JP2014521718A - ピラジノ−トリアジン誘導体を含む非小細胞性肺癌の予防および治療用組成物 - Google Patents

Abstract

【課題】ピラジノ−トリアジン誘導体を含む非小細胞性肺癌の予防および治療用組成物の提供。
【解決手段】本発明は、ピラジノ−トリアジン誘導体、その異性体または薬剤学的に許容されるその塩を含む組成物を提供し、前記組成物は、優れた非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防および治療効果がある。
【選択図】図１

Description

本発明は、ピラジノ−トリアジン誘導体を含む非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防および治療用組成物に関するものである。

肺起源の悪性腫瘍である原発性肺癌は、その組織型によって、大きく小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）と非小細胞性肺癌（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；ＮＳＣＬＣ）に区分する。非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、肺癌（Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の８０％以上を占め、米国国内の癌による死亡原因１位、完治率１５％未満、平均生存率８〜１０ヶ月と非常に致命的な疾患である。初期段階後は外科的手術が不可能であり、単に抗癌治療にのみ依存しなければならないが、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）自体が極めてｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓな癌形態（ｃａｎｃｅｒ ｔｙｐｅ）であるため、抗癌剤に対する反応性が非常に低い。

これにより、細胞毒性薬物（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｄｒｕｇ）の併用治療（ｄｏｕｂｌｅｔ ｔｈｅｒａｐｙ）が非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）治療の主流となっている。このような抗癌剤としては、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）などがあり、パクリタキセルおよびカルボプラチンを用いた治療が優先的に使用されている。また、標的治療剤として、上皮成長因子（ＥＧＦ；Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）を抑制する薬剤の上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＥＧＦＲ ＴＫＩ）が、タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））、イレッサ（Ｉｒｒｅｓａ（Ｒ））などの名で商品化され、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療に使用されている。

しかし、このような細胞毒性薬物（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｄｒｕｇ）の併用治療は、深刻な毒性を伴うため、高齢患者などの肉体的機能状態が低い患者では適用しにくい限界を有している。また、非常に初期またはすでに進行した非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者では抗癌効能が低下し、再発率も高い。そのため、毒性がなく、優れた抗癌効能を示すことができる効果的な抗癌剤を中心として、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）治療法の再編が必要である。

また、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）などの標的治療剤は、特定の標的因子が発現される癌患者にしか適用できないが、タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））またはイレッサ（Ｉｒｒｅｓａ（Ｒ））などの場合、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ（Ｌ８５８Ｒ、ｄｅｌＥ７４６＿Ａ７５０など））がある一部の患者において、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者群より特に効果があり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）の結合親和度（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ）が増加し、良好な臨床結果（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を示すという臨床試験結果が２００４年に報告された（非特許文献１）。しかし、前記のような活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）患者における優れた抗癌効能にもかかわらず、２００５年、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）の治療を受けた患者のうち、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対する薬物抵抗性（ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）を有する再発（Ｒｅｌａｐｓｅｄ）患者が多数発生し、後生遺伝学（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）の分析により、再発した患者の５０％以上で上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ゲートキーパー（ｇａｔｅｋｅｅｐｅｒ）のスレオニン（Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）７９０がメチオニン（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）に変形（Ｔ７９０Ｍ）したことが明らかになった（図１および図２参照）。また、結晶学（Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ）の分析により、Ｔ７９０Ｍ変形を有する場合、タルセバ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ））が結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）する位置でメチオニン（Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ）との立体的障害（ｓｔｅｒｉｃ ｈｉｎｄｒａｎｃｅ）が発生し、結合親和度（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ）が減少することが、薬物抵抗性（ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の主な原因であることが確認された（非特許文献２）。Ｔ７９０Ｍ変形のほか、Ｌ７４７Ｓ、Ｄ７６１Ｙ、Ｔ８５４Ａなども報告されているが、全体の１０％未満と、その重要性がＴ７９０Ｍに比べて低いことが報告されており（非特許文献３）、活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）とＴ７９０Ｍ（ｅｘｏｎ２０）を同時に有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者においては、どのような治療ができるかに関する十分な資料が存在しない（非特許文献４）。

したがって、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者だけでなく、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する患者に対して優れた非小細胞性肺癌の治療効果を示す治療剤、および上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対する薬物抵抗性を有する非小細胞性肺癌でも優れた治療効果を示す治療剤の開発が必要である。

これに関連し、特許文献１、２、３および４には、抗癌剤として使用可能なピラジノ−トリアジン誘導体形態の多数の化合物が開示されている。しかし、いずれの文献においても、当該化合物が非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）に効果があることを示していない。本発明者らは、これら化合物のうち、化学式１で表される一部の化合物誘導体が非小細胞性肺癌の予防および治療に特に優れた効果を示すだけでなく、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対する薬物抵抗性を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）でも驚くほどの治療効果を示すことを裏付け、本発明を完成した。

