JP2014525247A - 形質転換した微生物、例えばピキア・パストリス中で抗体などのマルチサブユニットタンパク質を高濃度かつ高純度で生産するための多コピー法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図2
Description
本出願は、2011年8月19日に出願し、「形質転換した微生物、例えばピキア・パストリス中で抗体などのマルチサブユニットタンパク質を高濃度かつ高純度で生産するための多コピー法(MULTI−COPY STRATEGY FOR HIGH−TITER AND HIGH−PURITY PRODUCTION OF MULTI−SUBUNIT PROTEINS SUCH AS ANTIBODIES IN TRANSFORMED MICROBES SUCH AS PICHIA PASTORIS)」という名称の米国特許出願番号第61/525,307号(代理人明細書番号67858.730200)およびその一部継続出願である、2012年5月8日に出願した、「形質転換した微生物、例えばピキア・パストリス中におけるマルチサブユニットタンパク質の高純度生産(HIGH−PURITY PRODUCTION OF MULTI−SUBUNIT PROTEINS SUCH AS ANTIBODIES IN TRANSFORMED MICROBES SUCH AS PICHIA PASTORIS)」という名称の米国特許出願番号第13/466,795号(代理人明細書番号75820.711001)の優先権を主張し、この全体はそれぞれ、参照することにより本明細書に組み入れられる。
当然のことながら、本発明は、特定の方法、プロトコール、細胞株、動物の種または属、および記載した試薬に限定されず、それらを変えることもできる。本明細書で使用する用語は特定の実施形態を説明する目的ためだけのものであり、本発明の範囲を限定する目的ではなく、本発明は、添付の請求項によってのみ限定されることも理解されたい。
Ab−Cをコードしている様々なコピー数の軽鎖および重鎖遺伝子を含むP.pastoris株のパネルの生成
バイオリアクター中で抗体を発現させるための方法
Claims (160)
- 高い収量で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法であって:
(a)宿主細胞のパネルを提供する工程であって、前記パネルは、それぞれが、該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子を含む少なくとも2種類の宿主細胞を含み;
ここで前記少なくとも2種類の宿主細胞はそれぞれ、2つの親細胞を交配することまたは融合させることによって生成され、各親細胞は、前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている少なくとも1つの遺伝子を1コピー以上含む、工程;
(b)該マルチサブユニット複合体を発現させるために各前記宿主細胞を培養する工程であって、ここで前記少なくとも2種類の宿主細胞に含まれる該遺伝子は、前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットを様々なレベルで発現する、工程;
(c)各前記宿主細胞が産生した該マルチサブユニット複合体の収量を測定する工程;および
(d)前記宿主細胞のパネル中で、別の宿主細胞よりも高い収量を産生する該宿主細胞を、所望のマルチサブユニット複合体を高い収量で産生する宿主細胞であると同定する工程、を含む、高い収量で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法。 - 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、および前記該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子が、前記所望の抗体の軽鎖および重鎖をコードしている遺伝子を含む、請求項1の方法。
- スクリーニングした細胞の該パネルが、該マルチサブユニット複合体を含んでいる該サブユニットをコードする該遺伝子を、様々なコピー数の組み合わせで発現する宿主細胞を含んでいる、請求項1の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を15コピーまで発現させ、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を12コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を10コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を8コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を6コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、抗体である該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を10コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項3の方法。
- 該宿主細胞が二倍体酵母細胞である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記二倍体酵母がピキア細胞である、請求項10の方法。
- 前記ピキアがピキア・パストリス(Pichia pastoris)細胞である、請求項11の方法。
