BR112013027041B1 - Método de detecção de um analito e kit - Google Patents

Abstract

MÉTODO DE DETECÇÃO DE UM ANALITO E KIT A presente invenção refere-se a um método de detecção de um analito. O método inclui o fornecimento de uma amostra, de um recipiente 110 com uma parede 115 e de um catalisador para uma reação luminescente. A parede inclui uma porção colorida 115b. O método compreende adicionalmente a formação de uma reação no recipiente e a detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir da mistura de reação no recipiente. A detecção da luz emitida a partir do recipiente pode compreender a detecção de luz passando através da porção colorida. A porção colorida pode ser detectada visualmente e a cor pode ser associado à identidade de um reagente específico para o analito disposto no recipiente. Os kits que compreendem o recipiente e um catalisador para uma reação luminescente também são apresentados.

Description

REFERÊNCIA REMISSIVA A PEDIDOS DE DEPÓSITO CORRELATOS

[001] Este pedido reivindica o benefício do pedido de patente provisório US n° 61/478.251, depositado em 22 de abril de 2011, que está aqui integralmente incorporado, por referência.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Os laboratórios com frequência realizam uma variedade de procedimentos de teste como, por exemplo, testes para determinar a presença ou identidade de um agente etiológico. Cada teste pode incluir um reagente específico para o analito (por exemplo, um substrato de enzima, um primer ou sonda de ácido nucleico, um anticorpo, um anticorpo monoclonal ou um receptor) que pode detectar a presença de um microrganismo específico em uma amostra.

[003] Os testes de laboratório para agentes etiológicos são frequentemente realizados em recipientes individuais (por exemplo, tubos ou microtubos). Adicionalmente, não é incomum processar um lote de testes ao mesmo tempo para otimizar a eficiência das operações do laboratório. Como testes similares são com frequência realizados em tubos com aparência idêntica, os técnicos de laboratório usam marcadores para distinguir os tubos contendo materiais de amostra diferentes e/ou reagentes específicos para o analito.

[004] Os marcadores são rotineiramente aplicados aos tubos de reação para identificar o conteúdo dos tubos. Os marcadores podem ser escritos no tubo ou na tampa correspondente. Tinta permanente à prova de água é usada para evitar que o marcador seja lavado ou raspado durante o manuseio. Alternativamente, um marcador adesivo, contendo uma descrição do conteúdo do tubo, é fixado ao tubo.

[005] Os marcadores com frequência incluem uma grande quantidade de informações relacionadas ao conteúdo do tubo (por exemplo, identidade da amostra, data, o tipo de teste ou analito específico do reagente, o operador). Marcadores com código de barras são usados em alguns casos, de forma que uma quantidade relativamente grande de informações pode ser incorporada em um marcador relativamente pequeno.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[006] Em geral, a invenção está relacionada a um método de detecção de um analito. Em particular, o método é encaminhado para a detecção da presença de um analito pela detecção de uma reação de emissor de luz. O método adicionalmente está relacionado a um recipiente colorido que pode ser usado no método. Surpreendentemente, uma variedade de recipientes coloridos, que são visualmente distinguíveis uns dos outros, podem ser usados em um método de detecção que exige a detecção da luz que passa através das paredes coloridas do recipiente. Vantajosamente, os recipientes coloridos fornecem identificação visual instantânea de ao menos um componente da reação, assim reduzindo a possibilidade de erro do laboratório.

[007] Em um aspecto, a presente descrição apresenta um método de detecção de um analito. O método pode compreender o fornecimento de uma amostra, um catalisador para uma reação luminescente e um recipiente; formando uma mistura de reação no recipiente; e detectando a luz emitida a partir da mistura de reação no recipiente. A mistura de reação pode compreender a amostra e o catalisador. O recipiente pode incluir ao menos uma parede. Ao menos uma porção da parede compreende um agente corante.

[008] Em qualquer das modalidades acima, o recipiente pode ser adaptado para uso em um luminômetro. Em qualquer das modalidades acima, formando uma mistura de reação pode compreender adicionalmente a formação de uma mistura de reação para facilitar uma reação luminescente. Em qualquer das modalidades acima, a porção pode ser visivelmente colorida. Em qualquer das modalidades acima, detectar luz a partir da reação luminescente pode compreender adicionalmente o posicionamento de forma operável do recipiente em um luminômetro que compreende um detector. Em qualquer das modalidades acima, o posicionamento de forma operável do recipiente pode compreender adicionalmente o posicionamento do recipiente de modo que ao menos uma parte da porção seja posicionada entre a mistura de reação e o detector. Em qualquer das modalidades acima, o detector da luz pode compreender adicionalmente a quantificação de uma quantidade de luz.

[009] Em qualquer das modalidades acima, fornecer o catalisador pode compreender adicionalmente o fornecimento de um catalisador seco reidratável. Em qualquer das modalidades acima, fornecer um catalisador pode compreender fornecer luciferase. Em qualquer das modalidades acima, em que o fornecimento do reagente de detecção e do recipiente pode compreender adicionalmente o fornecimento do recipiente com o catalisador disposto nele.

[010] Em qualquer das modalidades acima, o método pode compreender adicionalmente o fornecimento de um reagente específico para o analito. Em qualquer das modalidades acima, o fornecimento de um reagente de detecção específico para o analito pode compreender adicionalmente o fornecimento de um polinucleotídeo. Em qualquer das modalidades acima, a formação de uma mistura de reação pode compreender adicionalmente a formação de uma mistura de reação para facilitar a amplificação do ácido nucleico. Em qualquer das modalidades acima, a cor da porção pode ser associada à identidade do reagente específico para o analito disposto no recipiente. Em qualquer das modalidades acima, o analito pode compreender DNA ou RNA.

[011] Em qualquer das modalidades acima, o agente corante pode compreender um agente corante vermelho, um agente corante azul, um agente corante amarelo, um agente corante verde, uma mistura de quaisquer dois ou mais dos supracitados agentes corantes ou uma combinação de quaisquer dois ou mais dos supracitados agentes corantes.

[012] Em um outro aspecto, a presente descrição apresenta um kit. O kit pode compreender um reagente de detecção e um recipiente. O recipiente pode compreender ao menos uma parede. Ao menos uma porção da parede pode compreender um agente corante. O recipiente pode ser adaptado para uso em um luminômetro.

