JP2014159442A - オリゴペプチドチロシナーゼインヒビターおよびその使用 - Google Patents

Abstract

【課題】ペプチドであり、チロシナーゼの酵素活性を抑制するもの、ならびに皮膚色素沈着の減少におけるそれらの使用のための調剤物および方法、および局所的調剤物における抑制性ペプチドを投与する方法を提供する。
【解決手段】ＫＦＥＫＫＦＥＫおよびＹＲＳＲＫＹＳＳＷＹを包含するペプチドシークエンス。前記ペプチドを含む、皮膚科学的に許容可能な調剤物。前記ペプチドを投与することを含み、ペプチドの前記投与は軽減された皮膚色素沈着に対して十分にチロシナーゼを抑制する、皮膚の処置のための方法。
【選択図】図１

Description

発明者：Basil M. Hantash（バジル エム ハンタッシュ）
関連出願への相互参照
この出願は、2007年6月27日付け出願の米国仮特許出願第60/937392号からの優先権を請
求し、それはその全体において参照することにより本明細書に組み込む。
政府支援の記述
なし
シークエンスリスティング、コンピュータープログラム、またはコンパクトディスクへ
の参照
本出願人は、シークエンスリスティングのペーパーコピーが添付のコンピューターのデ
ィスク装置上に見出されるコンピューター読取可能な形態におけるシークエンスリスティ
ングと同一であることを述べる。本出願人はシークエンスリスティングの内容をその全体
において参照することにより組み込む。

本発明の背景
本発明の分野
本発明はチロシナーゼインヒビターの分野に、およびこの酵素の抑制に関与する方法お
よび処置の組成物に関する。
関連技術
本発明は、新規な生物学的薬剤（biological agents）、特にチロシナーゼの酵素活性
を減らすオリゴペプチドに関する。これらの薬剤は、基礎科学調査（investigation）に
おいて、診断的適用において研究および開発のツールとして、高色素沈着によって特徴づ
けられる皮膚状態の治療のための薬用化粧品として、および病態（pathological conditi
ons）でそれらの腫瘍原性（tumorigenicity）を促すためのチロシナーゼ活性による（rel
y on）ものの処置のための治療学としての用途をもつ。

メラニンは、人体を紫外線の有害な影響から保護することで重要な役割を演じる。メラ
ニンはまた、医科学および美容術における重要な因子でもある。メラニンが皮膚組織にお
いて形成され、または合成されることが知られている。メラニンの過剰量は皮膚を暗くし
、そしてメラニンの不均一な分布は肝斑およびそばかす（ephelis）を引き起こし、その
双方は皮膚障害である。メラニンの生合成経路には、チロシンのL-3,4-ジヒドロキシフェ
ニルアラニン（L-DOPA）への触媒作用による水酸化、およびL-DOPAのドパクロムへの転換
が関与する。メラニンの合成を抑制する効果的なやり方は、チロシンのヒドロキシル化を
ブロックする（妨げる）ことである。

米国特許第７，１２５，５７２号明細書

ヒドロキノン（HQ）が、商業上入手可能な店頭でのスキンライトナー（肌を美しくする
）製品において1950年代から、そして、商業上入手可能な医療用品（medical product）
として1960年代から用いられている。それがまた、化粧用品で、ヘアダイおよびコーティ
ングフィンガーネイルのための製品においても用いられる。2001年から始まって、HQはEu
ropean Union（欧州連合）国において、化粧用皮膚ライトニング（skin lightening）調
剤物（製剤）における使用のためにはもはや認可されないが、アルブチンを含む製品、HQ
の類似物、および植物性品（botanicals）で、自然にHQおよびアルブチンを含む植物を含
有するものはヨーロッパ諸国において入手可能なままであり続ける。また、Matsubayashi
（マツバヤシ）ら、“Pharmaceutical and clinical assessment of hydroquinone ointm
ent prepared by extemporaneous nonsterile compounding（即座の非滅菌の配合によっ
て調製されたヒドロキノン軟膏の製薬上の、および臨床上のアセスメント）”、Biol Pha
rm Bull. 2002年1月;25(1):92-6を参照。そこで明らかにされるように、皮膚色素脱失薬
剤のヒドロキノン（HQ）の軟膏は、アメリカ合衆国およびと欧州連合において商業上入手
可能な皮膚ライトニングクリームをイミテート（手本に）することによって日本国におい
て即座の非滅菌配合によって調製されている。しかし、種々の問題が、HQ軟膏の色収差、
有効性の比較的大きな変動（variability）、および望ましくない副作用を含んで観察さ
れるが、それらは穏やかであった。HQは約700μMの公にされた（published）IC50をもつ
。

ヒドロキノンを含む療法は、アジア諸国で非合法化され、標準的なHQ処置をこの状態を
患う大多数の人々にとってアクセスし難くする。実際、米国FDAは、それが国内でヒドロ
キノンの使用を禁止することもありうることを示す通知を発行した。さらにまた、ヒドロ
キノンは内臓悪性腫瘍（visceral malignancy）と関係しており、そして長期の局所配送
は潜在的に有害な治療的なオプションの場合がある。状況で最高のもの（in the best of
）のヒドロキノンは、高色素沈着の部分的な緩和だけに導かれる。いくらかの薬用化粧品
（cosmeceutical）調剤物は、コウジ酸、アルブチン、およびビタミンCのような他の活性
原材料（ingredients）を含んでいるが、したがって有効性は皮膚の適した層に対し活性
なものを配送するために化学的な不安定性または不能（inability）に関する問題により
、大いに失望させるものであった。より一層高い濃度が利用されているが、患者は皮膚刺
激（irritation）により処置を中止することが多い。これは、活性原材料で、レチン（re
tin）Aおよびヒドロキノンのようなものからの刺激を減らすために、局所ステロイドの追
加を導いた。肝斑および他の高色素沈着の障害が、処置するのに数ヶ月から数年かかるの
で、活性原材料の刺激効果（irritant effect）に抵抗する（combat）ことを要求される
強さでの外見上の（on the face）局所ステロイドの使用は局所ステロイドによって誘導
される副作用を引き起こすことなく可能なものではない。媒体またはより一層大きな可能
性の局所ステロイドが連続的に数週間よりも長い間に顔に用いられるとき、皮膚萎縮、脆
弱性およびテレンジエクタシア（telengiectasia）が普通に起こる。この副作用プロファ
イルは、特に、顔のようなエリアにおいて、受け入れ難い。

赤外線レーザーが、いくらか首尾よく使われた。それらは一般に、真皮のようなより一
層深い皮膚エリアに色素（顔料）を局所化させる状況にとってより一層効果的である。効
果的に表皮を処置するために、切除処置が通常使用される。この療法は、受動体（患者）
のための有意な休止期間と関係し、二次的バム（second-degree bum）または患者が感染
を受け易いままにされる侵食の創作（creation）を含む。加えて、レーザー治療は、多く
の患者に金銭的余裕がない（cannot afford）高価な処置オプションである。極端なケー
スでは、漂白剤が不成功であったとき、皮膚の色素脱失が選ばれた。膨大な病態は、異常
に（aberrantly）皮膚中への色素の堆積に導かれることがある。例えば、ホルモンのアン
バランスが顔のおよび四肢の（extremity）高色素沈着を引き起こすことがあることはよ
く知られており、妊娠の間、またはその後に女性において最も多く観察される。多くの場
合の時、この高色素沈着は、美学的に外観を損なうこと（aesthetically disfiguring）
になり、自尊心、および社会的状況における困惑に関する問題を導く。肝斑は、多くの場
合の時、Fitzpatrick（フィッツパトリック）タイプIV〜VIスキンを有する個体に影響を
及ぼす。これは、世界的な人口のかなりの部分を構成する。

フィッツパトリックタイプIVからVIスキンまでを有する大多数の個体は、アジアの家系
である。

フィッツパトリックスキンタイプのスケールによって、日光暴露に対する外観および皮
膚反応のテストに基づいて、個体は一般に、以下の通りに分類される。すなわち
タイプI：非常に美しい（Very fair）肌の色合い、ブロンドまたは赤毛、
タイプII：明るい肌の色合い、日焼けするが、通常の日焼け。
タイプIII：白色からオリーブ色までの肌の色合い、時々やけど。
タイプIV：中間のブラウン色の肌の色合い、珍しく（rarely）やけど。
タイプV：濃いブラウン色の肌の色合い、非常に珍しくやけど。
タイプVI：黒色の肌の色合い、非常に濃い目、日焼け抵抗性。

肝斑に加えて、中でも、顔のような美学的に敏感な場所の高色素沈着は、にきびまたは
酒さのような障害により、炎症の後に起こりうる。これらの状況は、有意な心理的不快に
も導かれる。米国では、130億ドルが毎年薬用化粧品に使われる。米国市場でのヒドロキ
ノンの予想された禁止と共に、目下市場に出ている他の非薬理学的薬剤の継続した安定性
（ビタミンC）または配送（アルブチン、コウジ酸、その他）の問題と併せて、オリゴペ
プチドインヒビターは、この満たされてないニーズに対する解法を提供するかもしれない
。

特定の特許および出版物
Scot（スコット）ら、“Production of cyclic peptides and proteins in vivo（サイ
クリックペプチドおよびタンパク質の生体内生産）”Proc. Nat. Acad. Sci. Vol. 96, I
ssue 24, 13638-13643, 11月23日, 1999年は、細菌におけるサイクリックの、8-アミノ酸
のチロシナーゼインヒビターシュードステリン（pseudostellarin）Fの生産を明らかにす
る。

Verma（ヴェルマ）ら、“Modulation of agonist binding to human dopamine recepto
r subtypes by L-prolyl-L-leucyl-glycinamide and a peptidomimetic analog（L-プロ
リル-L-ロイシル-グリシンアミドおよびペプチド模倣類似物によるヒトドーパミン受容体
サブタイプに結合性の作用薬の調節）”J Pharmacol Exp Ther. 2005 Dec;315(3):1228-3
6. Epub 2005年8月26日は、ヒトのドーパミン（DA）受容体サブタイプと結合性の調節性
作用薬において、視床下部のトリペプチドL-プロリル-L-ロイシル-グリシンアミド（PLG
）およびその配座固定されたアナログの3(R)-[(2(S)-ピロリジニルカルボニル)アミノ]-2
-オキソ-1-ピロリジンアセトアミド（PAOPA）の役割を明らかにする。

Yamada（ヤマダ）らへの米国特許US 6,165,982号、2000年12月26日発行、“Use of ser
icin as antioxidants and tyrosinase inhibitors（酸化防止剤およびチロシナーゼイン
ヒビターとしてのセリシンの使用）”と題するものは、抗酸化剤または活性原材料として
酸化防止能力を発揮するのに十分な量のセリシンを含むチロシナーゼ活性のためのインヒ
ビター（抑制剤）として有用な組成物を明らかにする。セリシンは、絹の、高分子量の、
自然な、可溶性糖タンパク質構成要素である。セリシンは皮膚および髪のケラチン（角質
）と結合し、保護フィルム（薄膜）を形成する。

Takeuchi（タケウチ）らへのUS 5,126,327、1992年6月30日発行、“Melanocyte-stimul
ating hormone inhibitor and external preparation containing the same（メラニン細
胞刺激ホルモンインヒビターおよびそれを含有する外用調製物）”と題されたものは、一
定のアミノ酸配列、1〜12個の炭素原子をもつアシル基、1〜12個の炭素原子を持つアミノ
酸残基、またはそのアシル化された誘導体、2〜40のアミノ酸残基をもつペプチド残基ま
たはそのアシル化された誘導体をもつメラニン細胞刺激ホルモンインヒビターを明らかに
する。

Arquette（アークエット）へのUS 7,025,957、2006年4月11日発行、“Composition and
method to whiten skin（皮膚を白くする組成および方法）”と題するものは、皮膚を白
くする薬剤として効果的な組成を明らかにする。組成には、シモンドシン（Simmondsin）
が含まれ、それはホホバ（ホホバ油）ミール（Simmondsia chinensis）から抽出される配
糖体である。一定の具体例において、組成物はホホバ（Simmondsia chinensis）の抽出物
を含む。組成物は皮膚を白くするために効果的な量において調剤物を個体に局所適用する
ことによって投与され、そこで組成物はホホバ抽出物を含む。

