JP2014209132A - アルツハイマー病に関する方法及び組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】例えば本発明は、被験者におけるアルツハイマー病の診断方法を提供する。この方法は、前記被験者からの組織サンプルまたは体液サンプルにおいて、ここに記載する方法により同定された1つ以上の差異的に発現するタンパク質を検出することを含む。
【選択図】なし
Description
(a)異なるレベルのアルツハイマー病症状を示す被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルにおいて、少なくとも1つのタンパク質が差異的に発現するというパラダイムを確立する工程;
(b)前記被験者から組織サンプルまたは体液サンプルを入手する工程;
(c)前記サンプル中の、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(d)そのような測定と臨床情報の間の事前の相関関係を参考にして、アルツハイマー病の性質または程度と前記測定とを関連づける工程;
を含む。
(a)スクリーニングされる薬剤で治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者由来またはそのような被験者を表す関連組織サンプルを入手する工程;
(b)治療を受けた被験者由来またはそのような被験者を表す組織中の、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(c)治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者において、差異的に発現するタンパク質の発現、活性若しくは量を変化させる程度に従って、薬剤を選択または拒絶する工程;
を含む。
(a)スクリーニングされる薬剤で治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者由来、またはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルを経時的に入手する工程;
(b)前記サンプル中の、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(c)治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者において、差異的に発現するタンパク質の発現に経時的に変化をもたらす薬剤かどうかを測定する工程;
を含む。
(a)健常被験者とアルツハイマー病症状を示す被験者;並びに
(b)前記薬剤で治療を受けていないアルツハイマー病症状を示す被験者と薬剤治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者;
を含む。
(a)前記薬剤で治療を受けた及び受けていない健常被験者;並びに以下の一方または両方
(b)前記薬剤で治療を受けた及び受けていない軽度認知障害被験者;並びに
(c)前記薬剤で治療を受けた及びを受けていないアルツハイマー病症状を示す被験者;
を含む。
i)組織サンプル若しくは体液サンプル、またはそのタンパク質含有抽出物を、固相支持体に固定化する工程;
ii)固定化したタンパク質を表面増強レーザー脱離飛行時間質量分析法を用いて分析する工程;
iii)アルツハイマー病被験者及び健常被験者間の、タンパク質発現の差を検出するために得られたスペクトルを比較する工程;
を含む。
(a)3mm×180mmのアクリルアミドポリマーの非直線状固定化pH勾配(IPG)ゲルを準備する工程;
(b)前記IPGゲルを、尿素(8M)、3-[(コラミドプロピル)ジメチルアンモニオ]-1-プロパンスルホナート(CHAPS、2%w/v)、0.5% IPGファルマライト、及び微量のブロモフェノールブルーの水溶液25mlを含むカセット中で再水和する工程;
(c)前記カセットから液体を除き、湿った電極芯、電極、及びサンプルカップを備えた電気泳動トレーに前記ゲルを移し、ゲルとカップを低粘度のパラフィン油で覆う工程;
(d)前記IPGゲルの陰極末端で、尿素(8M)、CHAPS(4%w/v)、Tris(40mM)、0.5% IPGファルマライト、及び微量のBromophenol Blue中の関連生体組織を乾燥粉末にした材料の水溶液200μgをサンプルカップにアプライする工程;
(e)前記ゲルについて、3時間500Vの定電圧で、その後1時間500Vから1000Vの直線的増加の勾配電圧で、その後2時間1000Vの定電圧で、その後2時間1000Vから8000Vの直線的増加の勾配電圧で、その後、タンパク質がゲル中でpI依存的な最終地点へ移動するのに十分な時間8000V定電圧で、等電点電気泳動を実施する工程;
(f)前記ゲルを、Tris-HCl(50mM)pH6.8、尿素(6M)、グリセロール(30%v/v)、SDS(2%w/v)及びDTT(10mg/ml)を含む水溶液100mlの入ったトレー内で平衡化する工程;
(g)この溶液を、Tris-HCl(50mM)pH8.8、尿素(6M)、グリセロール(30%v/v)、SDS(2%w/v)、ヨードアセタミド(25mg/ml)、及び微量のBromophenol Blueを含む水溶液100mlで置換し、20分間インキュベートする工程;
(h)リーディングバッファーとしてのTris-HCl(0.375M)pH8.8中で、TEMED(0.5%w/v)、過硫酸アンモニウム(0.1%w/v)、及びチオ硫酸ナトリウム(5mM)を添加して重合させる、アクリルアミド/ピペラジン−ジアクリリル架橋剤(9-16%T/2.6%C)の縦勾配スラブゲル160×200×1.5mmを準備する工程;
(i)前記ゲルをsec-ブタノールで約2時間浸し、その後ブタノールを除去し、水で置換する工程;
(j)前記IPGゲル断片を二次元電気泳動に適したサイズに切断し、陽極末端から6mm及び陰極末端から14mmを除去する工程;
(k)前記スラブゲルを、70℃に加熱したアガロース(0.5%w/v)及びリーディングバッファーとしてのTris-グリシン-SDS(25mM-198mM-0.1%w/v)の水溶液で浸し、この浸した溶液を介してスラブゲル上に前記IPGゲルをのせる工程;
(l)8-12℃、5時間40mAの定電流で、二次元電気泳動を実施する工程;並びに
(m)ゲルを洗浄する工程;
を含む。