国際公開第１２／０５０３９３号 国際公開第１０／１２０１１２号 国際公開第０９／０５１９７号 国際公開第０９／１４８１９２号

ＳＣＩＥＮＣＥ Ｖｏｌ３０４、４、ＪＵＮＥ２００４ ＮＥＪＭ Ｖｏｌ３５２、８、Ｆｅｂ２００５ Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ ｃａｎｃｅｒ Ｖｏｌ１０、２０１０ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ１０５（１）、１−８、２０１１

本発明の目的は、ピラジノ−トリアジン誘導体を含む非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防および治療用組成物を提供することである。

また、本発明の他の目的は、ピラジノ−トリアジン誘導体の治療的有効量を患者に投与することで、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）を治療する方法を提供することである。

本発明は、下記の化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物を含む、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物を提供する。

（式中、
Ｒ_１は、置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基であり；Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルキニル基、Ｃ３〜Ｃ６のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ１０のアリールアルキル基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリールアルキル基であり；Ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；Ｂは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；およびＹは、水素、Ｃ３〜Ｃ１０のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基である。）

本発明の好ましい例によれば、置換されたＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換されたＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、

のうちの１つ以上で置換されたものであり、前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成できるものであり得る。

本発明の好ましい他の例によれば、Ｒ_１は、ナフチル基、キノリニル基、インドリル基、置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基であり、前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、および置換されたインドリル基は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、

のうちの１つ以上で置換されたものであり、前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成できるものであり；Ｒ_３は、メチル基またはプロペニル基であり；ＡおよびＢのうちの少なくとも１つは、水素であり；Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；およびＹは、水素であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基は、

のうちの１つ以上で置換されたものであり得る。

本発明のさらに他の例によれば、Ｒ_１は、

のうちのいずれか１つであり；Ｒ_３は、

またはメチル基であり；ＡおよびＢのうちの少なくとも１つは、水素であり；Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；およびＹは、水素であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式２〜１１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩から選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式１−１または１−１Ｐで表される化合物であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式１−２〜１−７で表される化合物から選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式２−１〜２−８で表される化合物およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する患者で発症する癌であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌であり得る。

本発明の好ましいさらに他の例によれば、前記上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌は、変形した上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者で発症する癌であり得る。

本発明のさらに他の例によれば、前記変形した上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形を有する上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）であり得る。

また、本発明は、下記の化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物の治療的有効量を非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）患者に投与する段階を含む、非小細胞性肺癌の治療方法を提供する。

（式中、
Ｒ_１は、置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基であり；Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルキニル基、Ｃ３〜Ｃ６のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ１０のアリールアルキル基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリールアルキル基であり；Ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；Ｂは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；およびＹは、水素、Ｃ３〜Ｃ１０のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基である。）

本発明の組成物は、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の治療に有用に使用可能であり、特に、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の治療および予防に優れた効果がある。

上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）遺伝子および変形位置を示した図である。 上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）遺伝子の２次変形および２次変形が現れる比率を示したグラフである。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の低用量（１００ｍｇ／ｋｇ）投与群における腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、細胞接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、平均腫瘍大きさ（Ｍｅａｎ Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の低用量（１００ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＤ８を基準とする体重変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、細胞接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の高用量（１５０ｍｇ／ｋｇ）投与群における腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、細胞接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、平均腫瘍大きさ（Ｍｅａｎ Ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の高用量（１５０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるＤ８を基準とする体重変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、細胞接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、処理後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の投与による体重変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、処理後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を意味し、縦軸は、体重変化（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｃｈａｎｇｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１の化合物）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式２−２の化合物のＮａ２価塩）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式２−２の化合物のＮａ２価塩）の投与による体重変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−３、１−５の化合物）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−３、１−５の化合物）の投与による体重変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）を意味する。 本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−７）の投与による腫瘍の大きさの変化を示したグラフである。前記グラフにおいて、横軸は、接種後の経過日（ｄａｙｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ）を意味し、縦軸は、腫瘍の大きさ（Ｔｕｍｏｒ Ｓｉｚｅ）を意味する。

本発明は、ピラジノ−トリアジン誘導体を含む非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物に関するものである。

本発明者らは、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体が非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）患者の癌治療および予防に特に効果的であることを確認し、本発明を完成した。

本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式１で表される化合物誘導体を意味する。

具体的には、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式１で表される化合物、これらの異性体またはこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物であり得るが、これに限定されない。

式中、
Ｒ_１は、置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基であり得る。前記置換されたＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換されたＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、

のうちの１つ以上で置換されたものであり得、
この時、前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成することができる。