Fotinos（フォティノス）らへのUS 7,083,781、2006年8月1日発行、“Film forming po
lymers, methods of use, and devices and applications thereof（フィルム形成ポリマ
ー、使用の方法、および装置ならびにその応用）”と題するものは、対象体の皮膚に活性
薬剤を配送するための、ポリマー、活性原材料および溶媒を含む組成物および方法を明ら
かにし、組成物は、ローリング、拡散、エアゾールによってまたは液滴において、または
皮膚と接触するフィルムを形成することが可能である。この技術において既知の化粧用活
性薬剤は、皮膚の外観を改善するために、フィルム形成組成物において組み込まれうる。
この条件とバランスをとるために典型的に用いられる抗色素沈着過剰（Anti-hyperpigmen
tation）薬剤は、チロシナーゼインヒビターで、ペプチド混合物および植物抽出物（エキ
ス）、発酵製品のようなもの、および抗酸化剤で、ヒドロキノン、コウジ酸、アスコルビ
ン酸誘導体、ヒドロキノンの合成または自然な誘導体およびヒドロキノン前駆体を含める
ことができる。その発明の好ましい具体例では、抗色素沈着過剰薬剤は、Pentharm Ltd.
（ペンターム社）のMelawhite（メラホワイト）、Basel（バーゼル）、Switzerland（ス
イス国）；Coletica（コレチカ社）のBiowhiteTM（バイオホワイト）TM（商品名）、Fran
ce（仏国）；Sederma（セデルマ社）のEtioline（エチオライン）、France；Kelesima（
ケルシマ社）のArbossa（アーブロッサ）、Italy（イタリア国）；Gattefosse（ガテフォ
ッセ社）のGatuline whitening（ガツラインホワイトニング）、France；Exsymol（エク
シモル社）のAscorbocilan（アスコルボシラン）C、Monaco（モナコ）；およびAlps Phar
m.（アルプスファーマ社）のKojic acid（コウジ酸）、日本国である。

Lee（リー）へのUS 7,125,572、2006年10月24日発行、“Tyrosinase inhibitor extrac
t（チロシナーゼインヒビター抽出物）”と題するものは、レモンの皮からのチロシナー
ゼインヒビター抽出物を明らかにする。チロシナーゼインヒビターは、有利な皮膚ホワイ
トニング効果を提供する。その発明によると、その発明のチロシナーゼインヒビター抽出
物は、280nmで主要な吸光度をもつ。このことは、チロシナーゼインヒビター抽出物がタ
ンパク質またはペプチドを含むことを示す。タンパク質またはペプチドがチロシナーゼを
抑制するための主要な活性成分であると考えられる。その抽出物の他の成分は、追加的な
効果で、抗加齢（アンチエージング）および抗酸化のようなものを提供することができる
。チロシナーゼインヒビター抽出物は、ローション、エマルジョン、クリーム、軟膏、ス
ティック、溶液、パック、およびゲルを含む、種々の形態であるように調製することがで
きる。チロシナーゼインヒビター抽出物は通常、化粧品で、油性物質、湿潤剤、増粘剤、
防腐剤、乳化剤、医学的原材料、香水、乳化スタビライザーなどのようなものにおいて用
いられる任意の原材料と混ぜられうる。

Ramaiah（ラマイハ）へのUS 6,143,723は以下のYR配列に従うペプチドが皮膚色素沈着
を、それを減らすよりはむしろ、高めることを、そこに例証するように教示する。

種々の他の特許および出版物は、無関係なペプチドを明らかにする。例は、US 5,789,3
82を参照し、それはブロッキングとしてのEGF受容体のためのブロッキングペプチドのTyr
ArgSerArgLysTyrSerSerTrpTyr を明らかにする。

発明の概略
以下の概略は本発明のすべての特長および局面を含むことを目的とせず、それは、本発
明がこの概要において議論するすべての特長および局面を含まなければならないことを意
味しない。

本発明は、実証する一定のペプチド配列に関し、すなわち
>1配列番号1
KFEKKFEK（KF ペプチド）
>2配列番号2
YRSRKYSSWY（YRペプチド）
である。

本発明はさらに本ペプチドを含むキットおよび組成、そしてチロシナーゼの発現に関与
する状況の処置の方法に指向し、そこにおいて、本ペプチドはメラニン形成細胞活性に関
与する皮膚における状況の処置のために局所に投与される。PLGペプチドが自然なアミノ
およびカルボキシの末端（termini）を含むことに注目される。他の調剤物は、体の他の
領域におけるチロシナーゼ活性を処置するのに有用であり、そして内部に投与されうる。

このように、一定の局面では、本発明は、アミノ酸配列KFEKKFEKと少なくとも63%の同
一性をもち、および約10mM未満のチロシナーゼのIC 50をもつ精製されたペプチドに指向
する。ペプチドは、効果において、削除を含め、最高3つの位置において置換しうる。ガ
イダンス（指針）は、これらの変形を行い、ならびにそれらを抑制性能力について試験す
るために与えられる。若干の場合において、ペプチドは約5mM未満のIC 50、またはそれよ
りさらに低いものをもつ。若干の場合において、RまたはFで残基を置換することは、本発
明の範囲内であり、そこではこれらの残基がチロシナーゼと結合するペプチドを増やすの
に役立つ。そのようにして、RまたはFで置換する残基はFでなく、それがそうなら、それ
はRで置換されるのが好ましい。同様に、YRSRKYSSWYの場合、置換される残基は好ましく
はRでない。1および3の間で残基はV、A、L、MまたはIで置換しえ、そこでは、これらの残
基が抑制性機能を増加するのに役立つ。加えて、あるものは、KをLまたはRで、FをWまた
はYで、EをDにより置換することができ、これらの残基が類似していることが知られてい
るからである。また、2つの隣接した荷電されたアミノ酸をもつことは、若干の具体例に
おいても有利である。一定の局面において、本発明は、アミノ酸のいくつか、またはすべ
てのためにD-アミノ酸の使用を含む。ペプチドは、調節基（modulating group）に、次に
規定するように、パルミチン酸またはエステルとしてリンク（連結）しうる。国際出願の
請求項1のペプチドは2つの隣接する荷電アミノ酸をもつ。

一定の局面では、本発明は、皮膚ホワイトニングにおいて有用な局所調剤物を包含する
。調剤物は、皮膚科学的に許容可能な原材料から作られる。調剤物は標準的なキャリヤー
（担体）物質を、ならびに一定の場合において、第2の処理薬剤および、YRSRKYSSWYおよ
びKFEKKFEKからなる群より選ばれる配列と本質的に同一なペプチドを含みうる。これらの
ペプチドは上述のように変形しうる。一定の具体例において、調製物は、可能性のあるオ
ーバーザカウンター（店頭で）の使用のために、または処方せんの使用のために適合され
（adapted）うる。オーバーザカウンターの使用について、あるものは、ある調剤物を用
いることができ、そこでは、ペプチドが約2倍のIC 50濃度よりも少ない濃度にある。製薬
上の使用のために、あるものはペプチドが2から100倍までのIC 50濃度の濃度でありうる
ものでよい。

本ペプチドはHQに対して優れた一定の局面にあり、そしてHQを実質含まないように調剤
しうる。一定の調剤において、異なるペプチドを組み合わせることができ、異なるシーク
エンス、異なる付着基、およびその他と共にである。キャリヤーは、以下の、すなわち、
水和性（hydrating）製剤、抗酸化調剤物、およびフリーラジカルスカベンジャー（遊離
基捕捉剤）から選ばれる物質を含んでよい。

一定の調剤物において、ペプチドはリポソームにおいて調剤されることによって改善さ
れた皮膚吸収（skin uptake）をもつ。

一定の局面では、本発明は皮膚処置の方法を包含し、皮膚のライトニング（ホワイトニ
ング）に関与する。この局面には、皮膚に、次の、すなわち、(a) KFEKKFEKまたは(b) YR
SRKYSSWYの1種と本質同一のペプチドを投与することを含む皮膚の処置のための方法が含
まれ、そこでは、ペプチドの前記投与は皮膚色素沈着を明るくするのに十分にチロシナー
ゼを抑制する。投与することには、上記に参照するように、局所的調製物を投与すること
を含むことができ、そしてさらに二次的処置の生成物を含みうる。

処置の本方法はまた、マイクロ皮膚切除（microdermabrasion）プロセスからの更なる
援助を用いる皮膚ホワイトニングを遂行することを含む。投与することは、マイクロ皮膚
切除プロセスと同時であってよい。投与することは放射線プロセスと併せられる。そのよ
うなプロセスは、皮膚透過性を増やすのに用いうる。さらに、投与することは、剥離装置
（abrading device）（、）マイクロニードル（極微針）、エレクトロポレーション（電
気穿孔）装置、またはイオントフォレーシス装置（iontophoretic device）によって遂行
される物理的処置と併わせられうる。

一定の局面では、本発明には、皮膚ホワイトニング手順を遂行するためのキットが包含
され、それは、約10mM未満のチロシナーゼのIC 50をもつ精製されたペプチド、および次
の、すなわち、どちらかのYRペプチドまたはKFのペプチドの配列をもつもの、およびそれ
と少なくとも63%同一である配列をもつペプチド；皮膚科学的に許容可能なキャリヤー；
二次的な処置生成物；および使用の指示書からなる群より選ばれるもの含む。キットは、
消費者または医者向けでありえ、そしてペプチドおよびキャリヤーのプレコンビネーショ
ン（予備的組合せ）で、調剤物を適用する準備がされるようなものが含まれ、またはそれ
は、ペプチドとキャリヤーとの混合が必要であってよい。

ペプチドKF、およびコントロールペプチドKFEFKFEF、（配列番号4）のインビトロ（試験管内）の効果を示すグラフであり、前者のペプチドだけが抑制性の活性をもつことが示される。 YRペプチド、コントロール、VLLK（配列番号3）およびポリ-L乳酸の活性のグラフであり、YRペプチドだけがチロシナーゼ上の抑制活性をもつことが示される。 コントロール、ヒドロキノン（HQ）およびYRペプチド、指定された（designated）“P4”の繁殖速度を示す棒グラフである。濃度は各ペプチドの隣に与える。YRペプチドがメラニン形成細胞の細胞の繁殖を抑制しないことが見られる。 HQおよびYRペプチド、指定された“P4”の細胞とのインキュベーション後のメラニン含量を比較する棒グラフである。濃度は各ペプチドの隣に与える。YRペプチドがヒトメラニン形成細胞においてメラニン合成を抑制しないことが見られる。 HQおよびYRペプチド、指定された“P4”とのインキュベーション後のチロシナーゼ活性を示す棒グラフである。濃度は各ペプチドの隣に与える。YRペプチドによるチロシナーゼ活性の抑制が、HQのものと比較しうる。

好適例の詳細な説明
概説
約6から12までのアミノ酸の間の短いペプチドが、明らかにされ、およびチロシナーゼ
に対する抑制性活性を持つことが示される。短いシークエンスのペプチドは自然に発生す
るアミノ酸を用いて一定の具体例において合成的に設計され、そしてしたがって、生物学
的に安全である。それらは、多数の機構を通してメラニン形成細胞に配送することができ
、制限されないが、リポソームが含まれ、適した皮膚層への接近が許される。これらのペ
プチドは酸化の問題で悩まされず、最も普通に用いられる原材料のビタミンCのようでな
い。これらのペプチドは肝がんを引き起こさず、ヒドロキノンのようでなく、そしてそれ
らは自然に発生するアミノ酸から導き出されるので、チロシナーゼの不活化により細胞内
にて簡単に分解する。それらは、メラニン合成を抑制することによって皮膚のライトニン
グまたはホワイトニングを引き起こす。

定義
他に定められない限り、本明細書で用いるすべての技術的な、および科学的な用語は、
この発明が属する技術において通常の知識を有する者によって普通に理解されるような同
じ意味をもつ。本明細書に記載するものと似た、または等価な任意の方法および物質も本
発明の実践または試験において用いることができるが、好適な方法および物質が記載され
る。一般に、関連して利用される命名法、および技術、細胞および分子生物学および化学
はよく知られるものであり、そしてこの技術において普通に用いられる。一定の実験的な
技術は、特に規定されないが、一般にこの技術においてよく知られた慣習的な方法によっ
て、そして種々の一般的な、および本明細書を通して引用し、そして議論されるより一層
多くの特定の参考文献において記載されているように実行される。明快さの目的のために
、以下の用語を、次に規定する。

用語“チロシナーゼ”は、本明細書においてモノフェノールモノオキシゲナーゼ（EC 1
.14.18.1；CAS番号：9002-10-2）に言及するために用い、酵素はフェノール類（チロシン
のようなもの）の酸化に触媒作用を及ぼす。それは、植物および酸化によってチロシンか
らメラニンおよび他の色素の生産に触媒作用を及ぼす動物性組織において存在する銅含有
酵素である。すべてのチロシナーゼは、それらの活性部位内で共通して二核性タイプ3銅
センター（中心）をもつ。ここで、2つの銅原子は各々が3つのヒスチジン残基に合わせら
れる（coordinated with）。Matoba（マトバ）ら、“Crystallographic evidence that t
he dinuclear copper center of tyrosinase is flexible during catalysis（チロシナ
ーゼの複核銅中心が触媒作用の間に柔軟であるという結晶学的な証拠）”、J Biol Chem.
2006年3月31日; 281 (13)：8981-90。Epub 2006年1月25日は、チロシナーゼ触媒中心の3
次元モデルを明らかにする。