- 前記二倍体酵母細胞が、メチロトローフ酵母、ピキア属の酵母、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、ピキア・アングスタ(Pichia angusta)、ピキア・グイレルモルジィ(Pichia guillermordii)、ピキア・メタノリカ(Pichia methanolica)、またはピキア・イノシトベラ(Pichia inositovera)である、請求項10の方法。
- 高い純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法であって:
(a)宿主細胞のパネルを提供する工程であって、前記パネルは、それぞれが、該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子を含む少なくとも2種類の宿主細胞を含み;
ここで前記少なくとも2種類の宿主細胞はそれぞれ、2つの親細胞を交配することまたは融合させることによって生成され、各親細胞は、前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている少なくとも1つの遺伝子を1コピー以上含む、工程;
(b)該マルチサブユニット複合体を発現させるために各前記宿主細胞を培養する工程であって、ここで前記少なくとも2種類の宿主細胞に含まれる該遺伝子は、前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットを様々なレベルで発現する、工程;
(c)各前記宿主細胞が産生した該マルチサブユニット複合体の純度を測定する工程;および
(d)前記宿主細胞のパネル中で、別の宿主細胞よりも高い純度で産生する該宿主細胞を、所望のマルチサブユニット複合体を高い純度で産生する宿主細胞であると同定する工程、を含む、高い純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法。 - 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、および前記該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子が、前記所望の抗体の軽鎖および重鎖をコードしている遺伝子を含む、請求項14の方法。
- 前記純度が、1種類以上のグリコシル化された抗体鎖の相対的な割合を測定することで決定される、請求項15の方法。
- 前記1種類以上のグリコシル化された抗体鎖がグリコ−高分子変異体を含む、請求項16の方法。
- スクリーニングした細胞の該パネルが、該マルチサブユニット複合体を含んでいる該サブユニットをコードする該遺伝子を、様々なコピー数の組み合わせで発現する宿主細胞を含んでいる、請求項1の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を15コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項14の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を12コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項14の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を10コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項14の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を8コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項14の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を6コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項13の方法。
- 該宿主細胞のパネルが、抗体である該マルチサブユニット複合体をコードする各遺伝子を10コピーまで発現し、および、実質的に、各サブユニットのその他のサブユニットに対する全ての可能なコピー数の組み合わせを構成している細胞を含む、請求項14の方法。
- 該宿主細胞が二倍体酵母細胞である、請求項14〜24のいずれか1項に記載の方法。
- 前記二倍体の酵母がピキア細胞である、請求項25の方法。
- 前記ピキアがピキア・パストリス(Pichia pastoris)細胞である、請求項26の方法。
- 高い収量で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法であって:
(a)宿主細胞のパネルを提供する工程であって、前記パネルは、それぞれが、該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる1つ以上の遺伝子を様々なコピー数で含む少なくとも2種類の宿主細胞を含む、工程;
(b)該マルチサブユニット複合体を発現させるために各前記宿主細胞を培養する工程;
(c)各前記宿主細胞が産生した該マルチサブユニット複合体の収量を測定する工程;および
(d)前記宿主細胞のパネル中で、別の宿主細胞よりも高い収量を産生する該宿主細胞を、所望のマルチサブユニット複合体を高い収量で産生する宿主細胞であると同定する工程、を含む、高い収量で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法。 - 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、および前記該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子が、前記所望の抗体の軽鎖および重鎖をコードしている遺伝子を含む、請求項28の方法。