[013] Em qualquer modalidade do kit, a porção pode ser visivelmente colorida. Em qualquer modalidade do kit, o reagente de detecção pode ser um reagente específico para o analito. Em qualquer modalidade do kit, a cor da porção pode estar associada à identidade do reagente específico para o analito. Em qualquer modalidade, o kit pode compreender adicionalmente um agente de lise celular, RNA polimerase ou DNA polimerase. Em qualquer modalidade do kit, a cor pode compreender vermelho, amarelo, azul, verde e misturas das mesmas ou suas combinações.

[014] O termo "analito", para uso na presente invenção, refere-se a várias moléculas (por exemplo, um nucleotídeo, um ácido nucleico, uma proteína, uma enzima) ou epítopos das moléculas (por exemplo, diferentes sítios de ligação de uma proteína, uma glicoproteína ou um polissacarídeo) ou células totais de um microrganismo. O analito pode ser característico de um microrganismo (isto é, bactéria, levedura, mofo ou vírus) ou um grupo de microorganismos de interesse e, dessa forma, a presença do analito em uma amostra é indicativa da presença do microrganismo na amostra.

[015] As palavras "preferencial" e "de preferência" referem-se às modalidades da invenção que possam proporcionar certos benefícios, sob certas circunstâncias. Entretanto, outras modalidades podem, também, ser preferenciais sob as mesmas ou outras circunstâncias. Além disso, a recitação de uma ou mais modalidades preferenciais não implica no desuso de outras modalidades e não tem a intenção de excluir outras modalidades do escopo da invenção.

[016] Os termos "compreende" e as variações do mesmo não têm um significado limitador, sendo que esses termos aparecem na descrição e nas reivindicações

[017] Para uso na presente invenção, "um", "uma", "o", "a", "ao menos um", "ao menos uma", "um ou mais" e "uma ou mais" são usados de maneira intercambiável. Dessa forma, por exemplo, um recipiente pode ser interpretado para significar "um ou mais" recipientes.

[018] O termo "e/ou" significa um ou todos os elementos mencionados ou uma combinação de quaisquer dois ou mais dos elementos listados.

[019] Para uso na presente invenção, as recitações de intervalos numéricos com extremos incluem todos os números contínuos nesta faixa (por exemplo 1 a 5 inclui 1, 1,5, 2, 2,75, 3, 3,80, 4, 5, etc.).

[020] O sumário anterior da presente invenção não se destina a descrever cada uma das modalidades apresentadas ou todas as implementações da presente invenção. A descrição a seguir exemplifica mais particularmente as modalidades ilustrativas. Em diversos lugares, durante a aplicação, a orientação é fornecida através de listas de exemplos, nas quais os exemplos podem ser usados de várias maneiras. Em cada instância, a lista recitada serve apenas com um grupo representativo e não deve ser interpretada como uma lista exclusiva.

[021] Detalhes adicionais destas e outras modalidades são demonstrados nos desenhos em anexo e na descrição abaixo. Outras características, objetivos e vantagens se tornarão aparentes a partir da descrição e dos desenhos, e a partir das reivindicações.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[022] A Figura 1 é uma vista lateral de uma modalidade de um recipiente com uma porção que compreende um agente corante, de acordo com a presente descrição.

[023] A Figura 2A é um vista esquemática em seção transversal explodida de uma modalidade de um recipiente com uma porção que compreende um agente corante e um leitor de luminescência, de acordo com a presente descrição.

[024] A Figura 2B é uma vista esquemática em seção transversal do recipiente da Figura 2A operacionalmente acoplada ao leitor de luminescência da Figura 2A.

[025] A Figura 3 é um gráfico de uma porção do espectro da luz emitida a partir das reações luminescentes realizado em um recipiente transparente e um recipiente que compreende um agente corante.

DESCRIÇÃO DETALHADADA INVENÇÃO

[026] Uma tendência nos testes de laboratório é o uso de testes de microvolume. Esta tendência está sendo dirigida pela despesa dos reagentes específicos (por exemplo, enzimas, reagentes de enzima, corantes, anticorpos monoclonais) e o desenvolvimento da tecnologia de preparação de amostra que pode concentrar as moléculas de analito em volumes bem pequenos, assim acentuando a cinética das reações de detecção. Ademais, há uma tendência com relação ao uso de um instrumento específico (por exemplo, um termociclo de PCR em tempo real) para executar um grande número de testes, muitos dos quais incluem reagentes específicos para o analito (isto é, primers e/ou sondas). Tais instrumentos com frequência usam recipientes padronizados (por exemplo, microtubos) nos quais todos os testes são realizados. Como os recipientes padronizados parecem idênticos, os técnicos de laboratório dependem do uso de marcadores para distinguir o conteúdo de cada recipiente.

[027] Os marcadores podem ser usados para registrar uma variedade de informações importantes relacionadas ao conteúdo de cada recipiente (por exemplo, identificação da amostra, fonte da amostra, data, operador, tipo de teste, reagentes específicos para o analito, números de lote e similares). Como os recipientes são muito pequenos, pode ser difícil registrar todas as informações em um marcador que se adaptará à área superficial disponível do recipiente e/ou sua tampa. O uso de código de barras pode associar uma amostra específica a um código/número, permitindo assim que o técnico registre grandes quantidades de informações associadas ao código de barras. Entretanto, tais códigos somente podem ser decifrados por um leitor de código de barras conectado a uma base de dados na qual as informações são armazenadas, tornando difícil para o técnico reconhecer visualmente de forma instantânea atributos importantes do conteúdo de qualquer recipiente.

[028] Uma outra desvantagem associada ao uso de marcadores é que eles podem obscurecer uma porção ou todas as paredes ou tampa de um recipiente no qual o teste é realizado. Isto pode ser um problema para testes que requerem detecção óptica de uma reação que ocorre no recipiente (por exemplo, uma reação na qual a emissão de luz por luminescência é a base para a detecção da presença ou ausência de um analito). O marcador pode substancialmente absorver luz de uma reação luminescente, enquanto a luz está passando do recipiente em uma trajetória em direção a um detector óptico (por exemplo um fotomultiplicador, um fotodiodo, um dispositivo de carga acoplada (CCD), um semicondutor de óxido metálico complementar (CMOS), um semicondutor, filme fotográfico) e/ou quando a luz passa através de uma superfície reflexiva destinada a direcionar a luz em direção ao detector óptico, assim reduzindo a sensibilidade potencial do sistema de detecção.

