JP2014521364A5 - - Google Patents
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Claims (22)
- ａ）クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される少なくとも１つの塩を含む平衡化緩衝液で前平衡化された疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）カラムに、哺乳類細胞から生産されたＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質の混合物を含む試料を、クロマトグラフィーレジン体積当たり１０ｇ／Ｌ ｂｅｄ〜１４ｇ／Ｌ ｂｅｄの量で注入するステップと、
ｂ）前記平衡化緩衝液の塩と同じ塩を含む洗浄緩衝液で前記カラムを洗浄して、ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質の混合物から切断型ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質を除去するステップと、
ｃ）前記平衡化緩衝液より塩濃度を減少させた溶出緩衝液で前記カラムから活性型ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質を溶出させるステップとを含む、
活性型ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質を製造する方法。 - 前記ステップａ）の平衡化緩衝液が０．４５Ｍ〜０．５５Ｍクエン酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜１００ｍＭリン酸ナトリウムを含む緩衝液である、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップａ）の平衡化緩衝液が０．７０Ｍ〜０．７２Ｍ硫酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜１００ｍＭリン酸ナトリウムを含む緩衝液である、請求項１に記載の方法。
- 前記平衡化緩衝液がｐＨ６．５〜７．０である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記平衡化緩衝液がｐＨ６．７〜６．９であり、０．４８Ｍ〜０．５２Ｍクエン酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜７０ｍＭリン酸ナトリウムを含む、請求項２に記載の方法。
- 前記平衡化緩衝液がｐＨ６．７〜６．９であり、０．７１Ｍ〜０．７２Ｍ硫酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜７０ｍＭリン酸ナトリウムを含む、請求項３に記載の方法。
- 前記カラムのリガンドがブチル基、オクチル基、フェニル基及びアルキル基からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップａ）のＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質がｐｃＤＮＡ３．１−Ｋｏｚａｋ−ＴＮＦＲＩＩ−Ｆｃ−ＩＲＥＳ−ＧＳベクターの導入された哺乳類細胞から生産される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質が、カラムに注入する前にアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー及び脱塩からなる群から選択される少なくとも１つの方法で部分精製される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質の混合物を含む試料が、注入前に５０ｍＳ／ｃｍ〜７５ｍＳ／ｃｍの伝導度を有するように調節される、請求項１に記載の方法。
- 前記伝導度がクエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム及び硫酸アンモニウムからなる群から選択される少なくとも１つの塩で調整される、請求項１０に記載の方法。
- 前記ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質の混合物を含む試料が、注入前にクエン酸ナトリウムを用いて５０ｍＳ／ｃｍ〜５５ｍＳ／ｃｍの伝導度に調整される、請求項１に記載の方法。
- 前記ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質の混合物を含む試料が、注入前に硫酸ナトリウムを用いて６５ｍＳ／ｃｍ〜７５ｍＳ／ｃｍの伝導度を有するように調整される、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップｂ）の洗浄緩衝液がステップａ）の平衡化緩衝液と同じ組成である、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップｃ）が４０ｍＳ／ｃｍ〜４７ｍＳ／ｃｍの伝導度を有する溶出緩衝液で活性型ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質を溶出させるステップである、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップｃ）の溶出緩衝液が０．３５Ｍ〜０．４Ｍの範囲のクエン酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップｃ）の溶出緩衝液が０．３５Ｍ〜０．５６Ｍの範囲の硫酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記溶出緩衝液がｐＨ６．５〜７．０である、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記溶出緩衝液がｐＨ６．７〜６．９であり、０．３８Ｍ〜０．４Ｍクエン酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜７０ｍＭリン酸ナトリウムを含む、請求項１６に記載の方法。
- 前記溶出緩衝液がｐＨ６．７〜６．９であり、０．３８Ｍ〜０．４Ｍ硫酸ナトリウム及び５０ｍＭ〜７０ｍＭリン酸ナトリウムを含む、請求項１７に記載の方法。
- 前記方法が、ｐＨが６．５〜７．０であり、伝導度が４ｍＳ／ｃｍ〜６ｍＳ／ｃｍの緩衝液を用いてカラムから不活性型ＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質又はＴＮＦＲ−Ｆｃ融合タンパク質凝集体を含む分画を分離するステップｄ）をさらに含む、請求項１に記載の方法。
- 前記ステップｄ）で使用する緩衝液が、ｐＨが６．７〜６．９であり、５０ｍＭ〜７０ｍＭリン酸を含む、請求項２１に記載の方法。
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