JP2014523405A5

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Publication number: JP2014523405A5
Application number: JP2014508565A
Authority: JP
Filing date: 2012-04-26
Publication date: 2015-05-28
Anticipated expiration: 2032-04-26

Description

細胞の文脈において使用される場合、「異種」タンパク質とは、細胞により天然には発現されないタンパク質を指す。例えば、タンパク質を発現するように組換えにより遺伝子操作された細胞は、異種タンパク質を発現する。
[本発明1001]
標的分子を含む生物学的試料からゲノムDNAを除去する方法であって、
（a）該試料由来のゲノムDNAを含む正に荷電した複合体が、陽イオン交換リガンドに結合し、かつ
（b）該標的分子が、該陽イオン交換リガンドに実質的に結合しない
ような条件下で、該試料を該陽イオン交換リガンドに接触させる工程；
減少した量のゲノムDNAを有する試料を生成するために、該陽イオン交換リガンドに結合した該正に荷電した複合体から該試料を分離する工程；および
減少した量のゲノムDNAを有する該試料に対して、少なくとももう1つの標的分子精製段階を実施する工程
を含む、方法。
[本発明1002]
前記標的分子がタンパク質である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記タンパク質が、細胞中において発現された異種タンパク質である、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記タンパク質が抗体である、本発明1002の方法。
[本発明1005]
前記抗体がIgG抗体およびIgM抗体から選択される、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記標的分子が核酸である、本発明1001の方法。
[本発明1007]
前記核酸がプラスミドである、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記陽イオン交換リガンドが、カルボン酸部分、またはスルホン酸部分、またリン酸部分を含む、本発明1001の方法。
[本発明1009]
前記陽イオン交換リガンドが固体支持体に結合している、本発明1001の方法。
[本発明1010]
前記固体支持体がクロマトグラフィーカラムである、本発明1009の方法。
[本発明1011]
前記固体支持体がビーズまたは粒子である、本発明1009の方法。
[本発明1012]
前記陽イオン交換リガンドが可溶性ポリマーに結合している、本発明1001の方法。
[本発明1013]
可溶性ポリマーがカルボキシメチルセルロースまたはデキストラン硫酸を含む、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記生物学的試料が細胞培養物由来である、本発明1001の方法。
[本発明1015]
前記生物学的試料が細胞培養上清である、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記細胞培養物が、哺乳動物細胞培養物、細菌細胞培養物、酵母細胞培養物、および昆虫細胞培養物からなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1017]
前記生物学的試料が細胞培養物である、本発明1001の方法。
[本発明1018]
前記陽イオン交換リガンドがビーズまたは粒子に連結され、かつ、前記細胞培養物における該ビーズまたは該粒子の存在により標的分子の凝集が減少する、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記細胞培養物中の細胞が前記標的分子を分泌する、本発明1017の方法。
[本発明1020]
前記接触させる工程の前または後のいずれかに、
（a）前記試料由来の負に荷電したDNAが、陰イオン交換リガンドに結合し、かつ
（b）前記標的分子が、該陰イオン交換リガンドに実質的に結合しない
ような条件下で該試料を該陰イオン交換リガンドに接触させ、それにより、該試料中の負に荷電したDNAから該標的分子を分離する工程
をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1021]
前記標的分子精製段階が、減少した量のゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに接触させることを含む、本発明1001または1020の方法。
[本発明1022]
前記標的分子精製段階が、
減少したゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに、該標的分子が該リガンドまたは該作用物質に結合するように接触させること；
該リガンドから該試料の他の成分を洗い流すこと；および
該リガンドまたは該作用物質から該標的分子を溶出すること
を含む、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記標的分子精製段階が、減少した量のゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに、該標的分子は該リガンドまたは該作用物質に実質的に結合しないが該試料の別の成分は該作用物質または該リガンドに結合するようなフロースルーモードで接触させることを含む、本発明1021の方法。