ここで使用される「差異的な発現」は、組織または体液タンパク質発現における、少なくとも1つの認識可能な差異を表す。それは、組織タンパク質発現における量的に測定可能な差異、半量的に見積もり可能な差異、または質的に検出可能な差異であっても良い。従って、差異的に発現するタンパク質(ここではDEPと称する)は、健常状態の組織において強く発現し、アルツハイマー病状態の組織においてあまり強く発現していない、あるいは全く発現していないものでも良い。逆に、それはアルツハイマー病状態の組織において強く発現し、健常状態においてあまり強く発現していない、または全く発現していないものでも良い。さらに、健常状態と疾患状態の間の比較で、タンパク質がいずれかの認識可能な変化を受けている場合は、その発現は差異的とみなされて良い。
ある実施態様では、本発明は、アルツハイマー病に関連するタンパク質の同定方法に関する。そのようなタンパク質は、健常状態における発現と比較してアルツハイマー病状態において差異的に発現するタンパク質を表す。そのような差異的に発現するタンパク質は、「標的」または「フィンガープリント」タンパク質を表す。
規模爆発及び消散物質の放出を引き起こし、マイクロチャネルを形成する空間を後に残す。マイクロチャネルの物質は、キャピラリー電気泳動と同様にEOFに基づいて分離する。それは、各チップがそれぞれのサンプル注入器、分離カラム及び電気化学的検出器を備えたマイクロチップの形成に適用できる(J. S. Rossier et al., 1999, Electrophoresis 20: 727-731参照)。
前記の方法により同定された差異的に発現するタンパク質は、例えば、ここに記載するそのような方法によりさらに特徴づけられる。そのようなタンパク質を、ここでは「同定されたタンパク質」と表すであろう。
前記セクション1で同定された差異的に発現するタンパク質を含む、同定されたタンパク質をここに記載する。具体的に、そのような同定されたタンパク質のアミノ酸配列を記載する。さらに、同定されたタンパク質に対する抗体、及び同定されたタンパク質をさらに特徴づけ、且つ利用する細胞及び動物に基づいたモデルについても、このセクションで議論する。
本発明はまた、1つ以上の差異的に発現するタンパク質またはパスウェイタンパク質のエピトープを特異的に認識できる抗体の産生方法に関する。そのような抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体(mAbs)、ヒト化抗体またはキメラ抗体、一本鎖抗体、Fab断片、F (ab’)2断片、Fab発現ライブラリーにより産生される断片、抗イディオタイプ(anti-Id)抗体、及び前記いずれかのエピトープ結合領域を含むが、これに制限されない。そのような抗体を、アルツハイマー病治療法の一部として利用でき、及び/またはフィンガープリント、標的、若しくはパスウェイ遺伝子タンパク質の異常レベルについて、またはそのようなタンパク質の異常型の存在について、患者を検査するための診断技術の一部として使用しても良い。
ここに記載される差異的に発現するタンパク質は、アルツハイマー病を予防または緩和できる化合物を検査するのに用いても良い。
アルツハイマー病症状を緩和し、またはアルツハイマー病の進行を減速または停止する方法及び組成物を下に記載する。少なくとも部分的に、標的タンパク質の異常なレベルにより、または異常な活性を示す標的タンパク質の存在により、アルツハイマー病症状が引き起こされる可能性がある。例えば、そのような標的タンパク質のレベル及び/または活性を低減することにより、アルツハイマー病症状が緩和するであろう。標的タンパク質の遺伝子発現レベル、または標的タンパク質の活性レベルを低減する技術について、セクション4.1で議論する。
前述のように、アルツハイマー病に関わる標的タンパク質の活性を増強することにより、そのような疾患が引き起こされるかもしれない。様々な技術を、そのような標的遺伝子及び/または標的タンパク質の発現、合成、または活性を阻害するために用いることができる。
アンチセンス、リボザイム及びトリプルヘリックス分子を、野生型、または適切であれば、変異型標的タンパク質の遺伝子活性のどちらかを低減または阻害するように設計する。そのような分子の作製及び使用するための技術は、当該技術分野でよく知られている。
標的タンパク質に対して特異的、且つその活性を阻害する抗体を、標的タンパク質の機能を阻害するために用いることができる。所望の場所で、変異型標的タンパク質に対する特異的抗体を用いても良く、それはそのような変異型標的タンパク質の産物の活性を阻害する。そのような抗体は、そのタンパク質自体に対して、またはそのタンパク質の一部に相当するペプチドに対して、前記セクション2に記載する標準的な技術を用いることにより作製することができる。前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Fab断片、一本鎖抗体、キメラ抗体等を含むが、これに制限されない。
アルツハイマー病を引き起こす標的タンパク質は、アルツハイマー病の疾患状態では過少発現しているかもしれない。あるいはまた、標的タンパク質の活性が低下し、アルツハイマー病症状を引き起こしているかもしれない。標的タンパク質のレベルを、アルツハイマー病症状が予防されるまたは緩和されるレベルへ増強する方法について、このセクションに記載する。標的タンパク質の活性レベルは、例えば、標的タンパク質の存在レベルを増加させる、または存在する活性を有する標的タンパク質のレベルを増加させることにより、増強することができる。
アルツハイマー病を治療または緩和するために、標的タンパク質の発現、合成及び/または活性に効果を有する、同定された化合物、核酸分子及び細胞を臨床上有効な量で患者に投与することができる。臨床上有効な量とは、アルツハイマー病症状を緩和するのに十分な化合物量、あるいはまた、前記症状を緩和するタンパク質濃度を発現するのに十分な核酸量を表す。
そのような化合物の毒性及び治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手法、例えばED50(集団の50%において臨床的に有効な量)を測定することにより、及びあらゆる副作用のED50(毒性-TD50)を測定することにより決定することができる。毒性と治療有効性の間の投薬量比は、治療指数であり、TD50/ED50という比として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物は好ましい。有毒な副作用を示す化合物が用いられるかもしれないが、患部組織の部位を標的とするそのような化合物のデリバリーシステムは、細胞への起こりうるダメージを最小限にし、よって副作用が低減されるように注意深く設計されるべきである。
本発明に従って用いられる製薬組成物を、従来の方法で、生理学的に許容される1つ以上の担体または賦形剤を用いることにより製剤化することができる。