- 高い純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法であって:
(a)宿主細胞のパネルを提供する工程であって、前記パネルは、それぞれが、該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる1つ以上の遺伝子を様々なコピー数で含む少なくとも2種類の宿主細胞を含む、工程;
(b)該マルチサブユニット複合体を発現させるために各前記宿主細胞を培養する工程;
(c)各前記宿主細胞が産生した該マルチサブユニット複合体の純度を測定する工程;および
(d)前記宿主細胞のパネル中で、別の宿主細胞よりも高い純度を産生する該宿主細胞を、所望のマルチサブユニット複合体を高い純度で産生する宿主細胞であると同定する工程、を含む、高い純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞を同定する方法。 - 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、および前記該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる遺伝子が、前記所望の抗体の軽鎖および重鎖をコードしている遺伝子を含む、請求項30の方法。
- 前記純度が、1種類以上のグリコシル化された抗体鎖の相対的な割合を測定することで決定される、請求項31の方法。
- 前記1種類以上のグリコシル化された抗体鎖がグリコ−高分子変異体を含む、請求項32の方法。
- 前記宿主細胞が二倍体酵母細胞である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記二倍体酵母細胞が、メチロトローフ酵母、ピキア属の酵母、ピキア・パストリス、ピキア・アングスタ、ピキア・グイレルモルジィ、ピキア・メタノリカ、またはピキア・イノシトベラである、請求項34の方法。
- 前記宿主細胞のパネルが、前記マルチサブユニット複合体の1つ以上のサブユニットをコードしている遺伝子を様々なコピー数で含む半数体細胞を交配または融合させ、前記交配によって前記マルチサブユニット複合体の該サブユニットをコードしている遺伝子を様々なコピー数で含む二倍体細胞を作出することで生成される、請求項34または35の方法。
- 該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる前記遺伝子が、半数体細胞のゲノム中に組み込まれている、請求項36の方法。
- 前記宿主細胞が倍数体の酵母細胞である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が四倍体酵母細胞である、請求項28〜33のいずれか1項に記載の方法。
- 前記二倍体酵母細胞が、メチロトローフ酵母、ピキア属の酵母、ピキア・パストリス、ピキア・アングスタ、ピキア・グイレルモルジィ、ピキア・メタノリカ、またはピキア・イノシトベラである、請求項39の方法。
- 前記宿主細胞のパネルが、前記マルチサブユニット複合体の1つ以上のサブユニットをコードしている遺伝子を様々なコピー数で含む二倍体細胞を交配または融合させ、前記交配によって前記マルチサブユニット複合体の該サブユニットをコードしている遺伝子を様々なコピー数で含む四倍体細胞を作出することで生成されている、請求項39または40の方法。
- 該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる前記遺伝子が、二倍体細胞のゲノム中に組み込まれている、請求項41の方法。
- 前記同定した宿主細胞を生産培養を展開するために使用する、請求項1〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が真核細胞である、請求項1〜43のいずれか1項に記載の方法。
- 前記真核細胞が酵母細胞である、請求項44の方法。
- 前記親細胞がそれぞれ半数体、二倍体または倍数体の酵母細胞である、請求項45の方法。
- 前記酵母細胞がメチロトローフ酵母である、請求項45または46の方法。
- 前記メチロトローフ酵母がピキア属である、請求項47の方法。
- 前記ピキア属のメチロトローフ酵母がピキア・パストリスである、請求項48の方法。
- 前記ピキア属のメチロトローフ酵母が、ピキア・アングスタ、ピキア・グイレルモルジィ、ピキア・メタノリカ、およびピキア・イノシトベラからなる群より選択される、請求項48の方法。
- 該マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる前記遺伝子が、pGAP、3’AOX TT、PpURA5、OCH1、AOX1、HIS4、GAP、ARG、およびHIS4 TT遺伝子座からなる群より選択される1つ以上のゲノムの遺伝子座に組み込まれている、請求項48の方法。
- 該マルチサブユニット複合体の前記サブユニットをコードしている少なくとも1つの前記遺伝子が、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターの制御下で発現している、請求項1〜51のいずれか1項に記載の方法。
- 前記誘導性プロモーターが、GAP、CUP1、AOX1、およびFLD1プロモーターからなる群より選択される、請求項52の方法。