用語“ペプチド”は、本明細書において、その慣習的な意味内容、すなわち、モノマー
がアミノ酸であり、そしてアミド結合を通して互いに結び付けられるポリマー（重合体）
であり、代わりにポリペプチドとして称される。アミノ酸がαアミノ酸であるとき、L-光
学異性体またはD-光学異性体のいずれも用いうる。その上、例えば、自然でないアミノ酸
、β-アラニン、フェニルグリシンおよびホモアルギニンはまた、含まれることが意図さ
れる。本ペプチドは、2またはそれよりも長いアミノ酸モノマー長であり、そして最高で2
0個のアミノ酸モノマー長さでありうる。アミノ酸の標準的省略形が用いられる（以下に
記載するようなものである）。

用語“キャリヤー”は、普通に、治療上のチロシナーゼインヒビターの安定性、無菌性
およびデリバビリティー（deliverability、配送可能性）を高めるのに用いられる製薬上
の化合物の調剤物上に用いられる化合物に言及する。ペプチドデリバリーシステム（配送
系）が溶液または懸濁物として調剤されるとき、デリバリーシステムは許容可能なキャリ
ヤー、好ましくは水性キャリヤーにおいてである。多様な水性キャリヤー、例は、水、緩
衝化された水、0.8%のサリン（塩水）、0.3%のグリシン、ヒアルロン酸などが用いられう
る。これらの組成物は慣習的な、よく知られた滅菌技術によって殺菌されることができ、
または滅菌ろ過されうる。結果として生じる水性溶液はそのまま使用のために包装される
ことができ、または凍結乾燥され、凍結乾燥された調製物は投与前に滅菌溶液と組合わさ
れる。それらの組成物は、およその生理学的条件に必要な製薬上許容可能な補助的な物質
で、pH調整剤および緩衝化薬剤、浸透圧調整薬剤、湿潤剤、などのようなもので、例えば
、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、
ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、その他のようなものを含
みうる。

用語“局所的”または“局所的に”は。本明細書において、スポット（点、場所）に言
及するようなその慣習的な意味内容において用い、それは物体の任意の部分において、ま
たはその上にあることができ、制限されないが、表皮、他の任意の真皮、または他の任意
の体組織をも含む。局所的投与または適用は、ペプチドと組織で、皮膚または膜のような
ものとの直接的な接触を意味し、それにはメラニン生成細胞が含まれる。本発明の局所的
薬剤を皮膚または粘膜に適用する方法には、“非定形（non-finite）”または液体または
半液体のキャリヤーで、ゲル、ローション、エマルジョン、クリーム、プラスター（硬膏
剤）または軟膏、または“有限の（finite）”キャリヤー、非拡散（non-spreading）物
質で、それらの形態が保持され、例は、パッチ、ドレッシングおよびバンデージ（包帯）
が含まれる。活性ペプチドの有限および非定形の形態のための溶媒は、非毒性の、製薬上
許容可能な物質、好ましくは液体であり、それはシステムの粘着特性または可溶性にあま
り否定的な影響を及ぼさないものである。溶媒は、好ましくは、多水酸基（polyhydric）
アルコールまたは多水酸基アルコールの組合せである。用語の多水酸基アルコールは任意
の有機多価（polyalcohol）アルコールを意味し、およびジプロピレングリコール、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、ブチレングリコール、ヘキシ
レングリコール、ポリオキシエチレン、ポリプロピレングリコール、ソルビトール、エチ
レングリコール、などが含まれる。他の適切な溶媒には、脂肪酸で、オレイン酸、リノー
ル酸、カプリン酸、などのようなもの、ならびに脂肪エステルまたはアルコールが含まれ
る。さらに適切な溶媒には、ペプチドに基づく組成物を溶解するために真皮または経皮的
組成物において普通に使われる他の非毒性の、不揮発性の溶媒が含まれる。

2つのポリペプチド配列の前後関係において、用語“シークエンス同一性”は2つのシー
クエンスにおける残基に言及し、最大の一致のために整列するとき、それは同じである。
比較のためのシークエンスの最適アラインメント（配列決定）は、例は、Smith（スミス
）およびWaterman（ウォーターマン）Adv. Appl. Math. 2: 482 (1981)の局所的ホモロジ
ーアルゴリズムによって、Needleman（ニードルマン）およびWunsch（ブンシュ）J. Mol.
Biol. 48:443 (1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズムによって、Pearson（ピ
アソン）およびLipman（リップマン）Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85: 2444 (1988
)の類似法のための検索によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された履行［G
AP, BESTFIT, FASTA, およびTFASTA、Wisconsin Genetics Software Package（ウィスコ
ンシン・ジェネティック・ソフトウェア・パッケージ）, Genetics Computer Group（ジ
ェネティック・コンピューター・グループ）, 575 Science Dr.（サイエンス・ドクター
）, Madison（マディソン）, Wis.（ウィスコンシン州）］によって、または、点検（ins
pection）によって行うことができる。シークエンス同一性は、参照配列と同一の残基に
基づいて算出されうる。例えば、KFEKKFEKについて、8つの残基をもち、あるものは、5つ
の同じ残基をもち、5/8まらは（すなわち）62.5（63%）のシークエンス同一性をもちうる
。ペプチドの制限された長さのため、変化が本発明の教示によってなされるとき、少なく
とも63%の同一性は“基本的に同一”と考えられる。あるものは、6/8（75%）または7/8（
88%）のシークエンス同一性をもちうる。さらなる例として、残基が排除されることがあ
り、E（グルタミン酸塩）のように、V、L、MまたはＩに変えられ、そしてあるものは7/8
または88%の同一性をもつことになり、そしてもつ。YRペプチドの方法または調剤の場合
、あるものは3/10残基を、70%同一性のために修飾しうる。

本明細書で用いられるような用語“実質同一”は、ポリペプチド配列の特徴を表示し、
そこでは、完全なペプチド長の比較ウインドウにわたり、参照配列と比較して、ポリペプ
チドが少なくとも60パーセントのシークエンス同一性、好ましくは少なくとも85パーセン
トの同一性、およびしばしば90から95パーセントまでのシークエンス同一性、より一層通
常、少なくとも99パーセントのシークエンス同一性をもつシークエンスを含む。実質同一
はさらに、アミノ酸の保存的な置換を包含する。用語“本質的に同一”は、本発明での8
または10個の残基ペプチドの前後関係において、本発明の教示、特に置換を作る際のガイ
ダンスの提供、および上記規定により、3つのアミノ酸置換が許されることを意味する。

保存的アミノ酸置換は、それらの側鎖で関係があるアミノ酸のファミリー内で起こるも
のである。遺伝的にコード化されたアミノ酸は一般に、数ファミリーに分けられ、すなわ
ち、(1)酸性=アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩；(2)塩基性=リジン、アルギニン、ヒス
チジン；(3)非極性=アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルア
ラニン、メチオニン、トリプトファン；および(4)非荷電極性=グリシン、アスパラギン、
グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。より一層好ましいファ
ミリーは次のもの、すなわち、セリンおよびトレオニンは、脂肪族化合物ヒドロキシファ
ミリーであり；アスパラギンおよびグルタミンは、アミド含有ファミリーであり；アラニ
ン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンは、脂肪族のファミリーであり；フェニルアラ
ニン、トリプトファン、およびチロシンは、芳香族ファミリーであり、およびシステイン
およびメチオニンは、イオウ含有側鎖ファミリーとしてである。例えば、イソロイシンま
たはバリンによるロイシンの、グルタミン酸塩によるアスパラギン酸塩の、セリンによる
トレオニンの分離された置き換えが予測されることは合理的であり、または構造的に関連
したアミノ酸によるアミノ酸の類似した置き換えが、特に置き換えがフレームワーク部位
内のアミノ酸を包含しない場合、結果として生じる分子の結合または特性上に大きな影響
をもたない。好適な保存的アミノ酸置換基は、次の、すなわち、バリン-ロイシン-イソロ
イシン、フェニルアラニン-チロシン、リジン-アルギニン、アラニン-バリン、グルタミ
ン酸-アスパラギン酸、システイン-メチオニン、およびアスパラギン-グルタミンである
。

アミノ酸置換を作ることにおける更なるガイダンスとして、あるものは所定の残基をR
、またはＦに、結合特性を増すために変えることによって置換され、またはそれを、抑制
特性を増すためにV、A、L、MまたはＩに変えることができる。あるものは、ペプチドの1
部分を、チロシナーゼ酵素への結合に対し、および別の1部分を抑制の方に指向するかも
しれない。一般に、FまたはRを変えること、およびKまたはEを、ならびにYまたはWを変え
ることがないのが好ましい。Yへの変化は、全体的な配列の前後関係で考慮するべきであ
り、それはtがチロシナーゼのための自然な基質（サブストレート）である残基だからで
ある。若干の変化が実際にチロシナーゼ活性の増加を招きうる点に注目すべきである。更
なるガイダンスについて、Schurink（シューリンク）ら、“Novel peptides with tyrosi
nase inhibitory activity（チロシナーゼ阻害活性を有する新しいペプチド）”、Peptid
es 28：485:495（2007年1月）参照。

本明細書において用いるような用語“ケラチン組織”は、哺乳類（例は、ヒト、イヌ、
ネコ、その他）の最も外側の保護カバーとして配置されるケラチン含有層に言及し、それ
には、制限されないが、皮膚、粘膜、唇、髪、足指爪、指の爪、クチクラ（角質）、蹄、
その他が含まれる。

本明細書において用いるように用語“局所適用”は、ケラチン組織の表面上に本発明の
組成物を適用し、または拡げることを意味する。

本明細書において用いるように用語“皮膚科学的に許容可能な”は、そのように記載さ
れた組成物またはその成分が哺乳類ケラチン組織と接触して用いるのに適切であり、過度
な毒性、不適合性、不安定性、アレルギー反応、などを伴わないことを意味する。

本明細書において用いるような用語“注入可能な調剤物”は、ヒトおよび/または動物
中への注入（注射）のために適切な調剤物を意味し、そこでは、注入は皮内、皮下、筋肉
内または静脈内である。これらの調剤物は無菌であり、発熱物質を含まず、そして生理的
に許容可能なpHにある。

本明細書において用いるような用語“放射線プロセス”は、対象体の皮膚または内部組
織に適用されるような処置プロセスを意味し、そして美容上、または治療上の目的のため
に用いられる。この用語には、電磁放射装置の使用が含まれ、レーザー、LEDs、高周波、
その他のようなものである。この用語にはまた、超音波装置の使用が含まれる。これらの
装置のすべては、本薬剤を用いる皮膚ホワイトニングが遂行されうるプロセスにおいて用
いられる。これらのプロセスの若干は角質層透過性を変動させ、およびこのペプチドを投
与するプロセスにおいて有利に有用である。

この技術において理解されるように、用語“IC50”は、インビトロ（試験管内）アッセ
イにおいて行われるように、チロシナーゼインヒビターペプチドの濃度がチロシナーゼ活
性の50%抑制を生じさせることが要求される手段を意味し；一定の濃度“未満”の値には
、IC 50値がより一層低い濃度にて含まれる。用語約には、プラスまたはマイナス10%の変
動（バリエーション）が包含されえ、そしてバリエーションが異なる試薬、実験的な状況
、その他から招かれる。精製されたチロシナーゼ製剤［例は、キノコ（マッシュルーム）
チロシナーゼ］を使用するIC50のインビトロでの決定は、臨床的用量を定めるのに有用で
ある。
一般的方法および物質

本発明での物質および一般的意味内容における方法は、ペプチドであり、それはチロシ
ナーゼ活性を抑制し、そしてヒトへの適用のために調剤されうる。それらは従って、メラ
ニンの過剰生産に関与する条件の処置または寛解（amelioration）に有用である。

ペプチド
本ペプチドには、細胞内でのチロシナーゼ活性を抑制する能力を保持するペプチド類似
物またはペプチド誘導体またはペプチド模倣薬（peptidomimetics）が含まれる。例えば
、本発明の抑制性ペプチド（inhibitory peptide）チロシナーゼモジュレーター（修飾因
子）は、その安定性、生物学的利用能、可溶性、その他を増すために修飾されうる。その
用語“ペプチド類似物”、“ペプチド誘導体”、および“ペプチド模倣薬”が本明細書に
おいて用いられ、あるペプチドの化学構造を模倣する分子が含まれ、そしてペプチドの機
能的特性を保持する。ペプチドの類似物を設計するアプローチは、この技術において知ら
れている。例えば、Farmer（ファーマー）、Drug Design［E. J. Ariens（アリエンス）
、ed.（編）］、Academic Press（アカデミック・プレス社）, New York（ニューヨーク
）, 1980年, vol. 10, pp.119-143; Ball.（ボール）J. B.およびAlewood（アレウッド）
, P. F. (1990) J. Mol. Recognition 3:55; Morgan（モーガン）, B. A.およびGainor（
ゲイナー）, J. A. (1989) Ann. Rep. Med. Chem. 24:243;およびFreidinger（フレイデ
ィンガー）, R. M. (1989) Trends Pharmacol. Sci. 10:270を参照。ペプチド類似物、誘
導体および模倣薬の例には、1種またはそれよりも多くのベンゾジアゼピン分子で置換さ
れたペプチド［例は、James（ジェームズ）、G. L.ら、(1993) Science 260：1937-1942
］、メチル化されたアミド連結を有するペプチドおよび“レトロ-インバーソ（inverso）
”ペプチド［Sisto（シスト）による米国特許第4,522,752号を参照］を有するペプチドが
含まれる。ペプチド類似物、ペプチド誘導体およびペプチド模倣薬は更に詳細に次に記載
する。