[029] Dessa forma, há ao menos dois problemas encontrados por um técnico que tenta executar um ensaio baseado em luminescência em um microrrecipiente: i) marcar um microrrecipiente em particular de modo que um ou mais componente crítico contido no microrrecipiente seja facilmente e instantaneamente passível de reconhecimento por um técnico ou um instrumento e ii) evitar a substancial interferência da marca na detecção óptica de uma reação no microrrecipiente. O método da invenção fornece um meio de marcar um recipiente de forma que, mesmo que os meios absorvam luz e fiquem diretamente na trajetória entre uma reação luminescente e um fotodetector, surpreendentemente, não interfere substancialmente na detecção da reação luminescente. Sem se ater à teoria, acredita-se que um observador humano facilmente detecta a cor do tubo porque o observador tipicamente está visualmente detectando a luz (a partir de uma fonte externa ao microrrecipiente) que passa através de ao menos duas camadas (por exemplo, paredes) do material colorido. Dessa forma, a absorbância aparente da luz externa é pelo menos duplicada quando detectada pelo olho humano. Ao contrário, a luz emitida por uma reação luminescente dentro do microrrecipiente apenas passa através de uma parede uma vez que está viajando por uma trajetória até o detector. Vantajosamente, isto permite a fácil detecção visível da cor do tubo com relativamente pouca interferência (isto é, absorbância) da luz emitida a partir de uma reação no microrrecipiente.

[030] O método compreende fornecer uma amostra, um reagente de detecção e um recipiente. O recipiente inclui ao menos uma parede que forma um sistema de abertura e um reservatório interno. Pode haver a suspeita de a amostra compreender um analito (por exemplo, um analito associado a um micro-organismo em particular ou um grupo de microorganismos). Os micro-organismos de interesse particular incluem os organismos procarióticos e eucarióticos, particularmente, bactérias Gram- positivas, bactérias Gram-negativas, fungos, protozoários, micoplasmas, leveduras, vírus e até mesmo vírus envelopados em lipídio. Os organismos particularmente relevantes incluem membros da família Enterobacteriaceae, ou da família Micrococcaceae ou do gênero Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Pseudomonas spp., Enterococcus spp., Salmonella spp., Legionella spp., Shigella spp. Yersinia spp., Enterobacter spp., Escherichia spp., Bacillus spp., Listeria spp., Vibrio spp., Corynebacteria spp. bem como herpes vírus, Aspergillus spp., Fusarium spp., e Candida spp. Os organismo particularmente virulentos incluem Staphylococcus aureus (incluindo cepas resistentes como Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)), S. epidermidis, Streptococcus pneumoniae, S. agalactiae, S. pyogenes, Enterococcus faecalis, Resistente a vancomicina Enterococcus (VRE), Resistente a vancomicina Staphylococcus aureus (VRSA), resistente intermediário a -vancomicina Staphylococcus aureus (VISA), Bacillus anthracis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Aspergillus niger, A. fumigatus, A. clavatus, Fusarium solani, F. oxysporum, F. chlamydosporum, Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Vibrio cholera, V. parahemolyticus, Salmonella cholerasuis, S. typhi, S. typhimurium, Candida albicans, C. glabrata, C. krusei, Enterobacter sakazakii, E. coli O157 e hastes Gram-negativas resistentes a múltiplos medicamentos (MDR).

[031] Bactérias gram-positivas e gram-negativas são de particular interesse. De maior interesse ainda são as bactérias gram-positivas como Staphylococcus aureus. Tipicamente, essas bactérias podem ser detectadas pela presença de uma característica de um componente da parede celular das bactérias, como uma proteína da parede celular. Além disso, de particular interesse são os micróbios resistentes a antibióticos incluindo MRSA, VRSA, VISA, VRE e MDR. Tipicamente, esses micróbios podem ser detectados detectando-se adicionalmente a presença de um componente celular interno, como uma proteína de membrana, uma proteína de transporte, uma enzima, etc., responsável pela resistência a antibióticos.

[032] Em algumas modalidades, o analito pode ser uma biomolécula que é um reagente para uma reação luminescente (por exemplo, ATP, luciferase). Em algumas modalidades, o analito pode ser uma biomolécula (por exemplo, um ácido nucleico) que participa de uma reação ou de uma série de reações que geram um reagente para uma reação luminescente. Um exemplo não limitador de uma série de reações que geram um reagente para uma reação luminescente em resposta à presença de um analito de ácido nucleico específico é o ensaio de LAMP-BART descrito por Gandelman et al. ("Novel Bioluminescent Quantitative Detection of Nucleic Acid Amplification in Real-Time", 2010, Plos ONE, volume 5 (11), artigo e 14155, publicado em www.plosone.org em novembro de 2010).

[033] A Figura 1 mostra uma modalidade de um recipiente 110 de acordo com a presente descrição. O recipiente 110 compreende uma parede unitária 115 que forma uma abertura 120 e um reservatório interno 130. Opcionalmente, uma tampa (não mostrada) pode ser usada para vedar a abertura 120. O recipiente 110 é adaptado para uso em um luminômetro. "Adaptado para uso em um luminômetro", para uso na presente invenção, significa que o recipiente 110 tem um formato e dimensões que permitem que seja recebido em um luminômetro de forma que a luz emitida do recipiente ou o conteúdo (por exemplo, uma mistura de reação) nele, possa ser detectada e, opcionalmente, medida pelo luminômetro. Em qualquer modalidade, o recipiente 110 está configurado (isto é, tem um tamanho e formato adequado) para ser recebido em um dispositivo de transferência térmica que é operacionalmente acoplado a um detector que detecta luz, conforme mostrado nas Figuras 2A-B, por exemplo. Consequentemente, nessas modalidades, a luz emitida a partir do recipiente 110 ou o conteúdo nele, pode ser recebida pelo detector que detecta luz enquanto, simultaneamente, a temperatura do recipiente e o conteúdo nele são opcionalmente controlados e/ou modulados pelo dispositivo de transferência térmica.