- 少なくとも1つの該マルチサブユニット複合体の前記サブユニットをコードしている前記遺伝子が、AOX1、ICL1、グリセルアルデヒド−3−リン酸塩脱水素酵素(GAP)、FLD1、ADH1、アルコール脱水素酵素II、GAL4、PHO3、PHO5、およびPykプロモーター、それらに由来するキメラプロモーター、酵母プロモーター、哺乳類のプロモーター、昆虫プロモーター、植物プロモーター、は虫類プロモーター、両生類プロモーター、ウイルスプロモーター、ならびに鳥類プロモーターからなる群より選択されるプロモーターの制御下で発現している、請求項1〜53のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が二倍体細胞または四倍体細胞である、請求項1〜54のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を前記細胞からまたは培地から精製する、請求項1〜55のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を前記細胞の細胞内成分、細胞質、核質、または膜から精製する、請求項56の方法。
- 前記宿主細胞が前記所望のマルチサブユニット複合体を該培地に分泌する、請求項56の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を前記培地から精製する、請求項58の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が単一特異性抗体または二重特異性抗体である、請求項1〜59のいずれか1項に記載の方法。
- 前記少なくとも2種類の宿主細胞が、前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている遺伝子を異なるコピー数含む、請求項1〜60のいずれか1項に記載の方法。
- 前記パネル中の少なくとも1種類の宿主細胞が、該マルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットをコードしている前記遺伝子を少なくとも2コピー含む、請求項61の方法。
- 前記パネル中の少なくとも1種類の宿主細胞が、前記パネル中の別の宿主細胞に含まれている対応する遺伝子の発現を誘導するプロモーターとは別のプロモーターによって発現が誘導されるマルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットをコードしている遺伝子を含む、請求項1〜62のいずれか1項に記載の方法。
- 前記パネル中の少なくとも1種類の宿主細胞が、該マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている2つ以上の配列を含んでいるポリシストロン性の遺伝子を含む、請求項1〜63のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が、IL−6、TNF−α、CGRP、PCSK9、またはNGFに特異的に結合する抗体を含む、請求項1〜64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が、ヒト抗体もしくはヒト化抗体またはそれらの断片を含む、請求項1〜65のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト化抗体が、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、またはウシに由来する抗体である、請求項66の方法。
- 前記ヒト化抗体がウサギ由来の抗体である、請求項66の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が、一価抗体、二価抗体、または多価抗体を含む、請求項1〜68のいずれか1項に記載の方法。
- 前記パネル中の少なくとも1つの前記宿主細胞に含まれている前記マルチサブユニット複合体のサブユニットを発現させる少なくとも1つの前記遺伝子が、前記宿主細胞中での発現用に最適化されている、請求項1〜69のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、前記所望の抗体の純度が、前記宿主細胞によって産生され、グリコシル化されておらず、予測した見かけの流体力学半径を有する抗体複合体中に含まれており、および/または前記所望の抗体の標的に特異的に結合する所望の抗体の画分を測定することで評価される、請求項1〜70のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、前記所望の抗体の収量が、グリコシル化されており、予測した見かけ流体力学半径を有する複合体とは別の抗体複合体に含まれていて、および/または前記所望の抗体の標的と特異的に結合しない生産に伴う変異体をいずれも計算にいれずに、前記宿主細胞によって産生された所望の抗体の量を決定することで評価される、請求項1〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 所望のマルチサブユニット複合体を組換え的に産生する方法であって、
(a)該マルチサブユニット複合体の各サブユニットをコードしている1つ以上の遺伝子を含んでいる宿主細胞を提供する工程であって、ここで前記宿主細胞は、請求項1〜72のいずれか1項に記載の方法によって、高い収量および/または純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞であると同定される、工程;ならびに