本発明のペプチドは、自然に発生するアミノ酸の任意のものから、または非自然に（no
n-naturally）発生するアミノ酸からの残基を包含しうる。これらの自然に発生するもの
、および非自然に発生するアミノ酸は、DまたはL配置であってよい。用語DおよびLは、そ
れらがこの技術において用いられることが知られているように本明細書において用いる。
本発明のペプチドには、単一のアミノ酸およびアミノ酸の短いスパン（例は、1-10）が含
まれる。加えて、本発明の修飾されたペプチドはまた、モノマーまたはダイマー（二量体
）を包含する。

上述のように、示された残基は自然に発生するLアミノ酸、またはその修飾でありえ、
つまり、化学的修飾、光学異性体、または修飾基（modifying group）への連結である。
特定の修飾が特定の修飾はペプチド内でなされ、それはチロシナーゼの活性を特異的に抑
制する本ペプチドの能力を維持しうると考えられ、それによってそれは色素合成のために
経路における最初の2つの工程に触媒作用を及ぼし：ジヒドロキシフェニルアラニン（DOP
A）へのアミノ酸チロシンのヒドロキシル化および/またはドーパキノンへのその後の酸化
である。

特定の修飾が、ペプチドに若干の追加的な望ましい特性を与えるために、特定の配列に
おいてなされうることも考えられる。一定のアミノ酸は、ペプチド活性の相当な損失なし
に、タンパク質構造における他のアミノ酸のために置換されうる。それが、そのペプチド
の生物学的な機能的活性を規定するペプチドの相互作用能力および性質であるので、一定
のアミノ酸配列の置換は短いペプチド配列においてさえ作成することができ、そしてそれ
でも似た特性を有するペプチドが得られる。したがって、本発明者によって、種々の変化
が生物学的有用性または活性の相当な損失なしでこのチロシナーゼインヒビターの配列に
おいてなされえ、そしておそらく望ましい活性を高めうると考えられる。

例えば、チロシナーゼ抑制性特性を有するペプチド構築物を設計する際に、置換が用い
られ、それは分子の１種またはそれよりも多くの特性を調節する。そのような変形は典型
的に、ペプチド内で１種またはそれよりも多くの部位にて別のもののために1種のアミノ
酸の交換が含まれる。例えば、一定のアミノ酸は、構造の相互作用の結合能力を高めるた
めに、ペプチド構造において他のアミノ酸のために置換されうる。あるものはまた、L-ア
ミノ酸のためにD-を置換し、また一定の側鎖の共有結合修飾を含みうる。

そのような変化をもたらす際に、アミノ酸のヒドロパシー（hydropathic）の指標（イ
ンデックス）が考慮されうる。

タンパク質上に相互作用の生物学的機能を与えることでのヒドロパシーのアミノ酸指標
の重要性は、一般に、この技術において理解される［Kyte（カイト）およびDoolittle（
ドゥーリトル）（1982）］。アミノ酸の相対的なヒドロパシーの特質が結果として生じる
タンパク質の二次構造に寄与することが認められ、それはタンパク質と、他の分子、例え
ば、酵素、基質、受容体、DNA、抗体、抗原、などとの相互作用を順番に定める。

各アミノ酸はそれらの疎水性および電荷特徴（KyteおよびDoolittle, 1982）に基づい
てヒドロパシー指標を割り当てられ、これらは、次の通りである、すなわち、イソロイシ
ン（+4.5）;バリン（+4.2）;ロイシン（+3.8）;フェニルアラニン（+2.8）;システイン/
シスチン（+2.5）;メチオニン（+1.9）;アラニン（+1.8）;グリシン（-0.4）;トレオニン
（-0.7）;セリン（-0.8）;トリプトファン（-0.9）;チロシン（-1.3）;プロリン（-1.6）
;ヒスチジン（-3.2）;グルタミン酸塩（-3.5）;グルタミン（-3.5）;アスパラギン酸塩（
-3.5）;アスパラギン（-3.5）;リジン（-3.9）;そして、アルギニン（-4.5）。

修飾において、目下実証されたシークエンス、一定のアミノ酸は、同様なヒドロパシー
指標またはスコア（得点）をもつ他のアミノ酸によって置換され、およびさらに似た生物
活性を有するタンパク質を招き、すなわち、まだ生物学的機能的に等しいタンパク質が得
られる。そのような変化をもたらす際に、ヒドロパシー指標が±2内であるアミノ酸の置
換が好適であり、±1内であるものは特に好まれ、そして±0.5内のものがさらに特に好ま
しい。

似たアミノ酸の置換はまた、親水性に基づいて有効にされることがある。U.S. Pat. No
. 4,554,101は、参照により本明細書に組み込み、タンパク質の最大の局所平均（greates
t local average）親水性が、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配され（governe
d）、タンパク質の生物学的特性と関連がある。U.S. Pat. No. 4,554,101に詳述されるよ
うに、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられる、すなわち、アルギニン(+3.0);
リジン(+3.0); アスパラギン酸塩(+3.0 ±1); グルタミン酸塩(+3.0 ±1); セリン(+0.3)
; アスパラギン (+0.2); グルタミン (+0.2); グリシン(0); トレオニン (-0.4); プロリ
ン (-0.5 ±1); アラニン (-0.5); ヒスチジン (-0.5); システイン (-1.0); メチオニン
(-1.3); バリン (-1.5); ロイシン (-1.8); イソロイシン (-1.8); チロシン (-2.3);
フェニルアラニン (-2.5); トリプトファン (-3.4)。

実証されたシークエンスの修飾において、アミノ酸置換はまた、一般的にアミノ酸側鎖
置換の相対的な類似性に基づいてよく、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズ
（大きさ）、などであるが、それでも、ペプチドの特定の特性をハイライトさせられるか
もしれない。考慮される前述の種々の特徴を取得する模範的な置換は、この技術における
熟練者によく知られ、そして次のものが含まれる、すなわち、アルギニンおよびリジンで
あり、それは、ヒスチジンと共に生理的pHで塩基性である;グルタミン酸塩およびアスパ
ラギン酸塩（それらは酸性である）;セリンおよびトレオニン;グルタミンおよびアスパラ
ギン;そして、バリン、ロイシンおよびイソロイシンである。

自然に生じるアミノ酸側鎖は下で例示され、そこでは、*は化合物のバックボーンに対
する付着点を表す、すなわち

アミノ基がアシル化、アルキル化またはアリール化されうるように、本発明のペプチド
のアミノ酸を修飾することができる。ベンジル基はハロゲン化、ニトロシル化（nitrosyl
ated）、アルキル化、スルホン化またはアシル化されうる。

種々の化学的に修飾されたアミノ酸は、このペプチドに組み込まれうる。これらの例に
は、次のものが含まれる、すなわち
アセチル化
N-アセチル-L-アラニン、N-アセチル-L-アルギニン;N-アセチル-L-アスパラギン;N-ア
セチル-L-アスパラギン酸; N-アセチル-L-システイン;N-アセチル-L-グルタミン;N-アセ
チル-L-グルタミン酸;N-アセチルグリシン;N-アセチル-L-ヒスチジン;N-アセチル-L-イソ
ロイシン;N-アセチル-L-ロイシン;N2-アセチル-L-リジン;N6-アセチル-L-リジン;N-アセ
チル-L-メチオニン;N-アセチル-L-フェニルアラニン;N-アセチル-L-プロリン;N-アセチル
-L-セリン;N-アセチル-L-トレオニン;N-アセチル-L-トリプトファン;N-アセチル-L-チロ
シン;N-アセチル-L-バリン。
アミド化
L-アラニンアミド、L-アルギニンアミド
ホルミル化
N-ホルミル-L-メチオニン
水酸化
4-ヒドロキシ-L-プロリン
脂質で修飾された（LIPID MODIFIED）
S-ファルネシル-L-システイン、S-ゲラニルゲラニル-L-システイン、N-パルミトイル-L
-システイン、S-パルミトイル-L-システイン、N-ミリストイル-グリシン、N6-ミリストイ
ル-L-リジン

メチル化
Nメチル-L-アラニン、N,N,N-トリメチル-L-アラニン、オメガ-N,オメガ-N-ジメチル-L-
アルギニン（、）L-ベータ-メチルチオアスパラギン酸、N5-メチル-L-グルタミン、L-グ
ルタミン酸5-メチルエステル（、）3'-メチル-L-ヒスチジン、N6-メチル-L-リジン、N6,N
6-ジメチル-L-リジン、N6,N6,N6-トリメチル-L-リジン、N-メチル-L-メチオニン、N-メチ
ル-L-フェニルアラニン
リン酸化
オメガ-N-ホスホ-L-アルギニン、Lアスパラギン酸4-無水リン酸、S-ホスホ-L-システイ
ン、1'-ホスホ-L-ヒスチジン、3'-ホスホ-L-ヒスチジン、O-ホスホ-L-セリン、O-ホスホ-
L-トレオニン、O4'-ホスホ-L-チロシン
その他
L-セレノシステイン、L-セレノメチオニン、L-3-オキソアラニン、2-ピロリドン-5-カ
ルボン酸、L-グルタミル5-グリセリルホスホリルエタノールアミン、2'-[3-カルボキサミ
ド-3-トリメチルアンモニオ]プロピル]-L-ヒスチジン（ジフタミド）、N6-ビオチニル-L-
リジン、N6-(4-アミノ-2-ヒドロキシブチル)-L-リジン（ハイプシン）、N6-レチナール-L
-リジン

このペプチドにおいて含まれるアミノ酸への他の修飾はこの技術において知られ、そし
て記述され、例えば、Kuhner（キューナー）らにおいて、US 6,858,581で、それは化学的
に修飾された抗微生物性ペプチドを記述する。

調節基（Modulating Group）
上記の式をもつ本発明のチロシナーゼモジュレータにおいて、改善された細胞取り込み
または有効性または調剤のための調節基は、直接または間接にチロシナーゼインヒビター
のペプチドに付着しうる。例えば、調節基は共有結合（covalent coupling）によってペ
プチドに直接付着することができ、または調節基は安定した非共有結合的な会合（non-co
valent association）によって間接的に付着することができる。本発明の1種の具体例に
おいて、調節基は、モジュレータのペプチドのアミノ末端に付着する。あるいはまた、本
発明の別の具体例において、調節基は、モジュレータのペプチドのカルボキシ末端に付着
される。

さらに別の具体例において、調節基は、化合物（例は、リジル残基（群）のエプシロン
アミノ基を通して、アスパラギン酸残基（群）またはグルタミン酸残基（群）のカルボキ
シル基を通して、チロシル残基（群）、セリン残基（群）またはトレオニン残基（群）の
ヒドロキシ基またはアミノ酸側鎖の上の他の適切な反応性基を通してのもの）のペプチド
の少なくとも1種のアミノ酸残基の側鎖に付着される。そのような調節基を調製すること
での更なるガイダンスは、US Pat. 5,854,204において見出される。

このペプチドは、コウジ酸（C6H6O4;5-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)-4-ピロン）
またはグネトール（gnetol）のような他のチロシナーゼインヒビターに共役されうる（Bi
osci Biotechnol Biochem. 2003年3月;67(3):663-5参照）。

細胞透過性を高めるための別の調節基はアミノ酸配列であり、それはメラニン形成細胞
によって認識され、そして取り上げられる。D'Ursi（ディウルシ）ら、“A Membrane-Per
meable Peptide Containing the Last 21 Residues of the GS Carboxyl Terminus Inhib
its GS-Coupled Receptor Signaling in Intact Cells: Correlations between Peptide
Structure and Biological Activity（GSカルボキシル末端の最後の21の残基を含む膜透
過性ペプチドは、無傷の細胞におけるGS結合受容体シグナリングを抑制する：ペプチド構
造および生物学的活性の間の相関関係）”、Mol Pharmacol 69：727-736、2006年は、共
有結合的に付着されたカーゴ（荷物）で、細胞膜を横切る内在性タンパク質のペプチドま
たはポリペプチド断片のようなものを輸送することができる細胞透過性ペプチドを明らか
にする。著者はそれらのペプチドを16-残基の断片のペネトラチンに接合させ、そしてそ
のような断片はここで明らかにされるペプチドに接合しうる。