好ましくは、前記Ｒ_１は、ナフチル基、キノリニル基、インドリル基、置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基であり、前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、および置換されたインドリル基は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、

のうちの１つ以上で置換されたものであり得、前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成できるものであり得る。また、前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基は、

のうちの１つ以上で置換されたものであり得る。

具体的には、前記Ｒ_１は、

のうちのいずれか１つであり得る。

Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルキニル基、Ｃ３〜Ｃ６のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ１０のアリールアルキル基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリールアルキル基であり、好ましくは、メチル基またはプロペニル基

であり得る。

Ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり得、Ｂは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり得、好ましくは、ＡおよびＢのうちの少なくとも１つは、水素であり得る。

Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり得る。

Ｙは、水素、Ｃ３〜Ｃ１０のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり得、水素であることが好ましい。

具体的には、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式２〜１１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式１−１または化学式１−１Ｐで表される化合物であり得る。

また、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式１−２〜１−７で表される化合物およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、下記の化学式２−１〜２−８で表される化合物およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物であり得る。

本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、次の反応式１によって製造できる。

反応式１において、Ａ、Ｂ、Ｒ_１、Ｒ_３、Ｘ、およびＹの定義は、前記の定義の通りである。

前記反応式１の反応を概略的に説明すると、次の通りである。

第１段階（ｓｔｅｐ１）：置換されたアミノアセタール（ａｍｉｎｏ ａｃｅｔａｌ）がアルデヒドまたはアルキルハロゲンと反応する段階；
第２段階（ｓｔｅｐ２）：前記第１段階で形成された置換されたアミノアセタールがアミノ酸（ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）とカップリングしてペプチドを形成する段階；
第３段階（ｓｔｅｐ３）：前記第２段階で形成されたペプチドを塩によって脱保護する段階；
第４段階（ｓｔｅｐ４）：前記第３段階で脱保護されたペプチドがヒドラジン酸中間体（ｈｙｄｒａｚｉｎｅ ａｃｉｄ ｓｉｄｅ ｃｈａｉｎ）とカップリングする段階；
第５段階（ｓｔｅｐ５）：前記第４段階で形成されたペプチドが酸性条件で環化され、ピラジノ−トリアジン誘導体（ｐｙｒａｚｉｎｏ−ｔｒｉａｚｉｎ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）が生成される段階；
第６段階（ｓｔｅｐ６）：前記第５段階で生成されたピラジノ−トリアジン誘導体において、Ｘ＝ヒドロキシグループの場合、リン酸基を導入する段階；
第７段階（ｓｔｅｐ７）：前記第６段階で導入されたリン酸基を一ナトリウム塩または二ナトリウム塩に転換する段階。

本発明において、薬剤学的に許容される塩は、医薬業界で通常使用される塩を意味し、例えば、ナトリウム塩、塩酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、またはカリウム塩などであり得、列挙されたこれら塩によって本発明で意味する塩の種類が限定されるものではない。好ましくは、前記薬剤学的に許容可能な塩は、ナトリウム塩または塩酸塩であり得る。

本発明の組成物は、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の治療または予防に有用に使用可能である。

前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者で発症する癌であり得る。

また、前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する患者で発症する癌であり得、前記活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）は、Ｌ８５８Ｒ、Ｅ７４６欠失またはＡ７５０欠失のうちの１つ以上であり得る。このように、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する癌は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）敏感性癌であり得る。前記「上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）」は、上皮成長因子（ＥＧＦ；Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）を抑制する薬剤の上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ＥＧＦＲ ＴＫＩ）を意味するが、このような定義に限定されるものではない。本発明において、「上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）敏感性癌」は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対して特に優れた治療効果を示す癌である。

一方、前記非小細胞性肺癌は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌であり得る。本発明において、「上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌」は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対する薬物抵抗性を示す癌であり、具体的には、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に変形がある患者に発生する癌であり得、前記変形は、前記活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）にＴ７９０Ｍ、Ｌ７４７Ｓ、Ｄ７６１Ｙ、またはＴ８５４Ａのうちの１つ以上の追加の変形を有するものであり得、特に、Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形であり得る。

前記上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）の投与後再発した癌であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に抵抗性を示す変形した上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者で発症する癌であり得る。

また、本発明の非小細胞性肺癌は、非変形ＫＲＡＳ遺伝子、または変形したＫＲＡＳ遺伝子（ｍｕｔａｎｔ ＫＲＡＳ）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり得る。

すなわち、本発明の組成物は、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の治療または予防に優れた効果を示し、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する癌患者または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する癌患者だけでなく、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌患者にも驚くほどの治療効果を示す。

本発明の組成物は、本発明の効果を損なわない範囲内で薬学的に許容可能な希釈剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤、ｐＨ調節剤、酸化防止剤、溶解補助剤などの添加剤を含むことができる。