[034] O recipiente 110 pode ser fabricado a partir de um material (por exemplo, vidro; Materiais poliméricos (como polietileno, polipropileno, por exemplo) que têm uma clareza óptica e transmissividade óptica que não evita substancialmente que a luz (por exemplo comprimentos de onda de luz visível de uma reação luminescente) passe pela parede 115 até um detector que detecta luz. Em algumas modalidades, o recipiente pode ser um tubo de ensaio, um tubo de reação ou um tubo para microcentrífuga. O luminômetro de tubo único n 20/20, disponível junto à Turner Biosystems (Sunnyvale, CA, EUA), inclui um adaptador de amostra que permite o uso de luminômetro de tubos de microcentrífuga de 1,5 ml, por exemplo.

[035] A parede 115 do recipiente 110 compreende adicionalmente uma porção 115b que inclui um agente corante. Em algumas modalidades (não mostradas), a porção que inclui um agente corante pode ser a tampa, em que a luz detectada a partir de uma reação luminescente no tubo é detectada após a luz ter passado através da tampa. Em algumas modalidades, o agente corante pode ser detectado com o uso de um instrumento (por exemplo, com o uso de um espectrofotômetro). Em modalidades preferenciais, a cor associada à porção 115b da parede 115 compreendendo o agente corante pode ser detectada visualmente. A porção pode incluir qualquer fração detectável da área superficial da parede 115. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 1 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 2 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 5 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 10 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 15 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 20 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 30 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 40 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 50 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 60 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 70 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 80 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 90 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 95 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até cerca de 99 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende até toda a área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 1 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 2 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 5 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 10 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 15 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 20 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 30 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 40 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 50 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 60 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 70 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 80 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 90 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 95 por cento da área superficial da parede. Em algumas modalidades, a porção compreende ao menos cerca de 99 por cento da área superficial da parede

[036] Em algumas modalidades, o agente corante é um pigmento e/ou um corante incorporado no material (por exemplo vidro, resina polimérica) a partir do qual o recipiente 110 é formado. Alternativa ou adicionalmente, em algumas modalidades (não mostradas) o recipiente 110 compreende adicionalmente uma camada (por exemplo, um revestimento ou uma camada de filme) acoplada a uma superfície (por exemplo, a superfície interna ou a superfície externa) da porção 115b da parede 115. A camada pode compreender um agente corante. O agente corante pode compreender um agente corante vermelho, um agente corante azul, um agente corante amarelo, um agente corante verde, uma mistura de quaisquer dois ou mais dos agentes corantes supracitados ou uma combinação de quaisquer dois ou mais dos agentes corantes supracitados.

[037] Como ocorre com o recipiente 110, a porção 115b da parede 115 compreendendo o agente corante tem uma clareza óptica e transmissividade óptica que substancialmente evita que a luz (por exemplo comprimentos de onda de luz visível de uma reação luminescente) passe através da porção 115b para um detector que detecta luz. Em uma modalidade preferencial, em relação a um recipiente similar que não compreende um agente corante, o recipiente que compreende uma porção 115b que tem um agente corante permite a transmissão de pelo menos cerca de 50% ou mais da luz emitida de uma reação luminescente. Em uma modalidade mais preferencial, em relação a um recipiente similar que não compreende um agente corante, o recipiente que compreende uma porção 115b que tem um agente corante permite a transmissão de pelo menos cerca de 75% ou mais da luz emitida a partir de uma reação luminescente. Em uma modalidade mais preferencial, em relação a um recipiente similar que não compreende um agente corante; o recipiente que compreende uma porção 115b que tem um agente corante que permite a transmissão de pelo menos cerca de 85% ou mais da luz emitida a partir de uma reação luminescente. Em uma modalidade mais preferencial, em relação a um recipiente similar que não compreende um agente corante; o recipiente que compreende uma porção 115b que tem um agente corante que permite a transmissão de pelo menos cerca de 90% ou mais da luz emitida a partir de uma reação luminescente. Em uma modalidade mais preferencial, em relação a um recipiente similar que não compreende um agente corante; o recipiente que compreende uma porção 115b que tem um agente corante que permite a transmissão de pelo menos cerca de 95% ou mais da luz emitida a partir de uma reação luminescente.

[038] A abertura 120 do recipiente 110 permite a transferência de materiais (não mostrada) no reservatório 130 do recipiente 110. Os materiais podem incluir materiais líquidos e/ou sólidos para facilitar uma reação luminescente. Alguns exemplos não-limitadores de materiais adequados para facilitar uma reação luminescente incluem um meio líquido (por exemplo, água, uma solução tampão), uma enzima (por exemplo, luciferase, fosfatase alcalina), um substrato de enzima (por exemplo, luciferina; ATP; 2-cloro-5-(4- metoxiespiro[1,2-dioxetano-3,2‘-(5-clorotriciclo[3.3.1. 13,7]decano])-4-ila]-1 -fenil fosfato (reagente de fosfatase alcalina CDP-STAR Chemiluminescent disponível junto à Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA)), um reagente quimioluminescente (por exemplo, luminol) e a reagente de lise celular (por exemplo, um detergente, TRITON X-100). A enzima (por exemplo, fosfatase alcalina, luciferase) pode ser acoplada a um parceiro de ligação (por exemplo, uma proteína como um anticorpo ou um receptor, por exemplo). Os materiais de amostra também podem ser transferidos para o reservatório, 130 através da abertura 120.

[039] Os materiais de amostra incluem materiais de amostra que são suspeitos de conter um analito. O material de amostra pode ser um líquido, um sólido, um sólido suspenso ou disperso em um líquido, um hidrogel. Em qualquer das modalidades, a amostra pode compreender micro-organismos e/ou moléculas que foram submetidas a uma ou mais técnicas de preparação de amostras incluindo, mas não se limitando a, concentração (por exemplo, por filtração, precipitação, aglomeração, centrifugação, absorção e/ou adsorção), amplificação (por exemplo, amplificação com base em crescimento e/ou enzimática), enriquecimento (por exemplo, enriquecimento por crescimento seletivo), extração (por exemplo, lise celular) e purificação (por exemplo, purificação cromatográfica, solvente particionamento).