このように、用語の調節基は、その活性に影響を及ぼすためにペプチドに連結される小
さな有機分子を意味し、それは、その安定性の取り込みまたはその他のものを改善するこ
とによって、または追加的なチロシナーゼ抑制を提供することによってのいずれでものも
のである。

好ましい具体例において、修飾基（群）（modifying group(s)）は、サイクリック（環
式）、複素環式、または多環式基を包含する。本明細書において用いる用語“環式基”は
、約3から10まで、好ましくは約4から8まで、そしてより一層好ましくは約5から7までの
炭素原子をもつ環式飽和の、または不飽和の（すなわち、芳香族の）基を包含することを
意図する。模範的な環式基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シク
ロヘキシル、およびシクロオクチルが含まれる。環式基は未置換または1種またはそれよ
りも多くのリング位置にて置換されてよい。このように、環式基は、例えば、次のもので
置換されてよい、すなわち、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキ
ニル、アリール、複素環、ヒドロキシル基、アミノ、ニトロ、チオール（、）アミン、イ
ミン、アミド、ホスホン酸塩、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテ
ル、チオエーテル、スルホニル、スルホン酸塩、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、
エステル、--CF₃、--CN、またはその他のもの。

別の好適例において、調節基は、皮膚を通して取り込みを増やすために、ペプチドに結
合される脂肪酸を含む。適切な脂肪酸（それは、対応するエステルを含むことを意味する
）には、パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、ラウリン酸イソプロピル、ミリスチ
ン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、パルミチン酸エチルヘキシル、乳酸ラウ
リルおよび乳酸セチルからなる群より選ばれる脂肪酸エステル皮膚軟化薬（緩和剤）が含
まれる。

用語“複素環式基”は、約3から10まで、好ましくは約4から8まで、およびより一層好
ましくは約5から7までの、炭素原子をもち、リング構造が約1から4までのヘテロ原子を含
む、環式の飽和した、または不飽和の（すなわち、芳香族の）基を含むことが意図される
。複素環式基には、ピロリジン、オキソラン、チオラン（thiolane）、イミダゾール、オ
キサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンが含まれる。複素環式リングは、1種
またはそれよりも多くの位置で置換され、そのような置換基として、例えば、ハロゲン、
アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、他の複素環、ヒドロキ
シル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホン酸塩、ホスフィン
、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエ
ーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−CF₃−CN、またはその他のものがある。複素
環はまた、他の環式基に対し架橋され、または融合することがある。

調剤物
本発明のペプチドは、皮膚科学的に許容可能なキャリヤーを含む局所的組成物中に調剤
されるのが好ましい。語句“皮膚科学的に許容可能なキャリヤー”は、本明細書で用いる
ように、キャリヤーが、ケラチン組織への局所適用に適切であり、そして良好な美的特性
をもち、本発明および他の任意の成分の活性と適合性であり、そして少しの厄介な安全ま
たは毒性懸念も引き起こさないことを意味する。キャリヤーの安全で、また有効な量は、
組成物の約50%から約99.99%まで、好ましくは約80%から約99.9%まで、より一層好ましく
は約90%から約98%まで、そしてさらにより一層好ましくは約90%から約95%までである。

キャリヤーは、多種多様な形態であることができる。例えば、エマルジョンキャリヤー
は、制限されないが、オイルインウォーター（水中油型）、ウォーターインオイル（油中
水型）、ウオーターインオイルインウォーター、およびオイルインウォーターインシリコ
ーンのエマルジョンが含まれ、ここで有用である。

好適なキャリヤーは、オイルインウォーターエマルジョン、ウォーターインオイルエマ
ルジョン、およびウォーターインシリコーンエマルジョンのようなエマルジョンを包含す
る。

本発明に従うエマルジョンは、一般に上記したような溶液および脂質または油を包含す
る。脂質および油は、動物、植物、または石油から誘導しえ、自然または合成的（すなわ
ち、人工のもの）であってよい。好適なエマルジョンはまた、湿潤剤、グリセリンのよう
なものを包含する。エマルジョンは好ましくは、キャリヤーの重さに基づいて、乳化剤の
およそ0.01%からおよそ10%まで、より一層好ましくは、およそ0.1%からおよそ5%を含有す
る。乳化剤は、非イオン性、陰イオン性または陽イオン性でありうる。たとえば、適切な
乳化剤は、米国特許第3,755,560号、1973年8月28日発行、Dickert（ディッカート）ら；
米国特許第4,421,769号、1983年12月20日発行、Dixon（ディクソン）ら；およびMcCutche
on's Detergents and Emulsifiers（マカッチャンの洗浄剤および乳化剤）、North Ameri
can Edition（北アメリカエディション）、317-324頁（1986年）に明らかにされる。

エマルジョンはまた、ケラチン組織への適用の際に、発泡を最小にするために、消泡剤
を含みうる。消泡剤には、高分子量シリコーンおよびそのような使用のためにこの技術に
おいてよく知られる他の物質が含まれる。

適切なエマルジョン類は、望ましい生産物の形態に従い、広範囲にわたる粘性をもちう
る。模範的な低粘性エマルジョン類は、それが好ましいが、およそ50センチストークまた
はそれよりも少ない、より好ましくはおよそ10センチストークまたはそれよりも少ない、
なお一層好ましくは、およそ5センチストークまたはそれよりも少ない粘性をもつ。

好ましいウォーターインシリコーンおよびオイルインウォーターのエマルジョン類は、
Bissett（ビセット）らによる米国PGPUB 20060188462、2006年8月24日に出版された“Ski
n care compositions containing a sugar amine（糖アミンを含有するスキンケア組成物
）” と題するものに詳細に記述される。

このペプチドは、リポソームにおいて調剤されうる。このペプチドは、Uster（ウスタ
ー）らへのUS 4,944,948で、“EGF/Liposome gel composition and method（EGF/リポソ
ームゲル組成物および方法）”と題されるものに記述されるような方法に従いリポソーム
において含有されることができ、そこでは、あるものが抑制性ペプチドをそこで用いられ
るEGFに取り換える。そこで記述されるように、負に荷電されたリポソームの高い粘性の
水性分散物はリポソームエントラップペプチドと共に調製されうる。ペプチド/リポソー
ム組成物は、典型的に、中性の、そして負に荷電するリン脂質（phopholipids）の等モル
の量およびペプチドを含有する低伝導率水性媒体におけるコレステロールおよびゲル様の
組成物を形成するために等電点がpH 5.5および8.5の間にある双性イオンの化合物を含む
脂質混合物を懸濁させることによって形成される。さらに模範的なガイダンスは、Mezei
（メゼイ）らへのUS 4,485,054で、“Method of encapsulating biologically active ma
terials in multilamellar lipid vesicles (MLV)（生物学的に活性な物質を多層脂質小
胞（MLV）においてカプセル化する方法）”と題するものにおいて見出されうる。

このペプチドチロシナーゼインヒビターはまた、経口か、または注入可能な調剤物とし
て調製されうる。注入可能な調剤物のpHは、特に注入の間の安全性および快適さに関し、
重要であり、そして特に調製物が液体の調剤物において供給される場合である。適切な調
剤物は、防腐剤（保存料）で、安息香酸ナトリウム、メチルパラベンおよびプロピルパラ
ベン、その他のようなものを含有することができ、および25℃で6.8-8.0のpHをもちうる
。このpHは緩衝剤（バッファ）によって維持されるのが好ましい。適切な緩衝剤には、ア
セテートバッファ、2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール、グリシンバッファ、リン酸塩バ
ッファ（トリス>ヒドロキシメチル-アミノメタン）（TRIS）バッファ、（2->N-モルホリ
ノ-エタンスルホン酸）、その他が含まれる。調剤物はまた典型的に、上記で規定するよ
うなキャリヤーを含むものである。注入可能な調剤物は、黒色腫および他のガンで、チロ
シナーゼを発現している細胞、例は、神経膠芽腫から導き出されるものの処置での使用に
適する。さらに詳細は、Bouchard（ブーシャード）らへのUS 5,773,291で、1998年6月30
日発行、“Non-melanotytic mammalian cell constitutively expressing biologically
active human tyrosinase and use thereof（構成的に生物学的に活性なヒトチロシナー
ゼを発現している非黒色性哺乳類細胞およびその使用）”と題されるものにおいて見出さ
れうる。これらの調剤物は、局所適用で、非ケラチン組織において見出されるメラニン形
成細胞のようなものによって近づき易くないメラニン形成細胞で有用である。メラニン形
成細胞は、表皮の基底層において、ならびに毛包、網膜、ぶどう膜（眼球血管膜）、およ
び軟髄膜（leptomeninges）において見出される。これらの細胞は、黒色腫の起源の部位
である。経口調剤物に関して、模範的な調剤物は、US 2007/0134279において見だされう
る。

このペプチドチロシナーゼインヒビターが、単独または互いに併用して用いうる。それ
らはまた、他の生物学的に活性な薬物または薬用化粧品と併用して使われうる。それらは
リポソームまたは他の経皮的配送機構で、破壊的な装置、その他のようなものによって配
送されうる。脂肪酸鎖は、角質層への脂質分割を介して非リポソームのものに基づく配送
を促すために、ペプチドのC末端またはN末端に共役されうる。他の致命的または自殺的薬
剤は、致命的または自殺的薬剤が高レベルで、黒色腫細胞のようなものでチロシナーゼを
発現するそれらの細胞へ配送されるようにするペプチドに共役されうる。

このペプチドの脂質ペプチド調剤物は、さらに、Dasseux（ダッセウ）へのUS 6,287,59
0で、2001年9月11日発行、“Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization（
同時凍結乾燥によるペプチド/脂質複合体形成）”と題されるもの；Yatvin（ヤテビン）
らへのUS 5,543,389で、1996年8月6日発行、“Covalent polar lipid-peptide conjugate
s for use in salves（膏薬で使用するための共有結合性の極性脂質-ペプチド共役物）”
と題されるもの、および他の参考文献に記述される。

本明細書に記載するオリゴペプチドの長さは、すなわち、20、または好ましくは12また
はそれよりも少ないアミノ酸で、チロシナーゼに対し生物学的抑制活性を有するものは、
以前には説明されていない。現在まで、チロシナーゼ酵素活性ビボを抑制するのに用いら
れるすべての薬剤は非ペプチドに基づくと信じられる。

このペプチドを調剤する際の更なるガイダンスは、Chaudhuri（チャウドゥーリー）ら
によるUS 20040086560で、2004年5月6日出版、“Skin-lightening（皮膚ライトニング）
”と題するものにおいて見出しうる。

このペプチドはさらに、皮膚状態を処置または寛解において有用な他の原材料と共に、
またはペプチドが研磨（abrasive）手法と併用して投与されるときに、刺激を減らす原材
料と共に調剤されうる。これらの付加的な原材料、ここでは“二次的処理薬剤（secondar
y treatment agent）”と名づけられ、その例には、1パーセントのビタミンK、および1パ
ーセントの水性塩基でのヒドロコルチゾン；にきび処置調剤物（例は、サリチル酸、マン
サク（ウィッチへーゼル）によって緩衝化されるアルコールベース、その他）；微細な境
界線（fine lines）/しわ処置調剤物（例は、ヒアルロン酸は水性ベースである）；水和
性調剤物（hydrating formulations）（例は、キンセンカ属、ビタミンA、D、またはE、
または任意の組合せ、鉱油ベースにおいて）；抗酸化剤調剤物/遊離基；スカベンジャー
（例は、鉱油ベースにおけるビタミンA、EおよびK）。他の化合物の単独またはそれとの
併用で採用されうる製品カテゴリーの他の例には、消毒剤、アストリンゼン、クレンザー
、細孔（ポア）うっ血除去剤、香油、植物性薬品、コラーゲン刺激物（collagen stimula
tors）、ハーブ、マイクロ乳化剤、酸素配送ビークル、タンパク質、血清、皮膚安定剤（
skin firming agents）、トナー（化粧水）、および局所麻酔剤が含まれる。用いられう
るような個々に挙げられた製品（補足的に指示される関連する利益と共に）は、以下のも
のを含み、すなわち、キュラソーアロエ（沈静する（calming））;アルファヒドロキシ酸
（剥離（ピール））;アルファリポ酸（抗酸化剤）;ベンゾイル（benzoil）および他の過
酸化物（にきび）;セラミド（水和（ハイドレーター））;銅（調色（トーニング））;銅
ペプチド（トーニング）;CoQ-10（補酵素Ｑ-10）および他の酵素（トーニング）;コーチ
ゾン（沈静）;グリコール酸（ピール）;ヒアルロン酸（コラーゲン刺激）;ハイドロ脂質
（ハイドレーター）;乳酸（ピール）;マグネシウムリン酸アスコルビル（ascorbic phosp
hate）（遊離基捕捉剤、コラーゲン刺激物、漂白）;ナイアシン（脈管拡張）;リン脂質（
加湿）;カリウム（トーニング、乾癬）、およびサリチル酸（にきび）である。上記の原
材料は、Karasiuk（カラシウク）へのUS PGPUB 20070088371、2007年4月19日出版、“Mic
rodermabrasion System and Method of Use（マイクロ皮膚剥離システムおよび使用の方
法）”と題されるものとの関連での使用について教示される。