また、遅延放出性製剤を作るために、腸溶性高分子、水不溶性重合体、疎水性化合物、および親水性高分子を含むことができる。前記腸溶性高分子は、ｐＨ５未満の酸性条件下で不溶性であるかまたは安定したもので、ｐＨ５以上の特定のｐＨ条件下で溶解または分解する高分子を指す。

その他、着色剤、香料の中から選択された多様な添加剤として薬学的に許容可能な添加剤を選択使用することで、本発明の製剤を製剤化することができる。

本発明において、添加剤の範囲が前記添加剤を使用することに限定されるものではなく、前記添加剤を選択によって通常範囲の用量を含有して製剤化することができる。

本発明にかかる薬剤学的組成物は、通常の方法によって、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、およびエアロゾルなどの経口型剤形、外用剤、坐剤、または滅菌注射溶液などの形態に剤形化して使用可能である。

本発明はさらに、本発明の化合物を含む組成物を哺乳類を含む対象体に投与することで、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）を予防または治療する方法を提供する。

本発明において、「投与」は、ある適切な方法で患者に本発明の非小細胞性肺癌の予防および治療用組成物を導入することを意味し、本発明の投与経路は、目的の組織に到達可能な限り、いかなる一般的な経路を通して投与できる。経口投与、腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、内皮投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与、腔内投与、腹腔内投与、硬膜内投与されるとよく、これに制限されない。

本発明にかかる非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物は、１日１回、または一定の時間間隔をおいて１日２回以上投与可能である。

本発明の化合物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率、および疾患の重症度などによってその範囲が多様である。０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙがより好ましいが、これは、患者の重症度、年齢、性別などによって変化可能である。

また、本発明は、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）患者に本発明の化合物を治療的有効量で投与することを含む、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の治療方法に関するものである。

本発明の好ましい一態様として、本発明の治療方法は、本発明の化合物を含む薬剤学的組成物と共に、１つまたはそれ以上の公知の治療剤を投与することを含むことができる。

公知の治療剤としては、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）などを例示することができ、公知の治療剤の薬学的有効量は当業界に公知となっており、症状の程度、本発明の組成物との併用投与などの諸条件を考慮して、処置医がその量を調節することができる。このように公知の治療剤を併用投与することにより、本発明の組成物によって公知の治療剤の副作用などを軽減させることができるだけでなく、相乗的な治療効果も期待することができる。これら公知の治療剤は、場合によって、複合製剤または同時に投与されたり、または本発明の組成物と時間間隔をおいて投与されるとよい。

以下、下記の実験例により、本発明をより具体的に説明する。これら実験例は本発明を説明するためのものであって、本発明の範囲が下記の実施例および実験例に限定されるものではない。

本発明に使用される化合物の製造は、反応式１を参照するか、国際公開特許ＷＯ１２／０５０３９３号、ＷＯ１０／１２０１１２号、ＷＯ０９／０５１３９７号、またはＷＯ０９／１４８１９２号に記載の製造方法を参照して製造することができる。

実験例１：化学式１−１の化合物のＥＧＦＲ ＴＫＩ抵抗性細胞（ＮＣＩ−Ｈ１９７５）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（１−１の化合物）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）で上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的治療剤に抵抗性を有するＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を有することを評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者由来のＮＣＩ−Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−５９０８）細胞株は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形（ｄｏｕｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して強い抵抗性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍マス（ｍａｓｓ）が形成されることを確認した。移植後８日目（Ｄ８）から２２日目（Ｄ２２）になる日まで、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞が移植されたマウスを６つの群に分けて、化学式１−１の化合物とパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）を下記の表１のように投与した。

Ｖｅｈｉｃｌｅ対照群（第１群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）を１日１回、週５回で２週間計１０回（Ｄ８〜１２、１５〜１９）静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

１−１投与群（第２、第３群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）に溶かして、１日１回、週５回で２週間計１０回（Ｄ８〜１２、１５〜１９）、１００、１５０ｍｇ／ｋｇの量で静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）投与群（６群）は、１日１回、週１回で２週間計２回（Ｄ８およびＤ５）、７．５ｍｇ／ｋｇの量で腹腔内投与（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｐ．）した。

併用投与群（第４、第５群）は、１−１の化合物をそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇ投与する群に、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）７．５ｍｇ／ｋｇを前記のような方法で併用投与した。

３）実験結果
（１）腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

実験期間の間、体重と腫瘍の大きさを週２〜３回測定した。

腫瘍の大きさと体重を測定し、１群あたりｎ＝７で、ｉｎ ｈｏｕｓｅ ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて均等に群分離（ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ）を進行させた。腫瘍の大きさの測定は、最長軸（Ｌｅｎｇｔｈ、ｍｍ）と最短軸（Ｗｉｄｔｈ、ｍｍ）をｄｉｇｉｔａｌ ｃａｌｉｐｅｒで測定し、次の式を利用して計算した。