アルツハイマー病の診断のために、軽度認知障害及びアルツハイマー病の進行をモニターする、アルツハイマー病の素因、及び、例えば、臨床試験の間、いずれかのアルツハイマー病化合物の有効性をモニターする、アルツハイマー病の治療のための臨床的評価を受けている患者をモニターする等の様々な方法を実施することができる。差異的に発現するタンパク質及びフィンガープリントタンパク質を、アルツハイマー病の性質または程度を明らかにするために用いることもでき、疾患の治療の特徴づけ、及び/または選択に役立てることもできる。
実験集団は、長期的に調査された、ADに罹患した人(NINCDS-ADRDA, probable)、他の認知症患者、及び健常年配者の大きな群集に基づく集団から抽出される。詳細な臨床診断を有する1000を超える被験者について、サンプルが入手可能である。臨床検査データは、体系的な診断、認知検査、及び行動検査を含む。およそ50ml(BD社の採血管vacutainer K3Eの15%の4×10ml、及びexetainerに1×10ml)の血液が各被験者から採血される。被験者は、採血の2時間より前から飲食をしない。1本のBD社vacutainer K3E(血漿)及びextainer(血清)がプロテオミクス研究に用いられる。プロテオミクスのために回収された前記血清/血漿サンプルを、回収から2時間以内に8分間3000回転で遠心する。
8M 尿素、2% w/v CHAPS、0.5% IPGファルマライト(pH3-10; Amersham Biotech社, UK)からなる2D用溶解バッファー中で、血清/血漿サンプルを溶解及び再水和した。その後、溶解したサンプルを18cm 3-10NL Immobiline pH 勾配ゲル(pH3-10のポリアクリルアミドゲル) を用いた等電点電気泳動にかけた。再水和したゲルのIPG等電点電気泳動は、IPGphor泳動装置で、以下のプロトコール:
ステップ1:1時間500V step-n-hold(s/h:すなわち、ゲルにかける電流を表示された時間特定の設定でステップの泳動時間中、徐々に増やしていく);
ステップ2:2時間500V s/h
ステップ3:1時間500から1000Vの直線的増加の勾配電圧(G)
ステップ4:2時間1000V s/h
ステップ5:2時間1000から8000V G
ステップ6:8時間8000V s/h
を用いて16時間実施した。
ゲル内での還元、アルキル化及び消化(トリプシンを用いた)を、マススペクトロメトリーによる分析の前に行った。システイン残基は、DTTで還元され、ヨードアセタミド処理により誘導体化され、安定的なカルバミドメチル(CAM)誘導体を形成した。トリプシン消化は、37℃で1時間行った後、室温/オーバーナイトで行った。
消化したサンプル(3μl)を脱塩し、ZipTipC18(Millipore社)を用いて濃縮した。4μl の50%アセトニトリル/0.1%トリフルオロ酢酸にペプチドを溶出した。その後、0.5μlをマトリックス(α-シアノ-4-ヒドロキシ-ケイ皮酸)0.5μlを備えた目的のプレート上へのせた。Voyager De-Pro、MALDI-TOFマススペクトロメーター(Applied Biosystems社)を用いてペプチドマスフィンガープリントを得た。マススペクトルを、遅延引出し(delayed extraction)を備えたリフレクトロン・モード(reflectron mode)で得た。その後、得られたマススペクトルを固定し、30ppm以上の正確性を達成するために、質量2163.0569Daの自己消化によるトリプシンペプチドを用いた。
一連のアセトニトリルと水溶液の洗浄により、ゲル断片からペプチドを抽出した。抽出物を最初の上清で浸し、凍結乾燥した。その後、各サンプルを6μlの50mM炭酸水素アンモニウムに再懸濁し、LC/MS/MSにより分析した。Ultimate LC システム(Dionex社, UK)を用いて、クロマトグラフィー分離を行った。75μm C18 PepMapカラムを用いた逆相クロマトグラフィーによりペプチドを分解した。200nl/mlの流速で前記ペプチドを溶出するために、0.05%ギ酸の中にアセトニトリルを勾配により供給した。QTOFmicro(Waters Corporation)に適合させたZ-スプレー源(Z-spray source)を用いたエレクトロスプレーのイオン化により、前記ペプチドをイオン化した。前記機器を自動切換えモードで稼動するように設定し、衝突により誘起する断片化により配列順序を決定するために、前駆体イオンをその強度に基づいて選択した。MS/MS分析は、ペプチドの質量電荷比(m/z)と荷電状態に基づいて選択される衝突エネルギープロファイルを用いることにより行った。
対照グループ(n=50)及び患者グループ(n=50)すべてについての二次元ゲル画像を統計解析にかけた。計16個のタンパク質スポットが重要な結果を示す(p<0.05)(図6参照)。
二次元電気泳動におけるペプチドスポットのパターンにより、臨床的に判断されるような事例性を予測できるかどうかを判断するために、分類予測を行った。データのトレーニングセットに基づくグループに設定された分類を予測するためのアルゴリズムを記憶している管制機器、Support Vector Machines(SVM)を用いた。SVMは、マイクロアレイ解析に最も一般的に用いられる。しかしながら、その統計上の課題はプロテオミクスに類似しており、様々なプロテオミクス研究の分類予測モデルとして、SVMがあらかじめ用いられている。GeneSpring(Silicon Genetics社)を用いて、オリジナルの25の患者及び25の対照をトレーニングセットとして指定し、その後、その複製の25の患者及び25の対照をテストセットとして指定した。同定されたすべてのタンパク質を可能性のある識別分子として用い、パラメーターPolynomial Dot Product Order 1及びDiagonal Scaling Factor 1を用いて、テストサンプル50中の34が、患者または対照として正確に同定された。二次元電気泳動のデータについてSVM解析のみを用いた感度は56%、特異性は80%であった。
患者と対照の初めのセット、及びその複製セットにおける標準化したスポットの吸光度を比較した。各スポットの患者と対照間の平均差を、Wilcoxen順位和検定(Mann-Whitney)を用いて比較した。平均差のないゼロ仮定に対するp値を保存し、増加する値により分類し順位づけした。棄却された仮説のうち誤って棄却された真の帰無仮説の割合(FDR)インデックスを、順位番号と理論上の確率との割合(スポット総数で割った順位番号)として算出した。15スポットが、.05以下のFDRを示すことが同定された。その後、これらはLC/MS/MSを用いて同定される。