さらに二次的な処置剤として、チロシナーゼ抑制剤ペプチドおよび本発明の調剤物は互
いに、随意に、そして処置、すなわち、皮膚ライトニングまたはホワイトニングの目的の
ために、他の皮膚ホワイトニング薬剤（skin whitening agent）と共に混合することもで
きる。たとえば、組み合わせることができる皮膚ホワイトニング製品には、制限されない
が、システイン、4-チオレゾルシン、3-アミノチロシン、5-ヒドロキシ-2-ヒドロキシメ
チル-γ-ピリドン、フォーメスヤポニカス（fomesjaponicus）およびガノダーマ（マンネ
ンタケ属、ganoderma）抽出物、コウジ酸、グラブリジン（glabridin）、カンゾウエキス
、グリチルリジン酸、catharanthus roseus（ニチニチソウ）抽出物、プロテオグリカン
、プロテイナーゼ抑制剤、オリゴペプチド、ベタイン、およびメチル4-ベンジルオキシ-2
-ヒドロキシベンゾアート、4-ベンジルオキシ-2-ヒドロキシ安息香酸、その他が含まれる
。このペプチドはまた、組み合わせて、または他のチロシナーゼ抑制剤、isoliquiritige
nin（イソリクイリチゲニン）カルコン（ILC）または4,4'-ジヒドロキシビフェニル（44'
-BP）のようなもの（Kim（キム）ら、“4,4'-Dihydroxybiphenyl as a new potent tyros
inase inhibitor （新しい有力なチロシナーゼ抑制剤としての4,4'-ジヒドロビフェニル
）”、Biol Pharm Bull.、2005年2月;28(2)：323-7）と組み合わせうる。

用量
用語“治療上効果的な量”は、メラニン形成細胞に対して適用されるチロシナーゼ抑制
性効果を生成するのに十分な薬物の量を意味することを意図し、メラニンの生産の減少ま
たは排除を招く。これらの量は、この技術において既知であり、またはこの技術において
既知の方法によって定められうるもので、および典型的にヒト成体あたりおよそ1から20,
000mgまでに、および好ましくは、およそ10から10,000mgまでにおよび、そして、もっと
も好ましくは、選ばれる調剤物により、および組織で、皮膜または粘膜のようなものが、
作用のサイトであるかどうかにより、適用につき抑制性薬剤のおよそ20から5,000mgまで
におよぶ。組成物における麻酔剤の量上の唯一の上限は、調製物が抑制性薬剤の結晶を実
質含まないことで、そして用いられる溶媒の量は、有限な組成物の特性がそれを適用の望
ましい部位に付着し過ぎるようにさせように望ましくない影響を及ぼすのに十分でないも
のである。このように、単一の原材料の抑制性ペプチドは、前述の範囲内で薬剤の治療上
効果的な量を含む。IC 50から推定されるとき、ペプチドのその濃度が実験的に適切であ
ると見出された。一般に、およそ2倍のIC 50より上の濃度が処方使用に適切であることが
示唆され、およそ2倍のIC 50より低いものは、店頭使用のために適する。しかし、皮膚の
取り込みの不足または他の損失の不足を考慮に入れるため、あるものは100倍のIC 50まで
にいくことがあった。2倍のIC 50にて、95%のチロシナーゼ抑制が達成されなければなら
ない。以下の表が典型的である、すなわち

濃度ならびに単位エリアあたり、すなわち正方形または立方センチメートルあたりの抑
制性ペプチドの量は、望ましい効果を達成するため、独立して変動させることができる。
減少した厚さの剤形において含まれる抑制性ペプチドベースのより一層高い濃度は、短期
間の適用を招く。増加した厚さの剤形に含まれる抑制性ペプチドベースの高濃度は（平方
または立方センチメートルあたりの抑制性ペプチドのより一層高いmg）、速やかな発現お
よび長期間での有力な抑制を招く。減少した厚さの剤形の抑制性ペプチドベースの低い濃
度は、より一層長い発現および短期間での軽い抑制を招く。増加した厚さの剤形に含まれ
る抑制性ペプチドの低い濃度は、より一層長い発現およびより一層長期間での軽い抑制を
もつ。上記の説明で示すように、合計組成物の非常に低いもの（およそ1%）から高いもの
（40%またはそれよりも多く）までの抑制性ペプチドの濃度を変動させる能力は、薄いも
の（およそ0.001インチ）または厚いもの（およそ0.500またはそれよりも厚いインチ）を
コート（被覆）する能力と共に組み合わさられるとき、本発明の実務者は、関心のある特
定の解剖学的な部位のために必要に応じてシステムの投与量を変動させることができる。

通例、所定の組織の場合、例は、上皮下層、選ばれるペプチド薬物、濃度および厚さお
よび適用の持続期間は、組織、たとえば、表皮または粘膜の基底層を透過し、およそ2か
ら30分までの内にピーク効果があるようにペプチドの能力に基づいて決定される。選ばれ
る薬剤、抑制性ペプチドの濃度および適用の厚さに応じて、抑制性ペプチドの組織、たと
えば表皮に対する効果の期間は、およそ2から240分までの間におよぶべきである。より一
層長いか、またはより一層短い継続期間はまた、必要により選ぶことができ、それはこの
技術における熟練者（当業者）にとって明らかである。

処置の方法
このペプチドは、上述のように調剤し、および/または修飾され、いろいろな処置様式
（treatment modalities）において用いられうる。たとえば、それらはレーザー処置また
は皮膚剥離/マイクロ皮膚剥離とともに摂取され、注射され、または適用されうる。皮膚
剥離は、皮膚の表面が剥離（研磨）によって取り除かれる化粧医学技法（cosmetic medic
al procedure）である。太陽による損傷を受けた皮膚を取り出し、および皮膚上の傷跡お
よび暗い点を取り除くか、または少なくすることが用いられる。アルミニウムの結晶も使
われるが、皮膚剥離単位は典型的に、ダイヤモンドチップにされる。1種のアプローチで
、“SilkPeel（シルクピール）”と名付けられるものは、ダイヤモンドチップのマイクロ
皮節を溶液の深い配送と共に組み合わせ、それは皮膚を改善し、そして甦らせるために白
くするもの（ホワイトナー）を含みうる。好ましい方法では、ペプチドはマイクロ皮膚剥
離の間に、届けられる溶液の1部分として投与される。皮膚剥離が流体の流れで遂行され
、それがマイクロ剥離された皮膚のエリアを囲む場合、皮膚は前処理、およびビタミン、
ローション、その他、ならびに好ましい方法で、このチロシナーゼ抑制剤ペプチド（群）
を伴うポスト処理の双方をうける。前処理はマイクロ剥離される皮膚処置のエリアを柔ら
かくすることができ、それによって、治療後処置が取り残される皮膚組織のストリーキン
グおよび赤みを減らすのを助ける一方、剥脱（exfoliation）をより一層完全で、取り残
される皮膚組織へのより少ない外傷を伴って達成するのがより一層簡単にされる。処置の
この方法に関する詳細は、KarasiukへのUS 6,695,853で、2004年2月24日発行、“Microde
rmabrasion system and method of use”と題されるものに見出されうる。

このペプチドはまた、レーザー処置とともにも用いられうる。エルビウムレーザーのよ
うなレーザー処置は、障害を受けた皮膚組織の種々の深さを蒸発させる。エルビウムレー
ザーは、米国の特許3,978,427においてさらに記述される。エルビウムレーザー手順は局
所的な麻酔溶液を使って実行され、そして治癒は通常、レーザーエネルギー侵入の深さに
従って2から5日までである。メラニンの吸収スペクトルに基づき、Qスイッチされたルビ
ーのレーザー（694nm）およびQスイッチされたNd：Yagレーザー（1064nm）は、黒子（ほ
くろ）および炎症後色素過剰のような色素過剰の病変の治療のためにこのペプチドと組み
合わせて選択される余地のレーザーである。

このペプチドは、レーザー処置で、Rf装置による放射エネルギーの投与、LEDs、または
超音波のようなものに加えて、様々な放射線処置と併用して使われうる。このペプチドは
、マイクロニードル（極微針）処置、エレクトロポーレーションまたはイオントフォレー
シス（イオン導入）である場合もある。適切なマイクロニードルは、US 6256533、“Appa
ratus and method for using an intracutaneous microneedle array（皮内極微針アレイ
を用いるための器具および方法）”と題される、Garstein（ガースティン）らに2001年7
月3日に発行されたものに記述される。エレクトロポレーションは、高電圧パルスを一時
的な孔の形成を誘導するために提案された皮膚への適用を含む。高電圧および短い処置継
続期間（数ミリ秒）が採用されることが最も多い。配送に影響を及ぼす他の電気パラメー
タは、波形、速度および数のようなパルス特性が含まれ、そして更に多数の出版物で記述
される。この技術は、異なっている親油性およびサイズ（すなわち、小分子、タンパク質
、ペプチドおよびオリゴヌクレオチド）を伴う分子の皮膚透過性を高めるのに首尾よく用
いられた。イオン導入は、局所適用の治療上の薬剤の浸透性を高めるために、皮膚に直接
、または間接的に剤形によってのいずれかで、低レベル電流の適用が包含される。この方
法論の結果としての増加した薬物浸透性は、以下の機構のいずれか1種または組合せでも
寄与することができ、すなわち、電子反発（Electro-repulsion）（荷電溶質について）
、電気浸透（非荷電溶質について）および電子動揺（electro-perturbation）（荷電およ
び非荷電のものの双方について）である。いくつかのイオン注入での（iontophoretic）
システムは目下商業上開発中である。

上述の障害に加え、またはこれと共に含まれるものにおいて、この発明が役立つものは
制限されないが、すなわち、そばかす縮小、アジア人皮膚上の黄色のマストーン（mass-t
one）の縮小および皮膚の抑制、老化プロセスに関連した逆クロミア（dischromia）、な
らびに静脈障害とリンクした赤みの縮小および紫外線誘導された色素形成における縮小で
ある。

上述したように、処置の好ましい方法には、皮膚のライトニング（明るくすること）が
包含される。この抑制剤は、他の処置のためにも用いられうる。チロシナーゼは黒色腫を
有する患者の免疫療法上の処置のための魅力的な標的抗原であり、それがいくつかの他の
メラニン形成細胞の分化抗原、MART-1、gp100、またはgp75のようなものより一層均一に
発現されるからである。2つの別々の調査において、チロシナーゼは、免疫組織化学また
は逆転写ポリメラーゼ連鎖反応によって評価される新鮮黒色腫標本の100%において発現さ
れると見出された。これらのデータは、チロシナーゼが本質的に黒色腫を有するすべての
患者について優れた標的でありえることを指し示す（Riley（ライリー）ら、J. Immunoth
er.、2001、24、212-220）。

チロシナーゼはまた、Vogt-Koyanagi-Harada（フォークト-コヤナギ-ハラダ）（VKH）
病にも結び付いた。VKHは、中枢神経系、聴覚の、および外皮の徴候と関連した両側性の
肉芽腫性汎ぶどう膜炎（bilateral granulomatous panuveitis）である。それは通常、ア
スセプティックな（asceptic、懐疑的でない）髄膜炎に先駆類似物と共に現れ、次いで滲
出性網膜剥離およびディスク充血を有する後側のぶどう膜炎が続く。VKH病を有する患者
から確立され、チロシナーゼファミリーペプチドで刺激されたT細胞クローンは、主に炎
症促進性、Th1-タイプT細胞反応を例示した。Read（リード）らはVKH様の症候群がチロシ
ナーゼおよび他のチロシナーゼファミリータンパク質から誘導されたペプチドで免疫化す
ることによってラットにおいて誘導可能であることを例証した（Read et al.、Curr. Opi
n. Ophthalmol.、2000、11、437-442）。
例

デザインおよび試験管内テスト
酵素の反応のためのキノコチロシナーゼ、L-チロシンおよび他の化学物質は、Sigma-Al
drich（シグマアルドリッチ）から入手した。短いシークエンスペプチド1-7は、既知のチ
ロシナーゼ基質との潜在的ホモロジー（相同関係）に基づいて設計した。すべての合成ペ
プチドは長さ3および10の間のアミノ酸であり、tBocおよび/またはFmoc固相化学を使って
合成した。ペプチドは、すべての場合で、研究等級（>80%の純度）であることが確認され
た。研究等級の試薬が便宜のために使われたと理解され、そしてペプチドが製薬上の等級
純度に、そして90%より高く、好ましくは99%より高く純粋であるように調製されることが
好ましい。