腫瘍の大きさ（ｍｍ^３）：
Ｗｉｄｔｈ（ｍｍ）ｘ Ｗｉｄｔｈ（ｍｍ）ｘ Ｌｅｎｇｔｈ（ｍｍ）／２

Ｄ８に測定した平均腫瘍大きさは６３ｍｍ^３（範囲＝４２〜１０３ｍｍ^３）であり、平均体重は１８．６ｇであった。

これに対して、前記表２に記載されているように、Ｄ２２に測定したｖｅｈｉｃｌｅ対照群の最終腫瘍大きさは９９５±１３１ｍｍ^３であり、化学式１−１の化合物を投与した群の最終腫瘍大きさはこれより顕著に小さい値を示した。

これにより、本発明の化合物がＬ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形（ｄｏｕｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）癌細胞株モデルにおいて優れた抗癌効果を示すことを確認した。

投与の進行に伴う抗癌効能の評価は、次の式を利用して腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）として計算した。

薬物投与群の腫瘍の大きさが初期の腫瘍の大きさより大きい場合、
％ＴＧＩ＝１００＊（１−（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_{Ｄａｙ Ｘ} − ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_{Ｉｎｔｉｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ}）／（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_{Ｄａｙ Ｘ} − ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_{Ｉｎｔｉｔｉａｌ ｆｏｒ Ｖｅｈｉｃｌｅ ｇｒｏｕｐ}））

薬物投与群の腫瘍の大きさが初期の腫瘍の大きさより小さい場合、
％ＴＧＩ＝１００＋１００＊（１−（Ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_ＤａｙＸ／Ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ_{Ｉｎｉｔｉａｌ}））

化学式１−１の化合物を投与した群のうち、１００ｍｇ／ｋｇを投与した群ではＴＧＩ７４％、１５０ｍｇ／ｋｇを投与した群ではＴＧＩ１０９％を示し、化学式１−１（Ｐ１）の投与は、用量依存的な抗癌効能を示すことを確認した。

これは、対照薬物のパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）が７．５ｍｇ／ｋｇの投与で２８％の腫瘍成長抑制能を示したのに比べてはるかに優れた結果である。

また、化学式１−１の化合物（１００、１５０ｍｇ／ｋｇ）およびパクリタキセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）（７．５ｍｇ／ｋｇ）の併用投与群ではそれぞれ９４％および１７５％のＴＧＩを示し、非常に優れた２つの薬物を併用投与することにより相乗効果（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ）を示すことを確認することができた。

測定結果を表２および図３〜図６に示した。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）および最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）の評価

死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）は、薬物の投与による死亡個体の発生を表記したものであり、本実験では、すべての群で死亡例が発生しなかった。

最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）は、薬物投与によって最大となった体重減少を意味するもので、最大耐薬用量（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｔｏｌｅｒａｂｌｅ Ｄｏｓｅ；ＭＴＤ）を決定するのに重要な項目である。薬物投与前（Ｄ１）の体重を基準（１００％）として体重の変化を百分率で表し、一般的に、薬物投与によって１０％以上の体重減少が発生した時をＭＴＤと定める。

その測定結果を表２に示した。

実験例２：化学式１−１の化合物のＥＧＦＲ ＴＫＩ抵抗性細胞（ＮＣＩ−Ｈ４６０）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（１−１の化合物）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）で上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的治療剤に抵抗性を有するＮＣＩ−Ｈ４６０細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を有することを評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者由来のＮＣＩ−Ｈ４６０（ＡＴＣＣ、ＨＴＢ−１７７）細胞株は、非変形（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）と変形したＫＲＡＳ遺伝子（ｍｕｔａｎｔ ＫＲＡＳ）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して強い抵抗性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍マス（ｍａｓｓ）が形成されることを確認した。移植後６日目（Ｄ１）から１８日目（Ｄ１２）になる日まで、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞が移植されたマウスを３つの群に分けて、１−１の化合物とパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）を下記の表３のように投与した。

ｖｅｈｉｃｌｅ対照群（第１群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）を１日１回、週３回で２週間計６回（Ｄ１、３、５、８、１０、１２）静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

１−１の化合物投与群（第２群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）に溶かして、１日１回、週３回で２週間計６回（Ｄ１、３、５、８、１０、１２）、１５０ｍｇ／ｋｇの量で静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）投与群（第３群）は、１日１回、週３回で２週間計６回（Ｄ１、３、５、８、１０、１２）、２０ｍｇ／ｋｇの量で腹腔内投与（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｐ．）した。