(b)前記マルチサブユニット複合体を発現させるために前記宿主細胞を培養する工程、を含む、産生方法。 - 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項73の方法。
- 前記所望の抗体を精製する工程をさらに含んでいる、請求項74の方法。
- 前記宿主細胞が、少なくとも100mg/L、少なくとも150mg/L、少なくとも200mg/L、少なくとも250mg/L、少なくとも300mg/L、100〜300mg/L、100〜500mg/L、100〜1000mg/L、少なくとも1000mg/L、少なくとも1250mg/リットル、少なくとも1500mg/リットル、1750mg/リットル、2000mg/リットル、またはそれ以上の力価の抗体を産生する、請求項74または75の方法。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が20世代にわたって安定な、請求項1〜76のいずれか1項に記載の方法。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が50世代にわたって安定な、請求項1〜77のいずれか1項に記載の方法。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が100世代にわたって安定な、請求項1〜78のいずれか1項に記載の方法。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が500世代にわたって安定な、請求項1〜79のいずれか1項に記載の方法。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が1000世代にわたって安定な、請求項1〜80のいずれか1項に記載の方法。
- 前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つの該サブユニットをコードしている遺伝子のコピーが、2つ以上の遺伝子座に組み込まれている、請求項1〜81のいずれか1項に記載の方法。
- 前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つの該サブユニットをコードしている遺伝子のコピーが、3つ以上の遺伝子座に組み込まれている、請求項1〜82のいずれか1項に記載の方法。
- 各遺伝子座が5コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項82または83の方法。
- 各遺伝子座が4コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項82または83の方法。
- 各遺伝子座が3コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項82または83の方法。
- 請求項1〜86のいずれか1項に記載の方法によって、高い収量および/または純度で所望のマルチサブユニット複合体を産生する宿主細胞であると同定された宿主細胞であって、前記宿主細胞は、2つの親細胞を交配することまたは融合させることによって生産された宿主細胞であり、各親細胞が前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている少なくとも1つの遺伝子を1コピー以上含んでいる、前記宿主細胞。
- それぞれが前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている、2種類の異なる遺伝子各々の少なくとも1コピーが、前記宿主細胞の相同染色体の2つの同じ遺伝子座に組み込まれている、請求項77の宿主細胞。
- ピキア属の二倍体細胞または四倍体細胞である、請求項87または88の宿主細胞。
- ピキア・パストリス細胞である、請求項89の宿主細胞。
- 請求項87〜90のいずれか1項に記載の宿主細胞に由来する、二倍体または四倍体酵母培養。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を発現させる少なくとも1つの遺伝子が前記宿主細胞のゲノムに組み込まれている、請求項87〜91のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を発現させる少なくとも1つの遺伝子が、1つ以上の染色体外成分、プラスミド、または人工染色体に含まれている、請求項87〜92のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項87〜93のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、前記所望の抗体の重鎖を発現させる遺伝子のコピー数よりも多いコピー数の前記所望の抗体の軽鎖を発現させる遺伝子を含む、請求項94の宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、前記所望の抗体の軽鎖を発現させる遺伝子のコピー数よりも多いコピー数の前記所望の抗体の重鎖を発現させる遺伝子を含む、請求項94の宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、前記所望の抗体の軽鎖を発現させる遺伝子のコピーと前記所望の抗体の重鎖を発現させる遺伝子のコピーを同数含む、請求項94の宿主細胞。
- 前記所望の抗体の軽鎖をコードしている遺伝子を1〜10コピーと、前記所望の抗体の重鎖をコードしている遺伝子を1〜10コピー含む、請求項94の宿主細胞。