[040] O fornecimento de um catalisador para uma reação luminescente compreende o fornecimento de uma substância que capacita uma reação luminescente a proceder a uma taxa mais rápida ou sob condições diferentes (por exemplo, a uma temperatura mais baixa) do que seria possível de outro modo. Em algumas modalidades, o catalisador é uma enzima como luciferase (por exemplo, luciferase do vaga-lume) ou fosfatase alcalina, por exemplo. Em algumas modalidades, a amostra pode compreender o catalisador. Em algumas modalidades, o catalisador pode ser fornecido em uma forma seca reidratável. Em algumas modalidades, o catalisador seco reidratável pode ser fornecido no reservatório interno 115 do recipiente 110. Em algumas modalidades, o catalisador pode ser fornecido em um recipiente separado (não mostrado) e transferido para o reservatório interno 115. O catalisador pode ser reidratado e/ou diluído com um líquido aquoso (por exemplo, água, um tampão).

[041] O método compreende adicionalmente a formação de uma mistura de reação no recipiente. A mistura de reação, quando formada, compreende o catalisador para uma reação luminescente (por exemplo, luciferase) e a amostra. A amostra, direta ou indiretamente, fornece ao menos um reagente para a reação luminescente. Por exemplo, em algumas modalidades, a amostra pode compreender células ou um lisato celular que fornece ATP como um reagente para uma biorreação luminescente. Dessa forma, em algumas modalidades, a formação de uma mistura de reação compreende adicionalmente a formação de uma mistura de reação que compreende um agente de lise celular (por exemplo, um detergente). Em algumas modalidades, a amostra pode compreender ácido nucleico (DNA ou RNA) que, na presença dos trifosfatos de desoxirribonucleotídeos e polimerase de ácido nucleico, pode facilitar uma reação de polimerização para formar DNA ou RNA. A reação de polimerização também resulta na produção de pirofosfato (P2O74-) que, na presença de adenosina monofosfato e ATP sulfurilase, pode produzir ATP, que pode ser usado como um reagente para uma biorreação luminescente conforme descrito em Gandelman et al. Dessa forma, em algumas modalidades, a formação de uma mistura de reação compreende adicionalmente a formação de uma mistura de reação que compreende, para facilitar, amplificação de ácido nucleico. Em algumas modalidades, a formação de uma mistura de reação compreende a formação de uma mistura de reação que inclui precursores de ácido nucleico (por exemplo, dNTP’s), uma polimerase de ácido nucleico e uma enzima (por exemplo, ATP sulfurilase) que usa pirofosfato para produzir um reagente (por exemplo, ATP) para uma reação luminescente.

[042] Tipicamente, a formação de uma mistura de reação compreende a colocação de reagentes em contato fluídico (por exemplo, em um fluido aquoso, como um tampão aquoso, por exemplo). A mistura de reação pode ser formada no recipiente 110, por exemplo, pela adição de reagentes ao recipiente antes ou após a adição de um fluido aquoso ao recipiente 110. Alternativamente, a mistura de reação pode ser formada em um recipiente separado (não mostrado) e uma porção ou toda a mistura de reação pode ser transferido ao recipiente 110.

[043] O método compreende adicionalmente a detecção da presença ou ausência de luz emitida a partir do recipiente ou do seu conteúdo. Em algumas modalidades, a detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir do recipiente ou luz emitida a partir de seu conteúdo compreende adicionalmente a detecção da luz com o uso de um luminômetro que inclui um detector para detectar luz. Nessas modalidades, o método compreende adicionalmente o posicionamento de forma operável do recipiente no luminômetro de modo que a luz emitida a partir do recipiente ou luz emitida a partir de seu conteúdo possa ser detectada pelo detector. Em algumas modalidades, o posicionamento de forma operável do recipiente no luminômetro compreende adicionalmente o posicionamento do recipiente de modo que ao menos uma parte da porção 115b da parede que compreende um agente corante seja posicionada entre a mistura de reação e o detector.

[044] As Figuras 2A e 2B mostram uma modalidade de um sistema 200 para detectar um analito. A Figura 2A mostra uma vista esquemática em seção transversal longitudinal parcialmente explodida dos componentes do sistema 200. O sistema 200 inclui um recipiente 210 e um leitor 240 que é similar ao dispositivo baseado em diodo descrito por Gandelman et al. O recipiente 210 compreende uma parede 215 e uma tampa 218. A parede 215 inclui uma porção (por exemplo, a parede inteira) que compreende um agente corante. Disposta no recipiente 210 está uma mistura de reação 230.

[045] O leitor 240 compreende um receptor 242 que inclui uma cavidade 243 configurada para receber o recipiente. O receptor 242 pode ser fabricado a partir de uma variedade de materiais incluindo, por exemplo, plástico ou metal. Em uma modalidade preferencial, o receptor 242 é fabricado a partir de um material condutor de calor (por exemplo, alumínio), que é acoplado operacionalmente a uma fonte de calor (por exemplo, um resistor, não mostrado) e um controlador de temperatura (não mostrado). Na modalidade ilustrada, a cavidade é conformada e dimensionada de modo que o recipiente 215, excluindo uma tampa 218, pode ser acoplada operacionalmente (isto é, assentada totalmente e de forma segura na) à cavidade 243 do receptor 242.

[046] Opcionalmente, o leitor 240 pode compreender um elemento que coleta luz 244. O elemento que coleta luz 244 tem um formato frustrocônico e tem por objetivo coletar luz que é emitida a partir do recipiente em uma direção que não é em direção ao detector 248 e refrata e/ou reflete a luz em uma direção (Seta "A") que é em direção ao detector 248. Em algumas modalidades, o elemento que coleta luz 244 pode ser uma superfície semelhante a espelho (por exemplo, uma superfície formatada, revestida e/ou polida do material usado para fabricar o receptor 242).

[047] O detector 248 pode ser qualquer detector capaz de converter sinais de fótons (isto é, luz) em sinais elétricos. Os exemplos de detectores adequados 248 incluem, por exemplo, tubos fotomultiplicadores e fotodiodos (por exemplo, fotodiodos de avalanche). O leitor 240 compreende adicionalmente uma carcaça 260 e, opcionalmente, uma cobertura (não mostrada) para substancialmente excluir a luz externa do detector 248 quando uma amostra está sendo analisada pelo leitor 240.

[048] A Figura 2B mostra uma vista esquemática em seção transversal longitudinal em seção transversal do sistema 200 da Figura 2A com o recipiente 210 posicionada de forma operacional no leitor 240. Na modalidade ilustrada, como a parede toda compreende um agente corante, posicionar de forma operável o recipiente 210 compreende adicionalmente o posicionamento do recipiente 210 de modo que ao menos uma parte da porção colorida da parede 215 está posicionada entre a mistura de reação 230 e o detector 248.