３）実験結果
（１）腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、体重と腫瘍の大きさの変化を測定し、腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）を測定した。実験開始前、腫瘍の平均大きさ（Ｍｅａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）は１３６ｍｍ^３であった。

測定結果を表４および図７〜図８に示した。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）および最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）およびＭＢＬを評価し、その測定結果を表４に示した。

実験例３：化学式１−１の化合物のＥＧＦＲ ＴＫＩ敏感性細胞（ＨＣＣ８２７）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（１−１の化合物）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）で上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的治療剤に敏感性を有するＨＣＣ８２７細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を有することを評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者由来のＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−２８６８）細胞株は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のｅｘｏｎ１９欠失変形（ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）（Ｅ７４６−Ａ７５０）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して敏感性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＨＣＣ８２７細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍マス（ｍａｓｓ）が形成されることを確認した。移植後８日目から３２日目になる日まで、ＨＣＣ８２７細胞が移植されたマウスを６つの群に分けて、化学式１−１の化合物とパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）を下記の表５のように投与した。

ｖｅｈｉｃｌｅ対照群（第１群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）を１日１回、週５回で４週間計２０回（Ｄ８−１２、Ｄ１５−１９、Ｄ２２−２６、およびＤ２９−３２）静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

１−１の化合物投与群（第２、第３群）は、食塩水（ｓａｌｉｎｅ）に溶かして、１日１回、週５回で４週間計２０回（Ｄ８−１２、Ｄ１５−１９、Ｄ２２−２６、およびＤ２９−３２）、１００、１５０ｍｇ／ｋｇの量で静脈投与（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｖ．）した。

パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）投与群（６群）は、１日１回、週１回で４週間計４回（Ｄ８、Ｄ１５、Ｄ２２、およびＤ２９）、１０ｍｇ／ｋｇの量で腹腔内投与（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉ．ｐ．）した。

併用投与群（第４、第５群）は、１−１の化合物をそれぞれ１００ｍｇ／ｋｇおよび１５０ｍｇ／ｋｇ投与する群に、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）１０ｍｇ／ｋｇを前記のような方法で併用投与した。

３）実験結果
（１）腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、体重と腫瘍の大きさの変化を測定し、腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）を測定した。実験開始前、腫瘍の平均大きさ（Ｍｅａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）は１２１ｍｍ^３であった。

測定結果を表６および図９、図１０に示した。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）および最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）およびＭＢＬを評価し、その測定結果を表６に示した。

前記実験例１から実験例３まで評価した化学式１−１の化合物の多様な非小細胞性肺癌株に対する腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の治療効果をまとめると、次の通りである。

化学式１−１の化合物は、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株を移植した動物モデルにおいて、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）標準治療剤のパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）より優れた抗癌効能を示し、特に、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に抵抗性を誘発する上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）Ｔ７９０Ｍ ｍｕｔａｔｉｏｎを有するＮＣＩ−Ｈ１９７５モデルにおいて最も優れた抗癌効能を示し、最も優れたパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）との相乗効果を示した。これは、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）治療に不応性の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者において、化学式１−１の化合物の治療剤としての強い可能性を示す。

実験例４：化学式１−１Ｐの化合物の多様な非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株におけるｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌活性の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−１Ｐ）が、多様な非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌活性を有することを評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株を用意し、９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにｗｅｌｌあたり５Ｘ１０^３個の細胞数だけ敷いた。化学式１−１Ｐの化合物と対照薬物としてドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）を適正濃度区間（０．００１ｕＭ〜１ｕＭ）で１／２ずつｄｉｌｕｔｉｏｎした後、それぞれのｗｅｌｌにｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ処理した。薬物処置後、７２時間の間、３７℃、５％のＣＯ_２ ｉｎｃｕｂａｔｏｒで培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｒ）（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ、＃Ｇ７５７３、Ｐｒｏｍｅｇａ）を１００ｕｌずつ添加し、２分間ｓｈａｋｉｎｇして細胞をｌｙｓｉｓさせた。１０分間、常温（ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；２５℃）で反応させた後、反応が終わると、ｐｌａｔｅをｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎｅｌｍｅｒ））で各ｗｅｌｌのｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔを分析した。

３）実験結果
７種の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株において、化学式１−１Ｐの化合物の評価を進行させて、癌細胞の成長を５０％抑制する化合物の濃度値（Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ５０、ＧＩ_５０）を次の式により計算した。その結果を表８に示した。

ＧＩ_５０＝（５０−（ｙ_１−（（ｙ_１−ｙ_２）／（ｘ_１−ｘ_２））＊ｘ_１）／（（ｙ_１−ｙ_２）／（ｘ_１−ｘ_２））
ｘ_１、ｘ_２＝５０％の細胞死滅を誘導する濃度が含まれた２つの濃度
ｙ_１、ｙ_２＝５０％の細胞死滅を誘導する濃度が含まれた細胞数値

ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＮＣＩ−Ｈ２３とＡ５４９細胞は、非変形上皮成長因子受容体（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ ＥＧＦＲ）と変形したＫＲＡＳ遺伝子（ｍｕｔａｎｔ ＫＲＡＳ）を有する非小細胞性肺癌細胞であり、それぞれ２７２、６７、３７２ｎＭにおけるＧＩ_５０細胞成長抑制効能を示した。

ＨＣＣ８２７は、ＥＧＦＲ ｅｘｏｎ１９に欠失変形（ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）（Ｅ７４６−Ａ７５０）とＫＲＡＳ遺伝子（ｍｕｔａｎｔ ＫＲＡＳ）を有していて、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に非常に敏感な（ｈｙｐｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）細胞であり、化学式１−１Ｐの化合物は、１１５ｎＭのＧＩ_５０細胞成長抑制効能を示した。

ＮＣＩ−Ｈ１６５０は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ｅｘｏｎ１９に欠失変形（ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ）（Ｅ７４６−Ａ７５０）を有しているが、ＫＲＡＳ ｍｕｔａｔｉｏｎがあって、ＥＧＦＲ ＴＫＩに対して抵抗性を示す。化学式１−１Ｐの化合物は、１５６ｎＭのＧＩ_５０細胞成長抑制効能を示した。

ＮＣＩ−Ｈ１９７５は、Ｔ７９０Ｍ変形を有する細胞であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）に対して抵抗性を示す。化合物１−１Ｐの化合物は、１１１ｎＭのＧＩ_５０細胞成長抑制効能を示した。

実験例５：化学式２−２の化合物のＮａ２価塩のＥＧＦＲ ＴＫＩ抵抗性細胞（ＮＣＩ−Ｈ１９７５）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式２−２の化合物のＮａ２価塩）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）で上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）標的治療剤に抵抗性を有するＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者由来のＮＣＩ−Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−５９０８）細胞株は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形（ｄｏｕｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して強い抵抗性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍マス（ｍａｓｓ）が形成されることを確認した。移植後１１日目（Ｄ１１）から２２日目（Ｄ２２）になる日まで、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞が移植されたマウスを３つの群に分けて、化学式２−２の２Ｎａ塩化合物とシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）を下記の表９のように投与した。

３）実験結果
（１）腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、体重と腫瘍の大きさの変化を測定し、腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）を測定した。実験開始前、腫瘍の平均大きさ（Ｍｅａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）は１１８ｍｍ^３であった。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）および最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）およびＭＬＢを評価し、その実験結果を下記の表１０、図１１、図１２に示した。

実験例６：化学式１−３および１−５の化合物のＥＧＦＲ ＴＫＩ抵抗性細胞（ＮＣＩ−Ｈ１９７５）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−３、１−５の化合物）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）で上皮成長因子（ＥＧＦＲ）標的治療剤に抵抗性を有するＨ１９７５細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を有することを評価することである。

２）実験方法
非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者由来のＮＣＩ−Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−５９０８）細胞株は、上皮成長因子（ＥＧＦＲ）Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形（ｄｏｕｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株であり、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して強い抵抗性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍マス（ｍａｓｓ）が形成されることを確認した。移植後１１日目（Ｄ１１）から２２日目（Ｄ２２）になる日まで、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞が移植されたマウスを５つの群に分けて、化学式１−３および１−５の化合物を下記の表１１のように投与した。

３）実験結果
（１）体重と腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、体重と腫瘍の大きさの変化を測定し、腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）を測定した。実験開始前、腫瘍の平均大きさ（Ｍｅａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）は１４２ｍｍ^３であった。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）および最大体重減少（Ｍａｘｉｍｕｍ Ｂｏｄｙ Ｗｅｉｇｈｔ Ｌｏｓｓ；ＭＢＬ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、ＭｏｒｔａｌｉｔｙおよびＭＢＬを評価し、その実験結果を下記の表１２、図１３、図１４に示した。

実験例７：化学式１−７の化合物のＥＧＦＲ ＴＫＩ抵抗性細胞（ＮＣＩ−Ｈ１９７５）における非小細胞性肺癌治療効果の確認

１）実験目的
この実験の目的は、本発明のピラジノ−トリアジン誘導体（化学式１−７の化合物）が、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）でＥＧＦＲ標的治療剤に抵抗性を有するＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞移植モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価することである。

