JP2014513794A - ルミネセンス検出方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
[0001] 本出願は、2011年4月22日に出願された米国特許仮出願第61/478,251号の利益を請求するものであり、参照によりこの開示内容全体が本明細書に組み込まれる。
[0002] 実験室では、多くの場合、例えば、病原体の存在又は同一性を決定するための試験などの多様な試験手順を行う。各試験は、サンプル中における特定の微生物の存在を検出することができる検体特異的な試薬(例えば、酵素基質、核酸プライマー若しくはプローブ、抗体、モノクローナル抗体、又はレセプタ)を含むことがある。
[0006] 一般に、本発明は、検体の検出方法に関する。特に、方法は、発光反応を検出することにより、検体の存在の検出に関する。方法は、更に、その方法に使用することができる有色容器に関する。驚くべきことに、互いに視覚的に識別可能な、多様な有色容器を、その容器の有色の壁を通過する光の検出を必要とする検出方法において、使用することができる。都合のよいことに、有色容器は、反応の少なくとも1つの構成成分の瞬間的な視覚的な識別をもたらし、それにより、実験誤差の可能性を低下させる。
[0026] 実験室試験における傾向は、微容量試験の使用である。特定の試薬(例えば、酵素、酵素試薬、染料、モノクローナル抗体)の費用及び、検体分子をかなりの少量に濃縮することにより、検出反応の動力学を向上させることができるサンプル調製技術の開発により、この傾向が進んでいる。また、特定の機器(例えば、リアルタイムPCRサーマルサイクラー)を使用し、多数の試験を行う傾向があり、その試験の多くは、検体特異的な試薬(すなわち、プライマー及び/又はプローブ)を含む。このような機器では、多くの場合、試験の全てが行われる、標準化された容器(例えば、マイクロチューブ)を使用する。標準化された容器は同一と考えられるため、実験室技術者は、各容器の内容物を識別するために、ラベルの使用に頼っている。
[0056] 実施形態Aは、検体の検出方法であって、
サンプル、発光反応のための触媒、少なくとも1つの壁を含む容器を提供することであって、
容器が、ルミノメーターにおける使用に適合され、
壁の少なくとも一部分が、着色剤を含むことと、
容器において反応混合物を形成することであって、この反応混合物が、サンプル及び触媒を含むことと、
容器において、反応混合物から放出される光の有無を検出することと、を含む方法である。
発光反応のための触媒と、
少なくとも1つの壁を含む容器と、を含み、
壁の少なくとも一部分が、着色剤を含み、
容器がルミノメーターにおける使用に適合される、キットである。
微生物ルミネセンスシステムLL1試薬及び微生物ルミネセンスシステムLL1緩衝液(両方とも、3M Health Care(St.Paul,MN)から入手可能なMLS L/L1置換キット、カタログ# 3003Bから入手)
[0083] 試薬:製造者の指示に従って、微生物ルミネセンスシステムLL1試薬は、LL1緩衝液を使用して、再構成され、渦巻いて、混合する。分子等級の水1mLを使用して、ATP陽性コントロールバイアル瓶を再構成する。
[0087] 実施例1については、青色PCRチューブを使用して、ハイブリッドデバイスを構築すること、実施例2については、緑色PCRチューブを使用して、ハイブリッドデバイスを構築すること、実施例3については、黄色PCRチューブを使用して、ハイブリッドデバイスを構築すること、及び実施例4については、ラベンダー色PCRチューブを使用して、ハイブリッドデバイスを構築すること以外は、比較例1に記載するように、試薬及びハイブリッドデバイスを調製した。「ブランク」(ATPを含まない)及び「試験」のRLU指数を、比較例1記載の同様の方法を使用して、得た。結果を表1に要約する。
[0091] 透明及び有色のPCRチューブによる可視光の透過率は、分光光度計(型番80−2097−62、LKB Biochrom(Cambridge,UK))を使用して、測定された。空のキュベットを使用して、参照スキャンを行った。前述の対応する透明及び有色のBiotex PCRチューブを含む個々のキュベットを使用して、実験用スキャンを行った。図3は、透明PCRチューブ(線「A」)及び改変ラベンダー色PCRチューブ(線「B」)を通過する500〜700nmの光の透過率の比較を示す。表2は、様々な有色のPCRチューブのそれぞれを通過する500nm〜700nmの光の透過率が、透明PCRチューブを通過する光の透過率と比較された実験の結果を示す。透明PCRマイクロチューブを含むキュベットを使用して、参照スキャンを行った以外は、上述するように実験を行った。チューブ全てが、透明チューブを透過した光の少なくとも80%で透過したが、緑色、黄色、改変青色、及び改変ラベンダー色チューブは、透明チューブを透過した光の少なくとも90%で透過した。
Claims (20)
- 検体の検出方法であって、
サンプル、発光反応のための触媒、及び少なくとも1つの壁を含む容器であって、
前記容器は、ルミノメーターにおける使用に適合されており、
前記壁の少なくとも一部分は、着色剤を含む、
サンプル、発光反応のための触媒、及び少なくとも1つの壁を含む容器を提供することと、
容器内で反応混合物を形成する工程において、前記反応混合物は前記サンプル及び前記触媒を含むことと、
前記容器内で、前記反応混合物から放出される光の有無を検出することと、
を含む、方法。 - 前記容器が、検出器を含むルミノメーターにおける使用に適合されている、請求項1に記載の方法。
- 前記一部分が視認可能に着色されている、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記容器からの光を検出することが、前記ルミノメーター内に前記容器を動作可能に配置することを更に含む、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記容器を動作可能に配置することが、前記一部分の少なくとも一部が前記反応混合物と検出器との間に配置されるように、前記容器を配置することを更に含む、請求項4に記載の方法。
- 前記触媒を提供することが、ルシフェラーゼを提供することを含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検出試薬及び前記容器を提供することが、前記触媒が内部に配置された前記容器を提供することを更に含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 検体特異的な試薬を提供することを更に含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記一部分の色が前記容器内に配置された前記検体特異的な試薬の識別に関連する、請求項8に記載の方法。
- 検体特異的な試薬を提供することが検体特異的なポリヌクレオチドを提供することを更に含む、請求項8又は9に記載の方法。
- 反応混合物を形成することが、反応混合物を形成し、核酸増幅を促進することを更に含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検体特異的な試薬がDNA、RNA、又は酵素標識化タンパク質を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記着色剤が、赤着色剤、黄着色剤、青着色剤、緑着色剤、前述の着色剤の任意の2種又はそれ以上の混合物、又は前述の着色剤の任意の1つ又は2種以上の組み合わせを含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 発光反応のための触媒と、
少なくとも1つの壁を含む容器と、
を含み、
前記壁の少なくとも一部分が、着色剤を含み、
前記容器がルミノメーターにおける使用に適合されている、キット。 - 前記一部分が視認可能に着色されている、請求項14に記載のキット。
- 検体特異的な試薬を更に含む、請求項14又は15に記載のキット。
- 前記検体特異的な試薬が検体特異的なポリヌクレオチドを含む、請求項16に記載のキット。
- 前記一部分の前記色が前記検体特異的な試薬の識別に関連する、請求項16又は17に記載のキット。
- 前記触媒がルシフェラーゼを含む、請求項14〜18のいずれか一項に記載のキット。
- 細胞溶解剤、RNAポリメラーゼ、DNAポリメラーゼ、又はATPスルフリラーゼを更に含む、請求項14〜19のいずれか一項に記載のキット。
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