患者と対照は同程度の年齢であるが、観察されたペプチドまたはスポットの差異が年齢、性別またはAPOE遺伝子型に起因している可能性があった。従って、年齢、性別及びAPOE遺伝子型を有する100の被験者すべてにおいて、患者と対照間で差異のある15スポットに対する相関解析を行った。まず、変数を比較するための基準を定めるために、データをユニット分散に応じて増減した(すなわち、各値を特定変数に対するすべての値の標準偏差で割った)。その後、Pearsonの相関係数を算出した。どのスポットも、年齢、性別またはAPOE遺伝子型との強い相関関係は見られなかった。2つのスポットが年齢と、2つのスポットが性別と、また1つのスポットがAPOE遺伝子型と弱い相関関係を示した。
この実験において、二次元ゲル電気泳動の工程の前に、6つの最も大量に存在するタンパク質を除くために、ヒト血漿サンプルを除去した。
Agilent社の除去カラムを用いて、60のヒト血漿サンプル(30の対照被験者及び30の疾患被験者)を除去した。前記サンプルを二次元電気泳動で分離した(pH3-10、10% SDS、75μgのタンパク質をのせた)。ゲルを銀染色し、スキャンし(8bit、200dpi)、Progenesisソフトウェアを用いて定量的に分析した。分離ゲルからゲル断片を取り上げるために、いくつかの対照サンプルを混合し、3つのゲルに処理した(2つのゲルには205μgのタンパク質をのせ、1つのゲルには350μgのタンパク質をのせた)。分離ゲルを流すために、疾患サンプルについても同じ方法を実施した。その後、タンパク質のスポットを脱色し、トリプシン処理し、及びポリペプチドをSpotハンドリング・ワークステーション(GE Amersham Biosciences社)を備えたMALDIターゲットプレート上にのせた。作製されたペプチドプロファイルを、Swiss-Protデータベースと組み合わせたMs-Fitプログラムを用いて分析した。
対照及び疾患サンプルから抽出したタンパク質のゲル画像をProgenesis(v2005)で分析した。各グループ(対照及び疾患)は29枚の分析ゲルに基づいた。スポットの検出、一致判定をProgenesisで行い、その後、スポットデータをExcelに移行し、イン−ハウス(in-house)で展開したマクロを変動係数(CV%)、t検定及びRegulation facto or changeを算出するために用いた。
分析した前記11スポットは、対照及び疾患サンプル間で増減する7つのタンパク質、つまり、α-2-マクログロブリン、インター-α-トリプシンインヒビター重鎖H4、補体タンパクC3、補体タンパクC4、アクチン及びハプトグロビンであると確認した。
アルツハイマー病被験者及び対照被験者間で差異のあるタンパク質ピークを同定するために、SELDI-TOF-MS及びProteinChip技術を組み合わせ、その後、物質のさらなる特徴づけ及び存在する成分の同定を進めるために、チップから物質を抽出した。
SELDI分析はAD患者サンプル及び対照サンプルの比較を含み、データはプールされたサンプルだけでなく、個体群のサンプルの両方に対して得られている。それぞれの場合において、対照及びAD患者からの血清のスペクトルプロファイルを比較した。
個体からの対照及びADの血清をQ10-SAX2chipsにかけた。:
n=4対照
n=4 AD
血清サンプルは、血清20μlをSELDI用溶解バッファー30μlで希釈することにより新鮮に調製された。サンプル5μlを必要に応じて各スポットにのせた。
PAPペンを用いて各スポットの周りに疎水性の円を描く。このPAPは、チップをSELDI機器に25分間放置すると完全に乾く。
血清を40:60の比(血清40μl + 溶解バッファー60μl)でSELDI用溶解バッファーに希釈する。典型的に、この希釈によりサンプルは20mg/mlから30mg/mlの濃度になるであろう。従って、溶解バッファーの5μlを用いると、100μgから150μg間のタンパク質を各スポットへのせることが可能であろう。
チップをFalconチューブに入れ、100mM Trisバッファー(室温pH9)を10-15ml加え、回転式ミキサーで5分間混合する。この操作を2回繰り返す。
最後の平衡化工程の後、チップを取り出し、柔らかいティッシュで慎重に乾かす。サンプル5μlを各スポットに滴下し、チップを密封式湿度室に入れ、30分間振とう機に置く。
インキュベーション後、各スポットから慎重にサンプルを除去し、チップをFalconチューブに入れる。100mM Trisバッファー(pH9)を10-15ml加え、Falconチューブを回転式ミキサーで5分間混合する。この操作を4回以上繰返し、チップを滅菌蒸留水(DDW)で2回洗浄する。
最後の洗浄工程の後、チップを取り出し、柔らかいティッシュで慎重に乾かし、25分間室温で風乾する。
飽和したSPAマトリックス(新しく調製したもの)2×0.6μlを各スポットにピペットで滴下する。最初のアプライは、二度目の0.6μlをアプライする前に乾くことになる。SPAを乾燥させるために、SELDI機器に10分間放置する。
クラスター分析の基準:5 s/n;100% スペクトル;0.3% マス;2 s/n;add est.ピーク
標準化:総イオン数3,000から30,000Da間のみ
を適用した。
同一サンプルのスポット間の再現性は非常に高かった。高い相関関係を達成した。対照と認知症グループにおける患者間のばらつきが見られた。これは、特異体質性の差異だけでなく、タンパク質量の差異に起因するかもしれない。非常に厳密なクラスター分析を用いると、3つのピークが統計的に有意(p=0.05)であることが分かり、その信頼性を確かめるためにこれらを視覚的に確認した。関心のあるこの3つのピーク(図1−3参照)は以下のとおりである。
分子量6,430Da、1.62倍ADにおいて存在量多、p=0.027
分子量14,640Da、2.29倍ADにおいて存在量多、p=0.036
分子量27,147Da、2.82倍ADにおいて存在量多、p=0.004574
プールされたサンプルの分析を、上の記載と全く同じ方法及び基準を用いて分析した。しかしながら、ここでは、3つのプールされた対照に対し、3つのプールされたADサンプルを分析した。この各プールは、少なくとも25の個体からの血清を含む。この方法では、ADに罹患した75以上の個体からのサンプルを網羅し、それらを75の個体数を示す対照集団に対して比較した。プールされたグループを、それぞれ25、25、25の独自の個体からなるADプール1、2及び3のように記載する。
非常に厳密なクラスター分析を用いると、1つのピークが統計的に有意(p=0.05)であることが分かり、その信頼性を確かめるためにこれを視覚的に確認した。関心のあるこのピーク(図4参照)は以下のとおりである。
