JP2014521952A - 不均一系(ばらつき)におけるタンパク質分解酵素活性の空間分布および時間分布を求めるための方法、これを実現するための装置、不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の空間分布および時間分布の変化をもとに、止血系の欠陥を診断するための方法 - Google Patents
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Abstract
この方法の目的は、いくつかの疾患を診断し、血液凝固パラメータに影響する医薬品の効率を評価するための可能性を与えつつ、フィブリン血栓成長の過程における凝固因子の空間分布を調べることのみならず、不均一系における血液凝固プロセスの異なる相における凝固因子の役割を評価することである。
この目的は、被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンのうちの1つからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、タンパク質分解酵素による蛍光発生基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ上述した基質をin vitro系に浸漬するステップと、あらかじめ定められた時点で、被検媒体試料を照明して、標識の蛍光シグナルを励起させるステップと、あらかじめ定められた時点で、照明と同時に、試料中における標識の蛍光シグナルの空間分布を記録するステップと、媒体の成分に対する媒体中での標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、標識の蛍光強度の一組の空間分布から、タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるステップと、を含む、不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める手段を作ることで、解決される。発色基質または発光基質を基質として加えてもよい。この方法を実現するための装置も提供される。
Description
キュベット内に、ウェルの数に応じて1つまたは2つ以上の血漿試料を入れ、
インサートを活性化因子とともにキュベットに挿入し、血漿を凝固活性化因子と接触させ(血栓形成の場合)、
フィブリン血栓の成長を時間と距離の関数として記録するか、あるいは、
キュベット内に、1つまたは2つ以上のフィブリン血栓を含む1つまたは2つ以上の血漿試料を入れ、
血漿を線溶活性化因子と接触させ(血栓溶解の場合)、
フィブリン血栓の溶解を時間と距離の関数として記録する。
空間フィブリン血栓形成を監視するための方法および装置の主な利点としては、少量の血漿しか必要ないということがあげられる。(300μlから最大で1500μlではない、すなわち、過去に報告のある同様の他の系を用いる場合の75分の1かつ標準的な凝固アッセイに必要な最小血漿量の5分の1である)わずか20μlという少ない量で、信頼できる高分解能の結果を得ることが可能である。この装置を用いることで、凝固系の最終産物であるフィブリン血栓の形成過程だけを記録する方法を実施できる。
この目的は、不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための方法であって、
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
タンパク質分解酵素による蛍光発生基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質をin vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、被検媒体試料を照明して標識の蛍光を励起させるステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記照明と同時に、試料中における標識の蛍光の空間分布を記録するステップと、
研究対象となる媒体の成分に対する標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、特定の瞬間に対する標識蛍光の一組の空間分布から、タンパク質分解酵素活性の時空間分布を得るステップと、を含む方法を提供することによって達成される。
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
タンパク質分解酵素による発色基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質をin vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記被検媒体試料に、標識による光の吸収が相当量になるような波長の光を照射するステップと、
あらかじめ定められた時点で、媒体中での標識による光吸収の空間分布を記録するステップと、
媒体の成分に対する媒体中での標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、特定の瞬間に対する標識による光吸収の一組の空間分布から、タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める(規定または計算する)ステップと、を含む方法を提供することによって達成される。
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
タンパク質分解酵素による発光基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質をin vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、試料中における標識の発光シグナルの空間分布を記録するステップと、