- 前記宿主細胞に含まれる、前記所望の抗体の重鎖をコードしている遺伝子のコピー数と、前記所望の抗体の軽鎖をコードしている遺伝子のコピー数がそれぞれ、2および2、2および3、3および3、3および4、3および5、4および3、4および4、4および5、4および6、5および4、5および5、5および6、または5および7である、請求項94の宿主細胞。
- 前記宿主細胞に含まれる、前記所望の抗体の重鎖をコードしている遺伝子のコピー数と、前記所望の抗体の軽鎖をコードしている遺伝子のコピー数がそれぞれ、2および1、3および1、4および1、5および1、6および1、7および1、8および1、9および1、10および1、1および2、2および2、3および2、4および2、5および2、6および2、7および2、8および2、9および2、10および2、1および3、2および3、3および3、4および3、5および3、6および3、7および3、8および3、9および3、10および3、1および4、2および4、3および4、4および4、5および4、6および4、7および4、8および4、9および4、10および4、1および5、2および5、3および5、4および5、5および5、6および5、7および5、8および5、9および5、10および5、1および6、2および6、3および6、4および6、5および6、6および6、7および6、8および6、9および6、10および6、1および7、2および7、3および7、4および7、5および7、6および7、7および7、8および7、9および7、10および7、1および8、2および8、3および8、4および8、5および8、6および8、7および8、8および8、9および8、10および8、1および9、2および9、3および9、4および9、5および9、6および9、7および9、8および9、9および9、10および9、1および10、2および10、3および10、4および10、5および10、6および10、7および10、8および10、9および10、10および10である、請求項94の宿主細胞。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が20世代にわたって安定な、請求項87〜100のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が50世代にわたって安定な、請求項87〜100のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が100世代にわたって安定な、請求項87〜100のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が500世代にわたって安定な、請求項87〜100のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 該所望のマルチサブユニット複合体をコードしている該遺伝子のコピー数および/または前記所望のマルチサブユニット複合体の収量が1000世代にわたって安定な、請求項87〜100のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つの該サブユニットをコードしている遺伝子のコピーが、2つ以上の遺伝子座に組み込まれている、請求項87〜105のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 前記マルチサブユニット複合体の少なくとも1つの該サブユニットをコードしている遺伝子のコピーが、3つ以上の遺伝子座に組み込まれている、請求項87〜105のいずれか1項に記載の宿主細胞。
- 各遺伝子座が5コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項106または107の宿主細胞。
- 各遺伝子座が4コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項104または105の宿主細胞。
- 各遺伝子座が3コピー以下の所定のサブユニットを含む、請求項106または107の宿主細胞。
- 生産培地中で生育している、請求項91の酵母培養。
- 前記生産培地が最少培地である、請求項111の培養。
- 前記最少培地が選択剤を含んでいない、請求項112の培養。
- 前記最少培地が予め形成されているアミノ酸または他の複雑な生体分子を含んでいない、請求項112の培養。
- 高細胞密度まで生育する、請求項91の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも50g/Lである、請求項115の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも100g/Lである、請求項115の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも300g/Lである、請求項115の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも400g/Lである、請求項115の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも500g/Lである、請求項115の培養。
- 前記高細胞密度が少なくとも750g/Lである、請求項115の培養。
- 該酵母細胞が少なくとも20回分裂するまで培養され、かつ、前記少なくとも20回分裂した後も、前記所望のマルチサブユニット複合体の発現を高レベルに維持している、請求項91の培養。
- 該酵母細胞が少なくとも50回分裂するまで培養され、かつ、前記少なくとも50回分裂した後も、前記所望のマルチサブユニット複合体の発現を高レベルに維持している、請求項91の培養。