[049] Em algumas modalidades, o leitor 240 pode estar incluído em um luminômetro. O luminômetro pode ser um luminômetro de mão, como, por exemplo, um luminômetro LIGHTNING MVP System disponível junto à BioControl Systems, Inc., Bellevue, WA, EUA. Alternativamente, o luminômetro pode ser um luminômetro de bancada como, por exemplo, o luminômetro de tubo único 20/20n ou um luminômetro similar aos descritos em Gandelman et al.

[050] De acordo com a presente descrição, a detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir de um recipiente é realizada após a formação da mistura de reação. A mistura de reação é configurada de modo que o analito na amostra forneça um componente que, direta ou indiretamente, capacite a reação luminescente. Dessa forma, a presença da luz emitida a partir do recipiente ou do conteúdo (por exemplo, a mistura de reação) nele, após a mistura de reação ser formada é uma indicação da presença do analito na porção da amostra que é testada. Por outro lado, a ausência da luz emitida a partir do recipiente ou de seu conteúdo, após a mistura de reação ser formada, é uma indicação da ausência do analito na porção da amostra que é testada.

[051] Em algumas modalidades, a detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir do recipiente, ou de seu conteúdo, compreende adicionalmente quantificar uma quantidade de luz emitida a partir do recipiente. Para uso na presente invenção, detecção e/ou quantificação da luz emitida a partir do recipiente significa detectar e/ou quantificar ao menos alguma luz que é emitida pelo conteúdo do recipiente (por exemplo, uma mistura de reação) e que passa através de uma porção colorida do recipiente. Em algumas modalidades, a maior parte da luz detectada e/ou quantificada é emitida pelo conteúdo do recipiente e passa através de uma porção colorida do recipiente.

[052] Em qualquer das modalidades do método, o método pode compreender adicionalmente fornecer um reagente específico para o analito. Em qualquer das modalidades, o reagente específico para o analito pode compreender um polinucleotídeo específico para o analito (por exemplo, um primer que pode ser usado para facilitar a amplificação do ácido nucleico). Em qualquer das modalidades, o reagente específico para o analito pode ser fornecido (por exemplo, em um meio líquido ou como um reagente desidratado) no recipiente. Em qualquer das modalidades, a cor da porção colorida do recipiente pode ser associada à identidade do reagente específico para o analito fornecido no recipiente. Qualquer cor pode ser usada para designar um recipiente que tem um reagente específico para o analito. Por exemplo, um recipiente pode incluir um reagente específico para o analito para detectar Escherichia coli, um tubo amarelo pode incluir um reagente específico para o analito para detectar Staphylococcus aureus e/ou um tubo verde pode incluir um reagente específico para o analito para detectar Campylobacter jejuni.

[053] Em um outro aspecto, a presente descrição apresenta um kit para detectar um analito. O kit pode compreender um recipiente conforme descrito aqui. O recipiente compreende ao menos uma parede que forma uma abertura e um reservatório interno. Ao menos uma porção da parede compreende um agente corante, conforme descrito aqui. Em algumas modalidades, a porção é visivelmente colorida. O recipiente adicionalmente é adaptado para uso em um luminômetro. O kit compreende adicionalmente um catalisador para uma reação luminescente, conforme descrito aqui. Em qualquer modalidade, o catalisador pode compreender luciferase, por exemplo.

[054] Em qualquer modalidade, o kit pode compreender adicionalmente um reagente específico para o analito. Em qualquer modalidade, o reagente específico para o analito pode compreender um polinucleotídeo ou um anticorpo, por exemplo.

[055] Em qualquer modalidade, o kit pode compreender adicionalmente um reagente usado para extrair e/ou purificar o ácido nucleico de uma célula. Exemplos não limitadores de tais reagentes incluem um reagente de lise celular (por exemplo, um detergente, uma enzima, lisoestafina). Em qualquer modalidade, o kit adicionalmente pode incluir um reagente usado para facilitar a amplificação do ácido nucleico (por exemplo, RNA polimerase, DNA polimerase, uma mistura de trifosfatos de ribonucelotídeo, uma mistura de trifosfatos de deoxiribonucelotídeo). Em qualquer modalidade, o kit adicionalmente pode incluir um reagente para facilitar a síntese de ATP (por exemplo, ATP sulfurilase, adenosina monofosfato).

MODALIDADES

[056] A modalidade A é um método de detecção de um analito, que compreende: fornecimento de uma amostra; um catalisador para uma reação luminescente; um recipiente que inclui ao menos uma parede; em que pelo menos uma porção do recipiente é adaptada para uso em um luminômetro; em que ao menos uma porção da parede compreende um agente corante; formação de uma mistura de reação no recipiente, a mistura de reação que compreende a amostra e o catalisador; e detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir da mistura de reação no recipiente.

[057] A modalidade B é o método da modalidade A, em que o recipiente é adaptado para uso em um luminômetro que compreende um detector.

[058] A modalidade C é o método da modalidade A ou modalidade B, em que a formação da mistura de reação compreende adicionalmente a formação de uma mistura de reação para facilitar uma reação luminescente.

[059] A modalidade D é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a porção é visivelmente colorida.

[060] A modalidade E é o método de qualquer uma das modalidades B a D, em que a detecção da luz a partir do recipiente compreende adicionalmente o posicionamento de forma operável do recipiente no luminômetro.

[061] A modalidade F é o método da modalidade E, em que o posicionamento de forma operável do recipiente compreende adicionalmente o posicionamento do recipiente de modo que ao menos uma parte da porção seja posicionada entre a mistura de reação e um detector.

[062] A modalidade G é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a detecção de luz compreende adicionalmente a quantificação de uma quantidade de luz.

[063] A modalidade H é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o fornecimento de um catalisador compreende adicionalmente o fornecimento de um catalisador seco reidratável.

[064] A modalidade I é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o fornecimento do catalisador compreende o fornecimento de luciferase.

[065] A modalidade J é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o fornecimento do reagente de detecção e do recipiente compreende adicionalmente o fornecimento do recipiente com o catalisador disposto ali.

[066] A modalidade K é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo, ainda, o fornecimento de um reagente específico para o analito.

[067] A modalidade L é o método de modalidade K, em que a cor da porção está associada à identidade do reagente específico para o analito disposto no recipiente.