媒体の成分に対する媒体中での標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、特定の瞬間に対する標識発光の一組の空間分布から、タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める(規定または計算する)ステップと、を含む方法を提供することによって達成される。
媒体の試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料と、蛍光発生基質または発色基質または発光基質と、を入れるためのキュベットを含むin vitro系と、
あらかじめ定められた時点で、被検媒体の試料を照明するための手段と、
あらかじめ定められた時点で、タンパク質分解酵素による上述した基質の切断時に形成される標識のシグナルの空間分布を記録するための手段と、
前記照明手段/記録手段を制御するための手段と、を備える装置を提供することによっても達成される。
試料として、全血、無血小板血漿、乏血小板血漿、多血小板血漿、抗凝血薬を加えた血液、抗凝血薬を加えた血漿からなる群から選択される血液成分を使用するステップと、
被検試料を、表面に固定化された血液凝固活性化因子と接触させること、研究対象となるタンパク質分解酵素によって切断される基質を添加すること、カルシウム塩を添加すること、接触凝固活性化の阻害因子を添加することからなる群から選択される少なくとも1つの操作を実行することによって、被検試料中にてタンパク質分解酵素を形成し、これを観察できる条件を与えるステップと、
決定された瞬間に、試料中にて基質から切断された標識のシグナルの空間分布を記録するステップと、
媒体の成分に対する媒体中での標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、特定の瞬間に対する標識シグナルの一組の空間分布から、タンパク質分解酵素(凝固因子)の活性の時空間分布を求めるステップと、
タンパク質分解酵素の時空間分布のずれによって、止血系の状態を推定するステップと、を含む方法を提供することで、さらに達成される。
試料中における血液凝固系の状態について判断すること
健常なドナーと比較することで、患者の凝固系の状態についての結論を出すこと
治療効率を推定すること
医薬品個々の最適用量を選択すること
医薬品の作用機序を求めること
医薬品の開発過程で化学物質をスクリーニングすること
血液凝固系の動作のメカニズムに関する情報を取得すること
血液系障害の病原および病因について研究すること
フィブリン血栓が成長する過程における凝固因子の空間的動態を研究すること
不均一系における異なる血液凝固相における凝固因子の役割についての評価を可能にすること。
本発明によれば、不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための方法が提供される。この方法は、以下のようにして実現される。
第2の実施形態は、基質が発色基質であるという点で、第1の実施形態とは異なる。
この方法の第3の実施形態は、基質が、タンパク質分解酵素によって反応時に切断されて化学発光産物を放出する基質であるという点で、第1の実施形態とは異なる。あらかじめ定められた時点で、試料中における発光強度の空間分布を記録する。媒体の成分に対する媒体中での化学発光産物の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、発光分布から、タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める。
以下の作用剤を使用した。ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリン、7−アミノ−4−メチル−クマリン(AMC)、Z−Gly−Gly−Arg−AMC、トウモロコシトリプシン阻害因子、第VIII因子、第VIII因子試験、第VIII因子欠乏血漿、糖タンパク質IIb−IIIaアンタゴニスト。
健常なドナーの新鮮なヒト血液から、正常な血漿の試料を得た。血液は、3.8%クエン酸ナトリウム(pH5.5)中に、容量比9:1で採取した。血液を1600gで15分間遠心処理した後、上清を10000gで5分間さらに遠心処理して、無血小板血漿を得た。次に、上清を凍結させ、−70℃で保管した。各実験の前に、試料を水浴中にて解凍した。
上述したように、活性化因子すなわち、プラスチック表面に固定化された組織因子(TF)の単層を用いて、凝固を活性化した。活性化因子を+4から+8℃で保管した。
異なる被検媒体試料における空間血栓成長について検討する。
上述したようにして調製した血漿に、たとえばトウモロコシトリプシン阻害因子などの阻害因子(0.2mg/ml)、0.1μMの脂質ベシクル(モル比20/80のホスファチジルセリン/ホスファチジルコリン)を補った。トロンビンの形成を観察するために、基質Z−GGR−AMC(800μM)を加えた。試料を37℃で10分間インキュベートした後、カルシウム塩、特にCaCl2(20mM)を加えた。調べる対象となる試料を実験用のキュベットに入れ、調製した血漿試料と接触させることで表面を組織因子で覆った活性化因子によって血栓の形成を開始した。
血栓の退縮を防止するために、25μg/mlの糖タンパク質阻害因子IIb/IIIaを使用した。また、実験は、0.5%低融点アガロースゲルで行った。これは、場合によっては高濃度のアンタゴニストでも退縮を完全には阻害しないかったからである。
画像処理
まず、赤色光および紫外光の画像を同じようにして処理した。光散乱(図6a)またはAMC蛍光のプロファイルを得るために、活性化因子の表面に垂直なラインに沿って、それぞれの範囲におけるフレームごとに光強度を測定した。これらの値を平均して、ライン150〜300本にした。
以下の反応−拡散式に対する逆問題を解くことで、AMCの一次元分布から、トロンビン濃度(図6b)を計算した。
Claims (24)
- 不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための方法であって、