実験的なペプチドによるチロシナーゼの抑制は、ドパクロム、基質L-チロシンの反応生
成物の比色検出によって定めた。キノコチロシナーゼ、L-チロシン、およびリン酸カリウ
ムバッファ（pH 6.8）は、5%DMSOにおいて溶解される短いシークエンスペプチドを含む96
ウェルプレートに加えられ、そして37℃でインキュベート（温置）した。475nmの吸光度
は反応開始後の30分にBIO-TEKプレートリーダーを使用して測定した。各々の実験は、3つ
の別々の機会に3通りで実行した。プロトコルは、更に詳細には、Piao（ピアオ）ら、“M
ushroom Tyrosinase Inhibition Activity of Some Chromones（若干のクロモンのキノコ
チロシナーゼ抑制活性）”、Chem. Pharm. Bull. 56(3)：309-311 (2002)、およびPomera
nts（ポメランツ）、J. Biol. Chem 238：2351-2357 (1963)において記載される。

酵素動力学は、反応速度の変化を、0.5、1、2、および4mMのL−チロシンの基質濃度を
伴って観察することによってミカエリス-メンテン（Michaelis-Menton）の式を使用して
算出した。一旦最初の反応速度が得られたら、ラインウィーバー-バークプロット（Linew
eaver-Burke plots）を、Km、Vmaxを算出し、そして酵素の抑制のモードを定めるために
作り出した。

IC50結果
321から1,556ツゥーの分子量において変動した7つの合成ペプチドを次に表示する。選
別される7つのペプチドのうち、5つが様々な抑制的効果を所有することが見出され、一方
で2つはチロシナーゼに対して活性が維持されなかった。これらのペプチドのためのIC50
値は、~40μMから8mMにまでおよんだ。結果を次の表に与える。すなわち

高濃度（15-50mM）で、KFEFKFEFは、比色検出を妨げるゲル様物質を作り出すことによ
り、吸光度を正常な反応値よりも高く異常に増加させた。ラインウィーバー-バークプロ
ットを用い、我々はすべての5つの活性ペプチドがチロシナーゼを競争的に抑制したこと
を見出した。これは、抑制性ペプチドの存在および不存在および増加する基質濃度の添加
によるチロシナーゼ活性のレスキューにおいて観察された定数Vmaxによって支持された。

結論として、我々はチロシナーゼ基質の観察された特性に対するそれらの類似性に基づ
く合成の短いシークエンスペプチドを設計した。驚くべきことに、我々はチロシナーゼに
対して抑制の様々な程度を所有するペプチドを見出した。

この知見の1つの局面は、上記に与えられるガイダンスを含む可能性があるペプチドの
修飾についての知識に関する。2つのペプチドを比較する際に

小さなfによって表されるPhe残基が不活性なペプチドにおけるものであり、および対応
する位置でのLysが活性を与えることが見られる。これは、下線を付けたKK、さらに他の
ペプチドにおけるSRおよびRNシークエンスによって例示されつ特性によって示されるよう
に、互いの隣にある正に荷電された残基をもつ上記モティーフにおける望ましさを示す。
あるものはまた、YRSRKYSSWYにおいて荷電残基を観察する。加えて、Tyrまたは似た残基
（例は、PheまたはTrp）の1またはそれよりも多くのアミノ酸の存在が望ましい。これら
の観察は、実証されるそれらに類似したシークエンスを設計する際に、更なるガイダンス
を提供する。また、ペプチドは自己集合された二次構造を形成するように設計することが
でき、それによって、多重のチロシナーゼ分子が単一の複合体によって束縛される場合が
ある。これは、多重のチロシン残基をもつシークエンスに有利である。

IC50値は、40μMほど低く測定され、目下商業上の使用のために入手可能な有効なチロ
シナーゼ抑制剤の若干と一致している値である。抑制のモードは、すべての場合で競争的
であると定められた。特定の酵素に対する活性を有する短いシークエンスペプチドの発見
は、将来的な製薬上の治療法の開発に対する重要な戦略を表す。短いシークエンスペプチ
ドは、増加した皮膚侵入、リポソームのカプセル封入への従順さ、または脂質共役、減少
した毒性を含む伝統的な薬理学的薬物および成長因子を超えるいくつかの利点を与えた。
我々の知る限りでは、これはチロシナーゼに対して短いシークエンスペプチドの重要な抑
制性効果を示す最初のレポートである。

安定性試験
ペプチド、すなわち、5つのペプチド、このYRSRKYSSWY、（配列番号２）、およびKFEKK
FEK（配列番号１）を含むものは、商業上の供給元、NeoMPS（ネオMPS）に注文した。第6
のペプチド、VLLKが、他のペプチド安定性の量的評価のための内部標準として使われた。

HPLC/MS、すなわち、1%の溶液を、ペプチドごとに調製し、そしてチューブに封入し、
それを周囲の環境に保った。高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）および質量分析（MS
）は、30日のおよその時間範囲で、定期的にテストした。内部標準として用いる新鮮1%VL
LK溶液は、各々のテストで同じ日に調製した。各々のペプチドの量は、VLLKのそれと比較
して、そのピークのエリアによって定めた。

YRSRKYSSWYおよびKFEKKFEKを含む4つのペプチドは、HPLCまたはMSのいずれかから4ヵ月
の間、分解を示さなかった。しかし、1つのペプチドが最初の月の間に分解し始めたよう
であり、それはMSでより一層小さな種のピークエリアの増加によって示され、一方で、そ
の後、およびそのような分解はシステインに関係があるかもしれない。

細胞アッセイ
色素細胞でのメラニン形成抑制活性は、Cancer Research, Vol. 42, pp. 1994-2002 (1
982)において記述される方法に従うが、わずかな修飾を伴ってアッセイした。4つ×10⁴の
B-16細胞、マウス黒色腫の株を、10v/vの%胎仔ウシ血清を含む10mlのEagle’s（イーグル
の）MEMの中に懸濁させ、25cm²のRoux's（ルーの）フラスコへ移し、そして5v/v% CO₂の
存在において、37℃で培養する。培養を、5日間続け、その一方、追加的に開始および第3
日目にテスト標本を含む新鮮なものを伴って培養基を新たにする。0.8w/v%塩水を含んで
いるリン酸塩バッファ（pH 7.2）において洗浄した後、細胞をトリプシンおよびEDTAを含
む溶液で引き離し（detached）、そしてろ過によって回復させた。ろ紙上の細胞は、つい
で乾燥し、デンシトメトリーを使って、500nmで反射光の強さについて定める。

他のアッセイをこのペプチドをテストする際に使いうる。あるものは、Orlow（オルロ
ー）らによる米国のPGPUB 2004/0175767、2004年9月9日出版、“Methods and compositio
ns that affect melanogenesis（メラニン形成に影響を及ぼす方法および組成）”と題さ
れるものに記述されるようなチロシナーゼ活性についてのアッセイを使うメラニン形成の
抑制剤のために選抜されうる。そこに記述されるように、あるものはチロシナーゼをテス
トのための細胞性媒体中に分泌させる場合がある。それらが生体内で行うように、試験管
内培養において増殖する野生タイプのメラニン形成細胞はメラノソームの内側にメラニン
を合成する。これらの培養細胞において、チロシナーゼは主にメラノソームの膜において
見出されるが、しかし、いくつかのチロシナーゼも分泌される。メラノソームの膜で見出
されるチロシナーゼは、C末端の貫膜ドメインによって適切な状態に保たれ、メラノソー
ムのルーメンを欲しているその活性部位をもつ。対照的に、Pタンパク質における変異か
、またはPタンパク質機能を抑制する化合物を通してメラニン形成について抑制されたメ
ラニン形成性の細胞では、チロシナーゼは誤った場所に局在化される。細胞のチロシナー
ゼの著しく大きな画分（フラクション）は、増殖または温置（インキュベーション）媒体
中に細胞から分泌される。その上、分泌されたチロシナーゼポリペプチドはそれが野生タ
イプ細胞で見出されたものより短く、それは、そのC末端膜アンカーが欠如しているから
である。分泌されたチロシナーゼは、しかし、増殖またはインキュベーション媒体におい
て酵素的に活性であり、そこで、それが細胞外チロシンからメラニンを合成することがで
きる。結果として、メラニン形成のために抑制されたメラニン形成性の細胞からのチロシ
ン含有の増殖またはインキュベーション媒体は、黒くなる（turn dark）。媒体中のチロ
シンのより一層高い濃度は、媒体をより一層黒くし、そして媒体中のチロシナーゼのより
一層高い濃度は、媒体をより一層速く黒くする。メラニン形成について抑制されないメラ
ニン形成性細胞が著しく少ないチロシナーゼしか分泌しないので、それらが培養されるチ
ロシン含有の増殖またはインキュベーション媒体は黒いようにならない。

生体内アッセイ
試験管内で有意にチロシナーゼ抑制をみせるペプチドはさらに、生体内でそれらの皮膚
ホワイトニング活性について試験されうる。

このアッセイでは、健康な雄性および雌性のボランティア（20-50年齢）は、3日間毎日
1度、それらの上腕エリア、それぞれ2.25cm²において2つの異なるスポット（点）で、お
よそ0.6Jの紫外線照射を受け、そして抑制性ペプチドを、24日にわたり毎日3回、いずれ
かの照射されたスポット上ででも適用される。その後、皮膚ホワイトニング薬剤を伴う照
射を受けたスポットを、メラニン形成の抑止（サプレッション）、すなわち、皮膚ホワイ
トニング効果の程度を推定するために、コントロールと比較する。

そのようなアッセイのための皮膚ホワイトニング薬剤は、エタノールの重量により10部
、およびメチルp-ヒドロキシベンゾエートの重量により0.18部を、いずれかの以下のもの
と一緒に、重量による0(コントロール)、4、10、16または40部のいずれかの活性ペプチド
または誘導体の50 w/w %で、その混合物が10w/wの水性クエン酸溶液でpH 5.5に調整され
、および重量によって100部の総量を与えるために混合物に精製された水が注がれること
で調製しうる。

皮膚ホワイトニング薬剤におけるペプチドの濃度は、したがって、0w/w %（コントロー
ル）、2w/w %、5w/w %、8w/w %または20w/w %である。

皮膚ホワイトニング薬剤は、最初にそれをガーゼにおいて浸すこと、そして密封包帯（
occlusive dressing）の技術に従って照射されたスポット上にガーゼを付けることによっ
て適用される。

皮膚ホワイトニング効果は、メラニン形成抑止、すなわち、皮膚ホワイトニング効果；
皮膚ホワイトニング効果のいずれかの“優れた”、“変化なし”または“劣る”への類別
（grading）；および“優れる”と答えるボランティアを数えること（各々のグループに
おいて20のボランティア）のために、コントロールと、処置されたスポットを比較するこ
とによって定める。

臨床研究
不応性の（recalcitrant）肝斑を有する患者（店頭の製品、6ヵ月間HQ4%、または6ヵ月
間のTri-luma(R)（トリ-ルナ（商標））クリームに対して失敗したもの）は、ランダム化
され、および2つの処置群に盲検された（ビークルとペプチド、下記のすべての調査のた
めに、キノコチロシナーゼ、L-チロシン、ヒドロキノンおよびL-ドーパは、Sigma Aldric
hから購入した。YRペプチド（“P4”、（アミノ酸配列YRSRKYSSWY 、純度94%）を、NeoMP
S Inc（ネオMPS社、San Diego（サンディエゴ）、カリフォルニア、USA）によって合成し
た）。

一次ヒトメラニン形成細胞、継代3をDr. Todd Ridky（トッドリドキィー博士）in the
department of dermatology（皮膚科学）、Stanford University（スタンフォード大学）
から快く入手できた。細胞は、Human Melanocyte Growth Supplement (ヒトメラニン形成
細胞増殖補助剤、HMGS, Cascade Biologics（カスケードバイオロジックス社）)で補われ
るMedium（媒体）254(Cascade Biologics)において培養された。それらは、5%のCO²で37
℃にて湿らされた雰囲気において増殖させた。細胞の平板培養密度（plating densities
）を、それらの細胞が試験試料と共にインキュベーションする継続期間の間、増殖の対数
期にあることを手配した。細胞のサブカルチャーを、4×10⁴細胞/cm²の密度で平板培養し
た。およそ24h後、新鮮な媒体および試験試料を添加した。細胞を試験試料追加の7d後に
収集し、2日おきに新鮮媒体および試験試料を入れ替えた。