[068] A modalidade M é o método da modalidade K ou da modalidade L, em que o fornecimento de um reagente específico para o analito compreende adicionalmente o fornecimento de um polinucleotídeo específico para o analito.

[069] A modalidade N é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a formação de uma mistura de reação compreende adicionalmente a formação de uma mistura de reação para facilitar a amplificação do ácido nucleico.

[070] A modalidade O é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o reagente específico para o analito compreende DNA, RNA ou uma proteína marcada com enzima.

[071] A modalidade P é o método de qualquer uma das modalidades anteriores, em que a cor do agente compreende um agente corante vermelho, um agente corante amarelo, um agente corante azul, um agente corante verde, uma mistura de quaisquer dois ou mais dos agentes corantes supracitados ou uma combinação de quaisquer dois ou mais dos agentes corantes supracitados.

[072] A modalidade Q é um kit, que compreende: um catalisador para uma reação luminescente; e um recipiente que compreende ao menos uma parede; em que ao menos uma porção da parede compreende um agente corante; em que o recipiente é adaptado para uso em um luminômetro.

[073] A modalidade R é o kit da modalidade Q, em que a porção é visivelmente colorida.

[074] A modalidade S é o kit da modalidade Q ou da modalidade R, em que, adicionalmente, um reagente específico para o analito.

[075] A modalidade T é o kit da modalidade S, em que o reagente está disposto no recipiente.

[076] A modalidade U é o kit da modalidade S ou da modalidade T, em que o reagente específico para o analito compreende um polinucleotídeo específico para o analito.

[077] A modalidade V é o kit de qualquer uma das modalidades S a U, em que a cor da porção está associada à identidade do reagente específico para o analito.

[078] A modalidade W é o kit de qualquer uma das modalidades S a V, em que o catalisador compreende luciferase.

[079] A modalidade X é o kit de qualquer uma das modalidades S a W, que compreende adicionalmente um agente de lise celular, RNA polimerase, DNA polimerase ou ATP sulfurilase.

[080] A presente invenção é ilustrada por meio dos exemplos a seguir. Deve-se compreender que os exemplos, materiais, quantidades e procedimentos específicos devem ser interpretados de forma aberta, de acordo com o escopo e com o espírito da invenção, segundo descrito no presente.

EXEMPLOS MATERIAIS

[081] Um reagente de luminescência microbiano LL1 e um tampão de sistema de luminescência microbiano LL1 (ambos obtidos a partir de kit de reposição MLS L/L1, n° de catálogo 3003B, disponível junto à 3M Health Care, St. Paul, MN, EUA).

[082] Controle positivo de sistema de luminescência microbiano (ATP) (n° de catálogo 3004; 3M Health Care; St. Paul, MN, EUA).

[083] Água grau molecular; n° de catálogo W4502; Sigma Chemical Co., St Louis, MO, EUA.

[084] tubos PCR de 0,2 ml (n° 34267.8S transparente, n° 34267.8B azul, n° 34267.8G verde, n° 34267.8Y amarelo, n° 34267.8L lavanda, azul* modificado, lavanda* modificado); Biotix; San Diego, CA, EUA. Os números de peça referem-se aos tubos PCR de estoque da Biotix. Entretanto, deve ser observado que os tubos azul modificado e lavanda modificado usados nos exemplos foram pedidos especiais e foram feitos pela Biotix com o uso de metade da quantidade (em relação aos tubos de estoque) de agente corante que é normalmente usada para fazer os tubos PCR de estoque.

[085] Superfície de teste Hygiena Snapshot 1515 Universal ATP; Hygiena, Camarillo, CA, EUA.

[086] Luminômetro BioControl Lightning MVP; BioControl Systems, Bellevue, WA, EUA.

EXEMPLO COMPARATIVO 1 DETECÇÃO DA BIOLUMINESCÊNCIA COM O USO DE UM MICROTUBO TRANSPARENTE.

[087] Reagentes: O reagente de sistema de luminescência microbiano LL1 foi reconstituído com o uso de tampão de LL1 e girado para misturar de acordo com as instruções do fabricante. 1 ml de água grau molecular foi usado para reconstituir o frasco de controle positivo ATP.

[088] Construção de dispositivos híbridos: Um pedaço de 1 cm foi cortado do fundo dos tubos do dispositivo SnapShot com o uso de uma lâmina de barbear ou depilar. Cuidado foi tomado para assegurar que o corte estava aproximadamente perpendicular ao eixo longitudinal do tubo. A tampa (com o chumaço fixado) foi removida do dispositivo e cerca de 5 cm do eixo do chumaço (incluindo o botão fibroso) foram rompidos. O tubo (corte) foi agitado para expelir qualquer umidade que foi de maneira frouxa colada às paredes do tubo. Os tubos PCR de 0,2 ml transparentes foram cortados de uma tira de 8 tubos e a extremidade aberta do tubo PCR foi inserida nas aberturas de corte no fundo dos tubos do SnapShot. Os tubos PCR foram inseridos longe o suficiente nos tubos SnapShot de forma que cerca de 1 cm dos tubos PCR estendeu-se do fundo dos tubos SnapShot. O diâmetro externo do tubo PCR e o diâmetro interno do tubo SnapShot foram de tais dimensões similares que o tubo PCR foi firmemente mantido no lugar, formando uma vedação resistente a líquido nos dispositivos híbridos.

[089] As amostras em branco foram analisadas por pipetagem de 100 μL do reagente LL1 em tubo PCR transparente no fundo dos dispositivos híbridos, inserindo os dispositivos híbridos em um luminômetro BioControl Lightning MVP e obtendo uma leitura RLU de acordo com as instruções do fabricante. As amostras de teste foram analisadas por pipetagem de 10 μL de solução ATP no dispositivo híbrido, seguido de 100 μl de reagente LL1. As soluções foram misturadas com o uso de uma micropipeta e os dispositivos híbridos foram inseridos em um luminômetro BioControl Lightning MVP para obter uma leitura RLU de acordo com as instruções do fabricante. Cinco dispositivos replicados foram testados com cada uma das soluções de branco e de teste. Foi observado que todo o líquido para cada reação (isto é, reações em branco e reações de teste) foi mantido na porção do tubo PCR do dispositivo híbrido enquanto o dispositivo híbrido foi colocado no luminômetro para detectar luz emitida a partir do tubo. Os resultados são mostrados na Tabela 1. Como um controle adicional, os dispositivos híbridos vazios (sem reagente LL1 e sem solução ATP) foram colocados no luminômetro e a leitura RLU foi obtida.