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
前記タンパク質分解酵素による蛍光発生基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質を前記in vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記被検媒体試料を照明して、前記標識の蛍光を励起させるステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記照明と同時に、前記試料中における前記標識の蛍光シグナルの空間分布を記録するステップと、
前記媒体の成分に対する前記媒体中における前記標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、前記標識の前記蛍光シグナルの一組の分布から、前記タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるステップと、を含む方法。 - 不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための方法であって、
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
前記タンパク質分解酵素による発色基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質を前記in vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記被検媒体試料に、前記標識による相当量の吸収に対応する波長の光を照射するステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記試料中での前記標識の光吸収の空間分布を記録するステップと、
前記媒体の成分に対する前記媒体中における前記標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、前記標識の前記蛍光シグナルの一組の分布から、前記タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める(規定または計算する)ステップと、を含む方法。 - 不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための方法であって、
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料を含有するin vitro系を提供するステップと、
前記タンパク質分解酵素による発光基質の切断時に、標識をさらに放出しつつ前記基質を前記in vitro系に浸漬するステップと、
あらかじめ定められた時点で、前記試料中での前記標識の発光シグナルの空間分布を記録するステップと、
前記媒体の成分に対する前記媒体中における前記標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、前記標識の前記蛍光シグナルの一組の分布から、前記タンパク質分解酵素活性の時空間分布を求める(規定または計算する)ステップと、を含む方法。 - 前記活性化剤は、前記タンパク質分解酵素活性の時空間分布の変化を引き起こすために、前記in vitro系に加えられる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記活性化剤は、表面に固定化された組織因子、可溶性の組織因子、組織型プラスミノーゲン活性化因子、組織因子発現能のある細胞、体組織の試料、ガラスまたはプラスチックからなる群から選択される作用剤である、請求項4に記載の方法。
- あらかじめ定められた時点で、前記被検試料媒体にさらに光を照射し、光散乱の空間分布、前記試料中での光透過の空間分布またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、前記被検試料の空間パラメーターを記録する、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記基質は、溶液として前記被検媒体試料に加えられる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記基質は、前記被検媒体試料を入れる前に前記in vitro系の壁面にフリーズドライ状で適用される、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記被検媒体は、多血小板血漿、無血小板血漿、乏血小板血漿からなる群から選択される血漿である、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 照明と前記標識の蛍光シグナルの変化の記録は、1分間に1〜1800回の頻度で行われる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記方法のステップはすべて、約37℃に制御された温度で行われる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記方法のステップはすべて、気圧より高い安定した圧力で行われる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記被検試料のpHを、7.2〜7.4の範囲内に安定させる、請求項1から3のいずれか1項に記載の方法。
- 不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布を求めるための装置であって、
被検媒体試料中に分散された、血漿、全血、水、リンパ液、コロイド溶液、晶質液またはゲル、タンパク質分解酵素またはそのチモーゲンからなる群から選択される被検媒体の試料と、蛍光発生基質または発色基質または発光基質と、を入れるためのキュベットを含むin vitro系と、