分子量14,646Da、1.72倍ADにおいて存在量多、p=0.037
SELDI分析により同定された差異的に発現するタンパク質を、さらにSDS-PAGEにより分析した。差異的に発現するタンパク質の分子量に相当するバンドを、マススペクトロメトリー分析のために切り出した。
(アポリポプロテインA-IV)
Q10 SAX2 SELDIチップで単離された14.6kDaのバンドについて、アポリポプロテインA-IV(P06727)に対して得られたシークエンス範囲を図9に示す。
二次元電気泳動のスポット164について、補体タンパクC4前駆体(P01028)に対して得られたシークエンス範囲を図10に示す。下線太字で示したいくつかのペプチドに基づいてスポット164を同定し、スポット164中のタンパク質を1466-1744に及ぶC末断片と確定した。
10の疾患サンプル及び10の対照サンプルを、6つの最も大量に存在するタンパク質に対して、それぞれ免疫除去した。疾患サンプルまたは対照サンプルのどちらかからなる2つのプールを作製し、qPST手順へ適用した(CNBrによるプレ切断、ジメチルグリシンによる標識、トリプシン処理、及び強陽イオン交換による分画化)。得られたSCX画分を、標準的な手法に従ったQTOF-II機器を用いるLC/MS及びLC/MS/MSにより分析した(異なる3つのデータ収集法によるLC/MS及びLC/MS/MS)。
[タンパク質の同定]
前述のように、3つの異なるMS/MS収集方法:
1.できる限り多くのペプチドIDを得るための分析に依存したデータ収集
2.増減する対、すなわち、疾患サンプル及び対照サンプル間でシグナル強度が異なるペプチドを含む「包含リスト」によるデータ収集(増減基準:≧2/≦0.5)
3.対をなさないMSシグナルを含む「包含リスト」によるデータ収集
を実施した。
8つのペプチドを、増減に対し交差試験できると認定した。これら8つのペプチドは5つのタンパク質を表す(タンパク質IDを得るために、ProteinProphetアルゴリズムを用いてペプチドを分類した)。
前記14.6kDaの分子がアポA-IVの断片であることを確認するために、ウエスタンブロッティングを行った。
抗ApoA-IV抗体(N末特異的)、Santa Cruz Biotechnology社
抗ApoA-IV抗体(C末特異的)、Santa Cruz Biotechnology社
を用いてプローブした。
両抗体ともに、ヒト由来のアポA-IVのアミノ末端(N末)またはカルボキシル末端(C末)付近に位置するペプチドに対して作製された、アフィニティー精製されたヤギ由来のポリクローナル抗体である。N末及びC末に対してプローブすることにより、アポA-IVタンパク質及び/またはアポA-IV断片を検出する可能性が増すであろうため、これらの抗体を選択した。
方法:
(サンプルの希釈)
血漿サンプルをリン酸緩衝食塩水(PBS)で1:8に希釈した。等量の2×Laemmliサンプルバッファーを加え、使用まで10分間ボイルした。
SDS電気泳動は、Fisher Scientific社の36ウェル、1.5mm厚のゲルを用いて行った(すべての溶液はNational Diagnostics社から購入した)。サンプルは4%濃縮ゲルを有する10%分離ゲルで分離した(すべての溶液はNational Diagnostics社から購入した)。サンプル(20μl)は、初めに30分間110Vで、その後、60分間150Vで色素の先端が泳動用バッファーにちょうど入り始めるまで分離した。セミドライ式転写機(Bio-Rad社)を用いて、45分間15VでゲルをPVDF膜(Amersham Biosciences社)へ転写した。その後、膜をPBS-Tweenで調製された5%ミルクでブロッキングし、4℃/オーバーナイトで補因子Hの一次抗体(Abcam社、UK)を用いてプローブした。バンドを化学発光ウエスタン検出キットECL+(Amersham Biosciences社)で検出し、膜をStorm蛍光スキャナー(Amersham Biosciences社)でスキャンした。免疫反応を示したバンドが139kDa(CFH:補因子H)に検出され、その光学密度をImage Quantソフトウェア(Amersham Biosciences社)を用いて定量した。統計解析ツールSPSSパッケージを用い、分布を利用しない(non-parametric)Mann-Whitney検定で解析した。
NINCDS-ADRDA probable ADの128人、及び健常年配者対照の78人からの血漿サンプルから、ウエスタンブロッティングの結果を得た。ADに罹患した患者では、CFHに32%の増加があった(Mann-Whitney;表2)。
Claims (46)
- 被験者においてアルツハイマー病を診断する方法であって、前記被験者からの組織サンプルまたは体液サンプルにおいて1つ以上の差異的に発現するタンパク質を検出することを含む方法。
- アルツハイマー病の性質または程度を測定する、請求項1に記載の方法。
- 時間の経過にともなうアルツハイマー病の進行を測定する、請求項2に記載の方法。
- ヒトまたは動物被験者において、アルツハイマー病の性質または程度を測定する方法であって、以下の工程:
(a)異なるレベルのアルツハイマー病症状を示す被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルにおいて、少なくとも1つのタンパク質が差異的に発現するといいうパラダイムを確立する工程;
(b)前記被験者から組織サンプルまたは体液サンプルを入手する工程;
(c)前記サンプル中の、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(d)そのような測定と臨床情報の間の事前の相関関係を参考にして、アルツハイマー病の性質または程度と前記測定とを関連づける工程;
を含む方法。 - アルツハイマー病の重篤度を測定する、請求項4に記載の方法。
- アルツハイマー病の継続期間を測定する、請求項4または5に記載の方法。
- 組織または体液サンプルは、尿、血液、血漿、血清、唾液または脳脊髄液サンプルである、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 対照被験者のものと比較して、前記タンパク質の発現の増加を検出する、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 対照被験者のものと比較して、前記タンパク質の発現の減少を検出する、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。