EXEMPLOS 1 A 4. DETECÇÃO DE BIOLUMINESCÊNCIA COM O USO UM MICROTUBO COLORIDO.

[090] Os reagentes e os dispositivos híbridos foram preparados conforme descrito no exemplo comparativo 1 exceto que o os tubos PCR azuis foram usados para construir os dispositivos híbridos para o exemplo 1, os tubos PCR verdes foram usados para construir os dispositivos híbridos para o exemplo 2, os tubos PCR amarelos foram usados para construir os dispositivos híbridos para o exemplo 3 e os tubos PCR lavanda foram usados para construir os dispositivos híbridos para o exemplo 4. As leituras de "branco" (sem ATP) e "teste" RLU foram obtidas com o uso dos mesmos métodos descritos no exemplo comparativo 1. Os resultados estão resumidos na Tabela 1. TABELA 1. DETECÇÃO DE UMA BIORREAÇÃO LUMINESCENTE COM O USO DE TUBOS DE REAÇÃO TRANSPARENTES E COLORIDOS. TODOS OS RESULTADOS SÃO REPORTADOS COMO UNIDADES DE LUZ RELATIVA (RLU’S).

[091] Os resultados mostram que a quantidade de luz detectada com o uso dos tubos coloridos situava-se na faixa de cerca de 89,9% (Tubos lavanda) a cerca de 99,9% (tubos amarelos) da luz detectada com o uso dos tubos transparentes, mesmo assim a cor dos tubos podia ser facilmente observada e identificada pelo operador humano. EXEMPLO 5. TRANSMITÂNCIA DA LUZ POR MICROTUBOS COLORIDOS.

[092] A transmitância da luz visível pelos tubos PCR transparentes e coloridos foi medida com o uso de um espectrofotômetro (número de modelo 80-2097-62, LKB Biochrom, Cambridge, reio Unido). As varreduras de referência foram feitas com um cadinho vazio. As varreduras experimentais foram feitas com o uso de cadinhos individuais que continham os respectivos tubos PCR transparentes e coloridas Biotex discutidos acima. A Figura 3 mostra uma comparação entre a transmitância de 500 a 700 nm de luz através de um tubo PCR transparente (linha "A") e um tubo PCR lavanda (linha "B"). A Tabela 2 mostra os resultados de um experimento onde a transmitância de 500 nm a 700 nm de luz através de cada um dos tubos PCR de várias cores foi comparada com a transmitância de luz através de um tubo PCR transparente. O experimento foi realizado conforme descrito acima, exceto que a varredura de referência foi feita com o uso de um cadinho contendo um microtubo PCR transparente. Apesar de todos os tubos transmitirem ao menos 80% da luz transmitida pelos tubos transparentes, os tubos verde, amarelo, azul modificado e lavanda modificado transmitiram ao menos 90% da luz transmitida pelos tubos transparentes. TABELA 2. DETECÇÃO DE UMA TRANSMISSÃO DE LUZ ATRAVÉS DE TUBOS DE REAÇÃO COLORIDOS. TODOS OS RESULTADOS SÃO REPORTADOS COMO UNIDADES DE LUZ RELATIVA (RLU’S). A TRANSMITÂNCIA DE LUZ FOI MEDIDA EM TUBOS DE TRÊS LOTES DIFERENTES DE CADA TUBO PCR COLORIDO DE ESTOQUE. A TRANSMITÂNCIA DE LUZ TAMBÉM FOI MEDIDA EM TUBOS DE UM LOTE CADA DOS TUBOS AZUL E LAVANDA MODIFICADOS.

[093] A descrição completa de todas as patentes, pedidos de patente, publicações e materiais disponíveis na forma eletrônica citados na presente invenção, está aqui incorporada a título de referência. Em caso de inconsistência entre a descrição do presente pedido e a(s) descrição(ões) de qualquer documento aqui incorporado, a título de referência, a descrição do presente pedido deve prevalecer. A descrição detalhada e os exemplos apresentados anteriormente foram fornecidos apenas por uma questão de clareza. Nenhuma limitação desnecessária deve ficar implícita a partir disso. A invenção não se limita aos detalhes exatos mostrados e descritos, visto que variações óbvias aos versados na técnica estarão incluídas na invenção definida pelas reivindicações.

[094] Todos os cabeçalhos são para a comodidade do leitor e não devem ser usados para limitar o significado do texto que segue os cabeçalhos, a menos que esteja especificado.

[095] Várias modificações podem ser feitas sem se afastar do espírito e do escopo da invenção. Essas e outras modalidades estão no escopo das reivindicações a seguir.

Claims (7)

1. MÉTODO DE DETECÇÃO DE UM ANALITO, caracterizado por compreender: fornecimento de uma amostra; um catalisador para uma reação luminescente; um reagente específico para o analito; e um recipiente que inclui ao menos uma parede; em que o recipiente é adaptado para uso em um luminômetro; em que a parede compreende uma porção colorida que compreende um agente corante, em que a cor da porção está associada à identidade do reagente específico para o analito disposto no recipiente; formação de uma mistura de reação no recipiente, a mistura de reação compreendendo a amostra e o catalisador; e detecção da presença ou ausência da luz emitida a partir da mistura de reação no recipiente, em que a detecção da luz que é emitida a partir da mistura de reação compreende detectar a luz que passa através da porção colorida do recipiente.

2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela porção ser visivelmente colorida.

3. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo reagente específico para o analito compreender DNA, RNA ou proteína marcada por enzima.

4. KIT, caracterizado por compreender: um catalisador para uma reação luminescente; um reagente específico para o analito; e um recipiente que compreende ao menos uma parede; em que a parede compreende uma porção colorida que compreende um agente corante, em que a cor da porção é associada à identidade do reagente específico para o analito; em que o recipiente é adaptado para uso em um luminômetro pela detecção da luz que passa através da porção colorida do recipiente.

5. KIT, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pela porção ser visivelmente colorida.

6. KIT, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 5, caracterizado pelo catalisador compreender luciferase.

7. KIT, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 6, caracterizado por compreender adicionalmente um agente de lise celular, RNA polimerase, DNA polimerase ou ATP sulfurilase.

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