決められた時間内に、前記被検媒体試料を照明するための手段と、
決められた時間内に、タンパク質分解酵素による前記基質の切断による標識シグナルの空間分布を記録する手段と、
照明手段および記録手段を制御する手段と、からなることを特徴とする、装置。 - プロセス活性化因子を前記キュベットに配置および挿入するための活性化手段を含み、タンパク質分解酵素活性の時空間分布の変化を開始させる、請求項14に記載の装置。
- 前記被検媒体試料中の温度を、好ましくは37℃で安定させる手段を含む、請求項14に記載の装置。
- 前記被検試料の全量の中を、好ましくは大気圧に対して上昇される安定した圧力にする手段を含む、請求項14に記載の装置。
- 暗視野法によって、可視光線で、前記被検媒体試料を照明する手段を含む、請求項14に記載の装置。
- 照明手段および記録手段を制御する前記手段は、オン/オフ時間、照明強度、照明手段と、その間の登録との同期を調節する可能性を与える、請求項14に記載の装置。
- 経時的なタンパク質分解酵素活性の空間分布を計算する可能性を与えるコンピューター計算装置に接続されるか、そのようなコンピューター計算装置をオンにする、請求項14に記載の装置。
- in vitroでの不均一系におけるタンパク質分解酵素活性の時空間分布の変化をもとに、止血系の障害を診断するための方法であって、
試料として、全血、無血小板血漿、乏血小板血漿、多血小板血漿、抗凝血薬を加えた血液、抗凝血薬を加えた血漿からなる群から選択される血液成分を使用するステップと、
被検試料を、表面に固定化された血液凝固活性化因子と接触させること、研究対象となるタンパク質分解酵素によって切断される基質を添加すること、カルシウム塩を添加すること、凝固の接触活性化の阻害因子を添加することからなる群から選択される少なくとも1つの操作を実行することによって、被検試料中にてタンパク質分解酵素を形成する、その観察のための条件を与えるステップと、
決定された瞬間に、前記基質から切断された前記試料中の標識シグナルの空間分布を記録するステップと、
前記媒体の成分に対する前記媒体中での前記標識の結合を考慮しつつ、「反応−拡散−対流」タイプの逆問題を解くことによって、前記標識シグナルの一組の空間分布から、決められた時間に対するタンパク質分解酵素(凝固因子)活性の時空間分布を求めるステップと、
前記タンパク質分解酵素の前記時空間分布のずれによって、止血系の状態を推定するステップと、を含む方法。 - 明確に規定された瞬間に、前記被検試料をさらに照明し、暗視野法によって、前記被検媒体試料中にて形成されるフィブリン血栓からの光散乱の空間分布を記録する、請求項21に記載の方法。
- 調べる対象となる凝固因子は、トロンビン、第Xa因子、第VIIa因子、第IXa因子、第XIIa因子、第XIa因子、プラスミンからなる群から選択されるタンパク質分解酵素である、請求項21に記載の方法。
- 前記試料中における凝固系の状態を評価し、診断を行うために、トロンビンまたはフィブリンの時空間分布の少なくとも1つのパラメーターを使用し、前記パラメーターは、トロンビン波の空間伝播速度、前記試料中におけるトロンビンの最大濃度、前記波の動いている部分におけるトロンビンの最大濃度、トロンビン濃度の増加率、空間に従ったトロンビン濃度の積分、時間および空間に従ったトロンビン濃度の積分、フィブリンフロントの空間伝播速度(光散乱)、前記試料中における最大フィブリン濃度(光散乱量)からなる群から群から選択されるものとする、請求項21に記載の方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112147138A (zh) * | 2019-06-26 | 2020-12-29 | 株式会社日立制作所 | 检测体性状识别装置、检测体性状识别方法和检测体搬运系统 |
WO2022145475A1 (ja) * | 2020-12-28 | 2022-07-07 | 藤森工業株式会社 | 血液凝固能の評価方法および血栓症リスクの検査方法 |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105738378A (zh) * | 2016-02-23 | 2016-07-06 | 上海航天动力科技工程有限公司 | 一种多功能自显像着色渗透剂及其应用 |
US11237178B2 (en) * | 2016-11-30 | 2022-02-01 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostyu <<Hemacore Labs>> | Device for monitoring the spatial and temporal dynamics of thrombin |
RU2657294C1 (ru) * | 2016-12-15 | 2018-06-13 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Устройство для количественной оценки флюоресценции и оптических свойств тканей in vivo |
CN114465969B (zh) * | 2021-12-23 | 2023-07-04 | 珠海格力电器股份有限公司 | 通讯消息组的管理方法、装置、设备和存储介质 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002537820A (ja) * | 1999-03-04 | 2002-11-12 | シナプス ベスローテン フェンノートチャップ | タンパク質分解酵素の生物学的に活性な形態の決定 |
JP2005528097A (ja) * | 2002-05-01 | 2005-09-22 | シナプス ベスローテン フェンノートシャップ | 複合生物媒体における、一時的なタンパク質分解活性の濃度を決定するための診断試験 |