- 差異的に発現するタンパク質に対する特異的抗体を用いて、サンプル中に前記タンパク質に特異的な自己抗体を検出することにより、またはマススペクトロメトリー法により、前記タンパク質を検出する、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 差異的に発現するタンパク質を二次元ゲル電気泳動を使用して検出する、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルを固相支持体に固定化する、請求項10に記載の方法。
- 1つより多い差異的に発現するタンパク質を検出することを含む、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
- 4つ以上の差異的に発現するタンパク質を検出することを含む、請求項13に記載の方法。
- アルツハイマー病を緩和する最も適切且つ有効な治療を予測するため、及びその治療の成果をモニターするために、アルツハイマー病に罹患した個体の組織サンプルまたは体液サンプル中の差異的に発現するタンパク質のパターンを用いる、請求項13または14に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6、図7、図8または図12に示されるタンパク質である、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6に示されるスポット177に見られる、登録番号P01834の免疫グロブリンλ鎖C領域である、請求項5に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6に示されるスポット165に見られる血清アルブミン前駆体アイソフォームである、請求項6に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6、図7、図8または図12に示される以下のタンパク質:アポリポプロテインA-IV前駆体、アポリポプロテインC-III前駆体、トランスシレチン、ガレクチン7、補体タンパクC4前駆体、補因子H、S100カルシウム結合タンパク質またはセルロプラスミン、ヒストン2B、免疫グロブリンλ鎖C領域、フィブリノーゲンγ鎖前駆体、インター-α-トリプシン重鎖H4前駆体、補体タンパクC3前駆体、クラステリン前駆体、γ若しくはβアクチン、ハプトグロビン前駆体の一つ、またはその断片、または図6のスポット番号2、14、15、123、165、176、184に見られる血清アルブミン前駆体アイソフォームである、請求項16に記載の方法。
- 前記断片はアポリポプロテインA-IVの270-309残基、補体タンパクC4の680-1446-1744残基を含む、または前記断片はSDS-PAGEで28kDaの断片として移動するアポリポプロテインA-IVのN末断片である、請求項19に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6、図7または図12に示される以下のタンパク質:α-2-マクログロブリン、免疫グロブリンα-1鎖C、アポリポプロテインA-IVの一つ、あるいはその断片、あるいは図6のスポット2に見られる補因子Hまたは血清アルブミン前駆体である、請求項19に記載の方法。
- アルツハイマー病を治療するのに有効な治療を決定することをさらに含む、請求項1から21のいずれか一項に記載の方法。
- アルツハイマー病の発症または進行を防ぐことを目的として、アルツハイマー病状態における1つ以上の差異的に発現するタンパク質の発現を、健常状態に見られるものに回復させるであろう薬剤を用いる治療方法。
- アルツハイマー病を治療するのにおける有効性を判定するための薬剤のスクリーニング方法であって、以下の工程:
(a)スクリーニングされる薬剤で治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルを入手する工程;
(b)治療を受けた被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルにおいて、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(c)治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者において、差異的に発現するタンパク質の発現、活性若しくは量を変化させる程度に従って、前記薬剤を選択または拒絶する工程;
を含む方法。 - 工程(a)の前に、アルツハイマー病症状を示す被験者及び健常被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルにおいて、少なくとも1つのタンパク質が差異的に発現するというパラダイムを確立する工程をさらに含む、請求項24に記載の方法。
- 前記差異的に発現するタンパク質の発現を、健常被験者のものに移行させる場合、その薬剤を選択する、請求項24または25に記載の方法。
- 前記タンパク質の発現を、健常被験者のものまで移行させる場合、その薬剤を選択する、請求項24または25に記載の方法。
- アルツハイマー病を治療するのにおける有効性を判定するための薬剤のスクリーニング方法であって、以下の工程:
(a)スクリーニングされる薬剤で治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルを経時的に入手する工程;
(b)前記サンプル中の、差異的に発現するタンパク質の存在、非存在若しくは発現の程度を測定する工程;並びに
(c)前記薬剤が治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者において、差異的に発現するタンパク質の発現に経時的に変化をもたらすかどうかを測定する工程;
を含む方法。 - 工程(a)の前に、アルツハイマー病症状を示す被験者及び健常被験者由来のまたはそのような被験者を表す関連組織若しくは体液サンプルにおいて、少なくとも1つのタンパク質が差異的に発現するというパラダイムを確立する工程;並びにアルツハイマー病症状を示す被験者及び健常被験者において、前記差異的に発現するタンパク質の発現が経時的に相違するというパラダイムを確立する工程;をさらに含み、前記差異的に発現するタンパク質の発現における変化を経時的に防ぐまたは減速する場合、その薬剤を選択する、請求項28に記載の方法。
- 異なるレベルのタンパク質発現を示す被験者、この被験者は以下の
(a)健常被験者とアルツハイマー病症状を示す被験者;並びに
(b)前記薬剤で治療を受けていないアルツハイマー病症状を示す被験者と前記薬剤の治療を受けたアルツハイマー病症状を示す被験者;
を含む、請求項24から29のいずれか一項に記載の方法。 - 前記薬剤で治療を受けた及び受けていない健常被験者において、異なるレベルのタンパク質発現は観察されない、請求項30に記載の方法。