Claims

標的分子を含む生物学的試料からゲノムDNAを除去する方法であって、
（a）該試料由来のゲノムDNAを含む正に荷電した複合体が、陽イオン交換リガンドに結合し、かつ
（b）該標的分子が、該陽イオン交換リガンドに実質的に結合しない
ような条件下で、該試料を該陽イオン交換リガンドに接触させる工程；
減少した量のゲノムDNAを有する試料を生成するために、該陽イオン交換リガンドに結合した該正に荷電した複合体から該試料を分離する工程；および
減少した量のゲノムDNAを有する該試料に対して、少なくとももう1つの標的分子精製段階を実施する工程
を含む、方法。
前記陽イオン交換リガンドが、スルホン酸部分、またはリン酸部分を含む、請求項1記載の方法。
前記生物学的試料が、細胞培養物または培養上清である、請求項1または2記載の方法。
前記標的分子がタンパク質である、請求項1記載の方法。
前記タンパク質が、細胞中において発現された異種タンパク質である、請求項4記載の方法。
前記タンパク質が抗体である、請求項4記載の方法。
前記抗体がIgG抗体およびIgM抗体から選択される、請求項6記載の方法。
前記抗体がIgMである、請求項6記載の方法。
前記標的分子が核酸である、請求項1記載の方法。
前記核酸がプラスミドである、請求項9記載の方法。
前記陽イオン交換リガンドが、カルボン酸部分、またはスルホン酸部分、またリン酸部分を含む、請求項1記載の方法。
前記陽イオン交換リガンドが固体支持体に結合している、請求項1記載の方法。
前記固体支持体がクロマトグラフィーカラムである、請求項12記載の方法。
前記固体支持体がビーズまたは粒子である、請求項12記載の方法。
前記陽イオン交換リガンドが可溶性ポリマーに結合している、請求項1記載の方法。
可溶性ポリマーがカルボキシメチルセルロースまたはデキストラン硫酸を含む、請求項15記載の方法。
前記生物学的試料が細胞培養物由来である、請求項1記載の方法。
前記生物学的試料が細胞培養上清である、請求項17記載の方法。
前記細胞培養物が、哺乳動物細胞培養物、細菌細胞培養物、酵母細胞培養物、および昆虫細胞培養物からなる群より選択される、請求項17記載の方法。
前記生物学的試料が細胞培養物である、請求項1記載の方法。
前記陽イオン交換リガンドがビーズまたは粒子に連結され、かつ、前記細胞培養物における該ビーズまたは該粒子の存在により標的分子の凝集が減少する、請求項20記載の方法。
前記細胞培養物中の細胞が前記標的分子を分泌する、請求項20記載の方法。
前記接触させる工程の前または後のいずれかに、
（a）前記試料由来の負に荷電したDNAが、陰イオン交換リガンドに結合し、かつ
（b）前記標的分子が、該陰イオン交換リガンドに実質的に結合しない
ような条件下で該試料を該陰イオン交換リガンドに接触させ、それにより、該試料中の負に荷電したDNAから該標的分子を分離する工程
をさらに含む、請求項1記載の方法。
前記標的分子精製段階が、減少した量のゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに接触させることを含む、請求項1または23記載の方法。
前記標的分子精製段階が、
減少したゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに、該標的分子が該リガンドまたは該作用物質に結合するように接触させること；
該リガンドから該試料の他の成分を洗い流すこと；および
該リガンドまたは該作用物質から該標的分子を溶出すること
を含む、請求項24記載の方法。
前記標的分子精製段階が、減少した量のゲノムDNAを有する前記試料を、陽イオン交換リガンド、陰イオン交換リガンド、混合型リガンド、親和性作用物質、または疎水性リガンドに、該標的分子は該リガンドまたは該作用物質に実質的に結合しないが該試料の別の成分は該作用物質または該リガンドに結合するようなフロースルーモードで接触させることを含む、請求項24記載の方法。