- 該酵母細胞が少なくとも100回分裂するまで培養され、かつ、前記少なくとも100回分裂した後も、前記所望のマルチサブユニット複合体の発現を高レベルに維持している、請求項91の培養。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項122〜124のいずれか1項に記載の培養。
- 請求項1〜86のいずれか1項に記載の方法に従って生成した細胞に由来する、安定な二倍体ピキア酵母培養を含んでいる培地であって、ここで該培地が含む前記所望のマルチサブユニット複合体の発現レベルが少なくとも約50mg/リットル、100mg/リットル、500mg/リットルまたは1000mg/リットル、1500mg/リットルまたはそれ以上である、培地。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体を培地中に発現している、請求項1〜86のいずれか1項に記載の方法に従って生成した細胞に由来する、安定な二倍体ピキア・パストリス酵母を含んでいる培地であって、ここで前記培養中での前記二倍体細胞の細胞密度が少なくとも約50g/L、100g/L、300g/L、400g/L、500g/L、700g/L、またはそれ以上である、培地。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項126または127の培地。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットが分泌シグナルを含む、請求項1〜128のいずれか1項に記載の方法または組成物。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項129の方法または組成物。
- 該分泌シグナルが、トリリゾチーム(CLY)シグナルペプチド;CLY−L8;出芽酵母(S.cerevisiae)インベルターゼ(SUC2)シグナルペプチド;MF−α(プレプロ);MF−α(プレ)−apv;MF−α(プレ)−apv−SLEKR;MF−α(プレプロ)−(EA)3;αFシグナルペプチド;KILM1シグナルペプチド;抑制性酸性ホスファターゼ(PHO1)シグナルペプチド;A.nigerGOXシグナルペプチド;シュワンニオミセス・オシデンタリ(Schwanniomyces occidentalis)グルコアミラーゼ遺伝子(GAM1)シグナルペプチド;プロ配列を含むヒト血清アルブミン(HSA)シグナルペプチド;プロ配列を含まないヒト血清アルブミン(HSA)シグナルペプチド;ISNシグナルペプチド;IFNシグナルペプチド;HGHシグナルペプチド;フィトヘマグルチニン(PHA);カイコリゾチーム;ヒトリゾチーム(LYZ1);アクチビンI型受容体;アクチビンII型受容体;ピキア・パストリス(P.pastoris)免疫グロブリン結合タンパク質(PpBiP);ヒト抗体3D6軽鎖リーダー配列;およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項129または130の方法または組成物。
- 前記親細胞がそれぞれ、半数体、二倍体または倍数体酵母細胞である、請求項1〜131のいずれか1項に記載の方法または組成物。
- 所望のマルチサブユニット複合体を組換え的に産生する方法であって:
(a)前記所望のマルチサブユニット複合体の各サブユニットをコードしている遺伝子を2〜10コピー含んでいる宿主細胞を提供する工程;および
(b)前記所望のマルチサブユニット複合体の各サブユニットをコードしている前記遺伝子を発現させるために、前記宿主細胞を培養する工程、を含み、
ここで前記宿主細胞は2つの親細胞を交配または融合させることで生成され、各親細胞は、前記マルチサブユニット複合体の1つ以上のサブユニットをコードしている遺伝子を1コピー以上含む、
所望のマルチサブユニット複合体を組換え的に産生する方法。 - 所望のマルチサブユニット複合体を組換え的に産生する方法であって:
(a)前記所望のマルチサブユニット複合体の各サブユニットをコードしている遺伝子を2〜10コピー含んでいる宿主細胞を提供する工程;および
(b)前記所望のマルチサブユニット複合体の各サブユニットをコードしている前記遺伝子を発現させるために、前記宿主細胞を培養する工程を含む、
所望のマルチサブユニット複合体を組換え的に産生する方法。 - それぞれが前記マルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている、2種類の異なる遺伝子各々の少なくとも1コピーが、前記宿主細胞の相同染色体の2つの同じ遺伝子座に組み込まれている、請求項133または134の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含む、請求項133〜135のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が真核細胞である、請求項133〜136のいずれか1項に記載の方法。
- 前記真核細胞が酵母細胞である、請求項137の方法。
- 前記酵母細胞がメチロトローフ酵母である、請求項138の方法。
- 前記メチロトローフ酵母がピキア属の酵母である、請求項139の方法。
- 前記ピキア属の酵母であるメチロトローフ酵母がピキア・パストリスである請求項140の方法。
- 前記ピキア属の酵母であるメチロトローフ酵母が、ピキア・アングスタ、ピキア・グイレルモルジィ、ピキア・メタノリカ、およびピキア・イノシトベラからなる群より選択される、請求項140の方法。