JP2009142283A (ja) * | 2001-09-10 | 2009-07-02 | Meso Scale Technologies Llc | 1つの試料について複数の測定を実施する方法及び装置 |
JP2011502268A (ja) * | 2007-11-02 | 2011-01-20 | メドプラスト ソシエテ アノニム | 空間的な線維素凝塊形成を監視するための方法及び装置 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3516579A1 (de) | 1984-11-19 | 1986-05-22 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Gerinnungstest auf teststreifen |
ATE132909T1 (de) * | 1991-11-13 | 1996-01-15 | Bjoern Dahlbaeck | Vefahren zur diagnose von störungen der blutgerinnung |
US5339830A (en) * | 1992-01-21 | 1994-08-23 | Blake Joseph W Iii | Blood coagulation test system |
EP1717588A1 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-02 | Synapse B.V. | Measuring thrombin activity in whole blood |
EP1966389B1 (en) * | 2005-12-27 | 2019-07-10 | McMASTER UNIVERSITY | Enzyme measurement assay using a modified substrate comprising a substrate attached to a macromolecule via a spacer |
US8133696B2 (en) * | 2006-06-06 | 2012-03-13 | Thrombinoscope B.V. | Method for determining thrombin activity |
EP2088435B1 (en) * | 2008-02-07 | 2011-07-13 | Synapse B.V. | Time-course measurement of enzymatic activity corrected for impacts of disturbances relating to the reaction of the enzyme with a substrate |
RU2395812C2 (ru) | 2008-11-14 | 2010-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Медицинские инновации" | Устройство для исследования пространственного свертывания крови и ее компонентов |
-
2011
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002537820A (ja) * | 1999-03-04 | 2002-11-12 | シナプス ベスローテン フェンノートチャップ | タンパク質分解酵素の生物学的に活性な形態の決定 |
JP2009142283A (ja) * | 2001-09-10 | 2009-07-02 | Meso Scale Technologies Llc | 1つの試料について複数の測定を実施する方法及び装置 |
JP2005528097A (ja) * | 2002-05-01 | 2005-09-22 | シナプス ベスローテン フェンノートシャップ | 複合生物媒体における、一時的なタンパク質分解活性の濃度を決定するための診断試験 |
JP2011502268A (ja) * | 2007-11-02 | 2011-01-20 | メドプラスト ソシエテ アノニム | 空間的な線維素凝塊形成を監視するための方法及び装置 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6015003989; Andrei Yu. Kondratovich: 'Spatiotemporal dynamics of contact activation factors of blood coagulation' Biochimica et Biophysica Acta Vol. 1569, 2002, pp. 86-104 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112147138A (zh) * | 2019-06-26 | 2020-12-29 | 株式会社日立制作所 | 检测体性状识别装置、检测体性状识别方法和检测体搬运系统 |
JP2021004782A (ja) * | 2019-06-26 | 2021-01-14 | 株式会社日立製作所 | 検体性状識別装置、検体性状識別方法及び検体搬送システム |
JP7273631B2 (ja) | 2019-06-26 | 2023-05-15 | 株式会社日立製作所 | 検体性状識別装置、検体性状識別方法及び検体搬送システム |
WO2022145475A1 (ja) * | 2020-12-28 | 2022-07-07 | 藤森工業株式会社 | 血液凝固能の評価方法および血栓症リスクの検査方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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