされた生体特異的結合反応体と検体との間のバイオ複合体を形成させる工程;
b)励起波長を有する放射線で該バイオ複合体を励起させ、これにより励起バイオ複合体を形成させる工程;および
c)該励起バイオ複合体から放出される発光放射線を検出する工程;
を含む、生体特異的結合アッセイの実施方法。 - 固有ルミネセンスの時間分解蛍光光度測定を利用する特異的生物親和性ベースの結合アッセイにおける、請求項12〜14のいずれか一項に記載の検出可能分子の使用。
- 請求項1〜11のいずれかに記載の式(I)の発光ランタニドキレートまたは請求項15に記載の式(II)のランタニドキレート配位子と共役した固体担体物質。
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DKPA201100630 | 2011-08-19 | ||
DKPA201100630 | 2011-08-19 | ||
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Cited By (2)
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---|---|---|---|---|
JP2015504877A (ja) * | 2011-12-22 | 2015-02-16 | デーホーアェル・フィンランド・オサケユキチュア | 改良された励起特性を有する新規発光ランタニドキレート |
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Families Citing this family (11)
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---|---|---|---|---|
FR3004189B1 (fr) * | 2013-04-04 | 2015-09-04 | Ecole Norm Superieure Lyon | Complexes de lanthanide comprenant au moins deux groupes betaines, utiles comme marqueurs luminescents |
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CN105973856B (zh) * | 2016-06-08 | 2018-12-18 | 南京工业大学 | 一种用镧系荧光配合物检测及加速β淀粉样蛋白聚集的方法 |
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01502271A (ja) * | 1987-02-25 | 1989-08-10 | アクアノーティックス コーポレーション | 配位子抽出および再生用のポリアルキルアミン錯体 |
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---|---|---|---|---|
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01502271A (ja) * | 1987-02-25 | 1989-08-10 | アクアノーティックス コーポレーション | 配位子抽出および再生用のポリアルキルアミン錯体 |
EP1447666A2 (en) * | 2003-02-13 | 2004-08-18 | Innotrac Diagnostics Oy | Biospecific binding reactants labeled with new luminescent lanthanide chelates and their use |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6015004672; NEWKOME G. R. et al.: Inorganic Chemistry Vol.23, No.16, 1984, p.2400-8 * |
JPN6015004673; ALCOCK N. W. et al.: Dalton Transactions Vol.3, 2005, p.518-27 * |
JPN7012004685; LODE P. et al.: Anal. Chem. Vol.75, No.13, 2003, p.3193-201 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015504877A (ja) * | 2011-12-22 | 2015-02-16 | デーホーアェル・フィンランド・オサケユキチュア | 改良された励起特性を有する新規発光ランタニドキレート |
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