- 前記マルチサブユニット複合体の該サブユニットを発現させる少なくとも1つの前記遺伝子が、該pGAP遺伝子座および該HIS4 TT遺伝子座からなる群より選択される1つ以上のゲノム遺伝子座に組み込まれている、請求項140の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体をコードしている少なくとも1つの前記遺伝子が、誘導性プロモーターまたは構成的プロモーターの制御下で発現される、請求項133〜143のいずれか1項に記載の方法。
- 前記誘導性プロモーターが、GAP、AOX1、CUP1、およびFLD1プロモーターからなる群より選択される、請求項144の方法。
- 前記所望の抗体軽鎖および/または重鎖をコードしている少なくとも1つの前記遺伝子が、AOX1、ICL1、グリセルアルデヒド−3−リン酸塩脱水素酵素(GAP)、FLD1、ADH1、アルコール脱水素酵素II、GAL4、PHO3、PHO5、およびPykプロモーター、それらに由来するキメラプロモーター、酵母プロモーター、哺乳類のプロモーター、昆虫プロモーター、植物プロモーター、は虫類プロモーター、両生類プロモーター、ウイルスプロモーター、および鳥類プロモーターからなる群より選択されるプロモーターの制御下で発現される、請求項133〜145のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が二倍体または四倍体細胞である、請求項133〜146のいずれか1項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が前記所望の抗体を該培地中に分泌する、請求項133〜147のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望の抗体が単一特異性または二重特異性抗体である、請求項133〜148のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望の抗体がIL−6、TNF−α、CGRP、PCSK9、またはNGFに特異的に結合する、請求項133〜149のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望の抗体がヒト抗体もしくはヒト化抗体またはそれらの断片である、請求項133〜150のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト化抗体がウサギに由来する抗体である、請求項151の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が一価抗体、二価抗体、または多価抗体を含む、請求項133〜152のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている遺伝子の少なくとも1つの前記コピーが、前記宿主細胞中での発現用に最適化されている、請求項133〜153のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、かつ、前記所望の抗体の軽鎖をコードしている遺伝子のコピー数が、前記所望の抗体の重鎖をコードしている遺伝子の前記コピー数よりも多いか、またはそれと同じである、請求項133〜154のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている各遺伝子を1コピーしか含まない株よりも、高い収量の前記所望のマルチサブユニット複合体を産生する、請求項133〜155のいずれか1項に記載の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体のサブユニットをコードしている各遺伝子を1コピーしか含まない株よりも、高い純度で前記所望のマルチサブユニット複合体を産生する、請求項133〜156のいずれか1項に記載の方法。
- 所望のマルチサブユニット複合体が所望の抗体を含み、かつ、前記純度が、重鎖および/または軽鎖ポリペプチドの総質量に占める、グリコシル化された重鎖および/または軽鎖ポリペプチドの質量をパーセンテージで測定することによって決定される、請求項157の方法。
- 前記所望のマルチサブユニット複合体の少なくとも1つのサブユニットが分泌シグナルを含む、請求項133〜158のいずれか1項に記載の方法。
- 該分泌シグナルが、トリリゾチーム(CLY)シグナルペプチド;CLY−L8;出芽酵母(S.cerevisiae)インベルターゼ(SUC2)シグナルペプチド;MF−α(プレプロ);MF−α(プレ)−apv;MF−α(プレ)−apv−SLEKR;MF−α(プレプロ)−(EA)3;αFシグナルペプチド;KILM1シグナルペプチド;抑制性酸性ホスファターゼ(PHO1)シグナルペプチド;A.nigerGOXシグナルペプチド;シュワンニオミセス・オシデンタリ(Schwanniomyces occidentalis)グルコアミラーゼ遺伝子(GAM1)シグナルペプチド;プロ配列を含むヒト血清アルブミン(HSA)シグナルペプチド;プロ配列を含まないヒト血清アルブミン(HSA)シグナルペプチド;ISNシグナルペプチド;IFNシグナルペプチド;HGHシグナルペプチド;フィトヘマグルチニン(PHA);カイコリゾチーム;ヒトリゾチーム(LYZ1);アクチビンI型受容体;アクチビンII型受容体;ピキア・パストリス(P.pastoris)免疫グロブリン結合タンパク質(PpBiP);ヒト抗体3D6軽鎖リーダー配列;およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドを含む、請求項159の方法。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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