- アルツハイマー病症状を示す被験者は、アルツハイマー病に罹患したヒト患者である、請求項24から29のいずれか一項に記載の方法。
- アルツハイマー病症状を示す被験者は、突然変異型アミロイド前駆体タンパク質(APP)トランスジェニックマウス、プレセニリン1(PS-1)トランスジェニックマウス、APP/PS-1ダブルトランスジェニックマウス、及び/またはグリコーゲンシンターゼキナーゼ・トランスジェニックマウスであり、健常被験者は野生型マウスである、請求項24から29のいずれか一項に記載の方法。
- 組織または体液サンプルは、脳組織サンプルである、請求項33に記載の方法。
- 組織または体液サンプルは、尿、血液、血漿、血清、唾液または脳脊髄液サンプルである、請求項33または34に記載の方法。
- 関連組織またはそのタンパク質含有抽出物について実施する二次元ゲル電気泳動を用いることによりパラダイムを確立する、請求項4、25または29のいずれか一項に記載の方法。
- 関連組織またはそのタンパク質含有抽出物のSELDI分析を用いることによりパラダイムを確立する、請求項4、25または29のいずれか一項に記載の方法。
- 差異的に発現するタンパク質は、図6、図7、図8及び図12に示される1つ以上のタンパク質、またはそのげっ歯類同等物を含む、請求項24から37のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6、図7、図8または図12に示される以下のタンパク質:アポリポプロテインA-IV前駆体、アポリポプロテインC-III前駆体、トランスシレチン、ガレクチン7、補体タンパクC4前駆体、ヒストン2B、免疫グロブリンλ鎖C領域、フィブリノーゲンγ鎖前駆体、補因子H、インター-α-トリプシン重鎖H4前駆体、補体タンパクC3前駆体、クラステリン前駆体、γ若しくはβアクチン、ハプトグロビン前駆体の一つ、またはその断片、または図6のスポット番号 No.2、14、15、123、165、176、184に見られる血清アルブミン前駆体アイソフォーム、またはそのげっ歯類同等物である、請求項38に記載の方法。
- 前記断片はアポリポプロテインA-IVのアミノ酸270-309残基、または補体タンパクC4の1446-1744残基、またはそのげっ歯類同等物を含む、請求項40に記載の方法。
- 少なくとも1つの前記差異的に発現するタンパク質が、図6、図7または図12に示される以下のタンパク質:α-2-マクログロブリン、免疫グロブリンα-1鎖C、アポリポプロテインA-IVの一つ、あるいはその断片、あるいは図6のスポット2に見られる補因子Hまたは血清アルブミン前駆体、あるいはそのげっ歯類同等物である、請求項39に記載の方法。
- 請求項24から41のいずれか一項に記載の方法を用いて薬剤を同定することを含み、その薬剤を製造し、且つ製薬組成物を供給するのに適当な担体でそれを製剤化するさらなる工程を含む、製薬組成物を作製する方法。
- アルツハイマー病被験者及び健常被験者からの関連組織または体液サンプルにおいて、差異的に発現するタンパク質を同定する方法であって、以下の工程:
i)組織サンプル若しくは体液サンプル、またはそこからのタンパク質を含む抽出物を、固相支持体に固定化する工程;
ii)固定化したタンパク質を表面増強レーザー脱離飛行時間質量分析法により分析する工程;
iii)アルツハイマー病被験者及び健常被験者間の、タンパク質発現の差を検出するために得られたスペクトルを比較する工程;
を含む方法。 - 組織または体液サンプルは、血液、血清または脳脊髄液サンプルである、請求項43に記載の方法。
- 前記方法で同定された差異的に発現するタンパク質を単離する工程をさらに含む、請求項43または44に記載の方法。
- 前記単離されたタンパク質を特徴づけする工程をさらに含む、請求項45に記載の方法。
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WO2014055683A1 (en) * | 2012-10-03 | 2014-04-10 | The Research Foundation For The State University Of New York | Spectroscopic method for alzheimer's disease diagnosis |
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US20160245828A1 (en) * | 2013-08-27 | 2016-08-25 | Crc For Mental Health Ltd | Method of Identifying Biomarkers of Neurological Diseases and Diagnosis of Neurological Diseases |
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AU2016243516A1 (en) * | 2015-03-27 | 2017-11-09 | The Research Foundation For The State University Of New York | Methods and materials for reducing amyloid beta levels within a mammal |
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JP6947451B2 (ja) * | 2016-06-29 | 2021-10-13 | 学校法人自治医科大学 | バイオマーカー、診断用組成物、及び診断用キット |
JP6947450B2 (ja) * | 2016-06-29 | 2021-10-13 | 学校法人自治医科大学 | バイオマーカー、診断用組成物、及び診断用キット |
US11592452B2 (en) * | 2017-07-14 | 2023-02-28 | Mcbi Inc. | Disease detection method |
JP6408087B2 (ja) * | 2017-07-25 | 2018-10-17 | 株式会社Mcbi | 認知機能障害疾患のバイオマーカーおよび該バイオマーカーを用いる認知機能障害疾患の検出方法 |
CN113024651A (zh) * | 2019-12-25 | 2021-06-25 | 中国医学科学院药物研究所 | 阿尔茨海默病生物标志物及其应用 |