細胞生存能力を、WST-1 Cell Proliferation Kit（細胞増殖キット）（Roche（ロシュ
社））を用いて定めた。細胞は、1×10⁵/well（24ウェルプレート）で平板培養された。
播種の24時間後に、試験試料を加え、そして培養物をさらに7d培養した。処置期間の終わ
りに、50μl WST-1を各ウェルに加えた。プレートを暗所に4h の間37℃で置き、そして45
0nmでの吸光度をマイクロプレートを使って読んだ。通常、3つの反復ウェルを、試験され
るグループごとに測定した。媒体を含むウェルだが細胞がないものは、コントロールとし
ての役目を果たした。細胞生存能力は、次の式によって算出された。すなわち
細胞生存能力=吸光度（試験される試料）/吸光度（媒体だけ）×100%。

メラニン形成細胞の上で試験したHQの濃度は、1、10、100、および1000μMであり、一
方、YRペプチドのそれらは、1、10、および100μMであった。メラニン形成細胞は100また
は1000μMのいずれかでもHQの添加後の24時間での死を見出され、HQの細胞傷害性が確か
められた。細胞は、10μMおよび下記のHQ処置に耐えるのが見出された。毒性は、7日間処
置後、最高100μMの濃度でのP4ペプチドで観察されなかった。

P4のメラニン形成に対する抑制性の効果が細胞増殖の抑制によって引き起こされるかも
しれないという可能性を排除するために、我々は試験試料の存在および不存在で増殖する
細胞の数を比較した。結果を図3に示す。我々は、メラニン形成細胞の増殖率に対するそ
のペプチドの何らかの抑制性効果を観察しなかった。ヒドロキノンも10μMまで抑制性効
果を示さないが、しかし、より一層高い濃度は100%の細胞毒性のため試験することができ
なかった。

メラニン含量測定
ヒトメラニン形成細胞を、6ウェルプレートで培養し、そして7d間、個々の試験試料で
処置した。PBSでの洗浄後、細胞をトリプシン/EDTA（PBSでの0.25%/0.1%）で、短いイン
キュベーションによってはがした。アリコート（一定分量）を、細胞カウントのために使
った。残部の細胞を超音波処理し、37℃で500μlの1MのNaOHで一昼夜インキュベートし、
光を避けた。メラニン濃度を、合成メラニンで取得した検量線で、未知試料の475nmでのO
Dの比較によって算出した。

YRペプチドがメラニン形成を妨げるというより一層直接的な証拠を提供するために、我
々は、メラニン形成細胞でのメラニンの産生上のその効果を定めた。7日間の、添加なし
、YRペプチド（P4）またはHQで処置するメラニン形成細胞におけるメラニンの含量は、分
光光度計で定め、そしてメラニン検量線と比較した。メラニン含量での減少は図4に示さ
れた。10μMのHQ（非毒性の用量）による処置は、わずかにメラニン含有量を減らした。
他方、ペプチドの同程度の濃度は、十分に、HQよりも大きな範囲にまでメラニン含有量を
減らした。

YRペプチド上のキノコチロシナーゼの酵素アッセイ
チロシナーゼ抑制活性は、基質としてL-チロシンを使って試験管内で、Piao（ピアオ）
LZ、Park（パーク）HR、Park YK、Lee SK、Park JH、Park MK. 2002。Mushroom Tyrosina
se Inhibition Activity of Some Chromones（若干のクロモンのキノコチロシナーゼ抑制
活性）. Chem Pharm Bull 50(3): 309-311）からの変更された方法を用いて定めた。

酵素、基質および抑制剤の濃度は、それぞれ、［E］、［S］および［I］として表示し
た。80マイクロリットルの0.067Mのリン酸カリウムバッファ（pH 6.8）、0.067Mのリン酸
カリウムバッファ（pH 6.8）の40マイクロリットルのL-チロシン、5%のDMSO溶液中の40マ
イクロリットルの抑制剤、および40マイクロリットルのキノコチロシナーゼ溶液を、96ウ
ェルマイクロプレートに加え、以下の通りに各々の試薬の最終濃度にした：0.2mg/ml［S
］、および96単位/ml［E］、様々な［I］。抑制剤溶液の代わりに5%のDMSO溶液を、ブラ
ンクの溶液に加え、そしてコントロールとして200マイクロリットルの合計容量に合わせ
た。アッセイ混合物を37℃でインキュベートした。反応混合物において生成したドパクロ
ムの量を、異なる時間期間でのマイクロプレートリーダーにおいて475nmにて測定した。
チロシナーゼ活性の抑制のパーセンテージは、以下の通りに算出された。すなわち
抑制（%）=［（A−B）−（C−D）］/（A−B）×100
A：インキュベーション後のブランク溶液の吸光度
B：インキュベーション前のブランク溶液の吸光度
C：インキュベーション後の試料溶液の吸光度
D：インキュベーション前の試料溶液の吸光度

基質としてL-ドーパを使い細胞チロシナーゼ活性を、Cheng（チェン）KT, Hsu（スウ）
FL, Chen SH, Hsieh（シエ）PK, Huang（ホワン）HS, Lee（リー）CK, Lee MH. 2007. Ne
w Constituent from Podocarpus macrophyllus var. macrophyllus Shows Anti-tyrosina
se Effect and Regulates Tyrosinase-Related Proteins and mRNA in Human Epidermal
Melanocytes（イヌマキ変種マクロフィラスからの新しい成分は抗チロシナーゼ効果を示
し、およびヒト表皮メラニン形成細胞においてチロシナーゼ関連タンパク質およびmRNAを
規制する）。Chem Pharm Bull 55(5): 757-761.）の方法によって分析した。

ヒトメラニン形成細胞を、6ウェルのプレートにおいて培養した。7d間、個々の試験試
料による処置の後、細胞をリン酸塩バッファ塩水（PBS）で洗い、リン酸塩バッファ、pH
6.8で、1%のトリトンX-100を含有するもので溶解させた。超音波処理後、溶解物を、10分
間の10000gでの遠心分離によって澄ませた。Bio-Rad protein assay kit（バイオラドの
タンパク質アッセイキット）でのタンパク質含量の決定後、溶解物をタンパク質（40μg
）の等しい量を含む96ウェル培養プレートに添加し、そして各々のウェルで150μlにとど
くように溶解バッファで調整した。溶解バッファで溶かされた10mMのL-DOPAの75μlを、
各ウェルに加えた。培養プレートを30分間37℃でインキュベートし、そして475nmにて分
光光度計を用いて読み取った。

チロシナーゼ阻害活性を、以下の式で算出した。すなわち、チロシナーゼ抑制（%）=［
1-（試料のO.D.（光学濃度）475/コントロールのO.D.475）］×100%。

遠心分離およびタンパク質計算の後、一定の各々の試料のための上澄み量を、各ウェル
で一定のタンパク質含量を補償することによって96ウェルプレートに移し、0.067Mのリン
酸塩バッファ（pH 6.8）で、各ウェルの容量を150μlに合わせた。リン酸塩バッファ（pH
6.8）で溶解された10mMのL-DOPAの75μlを、各ウェルに加えた。培養プレートを、30分
間37℃でインキュベートし、そして、475nmにて分光光度計を用いて読み取った。結果を
図5に示す。10μMのヒドロキノンによるメラニン形成細胞の処置は、28.8%によって細胞
チロシナーゼ活性を減らし；いずれかのペプチド単独による処置は、細胞チロシナーゼ活
性の用量依存的な減少に導いた。1μMで、YRペプチド（P4）は、14.5%だけ酵素活性を減
らし；10μMでは、P4は24.1%だけ減少した。最後に、100μMでは、P4は37.4%だけ酵素活
性を減少させた。

結論
上記の特定の説明は本発明を実証し、そして例示することを意図され、および本発明の
範囲を制限するとみてはならない。この明細書において言及する何らかの特許または出版
物も、特許または出版物がその日付の時点で関係する当業者の水準を示し、そしてはっき
りと述べられないかもしれないが、その分野において労働者によって理解される発明の詳
細を伝達することを目的とする。言及される方法または物質を記述し、そして可能にする
目的で必要であるように、そのような特許または出版物は各々が参照によって詳しく、そ
して個々に組み込まれたかのように、その同程度に、参照によって本明細書に組み込まれ
る。

Claims (33)

1. アミノ酸シークエンスＫＦＥＫＫＦＥＫと本質的に同一の配列をもち、および約１０ｍ
   Ｍよりも少ないＩＣ５０をもつ精製されたペプチド。
2. 約５ｍＭよりも少ないＩＣ５０をもつ、請求項１のペプチド。
3. １および２つの間の残基はＲまたはＦで置換される、請求項１のペプチド。
4. １および３つの間の残基は、Ｖ、Ａ、Ｌ、ＭまたはＩで置換される、請求項１のペプチ
   ド。
5. １つの残基はＲまたはＦで置換され、規定されるようなアミノ酸配列において２から３
   までの置換の合計が存在する、請求項４のペプチド。
6. 次の欄１において挙げるような１および３つの間のアミノ酸は、以下の表の欄２におい
   て挙げるアミノ酸で置換され、１から３つまでの置換の合計が存在する、請求項１のペプ
   チド。
   

   
7. Ｄアミノ酸を含む、請求項１のペプチド。
8. 調節基に連結される、請求項１のペプチド。
9. 配列はＫＦＥＫＫＦＥＫである、請求項１のペプチド。
10. ２つの隣接する荷電アミノ酸をもつ、請求項１のペプチド。
11. Ｙ、ＦおよびＷから選ばれる少なくとも１種の残基をもつ、請求項１のペプチド。
12. 請求項１に従うペプチドを含む、局所的な、経口または注入可能な調剤物。
13. 配列はＫＦＥＫＫＦＥＫである、請求項１２の調剤物。
14. 二次的処理薬剤およびＹＲＳＲＫＹＳＳＷＹおよびＫＦＥＫＫＦＥＫからなる群より選
    ばれる配列と本質的に同一のペプチドを含む、皮膚科学的に許容可能な調剤物。
15. ペプチドは少なくとも２つの隣接する荷電アミノ酸をもつ、請求項１４の調剤物。
16. １から３までのアミノ酸置換が規定された配列において含まれ、置換はＦまたはＲにお
    いてなく、置換は、（ｉ）ＦまたはＲへの変化、および（ｉｉ）Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｍ、Ｉへの
    変化の１から３つまでの変化から選ばれる、請求項１４の調剤物。
17. ペプチドは約２倍のＩＣ５０濃度よりも少ない濃度である、請求項１４の調剤物。
18. ペプチドは２から１００倍までのＩＣ５０濃度の濃度である、請求項１４の調剤物。
19. ＨＱが実質含まれない、請求項１４の調剤物。
20. 二次的処理薬剤は、請求項１４内の２種の異なる構造をもつ２つのペプチドが存在する
    ようなペプチドである、請求項１４の調剤物。
21. さらに、水和性調剤物、抗酸化物質調剤物、およびフリーラジカルスカベンジャー（遊
    離基消去剤）から選ばれる物質を含む、請求項１４の調剤物。
22. ペプチドはリポソームにおいて含有される、請求項１４の調剤物。
23. （ａ）ＫＦＥＫＫＦＥＫまたは（ｂ）ＹＲＳＲＫＹＳＳＷＹの１種と本質的に同一のペ
    プチドを投与することを含み、ペプチドの前記投与は軽減された皮膚色素沈着に対して十
    分にチロシナーゼを抑制する、皮膚の処置のための方法。
24. ペプチドはＹＲＳＲＫＹＳＳＷＹの配列をもつ、請求項２３の方法。
25. ペプチドＹＲＳＲＫＹＳＷＳＷＹは、１および３つの間の置換を、残基がＲまたはＫに
    変化し、またはＶ、Ａ、Ｌ、ＭまたはＩの１つに変化するのにしたがってもつ、請求項２
    ４の方法。
26. ここで、投与は、局所調製物を投与することを含む、請求項２３の方法。
27. 投与は、二次的処理生産物とともに投与されることを含む、請求項２３の方法。
28. 投与はマイクロ皮膚切除プロセスと併用する投与を含む、請求項２３の方法。
29. 投与はマイクロ皮膚切除プロセスを伴い同時である、請求項２３の方法。
30. 投与は放射プロセスとの併用である、請求項２３の方法。
31. 投与は、剥離装置マイクロニードル（極微針）、エレクトロポレーション（電気穿孔）
    装置、またはイオントフォレーシス装置によって遂行する物理的処置との併用である、請
    求項２３の方法。
32. 約１０ｍＭよりも少ないチロシナーゼのＩＣ５０をもち、およびＹＲペプチドまたはＫ
    Ｆペプチドのいずれかの配列をもつペプチドおよびその配列と本質的に同一の配列からな
    る群より選ばれる精製されたペプチド、皮膚科学的に許容可能な担体、二次的処理生成物
    、および使用のための指示を含む、皮膚ホワイトニング手順を遂行するためのキット。
33. ペプチドおよび担体は予備的組合せがされる、請求項３２のキット。

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