２）実験方法
ＮＳＣＬＣ患者由来のＮＣＩ−Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−５９０８）細胞株は、ＥＧＦＲ Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形（ｄｏｕｂｌｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有するＮＳＣＬＣ細胞株であり、ＥＧＦＲ ＴＫＩ（Ｔａｒｃｅｖａ（Ｒ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ））に対して強い抵抗性を有する。この細胞において、ｉｎ ｖｉｖｏ抗癌効能を評価するために、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞を大量に培養し、１匹あたり５ｘ１０^６ｃｅｌｌを０．２ｍｌのＨＢＳＳで希釈してマウス（Ｂａｌｂ／ｃ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ）の右腋窩部位に皮下移植し、３〜５日後に腫瘍ｍａｓｓが形成されることを確認した。移植後１１日目（Ｄ１１）から２２日目（Ｄ２２）になる日まで、ＮＣＩ−Ｈ１９７５細胞が移植されたマウスを２つの群に分けて、化学式１−７の化合物を下記の表１３のように投与した。

３）実験結果
（１）体重と腫瘍の大きさの変化および腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ）の評価

前記実験例１と同様の方法で、体重と腫瘍の大きさの変化を測定し、腫瘍成長抑制能（ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ、ＴＧＩ、％）を測定した。実験開始前、腫瘍の平均大きさ（Ｍｅａｎ ｓｔａｒｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｅ）は８６ｍｍ^３であった。

（２）死亡例（Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ）の評価
前記実験例１と同様の方法で、Ｍｏｒｔａｌｉｔｙを評価し、その実験結果を下記の表１４および図１５に示した。

本発明のピラジノ−トリアジン誘導体は、多様な非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）モデルにおいて、癌細胞の試験管内増殖を効果的に抑制する効果を示し、効果的な非小細胞性肺癌治療剤および予防剤として活用可能である。

Claims (14)

1. 下記の化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物を含む、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
   （式中、
   Ｒ_１は、置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基であり；
   Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルキニル基、Ｃ３〜Ｃ６のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ１０のアリールアルキル基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリールアルキル基であり；
   Ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；
   Ｂは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；
   Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；および
   Ｙは、水素、Ｃ３〜Ｃ１０のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基である。）
2. 前記置換されたＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または前記窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換されたＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基は、
   Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、
   のうちの１つ以上で置換されたものであり、
   前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成できるものである、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
3. Ｒ_１は、ナフチル基、キノリニル基、インドリル基、置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基であり、前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、および置換されたインドリル基は、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、
   のうちの１つ以上で置換されたものであり、
   前記ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、ピリジニル基、またはアミノ基で置換されたピリニジル基であり得、Ｒａ、Ｒｂは、共に縮合して環を形成できるものであり；
   Ｒ_３は、メチル基またはプロペニル基であり；
   ＡおよびＢのうちの少なくとも１つは、水素であり；
   Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；および
   Ｙは、水素である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
4. 前記置換されたナフチル基、置換されたキノリニル基、または置換されたインドリル基は、
   のうちの１つ以上で置換されたものである、請求項３に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
5. Ｒ_１は、
   のうちのいずれか１つであり；
   Ｒ_３は、
   またはメチル基であり；
   ＡおよびＢのうちの少なくとも１つは、水素であり；
   Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；および
   Ｙは、水素である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
6. 前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式２〜１１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
   
7. 前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式１−１または１−１Ｐで表される化合物である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
   
8. 前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式１−２〜１−７で表される化合物およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
   
9. 前記化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩は、下記の化学式２−１〜２−８で表される化合物およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
   
10. 前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、非変形（Ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ；ＷＴ）上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に活性変形（ａｃｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を有する患者で発症する癌である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
11. 前記非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）は、上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ；Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）抵抗性癌である、請求項１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
12. 前記上皮成長因子受容体チロシンキナーゼ抑制剤（ＥＧＦＲ ＴＫＩ）抵抗性癌は、変形した上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を有する患者で発症する癌である、請求項１１に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
13. 前記変形した上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍの二重変形を有する上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）である、請求項１２に記載の非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）の予防または治療用組成物。
14. 下記の化学式１で表される化合物、これらの異性体およびこれらの薬剤学的に許容可能な塩からなるグループより選択された少なくとも１つの化合物の治療的有効量を非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ；ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）患者に投与する段階を含む、非小細胞性肺癌の治療方法。
    （式中、
    Ｒ_１は、置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のアリール基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含む置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基であり；
    Ｒ_３は、水素、Ｃ１〜Ｃ６のアルキル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルケニル基、Ｃ２〜Ｃ６のアルキニル基、Ｃ３〜Ｃ６のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ１０のアリールアルキル基、または窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリールアルキル基であり；
    Ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；
    Ｂは、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であり；
    Ｘは、−Ｏ−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＨであり；および
    Ｙは、水素、Ｃ３〜Ｃ１０のアリール基、窒素（Ｎ）原子を少なくとも１つ含むＣ３〜Ｃ１０のヘテロアリール基、またはＣ１〜Ｃ６のアルキル基である。）