US20220260559A1 (en) * | 2020-11-04 | 2022-08-18 | Seer, Inc. | Biomarkers for diagnosing alzheimer's disease |
WO2024083822A1 (en) * | 2022-10-18 | 2024-04-25 | Immungenetics Ag | Identifying a subject suffering from alzheimer's dementia or being at risk of developing alzheimer's dementia |
CN117831756A (zh) * | 2024-03-05 | 2024-04-05 | 精智未来(广州)智能科技有限公司 | 一种认知障碍的辅助分析方法、装置、设备及存储介质 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003048775A2 (de) * | 2001-11-28 | 2003-06-12 | Biovision Ag | Peptide und verfahren zum nachweis von morbus alzheimer und zur unterscheidung von morbus alzheimer gegenüber anderen demenziellen erkrankungen |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4376110A (en) | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US4987071A (en) | 1986-12-03 | 1991-01-22 | University Patents, Inc. | RNA ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods |
US6342350B1 (en) * | 1997-09-05 | 2002-01-29 | The General Hospital Corporation | Alpha-2-macroglobulin diagnostic test |
US20030211622A1 (en) * | 1998-06-29 | 2003-11-13 | Roberts L. Jackson | Methods and compositions to assess oxidative brain injury |
US20030131364A1 (en) * | 1999-04-27 | 2003-07-10 | Karen Duff | Method for producing transgenic animal models with modulated phenotype and animals produced therefrom |
JP2001249128A (ja) * | 2000-03-06 | 2001-09-14 | Ikagaku:Kk | 動脈硬化症またはアルツハイマー病の診断用キット |
US20020174447A1 (en) * | 2001-01-23 | 2002-11-21 | Greenspan Ralph J. | Method for functional mapping of an alzheimer's disease gene network and for identifying therapeutic agents for the treatment of alzheimer's disease |
US6528309B2 (en) * | 2001-03-19 | 2003-03-04 | The Regents Of The University Of California | Vacuum-mediated desiccation protection of cells |
US6451547B1 (en) * | 2001-04-25 | 2002-09-17 | Syn X Pharma | Process for differential diagnosis of Alzheimer's dementia and device therefor |
WO2004001421A2 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Innogenetics N.V. | Method for the diagnosis and differential diagnosis of neurological diseases |
EP1572932A4 (en) * | 2002-07-03 | 2008-05-14 | Univ Illinois | REAGENTS AND METHODS FOR IDENTIFYING AND MODULATING THE EXPRESSION OF TUMOR GENE SCENARIAS |
DK1571970T3 (da) * | 2002-10-02 | 2011-11-28 | Dmi Biosciences Inc | Diagnose og monitorering af sygdomme |
KR100595494B1 (ko) * | 2003-02-24 | 2006-07-03 | (주) 디지탈바이오텍 | 혈액 내 베타-아밀로이드 항체 농도를 이용한 알츠하이머병 진단키트 |
GB0421639D0 (en) * | 2004-09-29 | 2004-10-27 | Proteome Sciences Plc | Methods and compositions relating to alzheimer's disease |
-
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Patent Citations (1)
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---|---|---|---|---|
WO2003048775A2 (de) * | 2001-11-28 | 2003-06-12 | Biovision Ag | Peptide und verfahren zum nachweis von morbus alzheimer und zur unterscheidung von morbus alzheimer gegenüber anderen demenziellen erkrankungen |
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